專利名稱：用于鎮(zhèn)痛、麻醉或治療藥物依賴性的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以替曲朵辛(也稱為河豚毒素)或蛤蚌毒素為主要活性成分的制劑，臨床上應(yīng)用包括但不限于全身給藥鎮(zhèn)痛和戒毒。
替曲朵辛屬于小分子非蛋白的高活性神經(jīng)毒素，主要存在于河豚魚的卵巢、肝臟和血液中，其它部分含量極微。替曲朵辛也在其它動物甚至海藻中發(fā)現(xiàn)，包括蜥蜴，加州蠑螈，虎蝦魚，藍(lán)環(huán)章魚等。
替曲朵辛以及蛤蚌毒素(saxitoxin)是高選擇性的鈉離子通道阻斷劑，可以同鈉離子通道的部分由α亞單位的SS1和SS2外端受體位點組成的部位結(jié)合。令人驚奇的是，這些長效鈉離子通道阻斷劑可以提供長效強力的鎮(zhèn)痛和麻醉作用而又不會產(chǎn)生明顯的副作用(董慶濱等，中國專利申請?zhí)?0124517.1；庫寶善等，中國專利申請?zhí)?012518.X，申請日都為2000年9月18日)。
替曲朵辛化學(xué)名是八氫-12-(羥甲基)-2-亞氨基-5，97，10d-二甲橋-10αH-[1，3]二橋氧并[6，5-d]嘧啶-4，7，10，11，12-戊醇，分子式為C11H17N3O8，分子量319.27，而其結(jié)構(gòu)式為 替曲朵辛的結(jié)構(gòu)特征是僅有一個碳環(huán)，一個胍基，六個羥基和一個半醛糖內(nèi)酯基團(tuán)。純的″替曲朵辛″是無色的結(jié)晶粉末。加熱到220℃結(jié)晶變暗沒有分解?！逄媲湫痢迦苡谒嵝运芤海蝗苡谒坝袡C溶劑。在水溶液中的Pka為8.76，屬于堿性動物生物堿。在中性或弱有機酸性溶液中對熱相當(dāng)穩(wěn)定，在強酸和強堿性水溶液中迅速破壞。
本發(fā)明選用純度為96％以上的替曲朵辛為主藥，可以用中國專利申請00124516.3(于2000年9月18日申請)中公開的技術(shù)從河豚魚等生物組織中提取。
因為替曲朵辛在胃酸中容易分解，口服不被認(rèn)為是理想的用藥途徑，所以本發(fā)明的制劑是以注射為主，具體而言是肌肉注射，但不局限于此。大多數(shù)的注射型制劑是溶液型的，而必須考慮的因素包括藥物的溶解性，穩(wěn)定性和安全性等(畢殿洲，藥劑學(xué)第四版)。
本發(fā)明提供一種用于鎮(zhèn)痛、麻醉或治療藥物依賴性的制劑，其包含作為主要成分的一種與鈉離子通道的α亞單位的SS1和SS2外端受體位點結(jié)合的鈉離子通道阻斷劑以及醫(yī)藥上適當(dāng)?shù)妮d體和輔劑，其中所述的鈉離子通道阻斷劑為替曲朵辛及其類似物，優(yōu)選為替曲朵辛。所述替曲朵辛類似物為河豚毒素、去水河豚毒素、胺基河豚毒素、甲氧基河豚毒素、乙氧基河豚毒素、脫氧河豚毒素或河豚酸。在本發(fā)明的制劑中，所述的替曲朵辛所占比例為5-100μg/毫升，最好是5-30μg/毫升。
所述的鈉離子通道阻斷劑還可以為蛤蚌毒素及其類似物。
在本發(fā)明的制劑中，所述的載體為無菌注射用水。所述輔劑包括酸性助溶劑、pH穩(wěn)定劑和性能調(diào)節(jié)劑。所述的酸性助溶劑為以下其中之一種或以上稀醋酸、稀鹽酸、檸檬酸溶液。所述的pH穩(wěn)定劑為以下其中之一種或以上醋酸鹽、檸檬酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽。所述制劑的pH值范圍在3.5-7.0，最好是在3.5-5.0。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.5％稀醋酸，50毫升pH值為3.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，添加無菌注射用水至1000毫升。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.01mol/L鹽酸，50毫升pH值為3.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，添加無菌注射用水至1000毫升。
在本發(fā)明的制劑中，所述的載體還可為無菌注射用水及丙二醇的混合溶液。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述丙二醇在制劑中所占體積的比例為10％-80％，最好為50％-60％。優(yōu)選的是，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.5％稀醋酸，600毫升丙二醇，添加無菌注射用水至1000毫升。
在本發(fā)明的制劑中，所述的性能調(diào)節(jié)劑可包括增黏劑、防腐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、和滲透增強劑。所述增黏劑是聚乙烯醇、羥丙基纖維素甲醚或卡波姆。所述防腐劑是氯化苯甲烴銨、氯丁醇、醋酸汞苯、或硝酸汞苯。所述滲透壓調(diào)節(jié)劑是氯化鈉、甘露醇、或丙三醇。所述滲透增強劑是乙二醇、油酸、或烷基胺。
在本發(fā)明的制劑中，鈉離子通道阻斷劑與血管收縮藥、抗生素、類固醇或非甾體消炎藥組合。
以下將參考附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明，在附圖中

圖1是替曲朵辛注射液(990120-1A)紫外鑒別圖。
圖2是替曲朵辛注射液(990120-2A)紫外鑒別圖。
圖3是替曲朵辛注射液(990120-3A)紫外鑒別圖。
圖4是替曲朵辛對照品紫外鑒別圖。
圖5是替曲朵辛三批注射液與對照品的保留時間鑒別圖。
圖6是替曲朵辛注射液(990120-1A)HPLC含量測定圖譜。
圖7是替曲朵辛注射液回收率試驗HPLC測定圖。
圖8是替曲朵辛注射液90120-1A樣品0天的色譜9是替曲朵辛注射液90120-1A樣品光照5天的色譜圖。
圖10是替曲朵辛注射液90120-1A樣品光照10天的色譜圖。
圖11是替曲朵辛注射液90120-1A樣品40℃5天的色譜圖。
圖12是替曲朵辛注射液90120-1A樣品40℃10天的色譜圖。
圖13是替曲朵辛注射液90120-1A樣品60℃5天的色譜圖。
圖14是替曲朵辛注射液90120-1A樣品60℃10天的色譜。
圖15是替曲朵辛注射液90120-1A樣品80℃5天的色譜。
圖16是替曲朵辛注射液90120-1A樣品80℃10天的色譜圖。
圖17是替曲朵辛注射液90120-1A樣品濕度為75％5天的色譜圖。
圖18是替曲朵辛注射液90120-1A樣品濕度為75％10天的色譜圖。
圖19是替曲朵辛注射液90120-1A樣品濕度為92.5％5天的色譜圖。
圖20是替曲朵辛注射液90120-1A樣品濕度為92.5％10天的色譜圖。
圖21是替曲朵辛注射液90120-1A樣品溫度為40℃加速一個月的色譜圖。
圖22是替曲朵辛注射液90120-1A樣品溫度為40℃加速2個月的色譜圖。
圖23是替曲朵辛注射液90120-1A樣品溫度為4-5℃留樣一個月的色譜圖替。
圖24是曲朵辛注射液90120-1A樣品溫度為4-5℃留樣3個月的色譜圖。
圖25是替曲朵辛注射液90120-1A樣品溫度為4-5℃留樣一個月的色譜圖。
根據(jù)臨床前藥理藥效實驗研究結(jié)果推算替曲朵辛注射液的制劑含量。
i)按對動物的有效劑量推算臨床用藥劑量一般按對動物有效劑量的1/5計算，人的體重分別以50、60、70kg計。
●本品對小鼠醋酸扭體的鎮(zhèn)痛ID50(半數(shù)抑制量)為2.80μg/kg(im)，則人的臨床推薦用藥劑量為2.80μg/kg×1/5×50(60，70)kg＝28.0(33.6，39.2)μg●本品對大鼠甲醛致痛的鎮(zhèn)痛有效劑量為2.5μg/kg(im)(P＜0.01)，則人的臨床推薦用藥劑量為2.50μg/kg×1/5×50(60，70)kg＝25.0(30.0，35.0)μgii)按LD50值推算臨床用藥的初步劑量結(jié)合藥效學(xué)研究結(jié)果，按LD50的1/50計算臨床藥用劑量，人的體重分別按50、60、70kg計。
●本品小鼠LD50為11.1μg/kg(im)，故臨床推薦用藥劑量為11.1μg/kg×1/50×50(60，70)kg＝11.1(13.32，15.54)μg。
根據(jù)藥理藥效學(xué)研究結(jié)果并參考有關(guān)文獻(xiàn)資料，將替曲朵辛注射液的制劑的規(guī)格訂為15μg/mL，針劑裝量可以設(shè)為15μg∶1mL和30μg∶2mL等。
替曲朵辛為氨基全氫喹唑啉型化合物，在水中溶解度很小，但在pH偏酸性的水溶液中可溶解。因此，可以采用制劑中常用的稀醋酸、稀鹽酸及檸檬酸溶液等為助溶劑進(jìn)行配制。另一方面，鑒于替曲朵辛在弱酸性溶液中對熱相對穩(wěn)定的性質(zhì)，保持制劑pH值的偏酸性有益于保證替曲朵辛制劑溶液的穩(wěn)定性。所以，有必要加入適當(dāng)?shù)木彌_劑以保證制劑的pH值范圍，例如醋酸鹽緩沖劑，檸檬酸鹽緩沖劑，硫酸鹽緩沖劑，磷酸鹽緩沖劑等。通過試驗和合理的推斷(見實施例1)，我們認(rèn)為替曲朵辛制劑的PH值應(yīng)保持在3.5-7.0之間，而在3.5-5.0之間最為穩(wěn)定。此外，還可以加入丙二醇與水組成混合溶劑，以提高替曲朵辛的穩(wěn)定性。
外界因素，如溫度、光線、濕度、氧等，是應(yīng)該予以考察，確認(rèn)它們對制劑穩(wěn)定性的影響，借以設(shè)計出符合質(zhì)量要求的處方和工藝。試驗結(jié)果提示(見實施例4)，替曲朵辛注射液受濕度、光照影響不大，外觀及含量均未發(fā)生明顯變化；但對溫度比較敏感，溫度越高，含量降低越多。因此應(yīng)該低溫存放替曲朵辛制劑以保證其穩(wěn)定性。
處于提高使用性能，便于保存等考慮，可在替曲朵辛制劑中進(jìn)一步加入以下成分
·至少一種黏性增加劑聚乙烯醇、羥丙基纖維素甲醚(hydroxypropylmethyl cellulose)、卡波姆(carbomer)等·防腐劑，例如氯化苯甲烴銨、氯丁醇、醋酸汞苯(phenylmercuricacetate)、硝酸汞苯(phenyl mercuric nitrate)等·滲透壓調(diào)節(jié)劑氯化鈉、甘露醇、丙三醇等·滲透增強劑乙二醇、油酸、烷基胺等·血管縮小藥、抗生素、類固醇或非類固醇的消炎藥等。
在藥物安全性方面，我們在前述專利申請(00124517.1)中已經(jīng)舉出實施例證明替曲朵辛制劑在毒性、溶血性、局部刺激性等方面都符合要求。該專利申請也指出，該制劑沒有嚴(yán)重的不可逆轉(zhuǎn)的毒副作用。
根據(jù)以上分析，本發(fā)明的替曲朵辛制劑處方選擇純度為96％以上的替曲朵辛為主藥，稀醋酸、稀鹽酸、枸櫞酸或檸檬酸為助溶劑，以5％醋酸—醋酸鈉緩沖溶液作為藥液PH值的穩(wěn)定劑，藥液的pH值宜選擇在3.5-5.0之間；制劑過程避免高溫受熱，宜采用無菌配制；運輸過程應(yīng)避免陽光曝曬，貯存宜置低溫陰涼處為佳。
蛤蚌毒素和替曲朵辛的理化性質(zhì)類似，也屬于海洋毒素，出自于海藻類生物。其結(jié)構(gòu)式為 根據(jù)MERCKINDEX，蛤蚌毒素也是在偏酸性溶液中比較穩(wěn)定。作為高選擇性的鈉離子通道阻斷劑，其鎮(zhèn)痛與麻醉的作用機理也與替曲朵辛類似。因此，蛤蚌毒素制劑的組成可以按照相同的原則設(shè)計確定，可以采用稀醋酸、稀鹽酸或檸檬酸為助溶劑，并加入例如醋酸鹽緩沖劑，檸檬酸鹽緩沖劑，硫酸鹽緩沖劑，磷酸鹽緩沖等作為藥液PH值的穩(wěn)定劑。
實施例實施例1替曲朵辛制劑處方篩選過程主要考察了不同助溶劑、藥液不同的PH值、溫度、光線、氧、緩沖劑用量對替曲朵辛溶液穩(wěn)定性的影響。一、助溶劑的選擇替曲朵辛為氨基全氫喹唑啉型化合物，在水中溶解度很小，可溶于酸性水溶液中，易溶于稀醋酸。經(jīng)預(yù)試驗表明，替曲朵辛在PH偏酸性的水溶液中均可溶解，我們分別采用制劑中常用的稀鹽酸、稀醋酸及枸櫞酸溶液為助溶劑進(jìn)行配制，經(jīng)100℃水浴加速試驗比較替曲朵辛在三種酸性水溶液中的穩(wěn)定性。樣品制備1.取替曲朵辛一定量，用適量0.01N的稀鹽酸溶解后，加水配成濃度為12μg/ml的替曲朵辛溶液，調(diào)PH值至4.40左右，灌封于2ml安瓿中。
2.取替曲朵辛一定量，用適量0.5％稀醋酸溶解，加入PH為4.40的醋酸—醋酸鈉緩沖溶液一定量，加水配成濃度為12μg/ml的替曲朵辛溶液，灌封于2ml安瓿中。
3.取替曲朵辛一定量，用適量0.5％的枸櫞酸溶液溶解，加入PH為4.40的枸櫞酸—枸櫞酸鈉緩沖溶液一定量，加水配成濃度為1μg/ml的替曲朵辛溶液，灌封于2ml安瓿中。實驗方法按編號分別取上述樣品，置100℃水浴內(nèi)進(jìn)行加速實驗，于0min、10min、15min、20min、25min、30min、60min分別取樣測定PH值和含量，結(jié)果見表1。
選擇100℃水浴加速實驗和60分鐘內(nèi)取樣測定PH值和含量的依據(jù)是注射劑的滅菌條件一般情況都選擇100℃流通蒸氣滅菌15-30分鐘，故選此條件下進(jìn)行實驗，不但可用較短的時間得出制劑穩(wěn)定性的考察結(jié)果，同時還可選擇適宜的滅菌條件。結(jié)果分析由表1可以看出，三種不同的配制方法PH值的變化情況不同，在100℃加熱條件下含量均出現(xiàn)下降。替曲朵辛在鹽酸水溶液中未加入緩沖溶液，PH值變化較大，其余兩種方法以有機酸稀溶液為助溶劑均加入了一定量的緩沖溶液，PH值則基本不變。因此，在制劑中必須加入一定量的緩沖溶液以恒定藥液的PH值。由表1看出，加熱可造成溶液中替曲朵辛的含量明顯下降。樣品②的含量降解幅度較其它兩組樣品小，說明替曲朵辛在醋酸水溶液中的穩(wěn)定性較好。表1 替曲朵辛在100℃水浴不同酸性(助溶劑)水溶液中的PH值和含量變化考察結(jié)果 二、空氣中的氧和高溫加熱對替曲朵辛溶液的影響從表1的實驗結(jié)果來看，替曲朵辛溶液經(jīng)100℃加熱10min含量分別下降了20～35％，說明高溫加熱對其含量影響很大。其次，空氣中的氧是否也是導(dǎo)致其含量大幅下降的原因之一，也需進(jìn)行考察。為此對替曲朵辛溶液分別進(jìn)行了脫氧和不脫氧配制的高溫加速試驗，并且分別作了充N2和CO2氣體的比較。樣品制備1.取替曲朵辛一定量，用適量0.5％稀醋酸溶解，加入一定量醋酸—醋酸鈉緩沖溶液(PH4.40)，加水配成濃度為12μg/ml的替曲朵辛溶液，灌封于2ml安瓿中。(不脫氧配制)2.取替曲朵辛一定量，同法配制，配制過程所用的水溶液先用N2脫氧，然后充N2灌裝于2ml安瓿中。(脫氧配制)3.取替曲朵辛一定量，同法配制，配制過程所用的水溶液先用CO2脫氧，然后充CO2灌裝于2ml安瓿中。(脫氧配制)實驗方法按編號分別取上述樣品，置100℃水浴內(nèi)進(jìn)行加速實驗，于0min、10min、15min、20min、25min、30min、60min分別取樣測定PH值和含量，結(jié)果見表2。
選擇100℃水浴加速實驗，于0，10，15，20，25，30，60分鐘取樣考察制劑的PH值和含量，可以得到均勻測試點的PH值和含量變化的數(shù)據(jù)，以便于數(shù)據(jù)處理和作出科學(xué)的分析。表2 空氣中的氧及高溫100℃加熱對替曲朵辛溶液影響的考察結(jié)果 結(jié)果分析由表2的結(jié)果來看，經(jīng)脫氧和不脫氧配制試驗比較，替曲朵辛溶液在加速實驗中的含量變化無明顯差異，說明空氣中的氧對溶液中替曲朵辛的含量影響不大；而在此加速實驗中，經(jīng)100℃加熱10min，各組替曲朵辛的含量均下降了25％左右，說明高溫加熱是導(dǎo)致溶液中替曲朵辛含量下降的主要原因，因此在制劑過程中應(yīng)避免藥液高溫受熱，最好不含高溫滅菌過程，而采用無菌配制。三、光對替曲朵辛溶液穩(wěn)定性的影響對制劑受光影響的情況我們分別進(jìn)行了散射光(室內(nèi)自然光)及直射陽光的考察。樣品制備
取替曲朵辛一定量，用適量0.5％稀醋酸溶解，加入一定量醋酸—醋酸鈉緩沖溶液(PH4.40)，加水配成濃度為12μg/ml的替曲朵辛溶液，灌封于2ml安瓿中。實驗方法將樣品分別置于散射光及陽光下照射不同時間后測其含量變化，結(jié)果見表3、4。
表3 散射光(室內(nèi)自然光)對替曲朵辛溶液的影響 表4 直射陽光對替曲朵辛溶液的影響 結(jié)果分析由表3、表4可看出，實驗結(jié)果表明替曲朵辛溶液對光具有相對的穩(wěn)定性，故不需避光保存；但在陽光直射下，含量稍有變化，提示制劑的貯存應(yīng)置于陰涼處，避免曝曬。四、不同PH值的替曲朵辛溶液穩(wěn)定性觀察文獻(xiàn)報導(dǎo)替曲朵辛在酸性及中性的水溶液中相對穩(wěn)定，我們對替曲朵辛在不同PH值溶液中的穩(wěn)定性情況進(jìn)行了考察。樣品制備配制一定濃度的PH值分別為3.00、3.50、4.00、4.50、5.00、5.50的替曲朵辛溶液。配制方法是稱取替曲朵辛一定量，用適量0.5％稀醋酸溶解，分別加入上PH值的醋酸—醋酸鈉緩沖溶液一定量，加水配成濃度為12μg/ml替曲朵辛溶液，灌封于2ml安瓿中。實驗方法將各組樣品置于70℃下進(jìn)行加速實驗，分別于0、0.5、1、2、4、8hr取樣測定替曲朵辛的含量，結(jié)果見表5。
實驗方法的設(shè)計是根據(jù)有關(guān)的藥物穩(wěn)定性研究資料及文獻(xiàn)資料報導(dǎo)選定的。即70℃水浴加速，考察時間為0.5至8小時，共5個取樣點測定含量變化情況，是通常采用的。
表5不同PH值的替曲朵辛溶液于70℃恒溫加速試驗結(jié)果 結(jié)果分析試驗結(jié)果表明替曲朵辛溶液穩(wěn)定性趨勢是，隨著PH值的升高，替曲朵辛的降解加速，反之，PH值降低，降解速度減慢，其穩(wěn)定性相對增加，在PH3.00～4.08之間替曲朵辛相對較為穩(wěn)定。五、醋酸鹽緩沖溶液加入量的選擇試驗表明，在加熱條件下，PH值增加能加速替曲朵辛的降解速度，因此，處方設(shè)計時其注射液的PH值宜選擇在偏酸的范圍，同時加入適量的緩沖溶液，以保證藥液相對恒定的PH環(huán)境，確保制劑在一定貯存期內(nèi)的穩(wěn)定性。對此，我們用正交法進(jìn)行了不同PH值醋酸鹽緩沖溶液加入量的實驗設(shè)計。實驗設(shè)計通過正交試驗設(shè)計對醋酸鹽緩沖溶液的PH值及其相應(yīng)的加入量進(jìn)行優(yōu)選，選用的因素水平如下表6。
表6因素水平表
實驗方法根據(jù)正交試驗設(shè)計，選擇不同PH的及醋酸鹽緩沖溶液及其相應(yīng)的加入量配制樣品，置70℃水浴中加熱2小時后，測定樣品中替曲朵辛的含量，計算殘存率，結(jié)果見表7。表7 正交試驗安排及結(jié)果分析
表8 方差分析表
F0.05(3，6)＝4.76，F(xiàn)0.01(3，6)＝9.78F0.05(2，6)＝5.14，F(xiàn)0.01(2，6)＝10.92結(jié)果分析從試驗結(jié)果及方差分析表可知因素A和因素B均有非常顯著的差異(P＜0.01)，說明醋酸鹽緩沖溶液的PH值及緩沖溶液的加入量均對制劑的穩(wěn)定性有著很大的影響。從試驗結(jié)果看，較優(yōu)的方案是A2B3，即PH值為3.5，緩沖溶液加入量為5％時藥液的穩(wěn)定性最好。
綜上所述，替曲朵辛制劑的工藝選擇稀醋酸為助溶劑，以5％醋酸-醋酸鈉緩沖溶液恒定藥液PH值；藥液的PH值宜選擇在3.5～4.0之間；制劑過程避免高溫受熱，宜采用無菌配制；運輸過程應(yīng)避免陽光曝曬；貯存應(yīng)冷藏保存為佳。
根據(jù)上述處方工藝試制的產(chǎn)品，經(jīng)考察各項指標(biāo)，均符合注射劑質(zhì)量要求，其重現(xiàn)性及穩(wěn)定性較好，因此，我們認(rèn)為本處方設(shè)計是合理、可行的。六、輔料在處方中作用本處方由稀醋酸及醋酸鹽緩沖溶液組成。其中，稀醋酸為助溶劑。醋酸—醋酸鈉緩沖溶液主要起恒定藥液PH值的作用。表9 原輔料來源及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
參考文獻(xiàn)[1] 畢殿洲，藥劑學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，第四版，271-272[2] 周茂青、沈希光，高獲得率提取替曲朵辛的方法，中國專利申請00124517.1，2000年9月18日。[3] 董慶濱、沈希光，全身給藥的鎮(zhèn)痛方法，中國專利申請00124516.3，2000年9月18日。實施例2-替曲朵辛制劑質(zhì)量研究1性狀本品為無色澄明液體。
結(jié)論三批樣品均為無色澄明液體。2 鑒別2.1 紫外吸收替曲朵辛本身沒有特征紫外吸收，但是，它經(jīng)堿水解后生成2-氨基-6-羥甲基-8-羥基喹唑啉(下稱C9堿)，同時定量生成草酸鈉，此化合物在紫外區(qū)有明顯特征吸收，可用于鑒別。
方法取本品10ml，置于具塞試管中，分別加6.0mol/L的NaOH溶液1.0ml，搖勻，在85℃水浴加熱45min，立即冷至室溫，照分光光度法(中國藥典1995年版二部附錄IVA)，在340～220nm波長范圍內(nèi)測定吸收光譜(見圖1，2，3和4)。
結(jié)論三批樣品均在277nm和232nm處有最大吸收，在255nm處有最小吸收。2.2高效液相色譜法在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間與替曲朵辛對照品主峰的保留時間一致，這在某一方面反映了二者的同質(zhì)性。對三批樣品按照含量測定項下方法操作，色譜圖見圖5。
結(jié)論三批樣品與對照品的保留時間一致。3檢查3.1 酸度樣品溶液的pH值
結(jié)論三批樣品的pH值均為3.9。3.2 溶液的澄明度取三批樣品，每批200支，照“澄明度檢查細(xì)則和判斷標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行檢查，結(jié)果如下
結(jié)論三批樣品均澄明。3.3溶液的透光率按分光光度法(中國藥典1995年版二部附錄IVA)，在430nm測定三批樣品的透光率，結(jié)果如下
結(jié)論三批樣品的透光率均大于98.0％。3.4裝量取三批樣品，每批5支，照注射劑(中國藥典1995年版二部附錄IB)項下注射液的裝量檢查，結(jié)果如下
結(jié)論三批樣品均大于標(biāo)示量2.0ml。3.5無菌取本品，依法檢查(中國藥典1995年二部附錄XIH)，符合規(guī)定。3.6細(xì)菌內(nèi)毒素取本品依法檢查(中國藥典1995年二部附錄XIE)，細(xì)菌內(nèi)毒素含量每1ml小于7.5Eu。本品在該限量下無干擾，故可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔熱原檢查法。3.7異常毒性取本品，按1∶75稀釋后，依法檢查(中國藥典1995年二部附錄XIC)，結(jié)果符合規(guī)定。3.8過敏試驗取本品，按1∶25稀釋后，無過敏反應(yīng)。3.9有關(guān)物質(zhì)照含量測定項下的方法。精密量取本品適量，加水制成1ml中含0.75μg溶液，作為對照溶液。取對照溶液100μl注入液相色譜儀進(jìn)行預(yù)試，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分的峰高約為滿量程的10-25％。準(zhǔn)確量取本品100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。量取各雜質(zhì)峰(溶劑峰除外)面積的和，不得大于對照溶液主峰面積的3％。
4含量測定由于高效液相色譜法具有專屬性強，靈敏度高，鑒別、有關(guān)物質(zhì)檢查與含量測定可同時進(jìn)行等特點，故確定本法作為含量測定的主要方法。通過多次試驗，優(yōu)化了固定相、流動相與檢測條件，建立了可靠的分離分析檢測方法，使替曲朵辛與主要相關(guān)雜質(zhì)得到了較好的分離，檢出靈敏度較高，操作方便，重現(xiàn)性亦較好。4.1 儀器及試劑儀器美國Beckman高效液相色譜儀(包括125泵，166可變波長檢測器，Gold Nouvean色譜工作站)藥品替曲朵辛由本公司精制，其對照品由本公司提供。
試劑庚烷磺酸鈉，日本東京化成工業(yè)株式會社；甲醇，Merck公司；水去離子水。4.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗色譜柱ODS(5μm)，4.6mm×250mm柱溫30℃；流動相0.01mol/L庚烷磺酸鈉(pH5.30)-甲醇(100∶1)流速1.5ml/min檢測波長205nm
色譜圖見圖6。
色譜柱的柱效(n)按替曲朵辛峰計算，n＝43227理論塔板數(shù)/米。
替曲朵辛峰與相鄰峰的分離度(R)＝1.8替曲朵辛峰的不對稱因子T＝1.14。4.3 精密度取樣品溶液100μl注入HPLC儀，記錄色譜圖，測定峰面積，連續(xù)6次，替曲朵辛峰面積的RSD為0.2％(n＝6)。4.4 線性范圍及最小檢出限精密稱取替曲朵辛對照品13.90mg，置100ml容量瓶中，加0.02％醋酸溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取80、40、20、8、4μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為y＝3403.91+243226x，線性范圍為12.625～0.505μg，相關(guān)系數(shù)(r)為0.9999。
以信噪比(S/N≥3)計算，最小檢出限為0.01ng。4.5 回收率試驗處方替曲朵辛15mg0.2％醋酸液 1mlPH3.5的醋酸-醋酸鈉液5％(50ml)加注射用水 至1000ml方法按上述配方配制不含替曲朵辛的溶媒，為溶液A。
稱取替曲朵辛14.08mg，置50ml量瓶中，加0.2％HAC溶解至刻度為溶液B。
取溶液B0.5ml，置10ml量瓶中，加0.2％醋酸液至刻度為溶液C。
取溶液B0.5ml，置10ml量瓶中，加溶液A至刻度，為溶液D。
分別取溶液A、C、D100μl進(jìn)樣，記錄色譜圖(圖7)，計算回收率，測得替曲朵辛的回收率為101.8％。
回收率R(％)＝1.42256/1.39659×100＝101.85％≈101.8％4.6 樣品含量測定取100μl樣品注入HPLC儀，記錄色譜圖(圖6)，測定峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算，即得。三批樣品的測定結(jié)果如下
文獻(xiàn)資料[1]中國藥典1995年版二部(附錄)[2]新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編1993年版[3]張豁中，溫玉麟。動物活性成分化學(xué)。天津科學(xué)技術(shù)出版社，1995年實施例3[實驗?zāi)康腯 比較不同比例的水與丙二醇混合溶劑替曲朵辛的穩(wěn)定性，篩選最佳的溶劑配比[實驗內(nèi)容] 分別不同配比的水與丙二醇混合溶劑配制替曲朵辛制劑，于100℃水浴中加熱10min，比較其穩(wěn)定性。[儀器、試劑]·Water泵510HPLC電熱恒溫水浴槽 北京醫(yī)療設(shè)備廠·替曲朵辛(純度96.85％)本公司自制1.2-丙二醇 AR廣東新寧化工廠[實驗設(shè)計]編組[處方I]R0替曲朵辛 1.5mg對照組 0.5％醋酸0.1ml(PH＝3.5)HAC-NaACa組緩沖溶液 5％注射用水 加至 100mlR1替曲朵辛 1.5mg0.5％醋酸0.1ml A組丙二醇 20ml注射用水 加至 100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R2替曲朵辛 1.5mg0.5％醋酸0.1ml B組丙二醇 40ml注射用水 加至 100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R3替曲朵辛1.5mg0.5％醋酸 0.1mlC組丙二醇 50ml注射用水加至100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R4替曲朵辛1.5mg0.5％醋酸 0.1mlD組丙二醇 60ml注射用水加至100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R5替曲朵辛1.5mg0.5％醋酸 0.1mlE組丙二醇 70ml注射用水加至100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R6替曲朵辛1.5mg0.5％醋酸 0.1mlF組丙二醇 80ml注射用水加至100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)R7替曲朵辛1.5mg0.5％醋酸 0.1mlG組丙二醇 100ml(用10％醋酸調(diào)PH＝3.5)[實驗操作]按上述處方設(shè)計分別配制替曲朵辛制劑(A組取99.10.10配制樣)，灌封于2ml安瓿中，分組(6支/組)置100℃水浴中加熱10min的分別取樣測定替曲朵辛含量與0時結(jié)果比較，計算替曲朵辛殘存率。[實驗結(jié)果]表10丙二醇與水混合溶劑中替曲朵辛殘存率(加熱時間100℃，10min)
丙二醇與水混合溶劑中替曲朵辛殘存率 由實驗結(jié)果的比較可以看出，隨著溶劑中丙二醇比例的增加，替曲朵辛制劑的穩(wěn)定性逐漸提高(殘存率增加)，且當(dāng)丙二醇比例≥50％時，殘存率基本維持在88.5％左右。說明，溶劑中加入一定量的丙二醇溶液，可使替曲朵辛制劑的穩(wěn)定性增加，當(dāng)丙二醇所占比例≥50％時，穩(wěn)定性上升趨勢，基本維持在一定的較高水平。
從上述篩選實驗可知，替曲朵辛制劑采用水與丙二醇混合容積(pH調(diào)至3.5)時，其穩(wěn)定性較醋酸及其緩沖液組成的處方制劑穩(wěn)定性增加，因此替曲朵辛注射液還可制成水與丙二醇混合溶液的制劑，以提高其穩(wěn)定性。從實驗可知，當(dāng)水與丙二醇混合溶劑中丙二醇含量為60％時，替曲朵辛制劑的穩(wěn)定性最好。實施例4 替曲朵辛注射液(醋酸及其緩沖液制劑)的穩(wěn)定性考察1試驗?zāi)康膶σ慌媲湫磷⑸湟?批號90120-1A)，除去外包裝，在不同存放條件下分別考察對光、熱、濕及存放時間的穩(wěn)定性。2考察條件2.1 光照熒光燈光照(2000-4000Lx)條件下，露置1、3、5、10天。2.2 高溫分別在40℃、60℃、80℃條件下，露置1、3、5、10天。2.3 高濕(室溫)分別在RH75％及RH92.5％條件下，露置1、3、5、10天。2.4 加速試驗40℃、RH75％條件下，露置2個月。2.5 4-5℃留樣放置一、三、六個月。長期穩(wěn)定性在繼續(xù)觀察中。2.6 25℃，RH60％條件下露置6個月在繼續(xù)觀察中。3考察項目及方法3.1 外觀目測。3.2 含量測定HPLC法(詳見實施例2)4考察結(jié)果見表11，圖8至圖25。5試驗結(jié)論
結(jié)果表明一批供試品在熒光燈下照射(3000Lx)，濕度RH75％及RH92.5％1、3、5、10天，其外觀與含量均未發(fā)生變化；高溫40℃、60℃、80℃考察，外觀未發(fā)生明顯變化，但含量明顯降低。在存放時間相同的條件下，溫度越高，含量降低越多。
結(jié)果提示替曲朵辛注射液應(yīng)于低溫2℃-8℃密封保存，長期穩(wěn)定性仍在繼續(xù)觀察中。表11替曲朵辛注射液穩(wěn)定性考察(批號90120-1A)
文獻(xiàn)資料[1] 中國藥典1995年版二部[2] 新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編，1993年版[3] 中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
權(quán)利要求
1.一種用于鎮(zhèn)痛、麻醉或治療藥物依賴性的制劑，其包含作為主要成分的一種與鈉離子通道的α亞單位的SS1和SS2外端受體位點結(jié)合的鈉離子通道阻斷劑以及醫(yī)藥上適當(dāng)?shù)妮d體和輔劑。
2.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述的鈉離子通道阻斷劑為替曲朵辛及其類似物。
3.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述的鈉離子通道阻斷劑為替曲朵辛。
4.如權(quán)利要求2的制劑，其中，所述替曲朵辛類似物為河豚毒素、去水河豚毒素、胺基河豚毒素、甲氧基河豚毒素、乙氧基河豚毒素、脫氧河豚毒素或河豚酸。
5.如權(quán)利要求3的制劑，其中，所述的替曲朵辛所占比例為5-100μg/毫升，最好是5-30μg/毫升。
6.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述的鈉離子通道阻斷劑為蛤蚌毒素及其類似物。
7.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述的載體為無菌注射用水。
8.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述輔劑包括酸性助溶劑、pH穩(wěn)定劑和性能調(diào)節(jié)劑。
9.如權(quán)利要求8的制劑，其中，所述的酸性助溶劑為以下其中之一種或以上稀醋酸、稀鹽酸、檸檬酸溶液。
10.如權(quán)利要求8的制劑，其中，所述的pH穩(wěn)定劑為以下其中之一種或以上醋酸鹽、檸檬酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽。
11.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述制劑的pH值范圍在3.5-7.0，最好是在3.5-5.0。
12.如權(quán)利要求3的制劑，其中，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.5％稀醋酸，50毫升pH值為3.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，添加無菌注射用水至1000毫升。
13.如權(quán)利要求3的制劑，其中，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.01mol/L鹽酸，50毫升pH值為3.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，添加無菌注射用水至1000毫升。
14.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述的載體為無菌注射用水及丙二醇的混合溶液。
15.如權(quán)利要求14的制劑，其中，所述丙二醇在制劑中所占體積的比例為10％-80％，最好為50％-60％。
16.如權(quán)利要求14的制劑，其中，所述制劑按下述比例構(gòu)成15毫克替曲朵辛，1毫升0.5％稀醋酸，600毫升丙二醇，添加無菌注射用水至1000毫升。
17.如權(quán)利要求8的制劑，其中，所述的性能調(diào)節(jié)劑包括增黏劑、防腐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、和滲透增強劑。
18.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述增黏劑是聚乙烯醇、羥丙基纖維素甲醚或卡波姆。
19.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述防腐劑是氯化苯甲烴銨、氯丁醇、醋酸汞苯、或硝酸汞苯。
20.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑是氯化鈉、甘露醇、或丙三醇。
21.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述滲透增強劑是乙二醇、油酸、或烷基胺。
22.如權(quán)利要求1的制劑，其中，鈉離子通道阻斷劑與血管收縮藥、抗生素、類固醇或非甾體消炎藥組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于鎮(zhèn)痛、麻醉或治療藥物依賴性的制劑,其包含作為主要成分的一種與鈉離子通道的α亞單位的SS1和SS2外端受體位點結(jié)合的鈉離子通道阻斷劑以及醫(yī)藥上適當(dāng)?shù)妮d體和輔劑。所述活性鈉離子通道阻斷劑是替曲朵辛或其類似物或者是蛤蚌毒素。
文檔編號A61K31/529GK1353990SQ0013267
公開日2002年6月19日 申請日期2000年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月22日
發(fā)明者康宇紅, 沈希光 申請人:南寧楓葉藥業(yè)有限公司