專利名稱:喜樹堿化合物及其制備方法
本件申請是中國發(fā)明申請第96114098.4號的分案申請。
本發(fā)明涉及喜樹堿化合物。更為特殊地是本發(fā)明涉及氨基烷氧基或羥基烷氧基喜樹堿化合物及制備該化合物的方法。由氨基烷氧基或羥基烷氧基喜樹堿化合物經(jīng)由氨基酸或肽與帶有羧基的多糖結(jié)合而制得的喜樹堿衍生物,可選擇性地并以大量給藥至病人的靶區(qū)域內(nèi),因此它們可以在病人的期望區(qū)域顯示出期望的藥理活性。所以,喜樹堿化合物的抗腫瘤活性被極大地加強(qiáng)且它們的副作用可被降低。
以前的技術(shù)喜樹堿為一種植物生物堿具有下列的結(jié)構(gòu) 同時已知它具有抗白血病和抗腫瘤活性,喜樹堿衍生物之一鹽酸艾諾特康(irinotecan){CPT-11,7-乙基-10-[4-(哌啶子基)-1-哌啶子基]羰氧喜樹堿}已經(jīng)投放市場。然而,CPT-11在臨床應(yīng)用中顯示強(qiáng)的抗腫瘤活性的同時也象其它抗腫瘤藥一樣顯示嚴(yán)重的毒性,因此CPT-11已被限制了其治療用途[參見Cancer and Chemotherapy,Vol.21,P 709(1994)]。
已經(jīng)合成了各種喜樹堿類化合物并報道這些喜樹堿化合物具有抗腫瘤活性(日本專利申請(公開)號279891/1989,222048/1993,87746/1994,228141/1994,和日本專利申請(特許)號503505/1992,502017/1992)。
另一方面,為了增強(qiáng)抗腫瘤活性,同時也盡可能地降低其副作用,也曾研究了這些具有嚴(yán)重副作用的化合物的給藥系統(tǒng),以這種給藥系統(tǒng)可以將需要量的藥物選擇性地投到靶組織。特別是在癌癥的化學(xué)治療中腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間對抗癌藥的敏感性沒有明顯的差別是一個嚴(yán)重的問題,同時對抗癌藥物的靶向給藥系統(tǒng)已進(jìn)行了許多研究以便使抗癌藥物選擇性地投向荷癌區(qū)域,例如阿霉素-多糖復(fù)合物(WO94/19376),包封脂質(zhì)體的阿霉素(Enhancement of effects of anticancer agents and targetingtherapy.p.227(1987),Science Forum Ltd.出版),葡聚糖結(jié)合的絲裂霉素(Enhancement of effects of anticancer agents and targetingtherapy p.278(1987),Science Forum Ltd.出版)。
如以上的解釋,喜樹堿類化合物具有優(yōu)良的抗腫瘤活性并為很有用的藥物,但它們在臨床應(yīng)用中因?yàn)樗鼈兊膰?yán)重副作用而被嚴(yán)格地限制了。因此,希望開發(fā)一類新的喜樹堿衍生物將喜樹堿化合物的優(yōu)良藥理活性恰當(dāng)?shù)乇A舻种破洳幌M膰?yán)重副作用。
在上述情況下,本發(fā)明人應(yīng)用上述的藥物給藥系統(tǒng)進(jìn)行了廣泛的研究為了得到?jīng)]有通常的喜樹堿類化合物的缺點(diǎn)的優(yōu)良喜樹堿衍生物,最后發(fā)現(xiàn)具有期望的藥理效用的新型喜樹堿衍生物可由帶有反應(yīng)基團(tuán)的喜樹堿化合物經(jīng)由氨基酸或肽與帶有羧基的多糖結(jié)合而得到,并完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的簡要描述本發(fā)明的一個目的是提供喜樹堿化合物[Ⅰ],該化合物[Ⅰ]經(jīng)由氨基酸或肽結(jié)合于帶羧基多糖得到的喜樹堿衍生物,具有強(qiáng)化抗腫瘤活性和低副作用。
本發(fā)明的另一目的為提供制備這些喜樹堿化合物的方法。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明的化合物是包含可用結(jié)構(gòu)式[Ⅰ]代表的具有氨基烷氧基或羥基烷氧基喜樹堿化合物的喜樹堿衍生物。 其中R1,R2,R3,R4和R5為
(A)在R1,R2,R3,R4和R5之中兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,或兩者均為氫原子,同時R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)中有一個是具有-Xn-Alkm-R6的基團(tuán),其余兩個基團(tuán)是氫原子或者(B)在R1,R2,R3,R4和R5之中,兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,同時上述亞烷基中的一個碳原子被具有-Xn-Alkm-R6式的基團(tuán)取代,R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)是氫原子,烷基或鹵原子,在(A)或(B)中亞烷基的一個或兩個亞甲基可任選地被-O-,-S-或-NH-置換,X為-O-或-NH-,Alk為亞烷基,R6為-NH2,具 式的基團(tuán),或-OH,m和n兩者均為0或1,或m為1,n為0。
上述喜樹堿化合物經(jīng)由氨基酸或肽與帶有羧基的多糖相結(jié)合。本發(fā)明的喜樹堿衍生物顯示極強(qiáng)的抗腫瘤活性但顯示低毒性。
本發(fā)明的喜樹堿化合物[Ⅰ]可經(jīng)由氨基酸或肽與帶有羧基的多糖相結(jié)合而制備喜樹堿衍生物。例如,這種喜樹堿衍生物可由氨基酸或肽的一部分或所有的羧基與化合物[Ⅰ]的R6通過酸-酰胺或酯鍵結(jié)合,隨后以多糖的一部分或所有的羧基與上述氨基酸或上述肽的氨基通過酸-酰胺鍵結(jié)合來制備。尤其是,本發(fā)明的喜樹堿化合物包括由氨基酸或肽C-末端羧基與化合物[Ⅰ]的R6通過酸-酰胺或酯鍵結(jié)合,隨后以多糖的一部分或所有的羧基與上述氨基酸或上述肽的N-末端氨基以酸-酰胺鍵結(jié)合而制備的化合物。
本發(fā)明的具有[Ⅰ]式的化合物的每個取代基被闡述如下。
(A)界定的亞烷基由R1,R2,R3,R4和R5相鄰的兩個基團(tuán)彼此結(jié)合形成,其中一個或兩個亞甲基可任選地為-O-,-S-或-NH-所置換,此亞烷基是由[Ⅰ]式的7-和9-位,9-和10-位,10-和11-位或11-和12-位的兩個取代基彼此結(jié)合形成的,同時此亞烷基包括具有2至6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基,例如1,2-亞乙基,三亞甲基,四亞甲基,五亞甲基,六亞甲基,甲基亞甲基,甲基1,2-亞乙基,甲基三亞甲基等。
其中一個亞甲基被-O-,-S-或-NH-置換的上述亞烷基包括在端極的亞甲基或除端極外的任何位置被-O-,-S-或-NH-置換。例如,這種亞烷基包括以-O-Alk’-或代表的亞烷基氧基(Alk’為亞烷基,以下相同),如亞甲氧基,1,2-亞乙基氧基,三亞甲基氧基,四亞甲基氧基,甲基亞乙基氧基;以-NH-Alk’-式代表的亞烷基氨基例如亞甲基氨基,1,2-亞乙基氨基,三亞甲基氨基,四亞甲基氨基,甲基1,2-亞乙基氨基;以-S-Alk’-式代表的亞烷基硫基如亞甲基硫基,1,2-亞乙基硫基,三亞甲基硫基,四亞甲基硫基,甲基亞乙基硫基;以-Alk’-O-Alk’-式代表的亞烷基氧烷基例如亞甲基氧基甲基,1,2-亞乙基氧基甲基,三亞甲基氧基甲基,甲基1,2-亞乙基氧基甲基;以-Alk’-NH-Alk’-式代表的亞烷基氨基烷基例如亞甲基氨基甲基,1,2-亞乙基氨基甲基,三亞甲基氨基甲基,甲基亞乙基氨基甲基;以-Alk’-S-Alk’-式代表的亞烷基硫烷基例如亞甲基硫甲基,1,2-亞乙基硫甲基,三亞甲基硫甲基,甲基亞乙基硫甲基等等。
其中兩個亞甲基被-O-,-S-或-NH-置換的上述亞烷基包括端極的兩個亞甲基或除端極外的任何位置的亞甲基被-O-,-S-或-NH-置換。例如這種亞烷基包括以-O-Alk’-O-式代表的亞烷基二氧基如亞甲基二氧基,1,2-亞乙基二氧基,三亞甲基二氧基,四亞甲基二氧基,甲基亞乙基二氧基;以-NH-Alk’-NH-式代表的亞烷基二氨基如亞甲基二氨基,1,2-亞乙基二氨基,三亞甲基二氨基,四亞甲基二氨基,甲基亞乙基二氨基;以-S-Alk’-S-式代表的亞烷基二硫基如亞甲基二硫基,1,2-亞乙基二硫基,三亞甲基二硫基,四亞甲基二硫基,甲基亞乙基二硫基等等。
-Xn-Alkm-R6式中的Alk包括具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基,例如亞甲基,1,2-亞乙基,三亞甲基,四亞甲基,五亞甲基,六亞甲基,甲基乙亞烷基,甲基三亞甲基等。-Xn-Alkm-R6基團(tuán)為,例如氨基烷氧基(如氨基乙氧基,氨基丙氧基),哌嗪基烷氧基(如哌嗪基乙氧基,哌嗪基丙氧基,哌嗪基丁氧基,哌嗪基戊氧基),羥基烷氧基(如羥基乙氧基,羥基丙氧基,羥基丁氧基,羥基戊氧基),氨基烷氨基(如氨基乙氨基,氨基丙氨基,氨基丁氨基,氨基戊氨基),哌嗪基烷氨基(如哌嗪基乙氨基,哌嗪基丙氨基,哌嗪基丁氨基,哌嗪基戊氨基),羥基烷氨基(如羥基乙氨基,羥基丙氨基,羥基丁氨基,羥基戊氨基),氨基烷基(如氨基甲基,氨基乙基,氨基丙基,氨基丁基,氨基戊基),哌嗪基烷基(如哌嗪基甲基,哌嗪基乙基,哌嗪基丙基,哌嗪基丁基,哌嗪基戊基),羥基烷基(如羥基甲基,羥基乙基,羥基丙基,羥基丁基,羥基戊基),氨基,哌嗪基和羥基。
(B)界定的亞烷基由R1,R2,R3,R4和R5相鄰的兩個基團(tuán)彼此結(jié)合形成,其中一個或兩個亞甲基可任選地被-O-,-S-或-NH-所置換,同時上述亞烷基的一個碳原子以式-Xn-Alkm-R6基團(tuán)所取代,此亞烷基是由[Ⅰ]式中的7-和9-位,9-和10-位,10-和11-位或11-和12-位的兩個取代基彼此結(jié)合形成的。此亞烷基包括具有2至6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基,例如1,2-亞乙基,三亞甲基,四亞甲基,五亞甲基,六亞甲基,甲基亞乙基,甲基三亞甲基等,同時其中一個亞甲基或兩個亞甲基被-O-,-S-或-NH-置換的亞烷基與上面舉例的那些基團(tuán)相同。在這些亞烷基中其中一個碳原子被-Xn-Alkm-R6基團(tuán)取代的那些也與上面舉例的基團(tuán)相同。
R1,R2,R3,R4和R5未形成亞烷基的剩余基團(tuán)為低級烷基的包括具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基,例如甲基,乙基,正丙基,異丙基,正丁基,異丁基,二級丁基,戊基,己基等。
鹵原子為氟,氯,溴或碘。
更且,式[Ⅰ]由上述(A)界定的A環(huán)和B環(huán)所形成的部分結(jié)構(gòu)的例子如以下結(jié)構(gòu)所示 其中,X,Alk,R6,m和n的限定與上相同。
此外,在以上(B)的界定中,式[Ⅰ]的A環(huán)和B環(huán)形成的部分結(jié)構(gòu)的例子如以下結(jié)構(gòu)所示 其中R1,R2,R3,R4和R5各為烷基,或?yàn)辂u原子或?yàn)闅湓?,同時X,Alk,R6,m和n的限定與以上的相同。
它們之中,R1,R2,R3,R4和R5的可取的組合為(1)R1與R2結(jié)合形成三亞甲基,R3為3-氨基丙氧基,R4和R5分別為氫原子 (2)R1為哌嗪基甲基,R2和R5各為氫原子,R3與R4結(jié)合形成1,2-亞乙基二氧基 (3)R1為氨基甲基,R2和R5各為氫原子,R3與R4結(jié)合形成1,2-亞乙基二氧基 (4)R1,R2,R4和R5各為氫原子,R3為3-氨基丙氧基
(5)R1和R2結(jié)合形成氨基取代的三亞甲基,R3為甲基,R4為氟原子,R5為氫原子 和(6)R1,R3,R4和R5各為氫原子,R2為氨基 本發(fā)明的可結(jié)合″帶有羧基的多糖″包括與上述的WO94/19376中所透露的那些相同的多糖,同時包括在其結(jié)構(gòu)中具有原有羧基的多糖(如透明質(zhì)酸,果膠酸,藻酸,軟骨酸,肝素等),并包括原始沒有羧基的多糖(如支鏈淀粉,葡聚糖,甘露聚糖,殼多糖,甘露葡聚糖,聚氨基葡糖等)但向其引入羧基。在這些多糖中葡聚糖是優(yōu)選的,更優(yōu)選以平均分子量為20,000至40,000的葡聚糖,最優(yōu)選平均分子量為50,000至150,000的葡聚糖(上述平均分子量系以凝膠滲透色譜法(GPC分析)測定的,Shinseikagaku Jikkern Koza,vol.20 p.7)。原始沒有羧基的多糖而向其引入羧基意指用羧C1-4烷基取代原來沒有羧基的多糖中一部分或全部羥基上的氫原子而制備的那些。
本發(fā)明的″具有羧基的多糖″也包括用還原劑處理原來沒有羧基的多糖,隨后用羧C1-4烷基取代產(chǎn)物的部分或所有羥基上的氫原子而制備的那些。
上述取代多糖的一部分或全部羥基上氫原子的羧C1-4烷基的烷基部分既可能是直鏈烷基也可能是支鏈烷基。可取的羧C1-4烷基為,例如,羧基甲基,1-羧基乙基,3-羧基丙基,1-甲基-3-羧基丙基,2-甲基-3-羧基丙基,4-羧基丁基等,以羧基甲基和1-羧基乙基為更可取。
本發(fā)明可結(jié)合的帶羧基的多糖以羧甲基化的葡聚糖或支鏈淀粉為可取。
當(dāng)向多糖引入羧烷基時,向其引入的程度以″取代度″來表示,它是以每個糖殘基的羧基烷基數(shù)值來限定的,即以下式來表示 當(dāng)羧烷基為羧基甲基時取代度在這種場合下以羧基甲基化度(CM-度)來表示。
當(dāng)多糖為支鏈淀粉,葡聚糖或甘露聚糖和它們的所有羥基均被取代時其取代度為3,而優(yōu)選的取代度在0.3至0.8的范圍之間。
當(dāng)多糖為殼多糖和其中所有羥基均被取代時,其取代度為2,而優(yōu)選的取代度在0.3至0.8的范圍之間。
此外,本發(fā)明的多糖在分子中至少應(yīng)有一個羧基烷基是必要的除非多糖中具有原有的羧基。所以本發(fā)明的多糖應(yīng)該排除具有取代度為0的多糖。
具有羧基的多糖可用WO94/19376透露的方法制備。
介于喜樹堿化合物[Ⅰ]和具有羧基的多糖之間的氨基酸包括天然氨基酸和合成氨基酸兩者(包括D-氨基酸,L-氨基酸,它們的混合物),并也既包括中性氨基酸又包括酸性氨基酸。更且,本發(fā)明的氨基酸不僅是α-氨基酸也可是β-氨基酸,γ-氨基酸,ε-氨基酸等,例如包括甘氨酸(Gly),α-丙氨酸(Ala),β-丙氨酸(β-Ala),纈氨酸(Val),亮氨酸(Leu),異亮氨酸(Ile),絲氨酸(Ser),蘇氨酸(Thr),半胱氨酸(Cys),甲硫氨酸(Met),天冬氨酸(Asp),谷氨酸(Glu),賴氨酸(Lys),精氨酸(Arg),苯丙氨酸(Phe),酪氨酸(Tyr),組氨酸(His),色氨酸(Try),脯氨酸(Pro),羥基脯氨酸,γ-氨基丁酸,ε-氨基己酸等。
本發(fā)明的肽包括由上述氨基酸形成的肽或在其鏈中具有除氨基酸以外其它化合物的肽類。例如,二羧酸如琥珀酸,二胺如乙二胺或二醇如乙二醇可存在于肽鏈的中間或末端。此外,肽鏈通常起始于其N-末端通過酸-酰胺鍵與多糖羧基結(jié)合。當(dāng)堿性氨基酸(如賴氨酸)存在于肽鏈中時肽鏈的結(jié)合部位可反轉(zhuǎn)為堿性氨基酸的ε-氨基與多糖的羧基結(jié)合,和α-氨基與肽鏈的C-末端結(jié)合。
這些肽可以是由兩個或更多氨基酸組成的,即二肽或多肽,較優(yōu)選的是由2-5氨基酸殘基組成的肽鏈。適合的肽鏈的例子為-Gly-Gly-L或D-phe -Gly-,-Gly-Gly-,-Gly-Gly-Gly-,-Gly-Gly-Gly-Gly-,-Gly-Gly-Gly -Gly-Gly-,-L-或D-phe-Gly-,-L-或D-Tyr-Gly-,-L-或D-Leu-Gly-,和含有這些序列(這些肽或含有這些序例的肽的N-末端引到多糖的羧基上)的肽鏈。在這些肽中,-Gly-Gly-L-或D-phe-Gly-,-Gly-Gly-,-Gly-Gly-Gly,-Gly-Gly-Gly-Gly-,-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-,-L-或D-phe-Gly-和-L-或D-Leu-Gly-是較優(yōu)選的。最優(yōu)選肽為-Gly-Gly-L-phe-Gly-,-Gly-Gly-,-Gly-Gly--Gly-,-Gly-Gly-Gly-Gly-,和-L-或D-phe-Gly-。
本發(fā)明式[Ⅰ]的喜樹堿化合物中有一些化合物為已知的,例如在日本專利申請(公開)號279891/1989,222048/1993,87746/1994,228141/1994和日本專利申請(特許)號503505/1992,502017/1993等透露的化合物,并可由通常的方法,諸如下列反應(yīng)
圖1所透露的方法制備反應(yīng)圖1 其中R1,R2,R3,R4和R5與以上的限定相同,R1’,R2’,R3’,R4’和R5’除包含在R1’,R2’,R3’,R4’和R5’中之一的-Xn-Alkm-R6中的氨基,哌嗪基或羥基被保護(hù)外均與R1,R2,R3,R4和R5相同。
那就是氨基羰基化合物(1)與已知的吡喃并二氫吲哚(2)(參見EP-0220601-A)用已知的Friedlander縮合反應(yīng)(參見Organic Reactions,28,pp.37-202,John Wiley & Sons,Inc.,New York(1982))縮合,隨后從產(chǎn)物上除掉保護(hù)基得到喜樹堿化合[Ⅰ]。
在上述方法中,在R1’,R2’,R3’,R4’和R5’之一中包含的-Xn-Alkm-Re基團(tuán)當(dāng)m為1和n為1時可在上述的Friedlander縮合反應(yīng)之后引入。
那就是,上反應(yīng)圖1的方法中,與-Xn-Alkm-R6相應(yīng)的基團(tuán)為羥基(-OH)或氨基(-NH2)的(1)式化合物經(jīng)Friedlander縮合反應(yīng)與化合物(2)縮合,得到的縮合產(chǎn)物再與以R6’-Alkm-OH式代表的保護(hù)的氨基烷醇或羥基烷醇(R6’為保護(hù)的氨基,保護(hù)的哌嗪基或保護(hù)的羥基,Alk和m與上述的限定相同)或它們的反應(yīng)衍生物(例如保護(hù)的氨基鹵代烷,保護(hù)的羥基鹵代烷)反應(yīng),隨后除掉其上的保護(hù)基得到期望的喜樹堿化合物[Ⅰ]。
起始原料氨基羰基化合物(1)可用下列反應(yīng)圖2制備反應(yīng)圖2 其中R1’,R2’,R3’,R4’和R5’的限定與以上相同。
羥基化合物(a)用氧化劑如吡啶重鉻酸鹽處理得酮類化合物(b),進(jìn)一步將其在適當(dāng)?shù)拇呋瘎┐嬖谙?,如鈀-炭進(jìn)行催化還原反應(yīng)得化合物(1)。
當(dāng)m和n均為1時,包含于R1’,R2’,R3’,R4’和R5’之一的-Xn-Alkm-R6基團(tuán)可用相應(yīng)于-Xn-Alkm-R6基團(tuán)為羥基(-OH)或氨基(-NH2)的(a)式化合物與HO-Alk-R6化合物(Alk和R6均與以上的限定相同)或其反應(yīng)衍生物(如取代鹵代烷)反應(yīng)引入到化合物(a)中。
本發(fā)明的喜樹堿化合物通過氨基酸或肽與多糖類結(jié)合所得到的衍生物及其可藥用的鹽對各種腫瘤顯示出優(yōu)良的抗腫瘤活性,特別是對實(shí)體腫瘤如肺癌,子宮癌,卵巢癌,乳腺癌,胃腸道癌(大腸癌,胃癌等)顯示優(yōu)良的治療效果。
由本發(fā)明的化合物得到的上述衍生物及其可藥用的鹽以非腸道給藥(如血管內(nèi)注射)為優(yōu)選,同時經(jīng)常以液體制劑(如溶液,懸浮液,乳濁液等)應(yīng)用。
本發(fā)明的喜樹堿衍生物的劑量依給藥方法,年齡,體重或病人的條件而變化,但通常的劑量幅度當(dāng)轉(zhuǎn)換為喜樹堿化合物[Ⅰ](當(dāng)R6為氨基時,轉(zhuǎn)換為喜樹堿化合物[I]的鹽酸鹽,當(dāng)R6為 時,轉(zhuǎn)換為喜樹堿化合物[I]的鹽酸鹽或二鹽酸鹽)時為0.02-50mg/kg/天,而以幅度為0.1-10mg/kg/天更可取。
本發(fā)明的喜樹堿化合物及其衍生物和制備方法用下列的例子加以較詳細(xì)地說明,但不應(yīng)解釋為是對它們的限制。
實(shí)施例1下式的喜樹堿衍生物的制備 [CM.Dextran.Na羧基甲基葡聚糖鈉鹽](1)3-(t-丁氧羰基氨基)丙醇的制備3-氨基丙醇(6.0g)溶于二氯甲烷(50ml)在攪拌和冰冷卻下向其中滴加二-t-丁基二碳酸酯(18.3g)?;旌衔镌谑覝叵聰嚢?2小時,濃縮,殘渣用硅膠柱層析精制得無色油狀標(biāo)題化合物(13.98g)。
收率99.9%IR(凈)Vmaxcm-1=3380,1790質(zhì)譜m/z=176([M+H]+)NMR(300 MHz,CDCl3):δTMS=1.45(9H,s),1.62-1.72(2H,m),3.0(1H,brs),3.29(2H,dd,J=12Hz,6Hz),3.66(2H,dd,J=12Hz,6Hz),4.80(1H,brs)(2)3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯的制備3-(t-丁氧羰基氨基)丙醇(10.0g)溶于二氯甲烷(100ml),在攪拌和冰冷卻下向其中加入三乙胺(8.66g)和甲苯磺酰氯(16.3g),反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。濃縮反應(yīng)混合物,殘渣溶于水和乙酸乙酯的混合物。分出有機(jī)層,以飽和氯化鈉溶液洗滌,用硫酸鈉干燥并在減壓下濃縮。殘渣用硅膠柱層析精制得淡黃色油狀標(biāo)題化合物(15.37g)。
收率82%IR(凈)Vmaxcm-1=3400,3340,1700質(zhì)譜m/z=352([M+Na]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.42(9H,s),1.78-1.90(2H,m),2.45(3H,s),3.11-3.22(2H,m),4.09(2H,t,J=6Hz),4.5-4.65(1H,m),7.36(2H,d,J=8Hz),7.77-7.83(2H,m)(3)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1-羥基-8-硝基-1,2,3,4-四氫萘的制備1,5-二羥基-8-硝基-1,2,3,4-四氫萘(2.0g)(J.Med.Chem.,1973,16(3),254)溶于干燥的DMF(80ml),向其中加入碳酸鉀(2當(dāng)量),碘化鈉(1.4當(dāng)量)和3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯(1.4當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在50℃攪拌24小時,向其中加入乙酸乙酯?;旌衔镆燥柡吐然c水溶液洗滌,并以硫酸鈉干燥。殘渣以硅膠柱層析精制得淡黃色無定形粉末狀標(biāo)題化合物(3.05g)。
收率87%IR(凈)Vmaxcm-1=3360,1695質(zhì)譜m/z=384([M+NH4]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.36(9H,s),1.57-1.90(6H,m),2.52-2.71(2H,m),3.11(2H,q,J=6Hz),4.07(2H,t,=6Hz),5.12-5.17(2H,m),6.89(1H,t,J=5.5Hz),6.96(1H,d,J=9Hz),7.68(1H,d,J=9Hz)(4)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-8-硝基-1,2,3,4-四氫萘-1-酮的制備5-[3’(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1-羥基-8-硝基-1,2,3,4-四氫萘(2.46g)溶于干燥的二氯甲烷(110ml),向其中加入3A分子篩(6.73g)和吡啶二氯鉻酸鹽(1.5當(dāng)量)并回流此混合物。在反應(yīng)完成以后,混合物以乙醚稀釋,不溶性物質(zhì)通過硅藻土Celite墊層過濾除去。濾液濃縮,殘渣用硅膠柱層析精制得無色粉末的標(biāo)題化合物(1.87g)。
M.p.:76-77℃收率76%IR(熔融)Vmaxcm-1=3550,1700質(zhì)譜m/z=382([M+NH4]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMs=1.44(9H,s),2.02-2.20(4H,m),2.68-2.73(2H,m),2.92(2H,t,J=6Hz),3.36(2H,q,J=6.5Hz),4.12(2H,t,J=6Hz),4.78(1H,brs),6.95(1H,d,J=9Hz),7.39(1H,d,J=9Hz)(5)8-氨基-5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1,2,3,4-四氫萘-1-酮的制備5-[3’(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-8-硝基-1,2,3,4-四氫萘-1-酮(3.55g)溶于乙醇(160ml),向其中加入10%的鈀-炭(420mg)?;旌衔镌跉錃庀聰嚢?.5小時,濾除催化劑。濾液濃縮,殘渣用硅膠柱層析精制得黃色油狀標(biāo)題化合物(3.56g)。
M.p.:112-115℃(分解)收率83%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3440,3340,1700,1650質(zhì)譜m/z=335([M+H]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMs=1.45(9H,s),1.92-2.67(4H,m),2.61(2H,t,J=6Hz),2.87(2H,t,J=6Hz),3.35(2H,q,J=6.5Hz),3.94(2H,t,J=6Hz),4.85(1H,brs),6.10(2H,brs),6.48(1H,d,J=9Hz),6.94(1H,d,J=9Hz)(6)10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿的制備8-氨基-5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1,2,3,4-四氫萘-1-酮(2.03g)溶于乙醇(85ml),向其中加入(4S)-7,8-二氫-4-乙基-4-羥基-1H-吡喃[3,4-f]并二氫吲哚-3,6,10(4H)-三酮(800mg)和P-甲苯磺酸(58mg),混合物回流17小時。反應(yīng)完成后,混合物在減壓下濃縮除去溶劑,生成的殘渣用硅膠柱層析精制得淡黃粉末的標(biāo)題化合物(850mg)。
M.p.:225-227℃(分解)收率50%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3440,3325,1750,1740,1655,1620質(zhì)譜m/z=562([M+H]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=-1.03(3H,t,J=7.5Hz),1.45(9H,s),1.82-2.18(6H,m),3.06-3.13(4H,m),3.41(2H,q,J=6Hz),3.79(1H,s),4.24(2H,t,J=6Hz),4.9(1H,br),5.16(2H,s),5.30(1H,d,J=16Hz),5.75(1H,d,J=16Hz),7.51(1H,d,J=9Hz),7.61(1H,s),8.06(1H,d,J=9Hz)(7)10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿(836mg)混懸于二噁烷(30ml)之中,在攪拌和冰冷卻下向其中中滴加18%的鹽酸二噁烷溶液(15ml)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌,并在反應(yīng)完成后向反應(yīng)混合物中加入異丙醚并攪拌。過濾收集沉淀粉末,用乙醚洗滌并在減壓下干燥。將如此得到的黃色粉末溶于水,冷凍干燥得黃色粉末狀標(biāo)題化合物(620mg)。
M.p.:>194℃(分解)收率84%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=1740,1655質(zhì)譜m/z=462([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMs=0.88(3H,t,J=7.5Hz),1.81-1.94(2H,m),1.97-2.15(4H,m),3.01-3.14(6H,m),4.28(2H,t,J=6Hz),5.23(2H,s),5.43(2H,s),7.28(1H,s),7.71(1H,d,J=9.5Hz),7.95-8.08(3H,brs),8.03(1H,d,J=9.5Hz)(8)10-[3'-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰基甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿的制備10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(158mg)和二異丙基乙胺(49mg)在攪拌下溶于DMF(5ml),向其中加入t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾彼?278mg)和N-羥基-琥珀酰亞胺(143mg)溶于干燥DMF(8ml)的溶液,在攪拌和冰冷卻下再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞酰胺鹽酸鹽(183mg)。混合物在室溫攪拌16小時。反應(yīng)完成后,混合物在減壓下濃縮以除去溶劑,生成的殘渣用硅膠柱層析精制得淡黃色粉末的標(biāo)題化合物(285mg)。
收率定量的IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3290,1660質(zhì)譜m/z=880([M+H]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.02(3H,t,J=7.5Hz),1.43(9H,s),1.85-1.94(2H,m),2.02-2.10(4H,m),2.97-3.05(5H,m),3.23(1H,dd,J=14Hz,5Hz),3.49(2H,q,J=6.5Hz),3.60-3.80(6H,m),4.20(1H,t,J=6Hz),4.50-4.56(1H,m),5.11(2H,s),5.29(1H,d,J=16.5Hz),5.71(1H,d,J=16.5Hz),5.85(1H,brt),7.08(1H,m),7.18-7.27(5H,m),7.45(1H,d,J=7Hz),7.52(1H,d,J=9.5Hz),7.58(1H,s),7.71(1H,m),7.99(1H,d,J=9.5Hz)(9)10-[3’-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備10-[3’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰甘氨酰氨基)-丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿(273mg)溶于二噁烷(10ml),在攪拌和冰冷卻下向其中滴加18%的鹽酸二噁烷溶液(15ml),反應(yīng)混合物在室溫下攪拌,并在反應(yīng)完成后向此混合物加入異丙醚?;旌衔飻嚢瑁恋矸勰┯眠^濾收集,以乙醚洗滌并在減壓下干燥。如此得到的黃色粉末溶于水中并冷凍干燥得黃色粉末狀標(biāo)題化合物(210mg)。
M.p.:>174℃(分解)收率83%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3190,1745,1650質(zhì)譜m/z=780([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7Hz),1.26-1.32(2H,m),1.86-2.04(6H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),2.98-3.05(5H,m),3.28-3.36(2H,m),3.54-3.88(6H,m),4.20(2H,t,J=6Hz),4.45-4.54(1H,m),5.19(2H,s),5.43(2H,s),7.11-7.27(5H,m),7.35(1H,s),7.71(1H,t,J=9.5Hz),7.97(1H,t,J=5.5Hz),8.03(1H,d,J=9.5Hz),8.19(3H,br),8.35(1H,t,J=6Hz),8.43(1H,d,J=8Hz),8.65(1H,t,J=5.5Hz)由上述方法得到的具有氨基的喜樹堿化合物與帶有羧基的水溶性高分子化合物如羧基甲基葡聚糖(以下均稱為(M-dextran)縮合得期望的喜樹堿衍生物。縮合反應(yīng)是在縮合劑存在下例如水溶性碳二亞酰胺[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亞酰胺鹽酸鹽,2-乙氧基-1-乙氧羰基-1,2-二氫喹啉等]在水中或水-有機(jī)溶劑混合物中進(jìn)行的。
(10)喜樹堿衍生物的制備CM-Dextran鈉鹽(CM-度0.5)(500mg)溶于水(20ml)中,在攪拌和10℃以下向其中加入10-[3’-(甘氨?;?甘氨酰基-L-苯丙氨?;?甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亞甲基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(50mg)。向混合物中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞酰胺鹽酸鹽(1.5g),在加入過程中混合物的pH用0.1N鹽酸控制在6.5-7.0?;旌衔镌?0℃以下攪拌2小時,其pH用0.1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至9。反應(yīng)混合物用離子交換柱層析(AGMP-50,Na-型,30ml,Bio-Rad Laboratories,Inc.制造)精制。含有期望化合物的組份合并(30ml),向其中加入3M氯化鈉水溶液(1.2ml),并將混合物傾于乙醇(150ml)中。離心收集沉淀,水(20ml)加至沉淀中,然后將混合物過濾。濾液中加入3M氯化鈉水溶液(0.4ml),混合物在攪拌下加至乙醇(80ml)中。離心收集沉淀,用溶劑洗滌,減壓下干燥得期望的喜樹堿衍生物(415mg)。10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亞甲基(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(實(shí)施例1-(7)的化合物)在期望的喜樹堿衍生物中的含量為4.4%,此含量系基于在380nm的吸收度計算的。按凝膠滲透色譜(GPC)分析法測得期望的喜樹堿衍生物的平均分子量為160,000,分布度(Mw/Mn)為1.57。
GPC分析的條件G4000SWXL(Toso,Ltd.制造),0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。
實(shí)施例2下式的喜樹堿衍生物制備 (1)7-(4’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰基甘氨?;?哌嗪基)甲基-10,11-亞乙基二氧-(20S)-喜樹堿的制備標(biāo)題化合物(518mg)系以與實(shí)施例1-(8)相同的方式從7-哌嗪基甲基-10,11-亞乙基二氧-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(450mg)和t-丁氧羰基-甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾彼?2當(dāng)量)以黃色粉末得到。
收率74%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3280,1750,1655質(zhì)譜m/z=923([M+H]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7.5Hz),1.37(9H,s),1.85-2.1(2H,m),2.3-2.6(4H,m),2.75(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.05(1H,dd,J=14Hz,4.5Hz),3.3-3.6(6H,m),3.58(1H,dd,J=21Hz,5.5Hz),3.74(1H,dd,J=17Hz,5.5Hz),3.9-4.1(4H,m),4.44(4H,s),4.58(1H,m),5.24(2H,s),5.42(2H,s),6.50(1H,s),6.97(1H,t,J=6Hz),7.1-7.3(6H,m),7.55(1H,s),7.77(1H,s),7.8-7.9(1H,br),8.05-8.2(2H,m)(2)7-(4’-(甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨;?哌嗪基)-甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備標(biāo)題化合物(409mg)系以與實(shí)施例1-(9)的相同方式從7-(4’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨?;拾滨;?哌嗪基)甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿(478mg)以黃色粉末得到。
M.p.237-239℃(分解)IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3250,1745,1655質(zhì)譜m/z=823([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.8-1.99(2H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.07(1H,dd,J=14Hz,4Hz),3.1-4.3(16H,m),4.47(4H,s),4.55-4.70(1H,m),5.44(2H,s),5.67(2H,s),7.15-7.32(6H,m),7.65(1H,s),8.05(1H,s),8.05-8.20(3H,br),8.29(1H,br),8.39(1H,d,J=8.5Hz),8.57(1H,t,J=5.5Hz)(3)喜樹堿衍生物的制備CM-Dextran鈉鹽(CM.度0.5)(1.2g)和7-(4’-(甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰基甘氨酰)哌嗪基)甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(168mg)以與實(shí)施例1-(10)相同的方式得到期望的喜樹堿衍生物(798mg),為淡黃色粉末。
基于在380nm吸收度計算的7-哌嗪基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽在期望的喜樹堿衍生物中的含量為1.1%。以凝膠滲透色譜(GPC)分析法測得的期望的喜樹堿衍生物的平均分子量為169,000,分布度(Mw/Mn)為1.32。
GPC分析的條件G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。
實(shí)施例3下式喜樹堿衍生物的制備 (1)7-N-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨;?氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿的制備標(biāo)題化合物(232mg)以與實(shí)施例1-(8)相同的方式以黃色粉末從7-氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(222mg)和t-丁氧羰基-甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨?;拾彼?2當(dāng)量)得到。
收率58%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3285,1750,1650質(zhì)譜m/z=854([M+H]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7.5Hz),1.35(9H,S),1.78-1.94(2H,m),2.74(1H,dd,J=14Hz,10Hz),2.99(1H,dd,J=14Hz,4.5Hz),3.4-3.8(4H,m),4.34-4.50(1H,m),4.42(4H,s),4.66-4.82(2H,m),5.42(4H,brs),6.50(1H,s),6.98(1H,t,J=6Hz),7.12-7.28(5H,m),7.26(1H,s),7.56(1H,s),7.80(1H,s),7.91(1H,br),8.14(1H,d,J=7.5Hz),8.32(2H,t,J=7.5Hz),8.58(1H,m)
(2)7-N-(甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨;?氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備標(biāo)題化合物(164mg)以與實(shí)施例1-(9)相同的方式從7-N-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨?;拾滨;?氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿(203mg)得到。
M.p.>211℃(分解)IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3220,1745,1655質(zhì)譜m/z=754([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.80-1.93(2H,m),2.77(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.00(1H,dd,J=14Hz,4Hz),3.6-4.55(7H,m),4.42(4H,s),4.65-4.85(2H,m),5.42(2H,s),5.45(2H,s),7.13-7.26(5H,m),7.27(1H,s),7.57(1H,s),7.83(1H,s),8.03-8.16(3H,br),8.34-8.40(2H,m),8.54(1H,br),8.73(2H,br)(3)喜樹堿衍生物的制備CM-Dexttan鈉鹽(CM度0.5)(772mg)溶于水(50ml)中,向其中加入DMF(25ml)?;旌衔镌诒鋮s下攪拌,并向其中加入7-N-(甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰基甘氨?;?氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(106mg)和2-乙氧基-1-乙氧羰基-1,2-二氫喹啉(1.57g)?;旌衔锓磻?yīng)過夜,并加到乙醇中(450ml)得沉淀,進(jìn)一步按實(shí)施例1-(10)相同的方式處理得期望的喜樹堿衍生物(545mg),為淡黃色粉末,基于375nm吸收度計算的7-氨基甲基-10,11-亞乙基二氧基-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽在期望的喜樹堿衍生物中的含量為5.5%。用凝膠滲透色譜(GPC)分析法測得期望的喜樹堿衍生物的平均分子量為165,000,分布度(Mw/Mn)為1.40。
GPC分析的條件G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。
實(shí)施例410-(3’氨基丙氧基)-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備(1)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-2-硝基苯甲醛二甲基縮醛的制備5-羥基-2-硝基苯甲醛二甲基縮醛(3.0g)溶于干燥的二甲基甲酰胺(50ml),向其中加入碘化鈉(3.15g),碳酸鉀(1.93g)和3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯(6.95g)?;旌衔镌?0℃攪拌3小時并冷至室溫?;旌衔镆砸宜嵋阴ヌ崛。崛∫阂燥柡吐然c水溶液洗滌,并用硫酸鈉干燥。得到的溶液在減壓下濃縮以除去溶劑,殘渣以硅膠柱層析精制得標(biāo)題化合物(5.22g)為淡黃色油狀物。
收率定量的IR(凈)Vmaxcm-1=3360,1710質(zhì)譜m/z=393([M+Na]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.44(9H,s),2.02(2H,quint.,J=6Hz),3.33(2H,dd,J=13Hz,6Hz),3.44(6H,s),4.11(2H,t,J=6Hz),4.7(1H,brs),6.01(1H,s),6.90(1H,dd,J=9Hz,3Hz),7.29(1H,d,J=3Hz),7.97(1H,d,J=9Hz)(2)10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-(20S)-喜樹堿的制備5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-2-硝基苯甲醛二甲基縮醛(1270mg)溶于乙醇(20ml)中,向其中加入10%鈀一炭(120mg),混合物在氫氣下攪拌1.5小時。濾除催化劑,向?yàn)V液中加入(4S)-7,8-二氫-4-乙基-4-羥基-1H-吡喃[3,4-f]并二氫吲哚-3,6-1 0(4H)-三酮(300mg)和P-甲苯磺酸(22mg),并將混合物在室溫攪拌過夜?;旌衔镌跍p壓下濃縮以除去溶劑,殘渣用硅膠柱層析精制得淡黃色粉末狀標(biāo)題化合物(204mg)。
M.p.223-224℃(分解)收率34%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3360,1750,1690質(zhì)譜m/z=522([M+H]+)NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.03(3H,t,J=7.5Hz),1.46(9H,s),1.8-2.0(2H,m),2.08(1H,dd,J=12.5Hz,6.5Hz),2.10(1H,dd,J=12.5Hz,6Hz),3.40(2H,q,J=6.5Hz),4.18(2H,t,J=6Hz),4.82(1H,brs),5.24(2H,s),5.29(1H,d,J=16Hz),5.73(1H,d,J=16Hz),7.12(1H,d,J=3Hz),7.43(1H,dd,J=9Hz,3Hz),7.61(1H,s),8.09(1H,d,J=9Hz),8.20(1H,d,J=9Hz)(3)10-(3’-氨基丙氧基)-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-(20S)-喜樹堿(352mg)溶于干燥的二噁烷-乙醇(7ml-1ml)中,在攪拌和冰冷卻下,向混合物中加入19%的二噁烷鹽酸(5ml)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌并向其中加入異丙醚(10ml)。過濾收集沉淀粉末并洗滌得黃色粉末狀標(biāo)題化合物(339mg)。
M.p.214-218℃(分解)IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3470,3280,1745質(zhì)譜m/z=422([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7.5Hz),1.80-1.95(2H,m),2.10-2.22(2H,m),2.96-3.10(2H,m),4.27(2H,t,J=6Hz),5.25(2H,s),5.42(2H,s),7.29(1H,s),7.49-7.55(2H,m),8.08(1H,d,J=10Hz),8.19(3H,brs),8.54(1H,s)實(shí)施例510-(3’-(甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨0被?丙氧基]-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(1)10-[3’-(t-丁氧羰基-甘氨酰基)-甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨0被鵠丙氧基]-(20S)-喜樹堿的制備10-(3’氨基丙氧基)-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(325mg)溶于干燥的二甲基甲酰胺(10ml),在攪拌及冰冷卻下向其中加入N-羥基琥珀酰亞胺(4當(dāng)量),二異丙基乙胺(2當(dāng)量),N-t-丁氧羰基-甘氨?;?甘氨酰基-L-苯丙氨?;拾彼?2當(dāng)量)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞酰胺鹽酸鹽(4當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜,并在減壓下濃縮以除去溶劑。殘渣用硅膠柱層析精制定量地得黃色粉末狀標(biāo)題化合物(597mg)。
IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3280,1750,1660質(zhì)譜m/z=840([M+H]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.36(9H,s),1.8-2.04(4H,m),2.72-2.84(1H,m),3.00-3.12(1H,m),3.24-3.36(2H,m),3.50-3.80(6H,m),4.18(2H,t,J=6Hz),4.44-4.54(1H,m),5.24(2H,s),5.42(2H,s),6.50(1H,s),6.99(1H,t,J=6Hz),7.12-7.27(5H,m),7.28(1H,s),7.48-7.55(1H,m),7.50(1H,s),7.88-7.96(1H,m),8.07(1H,d,J=9Hz),8.12-8.36(2H,m),8.51(1H,s)
(2)10-[3’-(甘氨?;?甘氨?;?L-苯丙氨?;?甘氨酰氨基)丙氧基]-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽的制備10-[3’-(t-丁氧羰基-甘氨?;?甘氨酰基-L-苯丙氨?;?甘氨酰氨基)-丙氧基]-(20S)-喜樹堿(580mg)以與實(shí)施例4-(3)相同的方式處理得黃色粉末狀標(biāo)題化合物(438mg)。
收率82%M.p.194-199℃(分解)IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3190,1745,1650質(zhì)譜m/z=740([M-Cl]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.80-2.03(4H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.05(1H,dd,J=14Hz,5Hz),3.2-3.5(2H,m),3.52-3.62(2H,m),3.62-3.83(4H,m),4.19(2H,t,J=6Hz),4.48-4.58(1H,m),5.25(2H,s),5.42(2H,s),6.5(1H,brs),7.13-7.26(5H,m),7.28(1H,s),7.49-7.55(1H,m),7.50(1H,s,J=9.5Hz),7.93(1H,t,J=6Hz),8.0-8.14(4H,m),8.32-8.41(2H,m),8.51(1H,s),8.56(1H,t,J=5.5Hz)實(shí)施例6下式的喜樹堿衍生物的制備 CM-Dextran鈉鹽(CM-度0.5)(513mg)溶于水(50ml)中,在攪拌下向其中加入10-[3’-(甘氨?;?甘氨?;?L-苯丙氨?;?甘氨酰氨基)丙氧基]-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽(77加g)和1-(3-二甲氯基丙基)-3-乙基碳二亞酰胺鹽酸鹽(1.54g),在加入過程中溫度保持在10℃以下。反應(yīng)混合物在10℃以下攪拌兩小時,在此過程中混合物的pH用0.2N鹽酸維持在6.0-6.5。反應(yīng)混合物用離子交換柱層析(AGMP-50,Na型,30ml,Bio-Rad,Laboratories,Inc.制造)精制。將含有期望的化合物的組份合并、過濾,并向?yàn)V液中加入乙醇。離心收集沉淀,洗滌,減壓下干燥得淺黃色粉末狀復(fù)合物(492mg)?;?80nm吸收度計算的10-(3’-氨基丙氧基)-(20S)-喜樹堿鹽酸鹽在期望的喜樹堿衍生物中的含量為2.8%。用凝膠滲透色譜(GPC)分析法測得期望的喜樹堿衍生物的平均分子量為179,000,分布度(Mw/Mn)為1.42。
GPC分析的條件G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。
實(shí)施例7下式喜樹堿衍生物的制備 (1)(9S)-1-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨?;?甘氨酰氨基)-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氫吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮的制備標(biāo)題化合物(247mg)以與實(shí)施例1-(8)相同的方式,以淺黃色無定形固體從(9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氫吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮鹽酸鹽(166mg)和t-丁氧羰基甘氨酰甘氨?;?L-苯丙氨酰基甘氨酸(2當(dāng)量)得到。
收率82%IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3290,1710,1655質(zhì)譜m/z=854([M+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.87(3H,t,J=7Hz),1.37(9H,s),1.8-1.95(2H,m),2.05-2.3(1H,m),2.42(3H,s),2.5-2.85(2H,m),2.9-3.1(1H,m),3.15-3.4(2H,m),3.5-3.8(6H,m),4.4-4.55(1H,m),5.26(2H,s),5.42(2H,s),5.55-5.65(1H,m),6.53(1H,s),6.99(1H,t,J=5Hz),7.1-7.3(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11Hz),7.8-7.95(1H,m),8.1-8.2(1H,m),8.3-8.4(1H,m),8.4-8.5(1H,m)(2)(9S)-1-(甘氨?;?甘氨?;?L-苯丙氨?;拾滨0被?-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7)二氫吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮的制備標(biāo)題化合物(193mg)以與實(shí)施例1-(9)相同的方式從上項(1)的化合物(220mg)得到,為黃色粉末。
M.p.>165℃(分解)IR(石蠟糊)Vmaxcm-1=3350,1745,1660,1615質(zhì)譜m/z=754([M-Cl+H]+)NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.87(3H,t,J=7Hz),1.80-1.94(2H,m),2.08-2.27(2H,m),2.41(3H,s),2.77(1H,dd,J=13Hz,9Hz),3.01(1H,dd,J=13Hz,5Hz),3.15-3.28(2H,m),3.5-3.91(6H,m),4.45-4.56(1H,m),5.25(2H,s),5.41(1H,d,J=13Hz),5.42(1H,d,J=13Hz),5.57(1H,m),7.12-7.30(5H,m),7.32(1H,s),7.80(1H,d,J=11Hz),8.0-8.2(3H,br),8.32(1H,d,J=7Hz),8.43(1H,t,J=5.5Hz),8.50-8.62(2H,m)(3)喜樹堿衍生物的制備CM-Dextran鈉鹽(CM-度0.65)(2,000mg)和上項(2)得到的化合物(170mg)用與實(shí)施例3-(3)相同的方式處理得期望的喜樹堿衍生物(1803mg),為淺黃色粉末?;?76nm吸收度計算的(9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氫吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮鹽酸鹽在期望的喜樹堿中的含量為3.0%。用凝膠滲透色譜(GPC)分析測得期望的喜樹堿衍生物的平均分子量為187,000,分布度(Mw/Mn)為1.54。
GPC分析的條件G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。
實(shí)施例8-24表1所列的喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的表1 [CM-Dextran·Na羧基甲基葡聚糖鈉鹽]
實(shí)施例25-41表2所列喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的。表2
實(shí)施例42-59表3所列喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的。表3
實(shí)施例60-76表4所列喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的。表4
實(shí)施例77-93表5所列喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的。表5
實(shí)施例94-110表6所列喜樹堿衍生物系以與實(shí)施例1-6相同的方式得到的。表6
參考例1(1)葡聚糖(葡聚糖T-110,平均分子量100,000(用GPC分析),Pharmacia Biotech AB制造)(29g)溶于水(290ml)中。在0-5℃向此溶液中加入硼氫化鈉(1.45g),混合物在5℃攪拌過夜。用醋酸將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至5,混合物在室溫進(jìn)一步攪拌3小時。用2N氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)混合物的pH至7,并在激烈攪拌下向其中加入乙醇(1.2L)?;旌衔锓胖?,同時不溶性物質(zhì)沉淀?;旌衔锷锨逡簝A出,剩余物離心。殘渣溶于水(0.5L)并將混合物冷凍干燥得白色粉末(26.3g)。
(2)如此得到的白色粉末(50g)溶于水(500ml)中,在冰冷卻下向其中加入氫氧化鈉(200g)。混合物攪拌30分鐘并溫?zé)嶂潦覝?。向此混合物中滴加一氯乙?110g)的水(150ml)溶液,混合物在40℃攪拌18小時。反應(yīng)混合物冷卻至10℃以下,并用醋酸調(diào)節(jié)混合物的pH至8-9。激烈攪拌下向反應(yīng)混合物中加入甲醇(8L),同時使不溶物沉淀。過濾收集不溶物,并溶于純水(5L)。溶液用超過濾法除鹽,剩余溶液在減壓下濃縮、過濾。向?yàn)V液中加入乙醇,過濾以收集沉淀物。以醇水溶液和丙酮洗滌,并在減壓下室溫干燥,然后在50℃減壓干燥得羧基甲基葡聚糖(CM-Dextran)鈉鹽(中和滴定法測得羧基甲基化度0.5)(50.2g)。
參考例2具有羧基甲基化度為0.65的CM-Dextran鈉鹽除改變一氯醋酸的量外余皆以與參考例1相同的方式得到。
權(quán)利要求
1.包含[Ⅰ]式所代表的喜樹堿化合物 其中R1,R2,R3,R4和R5為(A)在R1,R2,R3,R4和R5中兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,或兩者均為氫原子,同時R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)中有一個是具有-Xn-Alkm-R6式的基團(tuán),其余的兩個基團(tuán)是氫原子,或(B)在R1,R2,R3,R4和R5之中,兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,同時上述亞烷基中的一個碳原子被具有-Xn-Alkm-R6式的基團(tuán)取代,R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)為氫原子,烷基或鹵原子,同時在(A)或(B)中的亞烷基的一個或兩個亞甲基可任選地被-O-,-S-或-NH-置換,X為-O-或-NH-,Alk為亞烷基,R6為-NH2,具 式的基團(tuán),或-OH,m和n兩者均為0或1,或m為1,n為0,此喜樹堿化合物與氨基酸或肽結(jié)合,或?yàn)槠潲}。
2.按照權(quán)利要求1的化合物,其中上述氨基酸或上述肽的一部分或所有羧基通過酸-酰胺或酯鍵與化合物[Ⅰ]的R6鍵合,或?yàn)槠潲}。
3.按照權(quán)利要求2的化合物,其中氨基酸或肽的C-末端羧基通過酸-酰胺或酯鍵與化合物[Ⅰ]的R6鍵合,或?yàn)槠潲}。
4.按照權(quán)利要求3的化合物,其中化合物[Ⅰ]的R6為-NH2,或?yàn)?式的基團(tuán),同時化合物[Ⅰ]與肽結(jié)合,或?yàn)槠潲}。
5.按照權(quán)利要求4的化合物,其中(1)R1和R2結(jié)合形成三亞甲基基團(tuán),R3為3-氨基丙氧基,R4和R5各為氫原子;(2)R1為哌嗪基甲基,R2和R5各為氫原子,R3和R4結(jié)合形成1,2-亞乙基二氧基團(tuán);(3)R1為氨基甲基,R2和R5各為氫原子,R3和R4結(jié)合形成1,2-亞乙基二氧基團(tuán);(4)R1,R2,R4和R5各為氫原子,R3為3-氨基丙氧基;(5)R1和R2結(jié)合形成氨基取代的三亞甲基基團(tuán),R3為甲基,R4為氟原子,R5為氫原子;或(6)R1,R3,R4和R5各為氫原子,R2為氨基,或?yàn)槠潲}。
6.按照權(quán)利要求5的化合物,其中的肽選自包括下列肽組的一個成員甘氨?;?甘氨?;?L或D-苯丙氨酰基-甘氨酸,甘氨酰基-甘氨酸,甘氨?;?甘氨?;?甘氨酸,甘氨?;?甘氨酰基-甘氨?;?甘氨酸,甘氨酰基-甘氨?;?甘氨?;?甘氨?;?甘氨酸,L-或D-苯丙氨?;?甘氨酸和L或D亮氨?;?甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
7.按照權(quán)利要求6的化合物,其中的肽為甘氨酰基-甘氨?;?L-苯丙氨酰基-甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
8.按照權(quán)利要求6的化合物,其中的肽為甘氨?;?甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
9.按照權(quán)利要求6的化合物,其中的肽為甘氨?;?甘氨酰基-甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
10.按照權(quán)利要求6的化合物,其中的肽為甘氨?;?甘氨酰基-甘氨?;?甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
11.按照權(quán)利要求6的化合物,其中的肽為L-或D-苯丙氨?;?甘氨酸,或?yàn)槠潲}。
12.包含[Ⅰ]式所代表的喜樹堿化合物的制備方法, 其中R1,R2,R3,R4和R5為(A)在R1,R2,R3,R4和R5中兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,或兩者均為氫原子,同時R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)中有一個是具有-Xn-Alkm-R6式的基團(tuán),其余的兩個基團(tuán)是氫原子,烷基或鹵原子,或(B)在R1,R2,R3,R4和R5之中,兩個相鄰的基團(tuán)彼此結(jié)合形成亞烷基,同時上述亞烷基中的一個碳原子被具有-Xn-Alkm-R6式的基團(tuán)取代,R1,R2,R3,R4和R5剩余的三個基團(tuán)為氫原子,烷基或鹵原子,同時在(A)或(B)中的亞烷基的一個或兩個亞甲基可任選地被-O-,-S-或-NH-置換,X為-O-或-NH-,Alk為亞烷基,R6為-NH2,具 式的基團(tuán),或-OH,m和n兩者均為0或1,或m為1,n為0,此喜樹堿化合物與氨基酸或肽結(jié)合,或?yàn)槠潲};此制備方法包括化合物[Ⅰ]與氨基酸或肽反應(yīng),當(dāng)其氨基或羧被保護(hù)時,從氨基或羧基上脫去保護(hù)基,然后,如果需要,將生成的化合物轉(zhuǎn)化為其鹽。
全文摘要
包含[I]式所代表的喜樹堿化合物,其中R
文檔編號A61K47/48GK1300733SQ00133569
公開日2001年6月27日 申請日期1996年12月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月28日
發(fā)明者辻原健二, 川口隆行, 奧野哲, 矢野敏朗 申請人:田邊制藥株式會社