專利名稱：用母牛分枝桿菌治療慢性病毒感染的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在病毒感染，特別是慢性病毒感染的治療中母牛分枝桿菌的用途。
背景技術(shù)：
英國(guó)專利說(shuō)明書，NO.2156673(國(guó)際專利說(shuō)明書WO85/03639)敘述了包含殺死的母牛分枝桿菌細(xì)胞的免疫治療試劑。這些試劑可用于分枝桿菌疾病的免疫治療，特別是結(jié)核病和麻風(fēng)病的免疫治療。據(jù)報(bào)道，利用這一免疫治療試劑能夠加速眾所周知的單獨(dú)化學(xué)治療難于除去的導(dǎo)致結(jié)核病或麻風(fēng)病的存留桿菌。
國(guó)際專利說(shuō)明書PCT/GB85/00183(WO85/05034)敘述了用于減輕關(guān)節(jié)疾病癥狀和治療或診斷的組合物，該組合物中含有作為活性成分的完整的母牛分枝桿菌生物體。據(jù)報(bào)道，母牛分枝桿菌的制劑可用于治療各種自身免疫疾病，和尤其是關(guān)節(jié)疾病包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎或Reiter綜合癥。
母牛分枝桿菌的其它用途在下面幾個(gè)專利中有專門說(shuō)明WO91/02542，其中提到了含有起源于母牛分枝桿菌，通常用于治療缺半乳糖的IgG(即，重鏈上缺乏N連接的寡糖而來(lái)的末端半乳糖的IgG)的比例增加的病癥的抗原性的和免疫調(diào)節(jié)性的物質(zhì)的組合物，WO92/08484，其中提到利用母牛分枝桿菌治療葡萄膜炎，WO94/06466，其中提供了起源于母牛分枝桿菌的抗原性和/或免疫調(diào)節(jié)性物質(zhì)，用于生產(chǎn)治療AIDS和治療HIV陽(yáng)性的無(wú)病癥病人的藥劑，和南非專利申請(qǐng)95/2644，其中涉及有望對(duì)中胚層，外胚層，內(nèi)胚層起源的腫瘤，包括胸和支氣管腫瘤的治療有效的母牛分枝桿菌的免疫治療。
盡管WO92/08488進(jìn)一步公開(kāi)，殺死的母牛分枝桿菌的細(xì)胞可以用較為有利的方式刺激和/或修飾抗非母牛分枝桿菌內(nèi)源的抗原的免疫應(yīng)答，但為了方便，因此也是優(yōu)選的，上面提到的治療試劑含有母牛分枝桿菌的死細(xì)胞，最優(yōu)選地是經(jīng)過(guò)高壓滅菌殺死的細(xì)胞。
國(guó)際申請(qǐng)PCT/GB98/03346中論述已經(jīng)獲得含有冷休克治療誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的冷休克母牛分枝桿菌制劑，并且這樣的制劑具有各種用途，包括但不限于如Raynaud綜合癥或體溫過(guò)低等疾病的治療。
發(fā)明公開(kāi)我們已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)用母牛分枝桿菌進(jìn)行慢性病毒感染的治療對(duì)治療感染是有益的，因?yàn)槟軌蚍€(wěn)定感染，或部分地或整個(gè)地改進(jìn)臨床治療過(guò)程。
母牛分枝桿菌在人或其它動(dòng)物中抵抗病毒疾病的作用是驚人的，因?yàn)檫@一細(xì)菌抗原的作用對(duì)在較遠(yuǎn)位點(diǎn)感染病毒的細(xì)胞誘導(dǎo)應(yīng)答。
所以，本發(fā)明提供了治療HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，該方法包括對(duì)需要治療的人或動(dòng)物給藥有效量的母牛分枝桿菌制劑。但對(duì)這些非HIV慢性病毒的作用可能與抗HIV的作用不同，因?yàn)镠IV直接攻擊宿主的免疫系統(tǒng)，而據(jù)認(rèn)為宿主的免疫系統(tǒng)是受母牛分枝桿菌調(diào)節(jié)的。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了母牛分枝桿菌制備物用于生產(chǎn)治療HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑的用途。
發(fā)明的詳細(xì)描述有些病毒可以進(jìn)入特異的細(xì)胞，改變細(xì)胞的功能，以生產(chǎn)病毒蛋白質(zhì)，和表達(dá)應(yīng)急蛋白質(zhì)，但不殺死細(xì)胞。這樣，這些病毒慢慢地在感染的宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，這樣的感染會(huì)引起慢性病或疾病再發(fā)，并且也會(huì)產(chǎn)生臨床損傷。所以，“慢性病毒感染”是指人或其它動(dòng)物感染病毒并且在較長(zhǎng)的時(shí)期，通常幾星期，幾月甚至幾年內(nèi)在宿主的細(xì)胞內(nèi)繁殖而不危及宿主的生命。
引起慢性感染并且根據(jù)本發(fā)明可以治療的病毒有人乳頭瘤病毒(HPV)，單純性皰疹和其它皰疹病毒，乙型和丙型肝炎病毒以及其它肝炎病毒和麻疹病毒，所有這些病毒能夠產(chǎn)生嚴(yán)重的臨床癥狀。長(zhǎng)期的感染最終會(huì)導(dǎo)致例如能致死患者的丙型肝炎病毒引起的肝癌這樣的疾病。
在人體內(nèi)，乳頭瘤病毒會(huì)引起四種不同的疣散發(fā)性疣，通常是在手上；腳上的足底疣；復(fù)合性疣，其中有在分散的大面積的皮膚上融合的贅疣，通常也包括與宮頸異常增生相關(guān)的陰部(性病疣)在內(nèi)；和與子宮異常增生相關(guān)但通常沒(méi)有其它損傷的乳頭瘤病毒。其中前面兩個(gè)通常較易治療，自愈或局部措施就能治療。后面兩個(gè)較難治療，通常不同程度地伴隨人生命期。宮頸異常增生已知是惡性病的前兆，并且是進(jìn)行子宮頸涂片的主要原因。HPV至少有75種可以區(qū)別的類型。一種損傷通常與一種類型相關(guān)，復(fù)合的損傷通常與同時(shí)感染幾種不同類型的病毒有關(guān)，陰部疣和宮頸異常增生通常與16，18或31型病毒相關(guān)。根據(jù)本發(fā)明，這些類型，以及其它HPV亞型，例如HPV2a和HPV21的病毒是可以治療的。
單純性皰疹病毒HSV-1引起的已知的癥狀是“凍瘡”，這種病癥一年發(fā)生幾次，在頰或鼻粘膜和周圍的皮膚之間的粘膜接合處有小的或潰瘍性損傷。當(dāng)免疫性受急性病毒感染破壞時(shí)，通常發(fā)生損傷。在小的神經(jīng)末梢這些病毒會(huì)長(zhǎng)期存在。HSV-2病毒也可能引起生殖器皰疹，其中在陰莖和包皮之間或圍繞女性外陰的粘膜接合處的周圍，損傷會(huì)擴(kuò)展。在兩種性別中，生殖器皰疹損傷有趨勢(shì)比凍瘡更廣泛更嚴(yán)重。雖然一次與一次不一樣，但生殖器皰疹比凍瘡頑固得多。另外，在小的神經(jīng)中，病毒潰瘍會(huì)連續(xù)地再感染陰部區(qū)域，因此病毒就變得頑固。本發(fā)明提供了對(duì)HSV-1和HSV-2感染，以及其它皰疹病毒的治療。
雖然可能不是唯一的原因，但乙型和丙型肝炎病毒通常從人到人的傳播媒介是血液產(chǎn)物。兩種類型的病毒都會(huì)引起急性肝炎，但在一些人中治愈了沒(méi)有后遺問(wèn)題，而在另一些人中會(huì)變成慢性。慢性肝炎導(dǎo)致肝的慢性硬化，由于會(huì)發(fā)展成肝衰竭或惡性肝癌，肝硬化可能導(dǎo)致死亡。這些疾病都是不易治療的。
偶爾，麻疹病毒會(huì)在腦中慢慢地固定下來(lái)和引起循序性并且致死的稱為亞急性硬化全腦炎(SSPE)的病癥，這種病癥還沒(méi)有已知的治療措施。
按照本發(fā)明可以治療的其它慢性病毒感染包括埃伯斯坦一巴病毒(EBV)，以及其它病毒，如可能與腫瘤相關(guān)的那些，或在動(dòng)物的情況中的各種牲畜的病毒疾病，例如家養(yǎng)的寵物或農(nóng)業(yè)上的重要的牲畜的那些病。
可以理解的是，對(duì)感染的治療是緩解，減輕或除去感染的癥狀，通過(guò)除去或減少負(fù)載的病毒等等減輕感染的嚴(yán)重性來(lái)延遲或阻止啟動(dòng)次級(jí)變化如惡性或其它形態(tài)的變化。
母牛分枝桿菌制劑可以全部是或包括母牛分枝桿菌的死細(xì)胞的材料。盡管高壓滅菌是優(yōu)選的殺死細(xì)菌細(xì)胞的方法，例如在69kPa，115℃-125℃下處理10分鐘，但例如利用輻射，例如在2.5megarads劑量的60Cobalt下，化學(xué)地，或其它方法也是可以的。高壓滅菌可以比輻射產(chǎn)生更有效的制劑。
在殺死之前，母牛分枝桿菌可能在適當(dāng)?shù)墓腆w培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。改良的Sauton液體培養(yǎng)基是優(yōu)選的(Boyden等人)，用瓊脂固化，優(yōu)選地是1.3％的瓊脂。在有氧溫育后，通常在32℃下10天，可以收獲生物體，然后，稱重并懸浮于稀釋液中，可備用于給藥。如果需要，在使用前，可以在4℃下儲(chǔ)存。
除了在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)細(xì)胞，也可以利用如在發(fā)酵罐中的液體培養(yǎng)基如改良的Sauton培養(yǎng)基(Boyden等人)。
在生長(zhǎng)的過(guò)程中，為了誘導(dǎo)生產(chǎn)冷或熱休克蛋白質(zhì)，可以用冷休克或熱休克處理母牛分枝桿菌。適當(dāng)?shù)臒嵝菘藯l件包括在升高的溫度下，例如37，42或45℃下生長(zhǎng)一個(gè)時(shí)期，從10分鐘到幾個(gè)小時(shí)例如3個(gè)或更多個(gè)小時(shí)。冷休克處理可以是在減低的溫度下例如10到25℃下處理相同的時(shí)期。
稀釋液可以是無(wú)熱原的未緩沖的鹽。優(yōu)選地，稀釋液可以是硼酸緩沖的，優(yōu)選地含有表面活性劑如吐溫80。適當(dāng)?shù)呐鹚峋彌_液是Na2B4O7.10H2O-3.63克，H3BO3-5.25克，NaCl-6.19克，吐溫800.0005％，用蒸餾水加到1升。這些稀釋液在藥物學(xué)上是可接受的。
通過(guò)以母牛分枝桿菌如可從英國(guó)的聯(lián)邦藥物管理局IND和醫(yī)藥控制部的CTX的幾個(gè)研究人員用于人的GMP制劑SRL172的給藥已經(jīng)得到上面提到的對(duì)人產(chǎn)生的結(jié)果。Huntingdon Research已經(jīng)進(jìn)行了GLP的急性毒理研究。在美國(guó)已經(jīng)得到了1期和2期的安全數(shù)據(jù)，并交給了FDA。SRL172在3期試驗(yàn)中用于結(jié)核病的免疫治療。SRL172可以優(yōu)選地用于本發(fā)明。
SRL172是起源于R877R菌株的母牛分枝桿菌的制劑，根據(jù)布達(dá)佩斯條約，該菌株以登記號(hào)NCTC11659，在1984年2月13日，保藏于英國(guó)，倫敦NW95HT，Colindale街，國(guó)立典型培養(yǎng)物保藏中心(NCTC)，中央公共健康實(shí)驗(yàn)室。R877R最初是從中央U(xiǎn)ganda的Lango區(qū)(Stanford和Paul)的泥沙樣品中分離得到的。
也可以利用其它母牛分枝桿菌替代SRL172。通過(guò)生化和抗原性的標(biāo)準(zhǔn)可以鑒定屬于母牛分枝桿菌的生物體(Bonicke等人)。
以無(wú)或基本上無(wú)母牛分枝桿菌抗原或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的母牛分枝桿菌物質(zhì)給藥在本發(fā)明中是優(yōu)選的。換句話說(shuō)，即給藥的藥劑或組合物可以含有，或基本上包括母牛分枝桿菌的抗原性和/或免疫調(diào)節(jié)性物質(zhì)，如死的細(xì)胞，提取物或衍生物，和藥物學(xué)上可接受的稀釋劑。
以“治療有效的量”給藥是優(yōu)選的，因?yàn)檫@樣對(duì)病人是有利的。這樣的給藥的益處是至少能夠減輕一種癥狀。實(shí)際的給藥量，給藥速度和時(shí)間將根據(jù)治療的病情的特性和嚴(yán)重性而變化。治療的處方，例如，藥量等等，屬于普通治療醫(yī)生和其它治療人員的責(zé)任范圍。
一個(gè)劑量(其中以死細(xì)胞給藥)通常含有107到1010個(gè)殺死的母牛分枝桿菌微生物。盡管需要的話，可以多次給藥，例如間隔2星期到6個(gè)月，但給藥病人的一個(gè)劑量的藥中可以有108到109個(gè)殺死的母牛分枝桿菌。
根據(jù)治療的癥狀，可以同時(shí)或按順序單獨(dú)使用組合物或結(jié)合其它治療劑使用。
根據(jù)本發(fā)明和用于本發(fā)明的藥物組合物，除了活性成分還包括藥物學(xué)可接受賦形劑，載體，緩沖液，穩(wěn)定劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的物質(zhì)。這樣的物質(zhì)應(yīng)該是非毒性的并且應(yīng)該不會(huì)干擾活性成分的效力。載體或其它物質(zhì)的具體特性將根據(jù)給藥的途徑而不同，而這些途徑盡管優(yōu)選的是注射，例如皮，皮下或透皮，但這樣的途徑應(yīng)該是本領(lǐng)域技術(shù)人員使用的方便途徑。
對(duì)于注射途徑，活性成分的形式將是腸胃可接受的水溶液，其中無(wú)熱原，pH適當(dāng)，等滲和穩(wěn)定。已經(jīng)在上面討論過(guò)，適當(dāng)?shù)南♂寗┦撬幬飳W(xué)可接受的，并且是優(yōu)選的。
也可以口服給藥，這時(shí)，藥物組合物可以是片劑，膠囊，粉末或液體形式。片劑可以含有固體載體如明膠或佐劑。液體藥物組合物通常含有液體載體，如水，原油，動(dòng)物或植物油，礦質(zhì)油或合成油。還可以包括生理鹽溶液，葡聚糖或其它多糖溶液或醇如乙二醇，丙二醇，或聚乙二醇。
利用合適配方，例如包括穿行到氣管的合適部分的大小的顆粒將母牛分枝桿菌以氣霧劑給藥到氣管。這種制劑是干粉而不是含水懸浮液。
除了殺死的細(xì)胞，也可以利用起源于母牛分枝桿菌的其它物質(zhì)，特別是具有需要的活性的提取物或合成分子。
在下面的非限制性實(shí)施例中本發(fā)明得到進(jìn)一步說(shuō)明，這些實(shí)施例報(bào)告了接受一個(gè)或多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)劑量(108-109個(gè)細(xì)胞)的母牛分枝桿菌的病人的癥狀的研究。
實(shí)施例1接受用殺死的母牛分枝桿菌免疫治療別的適應(yīng)癥的兩個(gè)個(gè)體在手上有推測(cè)是病毒起因的長(zhǎng)期的單一類型的疣。在治療期間，觀察到疣完全治愈。
實(shí)施例2
由各種HPV亞型引起的擴(kuò)展性復(fù)合疣的三個(gè)病人接受了殺死的母牛分枝桿菌的系列注射。
第一位是免疫防御系統(tǒng)因?yàn)閲?yán)重的并發(fā)性免疫缺陷而從親本再構(gòu)建骨髓才5個(gè)月的15歲的男孩。他感染了HPV2a和21，并且在8年前已經(jīng)發(fā)展成難治療的疣。在過(guò)去幾年中，他接受了7次母牛分枝桿菌注射，有時(shí)，注射后IL-2產(chǎn)量增加，并且產(chǎn)生CD8毒性細(xì)胞。但是，這些副反應(yīng)都不長(zhǎng)久。他的臨床損傷繼續(xù)發(fā)展，檢測(cè)其發(fā)展。
第二位是29歲的婦女，她在9歲時(shí)第一次在手指上出現(xiàn)了疣，在15歲時(shí)，手和腳上的疣大量增加，并且在19歲時(shí)延伸到陰部。當(dāng)她20歲時(shí)進(jìn)行了宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，仍然顯示邊緣性的中等核異常，為此她接受了幾次局部的透熱治療和冷凝固治療。她接受了2次3個(gè)劑量的母牛分枝桿菌，第一次在1988年的3月和5月之間，第二次將近在2個(gè)星期的間隔之后。目前她的臨床狀況正在好轉(zhuǎn)。
第三位是54歲的婦女，她接受了3個(gè)單月劑量的母牛分枝桿菌，現(xiàn)在正在檢查對(duì)治療的反應(yīng)情況。
實(shí)施例3一個(gè)38歲的婦女在過(guò)去的6個(gè)月里進(jìn)行的子宮涂片顯示在過(guò)去的20年中她有子宮異型增生，在這20年中，她生產(chǎn)了3個(gè)小孩，她接受過(guò)局部激光治療。在1995年她接受了一次殺死的母牛分枝桿菌的注射后的兩次定期的宮頸檢查顯示癥狀正常，而她的第一次檢查是在22歲時(shí)。隨后，她進(jìn)一步接受了4次每年一次的注射殺死的母牛分枝桿菌和宮頸檢查，最后一次在1999年5月19日。自從開(kāi)始治療后，所有的涂片都是病毒清除了。
實(shí)施例4一個(gè)34歲的婦女被檢測(cè)到有3個(gè)月的陰部皰疹的歷史，接受了2次月間隔地注射殺死的母牛分枝桿菌，第3次注射是在間隔3個(gè)月后。在第一次注射后15個(gè)月時(shí)，病人作了檢查，報(bào)告說(shuō)，在接受治療后，她已經(jīng)是并且保持了無(wú)癥狀狀態(tài)。在這個(gè)時(shí)期，本來(lái)估計(jì)即使用抗病毒的化學(xué)治療連續(xù)治療，她也會(huì)有2次或3次的重新發(fā)作。
實(shí)施例5一個(gè)有先天性的弓形體歷史的9歲的女孩在1年前接種麻疹疫苗后出現(xiàn)了正在惡化的SSPE。在沒(méi)有任何其它替代治療的情況下，在1997年11月開(kāi)始用殺死的母牛分枝桿菌免疫治療。在開(kāi)始的15個(gè)月的治療中，她接受了母牛分枝桿菌的重復(fù)注射，她的病情進(jìn)展較小，從整體來(lái)說(shuō)，即癥狀沒(méi)有明顯的惡化。在接著的12個(gè)月中，她接受了間隔1星期的2次注射，觀察到了相當(dāng)明顯的好轉(zhuǎn)。病人又能夠自己坐下了。還報(bào)告說(shuō)眼睛，頭，頸，臂和腿都可以大幅度運(yùn)動(dòng)，并且她可以進(jìn)行有意的體育運(yùn)動(dòng)。對(duì)腦脊髓液的抗體分析發(fā)現(xiàn)了抗體從抗麻疹病毒的多克隆抗體(與正在惡化的SSPE病有關(guān))變化成寡聚克隆的抗麻疹抗體(與從病毒感染恢復(fù)有關(guān))。
即使單個(gè)出版物或?qū)＠f(shuō)明書都是特定或單獨(dú)適用于引入作為參考的，本說(shuō)明書中的引證的所有公開(kāi)物和專利申請(qǐng)書都可以引入作為參考。
雖然，為了說(shuō)明和理解，通過(guò)敘述和實(shí)施例，前面敘述的發(fā)明已經(jīng)在一定程度上得到了詳細(xì)的陳述，但對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員，很顯然能夠理解的是，在不脫離附加的權(quán)利要求書的精神或范圍的情況下，是可以進(jìn)行一些改變和修改的。
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Stanford和Paul，(1973)Ann.Soc.Belge Med.Trop.53141-389.
權(quán)利要求
1.母牛分枝桿菌制劑用于制造用于治療HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述的HPV感染與宮頸異常增生有關(guān)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是皰疹病毒感染。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的皰疹病毒感染是單純性皰疹病毒感染。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中慢性病毒感染是亞急性硬化全腦炎。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
8.治療HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，該方法包括對(duì)需要治療的人或動(dòng)物給藥治療有效量的母牛分枝桿菌制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
10.根據(jù)利要求9所述的方法，其中所述的HPV感染與宮頸異常增生有關(guān)。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是皰疹病毒感染。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的皰疹病毒感染是單純性皰疹病毒感染。
13.據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是亞急性硬化全腦炎。
14.據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
全文摘要
本發(fā)明提供了母牛分枝桿菌制劑用于生產(chǎn)治療除HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑中的用途。慢性病毒感染包括HPV感染,如與宮頸異常增生相關(guān)的HPV感染,皰疹病毒感染,亞急性硬化全腦炎和肝炎病毒感染。
文檔編號(hào)A61P31/20GK1377274SQ0080347
公開(kāi)日2002年10月30日 申請(qǐng)日期2000年2月16日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月16日
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