專利名稱：用作雌激素藥物的n－取代的二氫吲哚類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作雌激素藥物的新N-取代的二氫吲哚化合物，以及藥物組合物、使用這些化合物的治療方法和制備它們的方法。
背景技術(shù)：
雌激素代替治療已建立用作婦女中防止骨質(zhì)疏松的治療選擇[C.Christiansen，R.Lindsay，Estrogen，Bone Loss andPreservation，Osteoporosis International，1，15-21(1990)]。無相反雌激素治療的問題是會發(fā)生子宮的增生作用，引起子宮內(nèi)膜異位和/或子宮內(nèi)膜癌。盡管不太清楚，但無相反雌激素代替治療與乳腺腫瘤形成的發(fā)病率的增加有關(guān)。非甾族抗雌激素藥物，例如他莫昔芬已用于治療乳腺癌。在用作子宮組織的拮抗藥的同時，他莫昔芬已顯示對人體骨骼產(chǎn)生類似雌激素的作用。然而，在子宮中證實部分激動作用已引起某些關(guān)注。近年的抗雌激素藥物，雷洛昔芬，Lilly’s苯并噻吩是非甾族抗雌激素藥物，它顯示進一步的組織選擇性。在具有節(jié)約骨骼的能力的同時，在動物模型中已證明它比他莫昔芬以較少的程度刺激子宮生長。近年已出現(xiàn)對雌激素受體調(diào)節(jié)劑的組織選擇作用的綜述[T.A.Grese和J.A.Dodge在“Ann.Rep.in Med.Chem.”J.A.Bristol，Ed.Academic Press，New York，1996，181頁]。
吲哚類作為雌激素拮抗藥的應(yīng)用已由Von Angerer，ChemicalAbstracts，99卷，No.7(1983)，Abstract No.53886u報導(dǎo)。還參見J.Med.Chem.1990，33，2635-2640；J.Med.Chem.1987，30，131-136。還參見Ger.Offen.，DE3821148A1 891228和WO96/03375。
本發(fā)明描述的化合物具有對雌激素受體(ER)的中等結(jié)合，在治療骨質(zhì)疏松、前列腺肥大、乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌方面具有潛在應(yīng)用。
發(fā)明描述本發(fā)明的N-取代的二氫吲哚類化合物是用于治療與雌激素缺乏有關(guān)的疾病的組織選擇性雌激素激動劑/拮抗藥。它們包括下式的化合物 其中R1是H或芐基；R2是H、-OH或-O-芐基；R3、R4和R5分別選自H、鹵素、氰基、C1-C6烷基(直鏈或支鏈)、三氟甲基、-OH或它們的C1-C12酯(直鏈或支鏈)或C1-C12烷基醚(直鏈或支鏈或環(huán)狀)，或C1-C6鹵化醚，優(yōu)選C1-C3鹵化醚，包括三氟甲基醚和三氯甲基醚；R6是H或C1-C6烷基；R7是C1-C6烷基；n是2或3；Y是O或S；和X是 其中R’選自相同或不同的C1-C6低級烷基，或X是選自如下的環(huán)狀基團 或其可藥用的鹽。
OH基團的C1-C12酯的實例是C2-C12基酯，例如OC(＝O)C1-C6烷基酯。
烷基的實例是甲基、乙基、正丙基、異丙基和正丁基。
R6和R7的實例是甲基。
其中本發(fā)明更優(yōu)選的化合物是其中Y是O的化合物。優(yōu)選n是2。R3、R4和R5優(yōu)選分別選自H、OH或鹵素。應(yīng)理解在基團R6和R7的烷基中碳原子數(shù)目可彼此獨立地選擇。
本發(fā)明包括由與無機或有機酸的附加反應(yīng)形成的可接受鹽形式。無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、硝酸以及有機酸，例如乙酸、丙酸、檸檬酸、馬來酸、蘋果酸、酒石酸、苯二甲酸、琥珀酸、甲磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟腦磺酸、苯磺酸是有用的。已知帶有堿性氮的化合物可與許多不同的酸(質(zhì)子和非質(zhì)子)配合，通常優(yōu)選以酸加成鹽形式給藥本發(fā)明的化合物。此外，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的季銨鹽，它可通過使側(cè)鏈的親核胺與合適的活性烷基化劑，例如烷基鹵或芐基鹵反應(yīng)制備。
本發(fā)明的化合物具有至少一個不對稱中心，因此化合物可存在和分離成許多旋光立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明包括任何旋光形式的式I化合物或它們的混合物，例如外消旋體。標準分離技術(shù)可用于分離特定對映體或非對映體形式。例如外消旋混合物可通過與‘拆分試劑’的單一對映體反應(yīng)(例如通過非對映體鹽形成或形成共價鍵)轉(zhuǎn)化為旋光非對映體混合物。得到的旋光非對映體混合物可通過標準技術(shù)(如結(jié)晶或色譜法)分離，隨后處理單個的旋光非對映體以除去‘拆分試劑’從而釋放出本發(fā)明化合物的單一對映體。手性色譜法(如手性載體、洗脫劑或離子對試劑)也可直接用于分離對映體混合物。
本發(fā)明的化合物是部分雌激素激動劑，顯示高的雌激素受體親和力，然而，不同于許多雌激素，許多這些化合物不導(dǎo)致子宮濕重量的增加。這些化合物在子宮中是抗雌激素的，能夠完全拮抗在子宮組織中的雌激素激動劑的營養(yǎng)作用。由于這些化合物的組織選擇性性質(zhì)，它們用于治療或預(yù)防哺乳動物由雌激素缺乏或雌激素過量引起或相關(guān)的疾病狀態(tài)或綜合癥。
本發(fā)明化合物通過降低膽固醇和防止骨損失具有類似于雌激素激動劑的能力。這些化合物用于治療許多由雌激素過量或缺乏引起的疾病，包括骨質(zhì)疏松、前列腺肥大、男性禿發(fā)、卵巢癌、不育癥、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、心血管疾病、避孕、早老性癡呆、認識衰退和其它CNS疾病以及某些癌癥，包括黑素瘤、前列腺癌癥、結(jié)腸癌、CNS癌等。此外，這些化合物可用于在經(jīng)絕后婦女的激素代替治療或雌激素補充是有益的其它雌激素缺乏癥狀中。
本發(fā)明的化合物還可用于治療骨損失的方法，所述骨損失可由新骨組織的個別形成和老組織的吸收作用的不平衡產(chǎn)生，導(dǎo)致骨的凈損失產(chǎn)生。該骨損耗在如下范圍的個體中產(chǎn)生，尤其是經(jīng)絕后婦女、接受子宮摘除手術(shù)的婦女、正在接受或已接受長期皮質(zhì)類固醇治療的人、生殖腺發(fā)育不全的人和患有庫欣綜合征的人。用于骨骼恢復(fù)的特殊需要還可建議在患有骨折、缺損骨結(jié)構(gòu)的人體和接受與骨相關(guān)的手術(shù)和/或移植假枝的人中使用這些化合物。除了上述這些問題外，這些化合物可用于治療骨關(guān)節(jié)炎、血鈣過少、血鈣過多、佩吉特氏病、骨軟化、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤和具有對骨組織有害作用的癌的其它形式。治療上述疾病的方法應(yīng)理解為包含向需要該治療的個體給藥藥物有效量的一種或多種本發(fā)明的化合物或其可藥用的鹽。本發(fā)明還包括藥物組合物，它包括一種或多種本發(fā)明的化合物和/或其可藥用的鹽與一種或多種可藥用的的載體、賦形劑等。
還理解這些化合物的劑量、治療方案和給藥方式將根據(jù)所治療的疾病和個體變化，將由所涉及的醫(yī)師判斷。優(yōu)選本發(fā)明的一種或多種化合物的給藥以低劑量開始，并增加直至獲得所需的效果。
這些化合物的有效給藥可以約0.1mg/天-約1000mg/天的有效劑量給出，優(yōu)選給藥將是以單獨劑量或兩個或多個分開劑量的約10mg/天至約600mg/天。該劑量可以用于指導(dǎo)以用于本發(fā)明活性化合物的任何方式向治療者的血液給藥，包括口服、腸胃外(包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射)和經(jīng)皮。用于該披露，經(jīng)皮給藥應(yīng)理解為包括所有穿過人體表面和身體通道的內(nèi)襯，包括上皮和粘膜組織的給藥。該給藥可用本發(fā)明的化合物或其可藥用的鹽以洗液、霜劑、泡沫、貼劑、懸浮劑、溶液和栓劑(直腸和陰道)進行。
含有本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可包含任何常規(guī)使用的口服形式，包括片劑、膠囊、頰形式、錠劑、糖錠和口服液體、懸浮劑或溶液。膠囊可含有活性化合物與惰性填料和/或稀釋劑，例如可藥用的淀粉(例如玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、蔗糖、人工增甜劑、粉末纖維素，例如結(jié)晶和微晶纖維素、面粉、明膠、樹膠等的混合物。有用的片劑制劑可通過常規(guī)的壓制方法、濕造粒或干造粒方法制備和使用可藥用的的稀釋劑、粘結(jié)劑、潤滑劑、崩解劑、懸浮或增溶劑，包括但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、月桂基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、海藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、檸檬酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、滑石、干淀粉和糖粉。本發(fā)明口服制劑可采用標準延遲或延時釋放制劑以改變活性化合物的吸收。栓劑可由傳統(tǒng)材料制備，包括可可脂，含有或不含附加的蠟以改變栓劑的熔點，和甘油。還可以使用水溶性栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇類。
本發(fā)明還提供了制備式(I)化合物的方法，其包含下列之一a)用下式(III)的化合物 其中n、R4、R5、Y和X是如上定義的，烷基化下式(II)的化合物 其中R1、R2、R3、R6和R7是如上定義的，得到式I化合物；或b)使下式的化合物 其中Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是如上定義的，hal表示鹵素，例如氯或溴，與下式的胺反應(yīng)H-X(V)其中X是如上定義的，得到式(I)化合物，或c)脫芐基其中R1是選擇性地取代的芐基和/或R2是選擇性地取代的芐氧基的式I化合物，得到其中R1是氫和/或R2是羥基的式I化合物，或e)酯化其中R3、R4或R5的至少一個是羥基的式I化合物為其酯衍生物。
用于進行上述方法a)→e)的方法是現(xiàn)有技術(shù)中已知的和/或在如下方案中說明。
本發(fā)明的方法可通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法制備，例如起始或核心二氫吲哚可通過如下方案1和2的一般方法制備。
方案1
方案2 本發(fā)明的化合物的合成可用六甲基二甲硅烷基氨基化鈉鹽和所需的側(cè)鏈通過核模板1或6去質(zhì)子作用隨后烷基化完成(方案1和2)。 1R＝H6R＝OBn實施例1(方案1中的化合物1)5-芐氧基-3，3-二甲基-2-苯基-2，3-二氫-1H-吲哚如上所示的保護的二氫吲哚化合物1和6用作核模板以合成化合物3(實施例3)、5(實施例6)、8(實施例9)和10(實施例11)。這些物質(zhì)模板使用Letcher，R.M.等的J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1993，卷1，939-944頁描述的一般方法制備。例如，模板1由4-芐氧基苯基肼和異丁酰苯制備。 向4-芐氧基-苯基肼HCl(2.5g，11.7mmol)和異丁酰苯(2.1g，14.0mmol)在20ml甲苯中的溶液中加入乙酸(催化量)，得到的溶液回流，共沸除去水14小時，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫并濃縮。得到的半固體溶解在乙酸中，回流12小時，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫并濃縮。將半固體殘余物溶解在乙醚中，用碳酸鉀中和。醚層干燥并濃縮，得到的固體亞胺溶解在THF-甲醇(6∶1)中，冷卻到0℃，加入硼氫化鈉(0.53g，13.2mmol)。使溶液溫?zé)岬绞覝兀瑪嚢?.5小時。將反應(yīng)混合物傾入15％鹽酸中，用碳酸鉀堿化。分離有機層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用柱色譜法(二氧化硅，己烷-乙酸乙酯(9∶1))純化。所需的模板1作為橙色半固體分離(2.9g，75％)。
1H NMR(CDCl3)δd 0.7(s，3H)，1.4(s，3H)，3.85(br.s 1H)，4.8(s.1H)，5.0(s，2H)，6.62(d，1H)，6.67(s，1H)，6.8(dd，1H)，7.3-7.5(m，10H)；13C-NMR(CDCl3)δ24.3(q)，26.3(q)，45.5(s)，71.0(t)，74.9(d)，110.4(d)，110.9(d)，113.0(d)，127.4，127.5 127.6，127.8，128，128.5(d)，137.6(s)，139.7(s)，139.9(s)，143.4(s)，152.9(s)；IR(film)3390，3040，2980，1490，1050cm-1；質(zhì)譜m/e 330(M+1)；CHN calc.for C23H23NO 實施例2(方案1中的化合物2)5-芐氧基-3，3-二甲基-2-苯基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚向5-芐氧基-二氫吲哚1(0.2g，0.61mmol)和哌啶乙氧基芐基溴11(0.18g，0.61mmol)在3mlTHF中的溶液中在-78℃下加入1.53ml(1.53mmol，1M，NaHMDSA-THF，2.5當量)。使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀瑪嚢?2小時。將反應(yīng)混合物傾入水中，用乙酸乙酯萃取。用硫酸鎂干燥有機層并濃縮。產(chǎn)物用快速色譜法(15％乙酸乙酯-己烷)純化得到所需的N-烷基化二氫吲哚2黃色泡沫狀物質(zhì)。1H-NMR(CDCl3)δ0.79(s，3H)，1.34(s，3H)，1.4(m，2H)，1.6(m，4H)，2.5(m，4H)，2.8(t，2H)，3.82(d，ABq，1H)，4.1(t，2H)，4.2(s，1H)，4.25(d，ABq，1H)，5.0(s，1H)，6.33(d，1H)，6.6(dd.1H)，6.7(dd，1H)，6.8(d，2H)，7.2(d，2H)，7.3-7.45(m，10H)；13C-NMR(CDCl3)δ24.18(t)，25.05(q)，25.9(t)，26.0(q)，44.5(s)，51.5，55.0，57.9，65.9，70.9(t)，80.5(d)，109.0，110.7，112.5，114.4，127.53，127.55，127.7，128.1，128.5，128.6(d)，130.6，137.6，137.7，140.4，145.3，152.6，157.72(s)；質(zhì)譜m/e 547(M+1). 實施例3(方案1中的化合物3)3.3-二甲基-2-苯基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2.3-二氫-1H-吲哚-5-酚向N-烷基化二氫吲哚2(0.14g，0.26mmol)在8ml(THF-乙醇-乙酸，5∶2∶1)的溶液中加入0.14g(10％Pd/C)，隨后加入0.25ml環(huán)己二烯(10當量)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌7小時，通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物并濃縮，殘余物溶解溶解在乙酸乙酯中，用碳酸氫鈉洗滌。用硫酸鎂干燥有機層并濃縮。產(chǎn)物用快速色譜法(8％甲醇-二氯甲烷)純化得到所需的苯酚-二氫吲哚3。1H-NMR(CDCl3)δ0.65(s，3H)，1.25(s，3H)，1.3-1.5(m，6H)，2.4(m，6H)，2.65(m，2H)，3.7(d，ABq，1H)，4.1(m，1H)，4.25(d，ABq，1H)，6.28(d，1H)，6.4(dd，1H)，6.5(S，1H)，6.8(d，2H)，7.1(d，2H)，7.3-7.45(m，5H)，8.6(S，1H)；質(zhì)譜m/e 457(M+1).
實施例4(方案1中的化合物3(鹽酸鹽))3，3-二甲基-2-苯基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚(鹽酸鹽)苯酚二氫吲哚3(0.043g，0.11mmol)在2ml乙醚-THF(4-1)中的溶液用1.2當量(1M鹽酸/乙醚)處理，反應(yīng)混合物隨后攪拌2小時，濃縮得到所需的鹽酸鹽。
實施例5(方案1中的化合物4)1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷(Azepan)-1-基-乙氧基)-芐基]-5-芐氧基-3，3-二甲基-2-苯基-2，3-二氫-1H-吲哚如上述對化合物2所述進行制備。1H-NMR(CDCl3)δ0.8(s.3H).1.35(s.3H)，1.65(m，8H)，2.8(m，9H)，3.0(t.2H)，3.8(A-Bq，1H)，4.1(t.2H)，4.2(s，1H)，4.3(ABq，1H)，4.95(s，2H)，6.35(d，1H)，6.65(dd，1H)，7.5(s，1H)，6.85(d.2H)，7.2(d，2H)，7.25-7.5(m，10H)；質(zhì)譜m/e 561(M+1).
實施例6(方案1中的化合物5)1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-3.3-二甲基-2-苯基-2.3-二氫-1H-吲哚-5-酚如上述對化合物3所述進行制備。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.6(5，3H)，1.15(S，3H)，1.4(m，8H)，2.6(m，4H)，2.7(m，2H)，3.55(ABq，1H)，3.8(7，2H)，3.9(S，1H)，4.05(ABq，1H)，6.15(d，1H)，6.25(d，1H)，6.35(S，1H)，6.7(D，2H)，7.0(d，2H)，7.2-7.4(m，5H)，8.5(S，1H)；質(zhì)譜m/e 471(M+1).
實施例7(方案2中的化合物6)5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-2，3-二氫-1H-吲哚標題化合物用Letcher，R.M.等的J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1993，卷1，939-944頁(參見如上實施例1)描述的一般方法由4-芐氧基苯基肼和(4-芐氧基)-苯基異丙基酮制備。1H-NMR(CDCl3)δ0.7(s，3H)，1.35(s，3H)，3.85(br.s，1H)，4.5(S，1H)，5.0(s，2H，5.1(s，2H)，6.6(d，1H)，6.7(s，1H)，6.75(s，1H)，6.95(d，2H)，7.25-7.5(m，12H).13C-NMR(CDCl3)d 24.2，26.2(q)，45.5(s)，70.0，71.0(t)，74.5(d)，109.4，11 0.9，112.9，114.3，127.5，127.6，127.8，127.9，128.5，128.6，(d)，132.2，137.04，137.6，139.8，143.4，152.9，158.3(s)；質(zhì)譜m/e 436(M+1).
實施例8(方案2中的化合物7)5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二-氫-1H-吲哚如上述對化合物2所述進行制備。1H-NMR(CDCl3)δ0.75(s，3H)，1.2(s，3H)，1.6-1.8(m，6H)，2.75(t.2H)，3.2-3.85(m，4H)，4.05(t.2H)，4.7(br.s，1H)，4.35(br.s 2H)，5.0(s，2H)，5.1(s，2H)，6.3(d.2H)，6.5(m，2H)，6.6(d，2H)，6.85(d.2H)，6.95(d，2H)，7.05(d，2H)，7.2-7.5(m.8H)，7.5(br.s.1H).
實施例9(方案2中的化合物8)2-(4-羥基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚如上述對化合物3所述進行制備。1H-NMR(DMSO)δ0.75(s，3H)，1.2(s，3H)，1.6-1.8(m，6H)，2.75(t.2H)，3.2-3.85(m，4H)，4.05(t.2H)，4.7(br.s，1H)，4.35(br.s 2H)，6.3(d.2H)，6.5(m，2H).6.6(d，2H).6.85(d.2H)，7.05(d，2H)，7.5(br.s.1H)；質(zhì)譜m/e 473(M+1).
實施例10(方案2中的化合物9)5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚如上述對化合物2所述進行制備。1H-NMR(CDCl3)δ0.8(s，3H)，1.35(s.3H)，1.6-1.8(m，6H)，2.8(br.s，4H)3.1(t，2H)，3.8(ABq，1H)，4.1(t.3H)，4.25(ABq.1H)，4.95(s，2H)，5.1(s，2H)，6.3(d，1H)，6.6(d，1M)，6.75(s，1H)，6.8(d，2H)，6.95(m，3H)，7.1(d，1H)，7.2(d.2H)，7.3(m，8H)，7.55(d，1H)，8.1(d，1H).
實施例11(方案2中的化合物10)1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-2-(4-羥基-苯基)-3，3-二甲基-2-苯基-2.3-二氫-1H-吲哚-5-酚如上述對化合物3所述進行制備1H-NMR(CDCl3)δ0.8(s，3H)，1.15(s，3H)，1.6(t，2H)，1.7(m，4H)，3.1(m，2H)，3.3-3.5(m，4H)，4.2(t，2H)，4.3-4.5(m 2H)，6.7(d，4H)，6.8(d，4H)6.9(d，2H)，2.1(d，2H)，7.3(br.S，1H).
實施例12(方案2中的化合物11)1-[2-(4-氯甲基-苯氧基)-乙基]-哌啶該物質(zhì)由氨基醇1-[2-(4-羥基甲基-苯氧基)-乙基]哌啶通過用亞硫酰氯在THF中在0℃下處理制備，得到的固體無需進一步純化即可使用。1H-NMR(CDCl3)δ1.7-1.9(m，6H)，2.5(br.s，4H)，2.7(t，2H)，4.1(t，2H)，4.6(s，2H)，6.9(d，2H)，7.3(d，2H).12.1(br s，1H).
實施例13(方案2中的化合物12)1-[2-(4-氯甲基-苯氧基)-乙基]-氮雜環(huán)庚烷該物質(zhì)由氨基醇1-[2-(4-羥基甲基-苯氧基)-乙基]azapine通過用亞硫酰氯在THF中在0℃下處理制備，得到的固體無需進一步純化即可使用。1H-NMR(CDCl3)δ1.7(m，2H)，1.9(m，4H)，2.2(m，2H)，3.1(m，2H)，3.4(7，2H)，3.6(t.2H)，6.9(d，2H)，7.3(d，2H)，12.5(1H).
受體結(jié)合試驗?zāi)康挠糜诖_定在雌激素受體(ER)結(jié)合中與17β-雌二醇競爭的化合物。用于雌激素作用的廣泛接受的方式是經(jīng)其高親和力受體蛋白質(zhì)。顯示結(jié)合ER能力的化合物因此可調(diào)節(jié)與雌激素作用有關(guān)的生理過程。方法受體制劑過表達雌激素受體的CHO細胞在150mm2碟中在DMEM+10％葡聚糖涂覆的炭，剝離的胎牛血清中生長。板用PBS洗滌兩次，用10mM Tris-HCl，pH7.4，1mM EDTA洗滌1次。細胞通過刮表面收獲，隨后將細胞懸浮液放置在冰上。細胞用手提式機械組織粉碎機用兩次10秒觸發(fā)粉碎，粗制劑在12000×g離心20分鐘，在100000×g旋轉(zhuǎn)60分鐘得到無核蛋白體的胞液，將胞液凍干，在-80℃下貯存。胞液的蛋白質(zhì)濃度用BCA試驗使用BSA作為參考標準蛋白質(zhì)確定。結(jié)合試驗條件競爭試驗在結(jié)合＜2.0％的總輸入[3H]-17β-雌二醇的，96孔板(聚苯乙烯*)中進行，每個數(shù)據(jù)點收集一式三次。將100ug/100ul的受體制劑等分在每個孔中，在評價100×和500×競爭劑濃度時，在預(yù)競爭過程中加入50μl體積中的2.5nM[3H]17β-雌二醇+競爭劑(或緩沖劑)的飽和劑量。為測定IC50，當評價12個濃度的競爭劑時，僅使用0.8nM[3H]17β-雌二醇。板在室溫下培養(yǎng)2.5小時，在培養(yǎng)過程結(jié)束時，每個孔加入150μl冰冷卻的葡聚糖涂覆的炭(5％涂覆0.05％69K葡聚糖的活性炭)，板立即以900×g在4℃下離心5分鐘，為閃爍計數(shù)，取出200μl上清液，無論那一個首先發(fā)生，樣品計數(shù)到2％或10分鐘。
*由于聚苯乙烯吸收少量[3H]17β-雌二醇，含有放射性和胞液，但未用炭處理的孔被培養(yǎng)以定量可獲得的同位素。此外，含有放射性但不合胞液的孔用炭處理以確定[3H]17β-雌二醇的不可除去的DPM。使用Corning#25880-96 96孔板，因為在這些試驗中它們顯示結(jié)合最少量的雌二醇。結(jié)果分析用Beckman LS7500閃爍計數(shù)器用一組猝滅標準將放射性的每分鐘計數(shù)(CPM)自動轉(zhuǎn)化為每分鐘蛻變(DPM)以得到每個樣品的H#。為計算在100或500倍競爭劑存在下雌二醇結(jié)合％，使用如下公式((DPM樣品-未用炭除去的DPM)/(DPM雌二醇-未用炭除去的DPM))×100％＝雌二醇結(jié)合％為得到IC50曲線，結(jié)合％相對于[化合物]畫曲線，IC50由在最高達500x競爭劑濃度下顯示＞10％競爭的化合物產(chǎn)生。參比化合物對參比化合物和實施例4、6、9和11的化合物進行評價，測定它們的IC50濃度。置換50％的[3H]17β-雌二醇所需的這些化合物的濃度是雌二醇0.08μM 實施例4 0.8μM他莫昔芬 4.50μM 實施例6 1.0μM雷洛昔芬 0.04μM 實施例9 0.31μM17α-二氫馬烯雌酮 0.15μM實施例11 0.35μM
權(quán)利要求
1.下式的化合物或其可藥用的鹽 其中R1是H或芐基；R2是H、-OH或-O-芐基；R3、R4和R5分別選自H、鹵素、氰基、C1-C6烷基(直鏈或支鏈)、三氟甲基、-OH或它們的C1-C12酯(直鏈或支鏈)或C1-C12烷基醚(直鏈或支鏈或環(huán)狀)，或C1-C6鹵化醚；R6是H或C1-C6烷基；R7是C1-C6烷基；n是2或3；Y是O或S；和X是 其中R’選自相同或不同的C1-C6低級烷基，或X是選自如下的基團
2.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽，其中Y是O。
3.權(quán)利要求1或2的化合物或其可藥用的鹽，其中n是2和R3、R4和R5分別選自H、OH或鹵素。
4.權(quán)利要求1的化合物，它是5-芐氧基-3，3-二甲基-2-苯基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚或其可藥用的鹽。
5.權(quán)利要求1的化合物，它是3，3-二甲基-2-苯基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚或其可藥用的鹽。
6.權(quán)利要求1的化合物，它是1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-5-芐氧基-3，3-二甲基-2-苯基-2，3-二氫-1H-吲哚或其可藥用的鹽。
7.權(quán)利要求1的化合物，它是1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-3，3-二甲基-2-苯基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚或其可藥用的鹽。
8.權(quán)利要求1的化合物，它是5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-2，3-二氫-1H-吲哚或其可藥用的鹽。
9.權(quán)利要求1的化合物，它是5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚或其可藥用的鹽。
10.權(quán)利要求1的化合物，它是2-(4-羥基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚或其可藥用的鹽。
11.權(quán)利要求1的化合物，它是5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3，3-二甲基-1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-2，3-二氫-1H-吲哚或其可藥用的鹽。
12.權(quán)利要求1的化合物，它是1-[4-(2-氮雜環(huán)庚烷-1-基-乙氧基)-芐基]-2-(4-羥基-苯基)-3，3-二甲基-2-苯基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-酚或其可藥用的鹽。
13.藥物組合物，它包含權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽和可藥用的載體或賦形劑。
14.在哺乳動物中治療或預(yù)防骨損失的方法，該方法包含向需要的哺乳動物給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽。
15.在哺乳動物中治療或預(yù)防由雌激素缺乏引起或與其相關(guān)的疾病狀態(tài)或綜合征的方法，該方法包含向需要的哺乳動物給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽。
16.在哺乳動物中治療或預(yù)防心血管疾病的方法，該方法包含向需要的哺乳動物給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽。
17.制備權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用的鹽的方法，其包含下列之一a)用式(III)的化合物 其中n、R4、R5、Y和X如權(quán)利要求1中所定義，烷基化下式(II)的化合物 其中R1、R2、R3、R6和R7如權(quán)利要求1中所定義，得到式I化合物；或b)使下式的化合物 其中Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是如權(quán)利要求1中所定義，hal表示鹵素，例如氯或溴，與下式的胺反應(yīng)H-X(V)其中X是如上定義的，得到式I化合物，或c)脫芐基其中R1是選擇性地取代的芐基和/或R2是選擇性地取代的芐氧基的式I化合物，得到其中R1是氫和/或R2是羥基的式I化合物，或e)酯化其中R3、R4或R5的至少一個是羥基的式I化合物為其酯衍生物。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)化合物:其中:R
文檔編號A61K31/4439GK1342143SQ00804461
公開日2002年3月27日 申請日期2000年2月22日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月4日
發(fā)明者J·W·烏爾里奇 申請人:美國家用產(chǎn)品公司