專利名稱：免疫調(diào)節(jié)性類固醇,特別是16α－溴表雄酮的半水合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及制備和使用類固醇的方法，類固醇如16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮(16α-溴表雄(甾)酮或下文的“BrEA”)以及新型類似物。類固醇適用于一些治療性或非治療性用途，包括使用它們作為免疫調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明也涉及制備此類化合物、組合物以及制劑的方法。
已經(jīng)公開了BrEA以及從類固醇化合物3β-羥基雄-5-烴-17-酮(脫氫表雄(甾)酮或“DHEA”)制備BrEA(例如請(qǐng)參見，有機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Org.Chem.)1962 272937-38)。已經(jīng)公開了制備DHEA及其它類固醇的方法以及它們的生物特性，例如請(qǐng)參見，美國(guó)專利USP2833793，2911418，3148198，3471480，3976691，4268441，4427649，4542129，4666898，4956355，5001119，5043165，5077284，5028631，5110810，5157031，5162198，5175154，5277907，5292730，5296481，5372996，5387583，5407684，5424463，5461042，5478566，5506223，5518725，5527788，5527789，5532230，5559107，5562910，5583126，5585371，5587369，5591736，5593981，5610150，5635496，5641766，5641768，5656621，5660835，5686438，5696106，5700793，5707983，5709878，5710143，5714481，5728688，5736537，5744462，5753237，5756482，5776921，5776923，5780460，5795880，5798347，5798348，5804576，5807848，5807849，5811418，5824313，5824668，5824671，5827841，5837269，5837700，5843932，5846963，5859000，5872114和5872117；德國(guó)專利2035738和2705917；PCT申請(qǐng)WO95/21617，WO97/48367，WO98/05338，WO98/50040，WO98/50041，WO98/58650；歐洲專利EP0020029；BenDavid等，Proc.Soc.Expt.Biol.Med.，1967 1251136-1140，Coleman等，糖尿病(Diabetes)1982 31830，Oertel等，類固醇生物化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Steroid Biochem.)1972 3493-496，Pashko等，致癌作用(Carcinogenesis)1981 2717-721，Schwartz等，Nutr.Cancer 1981346-53；Dyner等，愛滋病學(xué)報(bào)(J.Acquired Immune DeficiencySyndromes)1993 6459-465；A.A.Afanasii和Y.A.Titov，類固醇的全合成(Total Steroid Synthesis)，Plenum Press，New York，1970，例如請(qǐng)參見p1-304。
已經(jīng)公開了使用DHEA以及其它類固醇用于多種用途例如調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，例如美國(guó)專利USP5869090，5863910，5856340，5824668，5804576，5753237，5714481，5709878，5407684，5206008，5077284，4978532，4898694，4542129，3711606和3710795。美國(guó)專利4956355和PCT申請(qǐng)WO97/48367公開了使用BrEA以及某些類固醇化合物處理某些病毒或細(xì)菌感染，如人體免疫缺乏病毒(“HIV”)感染。
已經(jīng)公開了類固醇化合物的多種生物作用和/或新陳代謝轉(zhuǎn)換，例如Batta等，生物化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Biol.Chem.)1986 25127-133，Belli等，肝(Liver)1991 11162-169，Bhattacharjee等，分析生物化學(xué)(Anal.Biochem.)1992 201233-236，Blake等，國(guó)際肽蛋白質(zhì)研究學(xué)報(bào)(Int.J.Peptide Protein Res.)1982 2097-101，1986 25127-133，Bonaventura.Am.J.Obstet.Gynecol.1978 131403-409，Bucala等，類固醇生物化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Steroid Biochem.)，1986 25127-133，Carey等，Biochem.，1981203637-3648，Chen等，致癌作用(Carcinogenesis)1999 20249-254，Chen等，Carcinogenesis 1998 192187-2193，Chow等，Antisense Res.Dev.1994 481-86，Citro等，Dis.Colon Rectum 1994 37(2 Suppl)S127-S132，Cleary，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1991 1968-16，Cleary，Int.J.Biochem.1990 22205-210，Crawford等，Lab.invest.1994 7142-51，Danenberg等，Antimicrob.Agents Chemother.1992 362275-2279，Dotzlaw等，癌癥研究(Cancer Res.)1999 59529-532，F(xiàn)alany等，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.1994 48369-375，F(xiàn)aredin等，J.Investigative Dermatol.1969 52357-361，Galigniana等，Mol.Pharmacol.1999 55317-323，Goto等，J.Chromatogr.1983 276289-300，Grenot，Biochem.1992 317609-7621，Hofbauer等，生命科學(xué)(Life Sci.)199964671-679，Huijghebaert等，J.Lipid Res.1986 27742-752，Hurd等，致癌基因(Oncogene)1999 181067-1072，Lida等，J.Lipid Res.199536628-638，Jellinck等，Steroids 1967 10329-346，Jonsson等，J.Pediatr.Gastroenterol.Nutr.1995 20394-402，Kalimi等，Mol.Cell.Biochem.1994 13199-108，Kramer等，J.Bial.Chem.1994 26910621-10627，LaRochelle等，Steroids 1984 43209-217，Liao等，Carcinogenesis1998 192173-2180，Lillienau等，J.Clin.Invest.1992 89420-431，Loria，心理神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)(Psychoneuroendocrinology)1997 22S103-S108，Luscher等，Mol.Immunol.1983 201099-1105，Manna等，J.Biol.Chem.1999 2745909-5918，Marschall等，J.Biol.Chem.1989 26412989-12993，Medh等，Cancer Res.1998 153684-3693，Mohan等，Steroids 1992 57244-247，Munoz de Toro等，J.Steroid Blochem.Mol.Biol.1998 67333-339，Padgett等，神經(jīng)免疫學(xué)學(xué)報(bào)(J.Neuroimmunol.)1998 8461，Padgett等，Ann.N.Y.Acad. Sci.1995 774323，Padgett等，J.Immunol.1994 1531544-1552，Pashko等，Carcinogenesis 1984 5463-466，Pashko等，Carcinogenesis 1981 2717，Petrylak等，臨床腫瘤學(xué)學(xué)報(bào)(J.Clin.Oncology)1999 17958-967，Podesta等，Steroids 1996 61622-626，Regelson等，Ann.N.Y Acad.Sci.1994 719564，Schmassmann等，胃腸病學(xué)(Gastroenterology)1993 1041171-1181，Schmassmann等，肝臟病學(xué)(Hepatology)1990 11989-996，Schreiber等，柳葉刀(Lancet)353459-461，Schreiber，Neth.J.Med.1998 53S24-31，Schwartz等，CancerRes.1988 484817，Shahidi等，Biochem.Bilphys.Res.Commun.1999254559-565，Steer等，Ann.Rheum.Dis.1998 57732-737，Suzuki等，Steroids 1998 63.672-677，Suzuki等，Steroids 1996 61296-301，Swaan等，生物結(jié)合化學(xué)(Bioconjugate Chem.)1997 8520-525，Tang等，抗癌藥物綜述(Anticancer Drug Res.)1998 13815-824，Thomas等，J.SteroidBiochem.1986 25103-108，Utsumi等，Cancer Res.1999 59377-381，Vanden Heuvel，J.Nutr.1999 129(2S Suppl.)575S-580S，Wang等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1998 1393903-3912，Wong等，J.Biol.Chem.1999 2745443-5453，Xie等，Endocrinology 1999 140219-227，Yen等，Lipids 1977 12409-413，Zackheim等，Arch.Dermatology 1998 134949-954，Zhang等，生物化學(xué)生物物理學(xué)報(bào)(Biochim.Biophys.Acta)1991 1096179-186，Zhu等，致癌作用(Carcinogenesis)1988 192101-2106。
含有BrEA用于把化合物輸送到細(xì)胞或細(xì)胞抽提物的組合物通常包含很多水。這種包含溶劑如二氧六環(huán)或二甲亞砜(“DMSO”)，水，或一種環(huán)糊精的溶液的組合物有助于化合物到細(xì)胞的傳遞，例如請(qǐng)參見藥物實(shí)驗(yàn)治療學(xué)學(xué)報(bào)(J.Pharmacol Exp.Ther.)1998，285876-83，癌癥研究(Cancer Res.)1986 463389-95，致癌作用(Carcinogenesis)19856333-35，1981 2717-721，1981 2683-86。這種組合物通常是通過注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)，或通過加到細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中而進(jìn)入組織培養(yǎng)中的細(xì)胞。歐洲公開號(hào)EP429187揭示了含有DHEA或BrEA以及聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮的制劑。某些這樣的組合物可能不理想或未達(dá)最佳標(biāo)準(zhǔn)的特性。例如，溶劑如二氧六環(huán)，DMSO或氯仿通常不是最好的或合適的非腸道賦形劑，特別是對(duì)于人體使用。人們需要含有BrEA或相關(guān)類固醇，并具有改進(jìn)了性能的制劑，改進(jìn)的性能如低毒、改進(jìn)的化學(xué)穩(wěn)定性或理想的適用于大規(guī)模合成的特性。
哺乳動(dòng)物對(duì)于感染或其它病癥的免疫響應(yīng)通常具有特征為通過不同的效應(yīng)細(xì)胞群介導(dǎo)的反應(yīng)。在許多情況下，在鼠類動(dòng)物體系中稱為Th1的輔助T細(xì)胞會(huì)促進(jìn)通常主要是細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)的免疫效應(yīng)子功能。在其它情況下，稱為Th2的輔助T細(xì)胞會(huì)促進(jìn)通常主要為體液反應(yīng)的免疫效應(yīng)子功能。通常需要有力的Th1反應(yīng)以消除感染或減緩感染的進(jìn)展。當(dāng)患者的免疫反應(yīng)傾向或主要為Th2型反應(yīng)時(shí)，與Th2相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞因子傾向于在同一時(shí)間抑制免疫系統(tǒng)增強(qiáng)Th1反應(yīng)的能力。這種相反的過程一般是真實(shí)存在的。當(dāng)哺乳動(dòng)物的免疫反應(yīng)開始導(dǎo)致Th2反應(yīng)增強(qiáng)時(shí)，對(duì)同樣條件作出的Th1反應(yīng)傾向于減弱。弱的Th1反應(yīng)可能與某些感染或其它病癥的進(jìn)展有關(guān)，例如請(qǐng)參見，M.Clerici和G.M.Shearer，現(xiàn)代免疫學(xué)(Immunol.Today)14107-111，1993；M.Clerici和G.M.Shearer，現(xiàn)代免疫學(xué)(Immunol.Today)15575-581，1994。這些發(fā)明提供的化合物和組合物對(duì)增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)有用處。
本發(fā)明的目的本發(fā)明的組合物、制劑或方法達(dá)到以下一個(gè)或多個(gè)目的。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供適用于治療或其它用途如免疫調(diào)節(jié)的新型類固醇化合物或類似物。本發(fā)明的目的還包括提供BrEA半水合物(BrEA2·H2O)、含有BrEA半水合物的組合物以及制備和使用方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有通式1表示的化合物并含有約3體積％或更少水的液體組合物和制劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供可作為中間體用以制備含有通式1表示的化合物的人用和獸用藥物制劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供把通式1表示的化合物用于患者以增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)的間歇式給藥方法。進(jìn)一步的目的是提供調(diào)節(jié)先天免疫或通過對(duì)患者給藥通式1表示的化合物如BrEA以增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)的方法。本發(fā)明的其它目的是提供方法，通過對(duì)患者給藥通式1表示的化合物如BrEA以抑制病原體如病毒在患者體內(nèi)的復(fù)制。本發(fā)明的目的包括提供對(duì)改善與免疫抑制或缺乏Th1免疫反應(yīng)有關(guān)的病理狀況的一種或多種癥狀有用的通式1表示的化合物或制劑。本發(fā)明的其它目的是提供制備和使用含有通式1表示的化合物的組合物和制劑的方法。附圖簡(jiǎn)述

圖1是通過USP方法<197>獲得的通過從乙醇和水中沉淀BrEA制備的BrEA半水合物的FTIR(傅立葉變換紅外)光譜。圖2是通過USP方法<197>獲得的通過從無水甲醇中沉淀BrEA制備的無水BrEA的FTIR光譜。圖3顯示了通過從乙醇和水中沉淀BrEA制備的BrEAr半水合物的DSC吸熱。圖4顯示了通過從無水甲醇中沉淀BrEAr制備的無水BrEA的DSC吸熱。圖5是通過從乙醇和水中沉淀BrEA制備的BrEA半水合物的XRD(粉末X射線衍射)光譜。圖6是通過USP方法<197>獲得的通過從丙酮和水中沉淀BrEA制備的BrEA半水合物的FTIR光譜。本發(fā)明概述按照本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供BrEA半水合物，該半水合物通過參考一種或多種物理性質(zhì)如熔點(diǎn)、紅外吸收光譜或粉末X射線衍射光譜進(jìn)行選擇性表征。 相關(guān)的實(shí)施方案包含BrEA半水合物以及一種或多種適用于人用藥物或獸用的賦形劑。另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案是一種制備BrEA半水合物的方法，BrEA半水合物包括從一種包含乙醇和水的溶液中沉淀的BrEA。
發(fā)明實(shí)施方案包括一種含有通式1表示的化合物的組合物以及一種或多種非水溶液液體賦形劑，其中組合物含有少于3體積％的水，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10獨(dú)立地為-H、-ORPR、-SRPR、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代酰基、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物，或，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R10、R15、R17和R18中的一個(gè)或多個(gè)為＝O或＝S并且不存在鍵連到同一個(gè)碳原子上的氫原子，或，R3和兩個(gè)R4一起包含通式2的結(jié)構(gòu)， R7為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-CHR10-CHR10-CHR10-、-CHR10-O-CHR10-、-CHR10-S-CHR10-、-CHR10-NRPR-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-；R8和R9獨(dú)立地為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-，或各自不存在R8或R9，保持5元環(huán)。
R13獨(dú)立地為C1-6烷基；R16獨(dú)立地為-CH2-、-O-、-S-、或-NH-；D為雜環(huán)或包含飽和碳原子的4、5、6或7元環(huán)，其中4、5、6或7元環(huán)的1、2或3個(gè)環(huán)碳原子選擇性地被-O-、-S-或-NRPR-置換；或該雜環(huán)的1、2或3個(gè)氫原子或該4、5、6或7元環(huán)的1或2個(gè)氫原子被-ORPR-、-SRPR-、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代酰基、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸或聚合物置換，或，一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳被＝O或＝S取代，或D包含兩個(gè)5或6元環(huán)，其中兩個(gè)環(huán)是稠合的或通過一個(gè)或兩個(gè)鍵連接的。
在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通式1表示的化合物，其中R7、R8、R9中的兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立地不為-CHR10的基團(tuán)，其中該化合物可選擇性地存在于一種組合物中，該組合物含有一種或多種適用于人類用藥或獸醫(yī)用途的賦形劑。
本發(fā)明的實(shí)施方案也包括通式1表示的化合物， 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10獨(dú)立地為-H、-ORPR-、-SRPR-、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、酰基、硫代?；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物，或R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10中一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地為＝O或＝S，并且不存在鍵連到同一個(gè)碳原子上的氫，或R3、R4一起組成通式2的結(jié)構(gòu)， R7為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-CHR10-CHR10-CHR10-、-CHR10-O-CHR10-、CHR10-S-CHR10-、-CHR10-NRPR-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-、或-NRPR-CHR10-；R8和R9獨(dú)立地為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-，或各自不存在R8或R9，保持5元環(huán)；R13獨(dú)立地為C1-6的烷基；D為雜環(huán)或包含飽和的碳原子的4、5、6或7元環(huán)，其中該4、5、6或7元環(huán)的1、2或3個(gè)環(huán)碳原子選擇性被-O-、-S-或-NRPR-置換，或該雜環(huán)的1、2或3個(gè)氫原子或該4、5、6或7元環(huán)的1或2個(gè)氫原子被-ORPR-、-SRPR-、-N(RPR)2-、-O-Si-(R13)2-、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；⒘虼；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物取代，或，一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳被＝O或＝S取代，或D包含兩個(gè)5或6元環(huán)，其中兩個(gè)環(huán)是稠合的或通過一個(gè)或兩個(gè)鍵連接的，其中R7、R8、R9中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)不是-CHR10-。
其它實(shí)施方案包括加強(qiáng)一種或多種細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)的方法，此類細(xì)胞因子或白介素用于促進(jìn)患者的Th1免疫反應(yīng)；或減弱一種或多種細(xì)胞因子或白介素表達(dá)的方法，此類細(xì)胞因子或白介素用于促進(jìn)患者的Th2免疫反應(yīng)，包括給患者用有效量的權(quán)利要求32的組合物，由此患者的Th1免疫反應(yīng)得到加強(qiáng)，而患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)得到減弱。
實(shí)施方案包括含有通式1所表示的化合物的液體制劑、一種或多種賦形劑以及少于約3重量％的水，其中該制劑被任意置于不包含水的容器中。
另一個(gè)實(shí)施方案是一種方法，包括對(duì)患者間歇式給用通式1表示的化合物，患者具有病理狀況如病毒或寄生蟲感染。
還有一個(gè)實(shí)施方案是一種調(diào)節(jié)患者先天免疫Th1免疫反應(yīng)或Th2免疫反應(yīng)的方法，其包括對(duì)患者給用通式1所表示的化合物。
另一個(gè)實(shí)施方案在包括附帶的幾個(gè)實(shí)施方案以及權(quán)利要求的說明書中描述。本發(fā)明詳述定義如果上下文中沒有另外指明或暗示，按此處所使用的來定義以下的術(shù)語。
一種“發(fā)明制劑”或“制劑”是指一種發(fā)明組合物，不進(jìn)一步進(jìn)行改變所存在的組分或組分比例的處理，該組合物可以經(jīng)非腸道對(duì)人或動(dòng)物給藥。該制劑適用于人或獸醫(yī)用途。
“發(fā)明組合物”是一種組合物，作為一種中間體，人們可用它來制備該發(fā)明制劑，即改變所需的組分或用量制備制劑。因此，本發(fā)明組合物包括這樣的組合物，即在成為制劑之前，還需進(jìn)一步的處理，如混合或加入所需量的組分。
“賦形劑”是指一種成分或組分，在與本發(fā)明組合物或制劑的其它組分的相容性方面是可接受的，并且對(duì)于要接受給藥的病人或動(dòng)物完全無害。作為此處所使用的“賦形劑”包括液體如苯甲酸芐酯、棉籽油、N，N-二甲基乙酰胺、C2-12醇(如乙醇)、甘油、花生油、聚乙二醇(PEG)、維生素E、罌粟籽油、丙二醇、紅花油、芝麻油、大豆油和植物油。此處使用的賦形劑選擇性不包括氯仿、二氧六環(huán)、植物油、DMSO或這些物質(zhì)的混合物。賦形劑包含一種或多種典型用于藥物制劑技術(shù)的成分，如填充劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑。
“患者”是指人或動(dòng)物。通常動(dòng)物是脊椎動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、家畜或野生動(dòng)物。靈長(zhǎng)類動(dòng)物包括黑猩猩、食蟹猴(cynomologous monkeys)、蛛猴和短尾猿如獼猴。嚙齒類動(dòng)物包括小鼠、大鼠、美洲旱獺、雪貂、兔子和倉鼠。家畜和野生動(dòng)物包括母牛、馬、豬、鹿、美洲野牛、水牛、貓科如家貓、犬類如狗、鳥類如雞、鴯鹋、鴕鳥以及魚類如鱒魚和鮭魚?；颊甙ㄇ笆龅娜缢械纳鲜鰟?dòng)物的任何子集，但不包括一個(gè)或多個(gè)群或物種如人類、靈長(zhǎng)類或嚙齒類。
“通式1表示的化合物”或“通式1表示的一種化合物”這樣的表達(dá)是指發(fā)明組合物或制劑，其中存在一種或一種以上通式1所表示的化合物，典型為1、2、3或4種，通常為1種。
這里使用的“烷基”是指連接的正鏈、仲、叔或環(huán)碳原子，即直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的。如果沒有另外指明，烷基基團(tuán)或烷基部分中的碳原子數(shù)為1-約20，如C1-8烷基是指含有1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)碳原子的烷基部分。烷基的例子包括甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(異丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(正丁基)、2-甲基-1-丙基(異丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(仲丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(叔丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
“鏈烯基”是指連接的正鏈、仲、叔或環(huán)碳原子，其中存在一個(gè)或多個(gè)雙鍵(如-CH＝CH-)，典型為1、2或3個(gè)，通常為1或2個(gè)。如果沒有另外指明，鏈烯基基團(tuán)或部分的碳原子數(shù)目為2-約20，如C1-8鏈烯基是指鏈烯基部分包含1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)碳原子。
“炔基”是指連接的正鏈、仲、叔或環(huán)碳原子，其中存在一個(gè)或多個(gè)叁鍵(如-C≡C-)，典型為1、2或3個(gè)，通常為1個(gè)。如果沒有另外指明，炔基基團(tuán)或部分的碳原子數(shù)目為2-約20，如C1-8炔基是指炔基部分包含1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)碳原子。
“芳基”是指苯基或萘基。
“取代的烷基”、“取代的鏈烯基”或“取代的炔基”是指烷基、鏈烯基或炔基具有連接到碳原子上的取代基或間斷碳原子鏈的取代基。取代基包括醚(-O-)、酮(-C(O)-)、-ORPR、-C(O)ORPR、-C(O)O-C(S)ORPR、-C(S)O-、-OC(O)-、-C(O)H、-OCH2-、-OCH2CH2-、-OCH2O-、-OCH2CH2O、-NRPR、-N(RPR)2、-NHRPR、-NHC(O)-、-CH2-NRPR-、-CH2-NHRPR、-CH2NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NHRPR、-OC(O)NRPR-、-OC(O)NHRPR、-NRPRC(O)NRPR-、-NRPRC(O)NHRPR、-NRPRCH2-、-NRPRCH2CH2-、-S-、-SRPR、-S(O)-、-S(O)(O)-、-S(O)ORPR、-S(O)H、-CN、-NO2、鹵素和這些基團(tuán)的組合，其中RPR獨(dú)立地為氫、保護(hù)基團(tuán)或兩個(gè)RPR一起為保護(hù)基團(tuán)。當(dāng)存在一個(gè)以上的取代基時(shí)，可獨(dú)立地選擇取代基。含有取代基的鏈烯基和炔基，典型的是在碳原子上取代，該碳原子是一個(gè)或多個(gè)除去雙鍵的亞甲基部分，如至少被一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)-CH2-分離的部分。
雜環(huán)舉例來說，“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”包括但不限于Paquette，LeoA的《現(xiàn)代雜環(huán)化學(xué)原理》(Principles of Modem HeterocyclicChemistry)，特別是第1、3、4、6、7和9章；《雜環(huán)化合物化學(xué)，系列專題論文》(The Chemistry of Heterocyclic Compounds，A series ofMonographs)(John Wiley & Sons，New York，1950至今)，特別是第13、14、16、19和28卷；以及美國(guó)化學(xué)會(huì)志(J.Am.Chem.Soc)1960，825566中所述的內(nèi)容。
舉例來說，雜環(huán)的例子包括但不限于吡啶基、噻唑基、四氫苯硫基、硫氧化的四氫苯硫基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫萘基、吲哚基、二氫吲哚基(indolenyl)、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖辛因基、三嗪基、6H-1，2，5-硫二嗪基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并呋喃基、氧雜蒽基、吩噁噻吩基(phenooxathiinyl)、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁啉基、吡嗪基、噠嗪基、中氮茚基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酚嗪基、1，5-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、4aH-咔啉基、咔啉基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咱、吩噁嗪基、異苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、噁唑烷基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基、苯并噁唑啉基和靛紅基(isatinoyl)。
舉例來說但不限于這些例子，碳鍵合的雜環(huán)鍵合在吡啶的2、3、4、5或6位，噠嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氫呋喃、噻吩、噻吩、吡咯或四氫吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑的3、4、或5位，氮丙啶的2或3位，氮雜環(huán)丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。更典型地，碳鍵合的雜環(huán)包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
舉例來說但不限于這些例子，氮鍵合的雜環(huán)鍵合在氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯烷、3-吡咯烷、咪唑、咪唑烷、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、1H-吲唑的1位，異吲哚或異二氫吲哚的2位，嗎啉的4位以及咔唑或β-咔唑的9位。氮鍵合的典型的雜環(huán)包括1-氮丙啶基(aziridyl)、1-氮雜環(huán)丁烷基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
“雜芳環(huán)”是指一個(gè)芳環(huán)或兩個(gè)或多個(gè)含有一個(gè)或多個(gè)芳環(huán)的稠環(huán)，其中單環(huán)或稠環(huán)包含1、2、3個(gè)或更多個(gè)雜原子，雜原子通常為氧(-O-)、氮(-NX-)或硫(-S-)，其中X為-H、一個(gè)保護(hù)基團(tuán)或C1-6烷基，通常為-H。例子如對(duì)雜環(huán)所描述的例子。
此處使用的“醇”，通常用于賦形劑，是指一種醇，其含有C2-12烷基部分，其中一個(gè)氫原子被一個(gè)羥基置換。醇包括乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇、正戊醇、異戊醇、正己醇、環(huán)己醇、正庚醇、正辛醇、正壬醇和正癸醇。醇中的碳原子可以是直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的。醇包括前述的任何子集，如C2-4醇(具有2、3或4個(gè)碳原子的醇)。
“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
“保護(hù)基”是指一種基團(tuán)，它防止它所連接的的原子發(fā)生不需要的反應(yīng)。例如對(duì)于-ORPR，RPR可以是氫或用于保護(hù)羥基中氧原子的保護(hù)基，而對(duì)于-C(O)-ORPR，RPR可以是氫或羧基保護(hù)基，對(duì)于-SRPR，RPR可以是氫或用于保護(hù)硫醇中的硫的保護(hù)基，而對(duì)于-NHRPR或-N(RPR)2，RPR可以是氫或用于保護(hù)一級(jí)胺或二級(jí)胺的氮原子保護(hù)基。在通式1表示的化合物中存在羥基、胺以及其它的活潑基團(tuán)，如R1或R2。這些基團(tuán)可能需要保護(hù)以避免在分子的其它部位發(fā)生的反應(yīng)。這些用于保護(hù)氧、硫或氮原子的保護(hù)基團(tuán)通常用于防止與親電化合物發(fā)生的不需要的反應(yīng)，如在類固醇化學(xué)中使用的酰化作用。
“酯”是指包含-C(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子(如約2-20個(gè)碳原子)以及0-約10個(gè)獨(dú)立選擇的雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-C(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-C(O)-O-類固醇或有機(jī)部分-O-C(O)-類固醇，如在R1或R2位置連接到通式1所表示的類固醇核上。有機(jī)部分通常含有上述的任何一個(gè)或多個(gè)有機(jī)基團(tuán)，如C1-20烷基部分、C2-20鏈烯基部分、C2-20炔基部分、芳基部分、C2-9雜環(huán)及其取代衍生物，如包含1、2、3、4個(gè)或更多個(gè)取代基，這些取代基可獨(dú)立地選擇。在這些有機(jī)部分中氫或碳原子的典型的取代基包括1、2、3、4或多個(gè)，通常為1、2或3個(gè)-O-、-S-、-NRPR-(包括-NH-)、-C(O)-、＝O、＝S、-N(RPR)2(包括-NH2)、-C(O)ORPR(包括-C(O)OH)、-OC(O)RPR(包括-O-C(O)-H)、-ORPR(包括-OH)、-SRPR(包括-SH)、-NO2、-CN、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-OC(O)-、-C(O)-O、-O-A8、-S-A8、-C(O)-A8、-OC(O)-A8、-C(O)-O-A8、＝N-、-N＝、＝N-OH、-OPO3(RPR)2、-OSO3H2或鹵素部分或原子，其中每個(gè)RPR為-H、獨(dú)立地選擇的保護(hù)基團(tuán)或兩個(gè)RPR一起組成保護(hù)基，且A8是C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C1-4炔基、C1-4烷基-芳基(如芐基)、芳基(如苯基)或C0-4烷基-C2-9雜環(huán)。取代基可獨(dú)立地選擇。有機(jī)部分包括通過變量R4限定的化合物。很顯然，有機(jī)部分不包括不穩(wěn)定的部分，如-O-O-，除了可以把這種不穩(wěn)定的部分用作過渡物質(zhì)制備具有足夠化學(xué)穩(wěn)定性的化合物，用于此處所述的一種或多種用途。人們通?？梢岳靡陨狭信e的取代基如-O-或-C(O)-置換一個(gè)或多個(gè)碳原子，或用如鹵素、-NH2或-OH置換一個(gè)或多個(gè)氫原子。
“硫酯”是指包含-C(S)-O-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的硫酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子(如約2-20個(gè)碳原子)以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-C(S)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-C(S)-O-類固醇或有機(jī)部分-O-C(S)-類固醇，在R2位置連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“硫縮醛”是指包含-C(O)-S-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的硫縮醛的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子(如約2-20個(gè)碳原子)以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-C(O)-S-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-C(O)-S-類固醇或有機(jī)部分-S-C(O)-類固醇，在R2位置連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“磷酯”或“磷酸酯”是指包含-O-P(ORPR)(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分，其中RPR為氫(-H)、保護(hù)基或上述酯中所述的有機(jī)部分。此處使用的磷酸酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-P(O)(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-P(O)(OH)-O-類固醇，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“硫代磷酸酯”是指包含-O-P(SRPR)(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分，其中RPR為氫(-H)、保護(hù)基或上述酯中所述的有機(jī)部分。此處使用的硫代磷酸酯的典型情況是包含氫原子、具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-P(O)(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-P(O)(SH)-O-類固醇，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“膦酸酯”是指包含-P(ORPR)(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分，其中RPR為氫(-H)、保護(hù)基或上述酯中所述的有機(jī)部分。此處使用的膦酸酯的典型情況是包含氫原子、具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-P(ORPR)(O)-O-結(jié)構(gòu)即有機(jī)部分-P(ORPR)(O)-O-類固醇或類固醇-P(ORPR)(O)-O-有機(jī)部分，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“次膦酸酯”是指包含-P(ORPR)-O-結(jié)構(gòu)的部分，其中RPR為氫(-H)、保護(hù)基或上述酯中所述的有機(jī)部分。此處使用的次膦酸酯的典型情況是包含氫原子、具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-P(ORPR)-O-結(jié)構(gòu)即有機(jī)部分-P(ORPR)-O-類固醇或類固醇-P(ORPR)-O-有機(jī)部分，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“硫酸酯”是指包含-O-S(O)(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的硫酸酯的典型情況是包含氫原子、具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-S(O)(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-S(O)(O)-O-類固醇，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“亞硫酸酯”是指包含-O-S(O)-O-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的亞硫酸酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-S(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-S(O)-O-類固醇，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“硫縮醛”是指包含-S-C(O)-結(jié)構(gòu)的部分。此處使用的硫縮醛的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過結(jié)構(gòu)-S-C(O)-如有機(jī)部分-S-C(O)-類固醇或類固醇-S-C(O)-有機(jī)部分，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。該有機(jī)部分如上述對(duì)酯的描述。
“酰胺”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-C(O)-NRPR-部分的有機(jī)部分，通常含有1或2個(gè)，其中RPR為-H或保護(hù)基，通常為-H。在某些實(shí)施方案中，-C(O)-NRPR-基團(tuán)在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到類固醇核上，即有機(jī)部分-C(O)-NRPR-類固醇或類固醇-C(O)-NRPR-有機(jī)部分。
“醚”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-O-部分的有機(jī)部分，通常含有1或2個(gè)。在某些實(shí)施方案中，-O-基團(tuán)在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到類固醇核上，如有機(jī)部分-O-類固醇。
“硫醚”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-S-部分的有機(jī)部分，通常含有1或2個(gè)。在某些實(shí)施方案中，-S-基團(tuán)在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到類固醇核上，如有機(jī)部分-S-類固醇。
“?；笔侵干鲜鲺ブ兴龅暮?、2、3、4或更多個(gè)-C(O)-基團(tuán)的有機(jī)部分。在某些實(shí)施方案中，-C(O)-基團(tuán)在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到類固醇核上，如有機(jī)部分-C(O)-類固醇。
“硫代酰基”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-C(S)-基團(tuán)的有機(jī)部分。在某些實(shí)施方案中，-C(S)-基團(tuán)在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到類固醇核上，如有機(jī)部分-C(S)-類固醇。
“碳酸酯”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-O-C(O)-O-基團(tuán)的有機(jī)部分。此處使用的碳酸酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-C(O)-O-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-C(O)-O-類固醇，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。
“氨基甲酸酯”是指上述酯中所述的含有1、2、3、4或更多個(gè)-O-C(O)-NRPR-結(jié)構(gòu)的有機(jī)部分，其中RPR為氫(-H)、保護(hù)基或上述酯中所述的有機(jī)部分。此處使用的氨基甲酸酯的典型情況是包含具有約1-50個(gè)碳原子以及0-約10個(gè)雜原子(如O、S、N、P、Si)的有機(jī)部分，其中有機(jī)部分通過-O-C(O)-NRPR-結(jié)構(gòu)如有機(jī)部分-O-C(O)-NRPR-類固醇或類固醇-O-C(O)-NRPR-有機(jī)部分，在位置R1-R6、R10、R15、R17或R18連接到通式1所表示的類固醇核上。
此處使用的“單糖”是指具有實(shí)驗(yàn)式(CH2O)n的多羥基醛或酮，其中n為3、4、5、6或7。單糖包括開鏈和閉合鏈形式，但通常為閉合鏈形式。單糖包括呋喃己糖和呋喃戊糖如2’-脫氧核糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、其2’-和3’-脫氧衍生物及2’，3’-二脫氧衍生物。單糖也包括核糖的2’，3’-二脫氧二脫氫衍生物。單糖包括葡萄糖、果糖、甘露糖、艾杜糖、半乳糖、阿洛糖、古洛糖、阿卓糖、塔羅糖、海藻糖、赤蘚糖、蘇糖、來蘇糖、赤蘚酮糖、核酮糖、木酮糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、阿洛酮糖、山梨糖、塔格糖、甘油醛、二羥基丙酮及其一元脫氧衍生物如鼠李糖的D-、L-和DL-異構(gòu)體。單糖被選擇性保護(hù)或部分保護(hù)。
選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分和選擇性取代的雜環(huán)是指這樣的一些取代基，包括C1-20烷基部分、C2-20鏈烯基部分、C2-20炔基部分、芳基部分、C2-9雜環(huán)或任一種的取代衍生物。這些有機(jī)部分的典型的取代基包括以下基團(tuán)的1、2、3、4或更多個(gè)，通常為1或2個(gè)-O-、-S-、-NRPR-、-C(O)-、-N(RPR)2、-C(O)ORPR、-OC(O)RPR、-ORPR、-SRPR、-NO2、-CN、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-OC(O)-、-C(O)-O、-O-A8、-S-A8、-C(O)-A8、-OC(O)-A8、-C(O)-O-A8、＝N-、-N＝、-OPO2RPR、-OSO3H或鹵素部分或原子，其中RPR選擇性為-H、保護(hù)基團(tuán)或兩個(gè)RPR一起組成保護(hù)基，且A8是C1-8烷基、C1-8鏈烯基、C1-8炔基、C1-4烷基-芳基(如芐基)、芳基(如苯基)或C1-4烷基-C1-5雜環(huán)。取代基可獨(dú)立地選擇。此處所述的有機(jī)部分以及此處所述的其它有機(jī)部分不包括不穩(wěn)定的部分，如-O-O-，除了可以把這種不穩(wěn)定的部分用作過渡物質(zhì)制備具有足夠化學(xué)穩(wěn)定性的化合物，用于此處所述的一種或多種用途。
選擇性取代的“單糖”包括任意C3-C7糖的D-、L-或DL-構(gòu)型，如赤蘚糖、甘油、核糖、脫氧核糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、海藻糖、甘露糖、葡萄糖胺、N-乙?；窠?jīng)氨糖酸、N-乙?；咸烟前?、N-乙?；肴樘前?，其一個(gè)或多個(gè)羥基被選擇性取代。合適的取代基包括氫、保護(hù)的羥基、羧基、疊氮基、氰基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-O-C2-6鏈烯基、-S-C2-6鏈烯基、選擇性保護(hù)的胺、選擇性保護(hù)的羧基、鹵素、硫醇或保護(hù)的硫醇。單糖間包括寡糖的鍵合為α或β。
選擇性取代的“寡糖”包括互相之間共價(jià)鍵合的兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多任意C3-C7糖。鍵合的糖可能具有D-、L-或DL-構(gòu)型。合適的糖和取代基如單糖所述。寡糖與類固醇間的鍵合為α或β，與單糖間包括寡糖的鍵合一致。
核苷包括3TC、AZT、D4T、ddl、ddC、G、A、U、C、T、dG、dA、dT和dC。
聚合物包括生物適合的有機(jī)聚合物，如一系列PEG和聚羥烷基聚合物。
PEG是指含有約20-約2000000個(gè)鍵連的單體的聚乙二醇，典型具有50-1000個(gè)鍵連的單體，通常含有100-300個(gè)。聚乙二醇包括含有各種鍵連單體數(shù)目的PEG，如PEG20、PEG30、PEG40、PEG60、PEG80、PEG100、PEG115、PEG200、PEG300、PEG400、PEG500、PEG600、PEG1000、PEG1500、PEG2000、PEG3350、PEG4000、PEG4600、PEG5000、PEG6000、PEG8000、PEG11000、PEG12000、PEG2000000及其混合物。
氨基酸“氨基酸”是指包含任何天然存在的或合成氨基酸殘基的氨基酸部分，即任何含有至少一個(gè)羧基和至少一個(gè)通過一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或更多碳原子直接連接的氨基殘基，典型的情況是通過一個(gè)α碳原子連接。位于羧基和氨基基團(tuán)之間的插入結(jié)構(gòu)的種類和特性有很多種結(jié)構(gòu)，包括此處所描述的那些。通常通過氨基連接到類固醇上的氨基酸具有足夠多的構(gòu)象和長(zhǎng)度，使其能夠自動(dòng)催化氨基酸-類固醇鍵的水解和類固醇的釋放。當(dāng)在體內(nèi)產(chǎn)生游離的羧基時(shí)可以發(fā)生這些過程，游離的羧基是通過脫酯作用、脫酰胺基作用或包含氨基酸的氨基和類固醇之間的鍵合的前體的解肽切割產(chǎn)生的。氨基酸的羧基或氨基與類固醇之間的鍵合的水解也可以通過化學(xué)或酶活性發(fā)生，例如酯酶切割或非酶水解。
一般來說，與本發(fā)明化合物中使用的殘基相對(duì)應(yīng)的氨基酸是天然存在的并且其本身并不具有顯著的藥物活性。但是，通過使用非天然存在的氨基酸殘基，也可以獲得最佳的藥物動(dòng)力學(xué)活性(基本上完成了對(duì)末端酰胺或酯鍵的水解)。當(dāng)氨基酸殘基為甘氨?；鶗r(shí)，插入結(jié)構(gòu)可以是象亞甲基這樣的簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)，或用于其它α氨基酸的取代的亞甲基。該結(jié)構(gòu)通常在氨基酸的羧基碳和胺氮之間的直接鍵合中包含最多約5個(gè)碳原子或雜原子。因此，氨基酸可以包含插入的亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基基團(tuán)或其取代類似物，這樣的類似物例如氧酯或醚，其中氧置換了碳，并且當(dāng)合適時(shí)置換氫。這種插入結(jié)構(gòu)的一個(gè)例子是-CH-OC(R22)(R23)-，其中R22和R23為獨(dú)立選擇的氫或上述酯中所述的有機(jī)部分。在某些實(shí)施方案中，R22和R23中的一個(gè)為氫，另一個(gè)為C2-20有機(jī)部分。有機(jī)部分的典型情況是包含具有約1-20個(gè)碳原子以及獨(dú)立選擇的0、1、2、3、4或5個(gè)雜原子的有機(jī)部分，雜原子通常選自氧、氮、硫和磷。當(dāng)期望更快的水解時(shí)，通常使用更少的插入原子，盡管更大的結(jié)構(gòu)是適宜的，如果例如這些更大的結(jié)構(gòu)具有足夠的易彎曲性或具有允許羧基的位置接近氨基酸-類固醇鍵的構(gòu)象。
通常R22為-H、甲基或羥甲基，一般為-H，而R23是天然存在的氨基酸的一個(gè)側(cè)鏈或基團(tuán)。氨基酸側(cè)鏈包括類似物，其中側(cè)鏈為與天然化合物對(duì)應(yīng)的C1-15同系物，如亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或其取代衍生物，例如烷基、醚或烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基)的取代衍生物。一般來說，對(duì)于含有羧基的側(cè)鏈，如果側(cè)鏈羧基的碳原子被5個(gè)或更少原子連接到N原子，那么羧基就會(huì)被選擇性地通過如酯化作用或酰胺基化作用保護(hù)，其中酯鍵或酰胺鍵在體內(nèi)可以水解。R22也可以與R30一起形成脯氨酸殘基(-CH2-)3。因此，R23一般為側(cè)基如-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CHCH2-CH2-CH3、-CH2-C6H5、-CH2-CH2-S-CH3、-CH2OH、-CH(OH)-CH3、-CH2SH、-CH2-C6H4OH、-CH2-CO-NH2、-CH2-CH2-CO-NH2、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH、-(CH2)4-NH2和-(CH2)3-NH-C(NH2)-NH2。R23也可以包括3-胍基丙基、芐基、4-羥芐基、咪唑-4-基、吲哚-3-基、甲氧苯基和乙氧苯基。最佳的R30基團(tuán)通過使用常規(guī)分析可以方便地選擇。
一般來說，氨基酸殘基具有如下面的通式所示的結(jié)構(gòu)。通常n為1或2，R22為-H，R23為包含以下一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)的部分氨基、羧基、酰胺、羧酸酯、羥基、C6-C7芳基、醚(-O-)、硫醚(-S-)、正、仲或叔烷基(C1-C6)、胍基、咪唑基、吲哚基、巰基、亞砜和磷?；22和R23取代基可以具有多種結(jié)構(gòu)，包括此處所列舉的，如酯、醚或碳酸酯。
當(dāng)氨基酸殘基包含一個(gè)或多個(gè)手性中心時(shí)，其D-、L-、內(nèi)消旋體、蘇式或赤式(當(dāng)合適的時(shí)候)外消旋體或其混合物都屬于本發(fā)明的范圍。通常來講，如果期望依賴非酶水解方法，D異構(gòu)體也可以使用。另一方面，L異構(gòu)體可能更通用，因?yàn)樗鼈円子谶M(jìn)行非酶以及潛在目標(biāo)酶水解，并且在胃腸道中它們可以更有效地被氨基酸或二肽輸送系統(tǒng)輸送。
合適的氨基酸殘基的例子包括以下內(nèi)容甘氨?；?；氨基多羧酸，如天冬氨酸、β-羥基天冬氨酸、谷氨酸、β-羥基谷氨酸、β-甲基天冬氨酸、β-甲基谷氨酸、β，β-二甲基天冬氨酸、γ-羥基谷氨酸、β，γ-二羥基谷氨酸、β-苯基谷氨酸、γ-亞甲基谷氨酸、3-氨基己二酸、2-氨基庚二酸、2-氨基辛二酸和2-氨基癸二酸；氨基酸酰胺如谷氨酰胺酰基和天冬酰胺?；欢喟被蚨鄩A單羧酸，如精氨酸、賴氨酸、β-氨基丙氨酸、γ-氨基三丁酸甘油酯、鳥氨酸、瓜氨酸、高精氨酸、高瓜氨酸、5-羥基-2，6-二氨基己酸(通常為羥基賴氨酸，包括同分異構(gòu)的羥基賴氨酸)和二氨基丁酸殘基；其它堿性的氨基酸殘基如組氨酸基；二氨基二羧酸，如α，α’-二氨基丁二酸、α，α’-二氨基戊二酸、α，α’-二氨基己二酸、α，α’-二氨基庚二酸、α，α’-二氨基-β-羥基庚二酸、α，α’-二氨基辛二酸、α，α’-二氨基壬二酸和α，α’-二氨基癸二酸殘基；亞氨基酸，如脯氨酸、4-或3-羥基-2-吡咯烷羧酸(通常為羥基脯氨酸，包括同分異構(gòu)的羥基脯氨酸)、γ-甲基脯氨酸、2-哌啶酸、5-羥基-2-哌啶酸、-N([CH2]nCOORPR)2(其中n為1、2、3、4、5、或6，RPR為-H或保護(hù)基)和氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸殘基；一或二烷基氨基酸(通常為C1-C8支鏈或正鏈的)，如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、烯丙基甘氨酸、三丁酸甘油酯、正纈氨酸、正亮氨酸、heptyline、α-甲基絲氨酸、α-氨基-α-甲基-γ-羥基戊酸、α-氨基-α-甲基-δ-羥基戊酸、α-氨基-α-甲基-ε-羥基己酸、異戊酸、α-甲基谷氨酸、α-氨基異丁酸、α-氨基-二乙基乙酸、α-氨基-二異丙基乙酸、α-氨基-二正丙基乙酸、α-氨基-二異丁基乙酸、α-氨基-二正丁基乙酸、α-氨基-乙基異丙基乙酸、α-氨基-正丙基乙酸、α-氨基-二異戊基乙酸、α-甲基-天冬氨酸、α-甲基-谷氨酸、1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸；異亮氨酸、同分異構(gòu)的異亮氨酸、叔亮氨酸、β-甲基色氨酸和α-氨基-β-乙基-β-苯基丙酸β-苯基絲氨酸基；α-氨基-β-羥基脂肪酸，如絲氨酸、β-羥基亮氨酸、β-羥基正亮氨酸、β-羥基正纈氨酸和α-氨基-β-羥基硬脂酸殘基；α-氨基、α-、γ-、δ-或ε-羥基酸，如高絲氨酸、γ-羥基正纈氨酸、δ-羥基正纈氨酸和ε-羥基正亮氨酸殘基；刀豆氨酸基和副刀豆氨酸基；γ-羥基鳥氨酸；2-氨基己糖酸，如D-氨基葡萄糖酸或D-氨基半乳糖酸殘基；α-氨基-β-硫醇，如青霉胺、β-硫醇正纈氨酸或β-硫醇三丁酸甘油酯殘基；其它含硫的氨基酸殘基包括半胱氨酸；高胱氨酸；β-苯基蛋氨酸；蛋氨酸；L-半胱氨酸亞砜的S異構(gòu)體；2-硫組氨酸；胱硫醚；和半胱氨酸或高胱氨酸的硫醚；苯丙氨酸、色氨酸和環(huán)取代的α氨基酸，如苯基或環(huán)己基氨基酸、α-氨基苯基乙酸、α-氨基環(huán)己基乙酸和α-氨基-β-環(huán)己基丙酸；苯丙氨酸的類似物和衍生物包括芳基、低級(jí)烷基、羥基、胍基、氧烷基醚、硝基、硫或鹵代苯基(例如酪氨酸、甲基酪氨酸和鄰氯、對(duì)氯、3，4-二氯、鄰、間或?qū)谆?，4，6-三甲基、2-乙氧基-5-硝基、2-羥基-5-硝基和對(duì)硝基苯丙氨酸)；呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基嘌呤或萘基丙氨酸；和色氨酸的類似物或衍生物，包括犬尿氨酸、3-羥基犬尿氨酸、2-羥基色氨酸和4-羧基色氨酸殘基；α-氨基取代的氨基酸殘基，包括肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、N-芐基甘氨酸、N-甲基丙氨酸、N-芐基丙氨酸、N-甲基苯丙氨酸、N-芐基苯丙氨酸、N-甲基纈氨酸和N-芐基纈氨酸；以及α-羥基氨基酸和取代的α-羥基氨基酸殘基，包括絲氨酸、蘇氨酸、同分異構(gòu)的蘇氨酸、磷酸絲氨酸和磷酸蘇氨酸殘基。
上述的任何一種或其它已知的氨基酸很適合在本發(fā)明中使用。典型的氨基酸能夠自催化氨基酸-類固醇鍵的水解。因此，它們通常包含或者基于體內(nèi)進(jìn)行水解包含游離的羧基或氨基。
所述的還有疏水氨基酸，如一或二烷基或芳基氨基酸，環(huán)烷基氨基酸等。這些氨基酸殘基與R29-R34(R31-R34在下文中定義)一起，通過調(diào)節(jié)通式1或通式2表示的化合物的親油性，能夠有助于細(xì)胞透過性。通常這些殘基并不含有巰基或胍基取代基。
肽R1-R4的1、2、3或更多個(gè)可以包括“肽”，即如上定義的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸。通常這些氨基酸通過正肽鍵即-CO-NH-在鄰近的氨基酸殘基之間連接起來。肽包括二肽(二聚物)、三肽(三聚物)、4、5、6、8、10或15個(gè)殘基的短肽，以及更長(zhǎng)的具有約100個(gè)或更多殘基肽或蛋白質(zhì)。本發(fā)明包含肽的化合物可以用作免疫原、前體藥物或用于其它類固醇衍生物的合成前體。在一個(gè)實(shí)施方案中，肽在其連接第一個(gè)和處于類固醇?xì)埢┒说南乱粋€(gè)殘基之間的肽鍵處含有一個(gè)解肽酶的切割位置。這種切割位置通過酶識(shí)別結(jié)構(gòu)例如被水解酶如位于血漿或細(xì)胞中的肽酶識(shí)別的特殊殘基選擇性地位于側(cè)面。
解肽酶是眾所周知的，特別是包括羧基肽酶。羧基肽酶通過除去C-末端殘基來消化多肽，且在許多情況下對(duì)于特殊的C-末端序列它們具有專一性。這種酶及其底物的要求通常也是公知的。例如，一個(gè)具有給定殘基對(duì)和游離羧基終端的二肽通過其α-氨基共價(jià)鍵合到類固醇核上。人們期望肽會(huì)被合適的二肽酶、蛋白酶或通過化學(xué)水解切割，這樣就使得最鄰近的氨基酸殘基的羧基自催化切割酰胺化鍵。
合適的二肽基團(tuán)的例子如下表所示(通過其單字母符號(hào)指明)。
符號(hào)1字母符號(hào) 3字母符號(hào) 氨基酸Y Tyr 酪氨酸G Gly 甘氨酸F Phe 苯丙氨酸M Met 蛋氨酸A Ala 丙氨酸S Ser 氨酸
I Ile 異亮氨酸L Leu 亮氨酸T Thr 蘇氨酸V Val 纈氨酸P Pro 脯氨酸K Lys 賴氨酸H His 組氨酸Q Gln 谷氨酰胺E Glu 谷氨酸W Trp 色氨酸R Arg 精氨酸D Asp 天冬氨酸N Asn 天冬酰胺C Cys 半胱氨酸二肽AA，AR，AN，AD，AC，AE，AQ，AG，AH，AI，AL，AK，AM，AF，AP，AS，AT，AW，AY，AV，RA，RR，RN，RD，RC，RE，RQ，RG，RH，RI，RL，RK，RM，RF，RP，RS，RT，RW，RY，RV，NA，NR，NN，ND，NC，NE，NQ，NG，NH，NI，NL，NK，NM，NF，NP，NS，NT，NW，NY，NV，DA，DR，DN，DD，DC，DE，DQ，DG，DH，DI，DL，DK，DM，DF，DP，DS，DT，DW，DY，DV，CA，CR，CN，CD，CC，CE，CQ，CG，CH，CI，CL，CK，CM，CF，CP，CS，CT，CW，CY，CV，EA，ER，EN，ED，EC，EE，EQ，EG，EH，EI，EL，EK，EM，EF，EP，ES，ET，EW，EY，EV，QA，QR，QN，QD，QC，QE，QQ，QG，QH，QI，QL，QK，QM，QF，QP，QS，QT，QW，QY，QV，GA，GR，GN，GD，GC，GE，GQ，GG，GH，GI，GL，GK，GM，GF，GP，GS，GT，GW，GY，GV，HA，HR，HN，HD，HC，HE，HQ，HG，HH，HI，HL，HK，HM，HF，HP，HS，HT，HW，HY，HV，IA，IR，IN，ID，IC，IE，IQ，IG，IH，II，IL，IK，IM，IF，IP，IS，IT，IW，IY，IV，LA，LR，LN，LD，LC，LE，LQ，LG，LH，LI，LL，LK，LM，LF，LP，LS，LT，LW，LY，LV，KA，KR，KN，KD，KC，KE，KQ，KG，KH，KI，KL，KK，KM，KF，KP，KS，KT，KW，KY，KV，MA，MR，MN，MD，MC，ME，MQ，MG，MH，MI，ML，MK，MM，MF，MP，MS，MT，MW，MY，MV，F(xiàn)A，F(xiàn)R，F(xiàn)N，F(xiàn)D，F(xiàn)C，F(xiàn)E，F(xiàn)Q，F(xiàn)G，F(xiàn)H，F(xiàn)I，F(xiàn)L，F(xiàn)K，F(xiàn)M，F(xiàn)F，F(xiàn)P，F(xiàn)S，F(xiàn)T，F(xiàn)W，F(xiàn)Y，F(xiàn)V，PA，PR，PN，PD，PC，PE，PQ，PG，PH，PI，PL，PK，PM，PF，PP，PS，PT，PW，PY，PV，SA，SR，SN，SD，SC，SE，SQ，SG，SH，SI，SL，SK，SM，SF，SP，SS，ST，SW，SY，SV，TA，TR，TN，TD，TC，TE，TQ，TG，TH，TI，TL，TK，TM，TF，TP，TS，TT，TW，TY，TV，WA，WR，WN，WD，WC，WE，WQ，WG，WH，WI，WL，WK，WM，WF，WP，WS，WT，WW，WY，WW，YA，YR，YN，YD，YC，YE，YQ，YG，YH，YI，YL，YK，YM，YF，YP，YS，YT，YW，YY YV VA VR VN VD，VC VE，VQ，VG，VH，VI，VL，VK，VM，VF，VP，VS，VT，VW，VY，VV這樣的二肽包括兩種氨基酸均為L(zhǎng)構(gòu)型、D構(gòu)型或構(gòu)型的混合物的種類。
三肽，即三個(gè)鍵合的氨基酸殘基，也是有用的實(shí)施方案。三肽包括那些其中A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y通過標(biāo)準(zhǔn)肽鍵鍵合到以上列舉的任何二肽的氨基或羧基終端上。序列-X1-Pro-X2-(其中X1為任意氨基酸，X2為氫、任意氨基酸殘基或脯氨酸的羧酸酯)被5-乙基-5-苯基巴比妥酸羧基肽酶切割，以產(chǎn)生帶有游離羧基的X1，X1反過來又自催化切割酰胺化鍵。X2通常是X2羧基的芐基酯。其它實(shí)施方案包括四肽如那些由上述列舉的任何二個(gè)相同或不同的二肽(例如AA和AA連接起來，或例如AA和GI連接起來)通過氨基終端或羧基終端互相連接起來的四肽。一種、二種或更多四肽通過四肽的氨基或羧基終端可以鍵合到通式1或通式2表示的化合物上。
有某些實(shí)施方案中，通式1或通式2表示的化合物包含一種或多種氨基酸或具有結(jié)構(gòu)(A)、(B)或(C)的肽(A)R32-NH-{[C(R29)(R30)]b-C(O)-N(R31)}f-[C(R29)(R30)]a-C(O)-O-類固醇，(B)R33-O-{C(O)-[C(R29)(R30)]d-N(R31)}g-C(O)-[C(R29)(R30)]c-N(R31)-O-類固醇，或(C)R33-O-{C(O)-[C(R29)(R30)]d-N(R31)}e-C(O)-[C(R29)(R30)]c-N(R31)-C(O)O-類固醇，其中(A)、(B)或(C)可獨(dú)立地選擇且它們鍵合到R1到R4的1、2、3或更多個(gè)上，其中R29-R31中的每一個(gè)都獨(dú)立地選擇；R29獨(dú)立地為-H或C1-20的有機(jī)部分(例如C1-6烷基，例如-CH3或-C2H5)；R30獨(dú)立地為氨基酸的側(cè)鏈，包括上述天然存在的氨基酸的側(cè)鏈，例如-H、-CH3、-CH2C6H5；R31為-H或保護(hù)基；R32和R33獨(dú)立地包括-H、保護(hù)基、酯或酰胺，其中的每一個(gè)原子或基團(tuán)可獨(dú)立地選擇；a、b、c和d獨(dú)立地是1、2、3、4或5，通常為1；e、f和g各自獨(dú)立地為0到1000的整數(shù)，通常各自獨(dú)立地為0、1、2、3、4、5、6、7或8；a、b、c和d各自獨(dú)立地為1或2；e、f和g獨(dú)立地為0、1、2、3、4或5。
如果氨基酸或殘基具有2個(gè)或更多胺基，如賴氨酸或精氨酸或鳥氨酸殘基，那么R29通常為-H而R30可包含[C(R34)2]n2N(RPR)-，其中n2為0、1、2、3、4、5或6，RPR為-H或保護(hù)基并且每個(gè)R34獨(dú)立地為-H、C1-20選擇性取代的烷基、C6-20選擇性取代的芳基、C7-20選擇性取代的烷芳基、C7-20選擇性取代的芳烷基、C1-20選擇性取代的烷氧基、C6-20選擇性取代的芳氧基或羥基。這樣的化合物含有許多類固醇部分。例如當(dāng)賴氨酸或鳥氨酸的ε-或δ-和α-氨基被類固醇部分所取代時(shí)，人們相信酰胺化物能夠釋放活性藥物分子，在不同的藥物動(dòng)力學(xué)條件下預(yù)期每個(gè)分子都會(huì)出現(xiàn)，因此又進(jìn)一步維持了藥物的釋放。
鹽本發(fā)明實(shí)施方案包括鹽和本發(fā)明化合物(通式1表示的化合物)的復(fù)合體，包括藥用的或相對(duì)無毒的鹽。某些本發(fā)明化合物具有一個(gè)或多個(gè)部分，這些部分在水溶液中至少會(huì)帶部分正電荷或負(fù)電荷，通常溶液pH值約4-10，溶液能夠參與鹽、復(fù)合體、具有部分鹽和部分復(fù)合體特性的組合物或其它非共價(jià)相互作用的形成，所有這些都稱為“鹽”。鹽通常是生物相容性的或藥物可接受的或無毒的，特別是對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。生物毒性的鹽也可用于本發(fā)明化合物的合成中間體。當(dāng)期望得到水溶性組合物時(shí)，經(jīng)常使用一價(jià)鹽。
通常金屬鹽是通過金屬氫氧化物與本發(fā)明的化合物反應(yīng)制備的。通過這種方法選擇性制備的金屬鹽的例子為含有Li+、Na+和K+的鹽。不溶的金屬鹽的制備可以通過往更可溶的金屬鹽溶液中加入合適的金屬化合物使不溶性的金屬鹽從更可溶鹽的溶液中沉淀出來。本發(fā)明的鹽可以通過把某些有機(jī)酸和無機(jī)酸加入到本發(fā)明化合物的酸性或堿性中心如在本發(fā)明的嘧啶堿類似物的堿性中心而形成，有機(jī)酸如有機(jī)羧酸，無機(jī)酸如烷基磺酸或氫鹵酸。金屬鹽包括含有Na+、Li+、K+、Ca++或Mg++的鹽。其它金屬鹽可能包含鋁、鋇、鍶、鎘、鉍、砷或鋅離子。
本發(fā)明化合物的鹽可以包括適合的陽離子和酸陰離子的組合，如堿金屬和堿土金屬離子或銨和季銨離子與磷酸或磷膦酸基團(tuán)的酸陰離子部分的組合，其存在于本發(fā)明聚合物或單體中。
鹽通過標(biāo)準(zhǔn)方法生產(chǎn)，包括在含有選定的酸的水、水-醇或水-有機(jī)溶液中溶解游離堿，然后選擇性蒸發(fā)該溶液。在含有酸的有機(jī)溶液中游離堿參加反應(yīng)，在這種情況下鹽通過可以直接分離或通過濃縮溶液獲得。
合適的胺鹽包括具有足夠堿度以形成穩(wěn)定鹽的胺，通常為低毒的胺，包括三烷基胺(三丙胺、三乙胺、三甲胺)、普魯卡因、二苯基胺、N-芐基-β-苯乙胺、ephenamine、N，N’-二芐基乙二胺、N-乙基哌啶、芐胺和二環(huán)己基胺。
鹽包括有機(jī)磺酸或有機(jī)羧酸鹽，例如通過將酸添加到堿性中心制備，堿性中心通常為胺?；撬岬睦影–6-16芳基磺酸、C6-16雜芳基磺酸和C1-16烷基磺酸如苯磺酸、α-萘磺酸、β-萘磺酸、(S)-樟腦磺酸、甲磺酸(CH3SO3H)、乙磺酸(C2H5SO3H)、正丙基磺酸、異丙基磺酸、正丁基磺酸、仲丁基磺酸、異丁基磺酸、叔丁基磺酸、戊基磺酸和己基磺酸。有機(jī)羧酸的例子包括C1-16烷基、C6-16芳基羧酸和C4-16雜芳基羧酸如乙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、戊二酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、丁二酸、蘋果酸、馬來酸、草酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、煙酸和2-苯氧基苯甲酸。
本發(fā)明鹽包括由無機(jī)酸制備的鹽，無機(jī)酸例如HF、HCl、HBr、HI、H2SO4、H3PO4、Na2CO3、K2CO3、CaCO3、MgCO3和NaClO3。選擇性地與一種陽離子如Ca++、Mg++、Li+、Na+或K+一起存在的合適的陰離子包括砷酸鹽、亞砷酸鹽、甲酸鹽、山梨酸鹽、氯酸鹽、高氯酸鹽、高碘酸鹽、重鉻酸鹽、乙二醇脫氧膽酸鹽(glycodeoxycholate)、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、牛磺膽酸鹽、牛磺脫氧膽酸鹽、牛磺石膽酸鹽、四硼酸鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽、亞硫酸鹽、氨基磺酸鹽、次硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽、硫氰酸鹽、硅酸鹽、偏硅酸鹽、CN-、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、苦味酸鹽、亞硫酸氫鹽、六氟磷酸鹽、次氯酸鹽、hypochlorate、硼酸鹽、偏硼酸鹽、鎢酸鹽和尿酸鹽。
鹽還包括本發(fā)明化合物與一種或多種氨基酸形成的鹽。盡管通常氨基酸上帶有酸性或堿性基團(tuán)的側(cè)鏈，例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸或谷氨酸，或中性基團(tuán)的側(cè)鏈如氨基乙酸、絲氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、異亮氨酸或高氨酸，但許多氨基酸都可使用，特別是天然發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)成分氨基酸。
本發(fā)明組合物包括非離子化以及兩性離子形式的化合物，以及帶有化學(xué)計(jì)量的水的水合物。
立體異構(gòu)體本發(fā)明的化合物(通式1表示的化合物)包括在任何或所有不對(duì)稱原子的富集的或拆分的光學(xué)異構(gòu)體，這從所述內(nèi)容中可以顯而易見地看出。外消旋和非對(duì)映的混合物以及單獨(dú)的光學(xué)異構(gòu)體可以分離或合成，以致于基本與其對(duì)映體或非對(duì)映異構(gòu)體分離，并且這些都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明化合物中可以找到手性中心，如R1、R2、R3和R4。
下述的一種或多種方法用于制備對(duì)映富集的或純異構(gòu)體。這些方法大致以優(yōu)選順序列舉，即人們通常應(yīng)該由手性前體進(jìn)行立體有擇合成，然后色譜分離，然后自發(fā)結(jié)晶。
立體有擇合成作為例子描述。當(dāng)合適的手性起始材料易得且選擇反應(yīng)步驟不會(huì)導(dǎo)致在手性位置發(fā)生不希望的外消旋化時(shí)可以方便地使用這種類型的方法。立體有擇合成的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)產(chǎn)生不希望的對(duì)映異構(gòu)體，對(duì)映異構(gòu)體是必須從終產(chǎn)物中除去的，因此就降低了總合成收率。一般來講熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解應(yīng)該使用什么樣的起始材料和反應(yīng)條件以通過立體有擇合成方法獲得所期望的對(duì)映富集的或純的異構(gòu)體。
如果通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)合適的立體有擇合成不能通過經(jīng)驗(yàn)設(shè)計(jì)或確定，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員就會(huì)采用其它方法。一種具有通用性的方法是在手性色譜樹脂上進(jìn)行色譜分離。這種樹脂裝在柱子里，通常叫做Pirkle柱，在市場(chǎng)上可以買到。這種柱含有手性固定相。外消旋物置于溶液中并裝載到柱子上，然后通過HPLC分離。例如請(qǐng)參見，色譜學(xué)會(huì)會(huì)議論文集(Proceedings Chromatographic Society)-國(guó)際手性分離研討會(huì)，Sept.3-4，1987?？梢院Y選用于最優(yōu)分離技術(shù)的手性柱的例子包括Diacel Chriacel OD、Regis Pirkle共價(jià)D-苯基甘氨酸、RegisPirkle Type 1A、Astec CyclobondII、Astec CyclobondIII、Serva ChiralD-DL＝Daltosil100、Bakerbond DNBLeu、Sumipas OA-1000、Merk纖維素三乙酸酯柱、Astec Cyclobond 1-Beta，或Regis Pirkle共價(jià)D-萘基丙氨酸。所有這些柱對(duì)每種外消旋混合物并不是都有效。但是，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解需要一定量的常規(guī)篩選以確定最有效的固定相。當(dāng)使用這些柱時(shí)，建議使用本發(fā)明化合物的實(shí)施方案，其中的電荷沒有中和，例如酸性官能團(tuán)如羧基并沒有酯化或酰胺化。
另一種方法需要把混合物中的對(duì)映異體體轉(zhuǎn)化成含有手性助劑的非對(duì)映體，然后通過通常的柱色譜分離結(jié)合物。這是一種非常合適的方法，特別是當(dāng)實(shí)施方案中包含游離羥基、氨基或羥基時(shí)，這些基團(tuán)會(huì)形成鹽或共價(jià)鍵合到手性助劑上。手性純的氨基酸、有機(jī)酸或有機(jī)磺酸都值得使用手性助劑，這些在本領(lǐng)域是公知的?？梢孕纬珊羞@種助劑的鹽或這些鹽共價(jià)(不可逆)鍵合到官能團(tuán)上。例如，純D或L氨基酸可用于把本發(fā)明實(shí)施方案的羧基酰胺化，然后通過色譜法分離。
酶分離是另一種具有潛在價(jià)值的方法。在這種方法中，人們?cè)谕庀旌衔镏兄苽鋵?duì)映異構(gòu)體的共價(jià)衍生物，通常是低級(jí)烷基酯(例如羧基)，然后衍生物進(jìn)行酶切割，通常使用水解方法。這種方法要想成功，必須選擇一種能夠進(jìn)行立體有擇切割的酶，因此通常需要按常規(guī)方法篩選若干種酶。如果要切割的是酯，那么人們選擇酯酶、磷酸酯酶和脂酶，并且確定它們對(duì)于衍生物的活性。典型的酯酶來自于肝、胰臟或其它動(dòng)物器官并包括豬肝酯酶。
如果對(duì)映異構(gòu)體混合物從溶液中分離而來或作為集聚體即對(duì)映純晶體的混合物溶化，那么晶體可以進(jìn)行機(jī)械分離，因此產(chǎn)生對(duì)映富集的配制物。但是這種方法對(duì)于大規(guī)模的制備不太實(shí)用并且對(duì)于真正的外消旋化合物其價(jià)值也有限。
不對(duì)稱合成是另一種用于獲得對(duì)映體富集的技術(shù)。例如，一種手性保護(hù)基與要進(jìn)行保護(hù)的基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，并允許反應(yīng)混合物達(dá)到平衡。如果反應(yīng)是對(duì)映有擇的，那么產(chǎn)物就會(huì)產(chǎn)生富集的對(duì)映異構(gòu)體。
還可以進(jìn)一步找到分離對(duì)映異構(gòu)體混合物的方案，作為例子但不限于，《對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體和拆分》(Enantiomers，Racemates，andresolutions)，Jean Jacques，Andre Collet和Samuel H.Wilen(KriegerPublishing Company，Malabar，F(xiàn)L，1991，ISBN 0-89464-618-4)Part 2，對(duì)映異構(gòu)體混合物的拆分(Resolution of Enantiomer Mixture)，217-435頁；更具體地，第4章，直接結(jié)晶分離(Resolution by DirectCrystallization)，217-251頁，第5章，非對(duì)映異構(gòu)體的形成和分離(Formation and Separation of Diastereomers)，251-369頁，第6章，引發(fā)結(jié)晶的非對(duì)稱轉(zhuǎn)化(Crystallization-Induced AsymmetricTransformations)，369-378頁，和第7章，實(shí)驗(yàn)分離方式和技術(shù)(Experimental Aspects and Arts of Resolutions)，378-435頁；更具體地，5.1.4部分，醇的分離、醇轉(zhuǎn)化為成鹽衍生物(Resolution of Alcohols，Transformations of Alcohols into Salt-Forming Derivatives)，263-266頁，5.2.3部分，醇、硫醇和酚的共價(jià)衍生物(Covalent Derivatives ofAlcohols，Thiols，and Phenols)，332-335頁，5.1.1部分，酸的分離(Resolution of Acids)，257-259頁，5.1.2部分，堿的分離(Resolution ofBases)，259-260頁，5.1.3部分，氨基酸的分離(Resolution of AminoAcids)，261-263頁，5.2.1部分，酸的共價(jià)衍生物(Covalent Derivatives ofAcids)，329頁，5.2.2部分，胺的共價(jià)衍生物(Covalent derivatives ofAmines)，330-331頁，5.2.4部分，醛、酮和亞砜的共價(jià)衍生物(CovalentDerivatives ofAldehydes，Ketones，and Sulfoxides)，335-339頁，and 5.2.7部分，共價(jià)非對(duì)映異構(gòu)體的色譜行為(Chromatographic Behavior ofCovalent Diastereomers)，348-354頁。
如果上下文沒有其它指明或暗示，本發(fā)明組合物或制劑中的液體組分如賦形劑的百分?jǐn)?shù)的表達(dá)是指組分的體積百分?jǐn)?shù)(v/v)。因此，20％的丙二醇是指本發(fā)明組合物或制劑中存在20％v/v的丙二醇。在本發(fā)明組合物中所指明的賦形劑的量不受其形式例如NF或USP級(jí)溶劑或賦形劑的影響。因此，如果其它的限制條件如水含量不過量，一種含有約30％聚乙二醇300NF的本發(fā)明組合物也可由USP級(jí)對(duì)應(yīng)物代替。
此處使用的“先天免疫”是指一種或多種通常與患者的非特異性免疫保護(hù)機(jī)理相關(guān)的組分。這些組分包括交替補(bǔ)充的途徑，例如因子B、因子D和備解素；NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞(單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)、中性白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞、纖維細(xì)胞；抗菌化學(xué)品，例如防衛(wèi)素；自然障礙-皮膚、粘膜上皮細(xì)胞；以用某些白介素、趨化因子和細(xì)胞因子。先天免疫在抵抗細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染如白血細(xì)胞感染、肝感染及其它感染如淋巴節(jié)感染方面起作用。通過通式1表示的化合物或此處所述的方法增強(qiáng)先天免疫就能夠增強(qiáng)吞噬溶酶體的融合或運(yùn)動(dòng)，而某些病原體如細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌如分枝細(xì)菌或李斯特菌屬會(huì)抑制吞噬溶酶體的融合或運(yùn)動(dòng)。
正如此處所使用的，所指的CD分子、特異免疫細(xì)胞子集、免疫反應(yīng)等等，一般都使用應(yīng)用于人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的分子、細(xì)胞等的術(shù)語。在其它物種中這些分子、細(xì)胞等的類似物或?qū)?yīng)物可能會(huì)有不同的術(shù)語，但也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。在科學(xué)文獻(xiàn)中可以找到關(guān)于各種CD分子和免疫細(xì)胞子集的術(shù)語和功能的描述。所指的病人的Th0、Th1或Th2細(xì)胞以及Th1或Th2免疫是指鼠類Th0、Th1或Th2細(xì)胞或反應(yīng)的人類對(duì)應(yīng)物。例如請(qǐng)參見，A.K.Abbas等編著的《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》(Cellular and Molecular Immunology)，W.B.Saunders Company，thirdedition，1997，ISBN 0-7216-4024-9，4-469頁，和I.Kimber和M.K.Selgrade編著的《免疫副毒理學(xué)的T淋巴細(xì)胞亞群》(T LymphocyteSubpopulation in Immunotoxicology)，John Wiley & Sons Ltd.，1998，ISBN 0-471-97194-4，1-53頁。
“免疫抑制分子”是指一些這樣的分子如環(huán)孢子菌素、環(huán)己酰胺、絲裂霉素C、阿霉素、紫杉醇和兩性霉素B。這些分子傾向于對(duì)免疫系統(tǒng)具有毒性并且直接或間接產(chǎn)生免疫抑制如使分裂細(xì)胞中毒，或者它們能夠下調(diào)免疫。
“類固醇受體”是指一種基因產(chǎn)物，通常是蛋白質(zhì)單或二聚體，能夠鍵合到配體上，配體如天然類固醇或它的一種類似物如通式1所表示的化合物。類固醇受體包括孤立類固醇受體。孤立類固醇受體是蛋白質(zhì)，其天然配體或生物功能至少還有部分不清楚。作為此處所使用的，類固醇受體包括同型二聚體如SXR和(CARβ)2，和異型二聚體如PXR-CARβ或RXR-CARβ。類固醇受體也包括同種型如用于PXR受體的PXR.1和PXR.2，和類固醇的同族體如稱作MB67的CARβ的同族體。同種型通常通過不同的接合方法用于來自一種基因的核RNA，而同族體通常是一種類固醇受體基因的清楚的復(fù)制，其中基因復(fù)制的編碼與參考類固醇受體基因產(chǎn)物相比僅有較少的差別。這種差別最通?？梢栽诙垠w以外的區(qū)域以及類固醇受體結(jié)構(gòu)的類固醇鍵合區(qū)找到。通常同種型和同族體與參考基因或類固醇受體鍵合同樣或類似的配體。類固醇受體可以來源于人或動(dòng)物，如從細(xì)胞中、組織中或來自任何靈長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物(包括鼠類)、鳥類、綿羊、牛、馬、犬或貓科物種的任何物種或任何本文別處提到的或本文引用的任何參考中的任何物種群(如種或?qū)俚?的任何物種的cDNA表達(dá)庫中獲得。
在把包括一種類固醇受體和一種通式1所表示的化合物結(jié)合起來的條件下，“發(fā)明復(fù)合體”或“復(fù)合體”是指一種包含一種類固醇受體和一種通式所表示的化合物以及選擇性含有其它分子的復(fù)合體。這種其它的分子包括(i)DNA識(shí)別序列(下文用“DNARS”表示)，即類固醇受體特異識(shí)別和鍵合的序列和(ii)能夠鍵合到類固醇受體-通式1化合物復(fù)合體上的轉(zhuǎn)錄因子。此處所使用的這些復(fù)合體能夠在體外或體內(nèi)細(xì)胞或不含細(xì)胞的系統(tǒng)中出現(xiàn)。例如復(fù)合體包括類固醇受體異型二聚體-通式1化合物的結(jié)合、類固醇受體同型二聚體-通式1化合物的結(jié)合、類固醇受體單體-通式1化合物的結(jié)合、類固醇受體異型二聚體-通式1化合物-DNA(或DNARS)的結(jié)合、類固醇受體同型二聚體-通式1化合物-DNA(或DNARS)的結(jié)合、類固醇受體異型二聚體-通式1化合物-轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合、類固醇受體同型二聚體-通式1化合物-轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合、類固醇受體異型二聚體-通式1化合物-DNA(或DNARS)-轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和類固醇受體同型二聚體-通式1化合物-DNA(或DNARS)-轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合。
“激動(dòng)劑”或“拮抗劑”分別為一種加強(qiáng)或減弱受體活性的化合物或組合物，這樣可能導(dǎo)致受調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄因子的增加或減弱。受體(和轉(zhuǎn)錄因子)可以通過加強(qiáng)或減弱轉(zhuǎn)錄而調(diào)節(jié)其靶向基因的轉(zhuǎn)錄。
一般方法已經(jīng)有關(guān)于確定各種組合物中的水含量或溶劑含量的方法，例如卡爾費(fèi)休法(Karl Fischer)(KF)和干燥失重法(LOD)。LOD測(cè)定樣品中的所有揮發(fā)份，而KF通常用于測(cè)定總水分。當(dāng)水為唯一存在的揮發(fā)份時(shí)，對(duì)于一給定的組合物L(fēng)OD值與KF值相等或稍低。KF測(cè)定化合物的水合物中的水，而LOD測(cè)定水以及其它可能存在的揮發(fā)份。本發(fā)明組合物和制劑可以方便地使用KF滴定法(例如使用一臺(tái)METROHM 684 KF庫侖計(jì)或等價(jià)物)按照公開的方法(美國(guó)藥典(U.S.Pharmacopoeia)，vol.23，1995，chapter<921>，U.S.PharmacopeialConvention，Inc.，Rockville，MD)和生產(chǎn)商的庫侖計(jì)說明書分析水含量。分析中所使用的物質(zhì)量約50-100mg，使用一臺(tái)5位分析天平(Sartorius，RC210D型，或合適的等價(jià)物)進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明組合物和制劑中所指明的水量為通過KF分析所測(cè)得的量。
粉末X射線衍射(XRD)方法用于表征各種晶體化合物(例如請(qǐng)參見，美國(guó)藥典(U.S.Pharmacooeia)，vol.23，1995，<941>，p.1843-1845，U.S.Pharmacopeial Convention，Inc.，Rockville，MD；Stout等，X射線結(jié)構(gòu)測(cè)定(X-Ray Structure Determination)；A Practical Guide，MacMillanCo.，New York，N.Y.，1986)。從晶體化合物得到的衍射圖案或其衍射部分通?？蓪?duì)給定的晶體形式進(jìn)行鑒定，盡管從連續(xù)的幾批晶體得到的重復(fù)衍射圖案中不經(jīng)常出現(xiàn)弱的或極弱的衍射峰。而且，XRD帶的相對(duì)強(qiáng)度，特別是低x-射線入射角值(低θ)，可能由于例如晶相、粒徑或其它測(cè)定條件的差別而出現(xiàn)的最佳方向效應(yīng)而有所變化。XRD光譜中的峰通常是由給定的θ值+/-約0.1-0.2來定義的。從1、2、3、4、5或更主要強(qiáng)度XRD峰獲得的XRD信息選擇性地與一種或多種其它鑒定數(shù)據(jù)(熔點(diǎn)、DSC、IR)結(jié)合通常很適合用于從其它包含有同樣組合物的晶體形式中表征或描述一種晶體物質(zhì)如BrEA半水合物。
其它用于鑒定或描述晶體物質(zhì)如BrEA半水合物的技術(shù)包括熔點(diǎn)(MP)、差式掃描量熱法(DSC)和紅外吸收光譜(IR)數(shù)據(jù)。DSC測(cè)定當(dāng)晶體結(jié)構(gòu)改變或晶體熔解時(shí)晶體吸熱或放熱的熱轉(zhuǎn)化溫度。MP數(shù)據(jù)和DSC熱轉(zhuǎn)化溫度在連續(xù)分析1或2℃的范圍內(nèi)通常具有可重現(xiàn)性。IR測(cè)定與存在的與基團(tuán)如羥基相關(guān)的特殊化學(xué)鍵相關(guān)的紅外光的吸收，這些基團(tuán)對(duì)應(yīng)于特定光的波長(zhǎng)產(chǎn)生振動(dòng)。
本發(fā)明實(shí)施方案本發(fā)明提供BrEA半水合物，它通常不含有其它形式的BrEA如無定形BrEA或無水BrEA。此處所使用的BrEA半水合物或晶體BrEA半水合物是指在一個(gè)確定的三維空間圖案或晶格中幾乎所有的組分分子具有有序排列的固體BrEA和水。晶體BrEA半水合物可以包含一種或多種晶相如板晶、棒條、盤狀或針狀?；静缓衅渌问紹rEA的BrEA半水合物是指干燥或基本干燥(其中液體占總重量的不足約10重量％)的固體制劑，其中制劑中存在的超過約55重量％的BrEA為BrEA半水合物。這種組合物通常含有至少約60重量％，或至少約70重量％，或至少約80重量％，通常至少約90重量％或至少約95重量％，或至少約98重量％的BrEA半水合物，其余存在的為其它形式的BrEA如無定形或無水BrEA。固體BrEA半水合物典型含有至少約90重量％，通常含有至少97重量％或98重量％的化合物，以及少于約10重量％，通常少于約3重量％或2重量％的副產(chǎn)物，副產(chǎn)物可能包括BrEA的16β異構(gòu)體或一種或多種BrEA合成中的副產(chǎn)物。通常在一種固體或液體介質(zhì)中存在的固體BrEA的量不包括可檢測(cè)量的其它形式的BrEA(使用標(biāo)準(zhǔn)分析方法如FTIR、DSC或XRD)，因此半水合物就占所存在的BrEA總量的約99-100重量％。
其它本發(fā)明的實(shí)施方案包括含有BrEA半水合物實(shí)質(zhì)量的組合物，其中BrEA半水合物存在于含有一種或多種其它形式的BrEA如無定形BrEA或無水BrEA，以及選擇性含有一種或多種附加組分如任何本文所述的賦形劑的組合物中。此處所使用的這些組合物中的“實(shí)質(zhì)量”的BrEA半水合物包含至少占所存在的BrEA總量的約15-20重量％或至少約20重量％的BrEA半水合物，典型為至少約25重量％，更典型為至少約30重量％，經(jīng)常為至少約35重量％，通常為至少約45重量％。這些組合物通常為固體如制劑或單位劑量，但是它們也包括含有固體BrEA的懸浮液、沉淀物、凝膠和膠體。這種懸浮液或沉淀物可以從例如從一種含有水的溶液中沉淀BrEA半水合物或通過往液體賦形劑中加入固體BrEA而得到。很明顯，含有實(shí)質(zhì)量BrEA的組合物可能實(shí)質(zhì)上不含有上述其它形式的固體BrEA。
通過以下一種或多種表征BrEA半水合物的方法可以方便地鑒定BrEA半水合物(1)其熔點(diǎn)或分解點(diǎn)或熔程(選擇性表達(dá)為+/-2℃)，(2)一種或多種BrEA半水合物的DSC轉(zhuǎn)化溫度或范圍(任何一種可以選擇性表達(dá)為+/-2℃)，(3)一種或多種BrEA半水合物的特征IR吸收帶，(4)使用Cu-Kα輻射獲得的BrEA半水合物的XRD光譜(例如基本上按照美國(guó)藥典(U.S.Pharmacopoeia)，vol.23，1995，<941>，p.1843-1845中描述的方法得到)的1、2、3、4、5、6或更多最高強(qiáng)度的XRD峰(任何一種或多種可選擇性表達(dá)為+/-0.1°θ或+/-0.2°θ)，(5)存在少于約3重量％或少于約2重量％的其它化合物，(6)約2.5重量％的干燥BrEA半水合物的含水量(例如2.3-2.7重量％)，其中干燥的BrEA半水合物是指通過過濾、選擇性地使用一種無水溶劑如己烷洗滌一次、再次過濾，然后在約60℃下真空干燥直至約60℃下24小時(shí)內(nèi)沒有進(jìn)一步的重量損失(例如，其中的含水量基本上是用美國(guó)藥典(U.S.Pharmacopoeia)，vol.23，1995，p.1801-1802或1840-1843方法<731>或<921>中描述的卡爾費(fèi)休法或其它方法測(cè)定的)所得到的干燥化合物，(7)通過對(duì)BrEA半水合物進(jìn)行單晶X射線晶體照相所得到的晶胞常數(shù)和定向陣(例如基本上是按照WO99/04774的實(shí)施例13中所述的方法得到的)，(8)通過偏振光顯微術(shù)進(jìn)行約100×放大至約150×放大所觀察到的結(jié)果對(duì)晶體形狀進(jìn)行描述，或(9)BrEA半水合物平均晶體尺寸和形狀描述。
因此例如，BrEA半水合物可能通過一種或多種其IR吸收帶表征，例如1741cm-1和1752cm-1處的羰基峰，以及其熔點(diǎn)或分解點(diǎn)或熔程和/或θ值(X射線衍射)為17.8、23.8、24.2、26.9-27.2、28.6、30.1和32.2處的1、2、3、4、5、6或更多XRD峰(通常是最強(qiáng)的峰)。
BrEA半水合物適合制備包含一種適用于人用藥物或獸用用途的賦形劑的組合物。這種組合物用來制備制劑和單位劑量。單位劑量典型包括片劑、膠囊、錠劑或無菌溶液，包括用于非腸道給藥的無菌溶液。固體單位劑量形式通常含有約5-1000mgBrEA半水合物，典型在每單位劑量中含有約20-400mg，例如約25mg、約50mg、約100mg、約150mg或約250mg。
本發(fā)明提供一種制備BrEA半水合物的方法，包括接觸水、16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17酮和一種C1-C6醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇)和水。通常存在唯一一種C1-C6醇例如乙醇，它是無水的或可以含有最高約2重量％的水。在某些實(shí)施方案中，該方法使用的溶液含有約5-25重量％的水、約30-45重量％的乙醇和約30-45重量％的BrEA制品。典型的BrEA制品為固體制品，含有至少約80重量％通常至少約90重量％或至少約95重量％的BrEA。該溶液可以包含約18-22重量％的水、約37-43重量％的乙醇和約37-43重量％的BrEA制品。在進(jìn)行沉淀或結(jié)晶方法時(shí)，溶液典型在約-20-約45℃的溫度下，通常在約0-約20℃溫度下。溶液保持在這種溫度范圍下30分鐘-約12小時(shí)且在結(jié)晶過程中選擇性地使用慢速至中速攪拌溶液。
一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案包含一種制備BrEA半水合物的方法，包括從含有至少約15-25重量％的水、約35-45重量％的BrEA制品和至少約35-45重量％的一種或多種與水混溶的溶劑通常為C1-6醇(甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇)的溶液中沉淀BrEA。BrEA制品可以選擇性地含有一種或多種BrEA合成中的副產(chǎn)物。典型的BrEA半水合物制品或批料包含少于約5重量％，通常少于約3重量％或約2重量％的副產(chǎn)物，如BrEA合成中的副產(chǎn)物。該方法的特征包括含有有機(jī)溶液的接觸水，有機(jī)溶液含有BrEA和一種有機(jī)溶劑如C1-C6醇(例如乙醇)或丙酮。往該溶液中加入水會(huì)導(dǎo)致BrEA半水合物的沉淀。含有BrEA半水合物晶體或沉淀的溶液是本發(fā)明的實(shí)施方案，用于制備以后通常在環(huán)境溫度下干燥和儲(chǔ)存的固體BrEA。
從含水溶液中沉淀BrEA半水合物可以通過已知的方法完成，如降低溶液溫度、使用飽和的或接近飽和的BrEA溶液、真空濃縮飽和的或接近飽和的BrEA溶液(通常在相對(duì)低的溫度下進(jìn)行，通常為約15-25℃)、往飽和的或接近飽和的BrEA溶液中加入BrEA半水合物晶種(例如約10-100mg/1-10L溶液)、加熱飽和的或接近飽和的BrEA溶液(約25-35℃幾分鐘，然后降低溫度或有效冷卻溶液)以及選擇性地往溶液中加入BrEA半水合物晶種或往飽和的或接近飽和的BrES乙醇-水溶液中加入液體如加入水或乙醇，這會(huì)導(dǎo)致溶液過飽和。BrEA也可以從其它溶劑或溶劑體系中沉淀，包括丙酮和丙酮-乙醇。這些溶劑通常都可與水混溶。也可以使用BrEA的兩相沉淀以回收固體BrEA半水合物，例如先沉淀并回收固體，然后或者將母液冷卻或引晶或者將母液放置例如在環(huán)境溫度下約一、二或更多天以得到二次獲得結(jié)晶。而且，BrEA半水合物也可以選擇性地重結(jié)晶以進(jìn)一步增加終固體的純度，基本上按照此處所述的方法。已經(jīng)描述了結(jié)晶有機(jī)化合物的方法，例如A.S.Myerson，工業(yè)結(jié)晶手冊(cè)(Handbook of IndustrialCrystallization)，1993，Butterworth-Heinemann，Stoneham，MA，p1-101。
其它相關(guān)的實(shí)施方案包括通過將含有BrEA和一種有機(jī)溶劑的溶液與水接觸的方法獲得的產(chǎn)物。典型的溶液如上所述，例如一種含有約3-5體積％的水和至少約40體積％的一種或多種與水混溶的溶劑的溶液，溶劑通常為極性溶劑如C1-6醇或酮(例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇，通常為乙醇或丙酮)。這種過程可以通過一種或多種上文所述的技術(shù)完成，例如冷卻飽和的或接近飽和的BrEA的水-乙醇溶液或選擇性用BrEA半水合物引晶冷卻的溶液。一個(gè)與此相關(guān)的實(shí)施方案含有溶液或固體，溶液或固體中含有濕的BrEA半水合物晶體或濕的過濾的或離心的BrEA半水合物濾餅，濾餅可在結(jié)晶后得到。這些實(shí)施方案的例子包括往BrEA-醇溶液中加入水，例如往約6體積的BrEA-乙醇溶液中緩慢加入約0.5-1.5體積或約0.8-1.2體積的水以得到BrEA半水合物。這些實(shí)施方案的其它例子包括往BrEA-酮溶劑溶液中加入水，例如往約10體積BrEA-丙酮中緩慢加入約0.5-1.5體積或約0.8-1.2體積的水以得到BrEA半水合物。
另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案是把BrEA半水合物研磨到平均粒子尺寸約0.01-200μm，或約0.1-10μm或約0.5-5μm。因此磨碎的BrEA半水合物的平均粒子尺寸或直徑可能相對(duì)較小例如約0.03-2.0μm或約0.1-1.0μm，或有時(shí)更大例如約0.5-5.0μm或約1-5.0μm。磨碎的BrEA半水合物適合于制備固體制劑和用于人類的或獸用的非腸道制劑。磨碎的物質(zhì)促進(jìn)BrEA半水合物在溶劑或賦形劑中的溶解并促進(jìn)其與固體或固體賦形劑的混合。
盡管也可能使用純BrEA半水合物給患者施用，但是其通常是以固體制劑形式存在或用于制備液體制劑。制劑通常用于制備單位劑量，例如片劑、膠囊或錠劑，用于口服、口腔或舌下給藥，它們通常含有約10-1000mg或典型含有約25-400mg BrEA半水合物。作為選擇，實(shí)施方案包括一種用于非腸道(例如皮下、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉、腹膜內(nèi))給藥的通過以下方法產(chǎn)生的產(chǎn)品將BrEA半水合物與一種液體賦形劑接觸、并選擇性地對(duì)溶液消毒、并選擇性地把溶液分配到小瓶或安瓿中，其可以是單劑量使用或多劑量使用、并選擇性地把制劑在低溫(約0-12℃或約2-10℃)下儲(chǔ)存，其中液體賦形劑是例如PEG100、PEG200、PEG300、PEG400、丙二醇、苯甲酸芐酯、芐醇或乙醇的一種、兩種、三種或多種。這種用于非腸道給藥的產(chǎn)品含有典型為約10-170mg/mL，通常為約20-110mg/mL或約30-100mg/mL的BrEA、選擇性一種或多種鹽、緩沖液或抑菌劑或防腐劑(例如NaCl、BHA、BHT或EDTA)。
其它實(shí)施方案包括一種通過以下方法產(chǎn)生的產(chǎn)品將BrEA半水合物與一種適用于人藥用途或獸用的賦形劑接觸，其中BrEA半水合物基本不含其它形式的BrEA。該產(chǎn)品對(duì)制備含有半水合物的制劑或單位劑量形式是有用的。
從BrEA半水合物制得的制劑或含有BrEA半水合物的制劑通常儲(chǔ)存的條件為限制與制劑接觸的水量，例如在盛有制劑的密封容器中的硅膠。已經(jīng)描述了容器的水滲透特性，例如容器-滲透(Containers-Permeation)，Chapter，USP23，1995，U.S.Pharmacopeial Convention，Inc.，Rockville，MD，p.1787。
實(shí)施方案包括當(dāng)進(jìn)行一種方法的步驟或操作時(shí)過渡產(chǎn)生的本發(fā)明組合物。例如，當(dāng)一種含有少于約3％水的通式1表示的化合物BrEA與一種賦形劑如一種PEG、一種醇、丙二醇或苯甲酸芐酯接觸時(shí)，該組合物在加入一種組分與另一種組分之前為非均相混合物。當(dāng)組分接觸時(shí)，混合物的均勻性增加并且組分相互之間所占的比例達(dá)到一理想值。因此，含有少于約3％水的本發(fā)明組合物可以含有約0.0001-99％的通式1表示的化合物如BrEA和一種或多種賦形劑。當(dāng)制備本發(fā)明組合物或制劑時(shí)必然產(chǎn)生這些過渡的組合物或制劑，并且它們也包括在受專利保護(hù)的本發(fā)明實(shí)施方案中。
一般來講，存在于本發(fā)明組合物和制劑中的通式1表示的化合物在非水賦形劑中完全溶解。但是，在某些實(shí)施方案例如過渡組合物和某些制劑中，通式1表示的化合物是部分溶解的，而其余部分以固體的形式存在，這些組合物或制劑可能為懸浮液或膠體。
適用于非腸道給人或動(dòng)物給藥通式1化合物的本發(fā)明組合物和制劑通常包含兩種、三種或更多賦形劑。用于說明的實(shí)施方案包括(1)丙二醇、PEG200、PEG300、乙醇和苯甲酸芐酯中的任意兩種、三種或四種，以及(2)丙二醇、PEG100、PEG200、PEG300、PEG400和苯甲酸芐酯中的任意兩種、三種或四種。
本發(fā)明組合物和制劑一般含有約0.01-10％的BrEA通常約1-5％以及約0.01-3％的水，典型為約0.05-3％，通常為約0.1-1％。本發(fā)明制劑通常以適用于每天一次或兩次或每2-3天一次非腸道給藥的單位劑量或多劑量形式提供。單位劑量含有約3-1000mg/單位劑量的BrEA，典型為約5-500mg，通常為約10-200mg。對(duì)于處理逆轉(zhuǎn)錄酶病毒例如人體內(nèi)的HIV，每單位劑量在約1-6mL，通常約2-4mL體積中通常含有約10-250mgBrEA，通常約100-200mg。
本發(fā)明實(shí)施方案包括通過組合、混合或其它把BrEA與一種、二種或更多賦形劑接觸的過程制備的產(chǎn)品。這種產(chǎn)品通過把組分進(jìn)行接觸的常規(guī)方法獲得。這種產(chǎn)品也可選擇性地包含有一種稀釋劑、一種崩解劑和一種粘合劑，或本文中描述的或本文中引用的其它賦形劑。
在存在顯著量水的情況下，人們發(fā)現(xiàn)BrEA在溴原子處發(fā)生差向異構(gòu)，這導(dǎo)致產(chǎn)生16α-和16β-BrEA異構(gòu)體的混合物。本發(fā)明含有BrEA或BrEA半水合物的組合物和制劑通常含有少于約3％的水，典型少于約0.3％，通常少于約0.1％。人們發(fā)現(xiàn)這些組合物和制劑當(dāng)在環(huán)境溫度下(約5-40C)儲(chǔ)存在密閉容器中時(shí)，相對(duì)含有更多水的對(duì)照組合物和制劑具有良好的穩(wěn)定性。這種液體還有一種特征即化合物沉淀的意外減少，看起來是由水引起的。
本發(fā)明實(shí)施方案包括含有少于約3％水、通式1化合物和一種通常認(rèn)為不適合于人用但對(duì)于制備本發(fā)明用于獸用的制劑有用的化合物的組合物。獸用制劑是用于把本發(fā)明組合物給下列動(dòng)物給藥的目的的組合物靈長(zhǎng)類動(dòng)物、貓、狗、馬、母牛、兔和其它患者，且可以含有獸醫(yī)技術(shù)可接受的賦形劑，并與通式1化合物如BrEA有相容性。這些獸用組合物通常不適用于人類，因?yàn)樗鼈儼馁x形劑不適用于人類，例如乙醇之外的醇類如甲醇、丙醇或丁醇。這些賦形劑典型存在的量相對(duì)較低，例如約1-30％，通常約1-5％。
本發(fā)明實(shí)施方案包括組合物和制劑，例如單位劑量形式和無菌溶.液，其含有(1)約1-100mg/mL通式1化合物、約57.5％丙二醇、約25％PEG300、約12.5％乙醇及約5％苯甲酸芐酯；(2)約1-60mg/mL通式1化合物、約70％丙二醇、約25％PEG300及約5％苯甲酸芐酯；(3)約1-60mg/mL通式1化合物、約25％PEG300、約35％丙二醇、約35％甘露醇及約5％苯甲酸芐酯；(4)約1-60mg/mL通式1化合物、約57.5％丙二醇、含有約25％PEG300和PEG200的混合物(例如PEG300∶PEG200約為1∶10-約10∶1)、約12.5％乙醇及約5％苯甲酸芐酯；(5)約1-60mg/mL通式1化合物、約75％丙二醇、含有約25％PEG300和PEG200的混合物(例如PEG300∶PEG200約為1∶10-約10∶1)及約5％苯甲酸芐酯；(6)約1-60mg/mL通式1化合物、約25％PEG300和PEG200(例如PEG300∶PEG200約為1∶10-約10∶1)、約35％丙二醇、約35％甘露醇及約5％苯甲酸芐酯；(7)任何一種(1)-(6)的制劑，其中通式1化合物為約40-55mg/mL；(8)任何一種(1)-(6)的制劑，其中通式1化合物為約30-100mg/mL；(9)任何一種(1)-(8)的制劑，其中存在1、2、3或4種通式1化合物；(10)任何一種(1)-(8)的制劑，其中存在1種或2種通式1化合物；(11)任何一種(1)-(8)的制劑，其中存在1種通式1化合物；(12)任何一種(1)-(11)的制劑，其中通式1化合物在R1-R6、R10、R15、R17或R18中的任意1、2或3個(gè)可獨(dú)立地選擇下列物質(zhì)酯、硫酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、氨基酸或1種或2種可獨(dú)立地選擇肽的通式1化合物；(13)任何一種(1)-(12)的制劑，其中通式1化合物包含或者為BrEA或BrEA半水合物；(14)任何一種(1)-(13)的制劑，其中通式1化合物包含或者為BrEA的酯、硫酸酯或磷酸酯。
其它實(shí)施方案包括通過把本發(fā)明組合物或制劑例如單位劑量形式、上述(1)-(14)中任何一個(gè)實(shí)施方案、或用于制備制劑的組合物在約10-40℃下儲(chǔ)存至少3天，例如在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存約1-24個(gè)月。在此期間內(nèi)本發(fā)明制劑通常儲(chǔ)存在密封的或感應(yīng)密封的容器中。本發(fā)明組合物通常儲(chǔ)存在密閉的容器中。本說明書和權(quán)利要求揭示了用于這些實(shí)施方案的示例性的合適的制劑和單位劑量形式。
其它實(shí)施方案包括化合物、組合物和制劑，其中R1-R6、R10、R15、R17和R18的一種或多種包含氨基酸或肽，例如R1、R2或R4包含氨基酸或肽，R3為鹵素且R5和R6均為-CH3。在R1-R6的一個(gè)或多個(gè)位置上的肽可以包含一種細(xì)胞表面結(jié)合肽如全蛋白或纖連蛋白或逆連蛋白(retronectin)如KQAGDV的序列。
在通式1化合物中，每個(gè)R4都可獨(dú)立地選擇。在某些實(shí)施方案中，一個(gè)R4為鹵素，另一個(gè)為另一個(gè)部分。在其它實(shí)施方案中，兩個(gè)R4都是可獨(dú)立選擇的部分而不是鹵素，例如一個(gè)C1-C20的有機(jī)部分。
R1-R6、R10、R15、R17和R18包括部分例如酯、硫酯、碳酸酯、氨基酸、肽和/或氨基甲酸酯，通常在生理狀態(tài)下它們是化學(xué)和/或酶促可以水解的。這樣的部分是獨(dú)立選擇的。通常這些部分會(huì)在類固醇核的R1-R6位置上產(chǎn)生-OH、-SH或-NH2。通式1化合物的實(shí)施方案包括下列方案(1)R1、R2和R4中的一個(gè)為可水解的部分(例如酯、硫酯、碳酸酯、氨基酸、肽或氨基甲酸酯)，R1、R2和R4的另外兩個(gè)為-H，R3不為氫，R5和R6均為-CH3；(2)R1、R2和R4的兩個(gè)為可水解的部分(例如獨(dú)立選擇的酯、硫酯、碳酸酯、氨基酸、肽和/或氨基甲酸酯)，R1、R2和R4的另外一個(gè)為-H，R3不為氫，R5和R6均為-CH3；(3)R1、R2和R4為可水解的部分，R3不為氫，R5和R6均為-CH3。在這些實(shí)施方案中，R3基團(tuán)通常為β-構(gòu)型而R1、R2和R4-R6通常為α-構(gòu)型。
在其它實(shí)施方案中，R1-R6、R10、R15、R17和R18的一個(gè)或多個(gè)，通常一個(gè)包含一種氨基酸或肽，而其余基團(tuán)從此處列舉的部分中獨(dú)立地選取。在這些實(shí)施方案中，肽通常為二聚體(二肽)或三聚體(三肽)。例如R1、R2和R4的一個(gè)包含一種氨基酸，R1、R2和R4的其余基團(tuán)獨(dú)立地包括-OH、＝O、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯，而R3為鹵素、羥基或酯，R5和R6獨(dú)立地為-H、-(CH2)n-CH3、-(CH2)n-CH2OH或-(CH2)n-CH2F、-(CH2)2-4-O-(CH2)2-4-CH3，其中n為0、1、2、3、4、5、6、7或8，經(jīng)常為0、1或2，通常為0。通常這些酯、碳酸酯或氨基甲酸酯在生理狀態(tài)下是可以水解的。
可以水解的部分通常含有?；Ⅴ?、醚、硫醚、酰胺、氨基酸、肽、碳酸酯和/或氨基甲酸酯。一般來講，可水解部分的結(jié)構(gòu)并不重要并可以變化。在某些實(shí)施方案中，這些部分含有總共約4-約10個(gè)碳原子。在其它實(shí)施方案中的這些可水解的部分含有有機(jī)部分，如上所述的用于酯的有機(jī)部分，它們含有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)碳原子以及1、2、3、4、5或6個(gè)雜原子例如氧、氮或硫。這些可水解的部分可以不包括在血漿、血液、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞質(zhì)或腸內(nèi)帶電的基團(tuán)，或者包括在一種或多種條件下帶有1、2、3或更多正電、負(fù)電或正電和負(fù)電的基團(tuán)。根據(jù)基團(tuán)的不同及其所處的條件，電荷可以為分?jǐn)?shù)。這些可水解的部分在其氫原子和/或碳原子處可以包含1、2、3、4或更多取代基，例如-OH、受保護(hù)的羥基、-SH、受保護(hù)的硫醇、羧基、受保護(hù)的羧基、胺、受保護(hù)的胺、-O-、-S-、-CO-、-CS-、烷氧基、烷硫基、鏈烯氧基、芳基、-OP(O)(O)-O-、-OS(O)(O)-O-和/或雜環(huán)。這些取代基是獨(dú)立選擇的。
通式1所表示的含有一個(gè)可水解部分的化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的-O-CHR24C(O)OR25、-S-CHR24C(O)OR25、-NH-CHR24C(O)OR25、-O-CHR24C(S)OR25、-S-CHR24C(S)OR25、-NH-CHR24C(S)OR25、-O-CHR24OC(O)R25、-S-CHR24OC(O)R25、-NH-CHR24OC(O)R25、-O-CHR24C(O)N(R25)2、-S-CHR24C(O)N(R25)2、-NH-CHR24C(O)N(R25)2、-O-CHR24OR25、-S-CHR24OR25、-NH-CHR24OR25、-O-CHR24C(R25)2CH2OX、-S-CHR24C(R25)2CH2OX、-NH-CHR24C(R25)2CH2OX、-O-CHR24C(R25)2OX、-S-CHR24C(R25)2OX或-NH-CHR24C(R25)2OX，一個(gè)或多個(gè)R1-R6、R10、R15、R17和R18包含的基團(tuán)。這些可水解的部分當(dāng)中，R24獨(dú)立地是-H、-CH2-C6H5、-CH2-CH2-C6H5、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、芳基或雜環(huán)，其中每個(gè)烷基、鏈烯基、芳基和雜環(huán)部分又獨(dú)立地選擇性被1、2、或3個(gè)，通常為1個(gè)-O-、-S-、-NH-、鹵素、芳基、-OX-、-SX-、-NHX-、酮(＝O)或-CN部分取代，或C1-8烷基選擇性地被3、4、5、或6個(gè)鹵素取代，且X為-H或保護(hù)基。R24的例子有-H、-CH3、-C2H5、-CH2-C1-5選擇性取代的烷基、-CH2-CH2-C1-4選擇性取代的烷基和-CH2-CH2-O-C1-4選擇性取代的烷基。R25獨(dú)立地為-H、-CH2-C6H5、-CH2-CH2-C6H5、C1-12烷基、C2-12鏈烯基、芳基、雜環(huán)、-CH2-雜環(huán)或-CH2-芳基，其中每個(gè)烷基、鏈烯基、芳基、雜環(huán)、-CH2-雜環(huán)或-CH2-芳基部分獨(dú)立地選擇性被1或2個(gè)，通常為1個(gè)-O-、-S-、-NH-、鹵素、芳基、-OX-、-SX-、-NHX-、酮(＝O)、-C(O)OX或-CN部分取代，或C1-12烷基、C2-12鏈烯基或芳基選擇性地被3、4、5或6個(gè)鹵素取代，其中X為-H或保護(hù)基，或芳基、雜環(huán)、-CH2-雜環(huán)或-CH2-芳基部分選擇性獨(dú)立地被1、2或3個(gè)C1-4烷基部分取代，或芳基部分或雜環(huán)，通常在環(huán)碳處帶有1、2或3個(gè)C1-4烷氧基部分。R25的例子有-H、-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9、-C6H13、-C6H5、-C6H4OH、-C6H4OCH3、-C6H4F、-CH2-C1-5選擇性取代的烷基、-CH2-CH2-C1-4選擇性取代的烷基和-CH2-CH2-O-C1-4選擇性取代的烷基。
在至少保留一個(gè)化合物的情況下，通式1化合物的實(shí)施方案包括或不包括在通式1范圍內(nèi)的化合物的所有子集。例如，通常包括在例如本發(fā)明非水溶液制劑和本發(fā)明的間歇式劑量方案和免疫調(diào)節(jié)方法中的通式1化合物的一個(gè)子集是通式1化合物，其中R2為羥基或一個(gè)可以水解為羥基的任意構(gòu)型的基團(tuán)，R5和R6是α-構(gòu)型的甲基。任意從通式1化合物中排除的子集化合物包括已經(jīng)在一項(xiàng)或多項(xiàng)在先技術(shù)參考文獻(xiàn)或出版物中公開的一種或多種化合物，例如一個(gè)或多個(gè)在本文中引用的參考文獻(xiàn)中的一個(gè)或多個(gè)化合物，特別是那些由于新穎性、明顯性和/或創(chuàng)造性的原因可能使得所有權(quán)利要求或?qū)嵤┓桨覆荒塬@得專利權(quán)的化合物。
通式1化合物的種和屬的說明性實(shí)施方案按以下所述內(nèi)容命名。
第1組說明性實(shí)施方案包括按照在下表A和B中給定的化合物結(jié)構(gòu)標(biāo)記命名。表B中命名的每個(gè)化合物具有下述通式B， 其中R5和R6均為-CH3，在1-2-、4-5或5-6-位置沒有雙鍵，一個(gè)R4為鹵素，R7、R8和R9均為-CH2-，R1、R2、R3和R4為表A中指定的取代基。這些按照表A和B命名的化合物稱為“第1組”化合物。
表B中命名的化合物是通過R1、R2、R3和R4指定的數(shù)字，按照如下化合物命名慣例進(jìn)行命名的。R1.R2.R3.R4依據(jù)表A所述的編號(hào)的化學(xué)取代基。表A中的每個(gè)數(shù)字為R1、R2、R3和R4指定了一個(gè)不同的結(jié)構(gòu)。當(dāng)R1、R2、R3或R4為二價(jià)部分時(shí)如＝O，在對(duì)應(yīng)位置上不存在氫。因此，命名為1.2.1.1的第1組化合物是通式B的結(jié)構(gòu)，其帶有鍵合到3-和7-位(分別為可變基團(tuán)R1和R2)碳上的β-羥基、鍵合到碳16(可變基團(tuán)R3)的α-溴和碳17(可變基團(tuán)R4)處的雙鍵氧(＝O)，即1.2.1.1具在以下結(jié)構(gòu)。
表AR1R21-OH 1-H2＝O 2-OH3-SH 3＝O4＝S 4-CH35-O-CH35-OCH36-O-S(O)(O)-O-Na+6-OC2H57-O-S(O)(O)-OC2H57-OCH2CH2CH38-CH38-OCH2CH2CH2CH39-H 9-Cl10-OC(O)C(CH3)310-BrR3R41-Br 1＝O2-Cl 2-OH3-I 3-H4-F 4-F5-H 5-Cl6-OH 6-Br7＝O 7-I8-O-C(O)-CH38-O-C(O)-CH39-O-C(O)-CH2CH39-O-C(O)-CH2CH310-O-C(O)-CH2CH2CH310-O-C(O)-CH2CH2CH3表B1.1.1.1，1.1.1.2，1.1.1.3，1.1.1.4，1.1.1.5，1 1.1.6，1.1.1.7，1.1.1.8，1.1.1.9，1.1.1.10，1.1.2.1，1.1.2.2，1.1.2.3，1.1.2.4，1.1.2.5，1.1.2.6，1.1.2.7，1.1.2.8，1.1.2.9，1.1.2.10，1.1.3.1，1.1.3.2，1.1.3.3，1.1.3.4，1.1.3.5，1.1.3.6，1.1.3.7，1.1.3.8，1.1.3.9，1.1.3.10，1.1.4.1，1.1.4.2，1.1.4.3，1.1.4.4，1.1.4.5，1.1.4.6，1.1.4.7，1.1.4.8，1.1.4.9，1.1.4.10，1.1.5.1，1.1.5.2，1.1.5.3，1.1.5.4，1.1.5.5，1.1.5.6，1.1.5.7，1.1.5.8，1.1.5.9，1.1.5.10，1.1.6.1，1.1.6.2，1.1.6.3，1.1.6.4，1.1.6.5，1.1.6.6，1.1.6.7，1.1.6.8，1.1.6.9，1.1.6.10，1.1.7.1，1.1.7.2，1.1.7.3，1.1.7.4，1.1.7.5，1.1.7.6，1.1.7.7，1.1.7.8，1.1.7 9，1.1.7.10，1.1.8.1，1.1.8.2，1.1.8.3，1.1.8.4，1.1.8 5，1.1.8.6，1.1.8.7，1.1.8.8，1.1.8.9，1.1.8.10，1.1.9.1，1.1.9.2，1.1.9.3，1.1.9.4，1.1.9.5，1.1.9.6，1.1.9.7，1.1.9.8，1.1.9.9，1.1.9.10，1.1.0.1，1.1.10.2，1.1.10.3，1.1.10.4，1.1.10.5，1.1.10.6，1.1.10.7，1.1.10.8，1.1.10.9，1.1.10.10，1.2.1.1，1.2.1.2，1.2.1.3，1.2.1.4，1.2.1.5，1.2.1.6，1.2.1.7，1.2.1.8，1.2.1.9，1.2.1.10，1.2.2.1，1.2.2.2，1.2.2.3，1.2.2.4，1.2.2.5，1.2.2.6，1.2.2.7，1.2.2.8，1.2.2.9，1.2.2.10，1.2.3.1，1.2.3.2，1.2.3.3，1.2.3.4，1.2.3.5，1.2.3.6，1.2.3.7，1.2.3.8，1.2.3.9，1.2.3.10，1.2.4.1，1.2.4.2，1.2.4.3，1.2.4.4，1.2.4.5，1.2.4.6，1.2.4.7，1.2.4.8，1.2 4.9，1.2.4 10，1.2.5.1，1.2.5.2，1.2.5.3，1.2.5.4，1.2.5.5，1.2.5.6，1.2.5.7，1.2.5.8，1.2.5.9，1.2.5.10，1.2.6.1，1.2.6 2，1.2.6.3，1.2.6.4，1.2.6.5，1.2.6.6，1.2.6.7，1.2.6.8，1.2.6.9，1.2.6.10，1.2.7.1，1.2.7.2，1.2.7.3，1.2.7.4，1.2.7.5，1.2.7.6，1.2.7.7，1.2.7.8，1.2.7.9，1.2.7.10，1.2.8.1，1.2.8.2，1.2.8.3，1.2.8.4，1.2.8.5，1.2.8.6，1.2.8.7，1.2.8.8，1.2.8.9，1.2.8.10，1.2.9.1，1.2.9.2，1.2.9.3，1.2.9.4，1.2.9.5，1.2.9.6，1.2.9.7，1.2.9 8，1.2.9.9，1.2.9.10，1.2.10.1，1.2.10.2，1.2.10.3，1.2.10.4，1.2.10.5，1.2.10.6，1.2.10.7，1.2.10.8，1.2.10.9，1.2.10.10，1.3.1.1，1.3.1.2，1.3.1.3，1.3.1.4，1.3.1.5，1.3.1.6，1.3.1.7，1.3.1.8，1.3.1.9，1.3.1.10，1.3.2.1，1.3.2.2，1.3.2.3，1.3.2.4，1.3.2.5，1.3.2.6，1.3.2.7，1.3.2.8，1.3.2.9，1.3.2.10，1.3.3.1，1.3.3.2，1.3.3.3，1.3.3.4，1.3.3.5，1.3.3.6，1.3.3.7，1.3.3.8，1.3.3.9，1.3.3.10，1.3.4.1，1.3.4.2，1.3.4.3，1.3.4.4，1.3.4.5，1.3.4.6，1.3.4.7，1.3.4.8，1.3.4.9，1.3.4.10，1.3.5.1，1.3.5.2，1.3.5.3，1.3.5.4，1.3.5.5，1.3.5.6，1.3.5.7，1.3.5.8，1.3.5.9，1.3.5.10，1.3.6.1，1.3.6.2，1.3.6.3，1.3.6.4，1.3.6.5，1.3.6.6，1.3.6.7，1.3.6.8，1.3.6.9，1.3.6.10，1.3.7.1，1.3.7.2，1.3.7.3，1.3.7.4，1.3.7.5，1.3.7.6，1.3.7.7，1.3.7.8，1.3.7.9，1.3.7.10，1.3.8.1，1.3.8.2，1.3.8.3，1.3.8.4，1.3.8.5，1.3.8 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，10.6.2.5，10.6.2.6，10.6.2.7，10.6.2.8，10.6.2.9，10.6.2.10，10.6.3.1，10.6.3.2，10.6.3.3，10.6.3.4，10.6.3.5，10.6.3.6，10.6.3.7，10.6.3.8，10.6.3.9，10.6.3.10，10.6.4.1，10.6.4.2，10.6.4.3，10.6.4.4，10.6.4.5，10.6.4.6，10.6.4.7，10.6.4.8，10.6.4.9，10.6.4.10，10.6.5.1，10.6.5.2，10.6.5.3，10.6.5.4，10.6.5.5，10.6.5.6，10.6.5.7，10.6.5.8，10.6.5.9，10.6.5.10，10.6.6.1，10.6.6.2，10.6.6.3，10.6.6.4，10.6.6.5，10.6.6.6，10.6.6.7，10.6.6.8，10.6.6.9，10.6.6.10，10.6.7.1，10.6.7.2，10.6.7.3，10.6.7.4，10.6.7.5，10.6.7.6，10.6.7.7，10.6.7.8，10.6.7.9，10.6.7.10，10.6.8.1，10.6.8.2，10.6.8.3，10.6.8.4，10.6.8.5，10.6.8.6，10.6.8.7，10.6.8.8，10.6.8.9，10.6.8.10，10.6.9.1，10.6.9.2，10.6.9.3，10.6.9.4，10.6.9.5，10.6.9.6，10.6.9.7，10.6.9.8，10.6.9.9，10.6.9.10，10.6.10.1，10.6.10.2，10.6.10.3，10.6.10.4，10.6.10.5，10.6.10.6，10.6.10.7，10.6.10.8，10.6.10.9，10.6.10.10，10.7.1.1，10.7.1.2，10.7.1.3，10.7.1.4，10.7.1.5，10.7.1.6，10.7.1.7，10.7.1.8，10.7.1.9，10.7.1.10，10.7.2.1，10.7.2.2，10.7.2.3，10.7.2.4，10.7.2.5，10.7.2.6，10.7.2.7，10.7.2.8，10.7.2.9，10.7.2.10，10.7.3.1，10.7.3.2，10.7.3.3，10.7.3.4，10.7.3.5，10.7.3.6，10.7.3.7，10.7.3.8，10.7.3.9，10.7.3.10，10.7.4.1，10.7.4.2，10.7.4.3，10.7.4.4，10.7.4.5，10.7.4.6，10.7.4.7，10.7.4.8，10.7.4.9，10.7.4.10，10.7.5.1，10.7.5.2，10.7.5.3，10.7.5.4，10.7.5.5，10.7.5.6，10.7.5.7，10.7.5.8，10.7.5.9，10.7.5.10，10.7.6.1，10.7.6.2，10.7.6.3，10.7.6.4，10.7.6.5，10.7.6.6，10.7.6.710.7.6.8，10.7.6.9，10.7.6.10，10.7.7.1，10.7.7.2，10.7.7.3，10.7.7.4，10.7.7.5，10.7.7.6，10.7.7.7，10.7.7.8，10.7.7.9，10.7.7.10，10.7.8.1，10.7.8.2，10.7.8.3，10.7.8.4，10.7.8.5，10.7.8.6，10.7.8.7，10.7.8.8，10.7.8.9，10.7.8.10，10.7.9.1，10.7.9.2，10.7.9.3，10.7.9.4，10.7.9.5，10.7.9.6，10.7.9.7，10.7.9.8，10.7.9.9，10.7.9.10，10.7.10.1，10.7.10.2，10.7.10.3，10.7.10.4，10.7.10.5，10.7.10.6，10.7.10.7，10.7.10.8，10.7.10.9，10.7.10.10，10.8.1.1，10.8.1.2，10.8.1.3，10.8.1.4，10.8.1.5，10.8.1.6，10.8.1.7，10.8.1.8，10.8.1.9，10.8.1.10，10.8.2.1，10.8.2.2，10.8.2.3，10.8.2.4，10.8.2.5，10.8.2.6，10.8.2.7，10.8.2.8，10.8.2.9，10.8.2.10，10.8.3.1，10.8.3.2，10.8.3.3，10.8.3.4，10.8.3.5，10.8.3.6，10.8.3.7，10.8.3.8，10.8.3.9，10.8.3.10，10.8.4.1，10.8.4.2，10.8.4.3，10.8.4.4，10.8.4.5，10.8.4.6，10.8.4.7，10.8.4.8，10.8.4.9，10.8.4.10，10.8.5.1，10.8.5.2，10.8.5.3，10.8.5.4，10.8.5.5，10.8.5.6，10.8.5.7，10.8.5.8，10.8.5.9，10.8.5.10，10.8.6.1，10.8.6.2，10.8.6.3，10.8.6.4，10.8.6.5，10.8.6.6，10.8.6.7，10.8.6.8，10.8.6.9，10.8.6.10，10.8.7.1，10.8.7.2，10.8.7.3，10.8.7.4，10.8.7.5，10.8.7.6，10.8.7.7，10.8.7.8，10.8.7.9，10.8.7.10，10.8.8.1，10.8.8.2，10.8.8.3，10.8.8.4，10.8.8.5，10.8.8.6，10.8.8.7，10.8.8.8，10.8.8.9，10.8.8.10，10.8.9.1，10.8.9.2，10.8.9.3，10.8.9.4，10.8.9.5，10.8.9.6，10.8.9.7，10.8.9.8，10.8.9.9，10.8.9.10，10.8.10.1，10.8.10.2，10.8.10.3，10.8.10.4，10.8.10.5，10.8.10.6，10.8.10.7，10.8.10.8，10.8.10.9，10.8.10.10，10.9.1.1，10.9.1.2，10.9.1.3，10.9.1.4，10.9.1.5，10.9.1.6，10.9.1.7，10.9.1.8，10.9.1.9，10.9.1.10，10.9.2.1，10.9.2.2，10.9.2.3，10.9.2.4，10.9.2.5，10.9.2.6，10.9.2.7，10.9.2.8，10.9.2.9，10.9.2.10，10.9.3.1，10.9.3.2，10.9.3.3，10.9.3.4，10.9.3.5，10.9.3.6，10.9.3.7，10.9.3.8，10.9.3.9，10.9.3.10，10.9.4.1，10.9.4.2，10.9.4.3，10.9.4.4，10.9.4.5，10.9.4.6，10.9.4.7，10.9.4.8，10.9.4.9，10.9.4.10，10.9.5.1，10.9.5.2，10.9.5.3，10.9.5.4，10.9.5.5，10.9.5.6，10.9.5.7，10.9.5.8，10.9.5.9，10.9.5.10，10.9.6.1，10.9.6.2，10.9.6.3，10.9.6.4，10.9.6.5，10.9.6.6，10.9.6.7，10.9.6.8，10.9.6.9，10.9.6.10，10.9.7.1，10.9.7.2，10.9.7.3，10.9.7.4，10.9.7.5，10.9.7.6，10.9.7.7，10.9.7.8，10.9.7.9，10.9.7.10，10.9.8.1，10.9.8.2，10.9.8.3，10.9.8.4，10.9.8.5，10.9.8.6，10.9.8.7，10.9.8.8，10.9.8.9，10.9.8.10，10.9.9.1，10.9.9.2，10.9.9.3，10.9.9.4，10.9.9.5，10.9.9.6，10.9.9.7，10.9.9.8，10.9.9.9，10.9.9.10，10.9.10.1，10.9.10.2，10.9.10.3，10.9.10.4，10.9.10.5，10.9.10.6，10.9.10.7，10.9.10.8，10.9.10.9，10.9.10.10，10.10.1.1，10.10.1.2，10.10.1.3，10.10.1.4，10.10.1.5，10.10.1.6，10.10.1.7，10.10.1.8，10.10.1.9，10.10.1.10，10.10.2.1，10.10.2.2，10.10.2.3，10.10.2.4，10.10.2.5，10.10.2.6，10.10.2.7，10.10.2.8，10.10.2.9，10.10.2.10，10.10.3.1，10.10.3.2，10.10.3.3，10.10.3.4，10.10.3.5，10.10.3.6，10.10.3.7，10.10.3.8，10.10.3.9，10.10.3.10，10.10.4.1，10.10.4.2，10.10.4.3，10.10.4.4，10.10.4.5，10.10.4.6，10.10.4.7，10.10.4.8，10.10.4.9，10.10.4.10，10.10.5.1，10.10.5.2，10.10.5.3，10.10.5.4，10.10.5.5，10.10.5.6，10.10.5.7，10.10.5.8，10.10.5.9，10.10.5.10，10.10.6.1，10.10.6.2，10.10.6.3，10.10.6.4，10.10.6.5，10.10.6.6，10.10.6.7，10.10.6.8，10.10.6.9，10.10.6.10，10.10.7.1，10.10.7.2，10.10.7.3，10.10.7.4，10.10.7.5，10.10.7.6，10.10.7.7，10.10.7.8，10.10.7.9，10.10.7.10，10.10.8.1，10.10.8.2，10.10.8.3，10.10.8.4，10.10.8.5，10.10.8.6，10.10.8.7，10.10.8.8，10.10.8.9，10.10.8.10，10.10.9.1，10.10.9.2，10.10.9.3，10.10.9.4，10.10.9.5，10.10.9.6，10.10.9.7，10.10.9.8，10.10.9.9，10.10.9.10，10.10.10.1，10.10.10.2，10.10.10.3，10.10.10.4，10.10.10.5，10.10.10.6，10.10.10.7，10.10.10.8，10.10.10.9，10.10.10.10其它說明性的通式B化合物組包括以下描述的化合物。如果沒有另外指定，以下化合物組的所有氫原子和R基團(tuán)與通式B的第1組化合物的定義相同。
第2組該組包括具有表A定義的R1、R2、R3和R4取代基的表B中命名的化合物，其中R1、R2、R3和R4取代基鍵合到與第1組化合物所述除在5-6位置存在一個(gè)雙鍵外相同的類固醇核上。因此，第2組化合物1.3.1.1具有結(jié)構(gòu) 第3組該組包括具有表A定義的R1、R2、R3和R4取代基的表B中命名的化合物，其中R1、R2、R3和R4取代基鍵合到與第1組化合物所述除在1-2和5-6位置存在雙鍵外相同的類固醇核上。因此，第3組化合物2.2.5.1具有結(jié)構(gòu) 第4組該組包括具有表A定義的R1、R2、R3和R4取代基的表B中命名的化合物，其中R1、R2、R3和R4取代基鍵合到與第1組化合物所述除在1-2位置存在一個(gè)雙鍵外相同的類固醇核上。因此，第4組化合物5.2.7.8具有結(jié)構(gòu) 第5組該組包括具有表A定義的R1、R2、R3和R4取代基的表B中命名的化合物，其中R1、R2、R3和R4取代基鍵合到與第1組化合物所述除在4-5位置存在一個(gè)雙鍵外相同的類固醇核上。因此，命名為3.5.2.9的第5組化合物具有結(jié)構(gòu) 第6組該組包括具有表A定義的R1、R2、R3和R4取代基的表B中命名的化合物，其中R1、R2、R3和R4取代基鍵合到與第1組化合物所述除在1-2和4-5位置存在雙鍵外相同的類固醇核上。因此，命名為10.2.7.8的第6組化合物具有結(jié)構(gòu) 第7-1至7-6組這些組包括上述的6個(gè)化合物，不同之外在于R5為氫而不是甲基。因此，第7-1組具有與上述第1組相同的類固醇，即不存在雙鍵，但R5為-H。第7-2組包括與上述第2組相同的類固醇核，即在5-6位置存在一個(gè)雙鍵，但R5為-H。第7-3至7-6組化合物具有相同的類固醇核。因此，命名為1.2.1.9的第7-1至7-6組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第7-1組化合物1.2.1.9， 第7-2組化合物1.2.1.9， 第7-3組化合物1.2.1.9， 第7-4組化合物1.2.1.9， 第7-5組化合物1.2.1.9和 第7-6組化合物1.2.1.9。
第8-1至8-6組這些組中包括在第1-6組中命名的每個(gè)化合物，不同之處在于通式B的R5為-CH2OH而不是甲基。第8-1至8-6組化合物具有與第1-6組化合物按相同方式命名的結(jié)構(gòu)，不同之處在于R5為-CH2OH而不是甲基。這些組與第7-1至7-6組化合物的命名方式相同。因此，命名為1.2.1.9的第8-1和第8-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第8-1組化合物1.2.1.9和 第8-2組化合物1.2.1.9。
第9-1至9-6組這些組包括在第1-6組中命名的每個(gè)化合物，不同之處在于通式B的R6為氫而不是甲基。第9-1至9-6組化合物具有與第7-1至7-6組化合物按相同方式命名的結(jié)構(gòu)，不同之處在于R6為氫而不是甲基。因此，命名為1.2.1.9的第9-1組和第9-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第9-1組化合物1.2.1.9和 第9-2組化合物1.2.1.9。
第10-1至10-6組這些組包括在第1-6組中命名的每個(gè)化合物，不同之處在于通式1的R6為-CH20H而不是甲基。第10-1至10-6組化合物具有與第7-1至7-6組化合物按相同方式命名的結(jié)構(gòu)，不同之處在于R6為-CH2OH而不是甲基。因此，命名為1.2.1.9的第10-1組和第10-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第10-1組化合物1.2.1.9和 第10-2組化合物1.2.1.9。
第11-1至11-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下取代基代替1-O-C(O)-CH2CH2CH2CH3(-O-C(O)-CH2CH2CH2CH3代替-OH，-OH是表A中R1取代基1)
2-O-C(O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH33-O-C(O)-CH2CH2OCH2CH34-O-C(O)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH35-O-C(O)-CH2CH2CH2CH2OCH2CH36-O-C(O)-CH2CH2OCH2CH2CH2CH37-O-C6H4Cl8-O-C6H3F29-O-C6H4-O(CH2)2-O-CH2CH310-O-C6H4-C(O)O(CH2)0-9CH3第11-1至11-6組化合物具有與第7-1至7-6組化合物按相同方式命名的結(jié)構(gòu)，不同之處在于表A中的取代基1-10由上述列舉的R1取代基1-10代替。因此命名為1.2.1.9的第11-1和11-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第11-1組化合物1.2.1.9和 第11-2組化合物1.2.1.9。命名為1.2.1.9的第11-7-1和11-7-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第11-7-1組化合物1.2.1.9和 第11-7-2組化合物1.2.1.9。命名為1.2.1.9的第11-8-1和11-8-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第11-8-2組化合物1.2.1.9。
第12-1至12-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-P(O)(O)-CH2CH(CH3)CH3(-O-P(O)(O)-OCH2CH(CH3)CH3代替-OH，-OH為表A中R1取代基1)
2-O-P(O)(O)-OCH2CH2CH2CH2CH33-O-P(O)(O)-OCH2CH2CH2CH2CH2CH34-O-P(O)(O)-OCH2CH2CH(CH2CH2)CH35-O-CH2CH2CH2CH2CH2CH36-O-C2H57-O-CH2CH2CH38-O-CH2CH2CH2CH39-O-CH(CH3)CHCH310-O-C(CH3)3第13-1至13-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-(CH2)4CH3(-O-(CH2)4CH3代替-OH，-OH為表A中的R1取代基1)2-O-C(O)-NH23-O-C(O)-NHCH34-O-C(O)-NHC2H55-O-C(O)-NHCH2CH2CH36-O-C(O)-NHCH2CH2OCH2CH37-O-C(O)-CH38-O-C(O)-C2H59-O-C(O)-CH2CH2CH310-O-C(O)-CH2CH2CH2CH3第14-1至14-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-CH2C6H52-O-CH2C6H53-O-CH2C6H4OCH34-O-CH2C6H4OCH35-O-CH2C6H4F6-O-CH2C6H4F7-O-CH2C6H3(OCH3)28-O-CH2C6H3(OCH3)29-O-CH2C6H4OCH2CH310-O-CH2C6H4OCH2CH3第15-1至15-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(O)-CH2CH2NH2(-O-C(O)-CH2CH2NH2代替-OH，-OH為表A中R1取代基1)
2-O-C(O)-CH2CH2CH2NH23-O-C(O)-CH2OH4-O-C(O)-CH2CH2OH5-O-C(O)-CH2CH2CH2OH6-O-C(O)-CH2SH7-O-C(O)-CH2CH2SH8-O-C(O)-CH2CH2CH2SH9-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C2H510-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C2H5第16-1至16-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(O)-A4-NH2，其中A4-NH2為由-NH2取代的4碳烷基(-O-C(O)-A4-NH2代替-OH，-OH為表A中R1取代基1)2-O-C(O)-A6-NH2，其中A6-NH2為由-NH2取代的6碳烷基3-O-C(O)-A8-NH2，其中A8-NH2為由-NH2取代的8碳烷基4-O-C(O)-A4-OH，其中A4-OH為由-OH或-O-取代的4碳烷基5-O-C(O)-A6-OH，其中A6-OH為由-OH或-O-取代的6碳烷基6-O-C(O)-A8-OH，其中A8-OH為由-OH或-O-取代的8碳烷基7-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C3H78-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C3H79-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C4H910-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C4H9第17-1至17-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R1取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C6H132-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C6H133-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C8H174-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-C8H175-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C5H10OH6-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C5H10OH7-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C3H6OH8-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C3H6OH9-O-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C7H14OH10-O-P(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-OH)-CH2-O-C(O)-CH2C7H14OH第18-1至18-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R4取代基1-10由以下基團(tuán)代替
1-O-C(O)CH2NH22-O-C(O)C(CH3)H-NH23-O-C(O)C(CH2C6H5)H-NH24-O-C(O)-O-NHC(CH3)H-CO2H5-O-C(O)-O-NHCH2-CO2H6-O-C(O)-O-NH(CH2C6H5)H-CO2H7-O-C(O)-CF38-O-C(O)-CH2CF39-O-C(O)-(CH2)3CF310-O-C(O)-(CH2)5CH3第19-1至19-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R4取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(O)-O-CH32-O-C(O)-O-CH2CH33-O-C(O)-O-C3H74-O-C(O)-O-C4H95-O-C(O)-O-C6H136-O-C(O)-O-C6H57-O-C(O)-O-C6H4OH8-O-C(O)-O-C6H4OCH39-O-C(O)-O-C6H4OCH2CH310-O-C(O)-O-C6H4F第20-1至20-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R4取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(O)-S-CH32-O-C(O)-S-CH2CH33-O-C(O)-S-C3H74-O-C(O)-S-C4H95-O-C(O)-S-C6H136-O-C(O)-S-C6H57-O-C(O)-S-C6H4OH8-O-C(O)-S-C6H4OCH39-C-C(O)-S-C6H4OCH2CH310-O-C(O)-S-C6H4F第21-1至21-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R4取代基1-10由以下基團(tuán)代替
1-O-C(S)-O-CH32-O-C(S)-O-CH2CH33-SH4＝S5-O-C(S)-O-C6H136-O-C(O)-O-CH2C6H57-O-C(O)-O-CH2C6H4OH8-O-C(O)-O-CH2C6H4OCH39-O-C(O)-O-CH2C6H4OCH2CH310-O-C(O)-O-CH2C6H4F第22-1至22-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R2取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(S)-O-CH32-O-C(S)-O-CH2CH33-O-C(S)-O-C3H74-O-C(S)-O-C4H95-O-C(S)-O-C6H136-O-C(O)-O-CH2C6H57-O-C(O)-O-CH2C6H4OH8-O-C(O)-O-CH2C6H4OCH39-O-C(O)-O-CH2C6H4OCH2CH310-O-C(O)-O-CH2C6H4F第23-1至23-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R3取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(S)-O-CH32-O-C(S)-O-CH2CH33-O-C(S)-O-C3H74-O-C(S)-O-C4H95-O-C(S)-O-C6H136-O-C(O)-O-CH2C6H57-O-C(O)-O-CH2C6H4OH8-O-C(O)-O-CH2C6H4OCH39-C-C(O)-O-CH2C6H4OCH2CH310-O-C(O)-O-CH2C6H4F第24-1至24-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R2取代基1-10由以下基團(tuán)代替
1-O-C(O)-O-C6H52-O-C(O)-O-C6H4OCH33-SH4＝S5-O-CHR24-C(O)-OR256-O-CHR24-C(O)-R257-O-CHR24-C(O)-N(R25)28-O-CHR24-C(O)-NHR259-O-CHR24-C(O)-NH210-O-CHR24-C(O)-OC6H5第25-1至25-10-6組這些組包括在第1至10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中表A中列舉的R3取代基1-10由以下基團(tuán)代替1-O-C(O)-O-C6H52-O-C(O)-O-C6H4OCH33-SH4＝S5-O-CHR24-C(O)-OR256-O-CHR24-C(O)-R257-O-CHR24-C(O)-N(R25)28-O-CHR24-C(O)-NHR259-O-CHR24-C(O)-NH210-O-CHR24-C(O)-OC6H5.
第26-1至26-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中通式B的R7為-O-而不是-CH2-。因此，命名為1.2.5.9的第26-1第26-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第26-1組化合物1.2.5.9和 第26-2組化合物1.2.5.9。命名為1.2.5.9的第26-8-1和26-8-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第26-8-1組化合物1.2.5.9和 第26-8-2組化合物1.2.5.9。命名為1.2.5.9的第26-11-1和第26-11-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第26-11-2組化合物1.2.5.9。
第27-1至27-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中通式B的R8為-O-而不是-CH2-。因此，命名為1.2.5.9的第27-1第27-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第27-1組化合物1.2.5.9和 第27-2組化合物1.2.5.9。命名為1.2.5.9的第27-8-1和27-8-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第27-8-1組化合物1.2.5.9和 第27-8-2組化合物1.2.5.9。命名為1.2.5.9的第27-11-1和第27-11-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第27-11-1組化合物1.2.5.9和 第27-11-2組化合物1.2.5.9。
第28-1至28-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中通式B的R9為-O-而不是-CH2-，并且在1-2位置上沒有雙鍵存在。因此例如不存在第28-3、28-4、28-6、28-8-3、28-8-4或28-8-6組，因?yàn)檫@些化合物中存在1-2雙鍵且2-位的環(huán)氧帶電。因此，命名為1.2.5.9的第28-1、第28-2和第28-5組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第28-1組化合物1.2.5.9， 第28-2組化合物1.2.5.9和 第28-5組化合物1.2.5.9。
命名為1.2.5.9的第28-8-1第28-8-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu)第28-8-1組化合物1.2.5.9和第28-8-2組化合物1.2.5.9。
命名為1.2.5.9的第28-11-1和第28-11-2組化合物具有以下結(jié)構(gòu) 第29-1至29-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R7為-NH-而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第30-1至30-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R8為-NH-而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第31-1至31-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R9為-NH-而不是-CH2-，并且在1-2位置不存在雙鍵。因此例如不存在第31-3、31-4、31-6、31-8-3、31-8-4或31-8-6組化合物。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第32-1至32-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R7、R8、R9中的兩個(gè)獨(dú)立地為-NH-、-O-或-S-，而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第33-1至33-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R7、R8、R9中的兩個(gè)獨(dú)立地為-NH-、-O-或-S-，而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第34-1至34-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R7為-S-，而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第35-1至35-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R8為-S-，而不是-CH2-。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第36-1至36-25-10-6組這些組包括在第1至25-10-6組中命名的每個(gè)化合物，其中R9為-S-，而不是-CH2-，并且在1-2位置不存在雙鍵。因此例如不存在第36-3、36-4、36-6、36-8-3、36-8-4或36-8-6組。這些化合物按第26-1第26-25-10-6組化合物所述的方法命名。
第37-1至37-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中R1不是二價(jià)的，例如不為＝O，并且它為α-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的β-構(gòu)型。
第38-1至38-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中R2不是二價(jià)的，例如不為＝O，并且它為α-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的β-構(gòu)型。
第39-1至39-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中R3不是二價(jià)的，例如不為＝O，并且它為β-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的α-構(gòu)型。
第40-1至40-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中R4不是二價(jià)的，例如不為＝O，并且它為α-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的β-構(gòu)型。
第41-1至41-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中R2和R4不是二價(jià)的，例如不為＝O，并且它們同為α-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的β-構(gòu)型。
第42-1至42-25-10-6組這些組包括上述在第1至36-25-10-6所有組中命名的每個(gè)化合物，其中當(dāng)5-位為氫時(shí)，其為β-構(gòu)型，而不是如通式B中所示的α-構(gòu)型。
第1至42-25-10-6組化合物中命名的任何化合物或一般化合物都適用于本文所述的方法。
在某些實(shí)施方案中，R1-R6、R10、R15、R17和R18中的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地具有這些結(jié)構(gòu)和/或獨(dú)立地包括所命名的化合物，-H、-OH、＝O、-SH、＝S、-NH2、-CN、-N3、鹵素、＝CH2、＝NOH、＝NOC(O)CH3、-C(O)-CH3、-C(O)-(CH2)1-4-CH3、-CCH、-CCCH3、-CH＝CH2，-CH＝CH2CH3，-O-C(O)-(CH2)m-(CF2)n-CH3，-O-C(O)-(CH2)m-(CF2)n-CF3，-O-C(O)-(CH2)m-(CF2)n-CH2F，-O-C(O)-O-(CH2)m-(CF2)n-CH3，-O-C(O)-O-(CH2)m-(CF2)n-CF3，-O-C(O)-O-(CH2)m-(CF2)n-CH2F，-O-C(O)-NH-(CH2)m-(CF2)n-CH3，-O-C(O)-NH-(CH2)m-(CF2)n-CF3，-O-C(O)NH-(CH2)m-(CF2)n-CH2F(其中m為1，2，3，4，5，6，7，8，9或10，n為0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10，通常n為0)，-CH(CH3)-(CH2)2-C(O)NH-CH2COOH，-CH(CH3)-(CH2)2-C(O)NH-CH2SO3H，-OSi(CH3)2C(CH3)3，-C(OH)＝CHCH3，＝CH(CH2)0-15CH3，-(CH2)0-14CH2F，-(CH2)0-14CH2Cl，-(CH2)0-14CH2Br，-(CH2)0-14CH2l，-(CH2)2-10-O-(CH2)0-4CH3，-(CH2)2-10-S-(CH2)0-4CH3，-(CH2)2-10-NH-(CH2)0-4CH3，-O-(CH2)0-14CH2F，-O-(CH2)0-14CH2Cl，-O-(CH2)0-14CH2Br，-O-(CH2)0-14CH2l，-O-(CH2)2-10-O-(CH2)0-4CH3，-O-(CH2)2-10-S-(CH2)0-4CH3，-O-(CH2)2-10-NH-(CH2)0-4CH3，-O-C(O)-(CH2)0-14CH2F，-O-C(O)-(CH2)0-14CH2Cl，-O-C(O)-(CH2)0-14CH2Br，-O-C(O)-(CH2)0-14CH2l，-O-C(O)-(CH2)2-10-O-(CH2)0-4CH3，-O-C(O)-(CH2)2-10-S-(CH2)0-4CH3，-O-C(O)-(CH2)2-10-NH-(CH2)0-4CH3，-O-C(S)-(CH2)0-14CH2F，-O-C(S)-(CH2)0-14CH2Cl，-O-C(S)-(CH2)0-14CH2Br，-O-C(S)-(CH2)0-14CH2l，-O-C(S)-(CH2)2-10-O-(CH2)0-4CH3，-O-C(S)-(CH2)2-10-S-(CH2)0-4CH3，-O-C(S)-(CH2)2-10-NH-(CH2)0-4CH3，-(CH2)0-16NH2，-(CH2)0-15CH3，-(CH2)0-15CN，-(CH2)0-15CH＝CH2，-(CH2)0-15NHCH(O)，-(CH2)0-16NH-(CH2)0-15CH3，-(CH2)0-15CCH，-(CH2)0-15OC(O)CH3，-(CH2)0-15OCH(OH)CH3，-(CH2)0-15C(O)OCH3，-(CH2)0-15C(O)OCH2CH3，-(CH2)0-15C(O)(CH2)0-15CH3，-(CH2)0-15C(O)(CH2)0-15CH2OH，-O(CH2)1-16NH2，-O(CH2)1-15CH3，-O(CH2)1-15CN，-O(CH2)1-15CH＝CH2，-O(CH2)1-15NHCH(O)，-O(CH2)1-16NH-(CH2)1-15CH3，-O(CH2)1-15CCH，-O(CH2)1-15OC(O)CH3，-O(CH2)1-15OCH(OH)CH3，-O(CH2)1-15C(O)OCH3，-O(CH2)1-15C(O)OCH2CH3，-O(CH2)1-15C(O)(CH2)0-15CH3，-O(CH2)1-15C(O)(CH2)0-15CH2OH，-OC(O)(CH2)1-16NH2，-OC(O)(CH2)1-15CH3，-C(O)O(CH2)1-15CN，-C(O)O(CH2)1-15CH＝CH2，-OC(O)(CH2)1-15NHCH(O)，-OC(O)(CH2)1-16NH-(CH2)1-15CH3，-OC(O)(CH2)1-15CCH，-OC(O)(CH2)1-15OC(O)CH3，-OC(O)(CH2)1-15OCH(OH)CH3，-OC(O)(CH2)1-15C(O)OCH3，-OC(O)(CH2)1-15C(O)OCH2CH3，-OC(O)(CH2)1-15C(O)(CH2)0-15CH3，-OC(O)(CH2)1-15C(O)(CH2)0-15CH2OH，磷酸烯醇丙酮酸，D-葡萄糖胺，葡糖膽酸，葡萄糖醛酸，泛酸，丙酮酸，葡萄糖，果糖，甘露糖，蔗糖，乳糖，海藻糖，鼠李糖，半乳糖，核糖，2’-脫氧核糖，3’-脫氧核糖，甘油，3-磷酸甘油酸酯，一種PEG(PEG20，PEG100，PEG200，PEG10000)，一種聚氧化烯聚合物，甘氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，蘇氨酸，脯氨酸，4-羥基脯氨酸或一種寡核苷酸或包含約4-約21個(gè)單體的類似物。
當(dāng)取代基為寡核苷酸或聚合物時(shí)，通常這些物質(zhì)中只有一種鍵合到通式1表示的化合物。通常情況是當(dāng)R1-R2和R4-R6包含一種或多種這種取代基(或本文所述的其它取代基)時(shí)，取代基以β-構(gòu)型存在，而R3通常包含一個(gè)β-構(gòu)型的取代。在某些實(shí)施方案中，R2處于α-構(gòu)型。
在某些實(shí)施方案中，R1-R6、R10、R15、R17和R18中的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地包含一種核苷、一種核苷酸、一種寡核酸或任一這些物質(zhì)的一種類似物。通常這種部分通過端羥基、硫醇、?；糠只虬吩?’、3’或2’位鍵合到類固醇核上，條件是當(dāng)那些位置上存在羥基、硫醇、?；虬窌r(shí)。對(duì)于寡核苷酸和寡核苷酸類似物，與類固醇的鍵合有時(shí)是通過在內(nèi)部2’-位上的一個(gè)糖羥基。
磷酸二酯的類似物的鍵合包括硫代磷酸酯鍵合和本文所引用的參考文獻(xiàn)中所述的其它鍵合。寡核苷酸偶合基團(tuán)是指任何適合在相鄰核苷酸間或其類似物間產(chǎn)生一種磷酸二酯鍵合或磷酸二酯類似物鍵合的部分。合適的寡核苷酸偶合基團(tuán)包括-OH、H-膦酸酯、烷基氨基膦酸酯或氨基磷酸酯如β-氰乙基-氨基磷酸酯、N，N-二異丙基氨基-β-氰乙氧基磷化氫和其它在引用的參考文獻(xiàn)中所述的寡核苷酸偶合基團(tuán)。合適的嘌呤和嘧啶堿包括腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶以及其它在引用的參考文獻(xiàn)中所述的嘌呤和嘧啶。合適的核苷、核苷酸、寡核苷酸以及其類似物已經(jīng)有描述，例如請(qǐng)參見，美國(guó)專利USP4725677，4973679，4997927，4415732，4458066，5047524，4959463，5212295，5386023，5489677，5594121，5614622，5624621；和公開號(hào)為WO92/07864，WO96/29337，WO97/14706，WO97/14709，WO97/31009，WO98/04585和WO98/04575的PCT公開文本，所有的這些在本文中引作參考。通式1化合物例如在第1至第42-25-10-6組中命名的任何化合物，適合與寡核苷酸鍵合，以調(diào)節(jié)寡核苷酸的親油性或把寡核苷酸運(yùn)輸或滲透到細(xì)胞中。一旦結(jié)合之物進(jìn)入細(xì)胞，這種鍵合在生物學(xué)上易于促進(jìn)類固醇從寡核苷酸上釋放。
表2列舉了R1-R6、R10、R15、R17和R18的一個(gè)或多個(gè)可以包含的這些和其它示例性部分。Pr指保護(hù)基。這些部分通常鍵合到R1、R2和R4位置的一個(gè)或多個(gè)上，通常鍵合到這些位置的一個(gè)或兩個(gè)上。對(duì)于具有不只一種給定變量的結(jié)構(gòu)例如A3或A5結(jié)構(gòu)中的X，每一個(gè)都可獨(dú)立地選擇。
表2
通常用于儲(chǔ)存本發(fā)明組合物和制劑的容器會(huì)限制進(jìn)入所儲(chǔ)存物質(zhì)的水量。通常制劑包裝在密封的或感應(yīng)密封容器中。容器通常是感應(yīng)密封的。容器的水滲透特性已經(jīng)有描述，例如《容器-滲透》(Containers--Permeation)，chapter.USP23<671>，United StatesPharmacopeial Convention，Inc.，12601 Twinbrook Parkway，Rockville，MD 20852，pp.1787以及下列等等(1995)。
使用通式A所表示的化合物治療某些疾病例如感染如瘧疾、HCV或隱孢子蟲屬已經(jīng)有所描述。通式A具有以下結(jié)構(gòu)
其中Q1為-C(R1)2-或-C(O)-；Q2為-C(R1)2-、-C(R1)(Y)-、-C(Y)-或-CH2-CH2-；Q3為-H或-C(R1)3-；Q4為-C(R1)2-、-C(O)-、羥基乙烯基亞甲基(-CH(CH＝CHOH)-)或甲基亞甲基(-CH(CH3)-)；Q5為-C(R1)2-或-C(O)-；X和Y獨(dú)立地為-OH、-H、低級(jí)烷基(例如C1-6烷基)、-O-C(O)-R5、-C(O)-O-R5、鹵素(即-F、-Cl、-Br或-I)或＝O；每個(gè)R1獨(dú)立地為-H、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；R2為-H、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-OR3、酯(例如-O-C(O)-R4或-C(O)-O-R4)、硫酯(例如-O-C(S)-R4或-C(S)-O-R4)、硫縮醛(例如-S-C(O)-R4或-C(O)-S-R4)、硫酸酯(例如-O-S(O)(O)-O-R4)、磺酸酯(例如-O-S(O)-O-R4)或氨基甲酸酯(例如-O-C(O)-NH-R4或-NH-C(O)-O-R4)或R2與鍵合到同一碳原子上的R1一起為＝O；R3為-S(O)(O)-OM、-S(O)(O)-OCH2-CH(O-C(O)-R6)-CH2-O-C(O)-R6、-P(O)(O)-OCH2-CH(O-C(O)-R7)-CH2-O-C(O)-R7、結(jié)構(gòu)(B)所示的葡萄糖苷酸， 或R3為C1-18烷基、C2-18鏈烯基、C2-18炔基、C1-18酯或C1-18硫酯，其中任意上述C1-18或C2-18部分在一個(gè)或多個(gè)氫原子處被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的-ORPR(包括-OH)、-NHRPR(包括-NH2)或-SRPR(包括-SH)基團(tuán)所取代，或R3為C1-18脂肪酸、C2-20炔基、(J)n-苯基-C1-5-烷基、(J)n-苯基-C2-5-鏈烯基；R4為-H、保護(hù)基、選擇性取代的C1-18烷基、選擇性取代的C1-18鏈烯基、選擇性取代的C1-18炔基、選擇性取代的芳基、選擇性取代的芳基-C1-6烷基、選擇性取代的芳基-C2-6鏈烯基、選擇性取代的芳基-C2-6炔基、選擇性取代的雜環(huán)-C1-6烷基、選擇性取代的C2-6鏈烯基-雜環(huán)、選擇性取代的C2-6炔基-雜環(huán)或選擇性取代的雜環(huán)，其中上述任何部分在1、2、3、4、5或更多個(gè)碳原子或氫原子處被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自-O-、-S-、-NRPR-(包括-NH-)、-NH-C(O)-、-ORPR(包括-OH)、-NHRPR(包括-NH2)、-SRPR(包括-SH)、＝O、＝S、＝N-OH、-CN、-NO2、-F、-Cl、-Br或-I的基團(tuán)或原子所取代；每個(gè)R5獨(dú)立地為直鏈或支鏈的C1-14烷基；每個(gè)R6獨(dú)立地為直鏈或支鏈的C1-14烷基；每個(gè)R7獨(dú)立地為直鏈或支鏈的C1-14烷基或結(jié)構(gòu)(B)所示的葡萄糖苷酸基團(tuán)；每個(gè)RPR獨(dú)立地為-H或獨(dú)立選擇保護(hù)基；n為0、1、2或3；每個(gè)J獨(dú)立地為-F、-Cl、-Br、-I、C1-4烷基、C1-4鏈烯基、C1-4烷氧基、羧基、硝基、硫酸基、磺?；?、C1-6羧酸酯或C1-6硫酸酯；M為氫、鈉、-S(O)(O)-O-CH2-CH(O-C(O)-R6)-CH2-O-C(O)-R6、-P(O)(O)-OCH2-CH(O-C(O)-R7)-CH2-O-C(O)-R7、或結(jié)構(gòu)(A)所示的葡萄糖苷酸基因；通式1中的點(diǎn)劃線表示一個(gè)選擇性的雙鍵，條件是在4-5和5-6位置上沒有雙鍵以及當(dāng)存在一個(gè)雙鍵時(shí)，0或1個(gè)R1基團(tuán)在1-、2-、4-、5-、6-或17-位上鍵合到碳原子上，使得這些碳原子為四價(jià)；以及鹽、立體異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、代謝物、類似物或前體。
通式A所示的化合物，特別是當(dāng)11-位的兩個(gè)R1不是羥基、烷氧基或可水解為羥基的部分時(shí)，一般適用于本文公開的方法和組合物，例如它們用于增強(qiáng)患者的Th1免疫反應(yīng)。給藥方法和劑量基本按本文所述。
間歇式給藥方法人們可以間歇地把通式1表示的化合物如BrEA或BrEA酯對(duì)患者用藥，而不會(huì)引起通常與不連續(xù)劑量有關(guān)的不希望的問題。這些不希望的問題包括病原體(病毒如HIV或寄生蟲如瘧原蟲寄生蟲)對(duì)治療藥劑產(chǎn)生抗藥性或病人或患者沒能堅(jiān)持服藥的失敗治療。間歇式給藥程序包括按以下方式口服、局部或非腸道給藥通式1表示的化合物(1)給藥約3-約20天，(2)約4-約20天不服用通式1化合物，(3)給藥約4-約40天，和(4)選擇性重復(fù)給藥程序1、2、3、4、5、6、10、15、20、30或更多次。通常給藥步驟(1)和(3)保持約3-15天，通常約3-5天。一般來講，上述給藥程序步驟(1)-(3)至少重復(fù)一次，通常至少2、3、4、5或6次。對(duì)于傾向于保持很長(zhǎng)時(shí)間的感染，例如HIV、HCV或其它慢性病毒或寄生蟲感染，間歇式給藥程序通常保持相對(duì)長(zhǎng)的時(shí)期，例如至少約6個(gè)月或約5年。
在間歇式給藥程序中，通式1化合物可以通過任意途徑給藥，例如肌肉(i.m.或I.M.)、皮下(s.c.或S.C.)、靜脈內(nèi)(i.v或I.V.)、真皮內(nèi)、其它非腸道途徑，氣霧劑使用量為約0.1-約10mg/kg/天，通常為0.2-4mg/kg/天。作為選擇，人們也可以把通式1化合物按口服約4-40mg/kg/天的量給藥，通常約6-20mg/kg/天。在某些實(shí)施方案中，間歇式給藥方法不包括通常用于把避孕類固醇給例如人類女性用藥的給藥程序，例如每天服用21天，然后不給藥7天。一般來說，本文所述的含有通式1化合物的非水溶液制劑是通過i.v.、i.m.、s.c.或其它非腸道途徑給藥的。每天的劑量可以是單一劑量給藥特別是對(duì)于非腸道用藥的劑量，或把劑量分成2、3、或4個(gè)次級(jí)劑量，通常為2個(gè)，特別是對(duì)于口服用藥的劑量。
示例性的實(shí)施方案為(a)給藥通式1化合物例如BrEA或BrEA的酯或碳酸酯，隔日一次20天，然后(b)不給藥1、2、3、4、5、6、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或更多天，然后(c)給藥通式1化合物每天至少一次，例如隔日給藥通式1化合物20天，以及(d)選擇性重復(fù)(a)、(b)或(c)1、2、3、4、5或6次或更多次。這些實(shí)施方案的一個(gè)子方案為(a)給藥通式1化合物例如BrEA或BrEA的酯或碳酸酯，隔日一次20天，然后(b)不給藥約10-40天，然后(c)給藥通式1化合物每天至少一次，例如隔日給藥通式1化合物20天，以及(d)選擇性重復(fù)(a)、(b)或(c)1、2、3、4、5或6次或更多次。在任何實(shí)施方案中，人們可以以每天2或3個(gè)次級(jí)劑量給藥通式1化合物。
其它實(shí)施方案為(a)給藥通式1化合物例如BrEA或BrEA的酯或碳酸酯，一天一次約8-12天，然后(b)不給藥1、2、3、4、5、6、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或更多天，然后(c)給藥通式1化合物每天至少一次，例如隔日給藥通式1化合物8-12天，以及(d)選擇性重復(fù)(a)、(b)或(c)1、2、3、4、5或6次或更多次。該實(shí)施方案的一個(gè)子方案為(a)給藥通式1化合物例如BrEA或BrEA的酯或碳酸酯，一天一次約10天，然后(b)不給藥約10-40天，然后(c)給藥通式1化合物每天至少一次，例如每天一次給藥通式1化合物約10天，以及(d)任意重復(fù)(a)、(b)或(c)1、2、3、4、5或6次或更多次。在任何實(shí)施方案中，人們可以以每天2或3個(gè)次級(jí)劑量給藥通式1化合物。
本發(fā)明間歇式給藥方法的一個(gè)方面是監(jiān)控患者對(duì)于給藥的反應(yīng)。例如，當(dāng)對(duì)一個(gè)患有病毒感染(如HCV、HIV、SIV、SHIV)的患者給藥時(shí)，人們可以監(jiān)測(cè)患者或病原體的反應(yīng)，例如一種或多種癥狀的改善或血清中受感染的粒子或病毒RNA的變化。一旦觀察到反應(yīng)，就可以再繼續(xù)給藥1、2或3天，然后停止給藥至少一天(至少24小時(shí))，通常至少2或3天。一旦患者的反應(yīng)出現(xiàn)減輕的信號(hào)(例如病毒血清RNA開始增加)，可以重新開始一個(gè)給藥療程?；颊邔?duì)通式1化合物的反應(yīng)的一個(gè)方面是患者可能會(huì)在較短的時(shí)間內(nèi)通常是約5-10天，顯示可測(cè)量的反應(yīng)，這就使得可以例如通過監(jiān)控周圍白血細(xì)胞(“PBMC”)中的病毒滴定度或通過測(cè)定血液中的病毒的核酸水平直接跟蹤患者的反應(yīng)。人們可以在間歇式給藥期間或給藥后監(jiān)測(cè)一種或多種免疫細(xì)胞子集，如NK、LAK、樹突細(xì)胞或調(diào)節(jié)ADCC免疫反應(yīng)的細(xì)胞，以監(jiān)控患者的反應(yīng)并確定何時(shí)顯示必須進(jìn)行進(jìn)一步的給藥通式1化合物。按照本文所述這些細(xì)胞子集是受到監(jiān)控的，例如通過流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)。
對(duì)于本文所述的任何治療或方法，患者所表現(xiàn)的長(zhǎng)期的有益效果或持續(xù)的免疫反應(yīng)可能是由于單一給藥通式1化合物或幾次每日給藥通式1化合物或間歇式給藥通式1化合物所引起的。單一給藥是指在24小時(shí)內(nèi)給患者給藥通式1化合物1、2、3或更多劑量并且至少在約45天至2個(gè)月如3、4、5、6或更多個(gè)月內(nèi)不再對(duì)患者給藥任何通式1化合物。在完成一短期療程(例如每日給藥2、3、4、5或6天)后，長(zhǎng)期的有益效果或免疫反應(yīng)可能還會(huì)持續(xù)，患者不再接受任何通式1化合物，或在某些情況下不接受任何其它的醫(yī)治引起患者病理狀況的主要原因的醫(yī)療治療。這種有益效果可以持續(xù)超過約5-30天。
在某些情況下，在用通式1化合物對(duì)患者進(jìn)行一短期療程后，治療引起的有益效果在超過3個(gè)月(4或5或更多月)內(nèi)可以觀察到。因此，給藥通式1化合物提供了一種有效保護(hù)患者免受感染發(fā)展，或免受不需要的免疫反應(yīng)(例如發(fā)炎)引起的不利后果，或免受免疫抑制(例如由感染、化學(xué)療法所引起)的方法，而在最初的給藥程序后至少3個(gè)月不再服用該化合物，最初的給藥程序可以是間歇式或連續(xù)給藥例如超過1天-約4個(gè)月(1-15天、約1個(gè)月、約2個(gè)月等)。
合成方法用于制備通式1化合物的試劑和反應(yīng)條件已經(jīng)有描述，例如請(qǐng)參見以上的引用內(nèi)容、美國(guó)專利USP5874598、5874597、5874594、5840900；PCT申請(qǐng)WO9901579。把多種有機(jī)部分鍵連到多種活性基團(tuán)上的通用化學(xué)合成方法已經(jīng)有描述。例如在G.T.Hermanson的《生物連接技術(shù)》(Bioconiugate Techniques)，AcademicPress，1996中，在3-136頁描述了官能目標(biāo)如氨基酸、肽和碳水化合物，在137-166頁描述了官能目標(biāo)中活性基團(tuán)的化學(xué)性質(zhì)，活性基團(tuán)如胺、硫醇、羧基、羥基、醛、酮和活性氫原子(例如連接到給電子部分如雜芳環(huán)上的-H)。該參考文獻(xiàn)還在169-416頁和605-638頁描述了對(duì)制備衍生物如零長(zhǎng)度交聯(lián)劑、同雙官能交聯(lián)劑、異雙官能交聯(lián)劑、標(biāo)記、探針和聚合物。該文獻(xiàn)還在639-671頁描述了改性寡核苷酸的合成方法。
一方面，氨基酸或肽通過氨基使用一種偶聯(lián)試劑如光氣(Cl-CO-Cl)或Cl-CS-Cl以及適合受保護(hù)的并在需要時(shí)可以保護(hù)的氨基酸或肽和類固醇連接到類固醇上。這種連接在氨基酸或肽與類固醇核之間產(chǎn)生了插入部分-CO-O-或-CS-O-。
示例性合成方案舉例但不限于以下方法，用于制備一種或多種本文所公開的化合物。例如在以下文獻(xiàn)中，可以發(fā)現(xiàn)起始物質(zhì)和方案的簡(jiǎn)明變化，在本文中引作參考A.P.Davis等，四面體通訊(Tetrahedron Lett.)，335111-5112，1992；I.Takashi等，化學(xué)藥物通報(bào)(Chem.Pharm.Bull.)，341929-1933，1986；I.Weisz等，Arch.Pharm.，319952-953，1986；T.Watabe等，藥物化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Med.Chem.)，13311-312，1970；M.Davis等，化學(xué)會(huì)志C(J.Chem.Soc.C.)，(11)1045-1052，1967；R.C.Cambie等，化學(xué)會(huì)志(J.Chem Soc.)Perkin Trans.，1，(20)2250-2257，1977；L. Minale等，J.Chem Soc.，Perkin Trans.1，(20)2380-2384，1974；C.K.Lai等，類固醇(Steroids)，42707-711，1983；S.Irie等，合成(Synthesis)，(9)1135-1138，1996；E.J.Corey，美國(guó)化學(xué)會(huì)志(J.Am.Chem.Soc.)，1188765-8766，1996；M.E.Annunziato等，生物連接化學(xué)(Bioconjugate Chem.)，4212-218，1993；N.J.Cussans等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，(8)1650-1653，1980；D.H.R.Barton等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(9)393-394，1978；H.Loibner等，Helv.Chim.Acta，592100-2113，1976；T.R.Kasturi等，Proc.Indian Acad.Sci.，[Ser.]Chem.Sci.，90281-290，1981；T.Back，有機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào)(J.Org.Chem.)，461442-1446，1981；A.Canovas等，Helv.Chim.Acta，63486-487，1980；R.J.Chorvat等，J.Org.Chem.，43966-972，1978；M.Gumulka等，加拿大化學(xué)學(xué)報(bào)(Can.J.Chem.)，63766-772，1985；H.Suginome等，J.Org.Chem.，552170-2176，1990；C.R.Engel等，加拿大雜環(huán)(Can.Heterocycles)，28905-922，1989；H.Sugimone等，Bull.Chem.Soc.Jpn.，62193-197，1989；V.S.Salvi等，Can.Steroids，4847-53，1986；C.R.Engel等，Can.Steroids，47381-399，1986；H.Suginome等，Chem.Lett.，(5)783-786，1987；T.Iwadare等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(11)705-706，1985；H.Nagano等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(10)656-657，1985；V.S.Salvi等，Steroids，27717725，1976；C.H.Engel等，Steroids，25781-790，1975；M.Gobbini等，Steroids，61572-582，1996；A.G.Gonzalez等，四面體(Tetrahedron)，461923-1930，1990；S.C.Bobzin等，J.Org.Chem.，543902-3907，1989；B.Solaja等，Croat.Chem.Acta，591-17，1986；Y.Kashman等，Tetrahedron，273437-3445，1971；K.Yoshida等，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)，151966-1978，1967；P.B.Sollman等，化學(xué)通訊(Chem.Commun.)，(11)552-554，1967；H.Suginome等，J.Org.Chem.，552170-2176，1990；H.Suginome等，Journal Chem.Lett.，(5)783-786，1987；G.A.Tolstikov等，Zh.Org.Khim.，22121-132，1986；T.Terasawa等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，(4)990-1003，1979；Z.Zhuang等，有機(jī)化學(xué)(Yougi Huaxue)，(4)281-285，1986；W.T.Smith等，Trans.Ky.Acad.Sci.，4576-77，1984；A.K.Batta等，Steroids，64780-784，1999；B.Ruan等，Steroids，6529-39，2000；L.Garrido等，Steroids，6585-88，2000；P.Ramesh等，Steroids，64785-789，1999；M.Numazawa等，Steroids，64187-196，1999；P.N.Rao等，Steroids，64205-212，1999；M.Numazawa等，Steroids，64320-327，1999；美國(guó)專利3281431、3301872、3325535、3325536、3952018、4602008、5571795、5627270、5681964、5744453；國(guó)際申請(qǐng)WO9408588、WO9508558、WO9508559、WO9638466、WO9809450；英國(guó)專利GB1168227、GB813529、GB802618；法國(guó)專利824529；日本專利JP45010134；歐洲專利申請(qǐng)EP232788、EP430078；和德國(guó)專利DE19631189。
方案1對(duì)于方案1中所示的結(jié)構(gòu)，R5-R9與通式1化合物的定義一致。因此，當(dāng)R5和R6均為β-構(gòu)型的-CH3時(shí)，R7、R8和R9均為-CH2-，9-位和14-位的H為α-構(gòu)型，3-位的醋酸酯為β-構(gòu)型，8-位的H為β-構(gòu)型，方案1中的化合物1為DHEA乙酸酯。本文公開的該方案以及其它方案中3、7、16、17或其它位置的乙酸酯基可獨(dú)立地為其它本文所述的酯部分，例如C2-50酯包括-C(O)-(CH2)0-4-(CF2)0-4-CF3包括-C(O)-CF3，-C(O)-C2-29選擇性取代的烷基，-C(O)-CH2-C2-28選擇性取代的鏈烯基，-C(O)-CH2-C2-28選擇性取代的炔基，-C(O)-(CH2)0-6選擇性取代的苯基，或-C(O)-(CH2)0-6選擇性取代的雜環(huán)或本文描述的或引用的參考文獻(xiàn)中的其它有機(jī)部分。
本文所描述的這些有機(jī)部分的典型取代基包括1、2、3或更多個(gè)獨(dú)立選擇的-O-、＝O、選擇性保護(hù)的羥基、-S-、選擇性保護(hù)的硫醇、-NH-、選擇性保護(hù)的-NH2、選擇性保護(hù)的-C(O)OH、-C(O)-NH-、-C(O)-NH2、-NH-C(O)-H、-NH-C(O)-C0-4H1-9、-NH-C(O)-O-C0-4H1-9、-CN、-NO2、-N3或鹵素。按照需要保護(hù)活性基團(tuán)，例如＝O在LiCR反應(yīng)中通常要保護(hù)，LiCR反應(yīng)用于在以下的方案1中產(chǎn)生化合物1。
方案1 縮寫LDA＝二異丙基酰胺鋰；MCPBA＝間氯過苯甲酸；TMSCl＝三甲基氯硅烷；DMAP＝4-甲基氨基吡啶；Dibromantin＝1，3-二溴-4，4-二甲基乙內(nèi)酰脲；R＝CRA；RA＝-H或如本文所述的C1-C50有機(jī)部分，例如-H、-C1-20選擇性取代的烷基、-C1-20選擇性取代的鏈烯基、-C1-20選擇性取代的炔基、-(CH2)0-6選擇性取代的苯基或-(CH2)0-6選擇性取代的雜環(huán)。
方案2使用方案1的最后兩步由方案1中所示的結(jié)構(gòu)A化合物制備通式2的化合物(1)Dibromantin，(2)LiBr，(3)Li-C-R，其中R為CRA，RA為-H或C1-12選擇性取代的烷基。當(dāng)R7、R8和R9均為-CH2-時(shí)，9-位和14-位的H為α-構(gòu)型，8-位的H為β-構(gòu)型，方案1的第一個(gè)化合物是DHEA乙酸酯。RA烷基部分的典型取代包括1、2或更多個(gè)獨(dú)立選擇的-O-、選擇性保護(hù)的＝O、選擇性保護(hù)的羥基、-S-、選擇性保護(hù)的硫醇、-NH-、選擇性保護(hù)的-NH2、選擇性保護(hù)的-C(O)OH、-C(O)-NH-、-C(O)-NH2、-NH-C(O)-H、-NH-C(O)-C0-4H1-9、-NH-C(O)-O-C0-4H1-9、-CN、-NO2、-N3或鹵素。
方案2 方案3如方案1在C-7處進(jìn)行烯丙位溴化作用。R和RA為方案1和2中所定義的。 方案4在C-16處存在溴的情況下，鋰試劑(當(dāng)R為-CH時(shí)，為炔化鋰)加成到17-位的＞C＝O上導(dǎo)致形成環(huán)氧化物或發(fā)生頻那醇重排。作為選擇，不具有結(jié)構(gòu)3的化合物可以在溫和的酸催化下脫水，再通過用Br2、H2O處理鏈烯而形成通式4的化合物。R和RA的定義同方案1和2。
方案4
方案5硼氫化鈉在C-7處產(chǎn)生差向異構(gòu)體混合物，混合物可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法如HPLC、TLC或柱色譜進(jìn)行分離。為得到純7α-OH化合物，烯丙位溴化作用后如方案1和3所述進(jìn)行水解。
方案5 方案6 方案6如方案1、2、3或4中那樣通過使用炔化鋰處理乙酸酯制備通式6的化合物。R和RA的定義同方案1和2。
方案7使用如方案1和4中所述的試劑從3-乙酸酯制備通式7的化合物。R和RA的定義同方案1和2。 方案8由通式A的化合物，通過硼氫化鈉在C-17處還原，然后進(jìn)行乙?；苽渫ㄊ?的化合物。 方案9使用如方案1和3中所述的反應(yīng)制備起始物質(zhì)。 方案10在C-3處進(jìn)行還原和乙?；?，在C-17處進(jìn)行水解和氧化使得通式10a和10b的化合物如方案1-9中在C-3、C-16和C-17處所示發(fā)生官能作用。7-氧代乙酸酯可以由通式A化合物3-乙酸酯代替，使用如方案1-9所示的反應(yīng)，7-氧代乙酸酯同樣也能夠在C-3、C-16和C-17處發(fā)生官能作用。
用LDA處理10a，然后對(duì)烯醇進(jìn)行烷基化，使得引入側(cè)鏈如R10，R10可以為例如C1-C20烷基(甲基、乙基)、C1-C20鏈烯基(CH2＝CH-(CH2)0-6-)、芐基、-(CH2)1-4-O-(CH2)0-4-CH3。
方案10 方案1-9顯示在所示位置引入羥基官能團(tuán)。把羥基轉(zhuǎn)化成其它的官能團(tuán)的方法本質(zhì)上與在例如本文引用的參考文獻(xiàn)中所述的方法一致。例如，通式1-10c化合物的酯如-O-C(O)-RB，其中RB是一個(gè)C1-50有機(jī)部分，由類固醇的醇制備而來，可以通過使用合適的酸酐或酰氯(RB-C(O)-Cl)處理類固醇的醇以形成任何所需要的酯。醚如-O-RB，由醇制備而來，通過形成堿金屬的醇鹽(Na+或K+)，然后用一級(jí)或二級(jí)碘化物(RB-I)處理而得。硫代碳酸酯RB-C(S)-O-，通過用Lawesson試劑處理RB-C(O)-O-制得。
硫酸酯NaO-S(O)(O)-O-、RB-O-S(O)(O)-O-，例如CH3(CH2)0-18-S(O)(O)-O-，通過用氯磺酸處理醇，然后用NaOH處理制得，或者由替代方案使用KMnO4氧化亞硫酸酯制得。如果期望得到烷基(如甲基)酯，可以使用烷基氯-磺酸酯(甲基氯-磺酸酯)。亞硫酸酯HO-S(O)-O-和銨鹽NH4O-S(O)-O或RBO-S(O)-O-酯(如CH3O-S(O)-O-)通過標(biāo)準(zhǔn)方法制備。銨鹽是通過用氨和二氧化硫處理醇制得的。當(dāng)在一種合適的堿如三乙胺存在下，用烷基氯亞硫酸酯(如甲基氯亞硫酸酯)、鏈烯基氯亞硫酸酯或炔基氯亞硫酸酯處理醇時(shí)，會(huì)得到酯例如烷基酯、鏈烯基酯和炔基酯(如甲基酯)。在Na2CO3存在下，用二乙基氯磷酸酯處理醇制得磷酸酯RBO-p(ORPR)(O)-O-。作為選擇，如果在三苯基膦(PPh3)和二乙基氮二羧酸酯存在下，用磷酸二酯處理醇，會(huì)轉(zhuǎn)化形成相應(yīng)的三酯(Mitsunobu反應(yīng))。
硫代磷酸酯RBO-p(SRPR)(O)-O-是通過用如磷酸酯所述使用二乙基氯磷酸酯的一硫類似物處理醇而制得的。碳酸酯RBO-C(O)-O-由相應(yīng)的類固醇的醇使用氯甲酸酯(RBC(O)-Cl)例如C1-20烷基、鏈烯基或炔基氯甲酸酯(如CH3(CH2)0-5-C(O)-Cl)而制備的。氨基甲酸酯RB-NH-C(O)-O-通過在三氟乙酸的存在下，用異氰酸酯(RBN＝C＝O)或NaOCN處理類固醇的醇制得。氨基酸酯ZNX-CHY-C(O)-O通過將類固醇的醇與N-保護(hù)的氨基酸的酰氯偶合制得。
氧化連接到類固醇核上的羥基用于得到酮及相關(guān)的官能性。例如，可以使用多種氧化試劑如AcOH中的CrO3或氯鉻酸吡啶鹽、二鉻酸吡啶鹽或草酰氯與三乙胺(Swern氧化)將醇轉(zhuǎn)化為酮。硫酮(＝S)是通過用Lawesson試劑[2，4-二(4-甲氧苯基)-1，3，2，4-二硫二phosphetane-2，4-二亞硫酸酯；可以從Aldrich購得]處理酮制得的。硫縮醛-C(SRB)(SRB)-為在酸催化條件下(例如HCl)，用RB-SH硫醇處理酮(-C(O)-)制備的。膦酸酯RO-P(ORPR)(O)-，是在KF存在下，通過將磷酸二酯加成到酮上產(chǎn)生羥基膦酸酯而制備的。人們可以任意使用脫水和加氫方法去掉羥基。
取代羥基以產(chǎn)生多種官能性。例如硫醇-SH，通過使用PBr3將醇轉(zhuǎn)化成溴化物，用硫脲然后用NaOH處理溴化物得到硫醇。硫醚RB-S-通過用NaOH以及所需的鹵化物如烷基鹵化物處理硫醇制得。作為選擇，醇的衍生物如對(duì)甲苯磺酸酯或甲磺酸酯可以由硫醇陰離子RB-S-替代以產(chǎn)生硫醚。硫酯R-C(O)-S-通過用硫羰酸的鈉鹽處理醇的甲苯磺酸酯(或甲磺酸酯)制備。
取代羥基可以用于在碳原子處產(chǎn)生連接到類固醇上的酯RBO-C(O)-和酰胺-NHRB-C(O)-。對(duì)于酰胺或胺，RB為-H、保護(hù)基或C1-50有機(jī)部分。這些物質(zhì)通過使用NaCN取代由類固醇溴化物轉(zhuǎn)化而來。氰化物基團(tuán)可以水解為酰胺或酸。將酸酯化或在合適的羧基活化試劑如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)存在下，酸與O-保護(hù)的氨基酸發(fā)生標(biāo)準(zhǔn)肽偶合反應(yīng)以形成類固醇-C(O)NH-CHY-C(O)-OR，其中Y是氨基酸的側(cè)鏈或C1-C10有機(jī)部分，R為保護(hù)基(或當(dāng)脫保護(hù)后為氫)。
連接到類固醇碳原子上的胺和胺的衍生物如RB-NH-、RB-C(O)-NH-、RB-O-C(O)-NH-或RBOC(O)-CHRB-NH-，通常由標(biāo)準(zhǔn)方法制備。例如，胺(NH2-類固醇)通常由酰胺(NH2-C(O)-類固醇)通過Hoffmann重排(Br2，NaOH)或由類固醇的酰氯通過Curtius重排(NaN3)制備。隨后可以通過烷基化作用引入RB取代基。在標(biāo)準(zhǔn)Mitsunobu條件(PPh3，DEAD)下，可以使用類固醇的醇作為起始物質(zhì)，使用N-(叔丁氧羰基)-對(duì)甲苯磺酰胺，以產(chǎn)生N-Boc磺酰胺。人們可以選擇性去除任一個(gè)保護(hù)基。用三氟乙酸處理產(chǎn)物產(chǎn)生磺酰胺(RB-S(O)(O)-NH-類固醇)。作為選擇，用萘基鈉(sodium naphthalenide)脫保護(hù)得到N-Boc化合物。使用酰氯(RB-C(O)-Cl)，胺(NH2-類固醇)可以轉(zhuǎn)化為酰胺(RBNH-C(O)-類固醇)。用氯甲酸乙酯處理得到N-氨基甲酸酯(RBOC(O)-NH-類固醇)。胺(NH2-類固醇)也可能使用α-溴酯(RB-C(O)-CHY-NH2)進(jìn)行烷基化以產(chǎn)生氨基酸取代的類固醇(RB-O-C(O)-CHY-NH-類固醇)。
當(dāng)反應(yīng)如取代反應(yīng)產(chǎn)生產(chǎn)物混合物時(shí)，所需要的中間體在進(jìn)行下一步反應(yīng)前，可以選擇性地同其它產(chǎn)物分離或至少從其它產(chǎn)物中部分富集(例如富集至少約10倍，通常至少約50-100倍)。在類固醇碳原子處發(fā)生的取代反應(yīng)通常在3-位以最大效率繼續(xù)進(jìn)行，3-位是相對(duì)立體不受阻礙的，而C-17位相對(duì)在某種程度上不如C-3位容易接近。C-3、C-7、C-17和C-16位的相對(duì)反應(yīng)性使得人們可以利用它們的反應(yīng)性以控制按順序在同一個(gè)類固醇分子上引入不同的官能團(tuán)。在反應(yīng)性更強(qiáng)的位置C-3或C-17上的基團(tuán)如羥基也可以按順序保護(hù)或脫保護(hù)以允許在其它位置上如C-7或C-16引入官能團(tuán)。
連接到化合物上的聚合物如PEG基本上如上所述。例如，PEG200或PEG300通過使用一種PEG醇鹽(PEG-ONa)取代類固醇溴化物，通過醚鍵(PEG-O-類固醇)在3、7、16、17或其它位置上連接到類固醇上。作為選擇，可以用類固醇烷氧化物處理PEG-Br。聚乙二醇酯如在美國(guó)專利USP5681964中所述的那些也可以通過使用一種合適的通式1化合物以及本文所述的方法制備。使用已知方法，可以將單糖或多糖和寡糖連接到類固醇羥基上，例如請(qǐng)參見USP5627270。
包含一個(gè)或多個(gè)環(huán)雜原子的通式1類固醇的類似物按照以下方法合成。
方案11含有兩個(gè)或三個(gè)環(huán)雜原子的通式1化合物按該方案方法制備。在該方案中，X為-CH2-、-NH-、-O-或-S-；R40為-H或-Br；R41為具有約12個(gè)或更少碳原子的有機(jī)部分，典型為C1-C8選擇性取代的烷基(如甲基、羥甲基、乙基、丙基)或C2-C8選擇性取代的具有一個(gè)雙鍵的鏈烯基(如乙烯基)，該鏈烯基帶有1、2、3或更多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基(如-OH、-COOH、-O-)以及其它任何含有一個(gè)通常受保護(hù)的官能團(tuán)的取代基。從19制備化合物20通過在酸中(H+)使用一種二元醇如HOC(CH3)2C(CH3)2OH完成(B.H.Lipshutz等，Synth.Commun.12267，1982)。大體積保護(hù)基的使用有利于在5-6位而不是4-5位產(chǎn)生雙鍵。
方案11 方案12A-12D結(jié)構(gòu)12化合物按下述方案制備。大多數(shù)反應(yīng)基本上按參考文獻(xiàn)所描述的方法進(jìn)行。例如請(qǐng)參見W.D.Langley，有機(jī)合成(Org.Syn.)，1，122，1932(化合物30)；R.Ratcliffe等，J.Org.Chem.354000，1970(化合物32)；A.I.Meyers等，J.Org.Chem.392787，1974(化合物33，41)；J.L.Isidor等，J.Org.Chem.38544，1973(化合物35)；G.Wittig等，Chem.Ber.871318，1954(化合物36)；P.M.Pojer等，Tet.Lett.3067，1976(化合物38)；A.Maercker，Org.React.14270，1965(化合物37)；E.J.Corey等，Tet.Lett.3269，1975(化合物37)；R.S.Tipson，J.Org.Chem.9235，1944(化合物39)；G.W.Kabalka，J.Org.Chem.512386，1986；B.B.Carson等，Org.Synth.1179，1941(化合物43)；H.J.Bestman等，Justus Liebigs Ann.Chem.693132，1966(化合物39)；M.Miyano等，J.Org.Chem.37268，1972(化合物51)；W.H.Glaze等，J.Org.Chem.331987，1968(化合物52)。
方案12A X為NH、S和CH2的結(jié)構(gòu)12化合物分別按下述方案12B、12C和12D制備。
方案12B 方案12C 方案12D 方案13該方案及下述反應(yīng)用于制備具有結(jié)構(gòu)13的化合物，以及相關(guān)的用于在通式1化合物的R7和R8處引入氧、碳、氮或硫的化合物。制備化合物63的反應(yīng)物3-氯-2-甲基丙烯(reg.No.563-47-3)可以購得(例如從Aldrich，F(xiàn)luka)。
方案13 以下所示為制備化合物59及其類似物的方案，其中CH2、S或NH-CH2代替了氧。適合將化合物106轉(zhuǎn)化為107的反應(yīng)條件已經(jīng)有描述(T.Hamada等，雜環(huán)(Heterocycles)，12647，1979；T.Hamada等，J.Am.Chem.Soc.108140，1986)。 β-甲氧乙氧甲基氯化物(MEM-Cl) 如下所述，把具有以下結(jié)構(gòu)的化合物中的甲基酮部分(-C(O)-CH3)(R-C(O)-CH3)轉(zhuǎn)化成其它官能團(tuán)。使用例如Br2或I2的堿液切割甲基酮以產(chǎn)生一個(gè)羧基部分，
然后基本如文獻(xiàn)所述(S.J.Chakrabarty，《有機(jī)化學(xué)中的氧化》(Oxidations in Organic Chemistry)，Part C，W.Trahnnousy，editor，Academic Press，NY，1987，chapter 5；L. J.Smith等，Org.Synth.III302，1953)用酸處理，產(chǎn)生R-C(O)-OH。用LiAlH4將羧酸還原為醇。用例如Br2水將羧酸轉(zhuǎn)化為溴化物的過程基本如文獻(xiàn)所述(J.S.Meck等，Org.Synth.V，126，1973；A.Mckillop等，J.Org.Chem.341172，1969)。
用N-溴丁二酰亞胺對(duì)結(jié)構(gòu)11的化合物進(jìn)行溴化得到在7-位有溴的類固醇及其類似物。 將11A化合物脫保護(hù)以產(chǎn)生醛化合物12。如方案11所示，溴原子最終處于7-位。通過將類固醇與堿(如KOH水溶液)反應(yīng)可以把溴轉(zhuǎn)化為羥基，反過來再使用已知方法保護(hù)羥基，已知方法如使用C6H5-CH2-Br和堿(KOH)?；臼褂妹枋龅姆椒▽?duì)醇進(jìn)行保護(hù)和脫保護(hù)，例如請(qǐng)參見W.H.Hartung等，Org.React.7263，1953；E.J.Rerst等，J.Org.Chem.293725，1968；A.M.Felix等，J.Org.Chem.434194，1978；D.A.Evans等，J.Am.Chem.Soc.1016789，1979；國(guó)際申請(qǐng)WO98/02450。使用類似的反應(yīng)在其它位置將溴轉(zhuǎn)化為羥基。其它取代基如方案1-10所述連接到類固醇上。
還有其它適合在7-位引入官能團(tuán)的替代方案。例如，在5-6位置具有一個(gè)雙鍵，且7-位未取代的通式1化合物可以選擇性地保護(hù)，例如用乙酸酯保護(hù)羥基，以及通過文獻(xiàn)所述方法(USP2170124)使用鉻酸氧化在7-位上引入酮。使用溫和的條件如Al(O-iPr)3將7-位的羰基還原為羥基，以避免還原5-6位的雙鍵。使用強(qiáng)還原條件如LiBH4在THF中會(huì)把7-羰基轉(zhuǎn)化為羥基，并且還原5-6雙鍵以及分子中存在的其它雙鍵。
使用H2和Pd可以在16-17位對(duì)雙鍵進(jìn)行選擇加氫，而不會(huì)還原5-6位的雙鍵。一般來講，酮(＝O)可以使用二元醇進(jìn)行保護(hù)，例如在進(jìn)行隨后的氧化或還原反應(yīng)之前，在對(duì)甲苯磺酸和苯中酮與乙二醇發(fā)生反應(yīng)。
本文所述的多種可以構(gòu)成通式1化合物的基團(tuán)如鍵連到類固醇核上的羥基或酮或取代的烷基、取代的雜環(huán)、氨基酸和肽可以含有一個(gè)或多個(gè)活潑部分如羥基、羧基、氨基或硫醇。很明顯，在本技術(shù)中，用于制備通式1化合物的中間體也可以得到保護(hù)。非環(huán)以及環(huán)保護(hù)基以及相應(yīng)的切割反應(yīng)在《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基》(Protective Groups inOrganic Chemistry)，Theodora W.Greene(John Wiley&Sons，Inc.，NewYork，1991，ISBN 0-471-62301-6)(下文稱“Greene”)中有描述，這里不再詳細(xì)說明。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這些保護(hù)基可以從本發(fā)明分子上除去而不會(huì)不可逆地改變共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)或分子殘余部分的氧化/還原態(tài)。例如，鍵連到-O-或-NH-基團(tuán)上的保護(hù)-RPR可以除去以分別形成-OH或-NH2，而不會(huì)影響分子中的其它共價(jià)鍵。有時(shí)如果需要，可以一次除去不止一個(gè)保護(hù)基，或者它們可以按順序除去。在本發(fā)明的含有一個(gè)以上保護(hù)基的化合物中，保護(hù)基可以相同或不同。
盡管可以理解受保護(hù)的中間體也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，但保護(hù)基仍然可以通過已知的方法除去。保護(hù)基的去除可以是費(fèi)力的或者簡(jiǎn)單的，這取決于所涉及的轉(zhuǎn)化的經(jīng)濟(jì)因素和性質(zhì)。一般來講，在合成通式1化合物時(shí)，人們可以使用帶有環(huán)外的胺或羧基的保護(hù)基。對(duì)于大多數(shù)治療應(yīng)用，胺基應(yīng)該脫保護(hù)。通常使用保護(hù)基以在反應(yīng)如烷基化或酰化中保護(hù)敏感基團(tuán)以免發(fā)生共價(jià)改變。通常保護(hù)基通過例如水解、消除或氨解除去。因此，從官能性方面作簡(jiǎn)單的考慮就足以在本發(fā)明化合物的給定位置選擇一個(gè)可逆的或不可逆的保護(hù)基。合適的保護(hù)基及其選擇標(biāo)準(zhǔn)在T.W.Greene和P.G.Wuts編著的《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第二版，Wiley Press，10-142、143-174、175-223、224-276、277-308、309-405和406-454頁有描述。
確定一個(gè)基團(tuán)是否需要保護(hù)可通過常規(guī)方式進(jìn)行，如Kocienski，Philip J.的《保護(hù)基》(Protecting Groups)(Gerog Thieme Verlag Stuttgart，New York 1994)(下文稱“Kocienski”)，1.1部分，第2頁；以及Greene第1章，1-9頁中所述。特別是當(dāng)按摩爾比例，90％的保護(hù)基通過脫保護(hù)反應(yīng)除去，而低于50％，典型25％，更典型為10％的脫保護(hù)的本發(fā)明產(chǎn)物分子其共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)或氧化/還原態(tài)有所變化而非由去除保護(hù)基所引起時(shí)，該基團(tuán)就是一個(gè)保護(hù)基。當(dāng)一個(gè)分子中存在同種類型的多個(gè)保護(hù)基時(shí)，當(dāng)所有該類型的保護(hù)基都除去時(shí)可以確定摩爾比例。當(dāng)一個(gè)分子中存在多個(gè)不同類型的保護(hù)基時(shí)，每種類型的保護(hù)基單獨(dú)處理(并且摩爾比例可以確定)或與其它保護(hù)基一起處理，這取決于一種類型保護(hù)基的脫保護(hù)條件是否也適用于其它類型。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)按常規(guī)技術(shù)所確定的摩爾比例，90％的保護(hù)基通過常規(guī)脫保護(hù)反應(yīng)除去，而低于50％，典型25％，更典型為10％的脫保護(hù)的本發(fā)明產(chǎn)物分子其共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)或氧化/還原態(tài)發(fā)生不可逆變化而非由去除保護(hù)基所引起時(shí)，該基團(tuán)就是一個(gè)保護(hù)基。不可逆變化需要一定的化學(xué)條件(不包括那些由水解、酸/堿中和或常規(guī)的分離或提純的條件)以恢復(fù)本發(fā)明的脫保護(hù)的分子的共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)或氧化/還原態(tài)。
保護(hù)基與一般概念及其特殊使用方法在Kocienski，Philip J.的“Protecting Groups”(Georg Thieme Verlag Stuttgart，New York，1994)中有詳細(xì)描述，本文將其全部引作參考。具體內(nèi)容是第1章，保護(hù)基概述，1-20頁，第2章，羥基保護(hù)基，21-94頁，第3章，二醇保護(hù)基，95-117頁，第4章，羧基保護(hù)基，118-154頁，第5章，羰基保護(hù)基，155-184頁，第6章，氨基保護(hù)基，185-243頁，第7章，結(jié)尾，244-252頁，和附錄，253-260頁，這些內(nèi)容都結(jié)合了各自的特異性。更具體地，部分2.3甲硅烷基醚，2.4烷基醚，2.5烷氧基烷基醚(縮醛)，2.6綜述(羥基和硫醇保護(hù)基)，3.2縮醛，3.3亞甲硅烷基衍生物，3.41，1，3，3-四異丙基二亞甲硅氧烷基衍生物，3.5綜述(二醇保護(hù)基)，4.2酯，4.3 2，6，7-三氧二環(huán)[2.2.2]辛烷[OBO]及其它原酸酯，4.4噁唑啉，4.5綜述(羧基保護(hù)基)，5.2 O，O-縮醛，5.3 S，S-縮醛，5.4 O，S-縮醛，5.5綜述(羰基保護(hù)基)，6.2 N-酰基衍生物，6.3 N-磺酰基衍生物，6.4 N-亞磺酰基衍生物，6.5 N-烷基衍生物，6.6 N-甲硅烷基衍生物，6.7亞胺衍生物，以及6.8綜述(氨基保護(hù)基)，這些每一部分在其討論的對(duì)必要的官能團(tuán)保護(hù)和脫保護(hù)的內(nèi)容有其特異性。另外，在該書內(nèi)封面和翻面頁中的表格“主要保護(hù)基索引”、第14頁的縮寫以及第15頁的“試劑和溶劑”本文都將其完全引作參考。
在第14-118頁描述了典型的羥基保護(hù)基，其包括醚(甲基)；取代的甲醚(甲氧基甲基、甲基硫甲基、叔丁基硫甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基、芐氧基甲基、對(duì)甲氧基芐氧基甲基、(4-甲氧基苯氧基)甲基、愈創(chuàng)木酚甲基、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、二(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、四氫吡喃基、3-溴四氫吡喃基、四氫硫代吡喃基、1-甲氧基環(huán)己基、4-甲氧基四氫吡喃基、4-甲氧基四氫硫代吡喃基、4-甲氧基四氫硫代吡喃基S，S-二氧撐、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基、1，4-二氧雜環(huán)己烷-2-基、四氫呋喃基、四氫硫代呋喃基、2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氫-7，8，8-三甲基-4，7-亞甲基苯并呋喃-2-基)；取代的乙醚(1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-芐氧基乙基、1-甲基-1-芐氧基-2-氟乙基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、對(duì)氯苯基、對(duì)甲氧基苯基、2，4-二硝基苯基、芐基)；取代的芐基醚(對(duì)甲氧基芐基、3，4-二甲氧基芐基、鄰硝基芐基、對(duì)硝基芐基、對(duì)鹵代芐基、2，6-二氯芐基、對(duì)氰基芐基、對(duì)苯基芐基、2-和4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基-N-氧撐、二苯基甲基、對(duì)，對(duì)’-二硝基二苯甲基、5-二苯并環(huán)庚基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、對(duì)甲氧基苯基二苯基甲基、二(對(duì)甲氧基苯基)苯基甲基、三(對(duì)甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯甲酰甲氧基)苯基二苯基甲基、4，4’，4”-三(4，5-二氯苯二甲酰亞氨基)甲基、4，4’，4”-三(乙酰丙酰氧基苯基)甲基、4，4’，4”-三(苯酰氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基-甲基)二(4，4’-二甲氧基苯基)甲基、1，1-二(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)呫噸基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1，3-苯并二硫戊環(huán)-2-基、苯并異噻唑基、S，S-二氧撐)；甲硅烷基醚(三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、二甲基異丙基甲硅烷基、二乙基異丙基甲硅烷基、二甲基乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三芐基甲硅烷基、三對(duì)二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基)；酯(甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基-甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對(duì)氯苯氧基乙酸酯、對(duì)聚苯基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4，4-(亞乙基二硫)戊酸酯、六甲基丙酮酸酯、金剛烷二甲酸酯、丁烯酸酯、4-甲氧基丁烯酸酯、苯甲酸酯、對(duì)苯基苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯(酮酸酯)；碳酸酯(甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯基磺?；?乙基、2-(苯基磺?；?乙基、2-(三苯基磷鎓基)乙基、異丁基、乙烯基、烯丙基、對(duì)硝基苯基、芐基、對(duì)甲氧基芐基、3，4-二甲氧基芐基、鄰硝基芐基、對(duì)硝基芐基、S-芐基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基、甲基二硫代碳酸酯)；帶有輔助切割的組群(2-碘代苯甲酸酯、4-疊氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、鄰(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲?；交撬狨?、2-(甲基硫代甲氧基)乙基碳酸酯、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯)；雜酯(2，6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2，6-二氯-4-(1，1，3，3-四甲基-丁基)苯氧基乙酸酯、2，4-二(1，1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、異丁酸酯、丁二酸單酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯(惕各酸酯)、鄰(甲氧基羰基)苯甲酸酯、對(duì)聚苯甲酸酯、α-萘酸酯、硝酸酯、烷基N，N，N’，N’-四甲基二氨基磷酸酯、N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫代膦酸酯、2，4-二硝基-苯基氨基甲酸酯)；以及磺酸酯(硫酸酯、甲磺酸酯(甲磺酸酯)、芐基磺酸酯、甲苯磺酸酯(Tos)))。
更典型的羥基保護(hù)基包括取代的甲基醚、取代的芐基醚、甲硅烷基醚，和酯包括磺酸酯，更典型的，三烷基甲硅烷基醚、甲苯磺酸酯和乙酸酯。
典型的1，2-和1，3-二醇保護(hù)基在Greene的第118-142頁有描述，其包括環(huán)縮醛和縮酮(亞甲基、乙叉基、1-叔丁基乙叉基、1-苯基乙叉基、(4-甲氧基苯基)乙叉基、2，2，2-三氯乙叉基、丙酮化合物(異丙叉基)、環(huán)戊叉基、環(huán)己叉基、環(huán)庚叉基、芐叉基、對(duì)甲氧基芐叉基、2，4-二甲氧基芐叉基、3，4-二甲氧基芐叉基、2-硝基芐叉基)；環(huán)原酸酯(甲氧基亞甲基、乙氧基亞甲基、二甲氧基亞甲基、1-甲氧基乙叉基、1-乙氧基乙叉基、1，2-二甲氧基乙叉基、α-甲氧基芐叉基、1-(N，N-二甲基氨基)乙叉基衍生物、α-(N，N-二甲基氨基)芐叉基衍生物、2-氧代環(huán)戊叉基)；以及甲硅烷基衍生物(二叔丁基亞甲硅烷基、1，3-(1，1，3，3-四異丙基二亞甲硅烷氧基)衍生物、四叔丁氧基二甲硅烷氧基-1，3-二叉基衍生物、環(huán)碳酸酯、環(huán)硼酸酯、乙基硼酸酯、苯基硼酸酯)。
更典型的1，2-和1，3-二醇保護(hù)基包括環(huán)氧化物和丙酮化合物。
典型的氨基保護(hù)基在Greene的第315-385頁有描述，其包括氨基甲酸酯(甲基和乙基、9-芴基甲基、9-(2-硫代)芴基甲基、9-(2，7-二溴)芴基甲基、2，7-二叔丁基-[9-(10，10-二氧代-10，10，10，10-四氫硫代呫噸基)]甲基、4-甲氧基苯?；?；取代的乙基(2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-苯酰乙基、1-(1-金剛烷基)-1-甲基乙基、1，1-二甲基-2-鹵代乙基、1，1-二甲基-2，2-二溴乙基、1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基、1-甲基-1-(4-聯(lián)苯基)乙基、1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙基、2-(2’-和4’-吡啶基)乙基、2-(N，N-二環(huán)己基酰氨基)乙基、叔丁基、1-金剛烷基、乙烯基、烯丙基、1-異丙基烯丙基、肉桂基、4-硝基肉桂基、8-喹啉基、N-羥基哌啶基、烷基二硫、芐基、對(duì)甲氧基芐基、對(duì)硝基芐基、對(duì)溴芐基、對(duì)氯芐基、2，4-二氯芐基、4-甲基亞硫酰芐基、9-蒽基甲基、二苯基甲基)；帶有輔助切割的基團(tuán)(2-甲基硫乙基、2-甲基磺酰基乙基、2-(對(duì)甲苯磺?；?乙基、[2-(1，3-二亞硫酰)]甲基、4-甲基苯硫基、2，4-二甲基苯硫基、2-磷鎓基乙基、2-三苯基磷鎓基異丙基、1，1-二甲基-2-氰基乙基、間-氯-對(duì)-酰氧基芐基、對(duì)-(二羥基氧硼基)芐基、5-苯并異噁唑基甲基、2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基)；能夠光切割的基團(tuán)(間-硝基苯基、3，5-二甲氧基芐基、鄰硝基芐基、3，4-二甲氧基-6-硝基芐基、苯基(鄰硝基苯基)甲基)；脲型衍生物(吩噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N’-對(duì)甲苯磺?；被驶’-苯基氨基硫羰基)；各種氨基甲酸酯(叔戊基、S-芐基硫代氨基甲酸酯、對(duì)氰基芐基、環(huán)丁基、環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)丙基甲基、對(duì)癸氧基芐基、二異丙基甲基、2，2-二甲氧基羰基乙烯基、鄰(N，N-二甲基-酰胺)芐基、1，1-二甲基-3-(N，N-二甲基酰胺)丙基、1，1-二甲基丙炔基、二(2-吡啶基)甲基、2-呋喃基甲基、2-碘乙基、異冰片基、異丁基、異煙堿基、對(duì)-(對(duì)’-甲氧基苯偶氮基)芐基、1-甲基環(huán)丁基、1-甲基環(huán)己基、1-甲基-1-環(huán)丙基甲基、1-甲基-1-(3，5-二甲氧基苯基)乙基、1-甲基-1-(對(duì)-苯偶氮基苯基)乙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基、苯基、對(duì)-(苯偶氮基)芐基、2，4，6-三叔丁基苯基、4-(三乙基銨)芐基、2，4，6-三甲基芐基)；酰胺(N-甲酰、N-乙酰、N-氯乙酰、N-三氯乙酰、N-三氟乙酰、N-苯乙酰、N-3-苯基丙酰、N-甲基吡啶基、N-3-吡啶基羧酰胺、N-苯甲酰苯丙氨酰衍生物、N-苯甲酰、N-對(duì)苯基苯甲酰)；帶有輔助切割基團(tuán)的酰胺(N-鄰硝基苯乙酰、N-鄰硝基苯氧基乙酰、N-乙酰乙?；?、(N’-二硫代芐氧基羰基氨基)乙酰、N-3-(對(duì)羥基苯基)丙酰、N-3-(鄰硝基苯基)丙酰、N-2-甲基-2-(鄰硝基苯氧基)丙酰、N-2-甲基-2-(對(duì)苯偶氮基苯氧基)丙酰、N-4-氯丁酰、N-3-甲基-3-硝基丁酰、N-硝基肉桂酰、N-乙?；鞍彼嵫苌铩-鄰硝基苯甲酰、N-鄰(苯酰氧基甲基)苯甲酰、4，5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮)；環(huán)狀亞胺衍生物(N-鄰苯二甲酰亞胺、N-二硫代丁二酰、N-2，3-二苯基馬來?；-2，5-二甲基吡咯基、N-1，1，4，4-四甲基-二甲硅烷基氮雜環(huán)戊烷加成產(chǎn)物、5-取代的1，3-二甲基-1，3，5-三氮雜環(huán)己烷-2-酮、5-取代的1，3-二芐基-1，3，5-三氮雜環(huán)己烷-2-酮、1-取代的3，5-二硝基-4-吡啶酮基)；N-烷基和N-芳基胺(N-甲基、N-烯丙基、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基、N-3-乙酰氧基丙基、N-(1-異丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)、季銨鹽、N-芐基、N-二(4-甲氧基苯基)甲基、N-5-二苯并環(huán)庚基、N-三苯基甲基、N-(4-甲氧基苯基)二苯基甲基、N-9-苯基芴基、N-2，7-二氯-9-芴基亞甲基、N-二茂鐵基甲基、N-2-吡啶甲基胺N’-氧化物)；亞胺衍生物(N-1，1-二甲基硫代亞甲基、N-芐叉基、N-對(duì)甲氧基芐叉基、N-二苯基亞甲基、N-[(2-吡啶基)基]亞甲基、N-(N’，N’-二甲基氨基)亞甲基、N，N’-異丙叉基、N-對(duì)硝基芐叉基、N-鄰羥芐叉基、N-5-氯鄰羥芐叉基、N-(5-氯-2-羥基苯基)苯基亞甲基、N-環(huán)己叉基)；烯胺衍生物(N-(5，5-二甲基-3-氧代-1-環(huán)己基))；N-金屬衍生物(N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-[苯基(五羰基鉻或鎢)]羰基、N-銅或N-鋅螯合物)；N-N衍生物(N-硝基、N-亞硝基、N-氧化物)；N-P衍生物(N-二苯基氧膦基、N-二甲基硫代氧膦基、N-二苯基硫代氧膦基、N-二烷基磷?；?、N-二芐基磷?；?、N-二苯基磷?；?；N-Si衍生物；N-S衍生物；N-亞磺酰衍生物(N-苯硫基、N-鄰硝基苯硫基、N-2，4-二硝基苯硫基、N-五氯苯硫基、N-2-硝基-4-甲氧基苯硫基、N-三苯基甲基亞磺酰、N-3-硝基吡啶硫基)；和N-磺酰衍生物(N-對(duì)甲苯磺酰、N-苯磺酰、N-2，3，6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰、N-2，4，6-三甲氧基苯磺酰、N-2，6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰、N-五甲基苯磺酰、N-2，3，5，6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰、N-4-甲氧基苯磺酰、N-2，4，6-三甲基苯磺酰、N-2，6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰、N-2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫呋喃-6-磺酰、N-甲磺酰、N-β-三甲基甲硅烷基乙磺酰、N-9-蒽磺酰、N-4-(4’，8’-二甲氧基萘甲基)苯磺酰、N-芐基磺酰、N-三氟甲基磺酰、N-苯甲酰甲基磺酰)。
更典型的氨基保護(hù)基包括氨基甲酸酯和酰胺，更典型的包括N-乙酰基基團(tuán)。
能夠進(jìn)行生物切割的基團(tuán)典型包括前藥。在《前藥的設(shè)計(jì)》(Designof Prodrugs)，Hans Bundgaard(Elsivier，N.Y.，1985，ISBN 0-444-80675-X)(Bundgaard)中描述了大量的這種基團(tuán)，此處不作詳細(xì)介紹。特別是在Bundgaard的第1-92頁描述了前藥及其對(duì)于大量官能團(tuán)的生物切割反應(yīng)。在Bundgaardr的第3-10頁詳細(xì)描述了具有羧基和羥基的前藥，第10-27頁描述了酰胺、亞胺和其它NH-酸性化合物，第27-43頁為胺，第62-70頁為環(huán)狀前藥。這些部分任意鍵連到類固醇的R1-R6、R10、R15、R17和R18中的一個(gè)、二個(gè)或更多個(gè)上。
代謝物本文描述的這些化合物在體內(nèi)的代謝物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，在此程度上，本發(fā)明的這些產(chǎn)物比現(xiàn)有技術(shù)新穎且不顯著。例如這些產(chǎn)物可能是由于酶促或化學(xué)過程，進(jìn)入體內(nèi)的通式1化合物發(fā)生氧化、還原、水解、酰胺化、酯化等等而產(chǎn)生的。因此，本發(fā)明通過包括將本發(fā)明的一種化合物與患者例如人、嚙齒類動(dòng)物或靈長(zhǎng)類動(dòng)物接觸，在足夠產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的期間所產(chǎn)生的新穎的且不顯著的化合物。這樣的產(chǎn)物通常是通過以下過程來鑒定的制備一種帶有放射性標(biāo)記(例如14C、3H、131I、32P、35S或99Tc)的本發(fā)明化合物，然后非腸道對(duì)動(dòng)物如大鼠、小鼠、豚鼠、靈長(zhǎng)類或人給藥一可檢測(cè)的劑量(例如大于約0.5mg/kg)，經(jīng)過足夠長(zhǎng)的代謝時(shí)間(通常約30秒至30小時(shí))，然后從尿、血液或其它生物樣品中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。這些產(chǎn)物的分離很容易，因?yàn)樗鼈兌甲髁藰?biāo)記(其它的產(chǎn)物通過使用能夠與在代謝產(chǎn)物中存活的抗原決定簇結(jié)合的抗體進(jìn)行分離)。代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通過常規(guī)方法確定，例如通過MS、HPLC或NMR分析。對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，代謝產(chǎn)物的分析通常與常規(guī)藥物的新陳代謝研究采用同樣的方法。只要這些轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在體內(nèi)不能再發(fā)現(xiàn)，那么它們?cè)谟糜诒景l(fā)明化合物的治療劑量的診斷分析中就是有用的，即使它們本身并不具有治療活性。
用于制備制劑的配方和組合物盡管也可能單獨(dú)給藥活性組分，但通常都是以它們的藥物制劑形式給藥。本發(fā)明可用于獸和人的制劑包含至少一種活性組分如通式1化合物和一種或多種可接受的賦形劑，以及其它治療組分。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種包含一種或多種藥用賦形劑或載體的組合物。一種或多種通式1化合物(也就是所說的“活性組分”)通過任何適用于要接受治療的疾病的途徑給藥。適用于非水溶液液體制劑和其它通式1化合物的制劑的給藥途徑包括口服、直腸、鼻用、局部(包括口腔和舌下)、陰道和非腸道(包括皮下、肌肉、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)。非水溶液液體制劑通常是通過一種非腸道途徑給藥的。在其它實(shí)施方案中，如本發(fā)明的間歇式給藥方法，通式1化合物可以一種非溶液液體制劑，一種干燥的固體制劑其可以是口服、局部、非腸道制劑，或一種可以非腸道、口服或局部使用的水溶液液體制劑的形式存在?？梢岳斫鈨?yōu)選的途徑例如可以隨患者的病理狀況或體重或患者對(duì)用通式1化合物進(jìn)行的治療或其它合適的治療所作出的的反應(yīng)而變化。
制劑包括適用于上述給藥途徑的那些。制劑可以方便地以單位劑量形式存在，并可以通過在制藥領(lǐng)域已知的任何技術(shù)制備。通常可以在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA1985，17版，和Nema等，PDA J.Pharm.Sci.Tech.1997，51166-171中找到有關(guān)技術(shù)、賦形劑和制劑的內(nèi)容。制備本發(fā)明制劑的方法包括把活性組分與賦形劑結(jié)合的步驟。通常制劑的制備方法為將活性組分與液體賦形劑或固體賦形劑細(xì)粉或兩種賦形劑均勻地、緊密地結(jié)合，然后如果合適，使產(chǎn)品成形。
本發(fā)明適合口服給藥的制劑制備成分散的單元，如每單元含有預(yù)定量活性組分的膠囊、扁囊劑和片劑；如粉劑或粒劑；如在水中或非水液體中的溶液或懸浮液；或如水包油乳液或油包水乳液?；钚越M分也可以塊劑、干藥糖劑或糊劑的形式提供。
通過擠壓或模壓制造選擇性帶有一種或多種輔助組分的片劑。在一臺(tái)合適的機(jī)器里，通過擠壓以自由流動(dòng)形式如粉末或顆粒，并選擇性與一種粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的活性組分，來制造壓縮的片劑。在一臺(tái)合適的機(jī)器里，通過模壓濕潤(rùn)的粉末狀活性組分與一種惰性稀釋劑的混合物制造模壓片劑。片劑可以選擇性包衣或打標(biāo)記，并選擇性配制以提供緩釋或控釋的活性組分。
對(duì)于眼睛或其它外部組織如嘴和皮膚感染，制劑通常是以含有活性組分的局部軟膏劑或乳膏的形式施用，活性組分的量例如0.075-20重量％(包括范圍為0.1-20重量％，增量為0.1重量％的活性組分，如0.6重量％、0.7重量％等)通常為0.2-15重量％，最通常為0.5-10重量％。當(dāng)為軟膏劑形式時(shí)，活性組分可以與石蠟或與水混溶的軟膏基料一起施用。作為選擇，活性組分也可以與水包油乳膏基料配制成乳膏劑。
如果需要，乳膏基料的水相可以包含例如至少30重量％的多羥基醇，即具有兩或兩個(gè)以上羥基的醇如丙二醇、1，3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)及其混合物。局部制劑可以按需要包含一種增強(qiáng)活性組分的吸收或透過皮膚或其它染病部位的化合物。皮膚透過增強(qiáng)劑的例子包括二甲亞砜和有關(guān)的類似物。
本發(fā)明乳液的油相可以以已知的方式由已知的賦形劑組成。盡管油相可以僅僅包含一種乳化劑(另有利泄劑)，但按照需要，它可以包含至少一種乳化劑與脂肪或油的一種或兩種組成的混合物?？梢砸黄鸢杏H水的乳化劑與親油的乳化劑，后者起穩(wěn)定劑的作用。某些實(shí)施方案同時(shí)含有油和脂肪。乳化劑與穩(wěn)定劑一起或不加穩(wěn)定劑組成所謂的乳化蠟，蠟與油和脂肪一起組成所謂的乳化軟膏基料，該基料形成乳膏制劑的油狀分散相。
適用于本發(fā)明制劑的利泄劑和乳化穩(wěn)定劑包括Tween60TM、Span80TM、十六醇十八醇混合物、芐醇、十四烷醇、一硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸鈉。
選擇用于制劑的合適的油或脂肪的依據(jù)是達(dá)到所需要的美容特性。乳膏劑通常是非油性的、非著色的和可洗去的產(chǎn)品，其具有合適的稠度以防止從管或其它容器中漏出?？梢允褂弥辨湹幕蛑ф湹囊换蚨榛ト缍惣憾狨?、硬脂酸異十六烷醇酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、十四酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或稱為Crodamol CAP的支鏈酯的混合物。這些物質(zhì)的單獨(dú)使用或混合使用取決于所需要的特性。作為選擇，可以使用高熔點(diǎn)脂類如白軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適于對(duì)眼睛進(jìn)行局部給藥的制劑還包括滴眼劑，其中活性組分溶解或懸浮在一種合適的賦形劑中，特別是一種用于在pH值接近中性如約6-8時(shí)帶有一個(gè)或多個(gè)電荷的活性組分的含水溶劑。在這種制劑中活性組分的含量典型為約0.5-20重量％，典型為約1-10重量％，通常為約2-5重量％。
適用于嘴中局部給藥的制劑包括在調(diào)味基料通常為蔗糖和阿拉伯樹膠或黃芪膠中含有活性組分的錠劑；在惰性基料如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯樹膠中含有活性組分的軟錠劑；以及在一種合適的液體賦形劑中含有活性組分的漱口藥。
直腸給藥的制劑可以帶有合適的基料的栓劑的形式提供，基料中含有例如可可油或水楊酸酯。
適于肺內(nèi)給藥或鼻內(nèi)給藥的制劑其顆粒尺寸范圍例如為0.01-500微米(包括平均顆粒尺寸范圍為0.01-500微米，增量為0.1微米或其它數(shù)值如0.05、0.1、0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6、7、8、9、10、20、25、30、35、50、75、100等微米的顆粒)，顆粒通過經(jīng)由鼻腔快速吸入或經(jīng)由口腔吸入以到達(dá)肺泡囊。合適的微粉化的制劑包括活性組分的水或油溶液或懸浮液。適用于氣霧劑、干粉或片劑給藥的制劑可以根據(jù)常規(guī)方法制造，并且可以與其它治療試劑如此前用于治療或預(yù)防病毒或其它如本文所述的感染的化合物一起提供。這種制劑可以通過例如口服、非腸道(i.v.、i.m.、s.c.)、局部或口腔途徑給藥。
適用于陰道給藥的制劑可以陰道栓劑、棉塞、乳膏劑、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧劑的形式提供，除活性組分外，其還含有在本領(lǐng)域中已知適用的賦形劑。
適于非腸道給藥的制劑包括水溶液或非水溶液無菌注射溶液，其可以含有抗氧劑、緩沖劑、抑菌劑以及使制劑與預(yù)期的受體血液等滲的溶質(zhì)；以及可以含有懸浮劑和增稠劑的水溶液或非水溶液無菌懸浮液。
制劑以單位劑量或多劑量容器例如密封的安瓿和小瓶提供，并且可以儲(chǔ)存在冰干(凍干)條件下，在使用前僅僅需要加入無菌液體賦形劑如注射用水。可以由無菌、顆粒以及前述的片劑制備臨時(shí)使用的注射用溶液或懸浮液。如本文所述，單位劑量制劑是指含有每日劑量或一日多次劑量或其適當(dāng)部分的活性組分的制劑。
應(yīng)當(dāng)理解除了以上具體敘述的組分，考慮到所討論的制劑類型，本發(fā)明制劑可以包括其它在本領(lǐng)域常用的試劑或賦形劑，例如那些適用于口服給藥的制劑可以含有調(diào)味劑。
本發(fā)明還提供含有至少一種上述活性組分以及一種獸用賦形劑的獸用組合物。獸用賦形劑是適用于給藥該組合物目的的物質(zhì)，其可以是固體、液體或氣體物質(zhì)，另外在獸用領(lǐng)域中其是惰性的或可接受的，并且與活性組分相容。這些獸用組合物可通過口服、非腸道或任何其它所需途徑給藥。
本發(fā)明制劑包括含有活性組分控釋藥物制劑(“控釋制劑”)，其中活性組分的釋放是受到控制和調(diào)節(jié)的，這樣就允許減少給藥的頻率或提高給定活性組分的藥物動(dòng)力學(xué)或毒性分布。
有效劑量的活性組分至少取決于所治療病癥的本質(zhì)、毒性、化合物是用于預(yù)防(較低劑量)還是抵御現(xiàn)存的感染或疾病、給藥的方式以及藥物制劑，并且由臨床醫(yī)生通過常規(guī)劑量放大研究確定。人們認(rèn)為有效劑量可以從約0.05-約30mg/kg體重/天。例如，對(duì)于局部給藥，一個(gè)體重大約70kg的成年人每天選擇的劑量范圍從約1mg-約500mg，通常約5mg-約40mg，并且根據(jù)給藥部位可以采用單劑量或多劑量形式。
實(shí)施方案包括含有脂質(zhì)體或脂類復(fù)合體的制劑，脂類復(fù)合體中含有通式1化合物如BrEA或其酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、氨基酸或肽。這種制劑按照已知方法制備，如美國(guó)專利USP4427649、5043165、5714163、5744158、5783211、5795589、5795987、5798348、5811118、5820848、5834016和5882678。脂質(zhì)體選擇性含有另外一種治療試劑，如兩性霉素B、順鉑、阿霉素、蛋白酶抑制劑、核苷或核苷酸類似物如本文所提到的那些。含有脂質(zhì)體的制劑可以通過任何一種標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)患者給藥，如口服、氣霧劑或非腸道(如s.c.、i.v或i.m.)。
治療應(yīng)用通式1化合物或由這些化合物通過水解或體內(nèi)的新陳代謝所產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)具有大量臨床和非臨床用途。該化合物通常用于增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)或減少Th2免疫反應(yīng)。本文所使用的Th1或Th2免疫反應(yīng)是指通常在哺乳動(dòng)物中但不是在鼠類動(dòng)物系統(tǒng)中所觀察到的反應(yīng)，術(shù)語Th1和Th2是從鼠類動(dòng)物中來的。因此，在人類中，Th1細(xì)胞優(yōu)先顯示趨化因子受體CXCR3和CCR5，而Th2細(xì)胞優(yōu)先表達(dá)CCR4分子以及更少量的CCR3分子。
本發(fā)明的方面包括含有至少一種通式1的化合物以及藥學(xué)可接受載體的組合物，通式1化合物的含量能有效增加所期望的免疫細(xì)胞子集如CD4+T細(xì)胞、NK(自然殺傷淋巴細(xì)胞)細(xì)胞或樹突細(xì)胞的相對(duì)比例或調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞子集一種或多種功能。典型的免疫調(diào)節(jié)以調(diào)節(jié)增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)或減弱Th2免疫反應(yīng)的基因的表達(dá)為主要內(nèi)容。通式1化合物的作用包括CD分子的表達(dá)或改變細(xì)胞子集如CD4+或CD8+的比例或其在患者血液或組織中的相對(duì)數(shù)量。CD分子參與多種免疫細(xì)胞子集的作用，并且可以用作體內(nèi)免疫功能的指示器。在某些方面，通式1化合物激活通常改變(增加或減少)細(xì)胞的表達(dá)或改變細(xì)胞的數(shù)量的免疫細(xì)胞，數(shù)量發(fā)生改變的細(xì)胞表達(dá)CD4、CD6、CD8、CD25、CD27、CD28、CD30、CD38、CD39、CD43、CD45RA、CD45RO、CD62L、CD69、CD71、CD90或HLA-DR分子的組合。通常表達(dá)這些分子如CD25、CD16或CD69的細(xì)胞的數(shù)目是增加的。通常觀察到的這種增加是表達(dá)這些分子的一種或多種的循環(huán)白細(xì)胞比例的增加。在某些情況下，可以發(fā)覺每細(xì)胞這種分子的數(shù)目是改變的。
在對(duì)患者給用通式1化合物后，粘連分子CD2、CD5、CD8、CD11a、CD11b、CD11c、CD18、CD29、CD31、CD44、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、CD50、CD54、CD58、CD103或CD104的一種或多種的表達(dá)也可發(fā)覺發(fā)生了改變。通常表達(dá)這些分子如CD5或CD56的細(xì)胞的數(shù)目是增加的。免疫反應(yīng)的多個(gè)方面中粘連分子的功能有如連接到第一類MHC分子上、在細(xì)胞間轉(zhuǎn)換信號(hào)或連接到在與內(nèi)皮或其它類型細(xì)胞相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞外基質(zhì)中的分子上。對(duì)患者給用通式1化合物還會(huì)影響某些免疫細(xì)胞子集如NK細(xì)胞(如CD8-、CD56+或CD8+、CD56+)或淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)的數(shù)目。通常可以觀察到循環(huán)NK或LAK細(xì)胞數(shù)目的增加，這體現(xiàn)在表達(dá)CD16、CD38、CD56、CD57或CD94的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞數(shù)目的增加。還可觀察到循環(huán)樹突細(xì)胞前體數(shù)目的增加，其顯示為表達(dá)CD11c、CD80、CD83、CD106或CD123的一個(gè)或多個(gè)的細(xì)胞數(shù)目的增加。盡管人們能夠觀察到表達(dá)這些分子的一個(gè)或多個(gè)的循環(huán)白血細(xì)胞比例的增加，在某些情況下，可以發(fā)現(xiàn)每細(xì)胞這些分子的數(shù)目發(fā)生改變。細(xì)胞數(shù)目和每細(xì)胞CD分子的密度都能夠進(jìn)行可測(cè)調(diào)節(jié)。免疫細(xì)胞子集的調(diào)節(jié)通常是在間歇式給藥通式1化合物時(shí)發(fā)生的。
在給患者施用通式1化合物后，可以發(fā)覺一個(gè)或多個(gè)歸巢受體如CD62L的表達(dá)也受到了影響。通常表達(dá)這些分子如CD62L的細(xì)胞數(shù)目是增加的。
其它由于在患者體內(nèi)存在通式1化合物而受到調(diào)節(jié)的CD分子包括細(xì)胞因子分子如CD115、CDW116、CD117、CD118、CDW119、CD120a、CD120b、CD121a、CD121b、CD122、CD123、CD124、CD125、CD126、CDW127、CDW128或CDW130。通常每細(xì)胞受體分子的數(shù)目可以調(diào)節(jié)。例如用于調(diào)節(jié)Th1免疫反應(yīng)(如IL-2、γIFN)的細(xì)胞因子的受體通常在調(diào)節(jié)Th1免疫反應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞上增加。調(diào)節(jié)這些分子可以通過調(diào)節(jié)在受影響細(xì)胞或其它細(xì)胞，通常為免疫細(xì)胞，內(nèi)的細(xì)胞因子合成，而直接或間接與細(xì)胞內(nèi)表達(dá)細(xì)胞因子受體的受體配合。免疫細(xì)胞可以與受體合成受到調(diào)節(jié)的細(xì)胞配合。
用通式1化合物治療患者會(huì)引起某些免疫細(xì)胞子集的對(duì)照或基礎(chǔ)水平以上或以下至少25-50％的變化(如至少30％或至少40％以上或以下)。例如，通常在對(duì)患者給藥單劑量的通式1化合物7天后，被激活的CD8+細(xì)胞如CD8+、CD69+、CD25+T細(xì)胞、CD8+、CD69+、CD25-T細(xì)胞或CD8+、CD69-、CD25+T細(xì)胞的總數(shù)目會(huì)增加超過約30％。個(gè)別患者被激活的CD8+細(xì)胞或被激活的CD8+細(xì)胞的子集的總數(shù)目的增加可能會(huì)超過50％、60％或100％。通常被激活的CD8+細(xì)胞或被激活的CD8+細(xì)胞的子集的總數(shù)目的增加范圍為約30-40％，但個(gè)別患者相對(duì)于基礎(chǔ)水平，其每單位血液體積內(nèi)被激活的CD8+細(xì)胞的數(shù)目的增加會(huì)超過100％。
給藥通式1化合物能夠影響其它免疫細(xì)胞子集。例如，在患者服用通式1化合物期間或給藥后，循環(huán)CD4+、CD69+、CD25-(Th1輔助細(xì)胞)和CD8+、CD16+、CD38+LAK細(xì)胞或CD8-、CD16+、CD38+LAK細(xì)胞的濃度通常會(huì)增加。而CD8-、CD16+、CD38+和CD8+、CD16+、CD38+(ADCC效應(yīng)細(xì)胞)和低側(cè)向散布Lin-、DR+、CD123+(樹突細(xì)胞前體)或低側(cè)向散布Lin-、DR+、CD11c+(樹突細(xì)胞或前體)可能顯示出適度或明顯的增加。
在受到免疫抑制，例如由感染(如病毒(HIV、HCV)、細(xì)菌感染或寄生蟲感染)或化療(例如抗病毒化療、癌癥化療或放射化療)引起免疫抑制的患者中給用通式1化合物，Th1或Th2反應(yīng)的平衡會(huì)發(fā)生可喜的轉(zhuǎn)變，患者可以抵御免疫抑制作用。當(dāng)Th1反應(yīng)未達(dá)最理想或不足時(shí)，用通式1化合物治療患者可使Th1反應(yīng)增強(qiáng)或Th2反應(yīng)減弱。相反，當(dāng)Th2未達(dá)最理想或不足時(shí)，用通式1化合物治療患者可使Th2反應(yīng)增強(qiáng)或Th1反應(yīng)減弱。因此，通式1化合物可用于改變患者的免疫反應(yīng)的性質(zhì)以在受到免疫抑制時(shí)達(dá)到更加平衡的免疫反應(yīng)。作為選擇，通式1化合物可以有選擇性地抑制不適當(dāng)?shù)幕虿幌胍拿庖叻磻?yīng)?？雌饋恚鰪?qiáng)的Th1反應(yīng)至少部分是由以下因素的一個(gè)或幾個(gè)引起的(i)生物制約減少，例如高水平的IL-4或IL-10通過預(yù)先存在的最初Th1效應(yīng)細(xì)胞影響Th1功能；(ii)Th0細(xì)胞與Th1細(xì)胞的分化增強(qiáng)或被Th1細(xì)胞調(diào)節(jié)的反應(yīng)增強(qiáng)；(iii)輔助細(xì)胞功能增強(qiáng)，例如抗原通過樹突前體細(xì)胞或巨噬細(xì)胞顯示；(iv)Th1前體或祖細(xì)胞的增殖或分化增強(qiáng)；(v)樹突細(xì)胞或其前體中的IL-12表達(dá)增強(qiáng)，這導(dǎo)致由Th0前體的Th1細(xì)胞分化增強(qiáng)；(vi)與Th1功能如IL-2、γ干擾素(γIFN)或淋巴毒素相關(guān)聯(lián)的因子的表達(dá)或活性增強(qiáng)。
本發(fā)明方法的一個(gè)方面是在給患者施用通式1化合物如BrEA后，改變IL-4或IL-10的表達(dá)。并同時(shí)觀察到細(xì)胞外的IL-4或IL-10水平迅速減少到ELISA不可檢測(cè)的水平。細(xì)胞內(nèi)IL-10水平減少到接近或低于流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)的檢出限。因此對(duì)患者施用通式1化合物就提供了一種抑制白介素任一者或兩者的方法。這種抑制可能與例如Th1反應(yīng)受到抑制(如由病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染(HIV、HCV等)或化療引起)或未達(dá)最理想時(shí)的患者，其相對(duì)于Th2或Th0反應(yīng)增強(qiáng)的Th1免疫反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。在許多患者中，服用通式1化合物以前，其IL-4或IL-10，通常是IL-10的水平很低或不可檢測(cè)。在這些患者中，服用通式1化合物會(huì)導(dǎo)致可以檢測(cè)的白介素(通常是IL-4)水平的快速下降。
在某些實(shí)施方案中，對(duì)患有病原體感染如病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染的患者給藥通式1化合物?？梢哉J(rèn)為通式1化合物適用的感染范圍很廣(例如請(qǐng)參見J.B.Peter編著的《傳染病實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)的使用和說明》(Use and Interpretation of Laboratory Tests in Infectious Disease)，第5版，Specialty Laboratories，Santa Monica，CA 90404，1998，第1-271頁)，這是因?yàn)樵摶衔锿ǔＤ軌蛟鰪?qiáng)Th1免疫反應(yīng)和/或減弱Th2免疫反應(yīng)。治療這些感染所遇到的困難如進(jìn)行性弓形蟲腦炎、瘧疾、肺結(jié)核、利什曼病和血吸蟲病看來通常都與不需要的Th2免疫反應(yīng)有關(guān)。通常不需要的Th2免疫反應(yīng)與細(xì)胞因子或白介素如IL-4和IL-10的一種或多種的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)，或由其引起。給藥通式1化合物或本文公開的其它化合物，一般都會(huì)減弱與Th2有關(guān)的一種或多種細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)。同時(shí)，該化合物也增強(qiáng)與Th1免疫反應(yīng)有關(guān)的一種或多種細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)。由于具有調(diào)節(jié)Th1和Th2免疫反應(yīng)的能力，這些化合物對(duì)許多臨床疾病如感染、免疫抑制或癌癥很有用，這些疾病都需要增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)。例如，對(duì)播散性或擴(kuò)散性結(jié)核，就需要減弱Th2免疫反應(yīng)以使患者疾病的發(fā)展減慢或更有效地清除受感染的細(xì)胞。
本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一些實(shí)施方案，其中對(duì)患者給藥通式1化合物和谷胱甘肽還原酶抑制劑如谷胱甘肽磺基肟[CH3-(CH2)3-S(＝O)(＝NH)-(CH2)2-CHNH2-C(O)OH]以治療感染如寄生蟲感染如瘧疾、弓形蟲、隱孢子蟲屬或治療癌癥或惡性腫瘤。減少還原谷胱甘肽的供給可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的噬菌作用，這可能是由增強(qiáng)了受感染細(xì)胞或正在復(fù)制的惡性細(xì)胞中的氧化性破壞引起的。另一方面，使用谷胱甘肽還原酶抑制劑可以使得免疫系統(tǒng)對(duì)受感染的或惡性細(xì)胞的識(shí)別增強(qiáng)。例如相對(duì)于單獨(dú)使用通式1化合物，通式1化合物如BrEA和谷胱甘肽磺基肟一起使用以加強(qiáng)從受感染細(xì)胞中清除環(huán)形期瘧疾或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)惡性細(xì)胞的識(shí)別。其中施用這些實(shí)施方案的感染和惡性腫瘤如本文所述。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是使用一種通式1化合物和一種類黃酮如naragin類黃酮以增強(qiáng)通式1化合物的生物利用率。在這些實(shí)施方案中，把有效量的類黃酮施用給已經(jīng)接受通式1化合物的患者。通常給患者的施用量為1-10mg類黃酮/kg體重，類黃酮如甲基補(bǔ)骨酯甲素A、香蜂草苷(異櫻花素-7-蕓香苷或新枸桔苷)、黃馬諾苷(異闊葉合歡查爾酮-7-葡萄糖苷)、黃烷酮吖嗪、黃烷酮二乙酰基腙、黃烷酮腙、水飛薊素、水飛薊亭、異水飛薊素或silandrin。類黃酮化合物通常與通式1化合物一起施用給患者或在通式1化合物施用給患者之前幾個(gè)小時(shí)如約1、2或3個(gè)小時(shí)后施用給患者。
脂質(zhì)體制劑可以用以加強(qiáng)通式1化合物輸送到某些細(xì)胞類型如腫瘤細(xì)胞(例如請(qǐng)參見USP5714163)或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)細(xì)胞。RES包括巨噬細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、脾臟竇狀隙、淋巴結(jié)和骨髓的襯細(xì)胞以及造血組織的成纖維狀的網(wǎng)狀細(xì)胞。RES細(xì)胞一般是吞噬細(xì)胞，并且是使用脂質(zhì)體或其它組合物或制劑在體內(nèi)或體外定位輸送通式1化合物的目標(biāo)。因此，人們可以把通式1化合物輸送到由網(wǎng)狀組織發(fā)展成的瘤(網(wǎng)狀內(nèi)皮瘤)。脂質(zhì)體也可以選擇性地含有一種來自傳染物如瘧疾寄生蟲的肽。該肽可以促進(jìn)產(chǎn)生第二級(jí)MHC和B細(xì)胞反應(yīng)。
疫苗佐劑本文所公開的化合物也可以用作免疫原的疫苗佐劑或免疫原組合物的組分以制備能夠特異與通式1化合物、其保留免疫學(xué)識(shí)別的抗原決定簇(抗體結(jié)合的位置)的代謝產(chǎn)物或用于接種抵抗如傳染物或惡性細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)抗原相結(jié)合的抗原。因此免疫原組合物用作制備與通式1化合物結(jié)合的抗體的中間體，用于如診斷、質(zhì)量控制等方法，或用于分析該化合物或其新型代謝產(chǎn)物。另外，該化合物對(duì)提高抗體抵抗其它非免疫原的多肽方面也是有用的，因?yàn)樵摶衔锟梢杂米鞔碳っ庖叻磻?yīng)不完全抗原部位。
所關(guān)心的水解產(chǎn)物包括上述水解受保護(hù)的酸性和堿性基團(tuán)的產(chǎn)物。在某些實(shí)施方案中，含有免疫原多肽如白蛋白、匙孔血藍(lán)蛋白以及下述其它多肽的酸性或堿性酰胺通常用作免疫原。上述代謝產(chǎn)物可能保留有相當(dāng)程度與本發(fā)明化合物的免疫交叉反應(yīng)性。因此，本發(fā)明的抗體能夠結(jié)合到未加保護(hù)的本發(fā)明化合物上而不結(jié)合到受保護(hù)的化合物上；另一方面，代謝產(chǎn)物能夠結(jié)合到受保護(hù)的化合物上和/或代謝產(chǎn)物不結(jié)合到本發(fā)明受保護(hù)的化合物上，或能夠特異結(jié)合于任何一種或三種物質(zhì)上。合乎需要的是抗體基本上不會(huì)與天然存在的物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。顯著的交叉反應(yīng)性是指在特定分析的特定分析條件下，足以干擾分析的反應(yīng)性。
本發(fā)明免疫原包括本發(fā)明表現(xiàn)為與免疫原物質(zhì)相關(guān)聯(lián)的所需要的抗原決定簇的化合物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這種關(guān)聯(lián)是指共價(jià)鍵合以形成一種免疫原結(jié)合物(合適時(shí))或非共價(jià)鍵合物質(zhì)的混合物或上述的組合。免疫原物質(zhì)包括佐劑如弗羅因德佐劑、免疫原蛋白質(zhì)以及免疫原多糖，免疫原蛋白質(zhì)如病毒、細(xì)菌、酵母、植物和動(dòng)物多肽特別是匙孔血藍(lán)蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。具有所需要的抗原決定簇結(jié)構(gòu)的化合物通常是通過使用一種多官能團(tuán)(通常為雙官能團(tuán))交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合到一種免疫多肽或多糖上。制備半抗原免疫原的方法本身是常規(guī)方法?？紤]到可用作交聯(lián)的前體或水解產(chǎn)物上的官能團(tuán)以及產(chǎn)生與免疫原物質(zhì)相對(duì)的特異于所述的抗原決定部位的抗體的可能性，在此以前任何用于把半抗原結(jié)合到免疫多肽等上的方法都很合適用在這里。
通常多肽結(jié)合在本發(fā)明化合物上的部位與要識(shí)別的抗原決定簇相距較遠(yuǎn)。
結(jié)合物以常規(guī)方式制備。例如，交聯(lián)劑N-羥基丁二酰亞胺、丁二酸酐或C2-8烷基-N＝C＝N-C2-8烷基用于制備本發(fā)明的結(jié)合物。該結(jié)合物包含一種本發(fā)明化合物，它通過一個(gè)鍵或一個(gè)具有1-100個(gè)典型為1-25個(gè)更典型為1-10碳原子的連接基團(tuán)結(jié)合到免疫原物質(zhì)上。該結(jié)合物通常色譜法等與起始物質(zhì)及副產(chǎn)物分離，然后經(jīng)無菌過濾后儲(chǔ)存于小瓶中。已經(jīng)描述了制備半抗原-載體免疫原的合成方法，例如請(qǐng)參見G.T.Hermanson的《生物結(jié)合技術(shù)》(Bioconjugate Techniques)，AcademicPress，1996，第419-493頁。
本發(fā)明的化合物是通過例如下述任何一種基團(tuán)交聯(lián)的羥基、羧基、碳原子或胺基。多肽的酰胺包括在這類化合物中，其中多肽用作上述保護(hù)基。
動(dòng)物通常對(duì)于免疫原結(jié)合物或衍生物以及以常規(guī)技術(shù)制備的抗血清或單克隆抗體具有免疫。
在通式1化合物用作增強(qiáng)患者對(duì)于抗原例如蛋白質(zhì)、肽或病毒或細(xì)胞制品的免疫反應(yīng)的實(shí)施方案中，通式1化合物大約與抗原同時(shí)施用給患者，如在抗原施用給患者的約7天之內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，通式1化合物在抗原施用給患者之前的1、2、3或4天施用。在其它的實(shí)施方案中，通式1化合物與抗原在同一天施用給患者。在另外的實(shí)施方案中，通式1化合物在抗原施用給患者之后1、2或3天施用給患者。通式1化合物可以使用本文所述的或引用的參考文獻(xiàn)中的任何一種制劑或給藥方法施用給患者。本發(fā)明的方面包括含有一種通式1化合物、一種或多種賦形劑以及一種抗原或抗原制品如破裂的細(xì)胞或病毒或如減毒的病毒或DNA疫苗的組合物或制劑。
相關(guān)的實(shí)施方案包括一種方法，它包括把有效量的通式1化合物和一種特異抗原施用給患者(如哺乳動(dòng)物如人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物)或輸送到患者的組織。這些方法能夠增強(qiáng)于抗原的免疫反應(yīng)。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)包括對(duì)于例如蛋白質(zhì)、肽、多糖、微生物、腫瘤細(xì)胞提取物或致命放射狀腫瘤或病原體細(xì)胞(如來自黑素瘤、腎細(xì)胞癌、乳腺癌、前列腺癌、良性前列腺增生、病毒或細(xì)菌，或本文描述的其它腫瘤或病原體的抗原或細(xì)胞)的抗原的粘膜免疫反應(yīng)。這些實(shí)施方案的方面包括當(dāng)抗原或免疫原經(jīng)鼻內(nèi)或口服施用給患者時(shí)，能夠增強(qiáng)患者的免疫反應(yīng)。在這些方面，通式1化合物大約與抗原同時(shí)施用或在抗原施用的約3-72小時(shí)內(nèi)施用。已經(jīng)描述了使用免疫調(diào)節(jié)試劑以增強(qiáng)對(duì)疫苗的免疫反應(yīng)，例如請(qǐng)參見USP5518725。
通式1化合物的其它用途包括把化合物施用給患病的患者。這種處理可以治療或改善疾病的源頭和/或與病理狀況相關(guān)聯(lián)的癥狀，病理狀況如病原體(病毒、細(xì)菌、真菌)感染、惡性腫瘤、不需要的免疫反應(yīng)。不需要的免疫反應(yīng)即引起病理和/或癥狀的免疫反應(yīng)，如自免疫疾病或過敏癥或疾病例如增殖不足疾病如正常的或受損的組織生長(zhǎng)或傷口愈合或燒傷愈合，或免疫抑制疾病如特征為沒有所需要的反應(yīng)和/或所需要的反應(yīng)不足的疾病。
許多癌癥或惡性腫瘤與有害的Th2免疫反應(yīng)或缺乏Th1反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。Th1免疫反應(yīng)不足可能使得惡性細(xì)胞能夠避開免疫監(jiān)視。這些疾病包括非小細(xì)胞肺癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌或腫瘤、淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、胰腺癌或胃腺癌、與人類乳頭瘤病毒屬有關(guān)的子宮頸上皮內(nèi)瘤形成、頸癌、肝臟腫瘤以及皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(蕈樣肉芽腫、塞澤里綜合癥)。
在某些這種實(shí)施方案中，患者的過度增殖疾病或惡性疾病可能與一種或多種病原體有關(guān)。例如肝臟細(xì)胞癌與HCV或HBV有關(guān)、卡波濟(jì)氏肉瘤與HIV-1或HIV-2有關(guān)、T細(xì)胞白血病與HTLV1有關(guān)、伯基特氏淋巴瘤與埃巴病毒有關(guān)、或乳頭瘤或癌與乳頭瘤病毒(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV45)有關(guān)或胃腺癌或胃MALT淋巴瘤與幽門螺桿菌感染有關(guān)。在其它實(shí)施方案中，通式1化合物施用給患有看來似乎與病原體如咽喉、食道、胃、腸、結(jié)腸、卵巢、肺、乳房或中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)的黑素瘤或癌癥或癌癥前期無關(guān)的過度增殖的患者。
在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，用含有2-20重量％BrEA的局部乳膏制劑處理患有黑素瘤或黑素瘤前體病變的病人。乳膏施用到主痣(發(fā)育不良的痣或普通獲得的痣)、主皮膚黑素瘤、附屬皮膚黑素瘤以及痣或黑素瘤周圍的皮膚上。如果適合，在施用乳膏之前，待處理的部位用肥皂洗凈或用醇(乙醇或異丙醇)擦洗。根據(jù)待處理部位的大小，每天一次或兩次施用約0.1-0.4g/待處理區(qū)域或病變的乳膏約10-20天。在病人恢復(fù)正?；顒?dòng)之前，約15-30分鐘內(nèi)不要?jiǎng)邮┧幉课坏娜楦唷?duì)某些病變，觀察到多數(shù)病人痣和黑素瘤的發(fā)展減慢并出現(xiàn)明顯的衰退。初步治療之后，用與初步治療相同的劑量每隔一天施用制劑至少1-4個(gè)月。對(duì)于這些病人，按照病人的醫(yī)生的建議以及病人的許可可以有選擇地開始或繼續(xù)治療前體病變或黑素瘤的標(biāo)準(zhǔn)療法，如二甲基三氮烯基咪唑羧酰胺或亞硝基脲(如BCNU、CCNU)。在腫瘤或前體病變通過外科切除且切除部位已完全愈合的情況下，病人有選擇地在該部位以及鄰近的周圍區(qū)域每隔一天繼續(xù)施用制劑至少1-4個(gè)月。在某些實(shí)施方案中，繼續(xù)每天施用通式1化合物的口服組合物或制劑，如對(duì)于本身是新化合物的通式1化合物。例如對(duì)于惡性黑素瘤，有選擇地系統(tǒng)施用BrEA，使用一種下述實(shí)施例中的制劑隔日給藥1-5mg/天約1周-約4個(gè)月。
Th1免疫反應(yīng)不足通常與病毒感染有關(guān)。病毒感染可能由DNA或RNA病毒如皰疹病毒、嗜肝DNA病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄酶病毒、外衣病毒、α-病毒、蟲媒病毒、黃熱病病毒、鼻病毒、乳頭瘤病毒和/或瘟病毒引起。已經(jīng)描述了病毒的例子。例如請(qǐng)參見，B.N.Fields等，基礎(chǔ)病毒學(xué)(Fundamental Virology)，第3版，1996，Lippencott-RavenPublishers，第2章第23-57頁，包括第26-27頁的表4，28-29頁的表5，第17章第523-539頁，第26-27章第763-916頁，第32章第1043-1108頁，以及第35章第1199-1233頁。本文所用的逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包括人類和動(dòng)物病毒，例如HIV-1、HIV-2、LAV、人類T細(xì)胞白血病病毒I(“HTLVI”)、HTLVII、HTLVIII、SIV、SHIV、FIV、FeLV。其它可以造成病毒感染的病毒，包括其基因組、分化體、隔離群、株系等等，包括人丙型肝炎病毒(“HCV”)、鴨乙型肝炎病毒(“HBV”)、人甲型肝炎病毒(“HAV”)、鴨肝炎病毒、土撥鼠肝炎病毒、人(“HPV”，例如HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV45)或動(dòng)物乳頭瘤病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、單純皰疹病毒I型(“HSV-1”)、單純皰疹病毒II型(“HSV-2”)、人皰疹病毒VI型(“HHV-6”)、人皰疹病毒VIII型(“HHV-8”)、登革熱病毒(I-IV型)、西方馬腦炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒和牛病毒性腹泄病毒。
其它涉及免疫失調(diào)或Th2免疫反應(yīng)過度的疾病包括自體免疫疾病如SLE(系統(tǒng)性紅斑狼瘡)、骨質(zhì)疏松癥、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、突眼性甲狀腺腫、與螨蟲相關(guān)的潰瘍性皮炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。Th2免疫反應(yīng)過度也與有害的癥狀或病理例如疲勞、疼痛、發(fā)熱或或感染發(fā)率病增加有關(guān)，其與老齡化、過敏和發(fā)炎疾病如囊性纖維化病人的過敏性支氣管肺曲霉病、特應(yīng)性哮喘、過敏性呼吸道疾病、過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、呼吸道反響過強(qiáng)的上皮下纖維化、慢性竇炎、常發(fā)性過敏性鼻炎、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎癥性腸病、纖維化牙槽炎(肺纖維化)相關(guān)。
其它在臨床上與Th2免疫反應(yīng)過度癥狀有關(guān)或具有Th2免疫反應(yīng)過度癥狀如疲勞、病痛、發(fā)熱或感染發(fā)病率增加的跡象為精神分裂癥、急性脊髓炎、肉狀瘤病、燒傷、外傷(如骨折、出血、外科)和異種移植的免疫反應(yīng)。所有這些疾病的至少部分病理的常見的基礎(chǔ)免疫組件使得單一試劑就能有效用于治療疾病或醫(yī)治與Th1反應(yīng)不足或Th2反應(yīng)過度有關(guān)的癥狀。在所有存在Th1反應(yīng)不足或Th2反應(yīng)過度的疾病中，按照本文所述方法，施用有效量的通式1化合物就可以改善這些與疾病相關(guān)的一種或多種癥狀。因此，人們可以使用本文所述的制劑或給藥途徑間歇式給藥通式1化合物。
在某些應(yīng)用中，通式1化合物可以直接或間接干擾一種病原體如病毒或寄生蟲(瘧疾)的復(fù)制、生長(zhǎng)或細(xì)胞間的傳遞。直接影響感染物或惡性細(xì)胞可以改善患者的臨床狀況。抑制寄生蟲或受感染細(xì)胞用于進(jìn)行正常復(fù)制或新陳代謝的一種或多種酶如葡萄糖-6-磷酸酯脫氫酶可以干擾細(xì)胞復(fù)制，其中葡萄糖-6-磷酸酯脫氫酶能夠影響NADPH的細(xì)胞生殖(例如請(qǐng)參見Raineri等，生物化學(xué)(Biochemistry)，1970 92233-2243)。這種影響能夠使通式1化合物具有抑菌效果。細(xì)胞酶表達(dá)或活性的調(diào)節(jié)也能夠干擾病原體如HIV或瘧疾寄生蟲的復(fù)制或生長(zhǎng)或干擾腫瘤細(xì)胞的復(fù)制或生長(zhǎng)，如抑制血管生成。增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)一般也會(huì)改善臨床效果。
在其它應(yīng)用中，實(shí)施方案是包括將通式1化合物與細(xì)胞接觸，并使得通式1化合物與類固醇激素受體形成復(fù)合體或調(diào)節(jié)生物活性的方法。類固醇激素受體可以是表現(xiàn)出與通式1化合物中度或高度鍵合親合性的孤獨(dú)核激素受體。在某些實(shí)施方案中，類固醇受體是已知的類固醇受體。通式1化合物與受體相互作用產(chǎn)生的生物效應(yīng)能夠?qū)е聦?duì)病原體或其細(xì)胞的復(fù)制或生長(zhǎng)進(jìn)行干擾。例如，可以改變HIV感染細(xì)胞的HIV轉(zhuǎn)錄的表達(dá)。受體-通式1化合物的復(fù)合體可以直接干擾依靠LTR的HIV基因轉(zhuǎn)錄，這使得病毒復(fù)制減慢。
本發(fā)明實(shí)施方案包括含有部分純化或純化的包含通式1化合物和類固醇受體的復(fù)合體的組合物。這種類固醇受體可以是孤獨(dú)類固醇核受體或特征化的類固醇受體，其中任一種類型與通式1化合物都具有中度或高度的鍵合親合力如低于約0.5-10×10-6M，通常低于約1×10-7M，或更高的親合力作用，低于約0.01-10×-9M。通式1化合物也可以增強(qiáng)免疫反應(yīng)，這使得免疫反應(yīng)和變化的細(xì)胞內(nèi)條件同時(shí)存在以改善本文所述的一種或多種病理狀況。
通式1化合物也可以用于鑒定調(diào)節(jié)生物反應(yīng)的受體，如參與影響加強(qiáng)的Th1細(xì)胞因子合成的受體。本發(fā)明實(shí)施方案包括一種方法，“方法1”，它允許在多種生物系統(tǒng)中，測(cè)定類固醇受體上的受測(cè)化合物的一種或多種作用。一般來講，受測(cè)化合物為通式1化合物。這種系統(tǒng)包括含有本質(zhì)上或誘導(dǎo)表達(dá)所述的類固醇受體的DNA構(gòu)造的細(xì)胞，如SXR、CARβ、RXR、PXR、PPARα或其混合物或二聚體，如SXR/RXR。在其它生物系統(tǒng)中，類固醇受體可以受到一種可調(diào)節(jié)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄控制。另外，表達(dá)其它基因如類固醇誘導(dǎo)基因如類固醇誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450。對(duì)于這種方法，類固醇受體源通常與一種監(jiān)控受體的方法例如通過測(cè)定受受體調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)合。構(gòu)成類固醇受體和選擇性監(jiān)控方法的細(xì)胞有時(shí)是指本文所稱的“生物系統(tǒng)”。類固醇受體源包括通常能夠表達(dá)所述的類固醇受體和從這種細(xì)胞取得的提取物的細(xì)胞細(xì)胞系和細(xì)胞群。其它符合本方法目的的有用的生物系統(tǒng)源是來自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表達(dá)受體的組織。
方法1的一個(gè)方面允許人們使用一種方法，測(cè)定在類固醇受體上通式1化合物的一種或多種作用，其包括(a)提供一種生物系統(tǒng)如細(xì)胞提取物、細(xì)胞或組織，該生物系統(tǒng)含有具有許多類固醇受體的細(xì)胞，所述類固醇受體包括含有類固醇受體如SXR、CAR-β、RXR、PPARα、PXR或包含其一種或多種的二聚體的單體、同型二聚體或異型二聚體；(b)通過將細(xì)胞與類固醇受體(如SXR、CAR-β、RXR、PPARα或PXR)激動(dòng)劑或拮抗劑接觸，以激活或抑制這些含有類固醇受體的單體、同型二聚體或異型二聚體；(c)將幾乎所有的類固醇受體激動(dòng)劑或拮抗劑從細(xì)胞中去除；(d)當(dāng)處于不含激動(dòng)劑或拮抗劑的活性狀態(tài)時(shí)，測(cè)定這些含有類固醇受體的單體、同型二聚體或異型二聚體的活性；(e)將細(xì)胞與受測(cè)化合物接觸；(f)當(dāng)單體、同型二聚體或異型二聚體仍然不含激動(dòng)劑或拮抗劑時(shí)，測(cè)定受測(cè)化合物對(duì)這些含有一種或多種類固醇受體的單體、同型二聚體或異型二聚體的至少一種作用；和(g)可選擇地將受測(cè)化合物歸類為類固醇受體的激動(dòng)劑或拮抗劑或具有很少或不具有可測(cè)作用的中性化合物。
方法1可以測(cè)定的作用包括測(cè)定或測(cè)量對(duì)表達(dá)受到類固醇受體影響的基因的作用。該基因可以是與病理狀況如感染物、免疫紊亂或過度增殖相關(guān)的基因。
因此，如果一種先前并沒有認(rèn)為是蛋白質(zhì)生物合成調(diào)節(jié)子的化學(xué)物質(zhì)能夠轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)對(duì)一種與維持或醫(yī)治病理狀況的一種或多種癥狀有關(guān)的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因，可以確定方法1的另一個(gè)方面，“方法1A”。該方法包括(a)將包含真核細(xì)胞的試樣與通式1化合物接觸，其中真核細(xì)胞包含許多類固醇受體蛋白質(zhì)和以5’以3’順序的DNA結(jié)構(gòu)，該DNA結(jié)構(gòu)包含(i)編碼所述的蛋白質(zhì)基因的可調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列，(ii)編碼所述蛋白質(zhì)的基因的一個(gè)啟動(dòng)子，和(iii)表達(dá)能夠產(chǎn)生可測(cè)信號(hào)、偶合到啟動(dòng)子上、并受啟動(dòng)子控制的多肽的報(bào)道基因，在一定條件下，如果該化學(xué)物質(zhì)能夠起到編碼所述的蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的作用，會(huì)使報(bào)道基因表達(dá)的多肽產(chǎn)生可測(cè)量的或可檢測(cè)的信號(hào)；(b)定量測(cè)定所產(chǎn)生信號(hào)的數(shù)量；和(c)將測(cè)定的信號(hào)量與所產(chǎn)生的信號(hào)量進(jìn)行選擇性地比較以確定引起由多肽產(chǎn)生的信號(hào)中的可檢測(cè)的變化的化學(xué)物質(zhì)，并確定該化學(xué)物質(zhì)是否特異轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)與病理狀況的一種或多種癥狀的維持或醫(yī)治有關(guān)的基因的表達(dá)，所產(chǎn)生的信號(hào)量是在不存在任何正在測(cè)試的化學(xué)物質(zhì)或剛剛將試樣與其它化學(xué)物質(zhì)接觸的條件下檢測(cè)的。
在實(shí)施方法1A時(shí)，人們通常可以將包含預(yù)定數(shù)目的相同的或基本相同的真核細(xì)胞的試樣與預(yù)定濃度的通式1化合物接觸。真核細(xì)胞含有使用常規(guī)分子生物學(xué)方法和流程制備的DNA結(jié)構(gòu)。一般來講，該DNA結(jié)構(gòu)按5’到3’順序包含(i)參與調(diào)節(jié)與病理的維持或醫(yī)治有關(guān)的基因的表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列；(ii)該基因的啟動(dòng)子，和(iii)表達(dá)能夠產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)、偶合到啟動(dòng)子上、并受啟動(dòng)子控制的多肽的報(bào)道基因。該結(jié)構(gòu)保持在一定的條件下，如果通式1化合物能夠起到編碼所述的蛋白質(zhì)的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的作用，它會(huì)使得由報(bào)道基因表達(dá)的多肽產(chǎn)生可測(cè)量的或可檢測(cè)的信號(hào)。一旦經(jīng)過足夠的時(shí)間以產(chǎn)生可檢測(cè)的反應(yīng)或信號(hào)，人們就能夠確定所產(chǎn)生的信號(hào)量。通常反應(yīng)或信號(hào)是定量測(cè)量的，但定性測(cè)量對(duì)于快速篩選的目的也是有用的。
對(duì)于方法1A，人們也可以選擇性地將可檢測(cè)的信號(hào)與產(chǎn)生的信號(hào)的量進(jìn)行比較，所產(chǎn)生的信號(hào)為(i)在不存在通式1化合物的情況下檢測(cè)的信號(hào)或(ii)當(dāng)將試樣與其它化學(xué)物質(zhì)接觸時(shí)，將通式1化合物確定為能夠在多肽產(chǎn)生的可檢測(cè)的信號(hào)中引起變化的化學(xué)物質(zhì)。然后，人們通常能夠確定是否通式1化合物特異轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)與病理狀況的一種或多種癥狀的維持或醫(yī)治有關(guān)的基因的表達(dá)。
方法1和1A的其它方面包括一種篩選方法，其包括分別將許多相同的、基本相同的或不同的試樣，每個(gè)試樣都含有預(yù)定數(shù)目的細(xì)胞中的每一個(gè)與預(yù)定濃度的要測(cè)試的每種不同的通式1化合物接觸，例如，其中該許多試樣中包含多于約1×103或多于約1×104的試樣或多于0.5-5×105個(gè)試樣。在其它方面中，人們可以通過定量聚合酶鏈反應(yīng)確定RNA的數(shù)量。在1或1A的任一項(xiàng)中，可以使用任何本文所述的或命名的通式1化合物。
本發(fā)明的方面包括另一種方法，“方法2”，其主要內(nèi)容是鑒定一種基因，它的表達(dá)由傳染病治療試劑的一種候選結(jié)合配偶體調(diào)節(jié)。通常該結(jié)合配偶體為類固醇受體，如含有SXR、CAR-β、PXR、PPARα或RXR或其同系物或同等型的單體、同型二聚體或異型二聚體。類固醇受體通常表現(xiàn)為一個(gè)復(fù)合體，該復(fù)合體包含例如通式1化合物和可調(diào)型基因的DNARS，其被所述類固醇受體或含有類固醇受體的復(fù)合體識(shí)別并特異性結(jié)合。這些復(fù)合體也可包含一種轉(zhuǎn)錄因子，該轉(zhuǎn)錄因子鍵合到所述類固醇受體上或鄰接或接近DNARS的核酸序列上。可能存在的示例性轉(zhuǎn)錄因子包括ARA54、ARA55、ARA70、SRC-1、NF-κB、NFAT、APl、Ets、p300、CBP、p300/CBP、p300/CBP關(guān)聯(lián)因子、SWI/SNF和SWI/SNF、CBP、SF-1、RIP140、GRIP1和Vpr的人類同系物中的一種或多種。一般而言，人們?cè)诨铙w內(nèi)或活體外提供第一和第二組細(xì)胞，并把第一組細(xì)胞與傳染病治療試劑接觸，但不將活體內(nèi)或活體外的第二組細(xì)胞與傳染病治療試劑接觸。通過常規(guī)流程從細(xì)胞中恢復(fù)RNA或產(chǎn)生來源于RNA的cDNA。從第一組和第二組細(xì)胞中分析RNA或來源于RNA的cDNA，就可以確定它們之間的差別，人們可以利用這種差別確定一種基因，該基因的表達(dá)由傳染病治療試劑的候選結(jié)合配偶體或任何與該基因有關(guān)的DNARS調(diào)節(jié)。
方法2的一個(gè)方面是確定通式1化合物調(diào)節(jié)、或參與與病理狀況的一種或多種癥狀的維持或醫(yī)治有關(guān)的基因的調(diào)節(jié)或轉(zhuǎn)錄的能力。一般而言，人們希望通式1化合物會(huì)使該基因的轉(zhuǎn)錄增加。病理狀況通常與一種傳染物如病毒、寄生蟲或細(xì)菌有關(guān)，但也可能包括免疫疾病如自體性免疫疾病或免疫不足。病理狀況也可以是對(duì)感染缺乏免疫反應(yīng)中，或?qū)^度增殖疾病或惡性腫瘤缺乏免疫反應(yīng)?？梢詰?yīng)用該方法的其它病理狀況是發(fā)炎疾病。
在某些方面，方法2使用的通式1化合物會(huì)做上標(biāo)記。這種化合物是通過常規(guī)方法，使用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記如放射標(biāo)記、熒光標(biāo)記或本文所述以及引用的參考文獻(xiàn)中的其它標(biāo)記制備的。
方法2的一個(gè)實(shí)施方案涉及通過扣除雜交法分析RNA、或來源于RNA的cDNA。在該實(shí)施方案中，使從第一組和第二組細(xì)胞得到的RNA或cDNA進(jìn)行雜交，并去除所得到的雙鏈結(jié)構(gòu)。這使得可以恢復(fù)編碼基因的核酸，該基因的轉(zhuǎn)錄由通常為類固醇受體的候選結(jié)合配偶體調(diào)節(jié)。人們可以使用常規(guī)方法從由該方法恢復(fù)的核酸中擴(kuò)增并獲得核酸和蛋白質(zhì)序列信息。由通式1化合物轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)或抑制的核酸序列為候選結(jié)合配偶體。
轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)的基因在由通式1化合物處理的第一組細(xì)胞中會(huì)得到富集，而耗盡或不存在任何受抑制的基因。在這些實(shí)施方案中，在去除雙鏈結(jié)構(gòu)后恢復(fù)的RNA通常通過標(biāo)準(zhǔn)RT-PCR或PCR流程進(jìn)行擴(kuò)增。這些流程通常使用幾組特異的隨機(jī)引物對(duì)，然后通過凝膠電泳分析擴(kuò)增的核酸。被通式1化合物誘導(dǎo)的核酸表現(xiàn)為帶，通常為雙鏈DNA，它不存在于對(duì)照或第二組細(xì)胞中。第一組細(xì)胞中被通式1化合物的結(jié)合配偶體轉(zhuǎn)錄抑制的核酸會(huì)耗盡或不存在該核酸。一旦這種基因的候選物得到確認(rèn)，它們可以被克隆或表達(dá)，并且與該基因有關(guān)的DNARS形成含有一個(gè)候選結(jié)合配偶體和一個(gè)選擇性標(biāo)記的通式1化合物的復(fù)合體的能力會(huì)通過常規(guī)方法，使用例如固定在柱子上的DNARS、或含有一種選擇性標(biāo)記的DNARS和一種候選結(jié)合配偶體的復(fù)合體的共沉淀使用抗結(jié)合配偶體抗體進(jìn)行分析，常規(guī)方法如平衡透析、親和層析。核酸序列分析通常用于鑒定與可調(diào)型基因的編碼區(qū)相鄰的區(qū)域以鑒定與該基因有關(guān)的任何DNARS?？赡芡ㄟ^結(jié)合到含有一種候選結(jié)合配偶體如類固醇受體以及選擇性一種通式1化合物的復(fù)合體的DNARS上對(duì)DNARS進(jìn)行確認(rèn)。通過DNA足跡法或其它檢測(cè)結(jié)合作用的方法完成對(duì)DNARS的定位和確認(rèn)。DNARS、受體或通式1化合物可以在方法2的這些變體中進(jìn)行標(biāo)記。
一般來講，第二組細(xì)胞可以與第一組細(xì)胞相同或基本相同。在細(xì)胞基本相同的實(shí)施方案(方法1和2)中，第一組或第二組細(xì)胞可以通過存在或不存在DNA結(jié)構(gòu)互相進(jìn)行區(qū)分，該DNA結(jié)構(gòu)表達(dá)(i)一種類固醇受體和/或(ii)一種容易檢測(cè)的蛋白質(zhì)如β-半乳糖苷酶、過氧化物酶、磷酸酯酶、或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶，該蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)通常是由類固醇受體進(jìn)行調(diào)節(jié)的。在這些實(shí)施方案中，第一組和第二組細(xì)胞的差別用來簡(jiǎn)化對(duì)通式1化合物和類固醇受體結(jié)合配偶體的生物效應(yīng)的分析。如果它們沒有表現(xiàn)出已知的或明顯的形態(tài)或基因差別，這兩組細(xì)胞就認(rèn)為是“相同的”。
通常第二組細(xì)胞起對(duì)照作用，并且因此它們?cè)讷@得RNA或cDNA之前，不與任何通式1化合物接觸。但是，對(duì)于某些實(shí)施方案，人們可以把第二組細(xì)胞與已知的類固醇受體結(jié)合配偶體的激動(dòng)劑或拮抗劑接觸。這使得可以將通式1化合物的效價(jià)與激動(dòng)劑或拮抗劑的效價(jià)進(jìn)行比較。
在其它實(shí)施方案中，人們可以通過提供第三組細(xì)胞對(duì)方法2進(jìn)行修改，當(dāng)?shù)诙M細(xì)胞用類固醇受體激動(dòng)劑或拮抗劑進(jìn)行處理時(shí)，第三組細(xì)胞可選擇性用作未處理的對(duì)照。在這些實(shí)施方案中，人們通常會(huì)將通式1化合物的效應(yīng)與基因或DNA結(jié)構(gòu)表達(dá)的激動(dòng)劑或拮抗劑進(jìn)行比較。DNA結(jié)構(gòu)含有啟動(dòng)子或其它受到由與結(jié)合配偶體協(xié)調(diào)一致的通式1化合物引起的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，通常是轉(zhuǎn)錄增加的調(diào)節(jié)序列。
包括復(fù)合體可以含有的孤獨(dú)類固醇受體、其同系物、同等型和輔因子(如輔阻遏物、轉(zhuǎn)錄因子、基因啟動(dòng)子區(qū)域或序列)的典型的哺乳動(dòng)物和其它類固醇受體為類固醇生成因子-1(SF-1)、雞卵白蛋白上游啟動(dòng)子-轉(zhuǎn)錄因子(COUP-TFI)及其哺乳動(dòng)物同系物、類維生素A和甲狀腺激素受體(SMRT)的沉默介質(zhì)及其哺乳動(dòng)物同系物、NF-E3、COUP-TFII及其哺乳同系物、睪丸孤獨(dú)受體TR2、甲狀腺激素α1(TRα1)、類維生素A的X受體α、TRα1/RXRα異型二聚體、直接復(fù)制-4甲狀腺激素反應(yīng)素(DR4-TRE)、雌激素受體(ER)、雌激素受體相關(guān)α(ERRα)、雌激素受體相關(guān)β(ERRβ)、類固醇異生素受體(SXR)、肝細(xì)胞核因子4(HNF-4)、肝細(xì)胞核因子3(HNF-3)、肝X受體(LXRs)、LXRα、雌激素受體α(ERα)、構(gòu)成型雄烷受體-β(CAR-β)、RXR/CAR-β異型二聚體、短異型二聚體配偶體(SHP)、SHR/ERα異型二聚體、雌激素受體β、SHP/ERβ異型二聚體、睪丸孤獨(dú)受體TR4、TR2/TR4異型二聚體、孕甾烷X受體(PXR)和同等型、細(xì)胞色素P-450單氧酶3A4基因啟動(dòng)子區(qū)域和同等型、HNF-4/細(xì)胞色素P-450單氧酶3A4基因啟動(dòng)子區(qū)域和同等型復(fù)合體、HIV-1長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)、HIV-2LTR、TR2/HIV-1LTR復(fù)合體、TR4/HIV-1LTR復(fù)合體、TR4/HIV-1LTR復(fù)合體、TRα1/TR4/HIV-1LTR復(fù)合體、TR2同等型(TR2-5、TR7、TR9、TR11)、DAX-1、DAX-1/類固醇生成急性調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)基因啟動(dòng)子區(qū)域、ReVErb、ReVErbAα、ReVErbβ、乳腺癌中擴(kuò)增的類固醇受體輔激活物(AIB1)、p300/CREB結(jié)合蛋白質(zhì)-相互作用蛋白質(zhì)(p/CIP)、甲狀腺激素受體(TR、T3R)、甲狀腺激素反應(yīng)素(T3REs)、構(gòu)成型雄烷受體(CAR)、非洲爪蟾屬xSRC-3和哺乳動(dòng)物(人類)同系物、TAK1/TAK1、過氧化物酶體增殖激活的受體α(PPARα)復(fù)合體、PPARα/RXRα復(fù)合體、TAK-1/RIP-140復(fù)合體、視黃酸受體(RAR)、RARβ、TR4/RXRE復(fù)合體、SF-1/類固醇羥化酶基因啟動(dòng)子區(qū)域、SF-1/催產(chǎn)素基因啟動(dòng)子區(qū)域、SF-1/ACTH受體基因啟動(dòng)子區(qū)域、大鼠耳-2和哺乳動(dòng)物同系物、人類TR3孤獨(dú)受體(TR3)、RLD-1、OR-1、雄激素受體、糖(腎上腺)皮質(zhì)激素受體、雌激素受體、孕酮受體、鹽皮質(zhì)激素受體、OR1、OR1/RXRα復(fù)合體、TIF-1、CBP/P300復(fù)合體、TRIP1/SUG-1復(fù)合體、RIP-140、SRC1α/P160復(fù)合體和TIF-2/GRIP-1復(fù)合體、RAR/N-CoR/RIP13復(fù)合體、RAR/SMRT/TRAC-2復(fù)合體和DNARS5’AGGTCANAGGTCA3’或5’TGCACGTCA3’。當(dāng)例如這些復(fù)合體進(jìn)行無細(xì)胞分析時(shí)，它們的一種可以包括在本發(fā)明方法內(nèi)。通過把表達(dá)這些蛋白質(zhì)，如含有穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)或用于瞬時(shí)感染分析的結(jié)構(gòu)哺乳動(dòng)物或酵母細(xì)胞的蛋白質(zhì)的一種或多種的DNA結(jié)構(gòu)插入細(xì)胞內(nèi)，能夠促進(jìn)在細(xì)胞內(nèi)形成這些復(fù)合體。在活體內(nèi)或體外使用通式1化合物作為激動(dòng)劑、拮抗劑或作為參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析或誘導(dǎo)生物反應(yīng)的方法基本如下述文獻(xiàn)所述例如請(qǐng)參見USP5080139、5696133、5932431、5932555、5935968、5945279、5945404、5945410、5945412、5945448、5952319、5952371、5955632、5958710、5958892、5962443；國(guó)際專利申請(qǐng)WO96/19458、WO99/41257、WO99/45930。這些包含通式1化合物并用于實(shí)施這些方法的復(fù)合體或分析系統(tǒng)都屬于本發(fā)明的方面。
通式1化合物通常與一種或多種生物配體相互作用從而導(dǎo)致生物反應(yīng)。為有助于為通式1化合物確認(rèn)候選結(jié)合配偶體，人們可以使用連接到載體通常為固體載體上的放射標(biāo)記的通式1化合物作為恢復(fù)候選結(jié)合配偶體的方法。通式1化合物可以通過例如類固醇核的3-、7-、16-或17-位連接到載體上。此種用途的連接劑是已知的并且包括同雙官能團(tuán)試劑和異雙官能團(tuán)試劑，它們中的一些可以買到。人們使用的連接劑通常包含約2-20個(gè)連接的原子。這些連接的原子通常大部分為碳，并帶有置換一個(gè)或多個(gè)碳原子的一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)氧、硫或氮原子。人們能夠利用從合適的細(xì)胞或組織獲得的cDNA表達(dá)庫作為候選結(jié)合配偶體源。細(xì)胞或組織要可以從哺乳動(dòng)物或脊椎動(dòng)物寄主如人、鼠、鳥、靈長(zhǎng)類或其它來源如昆蟲(果蠅)、其它的無脊椎動(dòng)物(酵母、細(xì)菌、支原體種、原質(zhì)團(tuán)種、四膜蟲種、C.elegans)或其它本文或所引用的參考文獻(xiàn)中所述的有機(jī)體組群或物種獲得。合適的組織包括皮膚、肝組織或細(xì)胞(包括肝細(xì)胞和肝巨噬細(xì)胞)、纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、腎細(xì)胞和組織、腦或其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞或組織(包括神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)組織、肺、腸、胎盤、乳房、卵巢、睪丸、肌肉(包括心臟或肌原肌細(xì)胞組織或細(xì)胞)、白血細(xì)胞(包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和組織)、淋巴組織或流質(zhì)和軟骨細(xì)胞。
人們從非人類源分離得到的候選結(jié)合配偶體通常含有對(duì)通式1化合物具有相似結(jié)合特性的人類同系物。因此非人類候選結(jié)合配偶體可以有利于人類同系物的恢復(fù)，例如通過制備抗血清或從包含人類同系物的溶液中沉淀人類同系物或通過將非人類候選結(jié)合配偶體序列與已知的人類基因序列進(jìn)行比較。一旦獲得候選結(jié)合配偶體源，它就可以與標(biāo)記的通式1化合物(例如通常用14C或3H標(biāo)記)以及包含該標(biāo)記的通式1化合物和候選結(jié)合配偶體的復(fù)合體接觸，并且該候選結(jié)合配偶體通過例如親和層析或抗體沉淀法進(jìn)行恢復(fù)。復(fù)合體的恢復(fù)提供了至少部分純化的候選結(jié)合配偶體源，即候選結(jié)合配偶體得到富集，例如與起始候選結(jié)合配偶體源材料中候選結(jié)合配偶體的豐度相比，其至少富集了10倍或至少富集了100倍或至少富集了500倍。
本發(fā)明的方面包括一種包含部分純化的(相對(duì)于天然源如細(xì)胞或細(xì)胞溶解產(chǎn)物，純化了至少約2-10倍)復(fù)合體或包含通式1化合物和類固醇受體的純化的(相對(duì)于天然源如細(xì)胞或細(xì)胞溶解產(chǎn)物，純化了至少約20-5000倍)復(fù)合體(其中部分純化或純化的復(fù)合體被選擇性地分離)、血清類固醇結(jié)合蛋白質(zhì)(例如人類血清白蛋白、α1-酸糖蛋白、性激素結(jié)合球蛋白、睪酮結(jié)合球蛋白、皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白、雄激素結(jié)合蛋白質(zhì)(大鼠))或另一種結(jié)合配偶體如轉(zhuǎn)錄因子或DNARS。這些組合物的一個(gè)方面包括通過將部分純化或純化的組合物與一種或多種細(xì)胞、一種或多種組織、血漿或血液接觸的過程所生成的產(chǎn)物。
其它方面包括一種測(cè)定通式1化合物的生物活性的方法，其包括(a)將通式1化合物與一個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群接觸；(b)測(cè)定以下一項(xiàng)或多項(xiàng)(i)結(jié)合配偶體與通式1化合物的復(fù)合體，(ii)細(xì)胞或細(xì)胞群的增殖，(iii)細(xì)胞或細(xì)胞群的分化，(iv)蛋白質(zhì)激酶C的活性，(v)蛋白質(zhì)激酶C底物磷酸化的水平，(vi)一個(gè)或多個(gè)靶基因的轉(zhuǎn)錄，(vii)類固醇如糖皮質(zhì)激素的細(xì)胞反應(yīng)的抑制，(viii)抑制類固醇如糖皮質(zhì)激素、性類固醇誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄或(ix)抑制HIV LTR促進(jìn)的轉(zhuǎn)錄；和(c)可選擇地將步驟(b)中得到的結(jié)果與一種合適的對(duì)照物進(jìn)行比較。該實(shí)施方案的方面包括(i)該方法，其中結(jié)合配偶體是一種類固醇受體、一種轉(zhuǎn)錄因子或DNARS，(ii)該方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)于與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲相關(guān)的復(fù)制或細(xì)胞病理效應(yīng)的調(diào)節(jié)活性，(iii)該方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)于與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲相關(guān)的調(diào)節(jié)活性或所測(cè)定的生物活性是細(xì)胞或包含NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞(新生細(xì)胞)、病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌感染細(xì)胞或寄生蟲感染細(xì)胞細(xì)胞群的新陳代謝(通過3H-胸苷吸收或其它本文或參考文獻(xiàn)中所述的分析方法進(jìn)行分析)，和(iv)該方法，其中靶基因是病毒基因、細(xì)菌基因、寄生蟲基因、與癌癥有關(guān)的基因如其中的病毒基因?yàn)镈NA或RNA聚合酶基因、逆轉(zhuǎn)錄基因、包膜基因、蛋白酶基因或與病毒核酸復(fù)制有關(guān)的基因或病毒結(jié)構(gòu)基因。
一個(gè)實(shí)施方案，是一種方法，其包括將含有一種類固醇受體和一種通式1化合物的復(fù)合體與反式激活蛋白接觸，因此形成一種包含類固醇受體蛋白質(zhì)、通式1化合物和反式激活蛋白的復(fù)合體，其中該反式激活蛋白存在于(1)細(xì)胞或組織提取物(例如細(xì)胞核、含有細(xì)胞核的溶解產(chǎn)物或不含細(xì)胞或組織的細(xì)胞核的溶解產(chǎn)物)，(2)部分純化或純化的細(xì)胞或組織提取物，(3)組織培養(yǎng)的細(xì)胞或(4)患者細(xì)胞中，其中(1)-(4)的任一項(xiàng)可選擇性包含一種靶基因(天然基因或通過標(biāo)準(zhǔn)基因工程技術(shù)引入的基因)，其表達(dá)的水平在復(fù)合體形成后可選擇性地進(jìn)行分析。在某些實(shí)施方案中，該反式激活蛋白是部分純化的或純化的，并且存在于細(xì)胞或組織提取物或部分純化的或純化的細(xì)胞或組織提取物中。反式激活蛋白可以是TIF-1、CBP/P300、TRIP1/SUG-1、RIP-140、SRC1α/P160、或TIF-2/GRIP-1。在任意這些實(shí)施方案中，與合適的對(duì)照物(例如在同樣的條件下的對(duì)照物，但不含對(duì)應(yīng)于通式1化合物的添加化合物，或其中另一種化合物(例如已知連接到類固醇受體上的類固醇)用作基準(zhǔn)或參考標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量變化的靶基因表達(dá))相比，含有類固醇受體蛋白質(zhì)、通式1化合物和反式激活蛋白的復(fù)合體可以增加或減少靶基因的轉(zhuǎn)錄。在這些方法中，靶基因可以為病原體基因(病毒、細(xì)菌、寄生蟲、真菌、酵母)或與病理狀況(自體免疫、發(fā)炎、過度增殖)有關(guān)的基因。
通式1化合物很適合用于所述的某些方法，這些方法使用類固醇調(diào)節(jié)細(xì)胞或組織中的生物活性。例如，通式1化合物可以用來有選擇性地與特異類固醇受體或類固醇孤獨(dú)受體、或它們的與患者的病理狀況有關(guān)的亞型相互作用，內(nèi)容基本如USP5668175所述。在這些應(yīng)用中，通式1化合物可以用作受體的配體，對(duì)與病理狀況(類固醇激素響應(yīng)的疾病狀態(tài))相關(guān)的基因產(chǎn)物的異常表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)。這種基因通常是由類固醇激素進(jìn)行調(diào)節(jié)的。在其它應(yīng)用中，人們可以使用通式1化合物對(duì)連接到類固醇受體或類固醇孤獨(dú)受體上的配體以及一個(gè)或多個(gè)如AP-1和/或帶有DNA序列的轉(zhuǎn)錄因子(或輔因子)進(jìn)行篩選，內(nèi)容基本如USP5643720所述。同樣地，通式1化合物可以基本按USP5597693、5639598、5780220、5863733和5869337所述來應(yīng)用。在某些這類實(shí)施方案中，通式1化合物被標(biāo)記以利使用。合適的標(biāo)記在本領(lǐng)域是已知的并且包括放射標(biāo)記(如3H、14C、32P、35S、131I、99Tc以及其它鹵素同位素)、熒光標(biāo)記(如熒光素、試鹵靈、得克薩斯紅、若丹明、BODIPY、芳基磺酸菁)、化學(xué)發(fā)光部分(如吖啶酸酯)、金屬螯合劑、生物素、抗生物素蛋白(avadin)、肽標(biāo)記物(如組氨酸六聚物、被單克隆或多克隆抗體識(shí)別的肽)、共價(jià)交聯(lián)部分。人們可以按照已知的方法制備這些標(biāo)記化合物。
適合測(cè)定多種化合物的生物效應(yīng)如激活免疫系統(tǒng)細(xì)胞(如NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞)的方法已經(jīng)有描述，例如Jakob等，免疫學(xué)學(xué)報(bào)(J.Immunol.)，1998，1613042-3049，Pierson等，血液(Blood)，1996，87180-189，Cash等，臨床實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)(Clin.Exp.Immuno1.)，1994，98313-318，Monick等，J.Immunol.，1999，1623005-3012，Rosen等，傳染免疫學(xué)(Infect.Immun.)，1999，671180-1186，Grunfeld等，J.Lipid Res.，1999，40245-252，Singh等，免疫細(xì)胞生物學(xué)(Immunol.Cell Biol.)，1998，76513-519，Chesney等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 1997，946307-6312，Verhasselt等，J.Immunol.1999 1622569-2574，Avice等，J.Immunol 1999 1622748-2753，Cella等，實(shí)驗(yàn)藥學(xué)學(xué)報(bào)(J.Exp Med.)，1999 189821-829，Rutalt等，F(xiàn)reeRadical Biol.Med.1999 26232-238，Akbari等，J.Exp.Med.1999 189169-178，Hryhorenko等，免疫藥理學(xué)(Immunopharmacology)1998 40231-240，F(xiàn)ernvik等，Inflamm.Res.1999 4828-35，Copper等，J.Infect.Dis.1999 179738-742，Betsuyaku等，J.Clin.Invest.1999 103825-832，Brown等，Toxicol.Sci.1998 46308-316，Sibelius等，Infect.Immunol.1999 671125-1130。在這些方法中使用通式1化合物是本發(fā)明的方面，并且它們?cè)试S例如測(cè)定通式1化合物對(duì)基因的生物效應(yīng)，該基因的表達(dá)受到通式1化合物和類固醇受體的調(diào)節(jié)。
實(shí)施方案包括任意上述的方法，例如方法1，其中細(xì)胞或生物系統(tǒng)包含NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞或肝細(xì)胞，它們選擇性地含有表達(dá)一個(gè)或兩個(gè)克隆的類固醇受體的DNA結(jié)構(gòu)。該方法可選擇性地分析相對(duì)于對(duì)照物，通式1化合物對(duì)細(xì)胞的效應(yīng)。對(duì)照物包括使用已知的類固醇受體的激動(dòng)劑或拮抗劑或?qū)⑴c通式1化合物接觸的細(xì)胞與沒有與通式1化合物接觸的對(duì)照物細(xì)胞(通常與處理的細(xì)胞為同一細(xì)胞類型)進(jìn)行比較。通過已知的分析方法測(cè)定相對(duì)于對(duì)照物的反應(yīng)如激活類固醇受體。
在某些情況下，通式1化合物會(huì)調(diào)節(jié)(增加或減少)細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄。在其它情況下，通式1化合物會(huì)增強(qiáng)患者的以下細(xì)胞的一種或多種的溶酶體運(yùn)動(dòng)NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或纖維細(xì)胞。這些效應(yīng)通常是直接或間接通過類固醇受體調(diào)節(jié)的，類固醇受體調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，如使得分析中使用的細(xì)胞如PKCα、PKCβ、PKCγ或PKCζ中的蛋白質(zhì)激酶C(PKC)的活性增加。
其它相關(guān)的實(shí)施方案是一種組合物，其包含部分純化的或純化的由通式1化合物和類固醇受體組成的復(fù)合體、血清類固醇結(jié)合蛋白質(zhì)(例如人類血清結(jié)合白蛋白、α1-酸糖蛋白、性激素結(jié)合球蛋白、睪酮結(jié)合球蛋白、皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白、雄激素結(jié)合蛋白(大鼠))或另一種結(jié)合配偶體如轉(zhuǎn)錄因子或DNARS。這些組合物的一個(gè)方面包括一種由將部分純化的或純化的組合物與一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞、一個(gè)或多個(gè)組織、血漿或血液接觸所產(chǎn)生的產(chǎn)物。
另一個(gè)實(shí)施方案包括一種測(cè)定通式1化合物的生物活性的方法，其包括(a)將通式1化合物與一個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群接觸；(b)測(cè)定以下一項(xiàng)或多項(xiàng)(i)結(jié)合配偶體與通式1化合物的復(fù)合體，(ii)細(xì)胞或細(xì)胞群的增殖，(iii)細(xì)胞或細(xì)胞群的分化，(iv)蛋白質(zhì)激酶C的活性，(v)蛋白質(zhì)激酶C底物磷酸化的水平，(vi)一個(gè)或多個(gè)靶基因的轉(zhuǎn)錄，(vii)類固醇如糖皮質(zhì)激素的細(xì)胞反應(yīng)的抑制，(viii)抑制類固醇如糖皮質(zhì)激素、性類固醇誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄或(ix)抑制HIV LTR推進(jìn)的轉(zhuǎn)錄；和(c)可選擇地將步驟(b)中得到的結(jié)果與一種合適的對(duì)照物進(jìn)行比較。該實(shí)施方案的方面包括(i)該方法，其中結(jié)合配偶體是一種類固醇受體、一種轉(zhuǎn)錄因子或DNARS，(ii)該方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)于與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲相關(guān)的復(fù)制或細(xì)胞病理效應(yīng)的調(diào)節(jié)活性，(iii)該方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)于與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲相關(guān)的調(diào)節(jié)活性或所測(cè)定的生物活性是細(xì)胞或包含NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞(新生細(xì)胞)、病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌感染細(xì)胞或寄生蟲感染細(xì)胞細(xì)胞群的新陳代謝(通過3H-胸苷吸收或其它本文或參考文獻(xiàn)中所述的分析方法進(jìn)行分析)，和(iv)該方法，其中靶基因是病毒基因、細(xì)菌基因、寄生蟲基因、與癌癥有關(guān)的基因如其中的病毒基因?yàn)镈NA或RNA聚合酶基因、逆轉(zhuǎn)錄基因、包膜基因、蛋白酶基因或與病毒核酸復(fù)制有關(guān)的基因或病毒結(jié)構(gòu)基因。
另一個(gè)實(shí)施方案是一種方法，其包括將含有一種類固醇受體和一種通式1化合物的復(fù)合體與反式激活蛋白接觸，因此形成一種包含類固醇受體蛋白質(zhì)、通式1化合物和反式激活蛋白的復(fù)合體，其中該反式激活蛋白存在于(1)細(xì)胞或組織提取物(例如細(xì)胞核、含有細(xì)胞核的溶解產(chǎn)物或不含細(xì)胞或組織的細(xì)胞核的溶解產(chǎn)物)，(2)部分純化或純化的細(xì)胞或組織提取物，(3)組織培養(yǎng)的細(xì)胞或(4)患者細(xì)胞中，其中(1)-(4)的任一項(xiàng)可選擇性地包含一種靶基因(天然基因或通過標(biāo)準(zhǔn)基因工程技術(shù)引入的基因)，其表達(dá)的水平在復(fù)合體形成后可選擇性地進(jìn)行分析。在某些實(shí)施方案中，該反式激活蛋白是部分純化的或純化的，并且存在于細(xì)胞或組織提取物或部分純化的或純化的細(xì)胞或組織提取物中。反式激活蛋白可以是TIF-1、CBP/P300、TRIP1/SUG-1、RIP-140、SRC1α/P160、或TIF-2/GRIP-1。在任意這些實(shí)施方案中，與合適的對(duì)照物(例如在同樣的條件下的對(duì)照物，但不含對(duì)應(yīng)于通式1化合物的任何添加化合物，或其中另一種化合物(例如已知連接到類固醇受體上的類固醇)用作基準(zhǔn)或參考標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量變化的靶基因表達(dá))相比，含有類固醇受體蛋白質(zhì)、通式1化合物和反式激活蛋白的復(fù)合體可以增加或減少靶基因的轉(zhuǎn)錄。在這些方法中，靶基因可以為病原體基因(病毒、細(xì)菌、寄生蟲、真菌、酵母)或與病理狀況(自體免疫、發(fā)炎、過度增殖)有關(guān)的基因。
當(dāng)實(shí)施本文所述的這些方法時(shí)，人們通常希望所觀察到的生物效應(yīng)包括含有兩種或多種組分的復(fù)合體的形成。這些組分可以包含一種或多種轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)錄的輔調(diào)節(jié)物或輔阻遏物及其同系物和同等型。這些因子和含有這些因子的復(fù)合體包括類固醇受體輔激活物-1族(SRC-1、SRC-1/血清反應(yīng)因子)的成員、NF-κB、NFAT、p300、CBP、p300/CBP、p300/CBP相關(guān)因子、SWI/SNF和人類及其它同系物、BRG-1、OCT-1/OAF、AP1、Ets、雄激素受體相關(guān)蛋白54(ARA54)、雄激素受體相關(guān)蛋白55(ARA55)、雄激素受體相關(guān)蛋白70(ARA70)、RAC3/ACTR、CREB結(jié)合蛋白(CPB)、SRC-1α、受體作用蛋白140(RIP-140)、轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白1、激活功能2、糖皮質(zhì)激素受體作用蛋白1(GRIP-1)、受體作用蛋白160(RIP-160)、半乳糖4D損害的抑制因子(SUG-1)、轉(zhuǎn)錄中間因子1(TIF-1)、轉(zhuǎn)錄中間因子2(TIF-2)、SMRT、N-CoR、N-CoA-1、p/CIP、類固醇生成因子1(SF-1)、p65(RelA)和由人類免疫缺乏病毒和及其同等型和同系物編碼的Vpr。這些因子的一種或多種可以存在于含有通式1化合物和類固醇受體的復(fù)合體中，如SXR、PPARα、CAR-β、RXR和/或PXR。
在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，通式1化合物用來對(duì)體外的哺乳動(dòng)物細(xì)胞施加抑制細(xì)胞效應(yīng)。這類細(xì)胞通常是淋巴細(xì)胞或轉(zhuǎn)化T細(xì)胞系，淋巴細(xì)胞如從血液或富含淋巴細(xì)胞的器官(如脾臟、淋巴組織或淋巴結(jié))獲得的T細(xì)胞群。通過這種活性可以估計(jì)通式1化合物調(diào)節(jié)免疫學(xué)作用的能力，如增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)或抑制與Th2有關(guān)的一種或多種細(xì)胞因子的表達(dá)。因此，本發(fā)明的方法包括(a)將通式1化合物與體外淋巴細(xì)胞接觸，(b)測(cè)定該化合物施加的抑制細(xì)胞程度以確認(rèn)一種抑制細(xì)胞化合物和(c)可選擇地將抑制細(xì)胞化合物給免疫受抑制的患者用藥，以確定該化合物對(duì)一種或多種本文所述的患者免疫反應(yīng)的作用，如增強(qiáng)Th1細(xì)胞因子或細(xì)胞反應(yīng)或減弱與Th2相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)。通常這些方法是通過使用一定范圍的通式1化合物濃度和合適的對(duì)照物進(jìn)行的，對(duì)照物如已知的抑制細(xì)胞試劑或含有溶劑但不含通式1化合物的空白。通過標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量對(duì)細(xì)胞增殖的抑制。測(cè)量該化合物的抑制細(xì)胞作用的方法包括測(cè)量在受到處理的和未受處理的培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目或使用例如將3H-胸苷引入受處理的和未受處理的培養(yǎng)物中測(cè)量DNA合成。通常細(xì)胞生長(zhǎng)介質(zhì)中通式1化合物的濃度范圍為約0.1μm-約100μm，對(duì)固定數(shù)目的細(xì)胞(如約0.4×105-約5×105)使用4-6個(gè)不同的化合物濃度。將通式1化合物留在組織培養(yǎng)中與細(xì)胞接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以觀察抑制細(xì)胞作用，如約16小時(shí)至約6天，典型為約24-72小時(shí)。在這些實(shí)施方案中，人們可以可選擇地鑒別類固醇受體的生物活性的調(diào)節(jié)，如激活PPARα，它可能與化合物引起的抑制細(xì)胞作用有關(guān)。
在某些應(yīng)用中，通式1化合物看來能夠改善與感染或疾病有關(guān)的一種或多種癥狀。例如，治療患有如由逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、癌癥化療或其它原因引起的免疫抑制的患者，通常會(huì)顯示一種或多種相關(guān)的癥狀如體重?fù)p失、發(fā)熱、貧血、疲勞得到改善，或減輕與二次感染如HSV-1、HSV-2、乳頭瘤、人類細(xì)胞巨化病毒(“CMV”)、肺孢子蟲屬(如卡氏肺孢子蟲)或念珠菌屬(白色念珠菌、克魯斯念珠菌、熱帶念珠菌)感染有關(guān)的感染癥狀。通式1化合物也可用于自體骨髓移植或干細(xì)胞移植中免疫系統(tǒng)的恢復(fù)。在某些實(shí)施方案中，通式1化合物以按本文所述的非水溶液液體制劑形式給藥或按本文所述的任意間歇式給藥方案使用固體或液體制劑給用通式1化合物。在患有逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的患者具有包括一種或多種癥狀的的情況下，對(duì)患者給藥約0.1-約10mg/kg/天(通常為約0.4-約5kg/kg/天)通式1化合物，在1-4周內(nèi)通常會(huì)使得一種或多種癥狀發(fā)生明顯的改善。癥狀有相對(duì)低的CD4數(shù)(例如約10-200，通常約20-100)、一種或多種另外的病原體感染(HSV-1、HSV-2、HHV-6、HHV-8、CMV、HCV、一種HPV、卡氏肺孢子蟲或念珠菌感染)以及一種或多種貧血、疲勞、卡波濟(jì)氏肉瘤、發(fā)熱或非自主體重?fù)p失(至少約5％體重)。在其它實(shí)施方案中，通式1化合物施用給患有看起來與病毒感染有關(guān)的疾病的患者，病毒感染如與CMV有關(guān)的肺炎或視網(wǎng)膜炎、與埃巴病毒有關(guān)的鼻咽癌或口腔毛狀白斑、與細(xì)小病毒19有關(guān)的溶血性貧血中的與風(fēng)疹病毒或再生障礙危象有關(guān)的進(jìn)行性全腦炎或糖尿病。
在一個(gè)典型的實(shí)施方案中，感染有HCV的病人服用一種含有約20mg/mLBrEA的水溶液等滲α-環(huán)糊精或β-環(huán)糊精制劑。該制劑經(jīng)靜脈內(nèi)給藥每天單一劑量或每天兩次次劑量。病人以1-10mg/kg/天的劑量服用4-10天，然后不給藥5-30天，然后再次服用環(huán)糊精制劑4-10天。重復(fù)該給藥方法一次、二次或多次。在治療中，對(duì)HCV進(jìn)行臨床標(biāo)記，如血液或血漿中的病毒核酸、血液或血漿中的肝酶(如AST/SGOT、ALT/SGPT、堿性磷酸酶)的水平。對(duì)于這些病人，可以有選擇地開始一種標(biāo)準(zhǔn)抗HCV治療如干擾素和/或病毒唑，或繼續(xù)按照病人的醫(yī)生的建議或病人告知的同意。在某些這種實(shí)施方案中，連續(xù)每天給藥通式1化合物作為一種口服或非腸道組合物或制劑的組分，如對(duì)于本身是一種新的通式1化合物。BrEA也可以選擇性地系統(tǒng)給藥，使用例如實(shí)施例1中的制劑，1-5mg/kg/隔日給藥約1-4個(gè)月，或以一種口服制劑的形式5-40mg/kg/隔日給藥1-4個(gè)月。
在任何公開的實(shí)施方案中，人們可以選擇性地將另外一種治療藥品與通式1化合物的給藥結(jié)合，即在給藥通式1化合物之前、之中或之后，對(duì)患者用藥。例如，對(duì)于患有病毒或寄生蟲感染的患者或在給藥通式1化合物的過程中，也可以給藥其它的治療藥品給患者，如核苷類似物用于病毒感染或氯喹用于瘧疾。這些附加的治療通常包括對(duì)于患者病理狀況的標(biāo)準(zhǔn)治療方法，但其也可以包括實(shí)驗(yàn)性或其它處理。例如，人們可以輔助給藥維生素(多種維生素、單一維生素)、抗氧劑或其它試劑(維生素E、別嘌呤醇)、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑(液體蛋白或碳水化合物制品)或作為病人藥物狀況的保證或病人的醫(yī)生建議的其它治療方法。在任何本文所述的實(shí)施方案中，任何這些附加的治療可以與任何通式1化合物如BrEA、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯或氨基酸或其與肽的結(jié)合物的給藥結(jié)合。
這些附加的治療對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員是顯而易見的。這些治療根據(jù)要治療的疾病、組分的交叉反應(yīng)性以及這種結(jié)合的藥學(xué)特性進(jìn)行選擇。例如，當(dāng)治療人類或其它患者的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染時(shí)，通式1化合物與一種或多種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、抗生素或鎮(zhèn)痛劑結(jié)合。合適的通式1化合物包括那些如本文的化合物第1組至42-25-20-6組以及其它地方所述的化合物。典型的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑為AZT、3TC、D4T、ddI、ddC、阿得弗韋地匹(adefovir dipivoxil)、9-[2-(R)-[[二[[(異丙氧羰基)氧基)甲氧基]-膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤、(R)-9-[2-(膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤和阿得弗韋。典型的蛋白酶抑制劑為印地那韋、那非那韋、利托那韋、印地那韋(crixivan)和斯擴(kuò)那韋(sequanavir)。也可以使用融合抑制劑，如HIV融合抑制劑。當(dāng)治療呼吸系統(tǒng)或其它系統(tǒng)的病毒感染如丙型肝炎病毒(“HCV”)或流感病毒感染(如流感A或B)時(shí)，本發(fā)明的組合物選擇性與抗病毒素(如γ-干擾素、金剛胺、甲金胺、病毒唑或USP 5763483公開的化合物(特別是權(quán)利要求1和2中描述的化合物)和5866601公開的化合物)、粘液溶解藥、祛痰藥、支氣管擴(kuò)張藥、抗生素、退熱藥或鎮(zhèn)痛藥結(jié)合使用。
在某些實(shí)施方案中，將通式1化合物施用于患有寄生蟲或細(xì)菌感染的患者，以減慢感染的發(fā)展，干擾感染物的復(fù)制或發(fā)展或改善一種或多種相關(guān)的癥狀，如體重?fù)p失、貧血或二次感染。寄生蟲有瘧疾寄生蟲、昏睡病寄生蟲和與胃腸感染有關(guān)的寄生蟲。寄生蟲和細(xì)菌包括以下生物體的種、群、屬、株或隔離種群胃腸寄生蟲、微孢子目、等孢子球蟲屬、小球隱孢子蟲屬、分枝桿菌(鳥分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌、肺炎分枝桿菌、滲透分枝桿菌)、支原體屬(發(fā)酵支原體、滲透支原體、肺炎支原體)、錐蟲屬(布氏錐蟲、岡比亞錐蟲、克氏錐蟲、伊氏錐蟲)、利什曼蟲屬(杜氏利什曼蟲、碩大利什曼蟲、巴西利什曼蟲)、瘧原蟲屬(惡性瘧原蟲、諾氏瘧原蟲、間日瘧原蟲、伯格氏瘧原蟲)、埃利希體屬(犬埃利希體、E.chaffensis、嗜噬胞埃利希體、馬埃利希體、腺熱埃利希體)、微小巴貝蟲、嗜血桿菌屬(睡眠嗜血菌、流感嗜血桿菌)、布魯菌屬(羊布魯菌、流產(chǎn)布魯菌)、巴爾通體屬(B.henselae)、鮑特菌屬(支氣管敗血性鮑特菌、百日咳鮑特菌)、埃希桿菌屬(大腸桿菌)、沙門菌屬(鼠傷寒沙門菌)、志賀菌屬(韋氏志賀菌)、假單孢菌屬(銅綠色假單孢菌)、奈瑟菌屬(淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌)、鏈球菌屬、葡萄球菌屬(金黃色葡萄球菌)、立克次體屬(立氏立克次體)、耶爾森菌屬(小腸結(jié)腸炎耶爾森菌)、嗜肺軍團(tuán)菌和利斯特菌屬(單核細(xì)胞增多性利斯特菌)。
例行實(shí)驗(yàn)可以將本文所述的本發(fā)明的一種或多種間歇式按劑量給藥方案或一種或多種非水溶液液體制劑應(yīng)用于本文所述的任何用途或應(yīng)用。對(duì)于本身為新型化合物的通式1化合物，該化合物可以按照本發(fā)明的間歇式按劑量給藥方案施用給患者，按劑量給藥方案如連續(xù)每日單一劑量或每天二次或多次按劑量給藥。另外，任何通式1化合物如本身為新型化合物的一種或多種通式1化合物，都可以存在于本文所述的任何固體或液體制劑中。例行實(shí)驗(yàn)可以將這些制劑和按劑量給藥方案應(yīng)用于本文所述的任何用途或應(yīng)用。
編號(hào)的實(shí)施方案本發(fā)明的幾個(gè)方面以及相關(guān)主題包括以下編號(hào)的實(shí)施方案。
在某些方面，本發(fā)明涉及含有通式1化合物的非水溶液液體制劑。典型的實(shí)施方案如下所述。
1.一種組合物，其含有一種或多種通式1或通式2化合物，以及一種或多種非水液體賦形劑，其中該組合物的含水量低于約3體積％。
2.實(shí)施方案1所述的組合物，其中一種或多種通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中，R7和R9分別為-CHR10、-CH2-、-CH＝、-O-、-S-或-NH-，其中R10為-OH、-SH、C1-10選擇性取代的烷基、C1-10選擇性取代的烷氧基、C1-10選擇性取代的鏈烯基或C1-10選擇性取代的炔基；而R8為-CH2-、-O-、-S-或-NH-，其中在5(如果存在)、8、9和14位的氫原子分別為α.α.α.α(即5α、8α、9α、14α)、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
3.實(shí)施方案2所述的組合物，其中一種或多種通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中在5(如果存在)、8、9和14位的氫原子分別為α.α.α.α、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
4.實(shí)施方案1、2或3所述的組合物，其中存在一種、二種、三種或四種通式1化合物。
5.實(shí)施方案1、2、3或4所述的組合物，其中含水量低于約0.3體積％。
6.實(shí)施方案1、2、3、4或5所述的組合物，其中一種或多種非水液體賦形劑是一種醇、一種聚乙二醇、丙二醇或苯甲酸芐酯的一種、二種或多種。
7.實(shí)施方案1-6(實(shí)施方案1、2、3、4、5或6)的任一項(xiàng)所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7α-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7α，17β-三羥基-5-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮、3β，7α-二羥基表雄(甾)酮、3β，7β-二羥基表雄(甾)酮、3β-羥基-7-氧代-表雄(甾)酮。
8.實(shí)施方案7所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
9.實(shí)施方案1-8任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物含有二種、三種、四種或五種非水液體賦形劑。
10.實(shí)施方案9所述的組合物，其中該組合物含有三種或更多種非水液體賦形劑。
11.實(shí)施方案1-10任一項(xiàng)所述的組合物，其中通式1化合物占該組合物的0.0001-99重量/體積％。
12.實(shí)施方案1-11任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物構(gòu)成一單元藥劑。
13.實(shí)施方案12所述的組合物，其中該單元藥劑含有大約0.5-100mg/mL的通式1化合物。
14.實(shí)施方案10所述的組合物，其中該組合物含有約1.0-60mg/mL的通式1化合物。
15.實(shí)施方案14所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮或16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
16.實(shí)施方案1所述的組合物，其中一種或多種非水液體賦形劑包括一種聚乙二醇、丙二醇和苯甲酸芐酯。
17.實(shí)施方案16所述的組合物，其中該組合物的含水量低于約0.3體積％。
18.實(shí)施方案17所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮或16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
19.實(shí)施方案18所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
20.實(shí)施方案16所述的組合物，其還含有一種醇。
21.實(shí)施方案20所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮或16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
22.實(shí)施方案1所述的組合物，其中一種或多種非水液體賦形劑包括苯甲酸芐酯、聚乙二醇、一種醇以及任意一種另外的非水液體賦形劑。
23.實(shí)施方案22所述的組合物，其中該組合物的含水量低于約0.3體積％。
24.實(shí)施方案22或23所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮或16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
25.實(shí)施方案24所述的組合物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
26.實(shí)施方案22、23、24或25所述的組合物，其中聚乙二醇為聚乙二醇300和/或聚乙二醇200。
27.實(shí)施方案26所述的組合物，其中所述醇為聚乙二醇300。
28.實(shí)施方案22或23所述的組合物，其含有約2.5-25體積％的乙醇、約1-10體積％苯甲酸芐酯、約10-35體積％聚乙二醇300、約40-65體積％丙二醇以及約2-60mg/mL16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
28A.28A.實(shí)施方案22、23、24、25或26所述的組合物，其含有約0.1-10體積％苯甲酸芐酯、約0.1-10體積％芐醇、約1-95體積％聚乙二醇200、約1-95體積％丙二醇以及約2-60mg/mL16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。實(shí)施方案28A的組合物可以含有約2體積％苯甲酸芐酯、約2體積％芐醇、約40體積％聚乙二醇200、約51體積％丙二醇(qs)以及約50mg/mL16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
29.實(shí)施方案28所述的組合物，其含有約12.5體積％乙醇、約5體積％苯甲酸芐酯、約25體積％聚乙二醇300、約57.5體積％丙二醇以及約50mg/mL16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
30.實(shí)施方案1-29任一項(xiàng)所述的組合物，其還含有一種局部麻醉劑。
31.實(shí)施方案30所述的組合物，其中該局部麻醉劑為普魯卡因、苯佐卡因或利多卡因。
32.實(shí)施方案1-31任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物包括溶劑化物、懸浮液、膠體、凝膠或任何上述的組合。
33.一種由以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將含有一種或多種通式1化合物和第一非水液體賦形劑的組合物與第二非水液體賦形劑接觸，其中該產(chǎn)物含有少于約3％水，以及其鹽、類似物、構(gòu)型異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。
34.實(shí)施方案33所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物含有少于約0.3％的水。
35.實(shí)施方案33或34所述的產(chǎn)物，其中第一非水液體賦形劑為一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)或丙二醇。
36.實(shí)施方案33、34或35所述的產(chǎn)物，其中第二非水液體賦形劑為一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)或丙二醇。
38.一種通過以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將含有一種或多種通式1化合物以及兩種非水液體賦形劑的組合物與第三非水賦形劑接觸，其中該產(chǎn)物含有少于約3％的水，以及其鹽、類似物、構(gòu)型異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。
39.實(shí)施方案38所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物含有少于約0.3％的水。
40.實(shí)施方案38或39的產(chǎn)物，其中的兩種非水液體賦形劑選自一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)、丙二醇、苯甲酸芐酯和一種醇(如乙醇)。
41.實(shí)施方案38、39或40所述的產(chǎn)物，其中第三非水液體賦形劑為一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)、丙二醇、苯甲酸芐酯或一種醇(如乙醇)。
42.一種通過以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將含有一種或多種通式1化合物以及三種非水液體賦形劑的組合物與第四非水液體賦形劑接觸，其中該產(chǎn)物含有少于約3％的水，以及其鹽、類似物、構(gòu)型異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。
43.實(shí)施方案42所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物含有少于約0.3％的水。
44.實(shí)施方案42或43的產(chǎn)物，其中的三種非水液體賦形劑選自一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)、丙二醇、苯甲酸芐酯和一種醇(如乙醇)。
45.實(shí)施方案42、43或44所述的產(chǎn)物，其中第四非水液體賦形劑為一種聚乙二醇(如PEG300或PEG200)、丙二醇、苯甲酸芐酯和一種醇(如乙醇)。
46.實(shí)施方案33-45中任何一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中產(chǎn)物儲(chǔ)存在低溫(約4℃-約8℃)或環(huán)境溫度下約30分鐘至約2年。
47.實(shí)施方案33-46任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中一種或多種通式1化合物包括1、2、3或4種通式1化合物。
48.實(shí)施方案33-46任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中一種或多種通式1化合物包括一種通式1化合物。
49.實(shí)施方案33-48任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中一種或多種通式1化合物選自16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮和16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
50.實(shí)施方案49所述的產(chǎn)物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
51.實(shí)施方案49產(chǎn)物，其含有約2.5-25體積％乙醇、約1-10體積％苯甲酸芐酯、約10-35體積％聚乙二醇300、約40-65體積％丙二醇以及約2-60mg/mL 16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
52.實(shí)施方案51所述的產(chǎn)物，其含有約12.5體積％乙醇、約5體積％苯甲酸芐酯、約25體積％聚乙二醇300、約57.5體積％丙二醇以及約50mg/mL 16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
53.實(shí)施方案33-52任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其還含有一種局部麻醉劑。
54.實(shí)施方案52的組合物，其中的局部麻醉劑為普魯卡因、苯佐卡因或利多卡因。
55.一種通過以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將含有一種通式1化合物與一種非水液體賦形劑接觸，其中該產(chǎn)物含有少于約3體積％的水，以及其鹽、類似物、構(gòu)型異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。
56.實(shí)施方案55所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物含有少于約0.3體積％的水。
57.實(shí)施方案53所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物儲(chǔ)存在低溫(約4℃-約8℃)或環(huán)境溫度下約1小時(shí)至約2年。
58.實(shí)施方案53所述的產(chǎn)物，其中第一非水液體賦形劑為一種聚乙二醇、一種醇、丙二醇或苯甲酸芐酯。
59.實(shí)施方案33-58任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中通式1化合物占該產(chǎn)物的約0.01％-約99％重量/體積比。
60.實(shí)施方案33-59任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物為單元藥劑。
61.實(shí)施方案60所述的單元藥劑包含一種溶液，其含有約0.5-70mg/mL一種或多種通式1化合物。
62.實(shí)施方案55-61任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中一種或多種通式1化合物選自16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮和16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
63.實(shí)施方案62所述的產(chǎn)物，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
64.實(shí)施方案33-61任一項(xiàng)所述的產(chǎn)物，其中一種或多種通式1化合物選自在第1組至第21-10-6組命名的系列化合物的一種或多種化合物。
65.一種方法，其包括將實(shí)施方案1-64任一項(xiàng)所述的組合物或產(chǎn)物施用給患有病原體感染或惡性腫瘤或免疫抑制或失調(diào)疾病的患者，如受抑制的Th1免疫反應(yīng)或不需要的Th2免疫反應(yīng)。
66.實(shí)施方案65所述的方法，其中病原體感染為DNA病毒感染或RNA病毒感染。
67.實(shí)施方案66所述的方法，其中RNA病毒感染為逆轉(zhuǎn)錄病毒感染或肝炎病毒感染。
68.實(shí)施方案67所述的方法，其中逆轉(zhuǎn)錄病毒感染或肝炎病毒感染為HIV、FIV、SIV、SHIV或丙型肝炎病毒感染。
69.實(shí)施方案65所述的方法，其中病原體感染為細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染。
70.實(shí)施方案69所述的方法，其中細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染為瘧疾感染。
71.實(shí)施方案65所述的方法，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中R7、R8和R9中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)為-CH2-或-CH＝，并且5(如果存在)、8、9、14位的氫原子構(gòu)型分別為α.α.α.α、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
72.實(shí)施方案71所述的方法，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 73.實(shí)施方案72所述的方法，其中R1、R2和R4分別為-OH、一種C2-C20酯或C1-C20烷氧基，R3為-H，R7、R8和R9的兩個(gè)或三個(gè)為-CH2-。
74.實(shí)施方案72或73所述的方法，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 75.實(shí)施方案71-74任一項(xiàng)所述的方法，其中5(如果存在)、8、9和14位的氫原子構(gòu)型分別為α.α.β.α或β.α.β.α。
在其它的實(shí)施方案中，通式1化合物包括新型化合物，其中的一些在以下的編號(hào)的實(shí)施方案中描述。
1A.通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中，R7、R8和R9任意選擇，且R7、R8和R9的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)不是-CH2-或-CH＝，并且5(如果存在)、8、9和14位的氫原子構(gòu)型分別為α.α.α.α、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
2A.實(shí)施方案1A所述的化合物，其中R8為-CH2-、-O-、-S-或-NH-。
3A.實(shí)施方案1A或2A所述的化合物，其中R7為-CH2-CHR10-、-O-CHR10-或-O-C(O)-。
4A.實(shí)施方案1A、2A或3A所述的化合物，其中不存在R8或R9。
5A.實(shí)施方案1A或2A所述的化合物，其中R7和R9分別為-CHR10-、-CH2-、-CH＝、-O-、-S-或-NH-，其中R10為-OH、-SH、C1-30有機(jī)部分、C1-30酯、C1-10選擇性取代的烷基、C1-10選擇性取代的烷氧基、C1-10選擇性取代的鏈烯基或C1-10選擇性取代的炔基。
6A.實(shí)施方案1A、2A、3A、4A或5A所述的化合物，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中5(如果存在)、8、9和14位的氫原子分別為α.α.α.α、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
7A.實(shí)施方案6A所述的化合物，其中R4為-OH、＝O、-SH、C1-30酯或C1-30烷氧基，其中酯或烷氧基部分被一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基任意取代，取代基任意選自-F、-Cl、-Br、-I、-O-、＝O、-S-、-NH-、-ORPR、-SRPR或-NHRPR。
8A.實(shí)施方案6A或7A所述的化合物，其中R1為-OH、＝O、-SH、一種C1-30酯或C1-30烷氧基，其中酯或烷氧基部分被一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基任意取代，取代基任意選自-F、-Cl、-Br、-I、-O-、＝O、-S-、-NH-、-ORPR、-SRPR或-NHRPR。
9A.實(shí)施方案1A、2A或3A所述的化合物，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中5(如果存在)、8、9和14位的氫原子分別為α.α.α.α、α.α.α.β、α.α.β.α、α.β.α.α、β.α.α.α、α.α.β.β、α.β.α.β、β.α.α.β、β.α.β.α、β.β.α.α、α.β.β.α、α.β.β.β、β.α.β.β、β.β.α.β、β.β.β.α或β.β.β.β，典型為α.α.β.α或β.α.β.α。
10A.實(shí)施方案9A所述的化合物，其中R4為-OH、＝O、-SH、C1-30酯或C1-30烷氧基，其中酯或烷氧基部分被一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基任意取代，取代基任意選自-F、-Cl、-Br、-I、-O-、＝O、-S-、-NH-、-ORPR、-SRPR或-NHRPR。
11A.實(shí)施方案9A或10A所述的組合物，其中R1為-OH、＝O、-SH、一種C1-30酯或C1-30烷氧基，其中酯或烷氧基部分被一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基任意取代，取代基任意選自-F、-Cl、-Br、-I、-O-、＝O、-S-、-NH-、-ORPR、-SRPR或-NHRPR。
12A.一種含有實(shí)施方案1A-11A任一項(xiàng)所述的化合物以及一種適合于人類藥用或獸用的賦形劑的組合物，賦形劑如本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中描述的賦形劑。
13A.一種通過以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將實(shí)施方案1A-11A任一項(xiàng)所述的化合物與適合于人類藥用或獸用的賦形劑接觸，賦形劑如本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中描述的賦形劑。
14A.實(shí)施方案1A-13A任一項(xiàng)所述的化合物、組合物或產(chǎn)物用于制備一種藥物的用途，該藥物用于預(yù)防或治療或改善一種或多種與感染、免疫抑制疾病、惡性腫瘤、癌變前疾病的癥狀，或用于調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物的免疫反應(yīng)，如增強(qiáng)Th1反應(yīng)或減弱Th2反應(yīng)，如本文或引用的參考文獻(xiàn)中所述的感染、惡性腫瘤或免疫失調(diào)。
15A.實(shí)施方案14A所述的用途，其中感染為病毒感染(如HIV、HCV、皰疹病毒、外衣病毒、人類乳頭瘤病毒感染或本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中的其它病毒)、細(xì)菌感染(如疏螺旋體屬、軍團(tuán)菌屬或本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中的其它細(xì)菌)、真菌或酵母感染(如念珠菌屬、曲霉屬或本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中的其它酵母)或寄生蟲感染(如瘧疾寄生蟲、胃腸線蟲、蠕蟲、利什曼原蟲屬、隱孢子蟲屬、鼠弓形蟲、卡氏肺囊蟲、血吸蟲、腸類圓線蟲或本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中的其它寄生蟲)。
16A.實(shí)施方案1A-15A所述的化合物、組合物、產(chǎn)物或用途，其中通式1化合物是第1至第42-25-10-6組中命名的任何一種化合物，或通式1化合物為第1至第42-25-10-6組的任何化合物中所述種類的一種。
在其它方面，本發(fā)明提供適用于治療本文所述的疾病的按劑量給藥方法。以下實(shí)施方案描述某些這種方法。
1B.一種方法，其包括將一種或多種通式1化合物(或一種含有通式1化合物的組合物)間歇式向患者給藥，或?qū)⑼ㄊ?化合物(或一種含有通式1化合物的組合物)輸送給患者的組織，如本文所述的或命名的任何通式1化合物，包括上述實(shí)施方案1-64以及1A-11A中所述的化合物。
2B.實(shí)施方案1B所述的方法，其中患者患有感染、過度增殖紊亂、過度增殖疾病、免疫抑制疾病、不需要的免疫反應(yīng)，或其中患者最近經(jīng)受或不久將經(jīng)受外傷、外科手術(shù)或醫(yī)療治療，其中醫(yī)療治療不是實(shí)施方案1B的方法。
3B.實(shí)施方案2B所述的方法，其中免疫抑制疾病或不需要的免疫反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意結(jié)合有關(guān)。
4B.實(shí)施方案3B所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善，或不需要的免疫反應(yīng)(如Th2反應(yīng))減少，或其中患者Th1免疫反應(yīng)得到增強(qiáng)。
5B.實(shí)施方案3B所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得到了增強(qiáng)。
6B.實(shí)施方案5B所述的方法，其中患者的先天免疫得到增強(qiáng)。
7B.實(shí)施方案6B所述的方法，其中患者的特異性免疫得到增強(qiáng)，如其中患者的Th2免疫反應(yīng)減少或其中患者的Th1免疫反應(yīng)增強(qiáng)。
8B.實(shí)施方案2B所述的方法，其中一種或多種通式1化合物按照下述按劑量給藥方案施用給患者，該按劑量給藥方案包括以下步驟，(a)一天至少一次對(duì)患者給藥通式1化合物至少2天；(b)不對(duì)患者給藥通式1化合物至少1天；(c)一天至少一次對(duì)患者給藥通式1化合物至少2天；和(d)選擇性地重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)至少一次或重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)的變體至少一次。
9B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(c)與步驟(a)包括相同的按劑量給藥方案。
10B.實(shí)施方案9B所述的方法，其中該按劑量給藥方案的步驟(a)包括給藥一種或多種通式1化合物每天一次、每天兩次、每天三次或每天四次。
11B.實(shí)施方案10B所述的方法，其中該按劑量給藥方案的步驟(a)包括給藥一種或多種通式1化合物每天一次或每天兩次。
12B.實(shí)施方案10B所述的方法，其中步驟(a)包括給藥一種或多種通式1化合物約3-約24天。
13B.實(shí)施方案12B所述的方法，其中步驟(a)包括給藥一種或多種通式1化合物約4-約12天。
14B.實(shí)施方案13B所述的方法，其中步驟(a)包括給藥一種或多種通式1化合物約4-約8天。
15B.實(shí)施方案14B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約3-約120天。
16B.實(shí)施方案15B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約4-約60天。
17B.實(shí)施方案16B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約5-約30天。
18B.實(shí)施方案16B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約8-約60天。
19B.實(shí)施方案15B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)至少重復(fù)約4次。
20B.實(shí)施方案15B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)重復(fù)約5-約25次。
21B.實(shí)施方案15B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約2個(gè)月。
22B.實(shí)施方案15B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約12個(gè)月。
23B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約3-約120天。
24B.實(shí)施方案23B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約4-約60天。
25B.實(shí)施方案24B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約5-約30天。
26B.實(shí)施方案23B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥一種或多種通式1化合物約8-約60天。
27B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)至少一次。
28B.實(shí)施方案27B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)約3-約25次。
29B.實(shí)施方案1B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約2個(gè)月。
30B.實(shí)施方案29B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約12個(gè)月。
31B.實(shí)施方案8B-30B任一項(xiàng)所述的方法，其中免疫抑制疾病或不需要的免疫反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意結(jié)合有關(guān)。
32B.實(shí)施方案31B所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善，或不需要的免疫反應(yīng)減少。
33B.實(shí)施方案32B所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得到增強(qiáng)。
34B.實(shí)施方案33B所述的方法，其中患者的先天免疫得到增強(qiáng)。
35B.實(shí)施方案34B所述的方法，其中患者的特異性免疫得到增強(qiáng)。
36B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(c)的按劑量給藥方案比步驟(a)短。
37B.實(shí)施方案36B所述的方法，其中步驟(a)包括給藥通式1化合物7-約24天。
38B.實(shí)施方案37B所述的方法，其中步驟(c)包括給藥通式1化合物4-約12天。
39B.實(shí)施方案38B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約3-約120天。
40B.實(shí)施方案39B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約4-約60天。
41B.實(shí)施方案40B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約5-約30天。
42B.實(shí)施方案36B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)至少一次。
43B.實(shí)施方案42B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)約3-約25次。
44B.實(shí)施方案36B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約2個(gè)月。
45B.實(shí)施方案44B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約12個(gè)月。
46B.實(shí)施方案36B-45B任一項(xiàng)所述的方法，其中免疫抑制疾病或不需要的免疫反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意組合有關(guān)。
47B.實(shí)施方案46B所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善或不需要的免疫反應(yīng)減少。
48B.實(shí)施方案47B所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得到增強(qiáng)。
49B.實(shí)施方案48B所述的方法，其中患者的先天免疫得到增強(qiáng)。
50B.實(shí)施方案49B所述的方法，其中患者的特異性免疫得到增強(qiáng)。
51B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(c)包括比步驟(a)更長(zhǎng)的按劑量給藥期。
52B.實(shí)施方案51B所述的方法，其中步驟(a)包括給藥通式1化合物7-約24天。
53B.實(shí)施方案52B所述的方法，其中步驟(c)包括給藥通式1化合物4-約12天。
54B.實(shí)施方案53B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約3-約120天。
55B.實(shí)施方案54B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約4-約60天。
56B.實(shí)施方案55B所述的方法，其中步驟(b)包括不給藥通式1化合物約5-約30天。
57B.實(shí)施方案51B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)至少一次。
58B.實(shí)施方案57B所述的方法，其中步驟(d)包括重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)約3-約25次。
59B.實(shí)施方案51B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約2個(gè)月。
60B.實(shí)施方案59B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)以及重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)經(jīng)歷的時(shí)間至少約12個(gè)月。
61B.實(shí)施方案51B-60B任一項(xiàng)所述的方法，其中免疫抑制疾病或不需要的免疫反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意結(jié)合有關(guān)。
62B.實(shí)施方案61B所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善，或不需要的免疫反應(yīng)減少。
63B.實(shí)施方案62B所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得到增強(qiáng)，或其中患者的Th1免疫反應(yīng)增強(qiáng)，或患者的Th2免疫反應(yīng)減弱。
64B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)的變體包括實(shí)施第一按劑量給藥方案步驟(a)、(b)和(c)一次、二次或三次，然后實(shí)施一次或多次第二按劑量給藥方案步驟(a’)、(b’)和(c’)，其中第二按劑量給藥方案的步驟(a’)、(b’)和(c’)的一次或多次比第一按劑量給藥方案對(duì)應(yīng)的步驟時(shí)間長(zhǎng)。
65B.實(shí)施方案8B所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)的變體包括實(shí)施第一按劑量給藥方案步驟(a)、(b)和(c)一次、二次或三次，然后實(shí)施一次或多次第二按劑量給藥方案步驟(a’)、(b’)和(c’)，其中第二按劑量給藥方案的步驟(a’)、(b’)和(c’)的一次或多次比第一按劑量給藥方案對(duì)應(yīng)的步驟時(shí)間短。
66B.實(shí)施方案1B-67B任一項(xiàng)所述的方法，其中一種或多種通式1化合物以氣霧劑的形式經(jīng)口服、肌肉、靜脈內(nèi)、皮下、局部、陰道、直腸、顱骨內(nèi)、鞘內(nèi)、真皮內(nèi)給藥或口腔給藥。
67B.實(shí)施方案66B所述的方法，其中一種或多種通式1化合物主要為存在于固體制劑中的固體形式，或一種或多種通式1化合物主要為存在于液體制劑中的溶劑化物、膠體或懸浮液形式，或一種或多種通式1化合物存在于凝膠、乳膏劑或糊劑中。
68B.實(shí)施方案2B-67B任一項(xiàng)所述的方法，其中患者的病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、或免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意結(jié)合為(a)DNA病毒感染或RNA病毒感染(HSV、CMV、HBV、HCV、HIV、SHIV、SIV)；(b)支原體感染、利斯特菌屬感染或分枝桿菌感染；(c)細(xì)胞外細(xì)菌感染；(d)真菌感染；(e)酵母感染(含珠菌屬，隱珠菌屬)；(d)原生動(dòng)物(瘧疾、利什曼原蟲屬、隱孢子蟲屬、弓形體病、肺囊蟲)；(e)多細(xì)胞寄生蟲；(f)自體免疫疾病(SLE、RA、糖尿病)；(g)癌癥(實(shí)體癌選自例如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤；彌漫性癌癥選自淋巴癌、白血病、結(jié)腸癌、肉瘤)；(h)癌前期；(i)化療(阿霉素、順氯氨鉑、絲裂霉素C)；(j)放療；(k)免疫抑制治療；(l)抗感染藥劑治療；(m)外傷(外科手術(shù)或其它)；(n)一度、二度和三度燒傷；(o)免疫抑制分子；(p)胃腸炎(過敏性腸炎、克羅恩氏病、慢性腹泄)；或(q)(a)到(p)的任意組合。
69B.實(shí)施方案68B所述的方法，其中RNA病毒感染為逆轉(zhuǎn)錄感染或肝炎病毒感染。
70B.實(shí)施方案68B或69B所述的方法，其中一種或多種通式1化合物為一種通式1化合物。
71B.實(shí)施方案70B所述的方法，其中一種或多種通式1化合物在組合物中，該組合物包含有，(a)一種或多種非水液體賦形劑，其中該組合物含有少于約3體積％的水；(b)一種包含藥學(xué)可接受的賦形劑的固體；或(c)一種或多種液體賦形劑，其中該組合物含有多于約3體積％的水。
72B.實(shí)施方案68B或71B所述的方法，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮或16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮。
73B.實(shí)施方案72B所述的方法，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
74B.實(shí)施方案1B-73B所述的方法，其中通式1化合物不包括一種或多種任意通式1化合物。
75B.一種用于治療患者的非自主性體重?fù)p失、口部損傷、皮膚損傷、機(jī)會(huì)性感染、腹泄或疲勞的方法，其包括對(duì)患者(例如由病毒感染、胃腸感染、化療、厭食引起的非自主性體重?fù)p失)間歇式給藥一種或多種通式1化合物。
76B.實(shí)施方案75B所述的方法，其中患者患有免疫抑制疾病。
77B.實(shí)施方案76B所述的方法，其中患者為人。
78B.實(shí)施方案77B所述的方法，其中患者為1天至18歲的人(如1個(gè)月至6歲)。
79B.實(shí)施方案75B-78B任一項(xiàng)所述的方法，其中與不具有患者的病理狀況的典型的可比對(duì)照主體相比，患者的特異性免疫保持受損狀態(tài)。
80B.實(shí)施方案79B所述的方法，其中在一個(gè)或多個(gè)按劑量給藥療程期間(如按劑量給藥1周至約2周或更長(zhǎng))，患者的CD4細(xì)胞數(shù)目不會(huì)顯著增加。
81B.實(shí)施方案80B所述的方法，其中患者的CD4細(xì)胞數(shù)目為約20-約100CD4+細(xì)胞/mm3或約20-約75CD4+細(xì)胞/mm3。
82B.實(shí)施方案1B-81B任一項(xiàng)所述的方法，其中患者患有病原體感染或惡性腫瘤，并且病原體或惡性腫瘤在經(jīng)過一段時(shí)間后不會(huì)對(duì)通式1化合物產(chǎn)生抗藥性，該時(shí)間段通常與在用非通式1化合物進(jìn)行治療的患者中，至少約50％產(chǎn)生可測(cè)抗藥性相關(guān)。
83B.實(shí)施方案82B所述的方法，其中病原體感染為HIV、SIV、SHIV或HCV感染。
84B.實(shí)施方案82B或83B所述的方法，其中通式1化合物為以下化合物的一種或多種16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β，17β-二羥基-5α-雄烯、16β-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β-羥基-5α-雄烯-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16β-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烯-17-酮或其一種生理上可接受的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、氨基酸結(jié)合物或其肽結(jié)合物。
85B.實(shí)施方案84B所述的方法，其中通式1化合物為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮或一種生理上可接受的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、氨基酸結(jié)合物或其肽結(jié)合物。
86B.實(shí)施方案1B-85B任一項(xiàng)所述的方法，其中通式1化合物為第1至第42-25-10-6組中命名的所有化合物中的一種，或通式1化合物為第1至第42-25-10-6組的任意化合物的所述種類中的一種。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)患者的免疫細(xì)胞或免疫反應(yīng)的方法。以下編號(hào)的實(shí)施方案描述某些這種方法。
1C.一種調(diào)節(jié)患者的先天免疫或增強(qiáng)患者的Th1免疫反應(yīng)或減少患者的Th2免疫反應(yīng)的方法，其包括對(duì)患者給藥通式1化合物，包括本文所述或公開的所有通式1化合物，包括在上述實(shí)施方案1-64和1A-11A中所述的化合物。
2C.實(shí)施方案1C的方法，其中患者的先天免疫得到了增強(qiáng)。
3C.實(shí)施方案1C或2C所述的方法，其中患者患有先天免疫抑制疾病、受抑制的Th1免疫反應(yīng)或不需要的Th2免疫反應(yīng)。
4C.實(shí)施方案3C所述的方法，其中先天免疫抑制、受抑制的Th1免疫反應(yīng)或不需要的Th2反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在或上述的任意結(jié)合有關(guān)。
5C.實(shí)施方案1C-3C任一項(xiàng)所述的方法，其中患者的Th1免疫反應(yīng)得到了增強(qiáng)。
6C.實(shí)施方案1C所述的方法，其中患者的Th2免疫反應(yīng)減少了。
7C.實(shí)施方案6C所述的方法，其中患者所患的疾病包括不需要的免疫反應(yīng)(如自體免疫疾病、SLE、糖尿病)。
9C.實(shí)施方案6C或7C所述的方法，其中患者為脊椎動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或人。
10C.實(shí)施方案9C所述的方法，其中脊椎動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或人的特異性免疫調(diào)節(jié)為(i)在體內(nèi)或體外對(duì)病毒感染或惡性腫瘤細(xì)胞的增強(qiáng)的CTL或Th1反應(yīng)，(ii)通過樹突細(xì)胞或樹突細(xì)胞前體增強(qiáng)抗原表達(dá)或生物活性，或(iii)增強(qiáng)對(duì)受病毒感染的或惡性腫瘤細(xì)胞的殺傷力。
11C.實(shí)施方案10C所述的方法，其中脊椎動(dòng)物為人，病毒感染為HIV感染，CTL或Th1反應(yīng)包括對(duì)于一種或多種HIV的gag蛋白或HIV的gp120增強(qiáng)的反應(yīng)。
12C.實(shí)施方案1C、4C、10C或11C所述的方法，其中患者的Th1細(xì)胞、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL細(xì)胞)、NK細(xì)胞、外圍血液淋巴細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞或纖維細(xì)胞是被激活的，該激活由相對(duì)于未處理的對(duì)照物，主體增強(qiáng)的3H-胸苷吸收，或在循環(huán)中的細(xì)胞型數(shù)量的增加或從一個(gè)組織或分隔部分(如皮膚)到另一個(gè)組織或分隔部分(例如血液、淋巴結(jié)、脾臟或胸腺)的細(xì)胞類型的明顯的運(yùn)動(dòng)而度量。
13C.實(shí)施方案1C、4C、10C、11C或12C所述的方法，其中通式1化合物調(diào)節(jié)患者的NK細(xì)胞一種或多種基因的轉(zhuǎn)錄，噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞或纖維細(xì)胞被激活(例如通過提高的蛋白激酶C的活性或通過類固醇受體或孤核激素受體的生物活性的調(diào)節(jié)而測(cè)量)。
14C.實(shí)施方案1C所述的方法，其中通式1化合物增強(qiáng)患者的NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞或纖維細(xì)胞的一種或多種中的溶酶體運(yùn)動(dòng)。
15C.實(shí)施方案1C所述的方法，其中通式1化合物增強(qiáng)患者的NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突細(xì)胞或纖維細(xì)胞(如PKCα、PKCβ、PKCγ和PKCζ)的一種或多種中的蛋白激酶C的活性。
16C.一種含有部分純化或純化的復(fù)合體的組合物，該復(fù)合體含有一種通式1化合物和一種類固醇受體、一種血清類固醇結(jié)合蛋白(例如人類血清白蛋白、α1-酸糖蛋白、性激素結(jié)合球蛋白、睪酮結(jié)合球蛋白、皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白、雄性激素結(jié)合蛋白(大鼠))或一種結(jié)合配偶體(如復(fù)合試劑、脂質(zhì)體、抗體)。
17C.一種通過以下過程產(chǎn)生的產(chǎn)物將實(shí)施方案16C中部分純化或純化的組合物與一種或多種無菌容器、一種或多種注射器、一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑(如上述設(shè)計(jì)說明書中定義的賦形劑，包括糖、乳糖、蔗糖、填充劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、或本文引用的參考文獻(xiàn)中命名的任何賦形劑)、一種或多種細(xì)胞、一種或多種組織、血漿或血液接觸。
18C.實(shí)施方案1C-17C所述的方法，其中患者患有感染、過度增殖紊亂、過度增殖疾病、免疫抑制疾病、不需要的免疫反應(yīng)，或其中患者最近經(jīng)歷了或近期內(nèi)將要經(jīng)歷創(chuàng)傷、外科手術(shù)或醫(yī)藥治療，其中醫(yī)藥治療不是實(shí)施方案1C所述的方法。
19C.實(shí)施方案18C所述的方法，其中免疫抑制疾病或不需要的免疫反應(yīng)與病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲、多細(xì)胞寄生蟲、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、胃腸炎或上述的任意結(jié)合有關(guān)。
20C.實(shí)施方案19C所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善或不需要的免疫反應(yīng)減少。
21C.實(shí)施方案19C所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病與病毒感染有關(guān)。
22C.實(shí)施方案21C所述的方法，其中病毒感染包括DNA病毒或RNA病毒感染。
23C.實(shí)施方案22C所述的方法，其中RNA病毒感染包括逆轉(zhuǎn)錄感染或肝炎病毒感染。
24C.實(shí)施方案18C-23C所述的方法，其中患者患有慢性腹泄、非自主性體重?fù)p失(通常至少約5％或以上)、惡病質(zhì)(通常至少大約5％或以上)、肌肉萎縮、一種或多種口部損傷(通常至少約1cm2)、一種或多種生殖器損傷(通常至少約1cm2)、皮膚損傷(通常至少約1cm2)或與AIDS有關(guān)的機(jī)會(huì)性感染的一種或多種。
25C.一種方法(例如測(cè)定通式1化合物的生物活性或調(diào)節(jié)細(xì)胞或不含細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)錄)，其包括(a)將通式1化合物與一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)細(xì)胞群在體外或體內(nèi)接觸；(b)測(cè)定以下一項(xiàng)或多項(xiàng)(i)結(jié)合配偶體與通式1化合物的復(fù)合體，(ii)細(xì)胞或細(xì)胞群的增殖，(iii)細(xì)胞或細(xì)胞群的分化，(iv)蛋白質(zhì)激酶C的活性，(v)蛋白質(zhì)激酶C底物磷酸化的水平，(vi)一個(gè)或多個(gè)靶基因的轉(zhuǎn)錄，(vii)類固醇如糖皮質(zhì)激素的細(xì)胞反應(yīng)的抑制或增強(qiáng)，(viii)類固醇(誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄的抑制)如糖皮質(zhì)激素、性類固醇，(ix)逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV、SIV、FIV或SHIV)LTR促進(jìn)的轉(zhuǎn)錄的抑制，或(x)在體內(nèi)血液循環(huán)中免疫細(xì)胞群數(shù)量的調(diào)節(jié)(如哺乳動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類或人類體內(nèi)的循環(huán)的外周血淋巴細(xì)胞)；和(c)任意選擇地將步驟(b)中得到的結(jié)果與一種合適的對(duì)照進(jìn)行比較。
26C.實(shí)施方案25C所述的方法，其中結(jié)合配偶體為類固醇受體、轉(zhuǎn)錄因子或類固醇激素總科的孤獨(dú)受體。
27C.實(shí)施方案25C所述的方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲有關(guān)的復(fù)制或細(xì)胞病理效應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)的活性。
28C.實(shí)施方案25C所述的方法，其中所測(cè)定的生物活性是通式1化合物對(duì)與逆轉(zhuǎn)錄病毒、肝炎病毒或原生寄生蟲有關(guān)的復(fù)制和細(xì)胞病理效應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)的活性，或所測(cè)定的生物活性是一個(gè)細(xì)胞或包含NK細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、感染病毒的細(xì)胞、感染細(xì)菌的細(xì)胞或感染寄生蟲的細(xì)胞的細(xì)胞群的新陳代謝(通過3H胸苷吸收進(jìn)行分析)。
29C.實(shí)施方案25C所述的方法，其中靶基因是病毒基因、細(xì)菌基因、寄生蟲基因、與癌癥有關(guān)的基因。
30C.實(shí)施方案29C所述的方法，其中病毒基因?yàn)榫酆厦富颉⒛孓D(zhuǎn)錄基因、包膜基因、蛋白酶基因或與病毒核酸復(fù)制有關(guān)的基因或病毒結(jié)構(gòu)基因。
31C.實(shí)施方案30C所述的方法，其中聚合酶基因編碼DNA聚合酶或編碼RNA聚合酶。
32C.實(shí)施方案30C所述的方法，其中逆轉(zhuǎn)錄基因編碼人類、靈長(zhǎng)類、鳥類或貓科動(dòng)物逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶。
33C.一種方法，其包括將通式1化合物施用給患有逆轉(zhuǎn)錄病毒感染且CD4數(shù)為550或更少的人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物。
34C.實(shí)施方案33C所述的方法，其中人的CD4數(shù)目為約20-約100或約20-約80。
35C.實(shí)施方案33C所述的方法，其中人的CD4數(shù)目為約30-約150。
36C.實(shí)施方案33C所述的方法，其中人的CD4數(shù)目為約500或更少，約450或更少，約400或更少，約350或更少，約300或更少，約250或更少，約200或更少，約150或更少，約100或更少，約50或更少，或約25或更少或者約20或更少。
37C.實(shí)施方案33C-36C所述的方法，其中通式1化合物存在于含有一種或多種非水液體賦形劑以及少于約3體積％水的組合物中，或存在于本說明書或任何上述編號(hào)的實(shí)施方案中所公開的任何制劑中。
38C.實(shí)施方案33C-37C所述的方法，其中通式1化合物按照本說明書中或任何上述編號(hào)的實(shí)施方案中所公開的一種間歇式按劑量給藥方案給藥。
39C.實(shí)施方案30C-45C所述的方法，其中人同時(shí)感染了丙型肝為病毒、乙型肝炎病毒、HSV-1、HSV-2、瘧疾寄生蟲、肺囊蟲寄生蟲或隱孢子蟲寄生蟲。
40C.實(shí)施方案46C所述的方法，其中人的HCV水平降低。
41C.一種方法，其包括將通式1化合物施用給患者或組織培養(yǎng)中的神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞，因此通式1化合物結(jié)合到與神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的細(xì)胞受體上，并且(1)引發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)或組織培養(yǎng)的細(xì)胞的生物反應(yīng)和/或(2)引發(fā)傳遞到遠(yuǎn)的部位或細(xì)胞的神經(jīng)元反應(yīng)，其中該方法可任意用于篩選通式1化合物的生物活性，治療患者的病理疾病(如病原體感染如病毒(HIV)、惡性腫瘤或神經(jīng)系統(tǒng)紊亂如與AIDS有關(guān)的癡呆、老年性癡呆、帕金森氏病、多發(fā)性硬化)，或測(cè)定通式1化合物對(duì)患者或神經(jīng)系統(tǒng)或組織培養(yǎng)中的細(xì)胞的生物有效度或新陳代謝，其中新陳代謝可以任意通過將一種通式1化合物的生物效應(yīng)與對(duì)照化合物比較進(jìn)行測(cè)定，對(duì)照化合物可以與通式1化合物不同。
42C.實(shí)施方案41C所述的方法，其中與神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞有關(guān)的受體是神經(jīng)傳遞系受體(如γ-氨基丁酸受體如A型、NMDA受體)和/或類固醇受體(如雄性激素受體、雌性激素受體)。
43C.實(shí)施方案41C或42C所述的方法，其中神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞是神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和/或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
44C.實(shí)施方案41C、42C或43C所述的方法，其中神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞或組織培養(yǎng)細(xì)胞的生物反應(yīng)為基因轉(zhuǎn)錄(如神經(jīng)傳遞素、血管升壓素、熱激蛋白)增加或減少、蛋白質(zhì)(如血管升壓素)分泌增加或減少、氧化應(yīng)力損害減少、氧化氮釋放增強(qiáng)和/或神經(jīng)突增長(zhǎng)加強(qiáng)。
45C.實(shí)施方案1C-44C任一項(xiàng)所述的方法，其中通式1化合物是選自通式1化合物的任意一種或多種或第1組至第21-10-6組命名的化合物中的一種或多種。
46C.一種方法，其用于(a)通過患者的免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞抗原的表達(dá)，其中免疫細(xì)胞抗原選自CD3、CD11c、CD14、CD16、CD19、CD25、CD38、CD56、CD62L、CD69、CD45RA、CD45RO、CD123、HLA-DR、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNFα、IGF1和γIFN，或(b)激活患者的CD8+T細(xì)胞或CD8-T細(xì)胞，其中激活包括至少暫時(shí)增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)CD25或CD69的表達(dá)，或(c)增加患者CD16+細(xì)胞(如CD8+、CD16+、CD38+或細(xì)胞CD8-、CD16+、CD38+)內(nèi)被CD8+或CD8-淋巴因子激活的殺傷(淋巴)細(xì)胞的比例，或(d)增加以下細(xì)胞的比例(i)CD8-、CD16+天然殺傷細(xì)胞，(ii)CD8+、CD16+天然殺傷細(xì)胞或(iii)調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8-、CD16+細(xì)胞，或(iv)調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8+、CD16+細(xì)胞，或(e)增加患者的循環(huán)白血細(xì)胞(如Lin-、HLA-DR+、CD123+或Lin-、HLA-DR+、CD11c+細(xì)胞)中的樹突細(xì)胞前體的比例，或(f)增加患者的循環(huán)的白血細(xì)胞中CD45RA+T細(xì)胞或CD45+、RO+T細(xì)胞的比例，或(g)改變(增加或減少)患者的循環(huán)的白血細(xì)胞中CD62L+T細(xì)胞的比例或相對(duì)數(shù)目，或(h)增加患者的循環(huán)的CD8+或CD4+T細(xì)胞中表達(dá)CD62L的CD8+或CD4+T細(xì)胞的比例，或(i)減少患者的循環(huán)的CD8+或CD4+T細(xì)胞中表達(dá)CD62L的CD8+或CD4+T細(xì)胞的比例，或(j)增加患者的循環(huán)的白血細(xì)胞中HLA-DR+、CD8+、CD38+細(xì)胞的比例，或(k)減少由患者的白血細(xì)胞所表達(dá)的或存在于患者的白血細(xì)胞或患者的血漿中的(或患者的白細(xì)胞在體外受刺激后所表達(dá)的)IL-4或IL-10的水平，或(1)至少暫時(shí)增加存在于患者的白血細(xì)胞或患者的血漿中的樹突細(xì)胞前體或樹突細(xì)胞的數(shù)目，或(m)增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞表達(dá)IL-2、IL-12或γIFN的能力，該方法包括將通式1化合物和藥學(xué)可接受的賦形劑施用給患者。
47C.實(shí)施方案46C所述的方法，其中通式1化合物具有以下結(jié)構(gòu)， 其中，R1為-OH或可以在生理?xiàng)l件下水解轉(zhuǎn)化為-OH的基團(tuán)(如C1-30酯)，兩者都可以處于α-或β-構(gòu)型；R2為處于α-或β-構(gòu)型的氫或者當(dāng)5、6位置為雙鍵時(shí)無R2；R3為-H或-Br，兩者都可以處于α-或β-構(gòu)型；R4為-OH或可以在生理?xiàng)l件下水解轉(zhuǎn)化為-OH的基團(tuán)(如C1-30酯)，兩者都可以處于α-或β-構(gòu)型，或R4為＝O并且在同一個(gè)碳原子上不存在鍵合的氫原子；R4A為R4、-C(O)-CH3或-C(O)-(CH2)1-6-CH3；R5為-H或-OH或可以在生理?xiàng)l件下水解轉(zhuǎn)化為-OH的基團(tuán)(如C1-30酯)，任一者都可以處于α-或β-構(gòu)型，或R5為＝O并且在同一個(gè)碳原子上不存在鍵合的氫原子；在5-6位的點(diǎn)劃線為一個(gè)任意的雙鍵，或其中通式1化合物具有本文命名或描述的任何通式1化合物中所示的結(jié)構(gòu)，包括上述實(shí)施方案1-64和1A-11A所述的化合物。
48C.實(shí)施方案46C或47C所述的方法，其中每天將通式1化合物施用給患者，時(shí)間從一天至約15天，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多天。
49C.實(shí)施方案48C所述的方法，其中在對(duì)患者給藥通式1化合物至少約4-7天的最后，如至少4、5、6、7或更多天，可檢測(cè)到免疫細(xì)胞抗原的表達(dá)受到了調(diào)節(jié)。
50C.實(shí)施方案48C或49C所述的方法，其中在對(duì)患者給藥通式1化合物至少約8-90天的最后，例如至少約8、10、12、15、20、25、28、30、35、40、42、45、49、50、55、56、60、63、65、70、75、77、80、84、85、90、91、95、98、100或更多天，可檢測(cè)到免疫細(xì)胞抗原的表達(dá)。
51C.實(shí)施方案46C-51C任一項(xiàng)所述的方法，其中患者患有免疫抑制疾病、病原體感染或與Th1免疫反應(yīng)不足或Th2免疫反應(yīng)過度有關(guān)的疾病。
52C.實(shí)施方案51C所述的方法，其中病原體感染為病毒感染、細(xì)菌感染、酵母感染、真菌感染或類病毒感染，如其中病原體感染為病毒感染如DNA病毒感染或RNA病毒感染(如嗜肝DNA病毒、細(xì)小病毒、乳多空病毒、腺病毒、皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、黃病毒、披膜病毒、彈狀病毒、微小RNA病毒、布尼亞病毒、呼腸孤病毒、正粘病毒或副粘病毒，如HIV1、HIV2、SIV、SHIV或本文所述或引用的參考文獻(xiàn)中所述的其它病毒所引起的感染)。
53C.實(shí)施方案52C所述的方法，其中患者患有與病原體感染有關(guān)或由病原體感染引起的免疫抑制疾病。
54C.實(shí)施方案46C-53C任一項(xiàng)所述的方法，其中患者為哺乳動(dòng)物、人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。
55C.實(shí)施方案46C-54C任一項(xiàng)所述的方法，其中通過非腸道(例如通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉或髓內(nèi)注射)、局部、口服、舌下或口腔對(duì)患者給藥約0.05mg/kg/天至約20mg/kg/天，例如約0.1mg/kg/天、約0.2mg/kg/天、約0.5mg/kg/天、約1.0mg/kg/天、約1.5mg/kg/天、約2mg/kg/天、約2.5mg/kg/天、約3.0mg/kg/天、約4mg/kg/天或約6mg/kg/天，即約0.1-10mg/kg/天，典型約0.2-7mg/kg/天。
56C.實(shí)施方案55C所述的方法，其中患者同時(shí)服用一種或多種第二治療藥劑以治療病原體感染，如病毒感染如HIV-1感染、HIV-2感染、HAV感染、HBV感染、HCV感染、埃巴病毒感染、HSV-1感染、HSV-2感染、人類皰疹病毒6感染、人類皰疹病毒7感染、人類皰疹病毒8感染，細(xì)菌或寄生蟲感染如瘧疾感染、利什曼病、隱孢子蟲病、弓形體病、支原體感染、毛滴蟲感染、衣原體感染、肺囊蟲感染、沙門氏菌感染、利斯特菌感染、大腸桿菌感染、耶爾森菌感染、弧菌感染、假單胞桿菌感染、分枝桿菌感染、嗜血桿菌感染、奈瑟球菌感染、葡萄球菌感染或鏈球菌感染。
57C.實(shí)施方案56C所述的方法，其中一種或多種第二治療藥劑為蛋白酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄抑制劑、病毒、細(xì)菌或寄生蟲的DNA或RNA聚合酶抑制劑、抗菌抗生素或抗真菌藥劑，如AZT、ddI、ddC、D4T、3TC、病毒(如HIV)融合抑制劑、羥基脲、那非那韋、沙奎那韋、利托那韋、印地那韋、氯喹、氯喹類似物、兩性霉素B、氟康唑、克霉唑、異煙肼、氨苯砜、利福平、環(huán)絲氨酸、紅霉素、四環(huán)素、抗生素、萬古霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、氟喹酮(flurorquinolone)(如卷須霉素、氟哌酸)、頭孢霉素抗生素、β-內(nèi)酰胺抗生素或氨基糖苷類抗生素(如鏈霉素、卡那霉素、妥布拉霉素)。
58C.實(shí)施方案46C-57C所述的方法，其中患者為人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。
59C.一種組合物，其含有有效量的免疫細(xì)胞子集調(diào)節(jié)通式1化合物以及藥學(xué)可接受的載體。
60C.實(shí)施方案59C所述的組合物，其中免疫細(xì)胞子集為(1)CD8+T細(xì)胞，(2)CD4+T細(xì)胞，(3)CD8+淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞，(4)CD8-淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞，(5)CD8-、CD16+天然殺傷細(xì)胞，(6)CD8+、CD16+天然殺傷細(xì)胞，(7)調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8-、CD16+細(xì)胞，(8)調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8+、CD16+細(xì)胞，(9)樹突細(xì)胞或樹突細(xì)胞前體，(10)CD45RA+T細(xì)胞，(11)CD45RO+T細(xì)胞，(12)CD45RA+、CD45RO+T細(xì)胞，(13)CD8+、CD62LT細(xì)胞，(14)CD4+、CD62L+T細(xì)胞或(15)HLA-DR+、CD8+、CD38+T細(xì)胞。
61C.一種檢測(cè)與對(duì)患者給藥通式1化合物有關(guān)的生物反應(yīng)的方法，其包括(1)從患者獲得樣品，(2)將通式1化合物施用給患者以得到受處理的患者，(3)從受到處理的患者取得第二樣品，(4)在獲得樣品的24小時(shí)內(nèi)，分析該樣品以得到檢測(cè)生物反應(yīng)的對(duì)照信息，(5)在獲得第二樣品的24小時(shí)內(nèi)，分析第二樣品是否存在生物反應(yīng)以獲得實(shí)驗(yàn)信息，和(6)任意將對(duì)照信息與實(shí)驗(yàn)信息進(jìn)行比較以檢測(cè)生物反應(yīng)的存在、不存在、相對(duì)強(qiáng)度或絕對(duì)強(qiáng)度。
62C.實(shí)施方案61C所述的方法，其中通式1化合物還含有藥學(xué)可接受的載體。
63C.實(shí)施方案61C或62C所述的方法，其中與對(duì)患者給藥通式1化合物有關(guān)的生物反應(yīng)為調(diào)節(jié)細(xì)胞表面抗原的表達(dá)、免疫細(xì)胞子集中細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量或相對(duì)數(shù)量增加、免疫細(xì)胞子集中細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量或相對(duì)數(shù)量減少或免疫細(xì)胞子集中細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量或相對(duì)數(shù)量沒有變化。
64C.實(shí)施方案63C所述的方法，其中免疫細(xì)胞子集為CD8+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、CD8-和CD16+天然殺傷細(xì)胞、循環(huán)樹突細(xì)胞前體、循環(huán)樹突細(xì)胞、組織樹突細(xì)胞前體、組織樹突細(xì)胞、CD8+淋巴激活的殺傷細(xì)胞、CD8-淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、CD8-和CD16+天然殺傷細(xì)胞、CD8+和CD16+天然殺傷細(xì)胞、調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8-、CD16+細(xì)胞、調(diào)節(jié)依賴抗體的(細(xì)胞介導(dǎo))細(xì)胞毒性的CD8+、CD16+細(xì)胞、CD45RA+T細(xì)胞、CD45RA+、CD45RO+T細(xì)胞、CD45RO+T細(xì)胞、CD8+、CD62LT細(xì)胞、CD4+、CD62L+T細(xì)胞或HLA-DR+、CD8+、CD38+T細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞。
65C.實(shí)施方案64C所述的方法，其中生物反應(yīng)至少暫時(shí)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞抗原或免疫輔助細(xì)胞抗原(如在內(nèi)皮細(xì)胞表面的粘著分子或在T細(xì)胞或B細(xì)胞表面的細(xì)胞因子受體)。
66C.實(shí)施方案65C所述的方法，其中免疫細(xì)胞抗原為蛋白質(zhì)、糖蛋白或通?；騼H僅由淋巴樣細(xì)胞(淋巴細(xì)胞或白血細(xì)胞或其前體，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、LAK細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突細(xì)胞)表達(dá)的細(xì)胞表面抗原。
67C.實(shí)施方案65C所述的方法，其中免疫細(xì)胞抗原為CD分子、白介素或細(xì)胞因子，任意選自CD16、CD25、CD38、CD62L、CD69、CD45RA、CD45RO、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNFα、IGF1和γIFN。
68C.實(shí)施方案61C-67C任一項(xiàng)所述的方法，其中患者為人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。
69C.一種改變患者體內(nèi)Th1-Th2平衡的方法，其包括將有效量的通式1化合物施用給患者，由此能夠檢測(cè)到患者的IL-4或IL-10的表達(dá)或分泌受到了調(diào)節(jié)。
70C.實(shí)施方案30C所述的方法，其中患者的IL-4或IL-10的表達(dá)或分泌減少并且可以檢測(cè)到患者體內(nèi)對(duì)感染或免疫抑制疾病產(chǎn)生的Th1免疫反應(yīng)的Th1-Th2平衡增強(qiáng)。
71C.實(shí)施方案1C-70C任一項(xiàng)所述的方法，其中通式1化合物為第1至第42-25-10-6組命名的任何化合物，或通式1化合物為第1至第42-25-10-6組的任何化合物中所述的任何種類。
讀罷這些實(shí)施方案，那么對(duì)這些實(shí)施方案、權(quán)利要求以及本公開的其余的部分變化或修改對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員來講都是顯而易見的。這種變化和修改都在本發(fā)明的范圍和精神之內(nèi)。本文所有引用的文獻(xiàn)以其全文引入作為參考。本文所引用的所有文獻(xiàn)在此專門引入作為參考。
實(shí)施例以下的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1.BrEA制劑如下在25％聚乙二醇300、12.5％無水乙醇、5％苯甲酸芐酯和57.5％丙二醇中制備兩批非水溶液BrEA制劑，其中BrEA的濃度為50mg/mL。BrEA從Procyte公司獲得。其余的賦形劑如下所示。
供應(yīng)商賦形劑 規(guī)格 終產(chǎn)品濃度批號(hào)阿爾科化學(xué)公司(Arco Chemical)丙二醇 USPHOC-61220-0110457.5體積％聚乙二醇 聯(lián)合碳化公司(Union Carbide)NF25體積％300695752麥克爾米科蒸餾(McCormick Distilling)無水乙醇 USP12.5體積％97K10光譜制藥(Spectrum Pharmaceuticals)苯甲酸芐酯 USP5體積％MG025
該制劑的制備是通過將BrEA懸浮在聚乙二醇300中，并且按順序加入丙二醇、苯甲酸芐酯和無水乙醇以形成溶液，另外加入丙二醇將溶液稀釋到最終需要的體積。過程如下所述。
將計(jì)量好的聚乙二醇300加入到混合容器中，然后一邊攪拌，一邊把計(jì)量的BrEA加入容器中，至少攪拌5分鐘形成均勻的乳狀液體，將丙二醇加入容器，至少攪拌5分鐘以形成均勻的懸浮液。將計(jì)量的苯甲酸芐酯加入容器，攪拌大約5分鐘以形成半透明懸浮液。將無水乙醇加入容器，攪拌大約5分鐘以形成清澈的無色溶液。然后加入丙二醇以獲得最終需要的制劑，并且攪拌約5分鐘。將該藥物溶液轉(zhuǎn)移到分裝裝置中，在每小瓶中加入1.2mL。在氮?dú)鈮毫ο拢瑢⑷芤哼B續(xù)通過兩個(gè)0.2μm聚偏氟乙烯過濾器過濾至2cc琥珀色玻璃小瓶中。小瓶用涂有聚四氟乙烯的丁基橡膠塞蓋住小瓶，卷邊密封。產(chǎn)品小瓶中使用的材料如下所示。材料 來源產(chǎn)品代碼描述小瓶 Wheaton 2702-B51BA 管狀小瓶，2mL/13mm，玻璃，類型1琥珀色塞子 Omniflex V923913mm，涂有聚四氟乙烯的丁基橡膠塞FM257/2密封 West 4107 翻轉(zhuǎn)密封，13mm淡灰色橋接產(chǎn)品規(guī)格經(jīng)以下一種或多種分析檢測(cè)。
*NLT-不小于**NMT-不大于批次分析
實(shí)施例2.BrEA藥物物質(zhì)和BrEA制劑的穩(wěn)定性使用BrEA以及來自實(shí)施例1的制劑進(jìn)行6個(gè)月期的加速穩(wěn)定性研究。在1、2、3、4、5和6個(gè)月時(shí)間點(diǎn)時(shí)取樣，并與實(shí)施例1所列的規(guī)格進(jìn)行比較。用第1批和第2批的BrEA制劑進(jìn)行實(shí)時(shí)穩(wěn)定性(25℃，60％相對(duì)濕度)研究，取樣時(shí)間點(diǎn)為3、6、9、12、18、24和36月。在40℃和75％相對(duì)濕度下儲(chǔ)存3個(gè)月后，BrEA效力的分析結(jié)果至少為標(biāo)簽值的95％。從穩(wěn)定性測(cè)試得到的結(jié)果表明升高第1批和第2批制劑的溫度和濕度時(shí)，BrEA至少可以穩(wěn)定3個(gè)月。
實(shí)施例3.靈長(zhǎng)類動(dòng)物間歇式按劑量給藥方案用實(shí)施例1所述的BrEA制劑治療感染有SHIV229逆轉(zhuǎn)錄病毒的豬尾短尾猿猴。SHIV229是包含HIV和SIV序列的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，J.Thompson等，摘要#75，第16屆非人類靈長(zhǎng)類模型的愛滋病年會(huì)，1998年10月7-10日，亞特蘭大，佐治亞州，M.Agy等，摘要#67，第16屆非人類靈長(zhǎng)類模型的愛滋病年會(huì)，1998年10月7-10日，亞特蘭大，佐治亞州。在猴子身上建立進(jìn)行性感染，在感染后約180-210天時(shí)未受處理的受到感染的動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的末期疾病癥狀。四只豬尾短尾猿猴(每組2只)接受皮下注射制劑1或2mg/kg體重連續(xù)10天(方案1)。在第8周，4只猴子中的3只再次治療，對(duì)2只未受治療的猴子隔日用5mg/kg制劑治療20天(方案2)。在第19周，所有接受治療的猴子都開始用每天一次3mg/kg BrEA制劑的第3療程連續(xù)處置10天，每次隔4周重復(fù)所有3個(gè)療程(方案3)。
感染有1-100個(gè)TCID50單位的動(dòng)物通過靜脈內(nèi)或直腸內(nèi)給藥。在按劑量給藥開始之前，第一組動(dòng)物的病毒滴定度范圍為106-108。所有的動(dòng)物都顯示血漿病毒SHIV RNA的初期上升。2-3周后，滴定度開始下降，并且4只動(dòng)物中的3只經(jīng)過初步治療后4-5周時(shí)，其平均病毒滴定度在基線以下，為0.76log，顯示對(duì)治療作出了反應(yīng)。到第8周時(shí)，所有的動(dòng)物的滴定度都返回到基線值。血糖濃度下降顯著，堿性磷酸酶水平上升，而SGOT/GGT值向正常值的最高端發(fā)展。沒有觀察到所監(jiān)測(cè)參數(shù)的其他明顯變化。在第一方案結(jié)束時(shí)，所有猴子的CD4水平仍然低于100細(xì)胞/mm3。
第二處置方案(方案2)的5只猴子中的3只對(duì)BrEA治療的反應(yīng)比以更低的劑量處置所觀察到的反應(yīng)水平程度深、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。在有反應(yīng)的猴子中，低于基線平均下降1.47log。經(jīng)過第一方案后沒有反應(yīng)的猴子當(dāng)在第二方案中給藥BrEA制劑時(shí)出現(xiàn)反應(yīng)。兩只沒有出現(xiàn)反應(yīng)，一只來自受治療組，一只來自無經(jīng)驗(yàn)處理組。第三處置(方案3)正在進(jìn)行，動(dòng)物正受到監(jiān)測(cè)。
該研究中的猴子搶救自一次傳染性研究，并且受研究的第一組的4只猴子(方案1)由于與疾病有關(guān)的原因情況已經(jīng)開始惡化，人們認(rèn)為它們?cè)趯?shí)驗(yàn)開始后只能活幾周。一只猴子在第356天死于對(duì)獲得血液分析樣品期間使用的麻醉劑的毒性反應(yīng)。在應(yīng)用這些藥物時(shí)，其余的猴子受到多個(gè)輪次的治療，看起來處于較好的臨床健康狀態(tài)。從感染開始，它們存活了超過380天。通過間歇式按劑量給藥BrEA制劑進(jìn)行治療。三只對(duì)照猴子感染了1-10,000個(gè)SHIV229TCID50單位，并且沒有接受治療。這些猴子被作為非治療支持存活研究。感染有SHIV229的豬尾短尾猿猴的平均死亡時(shí)間為193天。受到治療的猴子保持良好的臨床健康狀態(tài)超過350天，并且其CD4水平低于20細(xì)胞/mm3，且除了一只猴子出現(xiàn)輕度貧血外沒有機(jī)會(huì)性感染或與疾病有關(guān)的癥狀。
這些結(jié)果顯示感染有具有極強(qiáng)的致病性的SHIV逆轉(zhuǎn)錄病毒的靈長(zhǎng)類動(dòng)物表現(xiàn)出完全出乎意料的療效反應(yīng)。結(jié)果表明該治療方案中的大部分患者不僅相對(duì)于未處理的對(duì)照動(dòng)物存活期延長(zhǎng)，而且與逆轉(zhuǎn)錄感染有關(guān)的臨床癥狀也大大地得到改善，盡管事實(shí)上其CD4數(shù)目仍然很低，即初期低于約100CD4細(xì)胞/mm3，在治療方案的后期低于約20CD4細(xì)胞/mm3。到此為止，這些結(jié)果即(1)大部分具有低CD4水平(低于約150細(xì)胞/mm3，特別低于約75細(xì)胞/mm3)的患者具有良好的臨床健康狀態(tài)，和(2)盡管間歇式按劑量給藥期延長(zhǎng)，臨床上沒有對(duì)治療的病毒抗藥性信號(hào)，在靈長(zhǎng)類、人類或其它動(dòng)物身上都沒有出現(xiàn)。SHIV229模型在豬尾短尾猿身上致病力極強(qiáng)。在這些模型身上幾個(gè)星期出現(xiàn)的現(xiàn)象在感染有HIV的人類身上通常需要幾年。人們沒有料到治療這些感染有病毒的猴子并且使用通常使用的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑如AZT、3TC或蛋白酶抑制劑治療，會(huì)顯著影響疾病發(fā)展的過程。這些動(dòng)物的臨床狀況繼續(xù)改善，如每只動(dòng)物的體重增加約8-15％。這些結(jié)果說明使用間歇式按劑量給藥方案進(jìn)行治療非常有效，盡管患者的特異性免疫仍然有明顯的損害，如低CD4數(shù)目所表明的結(jié)果。使用免疫刺激劑如IL-2可以增加CD4數(shù)目，或根據(jù)治療方案、給藥的持續(xù)時(shí)間或患者的最初醫(yī)學(xué)狀況，在某些患者身上例如人它們可能會(huì)自然增加。這里顯示的抗病毒效果看起來至少部分是通過增強(qiáng)患者的免疫反應(yīng)起作用的，如通過噬菌細(xì)胞(NK細(xì)胞、單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞)增強(qiáng)免疫反應(yīng)，和/或增強(qiáng)任何其余的特異性免疫反應(yīng)，即使有的話，患者能夠集合這些特異性免疫反應(yīng)。
實(shí)施例4.人類治療方案使用含BrEA或其它通式1化合物的非水溶液制劑進(jìn)行劑量增加的臨床實(shí)驗(yàn)，這些制劑按照實(shí)施例1制備。病人為無處理經(jīng)驗(yàn)或有處理經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)劑量水平檢測(cè)3-10個(gè)病人。最初的劑量經(jīng)非腸道如s.c.或i.m.給藥25mgBrEA或其他通式1化合物。該劑量一天一次給藥或一天兩次給藥1-12天，然后不給藥至少7天(如7-90天)。隨后一天一次按劑量給藥1-12天，然后不給藥至少7天(如7-90天)。受測(cè)的其它劑量水平為20mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg和300mg，每個(gè)劑量作為單一劑量一天一次給藥，或以細(xì)分劑量一天分兩次、三次或更多次給藥。使用與劑量增加實(shí)驗(yàn)相同的給藥方案進(jìn)行有效性劑量實(shí)驗(yàn)，或有效性劑量實(shí)驗(yàn)可以選擇隔日給藥一次或兩次3-17天，然后不給藥7-90天，然后重復(fù)隔日給藥一次或兩次3-17天。使用從劑量增加實(shí)驗(yàn)獲得的最佳劑量如約10-200mg/天通式1化合物，無限期重復(fù)該方案(如至少約3-18個(gè)月)。
實(shí)施例5.動(dòng)物藥理學(xué)研究使用BrEA的口服以及皮下制劑進(jìn)行非臨床研究。大鼠口服給藥溶于不同賦形劑中的14C BrEA以確定該藥物在血液和不同器官中的水平。這些初步的藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明通過口服給藥，BrEA的吸收率為約0.1-15％，經(jīng)糞便排泄至少約80％。
實(shí)施例1的非水溶液BrEA制劑以單一皮下劑量施用給大鼠。在給藥的24小時(shí)內(nèi)，超過90％的藥物離開注射位置，并且在給藥后8-12小時(shí)時(shí)，血漿中的濃度達(dá)到最大，約注射劑量的1.2％。該藥物在血漿中的循環(huán)半衰期為約12小時(shí)。該藥物在任何主要的器官內(nèi)都不會(huì)聚集到一顯著量，并且主要通過尿排泄。
使用實(shí)施例1的制劑將BrEA經(jīng)皮下施用給大鼠。在給藥的24小時(shí)內(nèi)，大約90％的藥物離開注射位置，并且在注射后1個(gè)小時(shí)時(shí)，血漿中濃度達(dá)到最大，約為注射劑量的0.2％。從血漿中排出是兩相的，其半衰期分別為約12和72小時(shí)。在任何主要器官內(nèi)，BrEA都不會(huì)積累到顯著量，并且主要通過糞便排泄。也在獼猴身上進(jìn)行實(shí)施例1制劑的研究以確定血漿藥物動(dòng)力學(xué)。
血漿中14C BrEA的藥物動(dòng)力學(xué)分析在兩只雌性獼猴身上進(jìn)行。使用劑量1mg/kg的示蹤化合物(16α-溴-3β-羥基-5α-[4-14C]-雄烷-17-酮[50mCi/mmole])在肩胛骨區(qū)域以體積1mL/kg皮下注射。BrEA在25％聚乙二醇300、12.5％無水乙醇、5％苯甲酸芐酯以及適量的丙二醇中制成制劑。每只動(dòng)物注射40μCi。在0、0.5、1、2、4、8和24小時(shí)時(shí)取血液樣品以測(cè)定14C的行為。在8小時(shí)內(nèi)血漿中的放射性上升至接近峰濃度并且直到24小時(shí)研究結(jié)束大約保持在相同的水平。
在新西蘭白兔身上進(jìn)行14C BrEA的藥物動(dòng)力學(xué)分析。20μCi14C標(biāo)記的16α-溴-3β-羥基-5α-[4-14C]-雄烷-17-酮[50mCi/mmole]加上1mg/kg未標(biāo)記的BrEA施用給三只新西蘭白兔的每一只，在肩胛骨區(qū)域皮下注射體積為1mL/kg。該藥物在25％聚乙二醇300、12.5％無水乙醇、5％苯甲酸芐酯和適量的丙二醇中制成制劑。在0.5、1、2、4、8、12、24小時(shí)時(shí)對(duì)所有三只動(dòng)物取血液樣品，并且在48小時(shí)時(shí)對(duì)兩只動(dòng)物取樣。給藥后24小時(shí)和48小時(shí)，分別殺死一只和兩只動(dòng)物，并且收集以下的器官/組織腦、心臟、腎、肝、肺、骨胳肌、脾以及注射部位的肌肉和皮膚。除了這些器官和組織外，尿和糞便以及籠子沖洗物也收集起來。在以上列舉的任何器官中，BrEA都沒有積累到顯著量。在所有器官中，觀察到肝臟中具有最大量的藥物，在24小時(shí)和48小時(shí)，分別含有大約注射劑量的0.8％和0.12％(平均0.13％)。
器官中的藥物濃度(兔)
通過用全血中的濃度乘以動(dòng)物的假定的血液體積200mL計(jì)算給藥劑量在全部血液中的平均濃度。大約在8小時(shí)，血液中藥物的量達(dá)到極值，并且在48小時(shí)仍然存在明顯的小量藥物。在全血中BrEA的量始終比血漿中低，表明藥物沒有被血紅細(xì)胞吸收到明顯量。
通過口服給藥不同制劑進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以測(cè)定BrEA的生物利用度。BrEA是(1)溶于大豆油、維生素E油、維生素E與Cremophore的混合物中或(2)BrEA微粉化并與或不與表面活性劑結(jié)合。這些制劑將在下文描述。這些制劑通過口服給藥給大鼠，并測(cè)定血液、肝、脾、腎和淋巴結(jié)中的BrEA的濃度。在使用微粉化BrEA進(jìn)行的研究中，估計(jì)大腦的藥物吸收情況。當(dāng)BrEA溶于維生素E和大豆油以及維生素E與Cremophore的混合物中時(shí)，收集24小時(shí)的尿和糞便。此項(xiàng)研究得到的數(shù)據(jù)表明BrEA進(jìn)入淋巴中，但從其它器官中迅速排出。給藥24小時(shí)后回收在糞便中的14C放射性的量為78-83％。以下對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)作簡(jiǎn)要說明，結(jié)果列于表6中。
添加有14C標(biāo)記的BrEA的BrEA(5mg在1.0mL大豆油或維生素E油中)經(jīng)胃內(nèi)給藥給大鼠。用50μL乙醇促進(jìn)BrEA在維生素E或大豆油中的溶解。給藥后在1.5、3、5.5和24小時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行化驗(yàn)(3個(gè)/時(shí)間點(diǎn))，并測(cè)定血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)以及24小時(shí)的糞便和尿中的14C的放射性。根據(jù)14C的放射性得到結(jié)果表明一些BrEA進(jìn)入了淋巴系統(tǒng)。在血液、肝和淋巴結(jié)中，溶于大豆油的吸收量比維生素E油大。
添加有14C標(biāo)記的BrEA的BrEA(5mg在1.0mL或維生素E與Cremophore混合物中)經(jīng)胃內(nèi)給藥給大鼠。添加60μL乙醇促進(jìn)BrEA在維生素E-Cremophore混合物中的溶解。給藥后在2、3、5.5和24小時(shí)時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行化驗(yàn)(4個(gè)/時(shí)間點(diǎn))，并測(cè)定血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)以及24小時(shí)的糞便和尿中的14C的放射性。結(jié)果表明小部分的藥物被淋巴系統(tǒng)吸收。從血漿、肝和淋巴結(jié)中的數(shù)值可以斷定，與大豆油或維生素E溶劑相比，該藥物的吸收更慢，且其在組織中的存在時(shí)間更長(zhǎng)。
三只雄大鼠一組，口服給藥含有10或32mg以表面活性劑Synperonic PE/F127(2.5重量％)微粉化的BrEA及的1.0mL 0.9％NaCl。給藥后在1.5、5和24小時(shí)檢測(cè)大鼠。分析血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)和腦中的14C放射性。與BrEA在維生素E油和大豆油中的實(shí)驗(yàn)相比，在血液中BrEA的濃度更高，1.5小時(shí)為0.3％，并且10和32mg劑量在5小時(shí)后分別增加到0.8％和0.9％。另外，在1.5小時(shí)測(cè)定的淋巴結(jié)中的數(shù)值類似，且對(duì)于10和32mg劑量來說，該濃度在5小時(shí)和24小時(shí)分別保持在5.3％和5.2％，3.7％和3.1％(請(qǐng)參見表6)。
在重復(fù)劑量實(shí)驗(yàn)中，大鼠胃內(nèi)每6-16小時(shí)給藥含有2mg以表面活性劑Synperonic PE/F127(2.5重量％)微粉化的BrEA的1.0mL0.9％NaCl。在第一次給藥后40、72、84、90和96小時(shí)殺死大鼠(每時(shí)間點(diǎn)3只)?；?yàn)血液、肝、脾、腎和淋巴結(jié)中14C的放射性。注意到在本次實(shí)驗(yàn)中，血液、肝、腎和淋巴結(jié)中的水平比前述的實(shí)驗(yàn)高。
三只雄大鼠一組，經(jīng)口服給藥含有2、4或10mg微粉化BrEA并不含表面活性劑的1.0mL 0.9％NaCl。給藥后1.5、5和24小時(shí)時(shí)殺死大鼠并分析血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)和腦中的14C的放射性。在所觀察的組織中，不含表面活性劑的微粉化BrEA的濃度比加有表面活性劑的BrEA低。
實(shí)施例6.在體外對(duì)寄生蟲的抑制對(duì)于體外抗瘧疾測(cè)試，使用微量滴定板。按照WHO標(biāo)準(zhǔn)方法(WHO，1990)制備藥物的濃度為pMol/孔。受測(cè)化合物在無菌的RPMI-1640中溶于15％DMSO。使用對(duì)氯喹敏感(如WS/97)和抗氯喹(如MN/97)的瘧原蟲分離物。
如下所述進(jìn)行裂殖體抑制分析。在微量滴定板上預(yù)先加入定量的各種濃度的受測(cè)化合物。50μL被寄生的RPMI-1640中的紅細(xì)胞懸浮液(0.2mL紅細(xì)胞+0.3mL 血清+4-5mLRPMI-1640)分配到含有各種濃度受測(cè)化合物的微量滴定孔中。對(duì)每個(gè)濃度讀數(shù)三次。
如下所述進(jìn)行結(jié)合3H-次黃嘌呤分析。該測(cè)試按照Desjardins等在1979年的程序進(jìn)行。在37℃下培養(yǎng)30小時(shí)后，將來自裂殖體抑制實(shí)驗(yàn)中的帶有另外三個(gè)孔的微量滴定板加入3H-次黃嘌呤過夜。在帶有微孔過濾裝置的微孔玻璃過濾器上將細(xì)胞懸浮液沖洗兩次。通過Beckman LS6000 β-閃爍計(jì)數(shù)器對(duì)該濾膜盤計(jì)數(shù)。通過繪制DPM相對(duì)藥物濃度的曲線測(cè)量藥物的活性。
抗氯喹敏感的T996/86惡性瘧原蟲化合物的體外活性
*--％抑制
16α-氯表雄(甾)酮和16α-溴脫氫表雄(甾)酮抗氯喹敏感的T996.86和抗氯喹的K1惡性瘧疾原蟲的體外活性如下所示。
T996.86KI16-α-氯表雄(甾)酮 IC50-9.25pg/mL ～9.25μg/mLDHEA-Br IC50-25.0pg/mL ～25.0μg/mL其它通式1化合物，例如第1組至第25-6組的任何化合物以同樣的方式使用以抑制瘧原蟲寄生蟲。
實(shí)施例7.抑制berghei瘧原蟲的4天體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方案。4天抑制測(cè)試已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，并且它可以在1周的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。該測(cè)試包括在實(shí)驗(yàn)(D0)的第1天對(duì)感染了寄生蟲的紅細(xì)胞進(jìn)行接種，然后注射受測(cè)化合物，化合物也可以在方案的第2、3和4天給藥。在第5天，取血涂片并且或者通過計(jì)算寄生蟲血癥或者通過計(jì)算預(yù)定標(biāo)度(即1-5)的寄生蟲數(shù)目評(píng)價(jià)抗瘧原蟲的活性。Peters(Ann.Trop.Med.Parasitol.6425-40，1970)描述了4天測(cè)試的基本程序。
該方案簡(jiǎn)要如下所述。每個(gè)受測(cè)組使用5只雌性TO小鼠。使用肝素化的注射器通過心臟穿刺術(shù)從具有30+％寄生蟲血癥的供體小鼠身上收集P.berghei HP15 ANKA寄生蟲。用稀釋劑(50％HIFCS+50％無菌PBS)將血液稀釋到最終濃度為1％寄生蟲血癥或每0.2mL感染懸浮液中1×107個(gè)受感染的紅細(xì)胞。每只小鼠通過靜脈內(nèi)接種，這種方式比通過腹膜內(nèi)給藥0.2mL感染懸浮液會(huì)產(chǎn)生更均勻的感染率。以劑量為100mg/kg在(16.7％DMSO+83.3％celacol)中制備受測(cè)化合物。接種寄生蟲2小時(shí)后，經(jīng)腹膜內(nèi)給予該甾化合物制劑從D0開始，每天一次給藥化合物，并持續(xù)連續(xù)的3天。在給藥化合物的最后一天從尾巴血液制備血涂片，并將血液與100％甲醇混合，并用10％吉姆薩染液染色。在0-5的標(biāo)度，評(píng)定寄生蟲血癥，其中5是對(duì)照樣的值。
將1％寄生蟲血癥1×107紅細(xì)胞/mL的接種體，以每只小鼠(雌性TO小鼠)0.2mL的量通過靜脈內(nèi)注射輸送。在第1天接種后2小時(shí)開始給藥，并持續(xù)3天。當(dāng)評(píng)價(jià)寄生蟲血癥時(shí)，在第5天取自所有20只小鼠的血涂片分析結(jié)果如下所示。
化合物 治療 寄生蟲血癥記數(shù)(0-5)BrEA 100mg/kg×4天i.p.*1雄烯甲酸 100mg/kg×4天i.p.*2DHEA 100mg/kg×4天i.p.*1氯喹 3mg/kg×4天i.p.*1對(duì)照 N/A 5i.p.*＝腹膜內(nèi)注射在一個(gè)類似的方案中，用含有1×107紅細(xì)胞/ml的溶液通過I.V.注射對(duì)小鼠進(jìn)行接種。兩小時(shí)后通過I.V.給藥。一天一次給藥BrEA或其它通式1化合物(0.2mL I.V.或S.C.)共4天。研究之后剪切尾部獲得血樣。感染有P.berghei的小鼠用于獲得受感染的細(xì)胞。在小鼠的心臟血液中獲得寄生蟲，每只未受感染的小鼠用帶有14％寄生蟲血癥的0.2mL血液經(jīng)I.V.進(jìn)行感染。兩小時(shí)后，將第一劑量的BrEA(100mg/kg I.V.或S.C.)輸送給受感染的動(dòng)物。BrEA制劑為45％羥丙基-β-環(huán)糊精和0.9％鹽水溶液中含有15mg/ml BrEA的的無菌溶液。動(dòng)物受感染后在第1、2、3和4天時(shí)，BrEA(100mg/kg I.V.或S.C.)輸送給受感染的動(dòng)物。經(jīng)I.V.給藥BrEA的組中第30天時(shí)沒有出現(xiàn)死亡，而所有的對(duì)照動(dòng)物到第10天時(shí)全部死亡。通過S.C.給藥BrEA的動(dòng)物到第11天全部死亡。
實(shí)施例8.大鼠體外和體內(nèi)研究在體外方案中，寄生蟲(惡性瘧原蟲、對(duì)氯喹敏感的株系WT和抗氯喹的株系Dd2)的水平調(diào)整為1％而使用介質(zhì)將血細(xì)胞比容(hermocrit)調(diào)整到7％。用一個(gè)96孔板，每個(gè)孔中加入50μL寄生蟲和100μL與介質(zhì)混合的藥物，將相同的程序進(jìn)行三次。將板置于一個(gè)含有生理氣體混合物的小室中，并在37℃培育。在24、48和72小時(shí)時(shí)改變介質(zhì)/藥物混合物。在第5天時(shí)對(duì)每個(gè)孔制作載玻片，用吉姆薩染液染色，每塊載玻片計(jì)數(shù)500個(gè)紅血細(xì)胞。將三份取平均，數(shù)據(jù)記錄為百分抑制率。
在體內(nèi)方案中，對(duì)體重80-85g的Lewis大鼠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的寄生蟲(berghei瘧原蟲)IP注射。2小時(shí)后，每只大鼠靜脈內(nèi)注射下表中所述的一種治療藥品，然后放回它們的住處，供給標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)食物并允許它們隨意進(jìn)食和水。再次稱重，然后在接種后的第5、11和28天時(shí)用26規(guī)格的針取血。測(cè)量血細(xì)胞比容(hermocrit)，然后制作每只大鼠的血涂片。然后用吉姆薩染液將血涂片染色并測(cè)定寄生蟲血癥(定義為帶有寄生蟲的紅細(xì)胞百分比)的水平。再次把動(dòng)物放回住處，并每天觀察兩次以取得進(jìn)行性疾病或相反的藥物反應(yīng)的證據(jù)，進(jìn)行性疾病定義為倦怠，相反的藥物反應(yīng)定義為在總共28天內(nèi)損失起始體重20％。如果注意到進(jìn)行性疾病或相反的藥物反應(yīng)，使該動(dòng)物無痛死亡。
BrEA制劑為在45％羥丙基-β-環(huán)糊精和0.9％鹽水中含有15mg/mlBrEA的無菌溶液。
在第0、1、2和3天時(shí)進(jìn)行靜脈內(nèi)注射，結(jié)果如下所示。結(jié)果表明用含有BrEA的制劑進(jìn)行的體內(nèi)治療將寄生蟲血癥減少到與氯喹(“Clq”)對(duì)照所觀察到的相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。結(jié)果簡(jiǎn)述如下。
第4天 ％RBC寄生蟲血癥鹽水對(duì)照 16％氯喹對(duì)照 10％低劑量BrEA 9％高劑量BrEA 7％第11天％RBC寄生蟲血癥鹽水對(duì)照 36％氯喹對(duì)照 16％低劑量BrEA 12％高劑量BrEA 11％實(shí)施例9.人類臨床研究-寄生蟲感染受感染病人出現(xiàn)的對(duì)藥物治療的反應(yīng)按照世界衛(wèi)生組織的標(biāo)準(zhǔn)(WHO，1973)分級(jí)。通過寄生蟲以及發(fā)熱消除時(shí)間來評(píng)價(jià)對(duì)藥物的反應(yīng)。寄生蟲消除以三個(gè)指標(biāo)表達(dá)(i)寄生蟲的數(shù)目減少治療前(基線)值的50％(PC50)的時(shí)間；(ii)寄生蟲數(shù)目減少基線值的90％(PC90)的時(shí)間；以及(iii)寄生蟲數(shù)目下降到顯微檢測(cè)水平以下的時(shí)間(寄生蟲消除時(shí)間PCT)(N.J.White和S.Krishna，Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.83767-777，1989；White等，J.Infect.Dis.165599-600，1992；White等，J.Infect.Dis.1661195-1196，1992)。發(fā)熱消除時(shí)間定義為從施用藥物開始到口腔或直腸的溫度下降至或低于37.2℃并保持至少48小時(shí)的時(shí)間。
在治療之前以及在治療后第4、6、8、12、18、20、24、30和36小時(shí)或治療后每隔4或6小時(shí)從病人身上獲得靜脈血液直到周圍寄生蟲血癥完全消失。無菌收集血液并輸送到含有2mL酸性檸檬酸葡萄糖酯(ACD)的10mL注射器中用于體外培養(yǎng)。在溫育以前，將血漿與紅血細(xì)胞分離并把紅血細(xì)胞洗滌兩次。通過改進(jìn)的標(biāo)準(zhǔn)體外培養(yǎng)技術(shù)(W.Trager和J.B.Jensen，科學(xué)[Science]193673-675，1976；A.M.Oduola等，J.Protozool.39605-608，1992)培養(yǎng)寄生蟲。在收集后10分鐘內(nèi)將樣品分散到無菌離心管中并旋轉(zhuǎn)。將上浮的血漿儲(chǔ)存起來，而用培養(yǎng)介質(zhì)(洗滌介質(zhì)，RPMI-1640介質(zhì)，含有25mM HEPES緩沖劑和25mmol/LNaOH)洗滌壓積的細(xì)胞兩次。通過真空抽吸技術(shù)將血沉棕黃層去掉。對(duì)每個(gè)血液樣品用完全洗滌介質(zhì)[CMP(補(bǔ)充了10％人血漿的洗滌介質(zhì))]進(jìn)行1∶10的稀釋。每個(gè)樣品取1mm轉(zhuǎn)移到24孔微培養(yǎng)板的2個(gè)孔中。在預(yù)混的含5％CO2、5％O2和90％N2氣體氛圍和37℃下培育培養(yǎng)物。培養(yǎng)介質(zhì)每天改變一次，在開始培養(yǎng)后第24和48小時(shí)時(shí)準(zhǔn)備薄的血涂片用于顯微鏡檢查。如果受寄生蟲感染的紅血細(xì)胞的比例超過2％，則用未受寄生蟲感染的洗過的A型Rh陽性紅血細(xì)胞稀釋培養(yǎng)物樣品。
顯微檢查在體內(nèi)研究過程中，分別用無水甲醇(100％)和加熱來固定薄的和厚的血涂片，并用10％Giemsa染色20min。通過在清晰的接合區(qū)數(shù)2000個(gè)紅血細(xì)胞并確定被寄生蟲感染的比例對(duì)薄的血涂片中的寄生蟲血癥進(jìn)行定量。在厚血涂片中，通過計(jì)數(shù)對(duì)抗白細(xì)胞的寄生蟲對(duì)寄生蟲血癥進(jìn)行定量。如果在檢查了厚血涂片上200個(gè)顯微區(qū)域后沒有發(fā)現(xiàn)寄生蟲，則該涂片為陰性。在體外研究過程中，通過Li等人對(duì)Jiang方法的改進(jìn)方法(J.B.Jiang等，柳葉刀(Lancet)2(8293)285-288，1982；K.Silamut和N.J.White，Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.87436-443，1993；X.L.Li等，Chi.J.Parasitol.Dis.12296，1994)，將預(yù)處理的薄的和厚的血涂片按環(huán)形期分級(jí)。在對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲得的血液進(jìn)行培育后的24和48小時(shí)，在清晰的接合區(qū)域內(nèi)大約計(jì)數(shù)5000個(gè)紅細(xì)胞，并按成熟程度分級(jí)為微環(huán)、小環(huán)、大環(huán)、著色的營(yíng)養(yǎng)體和裂殖體。功能性存活能力按在體外培養(yǎng)24-48小時(shí)后能夠成熟為著色的營(yíng)養(yǎng)體或裂殖體的無性環(huán)的形式的比例進(jìn)行估計(jì)(W.M.Watkins等，Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.8775-78，1993)。
計(jì)算參數(shù) 病人表現(xiàn)出急性的、有癥狀的、嚴(yán)重的、非大腦純粹惡性瘧原蟲瘧疾。他們不耐口部液體、體溫高于39℃、每微升血液中含有超過5000個(gè)寄生蟲、具有無性繁殖的寄生蟲血癥并在抗瘧疾藥物的尿檢中呈現(xiàn)陰性。每4小時(shí)對(duì)病人經(jīng)靜脈內(nèi)施用懸浮于無菌的45％β-環(huán)糊精的鹽水中、濃度為25mg/mL的BrEA。該方案連續(xù)進(jìn)行4天。在前72小時(shí)內(nèi)每6小時(shí)對(duì)寄生蟲血癥進(jìn)行定量和臨床檢測(cè)，然后每天對(duì)參數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)直到第7天(168小時(shí))以及其后第14天。
血涂片用吉姆薩染液染色，并在厚涂片中通過計(jì)數(shù)2000個(gè)對(duì)抗白細(xì)胞的寄生蟲對(duì)厚涂片的寄生蟲血癥進(jìn)行定量，在薄的血涂片中通過獲得受感染的紅細(xì)胞的比例對(duì)寄生蟲血癥進(jìn)行定量。按照WHO標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥物治療的反應(yīng)分級(jí)。使用寄生蟲和發(fā)熱消除時(shí)間對(duì)藥物反應(yīng)進(jìn)行評(píng)估。寄生蟲消除以三個(gè)指標(biāo)表達(dá)寄生蟲數(shù)目減少到治療前值(基線值)50％的時(shí)間(PC50，原文誤為60)；減少到基線值90％的時(shí)間(PC90)；減少至低于顯微檢測(cè)水平(寄生蟲消除時(shí)間)的PCT。
發(fā)熱消除時(shí)間定義為從施用藥物開始到口腔或直腸的溫度下降至低于37.2℃并保持至少48小時(shí)的時(shí)間。在第14天時(shí)寄生蟲消除速率為100％。因此臨床反應(yīng)包括兩個(gè)病人表現(xiàn)出的對(duì)寄生蟲血癥的影響，以及一種或多種感染癥狀的改善。
瘧疾病人靜脈內(nèi)給藥BrEA試驗(yàn)病人A病人B發(fā)熱消除時(shí)間 12小時(shí) 18小時(shí)寄生蟲消除時(shí)間50％消除的時(shí)間 18小時(shí) 24小時(shí)90％消除的時(shí)間 24小時(shí) 48小時(shí)100％消除的時(shí)間 48小時(shí) 64小時(shí)實(shí)施例10.體外細(xì)胞研究使用完整細(xì)胞，檢測(cè)了在正常人RBC內(nèi)BrEA對(duì)戊糖-磷酸酯支路(PPS)的作用。由于葡萄糖-6-磷酸酯脫氫酶(“G6PD”)是PPS的限制酶，因此人們認(rèn)為在完整細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)PPS通量比在細(xì)胞溶解產(chǎn)物中檢測(cè)G6PD活性更能反映G6PD的活性。通常在細(xì)胞溶解產(chǎn)物中檢測(cè)到的G6PD的活性比在完整的、靜止的、未受刺激的RBC中的PPS通量大約高1100倍(細(xì)胞溶解產(chǎn)物中的G6PD活性165；PPS通量0.142微摩爾/小時(shí)/mLRBC)。在完整細(xì)胞內(nèi)的PPS通量和G6PD活性取決于許多因素(NADPH、NAD和ATP濃度，以及細(xì)胞內(nèi)的pH值)，如果檢測(cè)在細(xì)胞溶解產(chǎn)物內(nèi)進(jìn)行則這些因素保持恒定，而在完整細(xì)胞內(nèi)則可以變化。細(xì)胞中G6PD的活性水平顯著高于正常的基本要求，并且對(duì)總G6PD活性的抑制可能對(duì)細(xì)胞內(nèi)的PPS通量沒有或只有很小的后果。例如，具有地中海G6PD突變體的RBC相對(duì)于正常個(gè)體約有1-3％的殘留活性，對(duì)基本PPS通量沒有損害，但當(dāng)通過PPS的通量受到亞甲基藍(lán)添加劑的刺激時(shí)，顯示對(duì)通量有損害。使用各種量的BrEA進(jìn)行了一系列的實(shí)驗(yàn)，并在未受刺激的基本RBC和受亞甲基藍(lán)(MB)刺激的RBC中檢測(cè)PPS通量。
下述的數(shù)據(jù)顯示了在未受刺激的和受MB刺激的正常RBC中的PPS通量(微摩爾/小時(shí)/ml RBC)。不同濃度的BrEA(最終為0.3、3.5和7微摩爾)補(bǔ)充到懸浮于RPMI的洗過的RBC懸浮液中，在10％血細(xì)胞比容時(shí)pH為7.4，因此無需另外的培育和另外的洗滌就可以立即檢測(cè)出PPS通量。在BrEA濃度為7μM時(shí)觀察到對(duì)受MB刺激的PPS通量的微量抑制。
PPS通量對(duì)照樣，未受刺激的RBC 230DMSO對(duì)照樣，未受刺激的RBC 270DMSO對(duì)照樣，受MB刺激的RBC 50900.3μM BrEA，未受刺激 2500.3μM BrEA，MB刺激 50003.5μM BrEA，未受刺激 2703.5μM BrEA，MB刺激 49507μM BrEA，未受刺激 2957μM BrEA，MB刺激 4660下述數(shù)據(jù)顯示了三次實(shí)驗(yàn)的平均值，其中在正常的RBC內(nèi)檢測(cè)基本的、未受刺激的和受MB刺激的PPS通量(微摩爾/小時(shí)/ml RBC)。在這些實(shí)驗(yàn)中，不同濃度的BrEA(最終為～0.8、8和80微摩爾)補(bǔ)充到懸浮于RPMI的洗過的RBC懸浮液中，在10％血細(xì)胞比容(hermocrit)時(shí)pH為7.4。在37℃培育90分鐘后，檢測(cè)含BrEA和不含有BrEA的PPS通量。結(jié)果顯示了MB刺激的PPS通量的劑量依賴性抑制作用。在8微摩爾時(shí)的抑制為10％(p＝0.006相對(duì)于對(duì)照+DMSO)，在80微摩爾時(shí)的抑制為25％(p＝0.002相對(duì)于對(duì)照+DMSO)。
PPS通量對(duì)照樣，未受刺激的RBC430對(duì)照樣，受MB刺激的RBC5410DMSO對(duì)照樣，未受刺激的RBC480DMSO對(duì)照樣，受MB刺激的RBC48900.8μM BrEA，未受刺激4100.8μM BrEA，MB刺激 49308μM BrEA，未受刺激 4508μM BrEA，MB刺激443080μM BrEA，未受刺激 45080μM BrEA，MB刺激 3660
實(shí)施例11.抑制寄生蟲生長(zhǎng)以下顯示了Epi(16α-溴-表雄(甾)酮)對(duì)寄生蟲(惡性瘧原蟲)生長(zhǎng)的影響。EPI在濃度為1μM時(shí)具有活性。
治療后寄生蟲血癥時(shí)間為0 24小時(shí)48小時(shí) 72小時(shí)對(duì)照樣+DMSO 5％5.40％3.10％ 5.20％Epi 1μM 5％5.70％5.50％ 1.60％Epi 10μM 5％5.60％0.90％ 0Epi 100μM5％0 0 0Epi 500μM5％0 0 0對(duì)照樣+DMSO 2％8.80％11％8％Epi 50nM 2％9.90％9.20％ 8.30％Epi 1μM 2％5.80％6.10％ 2.10％Epi 2.5μM2％7.30％5.80％ 3.20％Epi 5μM 2％5.40％6％ 1.80％Epi 10μM 2％4.20％3％ 0Epi 50μM 2％0 0 0通過標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定寄生蟲血癥(顯微檢查至少500個(gè)細(xì)胞，用Diff-QuickTM(Baxter)染色)。在標(biāo)準(zhǔn)條件下在RPMI-1640中培育寄生蟲，RPMI-1640中補(bǔ)充Hepes/葡萄糖(10mM)，谷氨酸鹽(0.3g/l)和10％人血漿。血細(xì)胞比容為1％。
實(shí)施例12.對(duì)噬菌作用的刺激 使用人類粘著單核細(xì)胞測(cè)定BrEA影響受瘧原蟲感染的RBC的噬菌作用的能力。寄生蟲血癥水平約為8-10％，按如下所述從血液的血沉棕黃層中獲得人單核細(xì)胞。從新鮮收集的不含血小板的血沉棕黃層獲得周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞，血沉棕黃層得自兩種性別的健康成年人供體血液樣品。用微溫的補(bǔ)充有10mM葡萄糖的PBS(PBS-G)將分離出的細(xì)胞洗滌一次，并再次將細(xì)胞以5×106細(xì)胞/mL的濃度懸浮在補(bǔ)充有23mM NaHCO3和25mM Hepes，pH7.4(RMBH)的冰冷的RPMI-1640中。以4∶1的比例把DynabeadsM450總B和總T(Dynal)在4℃下20分鐘加入到細(xì)胞中。按制造商所指定的方法去除B型淋巴細(xì)胞和T型淋巴細(xì)胞。剩余的單核細(xì)胞在RMBH洗滌2次，并再次以1×106濃度懸浮在AIMV細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中(Gibro)。收集單核細(xì)胞層，在37℃下用PBS-G洗滌，并再次以1×106細(xì)胞/mL的濃度懸浮在AIMV細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中。通過CD14表達(dá)進(jìn)行估算純化的細(xì)胞中單核細(xì)胞的比例超過90％。
受調(diào)理的寄生蟲化的RBC(PE)的噬菌作用按下述進(jìn)行測(cè)定。通過與10PE/單核細(xì)胞混合引發(fā)新鮮血清調(diào)理的PE的噬菌作用。將懸浮液進(jìn)行簡(jiǎn)單的離心(室溫下150×g 5秒)以改善PE與單核細(xì)胞的接觸。為避免在離心后以及在整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期內(nèi)單核細(xì)胞的附著，細(xì)胞保持以5×106細(xì)胞/mL的濃度懸浮在AIMV介質(zhì)中，該介質(zhì)在37℃下置于加濕的培育箱(95％空氣，5％CO2)中的直徑為6cm的聚四氟乙烯底盤(Heraeus)中。通過顯微檢查術(shù)進(jìn)行估算至少有90％的單核細(xì)胞吞噬PE。對(duì)照細(xì)胞保持在相同的條件下但沒有噬菌作用。通過前述的生物體發(fā)光方法(E.Schwarzer等，Br.J.Haematol.1994 88740-745)對(duì)噬菌作用進(jìn)行定量估算。
如下所述進(jìn)行紅細(xì)胞處理和寄生蟲培養(yǎng)。從新鮮血液(Rh+)中分離紅細(xì)胞(RBC)。洗滌過的RBC用裂殖體/營(yíng)養(yǎng)體階段的寄生蟲(Palo Alto染色，不含支原體)進(jìn)行感染。用珀可(Percoll)-甘露醇方法分離階段特異性的寄生蟲。簡(jiǎn)單來講，在Percoll-甘露醇梯度(寄生蟲血癥＞95％SPE)上分離的正常的裂殖體階段寄生蟲化的RBC(SPE)與懸浮于生長(zhǎng)介質(zhì)(含有25mmol/L Hepes，20mmol/L葡萄糖，2mmol/L谷氨酰胺，24mmol/L NaHCO3，32mg/L慶大霉素和10％AB或A型人類血清，pH7.30的RPMI-1640介質(zhì))中的RBC混合以在選定的血細(xì)胞比容值開始同步培養(yǎng)。將接種體寄生蟲血癥調(diào)整至正常SPE的20％以分離環(huán)形寄生蟲化的RBC(RPE)，調(diào)整至正常SPE的5％以分離營(yíng)養(yǎng)體階段寄生蟲化的RBC(TPE)。接種后14-18小時(shí)，寄生蟲處于第一周期的環(huán)形期；在34-33小時(shí)，寄生蟲為第一周期的營(yíng)養(yǎng)體階段；接種后40-44小時(shí)寄生蟲處于第一周期的裂殖體階段。RPE、TPE和SPE在珀可(Percoll)-甘露醇梯度上分離。寄生蟲血癥通常為8-10％的RPE以及＞95％的TPE。非寄生蟲化和寄生蟲化的RBC用電子計(jì)數(shù)。為估算總寄生蟲血癥以及對(duì)RPE、TPE和SPE的相對(duì)貢獻(xiàn)，在指定時(shí)間下由培養(yǎng)物制備載玻片，用Diff-QuickTM寄生蟲染色劑染色，并在顯微下檢測(cè)大約400-1000個(gè)細(xì)胞。
使用各種濃度的通式1化合物如BrEA檢測(cè)其對(duì)寄生蟲化的RBC的影響，如0.5μM、1μM、10μM、25μM和50μM。營(yíng)養(yǎng)體寄生蟲化的RBC、裂殖體寄生蟲化的RBC或環(huán)形期寄生蟲化的RBC按所述方法進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例13.人瘧疾的臨床試驗(yàn) 建立包括15-20個(gè)病人的臨床試驗(yàn)方案。對(duì)于第I階段、I/II階段或第II階段試驗(yàn)，病人輕度感染有一種或多種寄生蟲，并且他們出現(xiàn)輕度癥狀(低于RBC寄生蟲血癥的約8-10％)。治療以前，病人任選被HIV、HCV、TB以及隱孢子蟲感染。對(duì)于一種或多種共感染的病人給予標(biāo)準(zhǔn)共感染治療。病人在醫(yī)院里治療一周。二個(gè)或多個(gè)劑量組如25、50或100mg/天非腸道給藥BrEA，如通過肌肉、皮下或靜脈內(nèi)注射，時(shí)間為病人接受給藥的當(dāng)周的3、4或5天。給藥連續(xù)進(jìn)行或以間歇式程序進(jìn)行，如在隔日分2、3或4次給予一個(gè)劑量的藥。
含有BrEA的制劑如本文所述，如實(shí)施例1所述的制劑或含有100mg/mL BrEA、～30體積％PEG300、30體積％的丙二醇、30體積％的苯甲酸芐酯以及2體積％芐醇的制劑。在第5-7天，如果觀察到寄生蟲血癥的減少低于50％，則給予病人標(biāo)準(zhǔn)瘧疾治療(甲氟喹)。在治療周內(nèi)以及治療之后的1、2、3或更多周內(nèi)，定期采集血樣以估算寄生蟲血癥、藥代動(dòng)力學(xué)、血漿細(xì)胞因子(如IL-2、IL-4、IL-10、IGF1、γIFN、GM-CSF)和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子(如IL-2、IL-4、IL-10、IGF1、γIFN、GM-CSF)。在起始給藥后約2-12周后，使用與起始劑量方案相同或類似的方案，選擇性再次對(duì)病人進(jìn)行治療。
對(duì)感染有簡(jiǎn)單的瘧疾的半免疫病人進(jìn)行示例性的肌肉給藥BrEA的開放式標(biāo)記研究。該制劑包含100mg/mL BrEA、～30體積％PEG300、30體積％的丙二醇、30體積％的苯甲酸芐酯以及2體積％芐醇。在該研究的前7天病人呆在醫(yī)院里作為住院病人。在連續(xù)5天內(nèi)病人每天接受肌肉給藥50mg或100mg BrEA。在前7天直到研究的第14天，每天的評(píng)估可以包括寄生蟲血癥評(píng)估(每天兩次)、化學(xué)、血液學(xué)和藥物水平(藥物動(dòng)力學(xué)評(píng)估)。如果在研究7天后，寄生蟲血癥從檢測(cè)值下降，并且病人在臨床上是穩(wěn)定的，隨后可以作為住院病人每天跟蹤病人的寄生蟲血癥(每天兩次)直到再過7天。如果在研究過程的任何時(shí)間，病人出現(xiàn)臨床上不穩(wěn)定，則不再繼續(xù)研究而對(duì)其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)瘧疾治療。由于BrEA抑制葡萄糖-6-磷酸酯脫氫酶，所以不應(yīng)對(duì)缺乏該酶的病人進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其它可能排除病人參加實(shí)驗(yàn)的考慮包括診斷有以下任何病癥的病人嚴(yán)重貧血(血細(xì)胞比容＜21％或血色素＜7g/dL)；有腎臟或肝臟衰竭史和/或?qū)嶒?yàn)證實(shí)的呼吸困難，證據(jù)是呼吸困難或呼吸速率≥30次/分鐘；血壓過低(收縮壓＜90mmHg)；心動(dòng)過速(心率＞130下/分鐘)懷孕或哺乳期婦女；明顯的活性伴同疾病(需要特殊治療的急性藥物診斷)；周圍血涂片的寄生蟲血癥＞10％的病人。
可以從每個(gè)病人身上采集血樣用于將來的臨床評(píng)價(jià)如確定活化標(biāo)示物或免疫學(xué)分析(如對(duì)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外白介素IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12、γIFN和TNFα的分析)。
實(shí)施例14.脂質(zhì)體制劑按如下所述制備適用于非腸道給藥的脂質(zhì)體。400mg磷酯酰膽堿與80mgBrEA溶解于氯仿和甲醇(體積比2∶1)中，通過減壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將溶液干燥。通過加入8.0mL 0.9％重量體積比的NaCl溶液并攪拌溶液將所得的膜再水化。脂質(zhì)體的尺寸用選擇性方式測(cè)量，如通過光子相關(guān)光譜(Malvern Zetasizer 3000或同等物)。例如通過超聲波降解法將平均尺寸減少至400nm以下，或使用合適的過濾器進(jìn)行過濾使脂質(zhì)體的尺寸理想化。用類似的程序制備含有濃度為15-100mg/mL通式1化合物脂質(zhì)體制劑。制劑用于將該化合物口服或非腸道給藥(I.M.、S.C.，I.V.)。
實(shí)施例15.環(huán)糊精制劑 按如下所述制備含有BrEA的環(huán)糊精制劑。45g羥丙基-β-環(huán)糊精加入1L無菌生理鹽水中，將混合物攪拌約4-24小時(shí)直到得到清澈的溶液。加入非微粉化的BrEA至濃度為20mg/mL，并將混合物攪拌直到得到清澈的溶液。使用0.2μm孔尺寸的過濾器通過過濾對(duì)溶液進(jìn)行除菌，并將溶液分配至無菌容器中。用類似的程序制備含有約15-100mg/mL通式1化合物的環(huán)糊精制劑。該制劑用于經(jīng)口服、非腸道(I.M.、S.C.，I.V.)或口腔內(nèi)或舌下途徑給藥該化合物。
實(shí)施例16.栓劑制劑 按如下所述制備含有通式1化合物如BrEA的栓劑制劑。計(jì)量足量的非微粉化的BrEA以獲得所需要數(shù)目的單元，每個(gè)單元含有500mg BrEA。BrEA與一種栓劑基料如從食用植物油中獲得的游離脂肪酸混合，以提供所需要的特性，如游離脂肪酸含量約0.1重量％、皂化值約242、碘值約3、水含量約0.1重量％，以及封閉毛細(xì)管熔點(diǎn)約35℃。
實(shí)施例17.人類HCV的臨床試驗(yàn)對(duì)一個(gè)感染有HIV和HCV的女性病人連續(xù)3天I.V.給藥BrEA，使用的制劑是在45％(重量/體積)的羥丙基-β-環(huán)糊精的鹽水中含有20mg/mL BrEA。在3天治療期內(nèi)，每4小時(shí)將4mL制劑(80mg BrEA)施用給病人。在按劑量給藥之前，病人的HCV水平經(jīng)PCR測(cè)量為6.5Log10，在按劑量給藥的第一天HCV水平為6.2Log10，給藥的第三天HCV水平為5.5Log10，施用完最后的劑量三天后HCV水平為4.9Log10。經(jīng)PCR測(cè)量HIV RNA水平為5.2Log10(給藥前)，5.8Log10(第一天)，5.9Log10(第三天)和5.4Log10(第六天)。NK細(xì)胞計(jì)數(shù)(細(xì)胞/mm3)在給藥前、第0天和第3天分別為28、41和38。
實(shí)施例18.制劑含有100mg/mLBrEA、～30體積％PEG300、30體積％的丙二醇、30體積％的苯甲酸芐酯以及2體積％芐醇的制劑是通過下述方法制備的將BrEA懸浮在聚乙二醇300中，并按順序加入丙二醇和苯甲酸芐酯以形成溶液，額外加入丙二醇將終溶液稀釋到所需要的體積。具體程序如下。
將計(jì)量的聚乙二醇300加入到混合用容器中。然后一邊攪拌，一邊加入計(jì)量的BrEA到容器中，至少混合5分鐘以形成均勻的乳狀液，將丙二醇加入容器中并至少混合5分鐘以形成均一的懸浮液。將計(jì)量的苯甲酸芐酯加入容器，并混合大約5分鐘以形成半透明的懸浮液。然后再加入丙二醇以獲得所需要的最終制劑，并混合大約5分鐘。將該藥物溶液輸送到體積分配裝置中，每個(gè)小瓶分裝1.2mL。在氮?dú)鈮毫ο?，將溶液通過兩個(gè)0.2μm聚四氟乙烯無菌過濾器過濾至2cc琥珀色玻璃小瓶中。小瓶蓋上涂有聚四氟乙烯的丁基橡膠塞并卷邊密封。
實(shí)施例19.機(jī)會(huì)性感染的臨床方案一個(gè)將100mg BrEA經(jīng)肌肉施用給感染HIV并存在機(jī)會(huì)性感染(OIs)危險(xiǎn)的晚期病人進(jìn)行雙盲法、隨機(jī)性的、安慰劑控制的研究。血清反應(yīng)呈陽性、CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)≤100細(xì)胞/mm3、HIV RNA濃度為1×106拷貝/mL、Kamofsky數(shù)目至少為60的HIV-1病人被確認(rèn)為該方案的潛在參與者。在監(jiān)測(cè)評(píng)估前，所有臨床方案的病人都必須理解并簽訂書面通知的同意表格。
使用實(shí)施例16制劑中的BrEA。連續(xù)3-5天施用藥物或賦形藥物，然后觀察約35-90天，例如觀察37天。一個(gè)示例性的治療方案包括治療5天，然后觀察37天，該過程在超過42周內(nèi)總計(jì)重復(fù)7次。監(jiān)控OIs的發(fā)生率以及OIs消退或受到控制的時(shí)間，并與安慰劑控制組進(jìn)行比較。可以在完成用于后續(xù)治療的研究后，在2或3個(gè)月內(nèi)每月對(duì)病人進(jìn)行監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)到OIs的發(fā)生或與AIDS有關(guān)的疾病，如肺結(jié)核(TB)、念珠菌病、肺囊蟲病(PCP)、腹泄、或卡波濟(jì)氏肉瘤可以被視為方案的終點(diǎn)。如果一個(gè)病人被診斷出一種或多種該方案指定的機(jī)會(huì)性感染，就開始對(duì)OI進(jìn)行方案治療，如Fluconazole用于念珠菌病或用于PCP、三甲氧芐二氨嘧啶和磺胺甲基異噁唑或氨苯砜。使用其它通式1化合物進(jìn)行類似的方案。
實(shí)施例20.人類HIV臨床方案 感染有HIV的病人使用制劑經(jīng)i.m.給藥25-200mgBrEA，該制劑含有100mg/mL BrEA、～30體積％PEG300、30體積％的丙二醇、30體積％的苯甲酸芐酯以及2體積％芐醇。病人每天給藥一次連續(xù)5天，然后在約28天或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行無BrEA的治療。然后對(duì)病人進(jìn)行連續(xù)5天給藥BrEA的一個(gè)或多個(gè)療程，然后至少約28天不給藥。最多進(jìn)行5輪5天治療，然后28天不給藥的方案。然后對(duì)從病人獲得的血液或血漿樣品使用流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)法以及其它已知的分析方法進(jìn)行免疫反應(yīng)分析。在從每個(gè)病人獲得樣品的24小時(shí)內(nèi)分析免疫細(xì)胞子集或其它測(cè)量的標(biāo)示物。本質(zhì)上按照標(biāo)準(zhǔn)方法使用可買到的試劑制備并使用加標(biāo)記的抗體，如與熒光染料(FITC、藻紅蛋白、別藻藍(lán)蛋白或PerCP)結(jié)合的抗CD抗原抗體，例如請(qǐng)參見PharMingen，1998研究產(chǎn)品目錄，第732-774頁的技術(shù)方案，第182-295頁的人類細(xì)胞表面分子以及在第2-173頁的小鼠、大鼠和倉鼠的細(xì)胞表面分子和第344-489頁的細(xì)胞因子和化學(xué)因子試劑。
該臨床方案為使用3個(gè)BrEA劑量水平經(jīng)肌肉施用給感染有HIV的病人的I/II階段、開放式標(biāo)記、隨機(jī)化的研究，病人缺少治療歷史。分為三個(gè)治療組，每組包含2個(gè)部分(部分A和B)。病人在整個(gè)研究的A和B部分接受相同劑量的BrEA。如果病人出現(xiàn)抗病毒反應(yīng)(HIVRNA滴定度至少在監(jiān)測(cè)值和基線值的平均值以下0.5log)或得益(任何在低于平均監(jiān)測(cè)值和基線值的HIV RNA滴定度的減少)于在研究的A和B部分所接受的治療，病人可以按照開始治療時(shí)所接受的劑量繼續(xù)接受5天的使用實(shí)施例2的BrEA制劑進(jìn)行的治療。該治療療程可以重復(fù)最多達(dá)6次。
在整個(gè)研究過程中監(jiān)測(cè)所有病人的HIV RNA(Chiron QuantiplexTM支鏈DNA分析)水平、T細(xì)胞子集[CD4/CD8]、前病毒的HIVDNA(PBMC)、白介素[IL-2、4、6、8、10和12](血清)、γIFN(血清)、類胰島素生長(zhǎng)因子[IGF-1](血清)和腫瘤壞死因子[TNF](血清)?？梢栽诓∪藰悠返淖蛹羞M(jìn)行PBMC定量共培養(yǎng)(細(xì)胞)。也可以對(duì)另外的激活標(biāo)示物進(jìn)行分析。設(shè)計(jì)化學(xué)分析、血液學(xué)操作盤和尿分析。另外，共感染有乙型肝炎和/或丙型肝炎、瘧疾或肺結(jié)核的病人可以定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)其病毒滴定度或微生物培養(yǎng)物。在部分A第一次給藥和部分B最后一次給藥后，從病人的子集中采集系列血樣和尿樣以確定藥物動(dòng)力學(xué)。
治療可以包括不止一次肌肉注射。肌肉注射可以在不同的部位進(jìn)行(即左或右上臂或大腿或臀部)，并且可以單一給藥100mg或分二次或多次每次小于100mg(如50mg)給藥200mg BrEA。
該研究分兩個(gè)部分，第1和第2部分。每個(gè)部分均包括兩個(gè)部分，部分A和部分B。參加此項(xiàng)研究的前12個(gè)病人分配到第1部分所述的計(jì)劃。其余的24名病人分配到該研究的第2部分。每部分的計(jì)劃如下所述。
部分A包括單一肌肉注射BrEA制劑。病人按受注射的日期為研究的第1天。從第1天開始，采集參加藥物動(dòng)力學(xué)小組的病人的系列血樣和尿樣。該研究的部分B在研究的第8天(第1部分)或研究的第15天(第2部分)開始。
第1部分的部分B包括以與研究的A部分相同的劑量連續(xù)5天每天肌肉注射實(shí)施例1的制劑。病人按受第一次給藥的時(shí)間大約為研究的第8-12天。5天的治療療程過后，進(jìn)行大約28天的觀察期(或從第一次給藥時(shí)的第8天大約經(jīng)32天至第40天第二治療療程開始)。在觀察期期間，要求病人每周返回診所進(jìn)行各項(xiàng)測(cè)試。大約從研究的第12-17天開始，采集參加藥物動(dòng)力學(xué)小組的病人的系列血樣和尿樣。
第2部分的B部分包含以與研究的A部分相同的劑量連續(xù)5天每天肌肉注射實(shí)施例2的制劑。病人按受第一次給藥的時(shí)間大約為研究的第15天。5天的治療療程過后，進(jìn)行大約45天的觀察期(或從第一次給藥時(shí)的第15天開始大約經(jīng)49天至第64天第二治療療程開始)。在觀察期期間，要求病人每周返回診所進(jìn)行各項(xiàng)測(cè)試。大約從研究的第19天開始，采集參加藥物動(dòng)力學(xué)小組的病人的系列血樣和尿樣。
按如下所述進(jìn)行隨機(jī)化劑量增加研究。當(dāng)每組12個(gè)病人中的4位完成了5天的部分B的每日給藥并且沒有出現(xiàn)嚴(yán)重的與藥物相關(guān)的不利現(xiàn)象時(shí)，經(jīng)主辦人和研究者協(xié)商后他們就參與下一個(gè)更高劑量水平的研究。
前4個(gè)參與的病人分配到50mg劑量組。如果沒有出現(xiàn)嚴(yán)重的與藥物有關(guān)的不利現(xiàn)象，后8個(gè)患者將以1∶1的比例隨機(jī)接受或者50mg或100mg劑量水平。如果接受100mg病人沒有出現(xiàn)嚴(yán)重的與藥物有關(guān)的不利現(xiàn)象，然后下面24個(gè)病人將以1∶2∶3的方式隨機(jī)接受50、100、或200mg的劑量水平。
如果一個(gè)劑量組12個(gè)病人中的4位出現(xiàn)嚴(yán)重的與藥物有關(guān)的不利現(xiàn)象(III或IV級(jí))，則另加兩個(gè)病人接受同樣的劑量水平。另外，對(duì)于參與下一個(gè)劑量水平組的病人，如果已經(jīng)報(bào)名，則暫時(shí)停止實(shí)驗(yàn)，直至安全性得到評(píng)估。如果另外兩個(gè)病人中的1人也出現(xiàn)嚴(yán)重的與藥物有關(guān)的不利現(xiàn)象，該劑量水平的給藥將會(huì)中止。一經(jīng)主辦人與研究者協(xié)商，將會(huì)有另外的病人參與在劑量限制組與下一個(gè)低劑量組之間的劑量水平實(shí)驗(yàn)，以確定最大可耐藥劑量(MTD)。額外的病人參與一個(gè)特殊劑量水平會(huì)通過修正方案確定。
結(jié)果表明單一劑量50mg或100mg給藥BrEA會(huì)增加激活的CD8+和CD4+細(xì)胞(如CD8+、CD69+、CD25-細(xì)胞)的數(shù)量，這些細(xì)胞是在病人的血液中循環(huán)的。此外，在循環(huán)中的樹突前體細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞以及調(diào)節(jié)ADCC(被CD8+、CD16-免疫細(xì)胞子集調(diào)節(jié)的依賴抗體的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性)功能的細(xì)胞數(shù)量也增加了。通常在連續(xù)5天給藥時(shí)觀察到進(jìn)一步的增加。
某些結(jié)果簡(jiǎn)述如下。療程1、2和3是指每天注射BrEA(每次注射50mg或100mgBrEA)的連續(xù)5天治療方案。在如下的圖表中，HE2000是指含有100mg/mL BrEA、～30體積％PEG300、30體積％丙二醇、30體積％苯甲酸芐酯以及2體積％芐醇的制劑。下述的數(shù)據(jù)為在基線(開始給藥的那一天)以及病人按受至少一次給藥BrEA后各個(gè)時(shí)間從病人的血樣中獲得。結(jié)果顯示免疫細(xì)胞群以及與Th1免疫反應(yīng)有關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)分布顯著增加。這些方案的病人開始時(shí)CD4的數(shù)量至少為200細(xì)胞/mm3，HIV RNA血漿負(fù)載量為5,000-1×106RNA拷貝/mL。給藥一個(gè)療程的BrEA(連續(xù)5天，i.m.注射)后，所有的病人都表現(xiàn)出免疫細(xì)胞水平的增加，這些免疫細(xì)胞包括激活的CD8 T細(xì)胞(如CD8+、CD69+、CD25+)、LAK細(xì)胞(如CD8+、CD16+、CD38+)、NK細(xì)胞(如CD8-、CD16+)、ADCC細(xì)胞(如CD8-、CD16+)以及樹突細(xì)胞(Lin-、HLA-DR+、CD11c+或Lin-、HLA-DR+、CD123+)。平均CD4 IL-10產(chǎn)量從66％的中值下降到細(xì)胞的4％，而CD4γIFN從8％的中值上升到63％，引起在細(xì)胞因子的產(chǎn)量從Th2向Th1轉(zhuǎn)變。
在下述圖表中，基線數(shù)據(jù)以“BL”或“pre”表示。
BrEA治療后免疫顯型的增加顯型 基線a療程1 療程2 療程3CD8+CD69+CD25- 18 54 56 75n＝ (13) (13) (9) (4)bp＝ ＜0.001＜0.001 0.04CD8+CD16+CD38+ 8 27 28 25n＝ (10) (10) (4) (4)p＝＜0.0010.047 0.02CD8-CD16+ 53 253288 249n＝ (12) (12) (4) (2)p＝＜0.0010.020.04Lin-HLA-DR+ 3.217.7 11.4c14.7cCD11c+/CD123+n＝ (10) (10) (5) (4)p＝＜0.0010.020.04IL2+CD4d3.14e29.25 31.42 13.59n＝ 13 13 3 4p＝＜0.0010.090.04IL10+CD4d66 20.9 8.9 15.3n＝ 13 13 5 3p＝0.005 0.005 0.03Th1反應(yīng)d17 66 64 53n＝ (13) (13) (5) (5)p＝0.001 0.033 0.025a細(xì)胞/μL的中值bt測(cè)試的成對(duì)值c對(duì)于在基線按受第2和第3個(gè)療程的病人不可用的測(cè)試，第2療程開始的基線值為6.4dCD4的百分比e從第8天開始的基線值(前述的第一次5天治療)
激活的T細(xì)胞平均值按療程與基線對(duì)比 LAK反應(yīng)的平均值按療程與基線反應(yīng)的對(duì)比
NK、ADCC應(yīng)答的平均值按療程與基線對(duì)比 按療程的樹突細(xì)胞應(yīng)答的平均值
HE2000使HIV中的IL10+CD4細(xì)胞正?；?HE2000增加Th1細(xì)胞百分比
Th1(主要為IFNg+)應(yīng)答與基線的對(duì)比 實(shí)施例21.治療HIV感染癥狀兩個(gè)感染有HIV并患有慢性腹泄的病人按如下所述給藥BrEA。皮下輸送BrEA制劑(40mg/mL BrEA在25體積％PEG300、12.5體積％乙醇、5體積％苯甲酸芐酯、～57.5體積％丙二醇)。病人每天接受在1.5mL中的60mgBrEA10天。在給藥期間，腹泄停止。10天的給藥期結(jié)束后，腹泄復(fù)發(fā)。其它口服接受BrEA的病人其腹泄也減輕了。
實(shí)施例22.皮下制劑 基本按本文所述制備BrEA制劑。該制劑含有50mg/mL BrEA、40體積％PEG200、2體積％芐醇、2體積％苯甲酸芐酯以及～66體積％丙二醇(qs)。該制劑特別適用于皮下給藥該化合物。
實(shí)施例23.制備BrEA半水合物—方法1 通過溴化表雄(甾)酮制備粗BrEA，然后從甲醇中結(jié)晶。通過將25g粗BrEA溶解于75mL回流的乙醇中并進(jìn)行適度攪拌制備半水合物。在保持溶液攪拌、回流時(shí)向BrEA溶液中慢慢加入12.5mL水。保持?jǐn)嚢枞芤?，然后將溶液慢慢冷卻至約20-25℃，并保持溫度約20-25℃約15分鐘以得到BrEA半水合物晶體的懸浮液。過濾回收晶體，在約20-25℃時(shí)用25mL 水∶乙醇(體積比5∶1)溶液洗滌，然后在50-60℃下真空干燥約13小時(shí)直到產(chǎn)物的重量恒定。晶體主要為棒狀和針狀，帶有少量的其它形狀如片狀。
該程序得到22.5g BrEA半水合物(產(chǎn)率90％)，通過KF分析其水含量為2.6重量％，HPLC面積法分析其純度為100％，其FTIR光譜中羰基峰在1741cm-1和1752cm-1。FTIR掃描無水BrEA顯示唯一羰基峰在1749cm-1。DSC掃描顯示三次吸熱。一次具有較寬的淺峰，在約109-110℃開始，在約150℃結(jié)束。該寬DSC峰與隨樣品溫度的增加半水合物晶體的失水一致。第二次吸熱約在83-100℃，其與從樣品中失去的少量殘留乙醇一致。DSC掃描無水BrEA不出現(xiàn)半水合物中所觀察到的該寬吸熱峰也與半水合物的失水一致。在100-150℃范圍以上，半水合物的DSC掃描中約在163-164℃(該溫度為無水BrEA的熔點(diǎn))時(shí)，出現(xiàn)第三吸熱尖峰。通過USP方法<197>得到FTIR，其中BrEA半水合物樣品在KBr中制備。DSC溫度記錄圖通過以10℃/分鐘的加熱速率，從25℃-250℃進(jìn)行掃描獲得。
實(shí)施例24.制備BrEA半水合物—方法2 通過將10g粗BrEA溶解在40mL回流的丙酮中并適度攪拌制備半水合物。保持溶液回流及攪拌時(shí)，向溶液中慢慢加入4.0mL水。保持?jǐn)嚢枞芤?，然后將溶液冷卻至約20-25℃，并保持約20-25℃約15分鐘以獲得BrEA半水合物晶體的懸浮液。通過過濾回收晶體，在約20-25℃用6.0mL 水∶丙酮(體積比10∶1)溶液洗滌，然后在50-60℃真空干燥過夜(約13-15小時(shí))直到產(chǎn)物的重量恒定。該方法獲得7.0g BrEA半水合物(產(chǎn)率70％)，KF分析其水含量為2.6重量％，F(xiàn)TIR光譜中羰基峰在1741cm-1和1752cm-1。
實(shí)施例25.BrEA半水合物顆粒尺寸的分析 基本上按本文所述制備BrEA半水合物，并使用一臺(tái)顆粒尺寸儀(Malvern儀器)確定尺寸。所使用的分析模型為用于多分散樣品和體積分布類型的模型。分析顯示晶體的直徑尺寸范圍為約0.5μm-約880μm。約90％的顆粒具有約20μm-約220μm直徑，并且大部分晶體的直徑為約30-200μm。平均顆粒直徑為約93μm。晶體的比表面積為約0.25m2/g。
在沒有指明的程度上，那些本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員理解本文所述的各種特殊實(shí)施方案、化合物或組合物的任何一種可以進(jìn)一步修改以包括其它的合適的特征，如本文以及本文引用的參考文獻(xiàn)中所公開的任何其它的特殊實(shí)施方案。
權(quán)利要求
1.16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物，其基本上不含其它形式的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
2.權(quán)利要求1所述的基本不含其它形式的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物，其中16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物含有至少約55重量％所存在的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
3.權(quán)利要求1所述的基本不含其它形式的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物，其中16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物包含至少約98重量％所存在的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
4.權(quán)利要求3所述的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物，其具有以下一種或多種特征(1)通過差式掃描量熱法分析測(cè)量，在約100℃時(shí)開始出現(xiàn)吸熱，(2)傅立葉轉(zhuǎn)換紅外吸收光譜測(cè)量在約1741cm-1和1750cm-1處出現(xiàn)兩個(gè)羰基吸收帶，(3)卡爾-費(fèi)休法滴定測(cè)量水含量約2.4重量％-約2.6重量％。
5.權(quán)利要求1、2或3所述的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮，其包含在含有一種適用于人類藥用或獸用的賦形劑的組合物中。
6.一種制備16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物的方法，包括將水、16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮和C1-C6醇接觸。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中C1-C6醇為乙醇。
8.權(quán)利要求6所述的方法，其中溶液含有約5-25重量％水，約30-45重量％乙醇和約30-45重量％16α-溴-3β羥基-5α-雄烷-17-酮配制物。
9.權(quán)利要求6所述的方法，其中溶液含有約18-22重量％水，約37-43重量％乙醇和約37-43重量％16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮配制物。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其中溶液的溫度為約20-約45℃。
11.權(quán)利要求1所述的16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物，其基本不含無水16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮或基本不含無定形16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮。
12.一種產(chǎn)物，其通過接觸一種包含水、16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮和一種C1-C6醇的溶液的過程而制備。
13.權(quán)利要求12所述的產(chǎn)物，其為16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮半水合物。
14.權(quán)利要求12或13所述的產(chǎn)物，其中所述溶液包含約5-25重量％水，約30-45重量％乙醇，以及約30-45重量％16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮配制物。
15.一種組合物，其含有一種通式1化合物、一種或多種非水液體賦形劑， 其中該組合物含有低于約3體積％的水，以及其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10獨(dú)立地為-H、-ORPR、-SRPR、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3-、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代?；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物或R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10的一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地為＝O或＝S，并且不存在鍵連到同一碳原子上的氫原子，或R3和R4一起包含通式2的結(jié)構(gòu)， R7為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-CHR10-CHR10-CHR10-、-CHR10-O-CHR10-、-CHR10-S-CHR10-、-CHR10-NRPR-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-；R8和R9獨(dú)立地為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-，或各自不存在R8或R9，保持5元環(huán)；R13獨(dú)立地為C1-6烷基；D為雜環(huán)或包含飽和碳原子的4、5、6、或7元環(huán)，其中4、5、6或7元環(huán)的1、2或3個(gè)環(huán)碳原子選擇性的獨(dú)立地被-O-、-S-或-NRPR-置換或該雜環(huán)上的1、2或3個(gè)氫原子或該4、5、6或7元環(huán)上的1或2個(gè)氫原子被-ORPR-、-SRPR-、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代酰基、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物取代，或，一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳被＝O或＝S取代，或D包含兩個(gè)5或6元環(huán)，其中兩個(gè)環(huán)是稠合的或通過一個(gè)或兩個(gè)鍵連接。
16.權(quán)利要求15所述的組合物，其中通式2具有以下結(jié)構(gòu)， 其中，R16獨(dú)立地為-CH2-、-O-、-S-或-NH-；R15、R17和R18獨(dú)立地為-H、-ORPR、-SRPR、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3-、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；⒘虼；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物，或R15、R17和R18的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地為＝O或＝S，并且不存在鍵連到同一碳原子上的氫原子，或R19為氮或CH。
17.權(quán)利要求16所述的組合物，其中R7、R8和R9的一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)獨(dú)立地為-O-、-S-、或-NH-，或其中R5和R6的一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地為-H、-CH3、-CH2ORPR、-CH2SRPR、-CH2O-C(O)-C1-10烷基、-CH2S-C(O)-C1-10烷基、-CH2O-C(O)-C1-10鏈烯基、-CH2S-C(O)-C1-10鏈烯基、-CH2O-C(O)-C0-4烷基-雜環(huán)、-CH2S-C(O)-C0-4烷基-雜環(huán)、-CH2O-C(O)-C0-4烷基-苯基、-CH2S-C(O)-C0-4烷基-苯基，其中任何C1-10烷基、雜環(huán)或苯基部分都被一個(gè)或多個(gè)取代基選擇性地取代。
18.權(quán)利要求17所述的組合物，其中一個(gè)或多個(gè)取代基為一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)獨(dú)立選擇的-O-、＝O、-ORPR、-S-、＝S、-SRPR、-NH-、-N(RPR)2或-C(O)-NH-，其中每個(gè)RPR獨(dú)立地為-H或一個(gè)保護(hù)基。
19.權(quán)利要求15所述的組合物，其中R1和R4獨(dú)立地為-OH、-O-烷基、-O-C(O)-烷基、＝O、-SH、-S-烷基、-S-C(O)-烷基或＝S，R2和R3獨(dú)立地為-H、-OH、-O-烷基、-O-C(O)-烷基、＝O、-SH、-S-烷基、-S-C(O)-烷基或＝S。
20.權(quán)利要求15所述的組合物，其中通式1化合物為在第1至第42-25-10-6組中命名的化合物。
21.通式1化合物， 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10獨(dú)立地為-H、-ORPR、-SRPR、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3-、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代?；⑻妓狨?、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物或R1、R2、R3、R4、R5、R6和R10的一個(gè)、二個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地為＝O或＝S，并且不存在鍵連到同一碳原子上的氫原子，或R3和R4一起包含通式2的結(jié)構(gòu)， R7為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-CHR10-CHR10-CHR10-、-CHR10-O-CHR10-、-CHR10-S-CHR10-、-CHR10-NRPR-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-；R8和R9獨(dú)立地為-CHR10-、-CHR10-CHR10-、-O-、-O-CHR10-、-S-、-S-CHR10-、-NRPR-或-NRPR-CHR10-，或各自不存在R8或R9，保持5元環(huán)；R13獨(dú)立地為C1-6烷基；D為雜環(huán)或包含飽和碳原子的4、5、6、或7元環(huán)，其中4、5、6或7元環(huán)的1、2或3個(gè)環(huán)碳原子選擇性的獨(dú)立地被-O-、-S-或-NRPR-置換或該雜環(huán)的1、2或3個(gè)氫原子或該4、5、6或7元環(huán)的1或2個(gè)氫原子被-ORPR-、-SRPR-、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代?；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物取代，或，一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳被＝O或＝S取代，或D包含兩個(gè)5或6元環(huán)，其中兩個(gè)環(huán)是稠合的或通過一個(gè)或兩個(gè)鍵連接，其中R7，R8和R9的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)不為-CHR10-。
22.權(quán)利要求21所述的化合物，其中通式2具有以下結(jié)構(gòu)， 其中，R15、R17和R18獨(dú)立地為-H、-ORPR、-SRPR、-N(RPR)2、-O-Si-(R13)3-、-CN、-NO2、酯、硫酯、磷酸酯、硫代磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、亞硫酸酯、硫酸酯、酰胺、氨基酸、肽、醚、硫醚、?；?、硫代?；?、碳酸酯、氨基甲酸酯、硫縮醛、鹵素、選擇性取代的烷基、選擇性取代的鏈烯基、選擇性取代的炔基、選擇性取代的芳基部分、選擇性取代的雜芳基部分、選擇性取代的單糖、選擇性取代的寡糖、核苷、核苷酸、寡核苷酸、聚合物，或R15、R17和R18的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地為＝O或＝S，并且不存在鍵連到同一碳原子上的氫原子，或R16獨(dú)立地為-CH2-、-O-、-S-或-NH-；以及R19為氮或CH。
23.權(quán)利要求21所述的化合物，其中不存在雙鍵，或其中存在一個(gè)雙鍵。
24.權(quán)利要求21所述的化合物，其中R7、R8和R9的一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)獨(dú)立地為-O-、-S-、或-NH-，或其中R5和R6的一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地為-H、-CH3、-CH2ORPR、-CH2SRPR、-CH2O-C(O)-C1-10烷基、-CH2S-C(O)-C1-10烷基、-CH2O-C(O)-C1-10鏈烯基、-CH2S-C(O)-C1-10鏈烯基、-CH2O-C(O)-C0-4烷基-雜環(huán)、-CH2S-C(O)-C0-4烷基-雜環(huán)、-CH2O-C(O)-C0-4烷基-苯基、-CH2S-C(O)-C0-4烷基-苯基，其中任何C1-10烷基、C1-10鏈烯基、雜環(huán)或苯基部分都被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的取代基選擇性取代。
25.權(quán)利要求24所述的化合物，其中一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選擇的取代基為一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)獨(dú)立選擇的-O-、＝O、-ORPR、-S-、＝S、-SRPR、-NH-、-N(RPR)2或-C(O)-NH-，其中每個(gè)RPR獨(dú)立地為-H或一個(gè)保護(hù)基。
26.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R1和R4獨(dú)立地為-OH、-O-烷基、-O-C(O)-烷基、＝O、-SH、-S-烷基、-S-C(O)-烷基或＝S，R2和R3獨(dú)立地為-H、-OH、-O-烷基、-O-C(O)-烷基、＝O、-SH、-S-烷基、-S-C(O)-烷基或＝S。
27.權(quán)利要求26所述的化合物，其中通式1化合物為在第1至第42-25-10-6組中命名的化合物。
28.權(quán)利要求21或22所述的化合物，其中R7、R8和R9的一個(gè)或二個(gè)獨(dú)立地為-O-、-S-或-NH-。
29.權(quán)利要求21所述的化合物，其中R7、R8和R9的一個(gè)或二個(gè)獨(dú)立地為-O-、-S-或-NH-，R1、R2和R4獨(dú)立地為-OH、-SH或一個(gè)可以水解為-OH或-SH的基團(tuán)。
30.權(quán)利要求29所述的化合物，其中R1處于α-構(gòu)型，R5和R6均處于α-構(gòu)型，并且R5和R6獨(dú)立地為-CH3或-CH2OH或一個(gè)可以水解為-CH2OH的基團(tuán)。
31.權(quán)利要求30所述的化合物，其中R2處于α-構(gòu)型，5-位的任何氫處于α-構(gòu)型。
32.權(quán)利要求21所述的化合物，其中通式1化合物為以下類似物16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β，7α-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7α，17β-三羥基-5α-雄烷、16α-溴-3α，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7β，17α-三羥基-5α-雄烷、16α-溴-3α，7α-二羥基-5α-雄烷-17-酮、16α-溴-3β，7α，17α-三羥基-5α-雄烷、16α-溴-3β-羥基-5α-雄烷-7，17-二酮、16α-溴-3α-羥基-5α-雄烷-7，17-二酮、16α-溴-7β-羥基-5α-雄烷-3，17-二酮、16α-溴-7α-羥基-5α-雄烷-3，17-二酮、3β-羥基-5α-雄烷-17-酮、3β，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、3β，7β，17β-三羥基-5α-雄烷、3β，7α-二羥基-5α-雄烷-17-酮、3β，7α，17β-三羥基-5α-雄烷、3α，7β-二羥基-5α-雄烷-17-酮、3β，7β，17α-三羥基-5α-雄烷、3α，7α-二羥基-5α-雄烷-17-酮、3β，7α，17α-三羥基-5α-雄烷、3β-羥基-5α-雄烷-7，17-二酮、3α-羥基-5α-雄烷-7，17-二酮、7β-羥基-5α-雄烷-3，17-二酮、7α-羥基-5α-雄烷-3，17-二酮、16α-溴-3β-羥基-5-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-5-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-5-雄烯、16α-溴-3β，7α-二羥基-5-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17β-三羥基-5-雄烯、16α-溴-3α，7β-二羥基-5-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17α-三羥基-5-雄烯、16α-溴-3α，7α-二羥基-5-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17α-三羥基-5-雄烯、16α-溴-3β-羥基-5-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-3α-羥基-5-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-7β-羥基-5-雄烯-3，17-二酮、16α-溴-7α-羥基-5-雄烯-3，17-二酮、3β-羥基-5-雄烯-17-酮、3β，7β-二羥基-5-雄烯-17-酮、3β，7β，17β-三羥基-5-雄烯、3β，7α-二羥基-5-雄烯-17-酮、3β，7α，17β-三羥基-5-雄烯、3α，7β-二羥基-5-雄烯-17-酮、3β，7β，17α-三羥基-5-雄烯、3α，7α-二羥基-5-雄烯-17-酮、3β，7α，17α-三羥基-5-雄烯、3β-羥基-5-雄烯-7，17-二酮、3α-羥基-5-雄烯-7，17-二酮、7β-羥基-5-雄烯-3，17-二酮、7α-羥基-5-雄烯-3，17-二酮、16α-溴-3β-羥基-4-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-4-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-4-雄烯、16α-溴-3β，7α-二羥基-4-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17β-三羥基-4-雄烯、16α-溴-3α，7β-二羥基-4-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17α-三羥基-4-雄烯、16α-溴-3α，7α-二羥基-4-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17α-三羥基-4-雄烯、16α-溴-3β-羥基-4-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-3α-羥基-4-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-7β-羥基-4-雄烯-3，17-二酮、16α-溴-7α-羥基-4-雄烯-3，17-二酮、3β-羥基-4-雄烯-17-酮、3β，7β-二羥基-4-雄烯-17-酮、3β，7β，17β-三羥基-4-雄烯、3β，7α-二羥基-4-雄烯-17-酮、3β，7α，17β-三羥基-4-雄烯、3α，7β-二羥基-4-雄烯-17-酮、3β，7β，17α-三羥基-4-雄烯、3α，7α-二羥基-4-雄烯-17-酮、3β，7α，17α-三羥基-4-雄烯、3β-羥基-4-雄烯-7，17-二酮、3α-羥基-4-雄烯-7，17-二酮、7β-羥基-4-雄烯-3，17-二酮、7α-羥基-4-雄烯-3，17-二酮、16α-溴-3β-羥基-1-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β-二羥基-1-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17β-三羥基-1-雄烯、16α-溴-3β，7α-二羥基-1-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17β-三羥基-1-雄烯、16α-溴-3α，7β-二羥基-1-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7β，17α-三羥基-1-雄烯、16α-溴-3α，7α-二羥基-1-雄烯-17-酮、16α-溴-3β，7α，17α-三羥基-1-雄烯、16α-溴-3β-羥基-1-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-3α-羥基-1-雄烯-7，17-二酮、16α-溴-7β-羥基-1-雄烯-3，17-二酮、16α-溴-7α-羥基-1-雄烯-3，17-二酮、3β-羥基-1-雄烯-17-酮、3β，7β-二羥基-1-雄烯-17-酮、3β，7β，17β-三羥基-1-雄烯、3β，7α-二羥基-1-雄烯-17-酮、3β，7α，17β-三羥基-1-雄烯、3α，7β-二羥基-1-雄烯-17-酮、3β，7β，17α-三羥基-1-雄烯、3α，7α-二羥基-1-雄烯-17-酮、3β，7α，17α-三羥基-1-雄烯、3β-羥基-1-雄烯-7，17-二酮、3α-羥基-1-雄烯-7，17-二酮、7β-羥基-1-雄烯-3，17-二酮或7α-羥基-1-雄烯-3，17-二酮，其中一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的可以水解為羥基的部分為選擇性鍵合到一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)羥基上，并且其中R7、R8和R9的一個(gè)或二個(gè)不是-CHR10-。
33.一種組合物，其包含一種權(quán)利要求21所述的化合物，以及一種或多種適用于人類藥用或獸用的賦形劑。
34.權(quán)利要求33所述的組合物，其中一種或多種賦形劑為固體賦形劑、非水溶液液體賦形劑或水。
35.權(quán)利要求34所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物為單位劑量制劑，其包含約5-約1000mg通式1化合物。
36.一種產(chǎn)物，其是通過將權(quán)利要求21所述的化合物與一種或多種適用于人類藥用或獸用的賦形劑接觸的過程生產(chǎn)的。
37.權(quán)利要求36所述的產(chǎn)物，其中賦形劑為固體賦形劑、非水溶液液體賦形劑或水。
38.權(quán)利要求37所述的產(chǎn)物，其中該產(chǎn)物為單位劑量制劑，其包含約3.5mg-約1000mg的一種通式1化合物。
39.一種方法，其包括將有效量的權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織，其中患者患有或易患病原體感染或惡性腫瘤，因此病原體感染或惡性腫瘤被預(yù)防或減緩或因此一種或多種病原體感染或惡性腫瘤的癥狀得到改善或因此引起病原體感染的主要病原體的復(fù)制受到抑制或因此惡性細(xì)胞的復(fù)制受到抑制，或因此一種引起病原體感染的主要細(xì)胞外病原體的至少一部分、或被病原體或惡性細(xì)胞感染的細(xì)胞被殺死，或因此惡性細(xì)胞群減少，或因此病原體復(fù)制的程度減弱。
40.權(quán)利要求39所述的方法，其還包括間歇式將有效量的權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織。
41.權(quán)利要求40所述的方法，其中(a)把權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織(i)每天一次、二次或三次連續(xù)1、2、3、4或5天或(ii)在3、5、7或9天的時(shí)間內(nèi)隔日每天一次、二次或三次；(b)從步驟(a)最后一天給藥開始，至少約28天至至少約8個(gè)月不給用權(quán)利要求15所述的組合物；(c)把權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織(i)每天一次、二次或三次連續(xù)1、2、3、4或5天或(ii)在3、5、7或9天的時(shí)間內(nèi)隔日每天一次、二次或三次；和(d)選擇性重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)1、2、3、4、5次或更多次。
42.權(quán)利要求40所述的方法，其中(a)在5天之內(nèi)隔日把 15所述的組合物施給患者或輸送至患者的組織；(b)不給用權(quán)利要求15所述的組合物2天；(c)然后重復(fù)步驟(a)；和(d)選擇性重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)1、2、3次或更多次。
43.權(quán)利要求42所述的方法，其中約0.05mg/kg至約25mg/kg存在于權(quán)利要求15所述的組合物中的通式1化合物，施用給患者或輸送至患者的組織。
44.一種方法，其包括將有效量的權(quán)利要求33所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織，其中患者患有或易患病原體感染或惡性腫瘤，因此病原體感染或惡性腫瘤被預(yù)防或減緩或因此一種或多種病原體感染或惡性腫瘤的癥狀得到改善或因此引起病原體感染的主要病原體的復(fù)制受到抑制或因此惡性細(xì)胞的復(fù)制受到抑制，或因此一種引起病原體感染的主要細(xì)胞外病原體的至少一部分、或被病原體或惡性細(xì)胞感染的細(xì)胞被殺死，或因此惡性細(xì)胞群減少，或因此病原體復(fù)制的程度減弱。
45.權(quán)利要求44所述的方法，其還包括間歇式將有效量的權(quán)利要求33所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中(a)把權(quán)利要求33所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織(i)每天一次、二次或三次連續(xù)1、2、3、4或5天或(ii)在3、5、7或9天的時(shí)間內(nèi)隔日每天一次、二次或三次；(b)從步驟(a)最后一天給藥開始，至少約28天至至少約8個(gè)月不給用權(quán)利要求33所述的組合物；(c)把權(quán)利要求33所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織(i)每天一次、二次或三次連續(xù)1、2、3、4或5天或(ii)在3、5、7或9天的時(shí)間內(nèi)隔日每天一次、二次或三次；和(d)選擇性地重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)1、2、3、4、5次或更多次。
47.權(quán)利要求45所述的方法，其中(a)在5天之內(nèi)隔日把 33所述的組合物施用給患者或輸送至患者的組織；(b)不給用 33所述的組合物2天；(c)然后重復(fù)步驟(a)；和(d)選擇性重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)1、2、3次或更多次。
48.權(quán)利要求47所述的方法，其中約0.05mg/kg至約25mg/kg存在于權(quán)利要求33所述的組合物中的通式1化合物，施用給患者或輸送至患者的組織。
49.一種用于增強(qiáng)患者的Th1免疫反應(yīng)或減弱患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者，因此患者的Th1免疫反應(yīng)得到增強(qiáng)或患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)減弱。
50.權(quán)利要求49所述的方法，其中患者患有免疫抑制疾病(Th1免疫反應(yīng)未達(dá)最理想)或具有不需要的免疫反應(yīng)(Th2免疫反應(yīng)過度)，其任意一種或二種與(1)一種病原體感染，其選自病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲感染以及多細(xì)胞寄生蟲感染，(2)一種自體免疫疾病，(3)惡性腫瘤或癌前期，(4)化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在，或胃腸刺激或發(fā)炎或(5)前述的任意結(jié)合有關(guān)。
51.權(quán)利要求50所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得到改善或不需要的免疫反應(yīng)減少。
52.權(quán)利要求51所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得到了增強(qiáng)。
53.權(quán)利要求52所述的方法，其中患者的病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲感染、多細(xì)胞寄生蟲感染、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、或免疫抑制分子的存在、胃腸刺激、發(fā)炎或前述的任意結(jié)合選自(a)DNA病毒感染或RNA病毒感染；(b)支原體感染、利斯特菌感染或分枝桿菌感染；(c)鏈球菌感染、葡萄球菌感染、弧菌感染、沙門氏菌感染、志賀氏菌感染、產(chǎn)腸毒素的、致腸病的、侵襲腸粘膜的或腸出血性大腸桿菌感染、耶爾森氏菌感染、彎曲菌感染、假單孢菌感染、疏螺旋體感染、軍團(tuán)菌感染和嗜血桿菌感染；(d)肺曲霉病、粘膜的或口咽念珠菌以及幼年類球孢子菌??；(e)念珠菌感染和隱球菌感染；(f)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎和糖尿??；(g)實(shí)體癌和彌散性癌癥，其選自卵巢癌、子宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌或腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤、白血病以及結(jié)腸癌；(h)良性前列腺增生以及復(fù)發(fā)性尖銳濕疣；(i)阿霉素治療、順氯氨鉑治療、絲裂霉素C治療、兩性霉素B治療；(j)γ-放療；(k)用于病毒感染或癌癥的核苷類似物治療；(l)外科創(chuàng)傷或意外創(chuàng)傷；(m)環(huán)孢菌素治療和皮質(zhì)類固醇治療；(n)過敏性腸病、克羅恩氏病、慢性腹泄；或(o)任意(a)到(n)的結(jié)合。
54.權(quán)利要求53所述的方法，其中患者為哺乳動(dòng)物。
55.權(quán)利要求53所述的方法，其中DNA病毒感染或RNA病毒感染選自HSV、CMV、HBV、HCV、HIV、SHIV、SIV、FIV、EBV、HSV-1、HSV-2、HSV-6、HHV-6、HHV-8、腺伴隨病毒、麻疹病毒、痘病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、人類鼻病毒、人類乳頭瘤病毒以及動(dòng)物乳頭瘤病毒感染。
56.權(quán)利要求55所述的方法，其中患者為患有HIV-1或HIV-2感染的人，其中患者的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)約25至約100CD4+細(xì)胞/mm3。
57.權(quán)利要求56所述的方法，其中患者患有一種或多種并發(fā)癥或與AIDS相關(guān)的共感染。
58.權(quán)利要求53所述的方法，其中患者具有病原體感染或惡性腫瘤，并且病原體或惡性腫瘤超過一段時(shí)間后不會(huì)對(duì)通式1化合物產(chǎn)生抗藥性，該時(shí)間通常與使用通式1化合物以外的化療或放療以治療病原體感染或惡性腫瘤的患者時(shí)，至少約30％的患者中會(huì)出現(xiàn)對(duì)傳統(tǒng)病原體或惡性腫瘤的化療或放療治療的可測(cè)量的抗藥性有關(guān)。
59.一種增強(qiáng)患者的Th1免疫反應(yīng)或減少患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求33所述的組合物施用給患者，因此患者的Th1免疫反應(yīng)得到增強(qiáng)或患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)減少。
60.權(quán)利要求59所述的方法，其中患者患有免疫抑制疾病(Th1免疫反應(yīng)未達(dá)最理想化)或不需要的免疫反應(yīng)(Th2免疫反應(yīng)過度)，其任何一種或兩種與(1)病原體感染，其選自病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲感染以及多細(xì)胞寄生蟲感染，(2)自體免疫疾病，(3)惡性腫瘤或癌前期，(4)化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、免疫抑制分子的存在、或胃腸刺激或發(fā)炎，(5)蠕蟲感染，或(6)前述的任意結(jié)合有關(guān)。
61.權(quán)利要求60所述的方法，其中患者的免疫抑制疾病得以改善或不需要的免疫反應(yīng)減少。
62.權(quán)利要求61所述的方法，其中患者的先天免疫、特異性免疫或二者得以增強(qiáng)。
63.權(quán)利要求62所述的方法，其中患者的病毒感染、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染、細(xì)胞外細(xì)菌感染、真菌感染、酵母感染、細(xì)胞外寄生蟲感染、細(xì)胞內(nèi)寄生蟲感染、原生寄生蟲感染、多細(xì)胞寄生蟲感染、自體免疫疾病、癌癥、癌前期、化療、放療、免疫抑制治療、抗感染藥劑治療、創(chuàng)傷、燒傷、或免疫抑制分子的存在、胃腸刺激、發(fā)炎或前述的任意結(jié)合選自(a)DNA病毒感染或RNA病毒感染；(b)支原體感染、利斯特菌感染或分枝桿菌感染；(c)鏈球菌感染、葡萄球菌感染、弧菌感染、沙門氏菌感染、志賀氏菌感染、產(chǎn)腸毒素的、致腸病的、侵襲腸粘膜的或腸出血性大腸桿菌感染、耶爾森氏菌感染、彎曲菌感染、假單孢菌感染、疏螺旋體感染、軍團(tuán)菌感染和嗜血桿菌感染；(d)肺曲霉病、粘膜的或口咽念珠菌以及幼年類球孢子菌病；(e)念珠菌感染和隱球菌感染；(f)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎和糖尿?。?g)實(shí)體癌和彌散性癌癥，其選自卵巢癌、子宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌或腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤、白血病以及結(jié)腸癌；(h)良性前列腺增生以及復(fù)發(fā)性尖銳濕疣；(i)阿霉素治療、順氯氨鉑治療、絲裂霉素C治療、兩性霉素B治療；(j)γ-放療；(k)用于病毒感染或癌癥的核苷類似物治療；(l)外科創(chuàng)傷或意外創(chuàng)傷；(m)環(huán)孢菌素治療和皮質(zhì)類固醇治療；(n)過敏性腸病、克羅恩氏病、慢性腹泄；或(o)任意(a)到(n)的結(jié)合。
64.權(quán)利要求63所述的方法，其中患者為哺乳動(dòng)物。
65.權(quán)利要求63所述的方法，其中DNA病毒感染或RNA病毒感染選自HSV、CMV、HBV、HCV、HIV、SHIV、SIV、FIV、EBV、HSV-1、HSV-2、HSV-6、HHV-6、HHV-8、腺伴隨病毒、麻疹病毒、痘病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、人類鼻病毒、人類乳頭瘤病毒以及動(dòng)物乳頭瘤病毒感染。
66.權(quán)利要求65所述的方法，其中患者為人，其患有HIV-1或HIV-2感染，其中患者的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)約25至約100CD4+細(xì)胞/mm3。
67.權(quán)利要求66所述的方法，其中患者患有一種或多種并發(fā)癥或與AIDS相關(guān)的共感染。
68.權(quán)利要求63所述的方法，其中患者具有病原體感染或惡性腫瘤，并且病原體或惡性腫瘤超過一段時(shí)間后不會(huì)對(duì)通式1化合物產(chǎn)生抗藥性，該時(shí)間通常與使用通式1化合物以外的化療或放療以治療病原體感染或惡性腫瘤的患者時(shí)，至少約30％的患者中會(huì)出現(xiàn)對(duì)傳統(tǒng)病原體或惡性腫瘤的化療或放療治療的可測(cè)量的抗藥性有關(guān)。
69.一種增強(qiáng)一種或多種促進(jìn)患者的Th1免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)或減少一種或多種促進(jìn)患者的Th2免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求15所述的組合物施用給患者，因此患者的Th1免疫反應(yīng)得到增強(qiáng)或患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)減少。
70.權(quán)利要求69所述的方法，其中患者的一種或多種促進(jìn)Th1免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素為IL-2、IL-12或γIFN。
71.權(quán)利要求68所述的方法，其中患者的一種或多種促進(jìn)Th2免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素為IL-4或IL-10。
72.一種增強(qiáng)一種或多種促進(jìn)患者的Th1免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)或減少一種或多種促進(jìn)患者的Th2免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素的表達(dá)的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求32所述的組合物施用給患者，因此患者的Th1免疫反應(yīng)得到增強(qiáng)或患者的不需要的Th2免疫反應(yīng)減少。
73.權(quán)利要求72所述的方法，其中患者的一種或多種促進(jìn)Th1免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素為IL-2、IL-12或γIFN。
74.權(quán)利要求72所述的方法，其中患者的一種或多種促進(jìn)Th2免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子或白介素為IL-4或IL-10。
全文摘要
本發(fā)明提供含有通式1類固醇即16α－溴－3β－羥基－5α－雄烷－17－酮半水合物以及一種或多種賦形劑的組合物,通常該組合物的含水量低于約3%。該組合物對(duì)于制備改進(jìn)的藥物制劑是有用的。本發(fā)明也提供一種間歇式給藥類固醇化合物如16α－溴－3β－羥基－5α－雄烷－17－酮的類似物的方法,以及用于這種給藥方案的組合物。本發(fā)明還提供使用某些類固醇以及類固醇類似物抑制病原體(病毒)復(fù)制、改善與免疫失調(diào)有關(guān)的癥狀并調(diào)節(jié)患者的免疫反應(yīng)的組合物和方法。本發(fā)明也提供制備以及使用免疫調(diào)節(jié)組合物和制劑的方法。
文檔編號(hào)A61K31/565GK1355809SQ00805366
公開日2002年6月26日 申請(qǐng)日期2000年3月23日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月23日
發(fā)明者克拉倫斯·納撒尼爾·阿勒姆, 詹姆斯·馬丁·弗林克, 路易斯·丹尼爾·多斯安若斯·德卡瓦略, 威廉·赫吉, 帕特里克·T·普倫德加斯特, 克里斯托弗·L·雷丁, 克魯帕卡·保羅·撒迪孔達(dá), 拉塞爾·尼爾·弗農(nóng) 申請(qǐng)人:霍利斯-伊登醫(yī)藥公司