專利名稱：半合成方法和其中間體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成方法，特別涉及半合成方法。
本發(fā)明背景歐洲專利309,477涉及海鞘素(ecteinascidins)729、743、745、759A、759B和770。公開(kāi)海鞘素化合物具有抗菌和其它有用的特性?，F(xiàn)在海鞘素743作為抗腫瘤藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
海鞘素743具有以下式(I)的復(fù)雜的三(四氫異喹啉酚)結(jié)構(gòu) 最近從海洋被囊動(dòng)物Ecteinascidin turbinata的提取物中分離制備了以上化合物。其產(chǎn)率低，因而一直在尋找其它的制備方法。
在美國(guó)專利5,721,362中描述了用于制備海鞘素化合物的合成方法。該提出權(quán)利要求的方法耗時(shí)并且復(fù)雜，有38個(gè)實(shí)施例分別描述了在得到海鞘素743的合成程序中的一個(gè)步驟。
美國(guó)專利5,721,362的權(quán)利要求25涉及所給出式(11)的中間體酚化合物，也將其稱為中間體11或Int-11。它具有以下雙(四氫異喹啉酚)結(jié)構(gòu)(II) 其中MOM是甲氧基甲基取代基和TBDPS是3，5-叔丁基二苯基甲硅烷基取代基。
從中間體11可以合成另一種重要的抗腫瘤藥物phthalascidin，參見(jiàn)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，3496-3501，1999。phthalascidin是式(III)的雙(四氫異喹啉酚)衍生物 在海鞘素743中，該1，4橋具有式(IV)的結(jié)構(gòu) 其它已知的海鞘素包括帶有不同橋環(huán)系的化合物，該橋環(huán)系例如存在于海鞘素722和736中，其中所述橋具有式(V)的結(jié)構(gòu) 海鞘素583和597中，其中所述橋具有式(VI)的結(jié)構(gòu) 和海鞘素594和596中，其中所述橋具有式(VII)的結(jié)構(gòu) 在J.Am.Chem.Soc.(1996)118，9017-9023中給出了這些化合物和有關(guān)化合物的復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。該文章結(jié)合在本文中作為參考。
已知其它的缺乏橋環(huán)系的化合物。它們包括雙(四氫異喹啉酮)抗腫瘤-抗微生物抗生素番紅菌素(safracins)和番紅霉素(saframycins)以及從培養(yǎng)的微生物或多孔動(dòng)物中分離出的海洋天然產(chǎn)物renieramicins和xestomycin。它們都具有常見(jiàn)的二聚四氫異喹啉碳骨架。這些化合物也可以根據(jù)芳環(huán)的氧化形式分類成I-IV四種類型。
類型I，二聚異喹啉酮，是式(VIII)的系統(tǒng)，最常存在于該類化合物中，參見(jiàn)以下表I。
表I類型I番紅霉素抗生素的結(jié)構(gòu)。 取代基化合物 R14aR14bR21R25aR25bR25c番紅霉素A H H CN O O CH3番紅霉素B H H H O O CH3番紅霉素C H OCH3H O O CH3番紅霉素G H OH CN O O CH3番紅霉素H H H CN OH CH2COCH3CH3番紅霉素S H H OH O O CH3番紅霉素Y3H H CN NH2H CH3番紅霉素Yd1H H CN NH2H C2H5番紅霉素Ad1H H CN O O C2H5番紅霉素Yd2H H CN NH2H H番紅霉素Y2bH QbCN NH2H CH3番紅霉素Y2b-dH QbCN NH2H C2H5番紅霉素AH2H H CN HaOHaCH3番紅霉素AH2Ac H H CN H OAc CH3番紅霉素AH1H H CN OHaHaCH3番紅霉素AH1Ac H H CN OAc H CH3番紅霉素AR3H H H H OH CH3a歸屬可以互換。b其中基團(tuán)Q是式(IX) 類型I芳環(huán)見(jiàn)于作為次要成分從淡紫灰鏈霉菌(Streptomyceslavendulae)中分離出的番紅霉素A、B和C；G和H；和S。從日本公開(kāi)特許公報(bào)JP-A2 59/225189和60/084288中已知稱作氰基醌胺的番紅霉素A的氰基衍生物。用合適的補(bǔ)加培養(yǎng)基，通過(guò)淡紫灰鏈霉菌經(jīng)直接生物合成制備番紅霉素Y3、Yd1、Ad1和Yd2。也已經(jīng)在淡紫灰鏈霉菌的補(bǔ)加培養(yǎng)基中制備了通過(guò)將一個(gè)單位的C-25上的氮原子連接到另一個(gè)單位的C-14上所形成的番紅霉素Y2b和Y2b-d二聚體。番紅霉素AR1(＝AH2)，一種通過(guò)Rhodococcus amidophilus產(chǎn)生的番紅霉素A在C-25上的微生物還原產(chǎn)物也通過(guò)用硼氫化鈉非立體選擇性化學(xué)還原(產(chǎn)物為1∶1差向異構(gòu)體的混合物)，隨后經(jīng)色譜分離[另一種異構(gòu)體AH1極性較低]制備。另一種還原產(chǎn)物番紅霉素AR3，21-脫氰基-25-二氫-番紅霉素A(＝25-二氫番紅霉素B)通過(guò)相同的微生物轉(zhuǎn)化制備。用Nocardia的物種進(jìn)行番紅霉素A的微生物的轉(zhuǎn)化的另一種類型產(chǎn)生番紅霉素B并經(jīng)分支桿菌屬(Mycobacterium)菌種進(jìn)一步還原產(chǎn)生番紅霉素AH1Ac。也已經(jīng)用化學(xué)方法制備了番紅霉素AH2和AH1的25-O-乙酸酯，用于生物學(xué)研究。
也已經(jīng)從海洋多孔動(dòng)物中分離出了式(X)的類型I化合物，參見(jiàn)表II。
表II來(lái)自海洋多孔動(dòng)物的類型I化合物的結(jié)構(gòu)。 取代基R14aR14bR21Rrenieramycin A OH H H -C(CH3)＝CH-CH3renieramycin B OC2H5H H -C(CH3)＝CH-CH3renieramycin C OH O O -C(CH3)＝CH-CH3renieramycin D OC2H5O O -C(CH3)＝CH-CH3renieramycin E HH OH -C(CH3)＝CH-CH3renieramycin F OCH3H OH -C(CH3)＝CH-CH3xestomycin OCH3H H -CH3從在Mexico收集的一種多孔動(dòng)物Reniera物種的抗微生物提取物中分離renieramycins A-D，伴隨生物起源的相關(guān)單體異喹啉renierone及有關(guān)化合物。renieramycin A的結(jié)構(gòu)最初確定具有在C-3、C-11和C-13上的轉(zhuǎn)化的立體化學(xué)。然而，經(jīng)仔細(xì)檢查新的、相關(guān)化合物renieramycins E和F(從在Palau收集的相同多孔動(dòng)物中分離)的1HNMR數(shù)據(jù)，揭示出renieramycins的環(huán)連接和番紅霉素的環(huán)連接完全一致。該結(jié)果得出結(jié)論即以前確定的renieramycins A-D的立體化學(xué)一定與番紅霉素的立體化學(xué)相同。
在一種多孔動(dòng)物，從Sri Lancan海域收集的Xestospongia物種中發(fā)現(xiàn)xestomycin。
具有還原氫醌環(huán)的式(XI)的類型II化合物包括從淡紫灰鏈霉菌中分離出的番紅霉素D和F以及從黃色粘球菌(Myxococcus xanthus)中分離出的Mx-1和Mx-2。參見(jiàn)表III。
表III類型II化合物 取代基化合物 R14aR14bR21R25aR25bR25c番紅霉素D O O H O OCH3番紅霉素F O O CN O OCH3番紅霉素Mx-1 H OCH3OH H CH3NH2番紅霉素Mx-2 H OCH3H H CH3NH2從培養(yǎng)的熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)中分離的抗生素番紅菌素A和B中發(fā)現(xiàn)類型III的骨架。這些式(XII)的抗生素由四氫異喹啉-醌亞單位和四氫異喹啉酚亞單位組成。 其中R21在番紅菌素A中是-H，在番紅菌素B中是-OH。
番紅霉素R，分類為類型IV骨架的唯一化合物，也從淡紫灰鏈霉菌中被分離。所述式(XIII)的化合物，由在酚的氧原子之一上帶有乙醇酸酯側(cè)鏈的氫醌環(huán)組成，由于它的適度毒性，可能是番紅霉素A的前體藥物。 所有這些已知的化合物具有如下式(XIV)結(jié)構(gòu)中所示的五環(huán)(A)到(E)的稠合系統(tǒng) 在海鞘素和一些其它的化合物中，所述環(huán)A和E是酚環(huán)，而在另外的化合物、特別是在番紅霉素中，所述環(huán)A和E是氫醌環(huán)。在已知的化合物中，所述環(huán)B和D是四氫化的，而環(huán)C是全氫化的。
本發(fā)明的目的仍然存在對(duì)于具有已知化合物的稠合五環(huán)系統(tǒng)的新的活性化合物和對(duì)于海鞘素化合物和相關(guān)化合物的其它合成途徑的需要。這樣的合成途徑可以提供對(duì)于已知抗腫瘤藥物的更經(jīng)濟(jì)的途徑，以及使得有可能制備新的活性化合物。本發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及已知化合物番紅菌素B(也稱為醌胺)在半合成合成中的用途。
一般而言，本發(fā)明涉及用于海鞘素的中間體、衍生物和有關(guān)結(jié)構(gòu)或其它來(lái)自于天然的雙(四氫異喹啉)類生物堿的四氫異喹啉酚化合物制備的半合成方法。用于半合成方法的合適的起始物質(zhì)包括從不同培養(yǎng)物得到的各類番紅霉素和番紅菌素抗生素，并且也包括各類從海洋多孔動(dòng)物中得到的reineramicin和xestomycin化合物。
所述起始化合物的通式(XV)如下 其中R1是酰氨基亞甲基基團(tuán)如-CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c，其中R25a和R25b形成酮基或其一個(gè)是-OH、-NH2或-OCOCH3而另一個(gè)是-CH2COCH3、-H、OH或-OCOCH3，條件是當(dāng)R25a是-OH或-NH2時(shí)，則R25b不是-OH，R25c是-H、-CH3或-CH2CH3，或R1是酰氧基亞甲基如-CH2-O-CO-R，其中R是-C(CH3)＝CH-CH3或-CH3；R5和R8獨(dú)立選自-H、-OH或-OCOCH2OH，或R5和R8都是酮基和所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)；R14a和R14b都是-H或一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；R15和R18獨(dú)立選自-H或-OH，或R5和R8都是酮基和所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)；和R21是-OH或-CN。
如下提供這類化合物更一般的結(jié)構(gòu)式 其中由R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10所定義的取代基每一個(gè)獨(dú)立選自H、OH、OCH3、CN、＝O、CH3；其中X是不同的酰胺或包含在所述天然產(chǎn)物中的酯官能團(tuán)；其中每一個(gè)虛線環(huán)代表一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)任選的雙鍵。
因此，根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)在提供用于制備中間體包括中間體11的半合成途徑并因此提供制備海鞘素化合物以及phthalascidin和其它化合物的半合成途徑。本發(fā)明每一條半合成途徑包括一系列轉(zhuǎn)化步驟以便得到所需產(chǎn)物。其中的每一步是與本發(fā)明相適應(yīng)的方法。本發(fā)明不限于所舉例的途徑，并且如果合適可以通過(guò)例如改變轉(zhuǎn)化步驟的程序提供可替換的途徑。
特別是，本發(fā)明涉及提供通式(XVI)的21-氰基原料 其中R1、R5、R8、R14a、R14b、R15和R18如上所定義。
在21-位上具有不同取代基的式(XVI)的其它化合物也可以代表可能的原料。一般來(lái)說(shuō)，任何能通過(guò)式(XV)化合物(其中R21是羥基)的21-羥基的親核置換產(chǎn)生的衍生物是候選物。合適的21-取代基的實(shí)例包括(但不限于)巰基；烷硫基(烷基具有1-6個(gè)碳原子)；芳硫基(芳基具有6-10個(gè)碳原子且未取代或由1-5個(gè)選自例如具有1-6個(gè)碳原子的烷基、具有1-6個(gè)碳原子的烷氧基、鹵原子、巰基和硝基的取代基取代)；氨基；一-或二烷基氨基(所述烷基或每個(gè)烷基具有1-6個(gè)碳原子)；一-或二芳基氨基(所述烷基或每個(gè)烷基相對(duì)于如上芳硫基中所定義)；式-C(Ra)(Rb)-C(＝O)Rc的α-羰基烷基，其中Ra和Rb選自氫原子、具有1-20個(gè)碳原子的烷基、芳基(如以上相對(duì)于芳硫基所定義)和芳烷基(其中具有1-4個(gè)碳原子的烷基由如以上相對(duì)于芳硫基所定義的芳基所取代)，條件是Ra和Rb之一是氫原子；Rc選自氫原子、具有1-20個(gè)碳原子的烷基、芳基(如以上相對(duì)于芳硫基所定義)、芳烷基(其中具有1-4個(gè)碳原子的烷基由如以上相對(duì)于芳硫基所定義的芳基所取代)、具有1-6個(gè)碳原子的烷氧基、
氨基或如上所定義的一-或二烷基氨基。
因此，在更一般的情況下，本發(fā)明涉及其中第一步是用親核試劑形成21-衍生物的方法。我們稱這類化合物為21-Nuc化合物。
對(duì)于一些終產(chǎn)物而言，特別是海鞘素770和phthalascidin，要求存在21-氰基，而對(duì)于其它終產(chǎn)物而言，21-氰基起到保護(hù)基的作用，其可以容易地轉(zhuǎn)化為其它取代基，例如海鞘素743或21-羥基phthalascidin的21-羥基。采用21-氰基化合物作為原料，有效地在隨后的合成步驟中使分子穩(wěn)定，直至它被任選除去。其它21-Nuc化合物可以提供這些優(yōu)勢(shì)和其它的優(yōu)勢(shì)。
在一個(gè)重要的方面，本發(fā)明在于通式(XVI)的21-氰基化合物在制備雙或三(四氫異喹啉酚)化合物中的用途?？梢灾苽涞漠a(chǎn)物包括中間體如中間體11，和海鞘素和phthalascidin，以及相關(guān)結(jié)構(gòu)的新的和已知的化合物。
優(yōu)選的原料包括那些式(XV)或(XVI)的化合物，其中R14a和R14b都是氫。優(yōu)選的原料也包括式(XV)或(XVI)的化合物，其中R15是氫。另外，優(yōu)選的原料包括式(XV)或(XVI)的化合物，其中環(huán)E是酚環(huán)。優(yōu)選的原料還包括式(XV)或(XVI)的化合物，其中R5、R8、R15和R18中至少一個(gè)、最好至少兩個(gè)或三個(gè)不是氫。
用于本發(fā)明的合適原料的實(shí)例包括番紅霉素A、番紅霉素B、番紅霉素C、番紅霉素G、番紅霉素H、番紅霉素S、番紅霉素Y3、番紅霉素Yd1、番紅霉素Ad1、番紅霉素Yd2、番紅霉素AH2、番紅霉素AH2Ac、番紅霉素AH1、番紅霉素AH1Ac、番紅霉素AR3、renieramycinA、renieramycin B、renieramycin C、renieramycin D、renieramycin E、renieramycin F、xestomycin、番紅霉素D、番紅霉素F、番紅霉素Mx-1、番紅霉素Mx-2、番紅菌素A、番紅菌素B和番紅霉素R。對(duì)于基團(tuán)R21而言，優(yōu)選的原料在21位上具有氰基。
在特別優(yōu)選的方面，本發(fā)明涉及半合成方法，其中所述轉(zhuǎn)化步驟適用于番紅菌素B 番紅菌素B番紅菌素B顯示出與海鞘素緊密相關(guān)的環(huán)系統(tǒng)。所述化合物具有相同的五環(huán)結(jié)構(gòu)和在右手芳環(huán)-環(huán)E中相同的取代形式。番紅菌素B也顯示出與一些在ET-743全合成中的合成中間體、特別是與中間體11非常接近地相似性。這些中間體可以用已經(jīng)建立的方法轉(zhuǎn)化成Et-743。因此，合成轉(zhuǎn)化番紅菌素B為中間體11將提供獲得ET-743的半合成方法。
因此，我們提供從化合物番紅菌素B制備的中間體11，以及從中間體11衍生的化合物，特別是海鞘素化合物。我們還提供從番紅菌素B制備的phthalascidin。本發(fā)明也涉及番紅菌素B在制備中間體11、phthalascidin、海鞘素化合物和本發(fā)明其它中間體中的用途。本發(fā)明也涉及從其它所建議的原料衍生的本文所述的化合物，以及那些化合物在制備所述化合物中的用途。
本發(fā)明更優(yōu)選的原料具有21-氰基。目前最優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式2的化合物。該化合物直接從番紅菌素B獲得并認(rèn)為是在半合成方法中關(guān)鍵的中間體。 化合物2在相關(guān)方面，我們提供通過(guò)發(fā)酵熒光假單胞菌的可產(chǎn)生番紅菌素B菌株，并用氰化物離子處理培養(yǎng)物得到的氰基番紅菌素B。優(yōu)選的熒光假單胞菌株是菌珠A2-2，F(xiàn)ERM BP-14，其用在EP 055,299的方法中。氰化物離子的合適的來(lái)源是氰化鉀。在典型的處理中，將所述培養(yǎng)物過(guò)濾并加入過(guò)量的氰化物離子。在合適的攪拌間隔例如1小時(shí)后，使pH變?yōu)閴A性，即pH為9.5，有機(jī)溶劑萃取得到粗制萃取物，將其進(jìn)一步純化得到氰基番紅菌素B。
為避免產(chǎn)生疑問(wèn)，本發(fā)明說(shuō)明書中所述的立體化學(xué)是基于對(duì)已知的天然產(chǎn)物的正確的立體化學(xué)的理解。因而，發(fā)現(xiàn)在指定立體化學(xué)中的錯(cuò)誤，然后在本發(fā)明說(shuō)明書全文所給出的結(jié)構(gòu)式中需要作出適當(dāng)?shù)馗恼?。另外，所述合成方法可以進(jìn)行改進(jìn)，本發(fā)明包括立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的產(chǎn)物典型為式(XVIIa) 或式(XVIIb)化合物 其中R1是任選保護(hù)或衍生的氨基亞甲基、任選保護(hù)或衍生的羥基亞甲基，例如其團(tuán)R1如對(duì)式(XV)所定義；R4是-H；或R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團(tuán) R5是-H或-OH；R7是-OCH3和R8是-OH或R7和R8一起形成基團(tuán)-O-CH2-O-；R14a和R14b都是-H或一個(gè)是-H，而另一個(gè)是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；和R15是-H或-OH；R21是-H、-OH或-CN；和衍生物包括其?；苌?，特別是其中R5是乙酰氧基或其它具有最多可達(dá)4個(gè)碳原子的酰氧基，并且包括其中在12位上的基團(tuán)-NCH3-由-NH-或-NCH2CH3-代替的衍生物和其中式(VI)化合物中的-NH2基團(tuán)被任選衍生化的衍生物。
在式(XVIIa)或(XVIIb)中，R1一般是氨基亞甲基、酰氨基亞甲基或R1與R4形成基團(tuán)(IV)或(V)。合適的酰氨基亞甲基包括那些由丙氨酸衍生的式-CH2-NH-CO-CHCH3-NH2的基團(tuán)和由其它氨基酸衍生的類似基團(tuán)，所述氨基酸主要包括D和L型的甘氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、組氨酸和羥基脯氨酸。對(duì)于基團(tuán)R1的通式則是-CH2-NH-aa，其中aa指氨基酸?；?。
基團(tuán)R1可以在-NH2基團(tuán)上被酰化，例如N-酰基衍生物可以由基團(tuán)-CH2NH2和-CH2-NH-aa形成。所述酰基衍生物可以是其N-?；騈-硫代酰基衍生物以及環(huán)酰胺。?；鶊F(tuán)的實(shí)例有鏈烷?；?、鹵代鏈烷酰基、芳基鏈烷?；?、鏈烯酰基、雜環(huán)基酰基、芳?；⒎蓟减；Ⅺu代芳?；?、硝基芳酰基或其它?；鶊F(tuán)。?；鶊F(tuán)可以是式-CO-Ra，其中Ra可以是不同的基團(tuán)例如烷基、烷氧基、亞烷基、芳基烷基、芳基亞烷基、氨基酸?；螂s環(huán)基，每一個(gè)任選由鹵素、氰基、硝基、羧基烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、烷基、氨基或取代的氨基取代。其它酰化劑包括異硫氰酸酯例如異硫氰酸芳基酯、特別是異氰酸苯酯。Ra的烷基、烷氧基或亞烷基適合具有1-6或12個(gè)碳原子，并可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀。芳基一般是苯基、聯(lián)苯基或萘基。雜環(huán)基可以是芳族的或部分或完全不飽和的，并適合具有4-8個(gè)環(huán)原子，更優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子，具有一個(gè)或多個(gè)選自氮、硫和氧的雜原子。
并非包括無(wú)遺，典型的Ra基團(tuán)包括烷基、鹵代烷基、烷氧基烷基、鹵代烷氧基烷基、芳基亞烷基、鹵代烷基芳基亞烷基、酰基、鹵代?；⒎蓟榛?、鏈烯基和氨基酸。例如Ra-CO-可以是乙?；?、三氟乙?；?、2，2，2-三氯代乙氧基羰基、異戊酰羰基、反式-3-(三氟甲基)肉桂酰羰基、七氟代丁酰羰基、癸?；驶?、反式-肉桂酰羰基、丁?；驶?、3-氯代丙?；驶?、肉桂酰羰基、4-甲基肉桂酰羰基、氫化肉桂酰羰基、或反式-己烯酰羰基、或丙氨?；?、精氨酰基、天冬氨酰基、天冬?；㈦装滨；?、谷氨酰基、谷氨酰胺酰基、甘氨?；?、組氨?；?、羥基脯氨?；?、異亮氨?；?、亮氨?；①嚢滨；?、甲硫氨酰基、苯丙氨?；⒏滨；?、絲氨酰基、蘇氨酰基、甲狀腺原氨?；⑸滨；⒗野滨；?、纈氨?；约捌渌怀Ｒ?jiàn)的氨基酸酰基，以及苯二酰亞氨基和其它環(huán)酰胺。其它的實(shí)例可以在所列出的保護(hù)基團(tuán)中發(fā)現(xiàn)。
其中-CO-Ra由氨基酸衍生并包括氨基的化合物其本身可以形成?；苌?。合適的N-?；衔锇ǘ?，其本身可以形成N-?；苌铩?br> 在一種涉及中間體產(chǎn)物變體(variation)中，環(huán)A被修飾以便結(jié)合如在下文討論的式(XX)或(XXI)所示的亞結(jié)構(gòu)。
在另一涉及中間體的變體的方法中，基團(tuán)R1可以是-CH2O-CO-CFu-CH2-S-Prot3，其由式(XIX)化合物衍生，其中Prot3和Fu具有所指定的意義。在這種情況下，R7和R8形成氧基亞甲基氧基。基團(tuán)R18通常被保護(hù)。通常R21是氰基。
優(yōu)選R14a和R14b是氫。優(yōu)選R15是氫。所述O-酰基衍生物合適是脂族O-?；苌?，特別是具有1-4個(gè)碳原子的?；苌锊⒁话銥镺-乙酰基，主要在5-位上。
對(duì)于酚類和羥基的合適的保護(hù)基團(tuán)包括醚和酯，例如烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷基甲硅烷基烷氧基烷基、烷硫基烷基、芳硫基烷基、疊氮基烷基。氰基烷基、氯代烷基、雜環(huán)基、芳基?；?、鹵代芳基?；?、環(huán)烷基烷基、鏈烯基、氯代烷基、烷基芳基烷基、烷氧基芳基烷基、硝基芳基烷基、鹵代芳基烷基、烷基氨基羰基芳基烷基、烷基亞硫酰基芳基烷基、烷基甲硅烷基和其它醚以及芳基酰基、碳酸芳基烷基酯、脂族碳酸酯、碳酸烷基亞硫?；蓟榛ァ⑼榛妓狨?、碳酸芳基鹵代烷基酯、碳酸芳基鏈烯基酯、氨基甲酸芳基酯、烷基氧膦基、烷基硫膦基、芳基硫膦基、磺酸芳基烷基酯和其它酯。這些基團(tuán)可以任選由以前在R1中所提到的基團(tuán)取代。
對(duì)于胺的合適的保護(hù)基團(tuán)包括氨基甲酸酯、酰胺和其它保護(hù)基團(tuán)例如烷基、芳基烷基?；腔?或鹵代-芳基烷基、鹵代烷基、烷基甲硅烷基烷基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、烷基芳基烷基、雜環(huán)基烷基、硝基芳基烷基、酰氨基烷基、硝基芳基聯(lián)硫基芳基烷基、二環(huán)烷基酰胺基烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基鏈烯基、硝基芳基鏈烯基、雜環(huán)基鏈烯基、雜環(huán)基、羥基雜環(huán)基、烷基聯(lián)硫基、烷氧基-或鹵代-或烷基亞硫?；蓟榛㈦s環(huán)?；推渌被姿狨ィ约版溚轷；Ⅺu代鏈烷?；?、芳基鏈烷?；?、鏈烯酰基、雜環(huán)?；?、芳?；⒎蓟减；Ⅺu代芳?；⑾趸减；推渌０芬约巴榛?、鏈烯基、烷基甲硅烷基烷氧基烷基、烷氧基烷基、氰基烷基、雜環(huán)基、烷氧基芳基烷基、環(huán)烷基、硝基芳基、芳基烷基、烷氧基-或羥基-芳基烷基和許多其它基團(tuán)。這些基團(tuán)可以任選由以前在R1中提到的基團(tuán)取代。
下列表中給出這些保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例。
對(duì)于-OH基團(tuán)的保護(hù)醚縮寫甲基甲氧基甲基MOM芐氧基甲基BOM
甲氧基乙氧基甲基MEM2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基SEM甲硫基甲基 MTM苯硫基甲基 PTM疊氮甲基氰基甲基2，2-二氯代-1，1-二氟代乙基2-氯代乙基2-溴代乙基四氫吡喃基 THP1-乙氧基乙基EE苯甲酰甲基4-溴代苯甲酰甲基環(huán)丙基甲基烯丙基炔丙基異丙基環(huán)己基叔-丁基芐基2，6-二甲基芐基4-甲氧基芐基MPM或PMB鄰-硝基芐基2，6-二氯代芐基3，4-二氯代芐基4-(二甲基氨基)羰基芐基4-甲基亞硫?；S基 Msib9-蒽基甲基
4-吡啶甲基七氟代-對(duì)-甲苯基四氟代-4-吡啶基三甲基甲硅烷基 TMS叔-丁基二甲基甲硅烷基TBDMS叔-丁基二苯基甲硅烷基TBDPS三異丙基甲硅烷基 TIPS酯甲酸芳基酯乙酸芳基酯乙酰丙酸芳基酯新戊酸芳基酯 ArOPv苯甲酸芳基酯9-氟代甲酸芳基酯碳酸芳基甲基酯1-金剛烷基碳酸酯叔-丁基碳酸酯 BOC-OAr4-甲基亞硫?；S基碳酸酯 Msz-Oar2，4-二甲基戊-3-基碳酸酯 Doc-Oar碳酸芳基2，2，2-三氯代乙基酯碳酸芳基乙烯基酯碳酸芳基芐基酯氨基甲酸芳基酯二甲基氧膦基 Dmp-OAr
二甲基硫膦基Mpt-OAr二苯基硫膦基Dpt-Oar甲磺酸芳基酯甲苯磺酸芳基酯2-甲酰基苯磺酸芳基酯對(duì)于-NH2基團(tuán)的保護(hù)氨基甲酸酯 縮寫甲基乙基9-芴基甲基 Fmoc9-(2-磺基)芴基甲基9-(2，7-二溴代)芴基甲基17-四苯并[a，c，g，i]芴基甲基 Tbfmoc2-氯代-3-茚基甲基 Climoc苯并[f]茚-3-基甲基 Bimoc2，7-二-叔-丁基[9-(10，10-二氧代-10，10，10，10-四氫thioxanthyl)]甲基DBD-Tmoc2，2，2-三氯代乙基 Troc2-三甲基甲硅烷基乙基Teoc2-苯基乙基 hZ1-(1-金剛烷基)-1-甲基乙基 Adpoc2-氯代乙基1，1-二甲基-2-氯代乙基1，1-二甲基-2-溴代乙基1，1-二甲基-2，2-二溴代乙基 DB-t-BOC1，1-二甲基-2，2，2-三氯代乙基 TCBOC1-甲基-1-(4-聯(lián)苯)乙基Bpoc1-(3，5-二-叔-丁基苯基)-1-1-甲基乙基 t-Burmeoc2-(2’-和4’-吡啶基)乙基 Pyoc2，2-雙(4’-硝基苯基)乙基Bnpeocn-(2-新戊酰氨基)-1，1-二甲基乙基2-[(2-硝基苯基)聯(lián)硫基]-1-苯基乙基NpSSPeoc2-(n，n-二環(huán)己基酰胺基)乙基叔-丁基 BOC1-金剛烷基 1-Adoc2-金剛烷基 2-Adoc乙烯基 Voc烯丙基 Aloc或Alloc1-異丙基烯丙基 Ipaoc肉桂基 Coc4-硝基肉桂基 Noc3-(3’-吡啶基)丙-2-烯基8-喹啉基n-羥基哌啶基烷基聯(lián)硫基芐基 Cbz或Z對(duì)-甲氧基芐基Moz對(duì)-硝基芐基 PNZ對(duì)-溴代芐基對(duì)-氯代芐基2，4-二氯代芐基4-甲基亞硫?；S基 Msz9-蒽基甲基二苯基甲基吩噻嗪基-(10)-羰基n’-對(duì)-甲苯磺酰基氨基羰基n’-苯基氨基硫代羰基酰胺甲酰胺乙酰胺氯代乙酰胺三氟代乙酰胺 TFA苯基乙酰胺3-苯基丙酰胺戊-4-烯酰胺吡啶甲酰胺3-吡啶基甲酰胺苯甲酰胺對(duì)-苯基苯甲酰胺n-苯鄰二甲酰亞胺n-四氯代苯鄰二甲酰亞胺 TCP4-硝基-n-苯鄰二甲酰亞胺n-二硫雜琥珀酰亞胺 Dtsn-2，3-二苯基馬來(lái)酰亞胺n-2，5-二甲基吡咯n-2，5-雙(三異丙基甲烷烷氧基)吡咯BIPSOPn-1，1，4，4-四甲基二硅氮雜環(huán)戊烷加合物 STABASE1，1，3，3-四甲基-1，3-二硅雜異吲哚啉B(niǎo)SB特定的-NH保護(hù)基團(tuán)n-甲胺n-叔-丁胺n-烯丙胺n-[(2-三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲胺 SEMn-3-乙酸基丙胺n-氰基甲胺n-(1-異丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺n-2，4-二甲氧基芐胺Dmb2-氮雜降冰片烯n-2，4-二硝基苯胺n-芐胺 Bnn-4-甲氧基芐胺 MPMn-2，4-二甲氧基芐胺DMPMn-2-羥基芐胺 Hbnn-(二苯基甲基)氨基 DPMn-雙(4-甲氧基苯基)甲胺n-5-二苯并環(huán)庚基胺 DBSn-三苯基甲胺 Trn-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基 MMTrn-9-苯基芴基胺 Pfn-三茂鐵基甲胺 Fcmn-2-吡啶甲基胺n’-氧化物n-1，1-二甲硫基亞甲基胺n-亞芐基胺n-對(duì)-甲氧基亞芐基胺n-二苯基亞甲基胺n-(5，5-二甲基-3-氧代-1-環(huán)己烯基)胺n-硝基胺n-亞硝基胺二苯基phosphinamide Dpp二甲硫基phosphinamide Mpt二苯硫基phosphinamide Ppt二芐基phosphoramidate2-硝基苯磺酰亞胺Npsn-1-(2，2，2-三氟代-1，1-二苯基)乙基磺酰亞胺TDE3-硝基-2-吡啶磺酰亞胺 Npys對(duì)-甲苯磺酰胺 Ts苯磺酰胺番紅菌素B包括丙氨酰側(cè)鏈。在本發(fā)明的一個(gè)方面，已發(fā)現(xiàn)用Boc基團(tuán)保護(hù)的游離氨基可以產(chǎn)生很大的優(yōu)勢(shì)。
本發(fā)明具體的海鞘素產(chǎn)物包括式(XVIII)的化合物 其中R1和R4形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團(tuán) 更優(yōu)選基團(tuán)(IV)或(V)；R21是-H、-OH或-CN，更優(yōu)選-OH或-CN；和其酰基衍生物，更優(yōu)選5-?；苌锇?-乙酰基衍生物。海鞘素743和相關(guān)化合物的制備通常，將21-氰基起始化合物轉(zhuǎn)化為例如式(XVIII)的海鞘素產(chǎn)物的過(guò)程包括a)如果需要，將環(huán)E的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；b)如果需要，將環(huán)A的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；c)將環(huán)A的酚系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為亞甲二氧基酚環(huán)；d)形成式(IV)、(VI)或(VII)的跨越環(huán)B的1-位和4-位的橋接螺環(huán)系統(tǒng)；和e)適當(dāng)衍生化，例如?；?br> 步驟(a)，如果需要將環(huán)E的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)的過(guò)程可以通過(guò)常規(guī)的還原方法完成。合適的試劑體系是氫與披鈀碳催化劑，盡管可以使用其它的還原體系。
步驟(b)，如果需要將環(huán)A的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)的過(guò)程與步驟(a)類似，不必作更多的說(shuō)明。
步驟(c)，將環(huán)A的酚系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為亞甲二氧基酚環(huán)的過(guò)程可以以幾種方法完成，可能伴隨著步驟(b)。例如，可以將醌環(huán)A的7-位上的甲氧基取代基脫甲基化并還原成二氫醌，用合適的親電子試劑如CH2Br2、BrCH2Cl捕獲或用類似的二價(jià)試劑直接得到亞甲二氧基環(huán)系，或用二價(jià)試劑如硫代羰基二咪唑得到取代的亞甲二氧基環(huán)系，該系統(tǒng)可以轉(zhuǎn)化為所需的環(huán)。
步驟(d)一般可以通過(guò)如下步驟完成在1-位上用橋鍵形成劑(可以幫助形成所需的橋)合適的取代，在4-位上形成內(nèi)外(exendo)醌甲基化物并使該甲基化物能與所述1-取代基反應(yīng)產(chǎn)生橋接結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的橋鍵形成劑是式(XIX)的橋鍵形成劑 其中Fu表示被保護(hù)的官能團(tuán)，例如基團(tuán)-NHProt4a或OProt4b，Prot3是保護(hù)基團(tuán)，虛線表示任選的雙鍵。
通過(guò)首先在環(huán)A和B連接點(diǎn)的10-位上導(dǎo)入羥基以便得到式(XX)的部分結(jié)構(gòu) 或更優(yōu)選的式(XXI)的部分結(jié)構(gòu)來(lái)適當(dāng)?shù)匦纬伤黾谆?其中基團(tuán)R”選自式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的所需基團(tuán)。對(duì)于前兩個(gè)基團(tuán)而言，所述基團(tuán)R”一般取-CHFu-CH2-SProt3的形式。然后，可以除去所述保護(hù)基團(tuán)并被適當(dāng)改性以便得到所需的化合物。
美國(guó)專利5,721,362中提供了步驟(d)的一般方法，結(jié)合到本文中作為參考。具體內(nèi)容可以參考該美國(guó)專利第8欄步驟(1)和實(shí)施例33的內(nèi)容和相關(guān)的內(nèi)容。
在步驟(e)中的衍生化過(guò)程可以包括例如用基團(tuán)Ra-CO-酰化以及將12-NCH3基團(tuán)轉(zhuǎn)化為12-NH或12-NCH2CH3。這類轉(zhuǎn)化可以使用現(xiàn)有的方法在其它步驟之前或之后進(jìn)行。
通過(guò)舉例說(shuō)明，現(xiàn)在能將式2的氰基番紅菌素B化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镋T-743，導(dǎo)致與以前所述的方法相比，時(shí)間更短和更簡(jiǎn)單的生產(chǎn)ET-743的方法。可以將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體25， 并且從這個(gè)衍生物中可能產(chǎn)生一系列半胱氨酸衍生物，其其后可以轉(zhuǎn)變?yōu)镋t-743。通過(guò)以下兩個(gè)化合物舉例說(shuō)明優(yōu)選的半胱氨酸衍生物 在方案I中敘述了利用化合物29逆合成分析制備ET-743。 方案I按照以上方案I，可能以21個(gè)線性步驟得到ET-743。所述方法通過(guò)依次反應(yīng)將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體25，該方法基本上包括(1)除去位于環(huán)A中的甲氧基，(2)將環(huán)A還原并且在一個(gè)反應(yīng)器中形成亞甲基-二氧基，(3)將位于碳1上的酰胺官能團(tuán)水解，(4)將得到的胺基轉(zhuǎn)化為羥基。此外，所述方法避免化合物25的環(huán)B中位置1上的伯醇官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)，直接使用半胱氨酸殘基29形成中間體27。在所述氨基中用β-β-β-三氯代乙氧基羰基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)半胱氨酸衍生物29，以便具有與存在的烯丙基和MOM基團(tuán)的相容性。將中間體27直接氧化和環(huán)化。這些情況與合成的最后階段中不同的脫保護(hù)對(duì)策一起使得所述路線成為新的路線并使其比美國(guó)專利5,721,362的方法更適合于工業(yè)開(kāi)發(fā)。
將2-氰基化合物轉(zhuǎn)化為中間體25通常包括以下步驟(參見(jiàn)方案II)通過(guò)使2與叔-丁氧基羰基酐反應(yīng)，生成式14保護(hù)的化合物；通過(guò)使其與溴代甲基甲基醚和二異丙基乙胺在乙腈中反應(yīng)，將14轉(zhuǎn)化為式15的二重-保護(hù)的化合物；通過(guò)使其與氫氧化鈉的甲醇溶液反應(yīng)，選擇地消去在15中醌系統(tǒng)的甲氧基以獲得式16的化合物；通過(guò)使用下一個(gè)優(yōu)先程序?qū)?6轉(zhuǎn)變?yōu)槭?8的亞甲基-二氧基化合物(1)在氫氣氛下，用10％Pd/C將化合物16的醌基團(tuán)還原；(2)通過(guò)在氫氣氛下與溴代氯代甲烷和碳酸銫反應(yīng)，將氫醌中間體轉(zhuǎn)化為式17的亞甲基二氧基化合物；(3)通過(guò)保護(hù)游離羥基為OCH2R基團(tuán)，將17轉(zhuǎn)變?yōu)槭?8的化合物。采用BrCH2R和碳酸銫進(jìn)行該反應(yīng)，其中R可以是芳基、CH＝CH2、OR’等；通過(guò)與HCl的二噁烷溶液反應(yīng)，將18的叔-丁氧基羰基和甲氧基甲基保護(hù)基團(tuán)消去以便得到式19的化合物。該反應(yīng)也可以通過(guò)將18與三氟代乙酸的二氯甲烷溶液混合完成；通過(guò)使19與異硫氰酸苯酯反應(yīng)，生產(chǎn)式20的硫脲化合物；通過(guò)與氯化氫的二噁烷溶液反應(yīng)，將式20的化合物轉(zhuǎn)化為式21的胺化合物；通過(guò)與氯甲酸三氯代乙基酯和吡啶反應(yīng)，將式21的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镹-Troc衍生物22；通過(guò)使22與溴代甲基甲基醚和二異丙基乙胺反應(yīng)，生產(chǎn)式23的被保護(hù)的羥基化合物；通過(guò)與乙酸和鋅反應(yīng)，將式23的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镹-H衍生物24；通過(guò)與亞硝酸鈉的乙酸溶液反應(yīng)，將式24的化合物轉(zhuǎn)化為式25的羥基化合物?；蛘?，可以在乙酸和乙腈的混合物中使用四氧化二氮，隨后通過(guò)用氫氧化鈉處理。也可以在乙酐-乙酸混合物中使用亞硝酸鈉，隨后用氫氧化鈉處理。 方案II使用半胱氨酸衍生物29將中間體25化合物轉(zhuǎn)化為ET-743通常包括以下步驟(參見(jiàn)方案III)通過(guò)使用(S)-N-2，2，2-三氯代乙氧基羰基-S-(9H-芴-9-基甲基)半胱氨酸29保護(hù)伯羥基官能團(tuán)，將式24的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)檠苌?0；通過(guò)使用氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯膦)將烯丙基裂解，將式30的保護(hù)的化合物轉(zhuǎn)化為酚衍生物31；通過(guò)用苯亞硒酸酐在低溫下氧化，將式31的酚化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?2的化合物；通過(guò)下列程序?qū)⑹?2羥基化合物轉(zhuǎn)變?yōu)閮?nèi)酯33(1)使式32的化合物與2當(dāng)量的三氟甲磺酸酐和5當(dāng)量DMSO反應(yīng)，(2)隨后與8當(dāng)量的二異丙基乙胺反應(yīng)，(3)隨后與4當(dāng)量的叔-丁醇反應(yīng)(4)隨后與7當(dāng)量的2-叔-丁基-1，1，3，3-四甲基胍反應(yīng)，(5)隨后與10當(dāng)量的乙酐反應(yīng)；通過(guò)使用TMSI將MOM保護(hù)基團(tuán)除去，將內(nèi)酯化合物33轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基化合物34；通過(guò)與Zn/AcOH反應(yīng)，將式34化合物的N-三氯代乙氧基羰基裂解得到化合物35；通過(guò)與N-甲基吡啶鎓甲醛氯化物、隨后與DBU反應(yīng)，將氨基化合物35轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的α-酮基內(nèi)酯化合物36；通過(guò)使式36的化合物與3-羥基-4-甲氧基苯基乙胺反應(yīng)，形成ET-770；通過(guò)與硝酸銀在AcN/H2O混合物中反應(yīng)，將ET-770轉(zhuǎn)變?yōu)镋T-743。
方案III以上所述將中間體25轉(zhuǎn)變?yōu)镋T-743的途徑可以用其它半胱氨酸衍生物例如化合物37即2-甲氧基甲基氧基-3-(9H-芴-9-基甲基)-硫代-丙烯酸方便地改進(jìn)。所述化合物已經(jīng)以烯醇醚的形式結(jié)合了酮基，而在其它的半胱氨酸類似物中，存在氨基，該氨基必須在其后經(jīng)氨基交換反應(yīng)，以55-60％的適度產(chǎn)率轉(zhuǎn)變?yōu)橥?。因此，因?yàn)楸苊饬税被粨Q步驟，使用化合物37可能顯著地增加線性合成的產(chǎn)率。
除了轉(zhuǎn)變(f)和(g)外，使用半胱氨酸衍生物37可以與使用半胱氨酸衍生物29相似的方法和相同的試劑將中間體化合物25轉(zhuǎn)化為ET-743。所述反應(yīng)程序在以下方案(方案IV)中說(shuō)明 方案IV也可以通過(guò)美國(guó)專利第5,721,362號(hào)中所述的中間體12與對(duì)該專利所述途徑提供改進(jìn)的中間體37反應(yīng)形成化合物38。phthalascidin和相關(guān)化合物的制備。
在本發(fā)明中，一類重要的產(chǎn)物包括phthalascidin并具有以下通式(XX) 其中R1是氨基亞甲基；R5是小的氧基-側(cè)鍵；和R21是氰基或羥基。對(duì)于phthalascidin而言，R1是苯二酰亞氨基亞甲基；R5是乙酸基；和R21是氰基。對(duì)于R1的其它基團(tuán)包括單-和雙-N-取代的酰氨基亞甲基以及其它環(huán)酰氨基亞甲基，對(duì)于R5的其它基團(tuán)還包括C1-C4?；约癈1-C4烷基。
將21-氰基化合物轉(zhuǎn)化為phthalascidin或式(XX)的相關(guān)產(chǎn)物一般包括以下步驟a)如果需要，將環(huán)E的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；b)在環(huán)A的5-位上形成-R5基團(tuán)；c)在環(huán)B的1-位上形成R1基團(tuán)；和d)如果需要，將環(huán)A的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；e)將環(huán)A的酚系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為亞甲基二氧基酚環(huán)。
這些步驟具有與用于制備海鞘素所給出的步驟許多相似性。步驟(c)一般包括在1-位上形成基團(tuán)-CH2NH2并將其?；?。
使用在將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)化為中間體25中所述的中間體，制備phthalascidin。例如中間體21和17是制備phthalascidin的合適的原料。
如以上在方案V中所示，用于從中間體21開(kāi)始合成制備phthalascidin的方法包括以下程序步驟通過(guò)與鄰苯二甲酸酐在二氯甲烷和羰基二咪唑中反應(yīng)，將21轉(zhuǎn)變?yōu)槭?7的化合物。通過(guò)與氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯膦)或堿性介質(zhì)反應(yīng)，隨后與乙酰氯反應(yīng)，將27轉(zhuǎn)化為phthalascidin。 方案V如以上在方案VI中所示，用于從中間體17開(kāi)始合成制備phthalascidin的方法包括以下程序步驟用乙酰氯和吡啶將式17化合物的羥基乙?；玫绞?2乙?；闹虚g化合物；通過(guò)與HCl的二噁烷溶液反應(yīng)，將42的叔-丁氧基羰基和甲氧基甲基保護(hù)基團(tuán)除去，得到式43的化合物。該反應(yīng)也可以通過(guò)將42與三氟乙酸的二氯甲烷溶液混合完成；通過(guò)使43與異硫氰酸苯酯反應(yīng)，制備式44的硫脲化合物；通過(guò)與氯化氫的二噁烷溶液反應(yīng)，將式44的化合物轉(zhuǎn)化為式45的胺化合物；通過(guò)與鄰苯二甲酸酐在二氯甲烷和羰基二咪唑中反應(yīng)，將45轉(zhuǎn)變?yōu)閜hthalascidin。 方案VI中間體11和相關(guān)中間體的制備。在以下程序中敘述逆合成分析。 在本發(fā)明中，一類重要的中間體包括中間體11并具有通式(XXI) 其中Proc1和Proc2是羥基保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選為不同的基團(tuán)。通常Proc1根據(jù)需要按常規(guī)選擇。通常Proc2根據(jù)需要按常規(guī)選擇。對(duì)于中間體11本身，基團(tuán)Proc1是甲氧基甲基和Proc2是叔-丁基二苯基甲硅烷基。
將所述21-氰基化合物轉(zhuǎn)化為中間體11或式(XXI)的相關(guān)的中間體的過(guò)程一般包括以下步驟a)如果需要，將環(huán)E的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；b)在環(huán)E的18-位上形成-OProt1基團(tuán)；c)在環(huán)B的1-位上形成-CH2-OProt2基團(tuán)；和d)如果需要，將環(huán)A的醌系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為酚系統(tǒng)；e)將環(huán)A的酚系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為亞甲基二氧基酚環(huán)。
步驟(b)，在環(huán)E的18-位上形成-OProt1基團(tuán)，一般是對(duì)于酚基團(tuán)的保護(hù)反應(yīng)并且不必專門評(píng)述。根據(jù)保護(hù)基團(tuán)的特性選擇合適的條件。所述其它步驟與其它的反應(yīng)相似。
步驟(b)，在環(huán)B的1-位上形成-CH2-OProt2基團(tuán)，通常通過(guò)在1-位上形成-CH2NH2、然后將胺官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為羥基官能團(tuán)并保護(hù)進(jìn)行。因此，當(dāng)起始物質(zhì)具有基團(tuán)R1(其是-CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c)時(shí)，則需要除去N-?；．?dāng)起始物質(zhì)具有R1(其是-CH2-O-CO-R)時(shí)，對(duì)于其中取代基R1是相同的海鞘素產(chǎn)物可以不需要改變。對(duì)于其它產(chǎn)物而言，都需要除去O-?；Ｔ撁擋；饔每梢圆捎酶鞣N方法。在一種變體中，使脫?；饔煤娃D(zhuǎn)化為羥基官能團(tuán)在一個(gè)步驟中進(jìn)行。因此，所述羥基可以被酰化或另外被轉(zhuǎn)化，得到合適的R1基團(tuán)。
U.S專利號(hào)5,721,362敘述了通過(guò)長(zhǎng)的多步合成生產(chǎn)ET-743的合成方法。該合成的中間體之一是中間體11。用氰基番紅菌素B作為起始物質(zhì)可能得到中間體11，以提供更短的途徑生產(chǎn)這類中間體并因此改進(jìn)生產(chǎn)ET-743的方法。
通過(guò)以上所述的方法，氰基番紅菌素B可以轉(zhuǎn)化為中間體25。利用以下步驟，從中間體25中可能得到中間體11，參見(jiàn)方案VII通過(guò)使25與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯在堿存在下反應(yīng)，制備式26的保護(hù)的羥基化合物；
最后，用氫化丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯膦)裂解26中的烯丙基導(dǎo)致中間體11的形成。 方案VII本發(fā)明將番紅菌素B轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體11的合成方法的一個(gè)實(shí)施方案是方案VIII的改進(jìn)和擴(kuò)展并包括以下程序步驟通過(guò)與KCN在酸性介質(zhì)中反應(yīng)，選擇性地用CN置換OH，將式1的化合物(番紅菌素B)立體選擇性地轉(zhuǎn)化為式2的化合物；通過(guò)使式2的化合物與異硫氰酸苯酯反應(yīng)，制備式3的硫脲化合物；通過(guò)在酸性介質(zhì)中水解、隨后加入乙酐，將式3的硫脲化合物轉(zhuǎn)化為式5的乙酰胺；通過(guò)用碳酸氫鈉猝滅所述在酸性介質(zhì)中的水解，可以分離式4的中間體胺化合物，但是所述中間體為高度不穩(wěn)定并很快轉(zhuǎn)變?yōu)槲逶h(huán)亞胺，即化合物6；通過(guò)與溴代甲基甲基醚和二異丙基乙胺在二氯甲烷中反應(yīng)，制備式7被保護(hù)的化合物；通過(guò)與氫氧化鈉的甲醇溶液反應(yīng)，將式7化合物醌系統(tǒng)的甲氧基選擇性脫甲基化為式8的化合物；通過(guò)優(yōu)選的以下程序?qū)⑹?的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?的亞甲基二氧基-化合物(1)在氫氣氛下，用10％Pd/C還原式8化合物的醌基團(tuán)；(2)在氫氣氛下，通過(guò)與溴代氯代甲烷和碳酸銫反應(yīng)將氫醌中間體轉(zhuǎn)化為式9的亞甲基二氧基化合物；(3)通過(guò)與BrCH2R和碳酸銫(其中R可以是?；?、CH＝CH2、OR’等)反應(yīng)，保護(hù)游離羥基為OCH2R基團(tuán)，將式9的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?0的化合物；通過(guò)與四氧化二氮在乙酸和乙酸乙酯的混合物中反應(yīng)，隨后用氫氧化鈉處理，將式10化合物的乙酰胺基團(tuán)轉(zhuǎn)化為式11的相應(yīng)羥基基團(tuán)；或者可以使用在乙酐和乙酸混合物中的亞硝酸鈉，隨后用氫氧化鈉處理；或者通過(guò)與肼或與Boc2O、DMAP，隨后與肼反應(yīng)，將式10化合物的乙酰胺基團(tuán)轉(zhuǎn)化為伯胺基團(tuán)；通過(guò)用4-甲?；?1-甲基吡啶鎓苯磺酸鹽或其它吡啶鎓離子，隨后用DBU或其它堿處理并進(jìn)一步水解，將伯胺氧化轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醛并隨后用氫化鋰鋁或其它還原劑將該醛還原為相應(yīng)的羥基，可以將所述伯胺轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羥基基團(tuán)(式11的化合物)；通過(guò)與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯和二甲基氨基吡啶在二氯甲烷中反應(yīng)，制備式26的被保護(hù)的化合物；通過(guò)在還原條件或酸性條件下反應(yīng)，使所述OCH2R保護(hù)基團(tuán)脫保護(hù)，將式26的甲硅烷基化的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體11。典型的方法包括氫氣氛下的鈀黑，或含水TFA，或氫化三丁基錫和二氯化雙(三苯膦合鈀)。
在另一優(yōu)選的改進(jìn)中，利用方案II的擴(kuò)展可以將式2的氰基化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體11，包括其它步驟通過(guò)使25與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯在堿存在下反應(yīng)，制備式26被保護(hù)的羥基化合物；最后，用氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯膦)將26中烯丙基裂解，導(dǎo)致中間體11的形成?；钚曰衔锏闹苽淇梢詫⑶杌t菌素B轉(zhuǎn)變?yōu)橐恍┚哂袧撛诳鼓[瘤治療活性的中間體和衍生物。這些中間體可以從已經(jīng)敘述的化合物開(kāi)始或利用可替換途徑制備。
這里所述的中間體包括化合物47和一些利用化合物45或43制備的酰胺衍生物。
在方案VIII中描述用以下程序制備化合物47通過(guò)使式2的化合物與異硫氰酸苯酯反應(yīng)，制備式3的硫脲化合物；通過(guò)在酸性介質(zhì)中水解，隨后加入乙酐，將式3的硫脲化合物轉(zhuǎn)化為式5的乙酰胺；通過(guò)用碳酸氫鈉猝滅在酸性介質(zhì)中的水解可以分離式4的中間體胺化合物，但是該中間體為高度不穩(wěn)定并很快轉(zhuǎn)變?yōu)槲逶h(huán)亞胺，即化合物6；通過(guò)與溴代甲基甲基醚和二異丙基乙胺在二氯甲烷中反應(yīng)，制備式7的被保護(hù)的化合物；通過(guò)與氫氧化鈉的甲醇溶液反應(yīng)，將式7化合物醌系統(tǒng)的甲氧基選擇性脫甲基化為式8的化合物；通過(guò)優(yōu)選的以下程序?qū)⑹?的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?0的亞甲基二氧基化合物(1)在氫氣氛下，用10％Pd/C將式8化合物的醌基團(tuán)還原；(2)在氫氣氛下，通過(guò)與溴代氯代甲烷和碳酸銫反應(yīng)將氫醌中間體轉(zhuǎn)化為式9的亞甲基二氧基化合物；(3)通過(guò)使與烯丙基-溴和碳酸銫反應(yīng)，保護(hù)游離羥基為烯丙氧基，將式9的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?0的化合物；通過(guò)與乙酰氯在吡啶中反應(yīng)，將式9的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴；?衍生物46；通過(guò)與鹽酸在二噁烷中反應(yīng)，將式46的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槊摫Ｗo(hù)的化合物47。 方案VIII利用下一個(gè)方案，從已敘述的中間體45制備其它有用的酰胺中間體衍生物 第二步是任選的。該方法是本發(fā)明的一個(gè)重要部分，特別是當(dāng)基團(tuán)R是以前所定義的基團(tuán)Ra時(shí)。另外，通過(guò)包括在5-位上具有不同基團(tuán)，直接用于產(chǎn)物的基團(tuán)或可以被除去的基團(tuán)或者被改性為所需的基團(tuán)的起始物，方案VIII可以容易地?cái)U(kuò)展使能夠制備式(XXIII)的化合物。方案IX通過(guò)以下程序，從化合物45可以制備一組類似物通過(guò)許多?；苌飳⑹?5的化合物的氨基?；员闾峁┫鄳?yīng)的酰胺，其中優(yōu)選的?；且阴；?、肉桂酰氯、對(duì)-三氟代肉桂酰氯、異戊酰氯、異硫氰酸苯酯或氨基酸；或前述提供RaCO-基團(tuán)的其它實(shí)例；通過(guò)與硝酸銀在AcN/H2O的混合物中反應(yīng)，將CN基團(tuán)轉(zhuǎn)化為OH基團(tuán)。
用以下方案，從已經(jīng)敘述的中間體43制備其它有用的酰胺中間體衍生物 方案X用以下程序，從化合物43可以得到另一組重要的中間體衍生物(a)通過(guò)許多酰基衍生物將式43的化合物的氨基?；员闾峁┫鄳?yīng)的酰胺，其中優(yōu)選的酰基是乙?；?、肉桂酰氯、對(duì)-三氟代肉桂酰氯、異戊酰氯或氨基酸，或前述提供RaCO-基團(tuán)的其它實(shí)例。(b)通過(guò)與硝酸銀在AcN/H2O的混合物中反應(yīng)，將CN基團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)镺H基團(tuán)。新的中間體化合物根據(jù)以前的解釋，可以看出本發(fā)明提供新的中間體化合物。根據(jù)環(huán)A，中間體是式(XXIIa) 或式(XXIIb)的化合物 其中R1是-CH2NH2或-CH2OH，或是該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式和R4是-H；或R1a和R4一起形成式(IV)、(VI)或(VII)的基團(tuán) R5是-OH或該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式；R14a和R14b均是-H或者一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH或該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；R12是-NH、-NCH3或-NCH2CH3-；R15是-OH或該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式；和R18是-OH或該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式。
在一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選至少R1、R5、R14a、R14b、R15或R18是保護(hù)或衍生化的基團(tuán)。
在本發(fā)明的一個(gè)變體中，基團(tuán)R1不是3，5-叔-丁基二苯基甲硅烷基取代基和/或基團(tuán)R18不是甲氧基甲基。
優(yōu)選R1是-CH2NH2或-CH2OH，或該基團(tuán)的保護(hù)或衍生化的形式，R4是-H；或R1a和R4一起形成以下基團(tuán) 優(yōu)選R14a和R14b都是-H。
一類優(yōu)選的中間體包括鑒定為化合物25的下式化合物 因此，優(yōu)選的類型是其中基團(tuán)MOM由任何其它保護(hù)基團(tuán)代替的通式化合物。
其它優(yōu)選的中間體包括鑒定為化合物45和47的化合物。其它N-?；苌锟梢匀菀椎赜苫衔?5制備并且是本發(fā)明的重要部分。合適的?；切┣懊嫣岬降幕鶊F(tuán)。相應(yīng)的21-羥基化合物也是有用的并包括在我們已發(fā)現(xiàn)的活性化合物之中。新的活性化合物已經(jīng)另外發(fā)現(xiàn)一些本發(fā)明的、最初制備作為中間體的化合物在治療癌癥如白血病、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌和黑素瘤方面具有優(yōu)越的活性。
因此，本發(fā)明提供治療任何患有癌癥的哺乳動(dòng)物、特別是人的方法，所述方法包括給予患者治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥用組合物。
本發(fā)明也涉及藥物制劑，其含有作為活性成分的本發(fā)明的一種化合物或多種化合物，以及制備它們的方法。
藥用組合物的實(shí)例包括具有合適的組成的任何固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等)或液體(溶液、懸浮液或乳劑)，或者口服、局部給藥或者腸胃外給藥，并且它們可以含有純的化合物或與任何載體或其它藥理活性化合物組合。當(dāng)腸胃外給藥時(shí)這些組合物必須是無(wú)菌的。
可以通過(guò)任何合適的方法給予本發(fā)明的化合物或組合物，例如靜脈內(nèi)輸注、口服、腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥。輸注的時(shí)間最長(zhǎng)可達(dá)24小時(shí)，更優(yōu)選2-12小時(shí)，最優(yōu)選2-6小時(shí)。短的輸注時(shí)間(使得不必在醫(yī)院過(guò)夜而進(jìn)行的治療)是特別理想的。然而，如果需要輸注時(shí)間可以是12-24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。輸注可以以合適的大約2-4周的間隔進(jìn)行。含有本發(fā)明化合物的藥用組合物可以通過(guò)脂質(zhì)體或毫微球體(nanosphere)包封物、以緩釋劑或經(jīng)其它標(biāo)準(zhǔn)的傳遞方法給藥。
化合物正確的劑量將根據(jù)具體的制劑、給藥的方法和特定的部位、宿主和所治療的腫瘤變化。還應(yīng)該考慮其它因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥的時(shí)間、排泄的速度、宿主的狀態(tài)、藥物的組合、反應(yīng)的敏感性和疾病的嚴(yán)重程度?？梢栽谧畲笕菰S劑量范圍內(nèi)持續(xù)地或間歇地給藥。
本發(fā)明的化合物和組合物可以與其它藥物一起使用以提供聯(lián)合治療。所述其它藥物可以形成同一組合物的一部分或作為獨(dú)立的組合物在同一時(shí)間或不同時(shí)間給藥。對(duì)所述其它藥物沒(méi)有具體限制，合適的候選藥物包括a)具有抗有絲分裂作用、特別是具有針對(duì)細(xì)胞骨架成分作用的藥物，包括微管調(diào)節(jié)劑例如紫杉烷藥物(如紫杉酚、紫杉醇(paclitaxel)、taxotere、docetaxel)，鬼臼毒素或長(zhǎng)春花生物堿(長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿)；b)抗代謝物藥如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、嘌呤類似物(如噴司他丁、甲氨蝶呤)；c)烷化劑例如氮芥類(如環(huán)磷酰胺或異環(huán)磷酰胺)；d)以DNA為靶目標(biāo)的藥物例如antracycline類藥物阿霉素、多柔比星、表阿霉素或表柔比星；e)以交連異構(gòu)酶為靶目標(biāo)的藥物如依托泊苷；f)激素或激素興奮劑或拮抗劑如雌激素、抗雌激素(他莫昔芬和有關(guān)的化合物)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、環(huán)丙孕酮或奧曲肽；g)以腫瘤細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為靶目標(biāo)的藥物，包括抗體衍生物如herceptin；h)烷化藥物如鉑劑(順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、paraplatin)或亞硝基脲；i)對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移有潛在影響的藥物如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；j)基因療法和反義藥物；k)抗體療法；l)海洋起源的其它生物活性化合物，特別是didemnins如aplidine；m)類固醇類似物，特別是地塞米松；n)抗炎藥物，特別是地塞米松；和o)止吐藥物，特別是地塞米松。
本發(fā)明也涉及本發(fā)明的化合物在治療方法中的用途和在制備用于治療癌癥的組合物中的用途。細(xì)胞毒素的活性細(xì)胞培養(yǎng)物。將細(xì)胞在含有Eagle氏平衡鹽、2.0mM L-谷氨酰胺、非-必需氨基酸、沒(méi)有碳酸氫鈉；補(bǔ)充10％胎牛血清(FCS)、10-2M碳酸氫鈉和0.1g/l青霉素G+硫酸鏈霉素的Eagle氏極限必需培養(yǎng)基(EMEM/neaa)中維持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
利用由Bergeron等(1984)所描述方法的改進(jìn)形式來(lái)進(jìn)行簡(jiǎn)單篩選過(guò)程以便測(cè)定和對(duì)比這些化合物的抗癌活性。所用的腫瘤細(xì)胞系是P-388(來(lái)自DBA/2小鼠的淋巴瘤懸浮培養(yǎng)物)、A-549(人的肺癌的單層培養(yǎng)物)、HT-29(人的結(jié)腸癌的單層培養(yǎng)物)和MEL-28(人的黑素瘤的單層培養(yǎng)物)。
將P-388細(xì)胞以每孔1×104細(xì)胞接種在含有指定濃度的藥物的1ml MEM 5FCS的等分試樣的16mm孔中。接種單獨(dú)的一組不含藥物的培養(yǎng)基作為對(duì)照生長(zhǎng)以確保細(xì)胞保持在指數(shù)生長(zhǎng)期。以一式兩份進(jìn)行所有測(cè)定。在37℃、10％CO2的98％濕度下孵育三天后，用0.1％的結(jié)晶紫染色。通過(guò)對(duì)比含有藥物的孔中的生長(zhǎng)與對(duì)照孔中的生長(zhǎng)，確定近似的IC50。
將A-549、HT-29和MEL-28接種在含有指示藥物濃度的1mlMEM 10FCS的等分式樣、以每孔1×104細(xì)胞的16mm孔中。作為對(duì)照組，培養(yǎng)物的單數(shù)行沒(méi)有接種藥物以保證所述細(xì)胞維持在生長(zhǎng)指數(shù)期。以雙份進(jìn)行所有測(cè)定。在37℃、10％CO2的98％濕度下孵育三天后，用0.1％結(jié)晶紫將所述孔染色。通過(guò)對(duì)比具有藥物的孔中的生長(zhǎng)和對(duì)照組孔中的生長(zhǎng)，確定近似的IC50。
1.Raymond J.Bergeron，Paul F.Cavanaugh，Jr.，Steven J.Kline.Robert G.Hughes，Jr.，Gary T.Elliot和Carl W.Porter。亞精胺兒茶酚胺鐵鰲合劑的抗腫瘤和抗皰疹活性。Biochem.Bioph.Res.Comm.1984，121(3)，848-854。
2.Alan C.Schroeder，Robert G.Hughes，Jr.和Alexander Bloch.無(wú)環(huán)嘧啶核苷類似物的作用。J.Med.Chem.1981，24 1078-1083。細(xì)胞毒素的活性 從該活性數(shù)據(jù)和其它研究中可以看出，本發(fā)明的活性化合物包括一類優(yōu)選的通式(XXIII)的化合物 其中R1如在前文中對(duì)式(XVIIb)所定義并優(yōu)選是中等體積的衍生化的氨基亞甲基；R5如在前文中對(duì)式(XVIIb)所定義并優(yōu)選是小體積的衍生化的羥基；R12如在前文中所定義并優(yōu)選是-NCH3-和
R21是羥基或氰基。
R1合適是疏水基并且其因此缺乏游離氨基、羥基或其它疏水官能團(tuán)。典型的R1是基團(tuán)-CH2-NH2-CO-Ra，其中Ra如上所定義，但優(yōu)選具有少于20個(gè)原子、更優(yōu)選少于15或10個(gè)原子的線性鏈長(zhǎng)度，其中1，4-苯基可以被認(rèn)為是四個(gè)原子的鏈長(zhǎng)度并且類似的意義適用于其它環(huán)基團(tuán)(例如1，2-環(huán)己基是兩個(gè)原子的鏈長(zhǎng)度)，少于10、15或20個(gè)原子的線性鏈本身可以被取代。特別是，所述數(shù)據(jù)提示在不具有所述基團(tuán)Ra-CO-與具有龐大的基團(tuán)之間可以達(dá)到平衡。
在一種變體中，優(yōu)選R1不含有環(huán)狀基團(tuán)，特別是芳族基團(tuán)。在有關(guān)的變體中，本發(fā)明不制備Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，3496-3051，1999(結(jié)合到本文中作為參考)中所敘述的化合物。對(duì)于R1優(yōu)選的基團(tuán)不包括在所述文章的表1中所示的相應(yīng)的取代基CH2R2，特別是對(duì)于R2的基團(tuán)A、B、C和D。
R5優(yōu)選乙酰基。
在特別優(yōu)選的化合物中，基團(tuán)R1在-NH2基團(tuán)上被乙酰化，例如N-?；苌锟梢詮幕鶊F(tuán)-CH2NH2和-CH2-NH-aa形成。所述?；苌锟梢允瞧銷-酰基或N-硫代?；苌?。所述酰基可以是式-CO-Ra，其中Ra如上所定義并選擇Ra以便符合所述標(biāo)準(zhǔn)。合適的酰基包括丙氨?；⒕滨；⑻於滨；?、天冬酰基、胱氨?；?、谷氨?；?、谷氨酰胺?；?、甘氨酰基、組氨?；⒘u基脯氨?；?、異亮氨酰基、亮氨?；?、賴氨酰基、甲硫氨酰基、苯丙氨?；⒏滨；?、絲氨酰基、蘇氨酰基、甲狀腺原氨?；?、色氨酰基、酪氨?；?、纈氨?；约捌渌被狨；?。優(yōu)選在氨基上將這些氨基酸酰基衍生化以便產(chǎn)生疏水性。
在一種變體中，基團(tuán)R1是衍生化的羥基亞甲基。類似的意義適用于衍生化的氨基亞甲基。
就活性化合物而言，本發(fā)明的重要方法如下 其中對(duì)于終產(chǎn)物的R5如對(duì)化合物(XXXII)所定義并且在所述原料中可以不同并且在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，R18在終產(chǎn)物中是羥基，但是可以是原料中的保護(hù)羥基并且在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，對(duì)于終產(chǎn)物的R12可以與在原料中的相同或可以在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，對(duì)于終產(chǎn)物的R21如上所定義并且如果是羥基，可以由氰基形成作為所述方法的一部分，Ra如上所定義并可以進(jìn)一步?；鳛樗龇椒ǖ囊徊糠忠员愕玫骄哂腥缢龅孽；疪a基團(tuán)的終產(chǎn)物。
在原料中R5優(yōu)選乙?；蚱渌〉孽；⑶以诜磻?yīng)中不起變化。在原料中R18優(yōu)選羥基并且在反應(yīng)中不起變化。在原料中R12優(yōu)選-NCH3并且在反應(yīng)中不起變化。終產(chǎn)物的R21如上所定義并且假定羥基可以由氰基形成作為所述方法的一部分。在最終產(chǎn)物中Ra優(yōu)選如在有關(guān)對(duì)式(XXIII)的化合物中所定義。
本發(fā)明的另一個(gè)重要方法包括以下反應(yīng) 本發(fā)明的另一個(gè)重要方法包括以下反應(yīng) 本發(fā)明的另一個(gè)重要方法包括以下反應(yīng)，其中基團(tuán)R1是可以轉(zhuǎn)化為羥基亞甲基的氨基亞甲基。
本發(fā)明的另一個(gè)重要方法包括以下反應(yīng)，其中具有R1是羥基亞甲基的化合物可以與式(XIX)的試劑反應(yīng) 其中Fu表示被保護(hù)的官能團(tuán)，Prot3是保護(hù)基團(tuán)，虛線表示任選的雙鍵。
本發(fā)明的另一個(gè)重要方法包括用于制備式(XVI)的21-氰基化合物的反應(yīng)，其包括使式(XV)的化合物 其中R1、R5、R8、R14a、R14b、R15和R18如上所定義和R21是羥基，與氰化物離子源反應(yīng)，得到所需的21-氰基化合物。
另外，也設(shè)想利用其它含有親核體的化合物制備式(XVI)的類似化合物的方法，其中21-位由另一個(gè)親核基團(tuán)21-Nuc基團(tuán)保護(hù)。例如在21-位上具有烷基氨基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通過(guò)其中R21是羥基的式(XV)的化合物與合適的烷基胺反應(yīng)制備。在21-位上具有烷硫基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物也可以通過(guò)其中R21是羥基的式(XV)的化合物與合適的鏈烷硫醇反應(yīng)制備。或者，在21-位上具有α-羰基烷基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通過(guò)其中R21是羥基的式(XV)的化合物與合適的羰基化合物，特別是在堿存在下反應(yīng)制備。其它合成途徑適用于制備其它21-Nuc化合物。
本發(fā)明另一個(gè)重要的反應(yīng)涉及處理本發(fā)明的21-氰基產(chǎn)物以便形成21-羥基化合物。這些化合物具有重要的體內(nèi)性質(zhì)。
實(shí)施例實(shí)施例1 向2(21.53g，39.17ml)的乙醇(200ml)溶液中加入叔-丁氧基羰基酐(7.7g，35.25ml)并將該混合物在23℃下攪拌7小時(shí)。然后將反應(yīng)物在真空中濃縮并將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯6∶4)純化，得到14(20.6 g，81％)，為黃色固體。Rf0.52(乙酸乙酯∶CHCl35∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.49(s，1H)，6.32(bs，1H)，5.26(bs，1H)，4.60(bs，1H)，4.14(d，J＝2.4Hz，1H)，4.05(d，J＝2.4Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.81(d，J＝4.8Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.34(br d，J＝7.2Hz，1H)，3.18-3.00(m，5H)，2.44(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，1.82(s，3H)，1.80-1.65(m，1H)，1.48(s，9H)，0.86(d，J＝5.7Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.5，180.8，172.7，155.9，154.5，147.3，143.3，141.5，135.3，130.4，129.2，127.5，120.2，117.4，116.9，80.2，60.7，60.3，58.5，55.9，55.8，54.9，54.4，50.0，41.6，40.3，28.0，25.3，24.0，18.1，15.6，8.5。ESI-MS m/z對(duì)于C34H43N5O8計(jì)算值649.7，實(shí)測(cè)值(M+H)+650.3。實(shí)施例2 在0℃下，向攪拌的14(20.6g，31.75ml)的CH3CN(159ml)溶液中加入二異丙基乙胺(82.96ml，476.2ml)、甲氧基亞甲基溴(25.9ml，317.5ml)和二甲基氨基吡啶(155mg，1.27ml)。將該混合物在23℃下攪拌24小時(shí)。用0.1 N HCl水溶液(750ml)將該反應(yīng)物在0℃下猝滅(pH＝5)并用CH2Cl2(2×400ml)萃取。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度己烷∶乙酸乙酯4∶1至己烷∶乙酸乙酯3∶2)純化，得到15(17.6g，83％)為黃色固體。Rf0.38(己烷∶乙酸乙酯3∶7)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，5.35(bs，1H)，5.13(s，2H)，4.50(bs，1H)，4.25(d，J＝2.7Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.84(bs，1H)，3.82-3.65(m，1H)，3.69(s，3H)，3.56(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.20-3.00(m，5H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.23(s，3H)，1.85(s，3H)，1.73-1.63(m，1H)，1.29(s，9H)，0.93(d，J＝5.1Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.4，180.9，172.4，155.9，154.5，149.0，148.4，141.6，135.1，131.0，129.9，127.6，124.4，123.7，117.3，99.1，79.3，60.7，59.7，58.4，57.5，56.2，55.9，55.0，54.2，50.0，41.5，39.9，28.0，25.2，24.0，18.1，15.6，8.5。ESI-MS m/z對(duì)于C36H47N5O9計(jì)算值693.8，實(shí)測(cè)值(M+H)+694.3。實(shí)施例3 在0℃下，向含有15(8g，1.5ml)的甲醇(1.61)的燒瓶中加入1M氫氧化鈉水溶液(3.21)。在此溫度下將該反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，然后用6MHCl猝滅至pH＝5。將該混合物用乙酸乙酯(3×11)萃取并將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度CHCl3到CHCl3∶乙酸乙酯2∶1)純化，得到16(5.3mg，68％)。Rf0.48(CH3CN∶H2O 7∶3，RP-C18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，5.43(bs，1H)，5.16(s，2H)，4.54(bs，1H)，4.26(d，J＝1.8Hz，1H)，4.04(d，J＝2.7Hz，1H)，3.84(bs，1H)，3.80-3.64(m，1H)，3.58(s，3H)，3.41-3.39(m，1H)，3.22-3.06(m，5H)，2.49(d，J＝18.6Hz，1H)，2.35(s，3H)，2.30-2.25(m，1H)，2.24(s，3H)，1.87(s，3H)，1.45-1.33(m，1H)，1.19(s，9H)，1.00(br d，J＝6.6Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ184.9，180.9，172.6，154.7，151.3，149.1，148.6，144.7，132.9，131.3，129.8，124.5，123.7，117.3，116.8，99.1，79.4，59.8，58.6，57.7，56.2，55.6，54.9，54.5，50.1，41.6，40.1，28.0，25.3，24.4，18.1，15.7，8.0。ESI-MS m/z對(duì)于C35H45N5O9計(jì)算值679.7，實(shí)測(cè)值(M+H)+680.3。實(shí)施例4 向化合物16(1.8g，2.64ml)的DMF(221ml)的脫氣溶液中加入10％Pd/C(360mg)并在H2(常壓)下攪拌45分鐘。將該反應(yīng)物在氬氣氛下經(jīng)硅藻土過(guò)濾到含有無(wú)水Cs2CO3(2.58g，7.92ml)的燒瓶中。然后加入溴氯甲烷(3.40ml，52.8ml)，將該瓶密封并在100℃下攪拌2小時(shí)。將該反應(yīng)物冷卻，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2洗滌。將有機(jī)層濃縮并干燥(硫酸鈉)得到17，為棕色油狀物，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而在下一步中使用。Rf0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5，SiO2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.68(s，1H)，6.05(bs，1H)，5.90(s，1H)，5.79(s，1H)，5.40(bs，1H)，5.31-5.24(m，2H)，4.67(d，J＝8.1Hz，1H)，4.19(d，J＝2.7Hz，1H)，4.07(bs，1H)，4.01(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.67(s，3H)，3.64-2.96(m，5H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(s，3H)，2.01-1.95(m，1H)，1.28(s，9H)，0.87(d，J＝63Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.1，162.6，154.9，149.1，145.7，135.9，130.8，130.7，125.1，123.1，117.8，100.8，99.8，76.6，59.8，59.2，57.7，57.0，56.7，55.8，55.2，49.5，41.6，40.1，36.5，31.9，31.6，29.7，28.2，26.3，25.0，22.6，18.2，15.8，14.1，8.8。ESI-MS m/z對(duì)于C36H47N5O9計(jì)算值693.34，實(shí)測(cè)值(M+H)+694.3。實(shí)施例5 在0℃下，向含有17(1.83g，2.65ml)的DMF(13ml)溶液的燒瓶中加入Cs2CO3(2.6g，7.97ml)和烯丙基溴(1.15ml，13.28ml)。將得到的混合物在23℃下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮(硫酸鈉)。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，CHCl3∶乙酸乙酯1∶4)純化，得到18(1.08mg，56％)為白色固體。Rf0.36(CHCl3∶乙酸乙酯1∶3)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.70(s，1H)，6.27-6.02(m，1H)，5.94(s，1H)，5.83(s，1H)，5.37(dd，J1＝1.01Hz，J2＝16.8Hz，1H)，5.40(bs，1H)，5.25(dd，J1＝1.0Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.91(bs，1H)，4.25-4.22(m，1H)，4.21(d，J＝2.4Hz，1H)，4.14-4.10(m，1H)，4.08(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.59(s，3H)，3.56-3.35(m，2H)，3.26-3.20(m，2H)，3.05-2.96(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.21(s，3H)，2.09(s，3H)，1.91-1.80(m，1H)，1.24(s，9H)，0.94(d，J＝6.6Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.0，154.8，148.8，148.6，148.4，144.4，138.8，133.7，130.9，130.3，125.1，124.0，120.9，117.8，117.4，112.8，112.6，101.1，99.2，73.9，59.7，59.3，57.7，56.9，56.8，56.2，55.2，40.1，34.6，31.5，28.1，26.4，25.1，22.6，18.5，15.7，14.0，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C39H51N5O9計(jì)算值733.4，實(shí)測(cè)值(M+H)+734.4。實(shí)施例6 向18(0.1g，0.137ml)的二噁烷(2ml)溶液中加入4.2 M HCl/二噁烷(1.46ml)并將該混合物在23℃下攪拌1.2小時(shí)。將該反應(yīng)物在0℃下用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅并用乙酸乙酯(2×70ml)萃取。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并在真空中濃縮，得到19(267mg，95％)，為白色固體，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而在下一步中使用。Rf0.17(乙酸乙酯∶甲醇10∶1，SiO2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.49(s，1H)，6.12-6.00(m，1H)，5.94(s，1H)，5.86(s，1H)，5.34(dd，J＝1.0Hz，J＝17.4Hz，1H)，5.25(dd，J＝1.0Hz，J＝10.2Hz，1H)，4.18-3.76(m，5H)，3.74(s，3H)，3.71-3.59(m，1H)，3.36-3.20(m，4H)，3.01-2.90(m，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，1.97-1.86(m，1H)，0.93(d，J＝8.7Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ175.5，148.4，146.7，144.4，142.4，138.9，133.7，131.3，128.3，120.8，117.9，117.4，113.8，112.4，101.1，74.2，60.5，59.1，56.5，56.1，56.3，56.0，55.0，50.5，41.6，39.5，29.5，26.4，24.9，21.1，15.5，9.33。ESI-MS m/z對(duì)于C32H39N5O6計(jì)算值589，實(shí)測(cè)值(M+H)+590。實(shí)施例7 向19(250mg，0.42ml)的CH2Cl2(1.5ml)溶液中加入異硫氰酸苯酯(0.3ml，2.51ml)并將該混合物在23℃下攪拌1小時(shí)。將該反應(yīng)物在真空中濃縮并將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度己烷到5∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到20(270mg，87％)為白色固體。Rf0.56(CHCl3∶乙酸乙酯1∶4)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.00(bs，1H)，7.45-6.97(m，4H)，6.10(s，1H)，6.08-6.00(m，1H)，5.92(s，1H)，5.89(s，1H)，5.82(s，1H)，5.40(dd，J＝1.5 Hz，J＝17.1Hz，1H)，3.38(bs，1H)，5.23(dd，J＝1.5Hz，J＝10.5Hz，1H)，4.42-4.36(m，1H)，4.19-4.03(m，5H)，3.71(s，3H)，3.68-3.17(m，4H)，2.90(dd，J＝7.8Hz，J＝18.3Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.12(s，3H)，2.10(s，3H)，1.90(dd，J＝12.3Hz，J＝16.5Hz，1H)，0.81(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.4，171.6，148.6，146.8，144.3，142.7，138.7，136.2，133.6，130.7，129.8，126.6，124.2，124.1，120.9，120.5，117.7，117.4，116.7，112.6，112.5，101.0，74.0，60.6，59.0，57.0，56.2，56.1，55.0，53.3，41.4，39.7，26.3，24.8，18.3，15.5，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C39H44N6O6S計(jì)算值724.8，實(shí)測(cè)值(M+H)+725.3。實(shí)施例8 向20(270mg，0.37ml)的二噁烷(1ml)溶液中加入4.2 N HCl/二噁烷(3.5ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌30分鐘。然后加入乙酸乙酯(20ml)和H2O(20ml)并將該有機(jī)層潷去。在0℃下，將含水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)堿化(pH＝8)，然后用CH2Cl2(2×50ml)萃取。干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)萃取物，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇5∶1)純化，得到21(158mg，82％)為白色固體。Rf0.3(乙酸乙酯∶甲醇1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，6.12-6.03(m，1H)，5.91(s，1H)，5.85(s，1H)，5.38(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.24(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.5Hz，1H)，4.23-4.09(m，4H)，3.98(d，J＝2.1Hz，1H)，3.90(bs，1H)，3.72(s，3H)，3.36-3.02(m，5H)，2.72-2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18.0Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.22(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.4，146.7，144.4，142.8，138.8，133.8，130.5，128.8，121.5，120.8，118.0，117.5，116.9，113.6，112.2，101.1，74.3，60.7，59.9，58.8，56.6，56.5，55.3，44.2，41.8，29.7，26.5，25.7，15.7，9.4。ESI-MS m/z對(duì)于C29H34N4O5計(jì)算值518.3，實(shí)測(cè)值(M+H)+519.2。實(shí)施例9 在-10℃下，向21(0.64g，1.22ml)的CH2Cl2(6.13ml)溶液中加入吡啶(0.104ml，1.28ml)和氯甲酸2，2，2-三氯代乙基酯(0.177ml，1.28ml)。將該混合物在此溫度下攪拌1小時(shí)，然后經(jīng)加入0.1 N HCl(10ml)將該反應(yīng)物猝滅并用CH2Cl2(2×10ml)萃取。經(jīng)硫酸鈉將有機(jī)層干燥并在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到22(0.84g，98％)，為白色泡沫狀固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，6.10-6.00(m，1H)，6.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.37(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，4.60(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.10(m，4H)，4.19(d，J＝12Hz，1H)，4.02(m，2H)，3.75(s，3H)，3.37-3.18(m，5H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.26(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.5，146.7，144.5，142.8，139.0，133.8，130.7，128.7，121.3，120.8，117.8，117.7，116.8，112.7，101.2，77.2，74.3，60.7，59.9，57.0，56.4，55.3，43.3，41.7，31.6，26.4，25.3，22.6，15.9，14.1，9.4。ESI-MS m/z對(duì)于C32H35Cl3N4O7計(jì)算值694.17，實(shí)測(cè)值(M+H)+695.2。實(shí)施例10 在0℃下，向22(0.32g，0.46ml)的CH3CN(2.33ml)溶液中加入二異丙基乙胺(1.62ml，9.34ml)、溴代甲基甲醚(0.57ml，7.0ml)和二甲基氨基吡啶(6mg，0.046ml)。將該混合物在30℃下加熱10小時(shí)。然后將該反應(yīng)物用二氯甲烷(30ml)稀釋并倒入pH＝5的HCl水溶液(10ml)中。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下除去溶劑得到殘余物，將其經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)純化，得到23(0.304g，88％)，為白色泡沫狀固體。Rf0.62(己烷∶乙酸乙酯1∶3)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，6.10(m，1H)，5.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.88(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.61(d，J＝12Hz，1H)，4.55(t，J＝6.6Hz，1H)，4.25(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.11(m，4H)，4.03(m，2H)，3.72(s，3H)，3.58(s，3H)，3.38-3.21(m，5H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.65(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.23(s，3H)，2.12(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.6，148.4，144.5，139.0，133.6，130.6，130.1，125.07，124.7，124.0，121.1，117.7，112.6，101.2，99.2，77.2，74.4，74.1，59.8，59.8，57.7，57.0，56.8，56.68，55.3，43.2，41.5，26.4，25.2，15.9，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C34H39Cl3N4O8計(jì)算值738.20，實(shí)測(cè)值(M+H)+739.0。實(shí)施例11 向23(0.304g，0.41ml)的90％乙酸水溶液(4ml)的懸浮液中加入鋅粉(0.2g，6.17ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌7小時(shí)。將該混合物經(jīng)用CH2Cl2洗滌的硅藻土墊過(guò)濾。用飽和碳酸氫鈉水溶液(pH＝9)(15ml)洗滌有機(jī)層并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下除去溶劑得到24(0.191g，83％)，為白色固體。Rf0.3(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.68(s，1H)，6.09(m，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.83(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.25(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.22-4.09(m，3H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.69(s，3H)，3.57(s，3H)，3.37-3.17(m，3H)，3.07(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.19(s，3H)，2.17(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.5，148.2，144.3，138.7，133.7，130.7，129.9，125.0，123.9，121.3，117.9，117.5，113.6，112.0，101.0，99.2，74.0，59.8，59.7，58.8，57.6，57.0，56.2，55.2，44.2，41.5，31.5，26.4，25.6，22.5，16.7，14.0，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C31H38N4O6計(jì)算值562.66，實(shí)測(cè)值(M+H)+563.1。實(shí)施例12 在0℃下向24(20mg，0.035ml)的H2O(0.7ml)和THF(0.7ml)溶液中加入NaNO2(12mg，0.17ml)和90％AcOH水溶液(0.06ml)并將該混合物在0℃下攪拌3小時(shí)。用CH2Cl2(5ml)稀釋后，用水(1ml)洗滌有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)純化，得到25(9.8mg，50％)為白色固體。Rf0.34(己烷∶乙酸乙酯1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.71(s，1H)，6.11(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.42(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.28(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.26-4.09(m，3H)，4.05(d，J＝2.4Hz，1H)，3.97(t，J＝3.0Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.67-3.32(m，4H)，3.58(s，3H)，3.24(dd，J1＝2.7Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.12(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.51(d，J＝18Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(s，3H)，1.83(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.7，148.4，138.9，133.7，131.1，129.4，125.1，123.9，120.7，117.6，117.5，113.2，112.3，101.1，99.2，74.0，63.2，59.8，59.7，57.9，57.7，57.0，56.5，55.2，41.6，29.6，26.1，25.6，22.6，15.7，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C31H37N3O7計(jì)算值563.64，實(shí)測(cè)值(M+H)+564.1。實(shí)施例13 在23℃下將原料(2.0g，5.90ml)加入到氫化鈉(354mg，8.86ml)的THF(40ml)懸浮液中，隨后在23℃下將所述懸浮液用氯甲酸烯丙基酯(1.135ml，8.25ml)處理，然后回流3小時(shí)。將該懸浮液冷卻，過(guò)濾，將該固體用乙酸乙酯(100ml)洗滌并濃縮濾液。將油性粗制物用己烷(100ml)研磨并保持在4℃過(guò)夜。以后，將溶劑潷去并用CH2Cl2(20ml)處理所述淺黃色淤漿，用己烷(100ml)使其沉淀。10分鐘后，再潷去溶劑。重復(fù)所述操作直至出現(xiàn)白色固體。將所述白色固體過(guò)濾并干燥，得到化合物29(1.80g，65％)，為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(d，J＝7.5Hz，2H)，7.62(d，J＝6.9Hz，2H)，7.33(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30(t，J＝6.3Hz，2H)，5.71(d，J＝7.8Hz，1H)，4.73(d，J＝7.8Hz，2H)，4.59(m，1H)，4.11(t，J＝6.0Hz，1H)，3.17(dd，J＝6.0Hz，J＝2.7Hz，2H)，3.20(dd，J＝5.4Hz，J＝2.1Hz，2H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ173.6，152.7，144.0，139.7，137.8，126.0，125.6，123.4，118.3，73.4，52.4，45.5，35.8，33.7。ESI-MS m/z對(duì)于C20H18Cl3NO4S計(jì)算值474.8，實(shí)測(cè)值(M+Na)+497.8。實(shí)施例14 將化合物25(585mg，1.03ml)和化合物29(1.47mg，3.11ml)的混合物與無(wú)水甲苯(3×10ml)共沸。在23℃下，向25和29的無(wú)水CH2Cl2(40ml)溶液中加入DMAP(633mg，5.18ml)和EDC.HCl(994mg，5.18ml)。將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌3小時(shí)。將該混合物分配在飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)之中并分離各層。用CH2Cl2(50ml)洗滌含水層。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將粗制物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷1∶3)純化，得到30(1.00g，95％)，為淺乳黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(m，2H)，7.52(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，2H)，6.65(s，1H)，6.03(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.79(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(m，1H)，5.29(dq，J＝10.3Hz，J＝1.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.73(d，J＝11.9Hz，1H)，4.66(d，J＝11.9Hz，1H)，4.53(m，1H)，4.36-3.96(m，9H)，3.89(t，J＝6.4Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.55(s，3H)，3.33(m，1H)，3.20(m，2H)，2.94(m，3H)，2.59(m，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.83(dd，J＝16.0Hz，J＝11.9Hz，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ169.7，154.0，148.8，148.4，145.7，144.5，140.9，139.0，133.7，130.9，130.6，127.6，127.0，124.8，124.6，124.1，120.8，119.9，118.2，117.7，117.3，112.7，112.1，101.3，99.2，74.7，73.9，64.4，59.8，57.7，57.0，56.8，55.4，53.3，46.7，41.4，36.5，34.7，31.5，26.4，24.9，22.6，15.7，14.0，9.1。ESI-MS m/z對(duì)于C51H53Cl3N4O10S計(jì)算值1020.4，實(shí)測(cè)值(M+H)+1021.2。實(shí)施例15 于23℃，向30(845mg，0.82ml)、乙酸(500mg，8.28ml)和(PPh3)2PdCl2(29mg，0.04ml)的無(wú)水CH2Cl2(20ml)溶液中滴加入BuaSnH(650mg，2.23ml)。將該反應(yīng)混合物在此溫度下攪拌15分鐘，冒泡。將粗制物用水(50ml)猝滅并用CH2Cl2(3×50ml)萃取。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將粗制物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷梯度從1∶5到1∶3)純化，得到31(730mg，90％)，為淺乳黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(m，2H)，7.56(m，2H)，7.37(m，2H)，7.30(m，2H)，6.65(s，1H)，5.89(s，1H)，5.77(s，1H)，5.74(s，1H)，5.36(d，J＝5.9Hz，1H)，5.32(d，J＝5.9Hz，1H)，5.20(d，J＝9.0Hz，1H)，4.75(d，J＝12.0Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.48(d，J＝11.9Hz，1H)，4.08(m，4H)，3.89(m，1H)，3.86(t，J＝6.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.69(s，3H)，3.38(m，1H)，3.25(m，1H)，3.02-2.89(m，4H)，2.67(s，1H)，2.61(s，1H)，2.51(dd，J＝14.3Hz，J＝4.5Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，1.95(s，3H)，1.83(m，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.2，152.5，148.1，146.2，144.4，144.3，143.3，139.6，134.6，129.7，129.6，126.2，125.6，123.4，123.3，121.6，118.5，116.3，110.7，110.2，105.1，99.4，98.5，75.2，73.3，61.7，58.4，57.9，56.3，56.1，55.1，54.7，53.9，51.9，45.2，40.1，35.6，33.3，24.8，23.3，14.5，7.3。ESI-MS m/z對(duì)于C48H49Cl3N4O10S計(jì)算值980.3，實(shí)測(cè)值(M+H)+981.2。實(shí)施例16 保持溫度在-10℃，通過(guò)導(dǎo)管向31(310mg，0.32ml)的無(wú)水CH2Cl2(15ml)溶液中加入70％苯亞硒酸酐(165mg，0.32ml)的無(wú)水CH2Cl2(7ml)溶液。將該反應(yīng)混合物在-10℃下攪拌5分鐘。在此溫度下加入飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)。再用CH2Cl2(40ml)洗滌含水層。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將粗制物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷梯度從1∶5到1∶1)純化，得到32(287mg，91％，HPLC91.3％)，為淺乳黃色固體并作為兩種異構(gòu)體的混合物(65∶35)，其用于下一步驟中。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(異構(gòu)體的混合物)7.76(m，4H)，7.65(m，4H)，7.39(m，4H)，7.29(m，4H)，6.62(s，1H)，6.55(s，1H)，5.79-5.63(m，6H)，5.09(s，1H)，5.02(d，J＝6.0 Hz，1H)，4.99(d，J＝6.0 Hz，1H)，4.80-4.63(m，6H)，4.60(m，1H)，4.50(m，1H)，4.38(d，J＝12.8 Hz，J＝7.5 Hz，1H)，4.27(dd，J＝12.8 Hz，J＝7.5 Hz，1H)，4.16-3.90(m，10H)，3.84(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(s，3H)，3.49(s，3H)，3.33-2.83(m，14H)，2.45-2.18(m，2H)，2.21(s，6H)，2.17(s，6H)，1.77(s，6H)，1.67(m，2H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ(異構(gòu)體的混合物)168.6，168.4，158.6，154.8，152.8，152.5，147.3，147.2，146.8，144.1，144.0，140.8，139.7，137.1，129.8，129.3，128.4，128.7，126.5，125.5，123.7，123.6，123.5，123.4，122.2，121.3，118.3，115.8，115.5，110.2，106.9，103.5，103.2，100.1，99.6，97.9，97.7，93.8，73.4，70.9，69.2，64.9，62.5，59.3，58.9，58.4，56.7，56.3，56.2，55.4，55.2，55.1，54.9，54.7，54.3，54.1，53.8，52.8，45.5，40.5，40.0，39.8，35.8，35.5，33.9，33.7，30.1，28.8，24.2，24.1，21.2，14.5，14.4，12.7，6.0，5.7。ESI-MS m/z對(duì)于C48H49Cl3N4O11S計(jì)算值996.3，實(shí)測(cè)值(M+H)+997.2。實(shí)施例17 將反應(yīng)燒瓶在火焰上干燥兩次，抽真空/用氬氣清洗數(shù)次并保持在氬氣氛下反應(yīng)。在-78℃下，向DMSO(39.1ml，0.55ml，5當(dāng)量)的無(wú)水CH2Cl2(4.5ml)溶液中滴加入三氟甲磺酸酐(37.3ml，0.22ml，2當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌20分鐘，然后在-78℃下通過(guò)導(dǎo)管加入32(110mg，0.11ml，HPLC91.3％)的無(wú)水CH2Cl2(1ml用于一起加入，0.5ml用于洗滌)溶液。在加入過(guò)程中兩個(gè)燒瓶中的溫度保持在-78℃下并且顏色由黃色轉(zhuǎn)變到棕色。將該反應(yīng)混合物在-40℃下攪拌35分鐘。在此時(shí)間內(nèi)所述溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)樯罹G色。此后，滴加入ipr2NEt(153ml，0.88ml，8當(dāng)量)并將反應(yīng)混合物保持在0℃下45分鐘，在此期間所述溶液顏色轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣?。然后滴加入?丁醇(41.6ml，0.44ml，4當(dāng)量)和2-叔-丁基-1，1，3，3-四甲基胍(132.8ml，0.77ml，7當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌40分鐘。以后，滴加入乙酐(104.3ml，1.10ml，10當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物保持在23℃下1小時(shí)以上。然后將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20ml)稀釋并用飽和NH4Cl水溶液(50ml)、碳酸氫鈉(50ml)和氯化鈉(50ml)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(洗脫液乙酸乙酯/己烷梯度從1∶3到1∶2)純化，得到33(54mg，58％)，為淺黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.20(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3 Hz，1H)，5.03(m，1H)，4.82(d，J＝12.2Hz，1H)，4.63(d，J＝12.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.35-4.17(m，4H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.45(m，2H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(m，2H)，2.03(s，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.5，167.2，152.7，148.1，147.1，144.5，139.6，139.1，130.5，129.0，123.7，123.5，123.3，118.8，116.5，112.1，100.6，97.8，73.3，60.5，59.4，59.2，58.3，57.6，57.4，56.1，53.3，53.1，40.6，40.0，31.0，22.2，18.9，14.4，8.1。ESI-MS m/z對(duì)于C36H39Cl3N4O11S計(jì)算值842.1，實(shí)測(cè)值(M+H)+843.1。實(shí)施例18 在23℃下，向33(12mg，0.014ml)的干燥二氯甲烷(1.2ml)和HPLC級(jí)的乙腈(1.2ml)溶液中加入碘化鈉(21mg，0.14ml)和新鮮蒸餾(經(jīng)氫化鈣在常壓下)的三甲基硅烷基氯(15.4mg，0.14ml)。該反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)化為橙色。15分鐘后，用二氯甲烷(10ml)將所述溶液稀釋并用新鮮Na2S2O4的水飽和溶液(3×10ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。得到化合物34(13mg，定量的)，為淺黃色固體，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.27(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3Hz，1H)，5.03(d，J＝11.9Hz，1H)，4.82(d，J＝12.2Hz，1H)，4.63(d，J＝13.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.34(m，1H)，4.27(bs，1H)，4.18(m，2H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.44(m，1H)，3.42(m，1H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.03(s，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C34H35N4O10S計(jì)算值798.1，實(shí)測(cè)值(M+H)+799.1。實(shí)施例19 在23℃下，向34(13mg，0.016ml)的乙酸/H2O混合物(90∶10，1ml)溶液中加入鋅粉(5.3mg，0.081ml)。將該反應(yīng)混合物在70℃下加熱6小時(shí)。此后，冷卻至23℃，用CH2Cl2(20ml)稀釋并用飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml)和Et3N水溶液(15ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物經(jīng)采用硅膠-NH2的快速柱層析(洗脫液乙酸乙酯/己烷梯度從0∶100到50∶50)純化，得到35(6.8mg，77％，對(duì)于兩個(gè)步驟)，為淺黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，6.03(dd，J＝1.3Hz，J＝26.5Hz，2H)，5.75(bs，1H)，5.02(d，J＝11.6Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.25(m，2H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝1.9Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.40(m，2H)，3.26(t，J＝6.4Hz，1H)，2.88(m，2H)，2.30-2.10(m，2H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.18(s，3H)，2.02(s，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.1，168.4，147.8，145.4，142.9，140.8，140.1，131.7，130.2，129.1，128.3，120.4，118.3，117.9，113.8，11 1.7，101.7，61.2，59.8，59.2，58.9，54.4，53.8，54.4，41.3，41.5，34.1，23.6，20.3，15.5，9.4。ESI-MS m/z對(duì)于C31H34N4O8S計(jì)算值622.7，實(shí)測(cè)值(M+H)+623.2。實(shí)施例20 在23℃下，向36(49mg，0.08ml)和2-[3-羥基-4-甲氧基苯基]乙胺(46.2mg，0.27ml)的乙醇(2.5ml)溶液中加入硅膠(105mg)。將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌14小時(shí)。將其用己烷稀釋并倒入層析柱中(乙酸乙酯/己烷從1/3到1/1)，得到Et-770(55mg，90％)，為淺黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.60(s，1H)，6.47(s，1H)，6.45(s，1H)，6.05(s，1H)，5.98(s，1H)，5.02(d，J＝11.4Hz，1H)，4.57(bs，1H)，4.32(bs，1H)，4.28(d，J＝5.3Hz，1H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝2.1Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(d，J＝5.0Hz，1H)，3.42(m，1H)，3.10(ddd，J＝4.0Hz，J＝10.0Hz，J＝11.0Hz，1H)，2.94(m，2H)，2.79(m，1H)，2.61(m，1H)，2.47(m，1H)，2.35(m，1H)，2.32(s，3H)，2.27(s，3H)，2.20(s，3H)，2.09(m，1H)，2.04(s，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C40H42N4O10S計(jì)算值770.7，實(shí)測(cè)值(M+H)+771.2。實(shí)施例22 在23℃下，向21(22mg，0.042ml)的CH2Cl2(0.8ml)的溶液中加入鄰苯二甲酸酐(6.44mg，0.042ml)并將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌2小時(shí)。然后，加入羰基二咪唑(1mg，0.006ml)并將混合物在23℃下攪拌7小時(shí)。然后加入羰基二咪唑(5.86mg，0.035ml)并將反應(yīng)物在23℃下再攪拌17小時(shí)。用CH2Cl2(15ml)稀釋該溶液并用0.1 N HCl(15ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)純化，得到27(26.4mg，96％)，為白色固體。RF0.58(乙酸乙酯)。1H NMR(300MHz，CDCl3)7.73-7.64(m，4H)，6.40(s，1H)，6.12-6.01(m，1H)，5.63(s，1H)，5.58(d，J＝1.5Hz，1H)，5.37(dd，J1＝1.8 Hz，J2＝17.4Hz)，5.23(dd，J1＝1.8 Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.12(d，J＝1.5Hz，1H)，4.22-4.15(m，3H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.68(s，3H)，3.59-3.55(m，2H)，3.35(d，J＝8.1Hz，1H)，3.27-3.16(m，2H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.64(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.09(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ167.7，148.9，146.4，144.2，142.6，139.5，134.0，133.5，132.0，131.0，128.3，123.0，121.3，120.9，118.1，117.5，116.8，113.6，112.4，100.8，74.5，60.6，60.5，57.7，56.6，55.6，55.5，42.3，41.7，26.6，25.5，15.9，9.46。ESI-MS m/z對(duì)于C37H35N4O7計(jì)算值648.79，實(shí)測(cè)值(M+H)+649.3。實(shí)施例23 在23℃下，向27(26mg，0.041ml)的CH2Cl2(11ml)的溶液中加入乙酸(11ml)、(PPh3)2PdCl2(2.36mg)和Bu3SnH(28ml，0.10ml)。在此溫度下攪拌2小時(shí)后，將該反應(yīng)物傾入快速柱(SiO2，梯度己烷到己烷∶乙酸乙酯2∶1)中，得到28(24.7mg，99％)，為白色固體。Rf0.33(己烷∶乙酸乙酯2∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75-7.70(m，2H)，7.69-7.65(m，2H)，6.39(s，1H)，5.82(bs，1H)，5.50(d，J＝1.5Hz，1H)，5.0(d，J＝1.5Hz，1H)，4.45(bs，1H)，4.23-4.19(m，2H)，4.10-4.09(m，1H)，3.73(s，3H)，3.60-3.48(m，2H)，3.36-3.33(m，1H)，3.26-3.20(m，1H)，3.14-3.08(m，1H)，3.98(d，J＝14.4Hz，1H)，2.61(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝12Hz，J2＝15.3Hz)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ167.8，146.4，145.1，143.9，142.7，137.1，133.5，131.9，130.8，128.4，122.9，120.8，118.0，116.8，114.0，113.4，106.4，100.4，60.6，60.5，57.8，56.6，55.5，55.2，42.6，41.5，25.6，25.5，15.8，8.9。ESI-MS m/z對(duì)于C34H32N4O7計(jì)算值608.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+609.2。實(shí)施例24 在0℃下，向28(357mg，0.058ml)的CH2Cl2(3ml)的溶液中加入乙酰氯(41.58ml，0.58ml)和吡啶(47.3ml，0.58ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后用CH2Cl2(15ml)稀釋該溶液并用0.1 N HCl(15ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)純化，得到phthalascidin(354mg，94％)，為白色固體。Rf0.37(CH3CN∶H2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2H)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0 Hz，J2＝15.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z對(duì)于C36H34N4O8計(jì)算值650，實(shí)測(cè)值(M+H)+651.2。實(shí)施例25 在0℃下，向17(300mg，0.432ml)的CH2Cl2(2ml)的溶液中加入乙酰氯(30.7ml，0.432ml)和吡啶(34.9ml，0.432ml)。將該反應(yīng)混合物在此溫度下攪拌2小時(shí)，然后用CH2Cl2(15ml)稀釋該溶液并用0.1NHCl(15ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑得到42(318mg，100％)，為白色固體，其沒(méi)有進(jìn)一步純化用于以下反應(yīng)。Rf0.5(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.66(s，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.42(t，J＝6.6Hz，1H)，5.07(d，J＝5.7Hz，1H)，4.98(d，J＝5.7Hz，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.11(d，J＝2.7Hz，1H)，3.98(bs，1H)，3.73-3.61(m，2H)，3.64(s，3H)，3.52-3.48(m，1H)，3.50(s，3H)，3.33(d，J＝9.6Hz，1H)，3.17-3.14(m，1H)，2.97-2.87(m，1H)，2.75-2.70(d，J＝16.8Hz，1H)，2.26(s，6H)，2.16(s，3H)，1.96(s，3H)，1.70(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.33(s，9H)，0.59(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.0，168.3，162.3，148.2，144.4，140.4，140.2，130.9，130.5，125.3，123.4，120.8，117.6，112.7，111.7，101.4，99.1，79.2，59.5，58.8，57.5，57.4，56.4，55.5，55.0，41.3，39.0，28.2，26.4，24.6，19.9，18.4，15.4，9.1。ESI-MS m/z對(duì)于C38H49N5O10計(jì)算值735.82，實(shí)測(cè)值(M+H)+736.3。實(shí)施例26 在23℃下，向42(318mg，0.432ml)的CH2Cl2(2.16ml)的溶液中加入三氟乙酸(1.33ml，17.30ml)并將反應(yīng)混合物在23℃下攪拌3.5小時(shí)。將該反應(yīng)物在0℃下用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅并用CH2Cl2(2×70ml)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇20∶1)純化，得到43(154mg，60％)為白色固體。Rf0.22(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，6.22(bs，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，4.08-4.06(m，2H)，4.01(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.49(d，J＝3.6Hz，1H)，3.33(d，J＝8.1Hz，1H)，3.26-3.22(m，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80-2.76(m，2H)，2.58(d，J＝18Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.27(s，3H)，2.21(s，3H)，1.96(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.90(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.8，169.0，146.8，144.4，142.8，140.5，140.2，131.1，128.8，120.8，120.5，117.1，112.9，111.6，101.5，60.3，59.0，56.5，56.3，55.6，55.1，50.2，41.6，39.5，26.8，26.3，24.9，20.2，15.4，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C31H37N5O7計(jì)算值591.65，實(shí)測(cè)值(M+H)+592.3。實(shí)施例27 向43(154mg，0.26ml)的CH2Cl2(1.3ml)的溶液中加入異硫氰酸苯酯(186ml，1.56ml)并將該混合物在23℃下攪拌2小時(shí)。將該反應(yīng)物在真空中濃縮并將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度己烷到己烷∶乙酸乙酯1∶1)純化，得到44(120mg，63％)為白色固體。Rf0.41(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.17(s，1H)，7.49-7.44(m，3H)，7.31-7.24(m，3H)，7.05(d，J＝6.9Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，5.52(bs，1H)，4.54(t，J＝6.6Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1 Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，2H)，3.80(bs，1H)，3.66(s，3H)，3.40(bs，1H)，3.32(d，J＝7.8Hz，1H)，3.16(d，J＝11.7Hz，1H)，2.82-2.61(m，3H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.01(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.62(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.5，171.9，168.7，146.7，144.5，142.6，140.6，140.3，136.3，131.0，129.9，128.9，126.7，124.4，120.9，120.6，117.7，116.6，112.7，111.9，101.4，60.4，58.7，57.5，56.1，55.7，55.1，53.3，41.4，38.8，26.3，24.4，20.2，18.1，15.3，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C38H42N6O7S計(jì)算值726.3，實(shí)測(cè)值(M+H)+727.3。實(shí)施例28 向44(120mg，0.165ml)的二噁烷(0.9ml)的溶液中加入5.3 NHCl/二噁烷(1.8ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌2.5小時(shí)。然后將CH2Cl2(10ml)和H2O(5ml)加入到該反應(yīng)物中并將有機(jī)層潷去。在0℃下用飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)(pH＝8)將含水層堿化，然后用CH2Cl2(2×15ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取液干燥(硫酸鈉)并在真空中濃縮，得到45(75mg，87％)為白色固體，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而在隨后反應(yīng)中使用。Rf0.23(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.43(s，1H)，5.94(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，4.10(d，J＝2.1Hz，1H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.91(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.34-3.25(m，2H)，3.05(dd，J1＝1.8Hz，J2＝8.1Hz，1H)，2.80-2.73(m，3H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.20(s，3H)，1.98(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.6Hz，J2＝16.2Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.7，146.7，144.4，142.9，140.4，130.4，128.9，121.1，120.8，117.8，116.8，113.6，11 1.5，101.4，67.6，60.5，59.8，58.4，56.6，55.8，55.3，43.6，41.8，31.3，25.6，20.2，15.6，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C28H32N4O6計(jì)算值520.58，實(shí)測(cè)值(M+H)+521.3。實(shí)施例29 向45(10mg，0.02ml)的CH2Cl2(0.4ml)的溶液中加入鄰苯二甲酸酐(2.84mg，0.02ml)并將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌2小時(shí)。然后加入羰基二咪唑(0.5mg，0.003ml)并將該混合物在23℃下攪拌7小時(shí)。然后加入羰基二咪唑(2.61mg，0.016ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌另外17小時(shí)。將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)純化，得到phthalascidin(11.7mg，93％)為白色固體。Rf0.37(CH3CN∶H2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2H)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z對(duì)于C36H34N4O8計(jì)算值650，實(shí)測(cè)值(M+H)+651.2。實(shí)施例30 在0℃下，向25(18mg，0.032ml)的DMF(0.05ml)的溶液中加入催化DMAP(0.5mg，0.004ml)、咪唑(5mg，0.08ml)和叔-丁基二苯基甲硅烷基氯(12.5ml，0.048ml)并將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌6小時(shí)。在0℃下加入水(10ml)并將含水層用己烷∶乙酸乙酯1∶10(2×10ml)萃取。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將粗制產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶1)純化，得到26(27mg，88％)為白色固體。Rf0.29(己烷∶乙酸乙酯3∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61-7.58(m，2H)，7.42-7.28(m，8H)，6.71(s，1H)，6.19-6.02(m，1H)，5.78(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.40(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.27(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.13(s，2H)，4.45(d，J＝2.4Hz，1H)，4.24(d，J＝2.1Hz，1H)，4.17-4.06(m，3H)，3.75(s，3H)，3.64(dd，J1＝2.4Hz，J2＝9.9Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.42-3.21(m，4H)，3.10(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝17.7Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.26(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-1.89(m，1H)，0.87(s，9H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.5，148.3，148.1，144.0，139.0，135.6，135.4，133.8，133.1，132.6，130.5，130.3，129.6，129.4，127.5，127.4，125.1，124.3，121.6，118.5，117.5，112.9，111.7，100.8，99.2，74.0，67.7，61.5，59.6，59.0，57.7，57.1，55.4，41.6，29.6，26.6，25.5，18.8，15.8，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C47H55N3O7Si計(jì)算值801.3，實(shí)測(cè)值(M+H)+802.3。實(shí)施例31 在23℃下，向26(7mg，0.0087ml)的CH2Cl2(0.15ml)的溶液中加入乙酸(2.5ml，0.044ml)、(PPh3)2PdCl2(0.5mg，6.96×10-4ml)和Bu3SnH(3.5ml，0.013ml)。將該反應(yīng)混合物在此溫度下攪拌1小時(shí)。將該溶液用己烷∶乙酸乙酯5∶1(0.5ml)混合物稀釋并傾入到快速柱(SiO2，梯度5∶1到1∶1己烷∶乙酸乙酯)中，得到ET-11(5mg，75％)為白色固體。Rf0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5，硅膠)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56(m，2H)，7.41-7.25(m，8H)，6.67(s，1H)，5.72(d，J＝1.0Hz，1H)，5.58(d，J＝1.0Hz，1H)，5.51(s，1H)，5.38(d，J＝5.75Hz，1H)，5.16(d，J＝5.7Hz，1H)，4.57(d，J＝2.9Hz，1H)，4.21(m，1H)，4.09(m，1H)，3.72(s，3H)，3.71(s，3H)，3.68(dd，J1＝2.1Hz，J2＝10.4Hz，1H)，3.38-3.26(m，3H)，3.11(dd，J1＝2.5Hz，J2＝15.7Hz，1H)，3.01(dd，J1＝8.9Hz，J2＝17.9Hz，1H)，2.70(d，J＝17.9Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，2.06(s，3H)，1.89(dd，J1＝12.1Hz，J2＝15.7Hz，1H)，0.9(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ149.0，147.4，145.3，144.3，136.3，135.7，135.4，133.2，130.9，130.5，129.6，129.5，127.5，125.0，118.6，112.5，112.1，105.7，100.5，99.8，68.5，61.5，59.7，58.8，57.7，56.9，56.5，55.4，41.7，26.6，26.2，25.5，18.9，15.8，14.2，8.7。ESI-MS m/z對(duì)于C44H51N3O7Si計(jì)算值761，實(shí)測(cè)值(M+H)+762。實(shí)施例32 在23℃下，將2(3.0g，5.46ml)和異硫氰酸苯酯(3.92mL，32.76ml)的CH2Cl，(27ml)的溶液在23℃下攪拌1.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物分配在CH2Cl2(10ml)和H2O(5ml)之間。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度己烷到2∶3己烷∶乙酸乙酯)純化，得到3(3.29g，88％)為黃色固體。Rf0.27(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.77(bs，1H)，7.42-7.11(m，5H)，6.65(d，1H)，6.29(s，1H)，5.6-5.5(m，1H)，4.19-4.14(m，2H)，4.08(d，1H)，3.92(s，3H)，3.87-3.65(m，6H)，3.77(s，3H)，3.37-2.98(m，8H)，2.50(d，1H)，2.31(s，3H)，2.20(s，3H)，1.96(d，1H)，1.87(s，3H)，1.81-1.75(m，1H)，0.96(d，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.7，180.9，178.9，172.0，155.7，147.1，143.2，142.4，136.0，135.1，130.5，129.9，129.3，128.5，126.9，124.4，120.2，117.4，116.3，77.1，60.9，58.6，56.2，55.8，55.0，54.6，53.5，41.7，40.3，25.1，24.5，18.4，15.8，8.7。ESI-MS m/z對(duì)于C36H40N6O6S計(jì)算值684.8，實(shí)測(cè)值(M+H)+685.2。實(shí)施例33 將3(0.143g，0.208ml)的6.5 M HCl/二噁烷(150ml)中的溶液在23℃下攪拌6小時(shí)。然后將甲苯(3ml)加入到該反應(yīng)物中并潷去有機(jī)層。將殘余物分配在飽和碳酸氫鈉水溶液(3ml)和CHCl3(3×3ml)之間。干燥有機(jī)層并濃縮，得到標(biāo)題化合物為4和6的混合物(4∶690∶10)，在放置時(shí)其緩慢結(jié)晶為6。Rf04(乙酸乙酯∶甲醇5∶1，硅膠)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，4.16(m，1H)，4.02(d，1H)，3.96(s，3H)，3.79(m，2H)，3.75(s，3H)，3.35(m，1H)，3.20-3.00(m，3H)，2.87(d，1H)，2.75(d，1H)，2.43(d，1H)，2.34(s，3H)，2.30(s，3H)，1.93(s，3H)，1.72-1.5(m，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C26H30N4O5計(jì)算值478.5，實(shí)測(cè)值(M+H)+479.2。實(shí)施例34
將3(0.143g，0.208ml)的6.5 M HCl/二噁烷(150ml)中的溶液在23℃下攪拌1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑得到殘余物，將該殘余物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/甲醇/三乙胺100∶25∶0.1)純化，得到6(80mg，83％)，為黃色固體。Rf0.26(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，5.9(bs，1H)，4.67(dd，J＝18.3Hz，J＝7.8Hz，1H)，4.24(d，1H)，4.16(s，3H)，3.93(d，J＝2.7Hz，1H)，3.8(m，2H)，3.77(s，3H)，3.45(m，2H)，3.08(dd，J＝17.9Hz，J＝3.6Hz，1H)，2.78(m，1H)，2.55(d，1H)，2.3(m，1H)，2.3(s，3H)，2.28(s，3H)，1.90(s，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ186.2，162.1，154.9，146.9，145.3，143.0，130.1，129.4，128.1，125.0，121.4，116.4，116.2，66.6，60.7，60.7，60.1，59.6，58.8，55.6，54.9，41.9，25.3，24.7，15.7，8.9。ESI-MS m/z對(duì)于C26H28N4O4計(jì)算值460.5，實(shí)測(cè)值(M+H)+461.1。實(shí)施例35 向3(2.38g，3.47ml)的二噁烷(5ml)溶液中加入5.3 M HCl的二噁烷溶液(34ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌45分鐘。然后加入Ac2O(51ml，539.5ml)并將該混合物攪拌4小時(shí)。將該反應(yīng)物于0℃冷卻并在此溫度下分配在飽和Na2CO3水溶液(300ml)和乙酸乙酯(300ml)之間。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將該殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度CH2Cl2到CH2Cl2∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到5(1.75g，97％)，為黃色固體。Rf0.53(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，5.98(bs，1H)，4.84(dd，1H)，4.17(d，1H)，4.00(d，1H)，3.99(s，3H)，3.85(bs，1H)，3.81(m，1H)，3.74(s，3H)，3.70(d，1H)，3.23(m，1H)，3.11(dd，1H)，3.09(m，1H)，2.93(m，2H)，2.44(d，1H)，3.67(s，3H)，2.25(s，3H)，1.70(s，3H)，1.60-1.50(m，2H)，1.29(s，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.9，180.8，169.9，160.2，156.2，147.0，143.1，140.4，136.1，130.6，129.6，127.9，120.4，117.2，61.0，60.7，58.6，56.1，55.7，55.1，54.3，41.8，41.1，25.7，23.9，22.2，15.7，8.7。ESI-MS m/z對(duì)于C28H32N4O6計(jì)算值520.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+521.1。實(shí)施例36 在0℃下，向5(1.75g，3.36ml)的CH2Cl2(17ml)溶液中加入二異丙基乙胺(11.71ml，67.23ml)、DMAP(20mg，0.17ml)和溴代甲基甲醚(4.11ml，50.42ml)。6小時(shí)后，在23℃下將該反應(yīng)物分配在CH2Cl2(50ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(25ml)之間。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下除去溶劑。將粗制產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN/H2O 1/1)純化，得到7(1.32g，70％)，為黃色固體。Rf0.34(ACN∶H2O 2∶3，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，5.14(s，2H)，4.82(m，1H)，4.22(d，1H)，4.00(s，3H)，4.0(m，1H)，3.83(m，2H)，3.7(s，3H)，3.58(s，3H)，3.4(m，1H)，3.2-2.95(m，6H)，2.43(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.89(s，3H)，1.5-1.4(m，2H)，1.31(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.9，180.7，169.6，156.2，148.9，148.5，140.3，136.2，131.3，130.1，127.7，124.6，123.7，117.3，99.5，99.2，60.9，59.7，58.8，57.7，56.4，55.7，55.0，54.2，51.0，41.6，41.0，40.5，25.5，23.9，22.3，19.3，15.6，14.6，8.6。ESI-MS m/z對(duì)于C30H36N4O7計(jì)算值564.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+565.3。實(shí)施例37 在0℃下，向7(0.37g，0.65ml)的甲醇(74ml)溶液中加入1M氫氧化鈉(130ml)。將該反應(yīng)物攪拌15分鐘，然后在0℃下用6M HCl猝滅至pH＝5。將該混合物用乙酸乙酯(3×50ml)萃取并將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(RP-C18，CH3CN/H2O 1/1)純化，得到8(232mg，65％)，為黃色油狀物。Rf0.5(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.75(s，1H)，5.15(s，2H)，4.86(m，1H)，4.26(d，1H)，4.01(d，1H)，3.88-3.81(m，2H)，3.70(s，3H)，3.58(s，3H)，3.39(m，1H)，3.27-3.21(m，1H)，3.18-3.08(m，2H)，3.03-2.97(m，1H)，2.47(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.90(s，3H)，1.57-1.46(m，2H)，1.33(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.3，180.6，175.9，170.1，151.5，148.9，148.6，143.3，133.7，13 1.5，129.9，124.7，123.5，117.1，117.0，99.2，59.8，58.7，57.8，56.3，55.3，54.9，54.3，41.5，40.7，29.6，25.5，24.4，22.2，20.7，15.7，8.0。ESI-MS m/z對(duì)于C29H34N4O7計(jì)算值550.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+551.2。實(shí)施例38 向化合物8(240mg，0.435ml)的DMF(30ml)脫氣溶液中加入10％Pd/C(48mg)并將該反應(yīng)物在H2(常壓)氣氛下攪拌1小時(shí)。在氬氣氛下將該反應(yīng)物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾到Schlenk管中，為無(wú)色溶液，含有無(wú)水Cs2CO3(240mg，0.739ml)。然后，加入溴氯代甲烷(0.566ml，8.71ml)。將該管密封并在90℃下攪拌3小時(shí)。將該反應(yīng)物冷卻并經(jīng)硅藻土過(guò)濾并用CH2Cl2洗滌。將有機(jī)層濃縮并干燥(硫酸鈉)，得到9為棕色油狀物，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而在下一步中使用。Rf0.36(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶5)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.71(s，3H)，5.89(d，1H)，5.81(d，1H)，5.63(bs，1H)，5.33(d，1H)，5.17(d，1H)，4.97(m，1H)，4.20(d，1H)，4.09(m，1H)，3.99(m，1H)，3.68(m，1H)，3.65(s，6H)，3.59-3.47(m，4H)，3.37-3.27(m，2H)，3.14-2.97(m，2H)，2.62(d，1H)，2.32(s，3H)，2.20(s，3H)，2.08(s，3H)，1.72(m，1H)，1.36(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ169.8，149.1，147.4，145.5，136.2，130.9，130.8，125.0，122.9，117.7，112.6，11 1.8，106.4，100.8，99.8，59.8，58.9，57.7，56.6，56.4，55.5，55.2，41.6，40.1，29.6，25.9，25.0，22.6，15.6，8.8。ESI-MS m/z對(duì)于C30H36SiN4O7計(jì)算值564.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+565.3。實(shí)施例39 在0℃下，向含有化合物9(245mg，0.435ml)的DMF(4ml)溶液的燒瓶中加入碳酸銫(425mg，1.30ml)和烯丙基溴(376ml，4.35ml)并將該混合物在23℃下攪拌1小時(shí)。將該反應(yīng)物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并分配在CH2Cl2(25ml)和H2O(10ml)之間。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并在減壓下濃縮，得到殘余物，將其經(jīng)快速柱層析(SiO2，CHCl3∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到10為黃色油狀物(113mg，43％)。Rf0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，6.3-6.0(m，1H)，5.94(d，1H)，5.87(d，1H)，5.43-5.36(m，2H)，5.22(s，2H)，5.00(m，1H)，4.22(m，1H)，4.17-4.01(m，1H)，3.98(m，2H)，3.71-3.67(m，1H)，3.69(s，3H)，3.62-3.51(m，3H)，3.58(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.31-3.26(m，3H)，3.09(dd，1H)，2.56(d，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，2.24-2.10(m，1H)，1.82-1.73(m，1H)，1.24(bs，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ169.4，148.8，148.3，139.1，133.7，130.9，130.3，125.2，120.2，117.7，113.1，112.6，101.3，99.3，74.1，59.7，59.3，57.8，57.0，56.1，56.1，55.2，41.6，41.0，40.9，29.7，26.3，22.5，15.6，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C33H40N4O7計(jì)算值604.7，實(shí)測(cè)值(M+H)+605.3。實(shí)施例40 在0℃下，向9(22mg，0.039ml)的CH2Cl2(0.2ml)的溶液中加入乙酰氯(2.79ml，0.039ml)和吡啶(3.2ml，0.039ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，得到46(22mg，93％)為白色固體。Rf0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，5.97(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝0.9Hz，1H)，5.12(d，J＝5.7Hz，2H)，5.04(d，J＝5.7Hz，1H)，4.90(t，J＝6Hz，1H)，4.17(d，J＝2.7Hz，1H)，4.05(d，J＝2.7Hz，1H)，4.01(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.57(s，3H)，3.50-3.44(m，2H)，3.38-3.36(m，1H)，3.30-3.26(m，1H)，3.00(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝12.9Hz，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.35(s，3H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.00(s，3H)，1.68(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)。ESI-MS m/z對(duì)于C32H38N4O8計(jì)算值606.67，實(shí)測(cè)值(M+H)+607.3。實(shí)施例41 向46(8mg，0.013ml)的二噁烷(0.1ml)的溶液中加入5.3 N HCl/二噁烷(0.5ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌1小時(shí)。然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，得到47(5mg，70％)為白色固體。Rf0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，4.97(bs，1H)，4.11(bs，1H)，4.04-4.02(m，2H)，3.75(s，3H)，3.65(d，J＝2.1Hz，2H)，3.56-3.30(m，2H)，3.04(dd，J1＝7.5Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80(d，J＝14.4Hz，1H)，2.59(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.33(s，3H)，1.25(s，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C30H34N4O7計(jì)算值562.61，實(shí)測(cè)值(M+H)+563.3。實(shí)施例42
在0℃下，向45(10mg，0.0192ml)的CH2Cl2(0.3ml)的溶液中加入異戊酰氯(2.34ml，0.0192ml)和吡啶(1.55ml，0.0192ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到48(11mg，95％)為白色固體。Rf0.12(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.02(t，J＝5.4Hz，1H)，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.06(d，J＝2.7Hz，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.76-3.71(m，1H)，3.86-3.28(m，3H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.55(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.84-1.68(m，2H)，1.36(d，J＝7.2Hz，2H)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.62(d，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C33H40N4O7計(jì)算值604.69，實(shí)測(cè)值(M+H)+605.3。實(shí)施例43 在0℃下，向45(10mg，0.0192ml)的CH2Cl2(0.3ml)的溶液中加入異戊酰氯(3.98ml，0.0192ml)和吡啶(1.55ml，0.0192ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到49(12.4mg，96％)為白色固體。Rf0.7(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(s，1H)，5.08(t，J＝5.4Hz，1H)，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.05(m，1H)，4.01(m，1H)，3.76(s，3H)，3.65-3.61(m，1H)，3.40-3.27(m，3H)，3.03(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.6Hz，1H)，2.78(d，J＝13.2Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.99(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.5Hz，1H)，1.73-1.42(m，4H)，1.33-1.18(m，10H)，1.03(m，2H)，0.87(t，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C38H50N4O7計(jì)算值674.83，實(shí)測(cè)值(M+H)+675.5。實(shí)施例44 在0℃下，向45(14.5mg，0.0278ml)的CH2Cl2(0.3ml)的溶液中加入反-3-三氟甲基肉桂酰氯(4.76ml，0.0278ml)和吡啶(2.25ml，0.0278ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶1)純化，得到50(18.7mg，94％)為白色固體。Rf0.64(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CH3OD)δ7.74-7.55(m，4H)，7.23(d，J＝16.0Hz，1H)，6.34(s，1H)，6.12(d，J＝16.0Hz，1H)，6.07(d，J＝0.9Hz，1H)，5.96(d，J＝0.9Hz，1H)，4.39(d，J＝2.4Hz，1H)，4.07-4.05(m，1H)，3.81(bs，1H)，3.46-3.51(m，3H)，3.42(s，3H)，3.09(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.94-2.85(m，2H)，2.74(d，J＝18.3Hz，1H)，2.38(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.80(s，3H)，1.84-1.75(m，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.7，165.3，146.5，144.7，142.6，140.6，138.0，135.9，131.0，130.9，129.1，128.6，125.8，125.7，124.5，124.4，122.7，121.2，117.8，116.5，113.0，112.0，101.7，60.4，59.1，56.5，56.4，55.6，55.3，41.8，40.3，26.6，25.1，203，15.4，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C38H37F3N4O7計(jì)算值718.72，實(shí)測(cè)值(M+H)+719.3。實(shí)施例45 在0℃下，向43(33mg，0.0557ml)的CH2Cl2(0.4ml)的溶液中加入異戊酰氯(6.79ml，0.0557ml)和吡啶(4.5ml，0.0557ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到51(34mg，91％)為白色固體。Rf0.09(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，6.10(bs，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.90(d，J＝0.9Hz，1H)，5.30(t，J＝6.0Hz，1H)，4.10-4.05(m，3H)，3.81(bs，1H)，3.74(s，3H)，3.54(bs，1H)，3.38-3.36(m，1H)，3.29-3.21(m，1H)，3.00(dd，J1＝8.0Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.00(s，3H)，1.95-1.90(m，3H)，0.87(d，J＝6.6Hz，6H)，0.76(d，J＝6.0Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C36H45N5O8計(jì)算值675.77，實(shí)測(cè)值(M+H)+676.3。實(shí)施例46 在0℃下，向43(33mg，0.0557ml)的CH2Cl2(0.4ml)的溶液中加入反-3-三氟甲基肉桂酰氯(9.52ml，0.0557ml)和吡啶(4.5ml，0.0557ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化，得到52(40mg，92％)為白色固體。Rf0.21(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.74-7.47(m，4H)，6.49(s，1H)，6.40(d，J＝15.6Hz，1H)，6.00(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.47(t，J＝6Hz，1H)，4.12-4.09(m，3H)，3.93(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.59-3.58(m，1H)，3.38(d，J＝7.8Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1 Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.79-2.78(m，1H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，6H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，1.84-1.80(m，1H)，0.85-0.84(m，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ171.9，168.8，164.4，146.9，144.6，143.0，140.5，140.5，139.3，135.7，131.1，131.0，129.4，129.1，126.0，124.1，124.0，122.4，121.1，120.7，120.6，117.7，116.9，112.8，112.0，101.6，60.6，59.3，57.1，56.3，55.9，55.2，49.0，41.7，49.9，26.5，25.1，20.2，18.4，15.7，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C41H42F3N5O8計(jì)算值789.8，實(shí)測(cè)值(M+H)+790.3。實(shí)施例47 在23℃下，向43(10mg，0.0169ml)的CH2Cl2(0.2ml)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38μl，0.0169ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌5小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)純化，得到53(10.7mg，93％)為白色固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(bs，1H)，5.32(bs，1H)，4.12(d，J＝2.1Hz，1H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.78-3.56(m，3H)，3.72(s，3H)，3.40(d，J＝8.1Hz，1H)，3.25(d，J＝9.3Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.4Hz)，J2＝18.0Hz，1H)，2.77(dd，J1＝2.1Hz，J2＝15.9Hz，1H)，2.68(d，J＝18.6Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，2.00(s，3H)，1.75(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.69(d，J＝6.3Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，168.6，156.0，147.0，144.6，143.0，140.6，140.4，131.0，129.4，120.9，120.7，117.6，116.8，112.4，112.1，101.6，60.5，59.0，57.1，56.3，55.6，55.2，48.7，41.6，39.4，26.5，24.9，20.2，17.8，15.4，9.2。ESI-MS m/z對(duì)于C33H36F3N5O8計(jì)算值687.63，實(shí)測(cè)值(M+H)+688.66。實(shí)施例48 在23℃下，向19(11mg，0.0169ml)的CH2Cl2(0.2ml)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38ml，0.0169ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌5小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1 N HCl(3ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)純化，得到54(10.7mg，93％)為白色固體。Rf0.6(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33(d，J＝6.3Hz，1H)，6.45(s，1H)，6.04(m，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.84(d，J＝1.5Hz，1H)，5.32(m，2H)，5.21(m，1H)，4.11(m，4H)，3.73(s，3H)，3.64(m，2H)，3.51(m，1H)，3.37(d，J＝7.8Hz，1H)，3.22(m，2H)，3.03(dd，1H，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.60(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.08(s，3H)，1.86(dd，J1＝12Hz，J2＝16.2Hz，1H)，0.82(d，J＝7.2Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.0，156.0，148.4，147.1，144.3，143.0，138.7，133.8，130.5，129.4，120.6，120.4，117.6，117.5，117.0，113.5，112.5，112.4，101.1，74.1，66.8，60.4，59.3，56.9，56.6，56.3，55.4，48.7，41.6，40.1，26.2，25.0，17.6，15.4，9.1。ESI-MS m/z對(duì)于C35H39F3N5O7計(jì)算值685.69，實(shí)測(cè)值(M+H)+686.3。實(shí)施例49 在23℃下，向54(100mg，0.415ml)的CH2Cl2(4ml)的溶液中加入乙酸(40ml)、(PPh3)2PdCl2(8.4mg，0.012ml)和Bu3SnH(157ml，0.56ml)。在此溫度下攪拌2小時(shí)后，將該反應(yīng)物傾入到快速柱(SiO2，梯度己烷到己烷∶乙酸乙酯2∶1)中，得到55(90mg，96％)為白色固體。Rf0.6(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.55(d，J＝7.2Hz，1H)，6.45(s，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.82(d，J＝1.2Hz，1H)，5.37(t，J＝6.0Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1Hz，1H)，4.04(d，J＝1.8Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.66-3.53(m，2H)，3.37-3.31(m，2H)，3.19-3.15(d，J＝11.7Hz，1H)，3.08-3.00(m，2H)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.04(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.84(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，156.3，147.3，144.9，144.4，143.3，136.7，130.7，129.3，120.6，117.6，117.4，114.4，112.1，107.7，101.0，85.8，60.5，59.3，56.5，56.4，56.2，55.2，48.9，41.6，40.9，25.7，25.3，18.0，15.6，8.7。ESI-MS m/z對(duì)于C32H35F3N5O7計(jì)算值645.63，實(shí)測(cè)值(M+H)+646.2。實(shí)施例50 在23℃下，向17(200mg，0.288ml)的CH2Cl2(1.44ml)的溶液中加入三氟乙酸(888ml，11.53ml)并將該反應(yīng)混合物在23℃下攪拌4小時(shí)。將該反應(yīng)物在0℃下用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅并用乙酸乙酯(2×70ml)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并在真空中濃縮，得到56(147mg，93％)為白色固體，其沒(méi)有進(jìn)一步純化而在以下反應(yīng)中使用。Rf0.19(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ6.48(s，1H)，5.88(d，J＝0.9Hz，1H)，5.81(d，J＝0.9Hz，1H)，4.35(d，J＝2.4Hz，1H)，4.15(d，J＝1.8Hz，1H)，3.99-3.98(m，1H)，3.70(s，3H)，3.52-2.96(m，7H)，2.68(d，J＝18.3Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CD3OD)δ173.2，149.1，145.6，144.9，138.0，132.2，130.6，121.4，119.6，117.4，114.3，109.2，102.5，82.3，60.4，58.4，58.3，57.8，56.6，50.1，42.3，41.6，27.8，26.2，19.5，15.5，9.8。ESI-MS m/z對(duì)于C29H35N5O6計(jì)算值549.62，實(shí)測(cè)值(M+H)+550.3。實(shí)施例51 向56(10mg，0.018ml)的CH2Cl2(0.4ml)溶液中加入異硫氰酸苯酯(13ml，0.109ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌1.5小時(shí)。將該混合物在真空中濃縮并將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度己烷到1∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到57(8mg，65％)為白色固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.88(bs，1H)，7.41-7.36(m，2H)，7.27-7.22(m，1H)，7.02-7.00(d，J＝7.8Hz，2H)，6.71(d，J＝7.2Hz，1H)，6.31(s，1H)，6.17(bs，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.55(bs，1H)，5.20-5.17(m，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.05(bs，1H)，4.02(d，J＝2.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.75-3.71(m，1H)，3.35(d，J＝7.8Hz，1H)，3.28-3.19(m，2H)，3.12-2.97(m，2H)，2.50(d，J＝18.3 Hz)，1H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.15-2.09(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.95(s，3H)，0.88(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.5，171.7，147.2，145.0，144.3，143.3，137.0，135.7，130.6，130.4，129.6，127.5，124.3，120.6，117.7，117.2，115.3，112.1，108.3，100.9，60.9，59.5，56.7，56.5，56.2，55.2，54.1，41.7，41.1，26.3，25.4，18.5，1 5.8，9.0。ESI-MS m/z對(duì)于C36H40N6O6S計(jì)算值684.81，實(shí)測(cè)值(M+H)+685.3。實(shí)施例52 在0℃下，向57(45mg，0.065ml)的CH2Cl2(0.5ml)溶液中加入乙酰氯(4.67ml，0.065ml)和吡啶(5.3ml，0.065ml)。將該反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 40∶60)純化，得到58(14mg，28％)為白色固體。Rf0.34(CH3CN∶H2O 7∶15)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ11.90(d，J＝6.6Hz，1H)，7.45-7.40(m，3H)，7.18-7.15(m，2H)，6.58(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.70(s，1H)，5.37(t，J＝4.8Hz，1H)，4.48(m，1H)，4.23(bs，1H)，4.07(bs，2H)，3.85-3.75(m，1H)，3.70(s，3H)，3.46-3.41(m，2H)，3.24-3.20(m，1H)，3.00-2.95(m，1H)，2.87-2.75(m，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.66(s，3H)，0.82(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ182.6，174.3，171.0，146.6，144.6，142.7，142.3，140.7，140.2，131.3，129.8，129.3，128.9，128.8，121.5，120.4，117.3，116.6，112.8，112.0，111.3，101.5，60.5，59.0，57.6，56.2，55.9，55.3，55.1，41.6，39.4，27.8，26.5，24.8，20.2，17.1，15.5，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C40H44N6O8S計(jì)算值768.88，實(shí)測(cè)值(M+H)+769.2。實(shí)施例53 向57(130mg，0.189ml)的二噁烷(1ml)溶液中加入5.3 N HCl/二噁烷溶液(1.87ml)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌4小時(shí)。然后向該反應(yīng)物中加入CH2Cl2(15ml)和H2O(10ml)并潷去有機(jī)層。在0℃下將含水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)堿化(pH＝8)，然后用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。將合并的有機(jī)物干燥(硫酸鈉)并在真空中濃縮，得到59(63mg，70％)為白色固體。Rf0.15(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.67(s，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.10(bs，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.25(dd，J1＝3.6 Hz，J2＝9.3Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.71-3.64(m，2H)，3.50(dd，J1＝2.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.42-3.37(m，2H)，3.16(dd，J1＝3.6Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.57(dd，J1＝9.3Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.27(s，3H)，2.11(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)。ESI-MS m/z對(duì)于C26H30N4O5計(jì)算值478.5，實(shí)測(cè)值(M+H)+479.3。實(shí)施例54 在0℃下，向43(20mg，0.0338mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入肉桂酰氯(5.63mg，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到60(22mg，90％)為白色固體。Rf0.56(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.51(s，1H)，7.50-7.47(m，2H)，7.36-7.35(m，2H)，6.43(s，1H)，6.36(brd，J＝15.9Hz，2H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(brd，J＝1.5Hz，2H)，5.42(t，J＝6.0Hz，1H)，4.12-4.07(m，3H)，3.96-3.95(m，1H)，3.73(bs，3H)，3.58(bs，2H)，3.39(d，J＝8.7Hz，1H)，3.25(d，J＝11.7Hz，1H)，3.0(dd，J1＝7.5Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.67(d，J＝16.5Hz，1H)，2.29(s，6H)，2.23(s，3H)，1.99(s，3H)，1.82(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.83(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.0，165.0，146.9，144.6，143.1，141.0，140.5，134.8，131.0，129.7，129.1，128.8，127.8，125.5，123.8，123.0，121.1，120.5，117.7，116.9，112.8，112.0，101.9，60.6，59.2，57.1，56.4，55.9，55.3，48.8，41.7，40.0，26.5，25.1，20.3，18.5，15.7，9.3。ESI-MS m/z對(duì)于C40H43N5O8計(jì)算值721.8，實(shí)測(cè)值(M+H)+722.3。實(shí)施例55 在0℃下，向45(19mg，0.0364mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入七氟代丁酰氯(5.44ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到61(11.7mg，45％)為白色固體。Rf0.76(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，6.12(bs，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.72(bs，1H)，4.13-4.11(m，2H)，4.0(d，J＝2.4Hz，1H)，3.98-3.96(m，1H)，3.73(s，3H)，3.39(d，J＝7.5Hz，1H)，3.39-3.28(m，2H)，3.09(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.80(d，J＝16.2 Hz，1H)，2.46(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.21(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H)。ESI-MS m/z對(duì)于C32H31F7N4O7計(jì)算值716.6，實(shí)測(cè)值(M+H)+717.2。實(shí)施例56 在0℃下，向43(24mg，0.04mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入丁酰氯(4.15ml，0.04mmol)和吡啶(3.28ml，0.04mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到62(24mg，90％)為白色固體。Rf0.35(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，6.10(d，J＝6.5Hz，1H)，6.0(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.11-4.06(m，3H)，3.85-3.81(m，1H)，3.75(s，3H)，3.59-3.53(m，2H)，3.38(d，J＝7.5Hz，1H)，3.27-3.22(m，1H)，3.0(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.4Hz，1H)，2.79(d，J＝15.3Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.0(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.58(q，J＝7.2Hz，2H)，0.89(t，J＝7.2Hz，3H)，0.76(d，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C35H43N5O8計(jì)算值661.64，實(shí)測(cè)值(M+H)+662.3。實(shí)施例57 在0℃下，向43(19mg，0.0364mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入肉桂酰氯(6.06mg，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到63(20.1mg，85％)為白色固體。Rf0.65(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.39-7.29(m，5H)，6.42(s，1H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.24(t，J＝6.8Hz，1H)，4.12-4.08(m，3H)，3.66-3.64(m，2H)，3.58(bs，3H)，3.36(d，J＝8.7Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，2.98(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.33(s，6H)，2.29(s，3H)，2.01(s，3H)，1.84(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)。ESI-MS m/z對(duì)于C37H38N4O7計(jì)算值650.72，實(shí)測(cè)值(M+H)+651.2。實(shí)施例58 在0℃下，向43(20mg，0.0338mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入3-氯代丙酰氯(3.22ml，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到64(20.5mg，89％)為白色固體。Rf0.32(EtOAc∶己烷5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，3H)，6.28(m，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(m，1H)，4.08-4.07(m，3H)，3.75(s，3H)，3.72-3.53(m，5H)，3.39(d，J＝8.1Hz，1H)，3.24(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝13.5Hz，1H)，2.50(t，J＝6.3Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.25(s，3H)，2.0(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝14.8Hz，1H)，0.81(d，J＝63Hz，3H)。實(shí)施例59 在0℃下，向43(19mg，0.0364mmol)的CH2Cl2(0.3ml)溶液中加入丁酰氯(3.78ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1 N HCl(5ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化，得到64(19mg，87％)為白色固體。Rf0.60(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.01(t，J＝6.4Hz，1H)，4.10-4.09(m，1H)，4.06(d，J＝2.1Hz，1H)，4.03-4.02(m，1H)，3.76(s，3H)，3.67-3.60(m，1H)，3.42-3.35(m，2H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.02(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.79(d，J＝14.1Hz，1H)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.78(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.63(s，3H)，1.53-1.46(m，2H)，1.28-1.16(m，2H)，0.68(t，J＝7.2Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C32H38N4O7計(jì)算值590.67，實(shí)測(cè)值(M+H)+591.2。實(shí)施例60 向50(31.7mg，0.044mmol)的CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)溶液中加入AgNO3(225mg，1.32mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌17小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶劑并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化，得到66(16mg，51％)為白色固體。Rf0.26(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.66-7.42(m，4H)，7.20(bs，1H)，6.44(s，1H)，5.97(b，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.76(bs，1H)，5.28(bs，1H)，4.54(bs，1H)，4.43(bs，1H)，4.00(bs，1H)，3.68-3.57(m，4H)，3.47(d，J＝3.3Hz，1H)，3.40(d，J＝11.7Hz，1H)，3.17(d，J＝6.9Hz，1H)，2.92(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.74(d，J＝17.1Hz，1H)，2.48(d，J＝18.6Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.28(s，3H)，1.99(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H)。ESI-MS m/z對(duì)于C37H38F3N3O8計(jì)算值709，實(shí)測(cè)值(M+-17)692.3。實(shí)施例61 向53(57mg，0.0828mmol)的CH3CN/H2O(1.5mL/0.5ml)溶液中加入AgNO3(650mg，3.81mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌24小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶劑并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化，得到67(28mg，50％)為白色固體。Rf0.28(EtOAc∶MeOH 10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 6.47(s，1H)，5.97(s，1H)，5.88(s，1H)，5.35(bs，1H)，4.51(bs，1H)，4.41(bs，1H)，4.12-4.05(m，1H)，4.00(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.64(bs，1H)，3.46(d，J＝3.3Hz，1H)，3.34(d，J＝11.4Hz，1H)，3.18(d，J＝7.5Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.48(d，J＝17.7Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.68(dd，J1＝12Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)。ESI-MS m/z對(duì)于C32H37F3N4O9計(jì)算值678.66，實(shí)測(cè)值(M+-17)661.2。實(shí)施例62 向48(32mg，0.0529mmol)的CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)溶液中加入AgNO3(270mg，1.58mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌24小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶劑并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化，得到68(18mg，56％)為白色固體。Rf0.40(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，5.23(d，J＝6.9Hz，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.01(d，J＝2.4Hz，1H)，3.78(m，1H)，3.77(s，3H)，3.41-3.37(m，1H)，3.17-3.15(m，1H)，2.96(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.70(d，J＝15.3Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，6H)，2.27(s，3H)，1.76-1.65(m，1H)，1.35-1.25(m，2H)，0.89-0.82(m，1H)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.58(d，J＝6.6Hz，3H)。實(shí)施例63 向51(27mg，0.04mmol)的CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)溶液中加入AgNO3(204mg，1.19mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌24小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶液并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化，得到69(10mg，38％)為白色固體。Rf0.38(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 6.48(s，1H)，6.16(bs，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.89(d，J＝1.5Hz，1H)，5.33(t，J＝6.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.40(m，1H)，4.11-4.09(m，1H)，4.00(d，J＝2.6Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.41-3.32(m，3H)，3.18(d，J＝8.4Hz，1H)，2.94(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝14.4Hz，1H)，4.45(d，J＝18.3Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.04(s，3H)，2.00-1.86(m，3H)，1.73(m，1H)，0.87(d，J＝6.3Hz，6H)。實(shí)施例64 向63(15mg，0.023mmol)的CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)溶液中加入AgNO3(118mg，0.691mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌24小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶液并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化，得到70(20.1mg，85％)為白色固體。Rf0.43(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 7.38-7.28(m，5H)，6.48(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(bs，1H)，5.38(brd，1H)，5.30(bs，1H)，4.53(m，1H)，4.42(m，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.78-3.65(m，5H)，3.46-3.40(m，2H)，3.17(d，J＝7.8Hz，1H)，2.94(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.73(d，J＝16.8Hz，1H)，2.45(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.28(s，3H)，1.97(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H)。實(shí)施例65 向65(25mg，0.042mmol)的CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)溶液中加入AgNO3(215.56mg，1.269mmol)并將該反應(yīng)物在23℃下攪拌24小時(shí)。然后在0℃下加入鹽水(10ml)和飽和NaHCO3水溶液(10ml)并將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。潷去溶液并將有機(jī)層干燥，在真空中濃縮。將殘余物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶2)純化，得到71(16mg，65％)為白色固體。Rf0.0.5(EtOAc∶MeOH 5∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.78(s，1H)，5.19(bs，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.37(bs，1H)，4.11 (brd，J＝4.8Hz，1H)，4.01(d，J＝2.1Hz，1H)，3.76(s，1H)，3.71-3.69(m，1H)，3.49-3.35(m，1H)，3.24(d，J＝13.5Hz，1H)，3.15(d，J＝9.3Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)，2.26(s，3H)，1.96(s，3H)，1.75-1.66(m，1H)，1.52-1.17(m，2H)，0.66(t，J＝7.2Hz，3H)。發(fā)酵方法實(shí)施例A將含有1％葡葡糖、0.25％牛肉膏、0.5％細(xì)菌培養(yǎng)胨、0.25％NaCl、0.8％CaCO3的接種培養(yǎng)基與微生物熒光假單胞菌的菌株A2-2的0.1％的冷凍營(yíng)養(yǎng)原液一起在27℃下、在旋轉(zhuǎn)振蕩器(25rpm)上孵育。孵育30小時(shí)后，將所述接種培養(yǎng)物加入到裝有由2％右旋糖、4％甘露糖醇、2％干釀造酵母(VitalevorBiolux，Belgium)、1％(NH4)2SO4、0.04％K2HPO4、0.8％KCl、0.001％FeCl3、0.1％L-Tyr、0.8％CaCO3、0.05％PPG-2000、0.2％消泡硅氧烷(ASSAF-100，RHODIA UK)組成的生產(chǎn)培養(yǎng)基的攪拌容器發(fā)酵罐中。在122℃下滅菌30分鐘。所接種的容積是2％(v/v)。溫度是27℃(0-16)小時(shí)，從16小時(shí)到過(guò)程結(jié)束(41小時(shí))溫度是24℃。溶解氧壓力高達(dá)25％。用稀硫酸將pH從28小時(shí)直至過(guò)程結(jié)束控制在6.0。超壓力為0.5巴。從16小時(shí)起到過(guò)程結(jié)束加入1％甘露糖醇或山梨糖醇(用于兩天的運(yùn)行)并加入2％甘露糖醇或山梨糖醇用于三天的發(fā)酵過(guò)程。
41或64小時(shí)后，必須萃取所述發(fā)酵培養(yǎng)物以便回收番紅菌素B或KCN處理澄清培養(yǎng)物以便回收氰基-番紅菌素B。實(shí)施例B從粗提物中得到氰基番紅菌素B。
將pH為6的發(fā)酵培養(yǎng)物澄清或過(guò)濾以除去固體物。用稀氫氧化鈉將澄清培養(yǎng)物的pH調(diào)節(jié)至9.5并用2∶1(v/v)乙酸乙酯、二氯甲烷或乙酸丁酯萃取兩次。在20分鐘內(nèi)進(jìn)行萃取，并使萃取液進(jìn)入攪拌容器中，該混合物的溫度維持在8-10℃。通過(guò)液-液離心將所述兩相分開(kāi)。用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)相或者冷凍，過(guò)濾以除去冰。蒸發(fā)有機(jī)相(乙酸乙酯層)直到得到油狀粗提物。
實(shí)施例C由澄清培養(yǎng)物得到氰基番紅菌素B將pH為6的發(fā)酵培養(yǎng)物澄清或過(guò)濾以除去固體物。用濃乙酸將該澄清培養(yǎng)物的pH調(diào)節(jié)到3.9。將0.5g/l KCN加入該澄清培養(yǎng)物中并在攪拌下，于20℃孵育1小時(shí)。然后，將溫度降至15℃，用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH到9.5并用2∶1.5(v/v)乙酸乙酯萃取。在20分鐘內(nèi)進(jìn)行萃取并使萃取液進(jìn)入攪拌容器內(nèi)，該混合物的溫度維持在8-10℃。通過(guò)液-液離心將所述兩相分開(kāi)。用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)相。蒸發(fā)有機(jī)相(乙酸乙酯層)直到得到油狀粗提物。該粗提物經(jīng)快速柱層析(SiO2，梯度20∶1-10∶-5∶1乙酸乙酯∶甲醇)純化定量得到化合物2，為淡黃色固體。Rf0.55(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)；tR＝19.9分[HPLC，Delta Pack C4，5μm，300 A，150×3mm，λ＝215nm，流速＝0.7ml/分，溫度＝50℃，梯度CH3CN-NaOAc水溶液(10mM)85％-70％(20分鐘)]；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.54(dd，J1＝4.4Hz，J2＝8.4Hz，1H)，6.44(s，1H)，4.12(d，J＝2.4Hz，1H)，4.04(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.87(bs，1H)，3.65(ddd，J1＝1.5Hz，J2＝8.7Hz，J3＝9.9Hz，1H)，3.35(br.d，J＝8.4Hz，1H)，3.15-2.96(m，4H)，2.92(q，J＝7.2Hz，1H)，2.47(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.18(s，3H)，1.83(s，3H)，1.64(ddd，J1＝2.7Hz，J2＝11.1Hz，J3＝14.1Hz，1H)，0.79(d，J＝7.2Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ186.0(q)，175.9(q)，156.2(q)，146.8(q)，142.8(q)，140.7(q)，136.6(q)，130.5(q)，128.8(q)，127.0(q)，120.5(s)，117.4(q)，116.5(q)，60.8(t)，60.4(s)，58.7(t)，56.2(s)，55.7(s)，54.8(s)，54.8(s)，54.4(s)，50.0(s)，41.6(t)，39.8(d)，25.2(d)，24.4(d)，21.2(t)，15.5(t)，8.4(t)。ESI-MS m/z對(duì)于C29H35N5O6計(jì)算值549.6，實(shí)測(cè)值(M+Na)+572.3。實(shí)施例D將由右旋糖(2％)、甘露醇糖(4％)、干釀造酵母(2％)、硫酸銨(1％)、磷酸氫二鉀(0.04％)、氯化鉀(0.8％)、三氯化鐵(III)六水合物(0.001％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸鈣(0.8％)、聚乙二醇2000(0.05％)和消泡劑ASSAF 1000(0.2％)組成的培養(yǎng)基(501)傾入到75l總?cè)萘康男⌒桶l(fā)酵罐中，滅菌后，用A2-2菌株(FERM BP-14)的接種培養(yǎng)基(2％)接種并在攪拌下、在27℃-24℃進(jìn)行充氣培養(yǎng)64小時(shí)(每分鐘充氣75l并以350-500rpm攪拌)。從27小時(shí)到過(guò)程結(jié)束，通過(guò)自動(dòng)供給稀硫酸控制pH。從16小時(shí)到過(guò)程結(jié)束加入2％甘露糖醇。經(jīng)離心除去細(xì)胞后，用稀氫氧化鈉將如此得到的培養(yǎng)物(451)調(diào)節(jié)到pH9.5，用25升乙酸乙酯萃取兩次。用20分鐘將該混合物在8℃下裝入攪拌容器中。通過(guò)液-液離心將兩相分離。將有機(jī)相在-20℃下冷凍并過(guò)濾除去冰，蒸發(fā)冰并蒸發(fā)直至得到40g油狀-深色-粗提物。引入氰化物基團(tuán)和純化以后，得到3.0g氰基番紅菌素B。實(shí)施例E將由右旋糖(2％)、甘露醇糖(4％)、干釀造酵母(2％)、硫酸銨(1％)、磷酸氫二鉀(0.02％)、氯化鉀(0.2％)、三氯化鐵(III)六水合物(0.001％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸鈣(0.8％)、聚乙二醇2000(0.05％)和消泡劑ASSAF 1000(0.2％)組成的培養(yǎng)基(501)傾入到75l總?cè)萘康男⌒桶l(fā)酵罐中，滅菌后，用A2-2菌株(FERM BP-14)的接種培養(yǎng)基(2％)接種并在攪拌下、在27℃-24℃進(jìn)行充氣培養(yǎng)41小時(shí)(每分鐘充氣75l并以350-500rpm攪拌)。從28小時(shí)到過(guò)程結(jié)束，通過(guò)自動(dòng)供給稀硫酸控制pH。從16小時(shí)到過(guò)程結(jié)束加入2％甘露糖醇。經(jīng)離心除去細(xì)胞后，用200ml濃乙酸將如此得到的培養(yǎng)物(451)調(diào)節(jié)到pH3.9。加入25g 97％的氫化鉀，于20℃攪拌1小時(shí)后，用1500ml 10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH到9.5。然后，用35升乙酸乙酯萃取。用20分鐘將該混合物在8℃下裝入攪拌容器中。通過(guò)液-液離心將兩相分離。將有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)直至得到60g油狀-深色-粗提物。層析后，得到4.9克氰基番紅菌素B。
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權(quán)利要求
1.具有式(XIV)結(jié)構(gòu)的21-Nuc化合物作為原料在合成中的用途 其中至少一個(gè)環(huán)A或E是醌環(huán)。
2.一種用于制備具有式(XIV)的稠環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物的方法 該方法包括從式(XVI)的21-氰基化合物起始的一個(gè)或多個(gè)反應(yīng) 其中R1是酰氨基亞甲基或酰氧基亞甲基；R5和R8獨(dú)立選自-H、-OH或-OCOCH2OH，或R5和R8都是酮基和所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)；R14a和R14b都是-H或者一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；和R15和R18獨(dú)立選自-H或-OH，或R5和R8都是酮基和所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)。
3.一種根椐權(quán)利要求2的方法，其中R1是-CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c，其中R25a和R25b形成酮基或一個(gè)是-OH、-NH2或-OCOCH3，而另一個(gè)是-CH2COCH3、-H、-OH或-OCOCH3，條件是當(dāng)R25a是-OH或-NH2時(shí)，則R25b不是-OH和R25c是-H、-CH3或-CH2CH3，或R1是-CH2-O-CO-R，其中R是-C(CH3)＝CH-CH3或-CH3。
4.一種根椐權(quán)利要求2的方法，其中式(XVI)的21-氰基化合物是氰基番紅菌素B。
5.一種根椐任一以上權(quán)利要求的方法，其中具有式(XIV)的稠環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物是式(XVIIa) 或式(XVIIb)化合物 其中R1是任選保護(hù)或衍生化的氨基亞甲基、任選保護(hù)或衍生化的羥基亞甲基；R4是-H；或R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團(tuán) R5是-H或-OH；R7是-OCH3和R8是-OH或R7和R8一起形成基團(tuán)-O-CH2-O-；R14a和R14b都是-H或者一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；和R15是-H或-OH；R21是-H、-OH或-CN；和其衍生物，包括?；苌锊⑶野ㄆ渲性?2位上的基團(tuán)-NCH3-由-NH-或-NCH2CH3-代替的衍生物和其中在式(VI)化合物中的-NH2基團(tuán)被任選衍生化的衍生物。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中R5是1-5個(gè)碳原子的鏈烷酰氧基。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中R5是乙酰氧基。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求5、6或7的方法，其中R14a和R14b是氫。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)的方法，其中R15是氫。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求5-9中任一項(xiàng)的方法，其中R21是-OH或-CN。
11.一種根據(jù)權(quán)利要求5-10中任一項(xiàng)的方法，所述化合物是式(XVIIb)。
12.一種根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中R7和R8一起形成基團(tuán)-O-CH2-O-。
13.一種根據(jù)權(quán)利要求4-11中任一項(xiàng)的方法，其中R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團(tuán)
14.一種根據(jù)權(quán)利要求5-12中任一項(xiàng)的方法，其中R1是任選保護(hù)或衍生化的氨基亞甲基、任選保護(hù)或衍生化的羥基亞甲基；和R4是-H。
15.一種根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中R1是基團(tuán)-CH2NH2或-CH2-NH-aa，其中aa是?；被峄鶊F(tuán)。
16.一種根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中以基團(tuán)-CH2NH2或-CH2-NH-aa的N-酰基衍生物形式存在。
17.一種根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中R1是N-?；苌?，其中所述?；鞘?CO-Ra，其中Ra是烷基、烷氧基、亞烷基、芳基烷基、芳基亞烷基、氨基酸酰基或雜環(huán)基，每一個(gè)任選由鹵代基、氰基、硝基、羧基烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、烷基、氨基或取代的氨基取代；或Ra是aa。
18.一種根據(jù)權(quán)利要求15、16或17的方法，其中存在一個(gè)或多個(gè)aa基團(tuán)并且是丙氨?；?、精氨?；?、天冬氨?；?、天冬?；㈦装滨；⒐劝滨；?、谷氨酰胺?；?、甘氨?；?、組氨?；?、羥基脯氨?；?、異亮氨?；⒘涟滨；?、賴氨?；?、甲硫氨?；?、苯丙氨?；⒏滨；?、絲氨?；?、蘇氨酰基、甲狀腺原氨?；?、色氨酰基、酪氨?；?、纈氨酰基或另一氨基酸?；?。
19.一種根據(jù)權(quán)利要求5-18中任一項(xiàng)的方法，其中一個(gè)或多個(gè)取代基由保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。
20.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，其中所述產(chǎn)物是式(XXIIa) 或式(XXIIb)化合物 其中R1是-CH2NH2或-CH2OH，或該基團(tuán)的被保護(hù)或衍生化的形式和R4是-H；或R1a和R4一起形成式(IV)、(VI)或(VII)的基團(tuán) R5是-OH或該基團(tuán)的被保護(hù)或衍生化的形式；R14a和R14b都是-H或者一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH或該基團(tuán)的被保護(hù)或衍生化的形式、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；R12是-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-；R15是-OH或該基團(tuán)的被保護(hù)或衍生化的形式；和R18是-OH或該基團(tuán)的被保護(hù)或衍生化的形式。
21.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，其中所述產(chǎn)物是式(XXIII)化合物 其中R1如以上對(duì)式(XVIIb)所定義并且優(yōu)選為中等體積的衍生化的氨基亞甲基；R5如以上對(duì)式(XVIIb)所定義并且優(yōu)選為小體積的衍生化的羥基；R12如以上所定義并且優(yōu)選為-NCH3-和R21是羥基或氰基。
22.一種根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中R1是疏水基團(tuán)。
23.一種根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中R1是基團(tuán)-CH2-NH2-CO-Ra，其中Ra具有少于20個(gè)原子，更優(yōu)選少于15或10個(gè)原子的線性鏈長(zhǎng)度。
24.一種根據(jù)權(quán)利要求20、21或22的方法，其中R5是乙酰基。
25.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，該方法包括以下步驟 其中對(duì)于終產(chǎn)物的R5如對(duì)化合物(XXXII)所定義并且可以在原料中不同并且在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，R18在終產(chǎn)物中是羥基，但在原料中可以是被保護(hù)的羥基并且在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，R12對(duì)于終產(chǎn)物可以與在原料中相同或可以在其中被轉(zhuǎn)化作為所述方法的一部分，R21對(duì)于終產(chǎn)物如上所定義并且如果是羥基，可以由氰基形成作為所述方法的一部分，Ra如上所定義并且可以進(jìn)一步?；鳛樗龇椒ǖ囊徊糠郑玫骄哂絮；腞a基團(tuán)的終產(chǎn)物。
26.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，其中aa是丙氨酰基。
27.一種根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述丙氨?；嬖谟谠现胁⒂葿oc基團(tuán)保護(hù)。
28.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，該方法包括以下反應(yīng)
29.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，該方法包括以下反應(yīng)
30.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，該方法包括其中將基團(tuán)R1由氨基亞甲基轉(zhuǎn)化為羥基亞甲基的反應(yīng)。
31.一種根據(jù)任一以上權(quán)利要求的方法，其中使具有基團(tuán)R1是羥基亞甲基的化合物與式(XIX)的試劑反應(yīng) 其中Fu表示被保護(hù)的官能團(tuán)，Prot3是保護(hù)基團(tuán)，虛線表示任選的雙鍵。
32.一種用于制備如在權(quán)利要求1中所定義的式(XVI)的21-氰基化合物的方法，該方法包括使式(XV)的化合物 其中R1、R5、R8、R14a、R14b、R15和R18如上所定義和R21是羥基，與氰化物離子源反應(yīng)得到所需的21-氰基化合物。
33.一種式(XVI)的21-氰基化合物 其中R1是酰氨基亞甲基或酰氧基亞甲基；R5和R8獨(dú)立選自-H、-OH或-OCOCH2OH，或R5和R8都是酮基，所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)；R14a和R14b都是-H或者一個(gè)是-H而另一個(gè)是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基；和R15和R18獨(dú)立選自-H或-OH，或R5和R8都是酮基和所述環(huán)A是對(duì)-苯醌環(huán)；番紅菌素B除外。
全文摘要
本發(fā)明提供制備具有式(XIV)的稠環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物的方法,該方法包括一個(gè)或多個(gè)從式(XVI)的21－氰基化合物開(kāi)始的反應(yīng),在式(XVI)中一般:R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1360588SQ0081008
公開(kāi)日2002年7月24日 申請(qǐng)日期2000年5月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月14日
發(fā)明者C·庫(kù)瓦斯, M·佩茲, A·弗蘭策斯奇, C·弗蘭德茲, J·L·奇查羅, P·加勒戈, M·扎祖洛, F·德拉卡勒, I·曼扎納雷斯 申請(qǐng)人:法馬馬有限公司