專利名稱：緩釋組合物、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥理活性物質(zhì)的緩釋制劑和其制備方法。
背景技術(shù)：
JP-A-7-97334公開了一種緩釋制劑及其制備方法，該制劑由生理活性肽或其鹽和具有末端游離羧基的生物可降解聚合物組成。
GB2209937、GB2234169、GB2234896、GB2257909和EP626170A2各自公開了一種組合物及其制備方法，該組合物包含生物可降解聚合物作為基質(zhì)，并且含有肽或蛋白質(zhì)的水不溶性鹽，例如雙羥萘酸鹽，二者是分別制備的。
WO95/15767公開了西曲瑞克(LH-RH拮抗劑)的撲酸鹽(雙羥萘酸鹽)和其制備方法，并且描述了這種雙羥萘酸鹽即使被封入生物可降解聚合物內(nèi)，其所表現(xiàn)出來的肽釋放性能也等同于獨立存在的雙羥萘酸鹽。
發(fā)明的公開這里提供了含有高濃度生理活性物質(zhì)的新穎組合物，其中抑制了生理活性物質(zhì)的過度的初期釋放，由此實現(xiàn)長期(優(yōu)選為約6個月或更長)內(nèi)穩(wěn)定的釋放速率。
本發(fā)明人為解決上述問題而進(jìn)行了努力，最終發(fā)現(xiàn)通過使生理活性物質(zhì)與羥萘甲酸共存于組合物中，能夠向組合物中引入高濃度的生理活性物質(zhì)；通過向乳酸-乙醇酸聚合物內(nèi)封入這兩種組分，能夠使生理活性物質(zhì)的釋放速率不同于該生理活性物質(zhì)在沒有乳酸-乙醇酸聚合物的存在下從生理活性物質(zhì)與羥萘甲酸所形成的組合物中釋放的速率；通過選擇乳酸-乙醇酸聚合物的特征和羥萘甲酸的量，能夠控制這種釋放速率；即使在高濃度下也肯定能夠抑制初期過度釋放，由此實現(xiàn)在非常長時期(優(yōu)選為約6個月或更長)內(nèi)的緩釋；以及通過采用這樣一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下，能夠提供進(jìn)一步令人滿意的緩釋制劑。進(jìn)一步努力結(jié)果完成了本發(fā)明。
因而，本發(fā)明提供(1)一種緩釋組合物，它包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽，其中所述乳酸-乙醇酸聚合物的重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)所述乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(2)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)是生理活性肽；(3)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)是LH-RH衍生物；(4)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸是1-羥基-2-萘甲酸或3-羥基-2-萘甲酸；(5)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸是1-羥基-2-萘甲酸；(6)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中乳酸與乙醇酸之間的％摩爾比為100/0至40/60；(7)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中乳酸與乙醇酸之間的％摩爾比為100/0；(8)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該聚合物的重均分子量為約3,000至約100,000；(9)根據(jù)上述(8)的緩釋組合物，其中該重均分子量為約20,000至約50,000；(10)根據(jù)上述(3)的緩釋組合物，其中該LH-RH衍生物是由下式代表的肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，Z表示NH-C2H5或Gly-NH2；(11)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中每單位質(zhì)量(g)該聚合物的末端羧基量(μmol)為50至90μmol；(12)根據(jù)上述(3)的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸或其鹽與該LH-RH衍生物或其鹽之間的摩爾比為3∶4至4∶3；(13)根據(jù)上述(3)的緩釋組合物，它包含以該緩釋組合物為基礎(chǔ)的12重量％至24重量％的LH-RH衍生物或其鹽；(14)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該生理活性物質(zhì)或其鹽是一種微水溶性或水溶性物質(zhì)；(15)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，它是注射劑；(16)一種制備根據(jù)上述(1)的緩釋組合物的方法，它包括從藥理活性物質(zhì)或其鹽、乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽與羥萘甲酸或其鹽的混合物中除去溶劑；(17)根據(jù)上述(16)的方法，它包括混合該藥理活性物質(zhì)或其鹽與該乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽和該羥萘甲酸或其鹽在有機溶劑中的溶液，分散該混合物，然后除去該有機溶劑；(18)根據(jù)上述(16)的方法，其中該藥理活性物質(zhì)或其鹽是含有該藥理活性物質(zhì)或其鹽的水溶液；(19)根據(jù)上述(16)的方法，其中該藥理活性物質(zhì)的鹽是與游離堿或酸所生成的鹽；(20)一種藥物，包含根據(jù)上述(1)的緩釋組合物；(21)含有根據(jù)上述(3)的緩釋組合物的一種抗前列腺癌、前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、青春期早熟、痛經(jīng)或乳腺癌的預(yù)防或治療劑、或一種避孕劑；(22)根據(jù)上述(1)的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)或其鹽是在至少6個月或更長的時間內(nèi)釋放的；和(23)一種緩釋組合物，包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、1-羥基-2-萘甲酸或其鹽和生物可降解聚合物或其鹽。
此外，本發(fā)明提供(24)一種制備根據(jù)上述(16)的緩釋組合物的方法，它包括制備w/o乳劑，該乳劑具有含有該生理活性物質(zhì)或其鹽的液體作為內(nèi)部水相，和具有含該乳酸-乙醇酸或其鹽和該羥萘甲酸或其鹽的溶液作為油相，然后除去溶劑；(25)一種制備根據(jù)上述(16)的緩釋組合物的方法，它包括制備w/o乳劑，該乳劑具有含該羥萘甲酸或其鹽的液體作為內(nèi)部水相，和具有含該生理活性物質(zhì)或其鹽和該乳酸-乙醇酸或其鹽的溶液作為油相，然后除去溶劑；(26)一種制備根據(jù)上述(16)的緩釋組合物的方法，它包括混合該藥理活性物質(zhì)或其鹽與該羥萘甲酸或其鹽，溶解該混合物，然后除去該有機溶劑；和(27)根據(jù)上述(24)至(26)中任一項的制備緩釋組合物的方法，其中用于除去該溶劑的過程是一種水中干燥方法。
用在本發(fā)明中的生理活性物質(zhì)沒有特別限制，只要它是制藥可用的即可，并且它可以是非肽化合物或肽化合物。非肽化合物例如可以是激動劑、拮抗劑和對酶具有抑制作用的化合物。優(yōu)選的肽化合物實例是生理活性肽，其分子量為約300至約40,000，優(yōu)選為約400至約30,000，更優(yōu)選為約500至約20,000。
這樣的生理活性肽例子可以是促黃體激素釋放激素(LH-RH)、胰島素、促生長素抑制素、生長激素、生長激素釋放激素(GH-RH)、催乳激素、紅細(xì)胞生成素、腎上腺皮質(zhì)激素、促黑素細(xì)胞激素、甲狀腺激素-釋放激素、促甲狀腺激素、促黃體激素、促卵泡成熟激素、后葉加壓素、催產(chǎn)素、降鈣素、胃泌素、促胰液素、促胰酶素、縮膽囊肽、血管緊張肽、人胎盤生乳素、人絨毛膜促性腺素、腦啡肽、內(nèi)啡肽、“KYOTORPHIN”、他福新、胸腺生成素、胸腺素、“THYMOTHYMRIN”、胸腺體液因子、血液胸腺因子、腫瘤壞死因子、集落誘導(dǎo)因子、胃動素、“DEINORPHINE”、鈴蟾肽、神經(jīng)降壓素、蛙皮素、緩激肽、心鈉利尿因子、神經(jīng)生長因子、細(xì)胞生長因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子、內(nèi)皮拮抗肽和它們的衍生物以及它們的片段及其衍生物。
本發(fā)明中，可以采用生理活性物質(zhì)本身或其藥學(xué)上可接受的鹽。
具有堿性基團例如氨基的生理活性物質(zhì)的鹽例如可以是與無機酸(也稱無機游離酸)(例如碳酸、重碳酸、鹽酸、硫酸、硝酸、硼酸等)和有機酸(也稱有機游離酸)(例如琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸等)所生成的鹽。
具有酸性基團例如羧基的生理活性物質(zhì)的鹽例如可以是與無機堿(也稱無機游離堿)(例如堿金屬如鈉和鉀，堿土金屬如鈣和鎂)或與有機堿(也稱有機游離堿)(例如有機胺如三乙胺，堿性氨基酸如精氨酸)所生成的鹽。生理活性肽可以生成金屬配位化合物(例如銅配合物、鋅配合物等)。
這類生理活性肽的優(yōu)選實例是這樣的LH-RH衍生物或其鹽，它可用于治療激素依賴性疾病，尤其是性激素依賴性癌癥(例如前列腺癌、子宮癌、乳腺癌、垂體癌等)、性激素依賴性疾病(例如前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、青春期早熟、痛經(jīng)、經(jīng)閉、經(jīng)前期綜合征、多腔性卵巢綜合征等)，并且可用作避孕劑(或者在節(jié)育后利用回彈作用抗不育癥)。也例如這樣的LH-RH衍生物或其鹽，它可用于治療良性或惡性腫瘤，該腫瘤不是性激素依賴性的，而是LH-RH敏感性的。
通常，LH-RH衍生物或其鹽例如可以是下面文獻(xiàn)中所述肽《GnRH類似物治療爭論與透視》The Parthenon Publishing Group Ltd.，(1996)、JP-W-3-503165、JP-A-3-101695、7-93774和8-259460。
LH-RH衍生物例如可以是LH-RH激動劑或LH-RH拮抗劑，后者例如可以是由式[I]代表的藥理活性肽或其鹽X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH2其中X表示N(4H2-糠酰)Gly或NAc，A表示選自NMeTyr、Tyr、Aph(Atz)和NMeAph(Atz)的殘基，B表示選自DLys(Nic)、DCit、DLys(AzaglyNic)、DLys(AzaglyFur)、DhArg(Et2)、DAph(Atz)和DhCi的殘基，C表示Lys(Nisp)、Arg或hArg(Et2)。
LH-RH激動劑例如可以是由式[II]代表的藥理活性肽或其鹽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y表示選自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的殘基，Z表示NH-C2H5或Gly-NH2。尤其優(yōu)選的一種是其中Y是DLue、Z是NH-C2H5的肽(也就是由5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLue-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5代表的肽)。
這些肽中任一種都可以按照前述參考文獻(xiàn)和專利說明書所述方法及其相應(yīng)方法加以制備。
本文所用的縮寫列在下面。縮寫 名稱N(4H2-糠酰)GlyN-四氫糠酰甘氨酸殘基NAc N-乙?；鵇2Nal D-3-(2-萘基)丙氨酸殘基D4ClPhe D-3-(4-氯)苯丙氨酸殘基D3PalD-3-(3-吡啶基)丙氨酸殘基NMeTyr N-甲基酪氨酸殘基Aph(Atz) N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基NmeAph(Atz) N-甲基-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基DLys(Nic)D-(e-N-煙酰)賴氨酸殘基Dcit D-瓜氨酸殘基DLys(AzaglyNic) D-(氮雜甘氨酰煙酰)賴氨酸殘基DLys(AzaglyFur) D-(氮雜甘氨酰呋喃基)賴氨酸殘基DhArg(Et2) D-(N，N’-二乙基)高精氨酸殘基Daph(Atz)D-N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基DhCi D-高瓜氨酸殘基Lys(Nisp)(e-N-異丙基)賴氨酸殘基hArg(Et2) (N，N’-二乙基)高精氨酸殘基DSer(tBu)O-叔丁基-D-絲氨酸Dhis(ImBzl) Nim-芐基-D-組氨酸按另一種方式，氨基酸當(dāng)以縮寫表示時，參見IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員會、《歐洲生物化學(xué)雜志》138卷9至37頁(1984)或者參照本領(lǐng)域的慣例，而氨基酸當(dāng)存在旋光異構(gòu)體時，意味著L型，另有指定除外。
用在本發(fā)明中的羥萘甲酸是在不同的碳原子上鍵合一個羥基和一個羧基的萘。因此，總共有14種異構(gòu)體，它們在關(guān)于羧基與萘環(huán)鍵合的每個1-位和2-位的羥基位置上是彼此不同的。本發(fā)明可以采用這些異構(gòu)體中任一種，也可以采用它們的任意比例的混合物。如下所述，酸離解常數(shù)較高者是優(yōu)選的，或者pKa(pKa＝-log10Ka，其中Ka是酸離解常數(shù))較低者是優(yōu)選的。微水溶性異構(gòu)體是優(yōu)選的。
還優(yōu)選的是可溶于醇(例如乙醇和甲醇)的異構(gòu)體?！翱扇苡诖肌笔侵溉芙舛?，例如在甲醇中的溶解度是10g/L或更高。
盡管在羥萘甲酸異構(gòu)體中3-羥基-2-萘甲酸的pKa(pKa＝2.708，KAGAKUBINRAN，II，日本化學(xué)會，1969年9月25日出版)是唯一已知的pKa，但比較羥基苯甲酸的三種異構(gòu)體之間的pKa可以給出有用的信息。因而，間-羥基苯甲酸和對-羥基苯甲酸的pKa是4或更高，而鄰-羥基苯甲酸(水楊酸)的pKa低得多(＝2.754)。因此，在上述14種異構(gòu)體中，羧基與羥基各自與萘環(huán)中相鄰碳原子鍵合的3-羥基-2-萘甲酸、1-羥基-2-萘甲酸和2-羥基-1-萘甲酸是優(yōu)選的。
羥萘甲酸可以是一種鹽。這樣的鹽例如可以是與無機堿(例如堿金屬如鈉和鉀，堿土金屬如鈣和鎂)、有機堿(例如有機胺如三乙胺，堿性氨基酸如精氨酸)或過渡金屬(例如鋅、鐵、銅)所生成的鹽以及配鹽。
下面描述制備本發(fā)明的藥學(xué)活性物質(zhì)羥萘甲酸鹽的方法實例。(1)將羥萘甲酸在水合有機溶劑中的溶液裝上弱堿型離子交換柱并被其吸附，直至飽和。隨后，加入該水合有機溶劑，以除去過量羥萘甲酸，然后加入生理活性物質(zhì)或其鹽在水合有機溶劑中的溶液，進(jìn)行離子交換，除去所得洗脫液中的溶劑。這樣的水合有機溶劑含有醇(例如甲醇、乙醇)、乙腈、四氫呋喃、二甲基甲酰胺等作為有機溶劑。除去溶劑使鹽沉淀的方法可以是本身已知的方法或其相應(yīng)方法。例如，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器并調(diào)節(jié)真空水平，蒸發(fā)除去溶劑。(2)強堿型離子交換柱的交換離子先前已經(jīng)被氫氧化物離子所代替，然后裝入生理活性物質(zhì)或其鹽在水合有機溶劑中的溶液，由此堿性基團交換為氫氧化物。所回收的洗脫液用于溶解少于當(dāng)量的羥萘甲酸，濃縮使鹽沉淀，如果必要的話用水洗滌后干燥。
盡管溶解度可能因所用生理活性物質(zhì)而異，但由于生理活性物質(zhì)的羥萘甲酸鹽是微水溶性的，因此利用該生理活性肽鹽本身的緩釋能力，可以作為緩釋制劑使用，或者可以進(jìn)一步配制成緩釋組合物。
用在本發(fā)明中的乳酸-乙醇酸聚合物是這樣一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下，優(yōu)選為1,500,000以上2,600,000以下，優(yōu)選采用具有末端游離羧基者。
乳酸-乙醇酸聚合物可以是鹽的形式。這樣的鹽例如可以是與無機堿(例如堿金屬如鈉和鉀，堿土金屬如鈣和鎂)、有機堿(例如有機胺如三乙胺，堿性氨基酸如精氨酸)或過渡金屬(例如鋅、鐵、銅)所生成的鹽以及配鹽。
該聚合物的乳酸與乙醇酸之間的％摩爾比優(yōu)選為約100/0至約40/60，更優(yōu)選為約100/0至約50/50。還優(yōu)選采用其％摩爾比為100/0的乳酸均聚物。
作為上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的最小重復(fù)單元之一的乳酸的旋光異構(gòu)體比以D-型/L-型(％mol/mol)表示，優(yōu)選為約75/25至約25/75。經(jīng)常采用D-型/L-型(％mol/mol)之比尤其為約60/40至約30/70的那些。
上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的重均分子量通常為約3,000至約100,000，優(yōu)選為約3,000至約60,000，更優(yōu)選為約3,000至約50,000，尤其為約20,000至約50,000。
本發(fā)明的乳酸-乙醇酸聚合物例如可以是這樣一種聚合物，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下，更優(yōu)選為這樣一種聚合物，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下。
多分散性(重均分子量/數(shù)均分子量)通常為約1.2至約4.0，優(yōu)選為約1.5至約3.5，更優(yōu)選為約1.7至約3.0。
每單位質(zhì)量(g)上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的游離羧基量通常為約20至約1000μmol，更優(yōu)選為約40至約1000μmol。進(jìn)一步優(yōu)選的量為約40至約95μmol，尤其為約50至約90μmol。
優(yōu)選的實例是(1)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量為約3,000至約100,000，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(2)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量為約3,000至約60,000，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(3)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量為約3,000至約50,000，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(4)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其重均分子量為約20,000至約50,000，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(5)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(6)一種乳酸-乙醇酸聚合物，其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(7)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約100,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(8)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約100,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(9)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約60,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(10)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約60,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(11)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(12)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；(13)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約20,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下；和(14)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約20,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下。
更優(yōu)選的實例是(15)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約100,000，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(16)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約60,000，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(17)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約50,000，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(18)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約20,000至約50,000，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(19)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(20)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，[2]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(21)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約100,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(22)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約100,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(23)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約60,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(24)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約60,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(25)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(26)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約3,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；(27)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約20,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約20至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下；和(28)一種乳酸-乙醇酸聚合物，[1]其重均分子量為約20,000至約50,000，[2]其每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)為約40至約1000μmol，且[3]其重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下。
重均分子量、數(shù)均分子量和多分散性是指利用15種單分散聚苯乙烯作為標(biāo)準(zhǔn)通過凝膠滲透色譜法(GPC)測定的聚苯乙烯的分子量和從它們計算的多分散性，這15種重均分子量為1,110,000、707,000、455,645、354,000、189,000、156,055、98,900、66,437、37,200、17,100、9,830、5,870、2,500、1,303和504。測定是利用高速GPC儀器(TOSO，HLC-8120GPC，通過示差折光率檢測)以及GPC柱KF804Lx2(SHOWADENKO)進(jìn)行的，氯仿為移動相。流速為1ml/min。
這里所述游離羧基的量是指通過標(biāo)記方法測定的量(以下稱為基于標(biāo)記法的羧基水平)。通常，在聚乳酸的情況下，將Wmg聚乳酸溶于5N鹽酸/乙腈的2ml混合物(v/v＝4/96)，與2ml 0.01M鹽酸鄰-硝基苯肼(ONPH)溶液(5N鹽酸/乙腈/乙醇＝1.02/35/15)和2ml 0.15M鹽酸1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺溶液(吡啶/乙醇＝4v/96v)混合，使混合物在40℃下反應(yīng)30分鐘，然后蒸餾除去溶劑。將殘余物用水洗滌(4次)，溶于2ml乙腈，與1ml 0.5mol/L氫氧化鉀的乙醇溶液混合，在60℃下反應(yīng)30分鐘。將反應(yīng)混合物用1.5N氫氧化鈉水溶液稀釋至Yml，檢查在544nm下的吸光度A(/cm)，使用1.5N氫氧化鈉水溶液作為參考標(biāo)準(zhǔn)。另一方面，使用DL-乳酸水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)，借助堿性滴定檢查它的游離羧基Cmol/L，并用ONPH標(biāo)記法轉(zhuǎn)化為DL-乳酰肼，然后檢查在544nm下的吸光度B(/cm)，基于這些，按照下列等式計算每單位質(zhì)量(g)聚合物的游離羧基的摩爾量。(mol/g)＝(AYC)/(WB)該“羧基的量”也可以這樣獲得，將乳酸-乙醇酸聚合物溶于甲苯-丙酮-甲醇的溶劑混合物，用氫氧化鉀的乙醇溶液滴定所得溶液的羧基，使用酚酞作為指示劑(以下，通過這種方法所得數(shù)值稱為“基于堿性滴定的羧基水平”)。
盡管乳酸-乙醇酸聚合物降解與消失的速率在很大程度上因共聚物的組成、分子量或游離羧基水平而異，不過由于它通常隨著乙醇酸比例的減少而降低，因此有可能借助減少乙醇酸比例或者增加分子量同時降低游離羧基水平，而延長釋放的持續(xù)時間。
這樣的“乳酸-乙醇酸聚合物”例如可以通過非催化的脫水性縮合聚合作用(JP-A-61-28521)從乳酸和乙醇酸加以制備，或者通過開環(huán)聚合作用從環(huán)狀二酯化合物例如丙交酯類和乙交酯類加以制備(《生物材料與生物工程百科全書A部材料》第2卷，Marcel Dekker，Inc，1995)。盡管通過上述已知的開環(huán)聚合作用所得聚合物有時可能是在其末端沒有游離羧基的聚合物，不過這樣的聚合物在使用前能夠轉(zhuǎn)化為每單位質(zhì)量具有一定數(shù)量羧基的聚合物，例如借助水解作用，如EP-A-0839525所述。
“具有末端游離羧基的乳酸-乙醇酸聚合物”容易通過已知方法(例如非催化的脫水性縮合聚合作用，JP-A-61-28521)或下列方法加以制備。
(1)首先，在羧基被保護(hù)的羥基一元羧酸衍生物(例如叔丁基D-乳酸酯、芐基L-乳酸酯)或羧基被保護(hù)的羥基二元羧酸衍生物(例如二芐基丙醇二酸酯、二叔丁基二羥乙基丙二酸酯)的存在下，用聚合催化劑使環(huán)酯化合物進(jìn)行聚合作用。
上述“羧基被保護(hù)的羥基一元羧酸衍生物”或“羧基被保護(hù)的羥基二元羧酸衍生物”例如可以是其羧基(-COOH)被酰胺化(-CONH2)或酯化(-COOR)的羥基羧酸衍生物，其中其羧基(-COOH)被酯化(-COOR)的羥基羧酸衍生物是優(yōu)選的。
這里所述酯中的R例如可以是C1-6烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基和叔丁基，C3-8環(huán)烷基，例如環(huán)戊基和環(huán)己基，C6-12芳基，例如苯基和α-萘基，C7-14芳烷基，包括苯基-C1-2烷基，例如芐基和苯乙基，或α-萘基-C1-2烷基，例如α-萘甲基。在上面列舉的那些當(dāng)中，叔丁基和芐基是優(yōu)選的。
上述“環(huán)酯化合物”例如可以是環(huán)內(nèi)具有至少一條酯鍵的環(huán)狀化合物。通常例如環(huán)狀單酯化合物(內(nèi)酯)和環(huán)狀二酯化合物(交酯)。
上述“環(huán)狀單酯化合物”例如可以是4-元環(huán)狀內(nèi)酯(β-丙內(nèi)酯、β-丁內(nèi)酯、β-異戊內(nèi)酯、β-己內(nèi)酯、β-異己內(nèi)酯、β-甲基-β-戊內(nèi)酯等)、5-元環(huán)狀內(nèi)酯(γ-丁內(nèi)酯、γ-戊內(nèi)酯等)、6-元環(huán)狀內(nèi)酯(δ-戊內(nèi)酯等)、7-元環(huán)狀內(nèi)酯(ε-己內(nèi)酯等)、對-二噁烷酮、1，5-二氧雜環(huán)庚烷-2-酮等。
上述“環(huán)狀二酯化合物”例如可以是由下式代表的化合物 其中R1和R2是相同或不同的，各自表示氫原子或C1-6烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基和叔丁基)，和交酯，其中R1是氫原子，R2是甲基，或者每個R1和R2都是氫原子。
那些具有代表性的例子是乙交酯、L-交酯、D-交酯、DL-交酯、內(nèi)消旋交酯、3-甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(包括旋光異構(gòu)體)等。
上述“聚合催化劑”例如可以是有機錫類催化劑(例如辛酸錫、二月桂酸二正丁基錫、四苯基錫)、鋁類催化劑(例如三乙基鋁)和鋅類催化劑(例如二乙基鋅)。
出于在反應(yīng)后容易除去溶劑的目的，鋁類和鋅類催化劑是優(yōu)選的，而出于確保殘留催化劑(如果有的話)的安全性的目的，鋅類催化劑是優(yōu)選的。
聚合催化劑的溶劑是苯、己烷、甲苯等，其中己烷和甲苯是尤其優(yōu)選的。
“聚合方法”可以是本體聚合，其中使用熔化了的反應(yīng)物，或者是溶液聚合，其中采用溶解在適當(dāng)溶劑(例如苯、甲苯、二甲苯、十氫萘和二甲基甲酰胺)中的反應(yīng)物。優(yōu)選的溶劑是甲苯、二甲苯等。盡管聚合溫度沒有特別的限制，不過本體聚合可以采用能夠在反應(yīng)初期熔化反應(yīng)物的溫度或更高，通常為100至300℃，而溶液聚合通常采用室溫至150℃，并使用冷凝器用于回流，或者當(dāng)反應(yīng)溫度超過反應(yīng)溶液的沸點時使用耐壓反應(yīng)器。盡管反應(yīng)時間可以因聚合溫度、其他反應(yīng)條件和目標(biāo)聚合物的特征而異，但一般說可以是10分鐘至72小時。反應(yīng)后，按照標(biāo)準(zhǔn)方法，將反應(yīng)混合物溶于適當(dāng)溶劑(例如丙酮、二氯甲烷、氯仿)，與酸混合(例如鹽酸、乙酸酐、三氟乙酸)以終止聚合作用，然后沉淀，例如與不溶解目標(biāo)產(chǎn)物的溶劑(例如乙醇、水、乙醚、異丙醚)混合，由此分離在其ω-末端具有被保護(hù)的羧基的乳酸-乙醇酸聚合物。
根據(jù)本發(fā)明的聚合方法采用羧基被保護(hù)的羥基羧酸衍生物(例如叔丁基D-乳酸酯、芐基L-乳酸酯)或羧基被保護(hù)的羥基二元羧酸衍生物(例如二芐基丙醇二酸酯、二叔丁基二羥乙基丙二酸酯)代替質(zhì)子鏈轉(zhuǎn)移劑，例如常用的甲醇。
使用這樣的羧基被保護(hù)的羥基羧酸衍生物(例如叔丁基D-乳酸酯、芐基L-乳酸酯)或羧基被保護(hù)的羥基二元羧酸衍生物(例如二芐基丙醇二酸酯、二叔丁基二羥乙基丙二酸酯)作為質(zhì)子鏈轉(zhuǎn)移劑，[1]有可能在輸入組成的基礎(chǔ)上控制分子量，[2]聚合之后的去保護(hù)可以使所得乳酸-乙醇酸聚合物的ω-末端羧基游離。
(2)隨后，將通過上述(1)聚合作用所得在其ω-末端具有被保護(hù)的羧基的乳酸-乙醇酸聚合物去保護(hù)，得到在其ω-末端具有游離羧基的目標(biāo)乳酸-乙醇酸聚合物。
保護(hù)基團可以通過本身已知的方法去保護(hù)。該方法可以是任意的方法，只要它能夠除去保護(hù)基團而不對聚(羥基羧酸)的酯鍵產(chǎn)生不利影響即可，不過通?？梢允沁€原、酸分解等。
還原方法例如可以是用催化劑(例如鈀-碳、鈀黑、氧化鉑)進(jìn)行催化氫化、在液銨中用鈉還原和用二硫蘇糖醇還原。在例如在其ω-末端具有被芐基保護(hù)的羧基的聚合物被催化氫化的情況下，將通常溶于乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等的聚合物與鈀-碳混合，通入氫氣，同時在室溫下劇烈攪拌約20分鐘至約4小時，由此實現(xiàn)去保護(hù)。
酸分解例如可以是用無機酸(例如氟化氫、溴化氫、氯化氫)或有機酸(例如三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸)及其混合物進(jìn)行酸分解。如果必要的話，酸分解可以在陽離子清除劑(例如茴香醚、苯酚、茴香硫醚)的存在下進(jìn)行。例如在其ω-末端具有被叔丁基保護(hù)的羧基的聚合物進(jìn)行酸分解的情況下，將通常溶于二氯甲烷、二甲苯、甲苯等的聚合物與適量三氟乙酸混合，或者將聚合物溶于三氟乙酸，然后將混合物在室溫下攪拌約1小時，由此實現(xiàn)去保護(hù)。
酸分解也優(yōu)選可以在聚合反應(yīng)之后立即進(jìn)行，在這種情況下，它也充當(dāng)聚合終止反應(yīng)。
而且如果必要的話，通過上述去保護(hù)所得乳酸-乙醇酸聚合物可以進(jìn)行酸水解，以根據(jù)需要調(diào)整重均分子量、數(shù)均分子量或末端羧基水平。通常，可以采用EP-A-0839525所述方法或其相應(yīng)方法。
上述所得乳酸-乙醇酸聚合物可以作為基質(zhì)，用于制備緩釋制劑。
在其末端具有非特異性游離羧基的聚合物可以通過已知方法(例如參見WO94/15587)加以制備。
此外，在開環(huán)聚合后其末端已經(jīng)借助化學(xué)處理轉(zhuǎn)化為游離羧基的乳酸-乙醇酸聚合物可從市場上買到，例如Boehringer Ingelheim KG的產(chǎn)品。
乳酸-乙醇酸聚合物可以以鹽的形式(例如上面列舉的那些)存在，鹽例如可以通過下列方法制備，(a)將溶于有機溶劑的上述具有羧基的乳酸-乙醇酸聚合物與含有無機堿(例如堿金屬如鈉和鉀，堿土金屬如鈣和鎂)的水溶液或與有機堿(例如有機胺如三乙胺，堿性氨基酸如精氨酸)混合，進(jìn)行離子交換反應(yīng)，然后分離聚合物的鹽，(b)將上述(a)列舉的堿的弱酸鹽(例如乙酸鹽和羥乙酸鹽)溶于上述具有羧基的乳酸-乙醇酸聚合物在有機溶劑中的溶液，然后分離乳酸-乙醇酸聚合物的鹽形式，(c)將溶于有機溶劑的上述具有羧基的乳酸-乙醇酸聚合物與過渡金屬(例如鋅、鐵、銅)的弱酸鹽(例如乙酸鹽和羥乙酸鹽)或氧化物混合，然后分離乳酸-乙醇酸聚合物的鹽形式。
盡管本發(fā)明組合物中藥理活性物質(zhì)的重量比可以因藥理活性物質(zhì)類型、其所需的藥理作用和持續(xù)時間而異，但在生理活性肽或其鹽的情況下，對于該生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的總量而言，當(dāng)這三種組分包含在緩釋組合物中時，該重量比是約0.001至約50重量％，優(yōu)選為約0.02至約40重量％，更優(yōu)選為約0.1至30重量％，最優(yōu)選為約12至24重量％，而在非肽生理活性物質(zhì)或其鹽的情況下，該重量比是約0.01至約80重量％，優(yōu)選為約0.1至約50重量％。即使當(dāng)含有生理活性物質(zhì)和羥萘甲酸時，類似的重量比范圍也是適用的。在緩釋組合物包含生理活性肽(這里稱為(A))與羥萘甲酸(這里稱為(B))的鹽的情況下，基于(A)+(B)的總量而言，(A)的重量比通常為約5至約90重量％，優(yōu)選為約10至約85重量％，更優(yōu)選為約15至約80重量％，尤其為約30至約80重量％。
在緩釋組合物含有三種組分的情況下，也就是生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽，每1摩爾生理活性物質(zhì)或其鹽的羥萘甲酸或其鹽的量為約1/2至約2摩爾，優(yōu)選為約3/4至約4/3摩爾，尤其為約4/5至約6/5摩爾。
下面，討論設(shè)計本發(fā)明組合物的程序，針對含有三種組分的緩釋組合物，也就是生理活性物質(zhì)、羥萘甲酸和乳酸-乙醇酸聚合物，其中生理活性物質(zhì)是堿性物質(zhì)。在這種情況下，該組合物含有生理活性物質(zhì)作為堿，及含有羥萘甲酸作為酸，無論以游離形式還是鹽的形式結(jié)合在組合物中，它們均各自在組合物制備期間的任意時間點以水合狀態(tài)或者在痕量水的存在下建立其離解平衡。盡管溶解度可以因所用生理活性物質(zhì)而異，不過由于微水溶性羥萘甲酸與生理活性物質(zhì)一起所生成的鹽被認(rèn)為是微水溶性的，因此離解平衡有利于該微水溶性鹽的生成。
為了制備含有高濃度堿性生理活性物質(zhì)的組合物，鑒于上面所討論的離解平衡，優(yōu)選的是質(zhì)子化幾乎所有生理活性物質(zhì)，以生成上述微水溶性鹽。為此，優(yōu)選的是加入羥萘甲酸或其鹽的量至少幾乎等于生理活性物質(zhì)或其鹽。
下面討論組合物所含有的生理活性物質(zhì)的緩釋機理。生理活性物質(zhì)大部分已被質(zhì)子化，與伴生的抗衡離子共存于上述組合物中?？购怆x子主要是羥萘甲酸。組合物對活體給藥后，乳酸-乙醇酸聚合物發(fā)生降解，生成其低聚物和單體，每種所得低聚物(乳酸-乙醇酸低聚物)和單體(乳酸或乙醇酸)肯定具有一個羧基，該羧基也能夠充當(dāng)生理活性物質(zhì)的抗衡離子。盡管生理活性物質(zhì)是以沒有電荷轉(zhuǎn)移的方式釋放的，也就是說，它是以鹽的形式伴隨抗衡離子釋放的，可轉(zhuǎn)移的抗衡離子種類例如可以是羥萘甲酸、乳酸-乙醇酸低聚物(具有可轉(zhuǎn)移的分子量)和單體(乳酸或乙醇酸)。
當(dāng)同時存在兩種或多種酸時，一般主要與強酸生成鹽，不過這種主導(dǎo)地位可以因其比例而變化。關(guān)于羥萘甲酸的pKa，例如3-羥基-2-萘甲酸的pKa是2.708(KAGAKUBINRAN，II，日本化學(xué)會，1969年9月25日出版)。另一方面，乳酸-乙醇酸低聚物羧基的pKa是未知的，但是按照“引入取代基所致自由能的改變可以在附加規(guī)則的基礎(chǔ)上取近似值”的原理，它是能夠從乳酸或乙醇酸的pKa(＝3.86或3.83)計算出來的。測定取代基對離解常數(shù)的貢獻(xiàn)，可以加以利用(表4.1，《有機酸與堿的pKa預(yù)測》，D.D.Perrin，B.Dempsey，E.P.Sergeant，1981)。羥基和酯鍵的pKa如下ΔpKa(OH)＝-0.90
ΔpKa(酯鍵)＝-1.7因此，考慮最接近被離解基團的酯鍵的貢獻(xiàn)，乳酸-乙醇酸低聚物羧基的pKa如下pKa＝pKa(乳酸或乙醇酸)-ΔpKa(OH)+ΔpKa(酯鍵)＝3.06或3.03因此，羥萘甲酸的酸性強于乳酸(pKa＝3.86)、乙醇酸(pKa＝3.83)和乳酸-乙醇酸低聚物(pKa＝3.83)，因而有可能在上述組合物中主要生成羥萘甲酸與生理活性物質(zhì)的鹽，并且鹽的特征主要決定了生理活性物質(zhì)從組合物中緩釋的曲線。這里所采用的生理活性物質(zhì)例如可以是上面提到的生理活性物質(zhì)。
本文中，從羥萘甲酸與生理活性物質(zhì)所生成的鹽是微水溶性而非水不溶性這一事實有利于緩釋機理。因而，正如上述關(guān)于酸離解常數(shù)的討論所證明的，由于在釋放的早期階段，在可轉(zhuǎn)移的生理活性物質(zhì)鹽中主要存在酸性強于乳酸-乙醇酸低聚物和單體的羥萘甲酸的鹽，使鹽的溶解度和組織分布性能成為生理活性物質(zhì)釋放速率的決定因素，因此，該物質(zhì)的初期釋放模式可以在羥萘甲酸的加入量的基礎(chǔ)上加以調(diào)整。隨后，作為乳酸-乙醇酸聚合物水解的結(jié)果，羥萘甲酸減少，并且所生成的低聚物和單體增加，以低聚物和單體作為抗衡離子的生理活性物質(zhì)的釋放機理逐漸占主導(dǎo)地位，由此即使在羥萘甲酸從上述“組合物”中基本耗盡之后，生理活性物質(zhì)也保持穩(wěn)定釋放。類似地可以解釋在緩釋組合物制造過程期間結(jié)合生理活性物質(zhì)的效率和在所結(jié)合的生理活性物質(zhì)給藥之后抑制初期過度釋放的能力如何提高。
上述機理還類似地解釋了羥萘甲酸在含有生理活性肽的羥萘甲酸鹽的緩釋組合物中所起的作用。
這里所用的術(shù)語“水不溶性”是指在蒸餾水中，在40℃或更低的溫度下，將所述物質(zhì)攪拌4小時后，溶于1L溶液的物質(zhì)質(zhì)量為25mg或更少。
這里所用的術(shù)語“微水不溶性”是指上述質(zhì)量大于25mg且不大于5g。若有關(guān)物質(zhì)是生理活性物質(zhì)的鹽，則在上述程序中所溶解的生理活性物質(zhì)質(zhì)量適用于上述定義。
盡管本發(fā)明緩釋組合物的形態(tài)沒有特別的限制，不過優(yōu)選為微粒體，尤其是微球體(在緩釋組合物含有乳酸-乙醇酸聚合物的情況下，也稱微膠囊)。這里所述微球體是指能夠分散在溶液中的可注射球形微粒體。驗證形態(tài)例如可以利用掃描電子顯微鏡進(jìn)行觀察。
用于制備包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的本發(fā)明緩釋組合物的方法如下所述，以微膠囊為例。
(I)包水(in-water)干燥方法(i)O/W法該方法中，首先制備羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽在有機溶劑中的溶液。用于制備本發(fā)明緩釋制劑的有機溶劑優(yōu)選地具有120℃或更低的熔點。
這樣的有機溶劑例如可以是鹵代烴(例如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳)、醚(例如乙醚、異丙醚)、脂肪酸酯(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯)、芳族烴(例如苯、甲苯、二甲苯)、醇(例如乙醇、甲醇)以及乙腈。作為用于乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的有機溶劑，二氯甲烷是尤其優(yōu)選的。
作為用于羥萘甲酸或其鹽的有機溶劑，醇或醇與鹵代烴的混合物是尤其優(yōu)選的。
羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽可以分別溶解，再彼此混合，或者可以都溶解在按一定比例的有機溶劑混合物中。在這些溶劑中，優(yōu)選地采用鹵代烴與醇的混合物，其中二氯甲烷與乙醇的混合物是特別優(yōu)選的。
當(dāng)使用乙醇作為與二氯甲烷混合的有機溶劑時，二氯甲烷與乙醇的有機溶劑混合物中的乙醇含量通常為約0.01至約50％(v/v)，更優(yōu)選為約0.05至約40％(v/v)，尤其為約0.1至約30％(v/v)。
盡管有機溶劑溶液中的乳酸-乙醇酸聚合物濃度可以因乳酸-乙醇酸聚合物的分子量和有機溶劑的類型而異，不過當(dāng)使用二氯甲烷作為有機溶劑時，該濃度通常為約0.5至約70重量％，更優(yōu)選為約1至約60重量％，尤其為約約2至約50重量％。
當(dāng)使用二氯甲烷與乙醇的混合物作為有機溶劑時，有機溶劑中的羥萘甲酸或其鹽濃度通常為約0.01至約10重量％，更優(yōu)選為約0.1至約5重量％，尤其為約0.5至約3重量％。
向所得羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物的溶液中加入藥理活性物質(zhì)或其鹽，溶解或分散。然后，將所得含有由藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物組成的組合物的有機溶劑溶液加入到水相中，形成O(油相)/W(水相)乳劑，然后將油相中的溶劑蒸發(fā)或者分散在水相中，由此制得微膠囊。該水相的體積通常為油相體積的約1至約10,000倍，更優(yōu)選為約5至約5,000倍，尤其為約10至約2,000倍。
上述外部水相可以含有乳化劑。這樣的乳化劑通?？梢允侨我饽軌蛐纬煞€(wěn)定O/W乳劑的乳化劑。通常采用的是陰離子型表面活性劑(油酸鈉、硬脂酸鈉、月桂基硫酸鈉等)、非離子型表面活性劑(聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯[Tween 80，Tween 60，可從“ATRASPOWDER”獲得]、聚氧乙烯蓖麻油衍生物[HCO-60，HCO-50，可從“NIKKO CHEMICALS”獲得])、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、卵磷脂、明膠、透明質(zhì)酸等。任意上面列舉的那些都可以單獨使用或者彼此結(jié)合使用。濃度優(yōu)選為約0.0001至約10重量％，更優(yōu)選為約0.001至約5重量％。
向外部水相中可以加入滲透劑。該滲壓劑可以是任意在其水溶液中產(chǎn)生滲透壓的物質(zhì)。
這樣的滲壓劑例如可以是多元醇、一元醇、單糖、二糖、低聚糖、氨基酸及其衍生物。
上述多元醇例如可以是三元醇如甘油，五元醇如阿糖醇、木糖醇和福壽糖醇，六元醇如甘露糖醇、山梨糖醇和衛(wèi)矛醇己六醇。在上面列舉的那些中，六元醇是優(yōu)選的，其中甘露糖醇是尤其優(yōu)選的。
上述一元醇例如可以是甲醇、乙醇和異丙醇，其中乙醇是優(yōu)選的。
上述單糖例如可以是戊糖如阿糖、木糖、核糖和2-脫氧核糖，己糖如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖和巖藻糖，其中己糖是優(yōu)選的。
上述低聚糖例如可以是三糖如麥芽三糖和棉子糖，和四糖如水蘇糖，其中三糖是優(yōu)選的。
上述單糖、二糖和低聚糖的衍生物例如可以是葡糖胺、半乳糖胺、葡糖醛酸和半乳糖醛酸。
上述氨基酸例如可以是任意L-氨基酸，例如甘氨酸、亮氨酸和精氨酸。L-精氨酸是優(yōu)選的。
任何這些滲透劑都可以單獨使用或者彼此結(jié)合使用。
所用濃度的這些滲壓劑的任何一種所產(chǎn)生的外部水相滲透壓是生理鹽水滲透壓的約1/50至約5倍，優(yōu)選為約1/25至約3倍。
用于除去有機溶劑的方法可以是任何本來已知的方法或其相應(yīng)方法。例如，在大氣壓或增量減壓下蒸發(fā)有機溶劑，并用螺旋槳攪拌器、磁攪拌器或超聲處理機進(jìn)行攪拌，或者用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行蒸發(fā)，并調(diào)節(jié)真空水平，或者用透析膜逐漸蒸發(fā)。
利用離心或過濾作用分離所得微膠囊，用蒸餾水洗滌若干次，以除去沉積在微膠囊表面上的任意游離形式的生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽、載體、乳化劑等，然后再次分散在蒸餾水中，冷凍干燥。
在制造過程中，為了防止粒子之間的聚集，可以加入抗聚集劑。這樣的抗聚集劑例如可以是水溶性多糖，例如甘露糖醇、乳糖、葡萄糖和淀粉(例如玉米淀粉)，氨基酸，例如甘氨酸，蛋白質(zhì)，例如纖維蛋白和膠原。其中，優(yōu)選地采用甘露糖醇。
冷凍干燥后，如果必要的話，可以在減壓下加熱除去微膠囊中所含有的水和有機溶劑，同時避免微膠囊之間的融合。優(yōu)選地，在略高于乳酸-乙醇酸聚合物的中間體玻璃轉(zhuǎn)化點的溫度下進(jìn)行加熱(玻璃轉(zhuǎn)化點是通過示差掃描量熱法測定的)，每分鐘升溫10至20℃。乳酸-乙醇酸聚合物的中間體玻璃轉(zhuǎn)化點至高于該溫度約30℃的溫度是更優(yōu)選的進(jìn)行加熱的溫度范圍。優(yōu)選地，加熱的溫度在從乳酸-乙醇酸聚合物的中間體玻璃轉(zhuǎn)化點至高于中間體玻璃轉(zhuǎn)化點10℃的溫度的范圍內(nèi)，更優(yōu)選地在從乳酸-乙醇酸聚合物的中間體玻璃轉(zhuǎn)化點至高于中間體玻璃轉(zhuǎn)化點5℃的溫度的范圍內(nèi)。
盡管加熱的時間階段可以因微膠囊的量等而異，不過在微膠囊本身的溫度達(dá)到某一溫度后，通常為約12小時至約168小時，優(yōu)選為約24小時至約120小時，尤其為約48小時至約96小時。
加熱方法沒有特別的限制，只要能夠均勻加熱微膠囊本體即可。
這樣的加熱方法例如可以是在恒溫箱、流化罐、活動罐或干燥爐內(nèi)加熱干燥的方法或者用微波加熱干燥的方法。在這些方法中，在恒溫箱內(nèi)加熱干燥的方法是優(yōu)選的。
(ii)W/O/W法(1)首先，制備乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽在有機溶劑中的溶液。該有機溶劑和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽在有機溶劑中的濃度類似于上述(I)(i)所述。當(dāng)采用有機溶劑混合物時，比例也類似于上述(I)(i)所述。
向所得乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽在有機溶劑中的溶液中加入生理活性物質(zhì)或其鹽，溶解或分散。然后，將所得含有由生理活性物質(zhì)或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽組成的組合物的有機溶劑溶液(油相)與羥萘甲酸或其鹽的溶液(溶劑例如水，水性溶劑、例如醇(例如甲醇、乙醇)，吡啶水溶液，二甲基乙酰胺水溶液)混合。將混合物用已知方法乳化，例如使用均化器或者超聲處理，形成W/O乳劑。
然后，將所得由生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽組成的W/O乳劑加入到水相中，形成W(內(nèi)部水相)/O(油相)/W(外部水相)乳劑，然后蒸發(fā)油相中的溶劑，制得微膠囊。該外部水相的體積通常為油相體積的約1至約10,000倍，更優(yōu)選為約5至約5,000倍，尤其為約10至約2,000倍。
可以加入到上述外部水相中的乳化劑和滲透劑以及隨后的制備都類似于上述(I)(i)所述。
(iii)W/O/W法(2)首先，制備羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽在有機溶劑中的溶液，所得有機溶劑溶液稱為油相。該制備方法類似于上述(I)(i)所述?；蛘撸u萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽可以分別配制成有機溶劑溶液，然后將二者混合。盡管有機溶劑溶液中的乳酸-乙醇酸聚合物濃度可以因乳酸-乙醇酸聚合物的分子量和有機溶劑的類型而異，不過當(dāng)使用二氯甲烷作為有機溶劑時，該濃度通常為約0.5至約70重量％，更優(yōu)選為約1至約60重量％，尤其為約2至約50重量％。
然后，制備生理活性物質(zhì)或其鹽的溶液或分散系(溶劑例如水和水與醇(例如甲醇、乙醇)的混合物)。
生理活性物質(zhì)或其鹽的加入濃度通常為約0.001mg/ml至10g/ml，更優(yōu)選為0.1mg/ml至5g/ml，特別是10mg/ml至3g/ml。
可以加入已知的增溶劑和穩(wěn)定劑。關(guān)于溶解或分散生理活性物質(zhì)和添加劑，可以進(jìn)行加熱、搖動或攪拌，只要活性不喪失即可，所得水溶液稱為內(nèi)部水相。
將上述所得內(nèi)部水相和油相通過已知方法乳化，例如使用均化器或者超聲處理，形成W/O乳劑。
所要混合的油相的體積通常為內(nèi)部水相體積的約1至約1,000倍，更優(yōu)選為約2至100倍，尤其為約3至約10倍。
所得W/O乳劑在約12至20℃下通常為約10至10,000cps，優(yōu)選為約100至5,000cps。
然后，將所得由生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽組成的W/O乳劑加入到水相中，形成W(內(nèi)部水相)/O(油相)/W(外部水相)乳劑，然后將油相中的溶劑蒸發(fā)或者擴散到外部水相中，由此制得微膠囊。該外部水相的體積通常為油相體積的約1至約10,000倍，更優(yōu)選為約5至約50,000倍，尤其為約10至約2,000倍。
可以加入到上述外部水相中的乳化劑和滲透劑以及隨后的制備都類似于上述(I)(i)所述。
(II)相分離方法當(dāng)通過這種方法制備微膠囊時，在攪拌下向上述(I)水中干燥方法所述由藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽組成的組合物在有機溶劑中的溶液中分批加入凝聚劑，使微膠囊沉淀和固化。這樣的凝聚劑為油相體積的約0.01至1,000倍，優(yōu)選為約0.05至約500倍，特別是約0.1至約200倍。
凝聚劑沒有特別的限制，只要它是可與有機溶劑混合的聚合的、無機的或植物的化合物，并且不發(fā)生所要溶解的生理活性物質(zhì)或其鹽與羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的配位化合即可。通常例如硅油、芝麻油、大豆油、玉米油、棉子油、椰子油、亞麻子油、礦物油類、正己烷、正庚烷等。任何這些物質(zhì)都可以單獨使用或者彼此結(jié)合使用。
分離所得微膠囊，例如用庚烷反復(fù)洗滌，使由藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽組成的組合物不含凝聚劑和其他物質(zhì)，然后在減壓下干燥?；蛘?，通過類似于上述(I)(i)所述包水干燥方法的方法進(jìn)行洗滌，然后冷凍干燥，然后進(jìn)行加熱干燥。
(III)噴霧干燥方法當(dāng)通過這種方法制備微膠囊時，將上述(I)包水干燥方法所述在有機溶劑中包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的溶液經(jīng)由噴嘴噴入噴霧干燥器的干燥腔內(nèi)，由此在極短的階段內(nèi)蒸發(fā)有機溶劑的微粒液滴，制得微膠囊。這樣的噴嘴例如可以是雙流噴嘴、壓力噴嘴、轉(zhuǎn)盤噴嘴等。隨后，如果必要的話通過類似于上述(I)包水干燥方法所述的方法進(jìn)行洗滌，然后冷凍干燥，然后進(jìn)行加熱干燥。
除上述微膠囊以外的微膠囊劑型可以這樣制備，使上述微膠囊制備方法(I)的包水干燥方法所述在有機溶劑中包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽的溶液例如受到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的處理，其中控制真空水平使有機溶劑和水蒸發(fā)至干，然后利用氣流粉碎機等進(jìn)行粉碎，由此得到微細(xì)粉末(也稱微粒體)。
其后，粉碎后的微細(xì)粉末可以通過類似于上述微膠囊制備方法(I)中的包水干燥方法所述的方法進(jìn)行洗滌，然后冷凍干燥，然后進(jìn)行加熱干燥。
這里所得微膠囊或微細(xì)粉末能夠使藥物釋放相當(dāng)于所用乳酸-乙醇酸聚合物的降解速率。
根據(jù)本發(fā)明的緩釋組合物可以是任意劑型，例如微球體、微膠囊、微細(xì)粉末(微粒體)等，它優(yōu)選地是微膠囊的形式。
根據(jù)本發(fā)明的緩釋組合物可以照此配制，或者作為原料，用于制備任何各種劑型，例如肌內(nèi)、皮下或組織注射或植入制劑，鼻、直腸和子宮內(nèi)黏膜制劑，口服制劑(例如固體劑型，例如膠囊劑，包括硬與軟膠囊劑，顆粒劑和粉劑，液體制劑，例如糖漿劑、乳劑和懸液)等。
當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的緩釋組合物配制成注射制劑時，它與下列成分一起配制成水懸液分散劑(例如表面活性劑如Tween 80和HCO-60，多糖如透明質(zhì)酸鈉，羧甲基纖維素，精氨酸鈉等)、防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯)、等滲劑(例如氯化鈉、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、脯氨酸)，或者與植物油一起分散，例如芝麻油和玉米油，制得油懸液，由此得到可實用的緩釋注射制劑。
當(dāng)用作注射制劑懸液時，可接受的緩釋組合物粒徑應(yīng)保證有令人滿意的分散性能和通過注射器針頭，平均粒徑例如可以是約0.1至約300μm，優(yōu)選為約0.5至約150μm，更優(yōu)選為約1至約100μm。
本發(fā)明的緩釋組合物的無菌制劑例如可以通過這樣的方法獲得整個制造過程都是在無菌條件下進(jìn)行的方法、利用γ射線滅菌的方法或加入防腐劑的方法均可，沒有特別的限制。
由于根據(jù)本發(fā)明的緩釋組合物具有低毒性，它能夠作為安全的哺乳動物(例如人、牛、豬、狗、貓、小鼠、大鼠、兔)藥物使用。
本發(fā)明的緩釋組合物的劑量可以因作為主要成分的生理活性物質(zhì)的類型和含量、劑型、藥理活性物質(zhì)釋放的持續(xù)時間、所治疾病和所治動物而異，它可以是藥理活性物質(zhì)的有效量。當(dāng)緩釋制劑是6個月制劑時，作為主要成分的藥理活性物質(zhì)的單次劑量優(yōu)選為約0.01mg至約10mg/kg體重每天每名成人，更優(yōu)選為約0.05mg至約5mg/kg體重。
緩釋組合物的單次劑量優(yōu)選為約0.05mg至約50mg/kg體重每名成人，更優(yōu)選為約0.1mg至約30mg/kg體重。
給藥頻率可以是數(shù)周一次、一月一次或數(shù)月一次(例如3、4或6個月)，這取決于作為主要成分的生理活性物質(zhì)的類型和含量、劑型、藥理活性物質(zhì)釋放的持續(xù)時間。
盡管根據(jù)本發(fā)明的緩釋組合物可以作為預(yù)防和治療劑，用于對抗各種疾病，這取決于其中所含有的藥理活性物質(zhì)的類型，當(dāng)含有LH-RH衍生物作為藥理活性物質(zhì)時，它可以作為預(yù)防和治療劑，用于對抗激素依賴性疾病，尤其是性激素依賴性癌癥(例如前列腺癌、子宮癌、乳腺癌、垂體癌等)、性激素依賴性疾病(例如前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、青春期早熟、痛經(jīng)、經(jīng)閉、經(jīng)前期綜合征、多腔性卵巢綜合征等)，并且可用作避孕劑(或者在節(jié)育后利用反彈作用抗不育癥)。它還可用于治療良性或惡性腫瘤，該腫瘤不是性激素依賴性的，而是LH-RH敏感性的。
實施例根據(jù)下列實施例和實驗對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，并不打算限制本發(fā)明。
實施例1將1.2g 5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLue-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5(以下簡稱肽A，Takeda Chemical Industries，Ltd.)的乙酸鹽溶于1.2ml蒸餾水的溶液與4.62g DL-乳酸聚合物(重均分子量40,600，數(shù)均分子量21,800，末端羧基水平52.7μmol/g)和0.18g 1-羥基-2-萘甲酸溶于8.25ml二氯甲烷與0.45ml乙醇的溶劑混合物的溶液混合，用均化器乳化，形成W/O乳劑。然后，將W/O乳劑倒入預(yù)先保持在15℃下的1200ml 0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，Nippon Synthetic Chemical Industry Co.，Ltd.)的水溶液，用渦輪混合機在7,000rpm下攪拌，形成W/O/W乳劑。將該W/O/W乳劑在室溫下攪拌3小時，使二氯甲烷和乙醇蒸發(fā)或者擴散到外部水層中，然后使油相固化，通過75μm孔徑的篩，在2000rpm下離心5分鐘(05PR-22，Hitachi，Ltd.)，沉淀出微膠囊，然后回收。將微膠囊再次分散在蒸餾水中，再次離心，洗滌除去游離組分，然后回收。向所回收的微膠囊中加少量蒸餾水混合，再次分散。將0.3g甘露糖醇溶于其中，然后將混合物冷凍干燥，得到粉末。微膠囊質(zhì)量的％回收率為46.91％，微膠囊的肽A含量為18.7％，1-羥基-2-萘甲酸含量為2.57％。
實施例2將1.2g肽A的乙酸鹽溶于1.2ml蒸餾水的溶液與4.62g DL-乳酸聚合物(重均分子量40,600，數(shù)均分子量21,800，末端羧基水平52.7μmol/g)和0.18g 3-羥基-2-萘甲酸溶于7.5ml二氯甲烷與0.45ml乙醇的溶劑混合物的溶液混合，用均化器乳化，形成W/O乳劑。其后，將混合物進(jìn)行類似于實施例1的處理，得到微膠囊粉末。微膠囊質(zhì)量的％回收率為53.18％，微膠囊的肽A含量為17.58％，3-羥基-2-萘甲酸含量為2.49％。
實驗1將各約45mg的實施例1和2所得微膠囊分散在0.3ml分散介質(zhì)(0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80、15mg甘露糖醇的蒸餾水溶液)中，經(jīng)由22G注射針頭對7周齡雄性SD大鼠背部皮下給藥。經(jīng)過預(yù)定階段后，處死大鼠，提取剩余在給藥部位的微膠囊，檢查肽A含量，除以最初的含量，得到％殘留率，如表1所示。
表1肽A的％殘留率實施例1 實施例21天 92.9％93.7％2周 74.6％78.8％4周 56.0％58.0％8周 31.6％36.0％12周28.3％32.3％16周24.5％26.8％20周17.8％23.8％26周12.6％15.6％
從表1明顯看出，含有1-羥基-2-萘甲酸的實施例1微膠囊和含有3-羥基-2-萘甲酸的實施例2微膠囊都能夠含有高濃度的藥學(xué)活性物質(zhì)，并且對生理活性物質(zhì)的初期過度釋放表現(xiàn)出極高的抑制作用。這些微膠囊都實現(xiàn)了生理活性物質(zhì)在極長階段內(nèi)以恒定速率緩釋。
實施例3將1.2g肽A的乙酸鹽溶于1.2ml蒸餾水的溶液與4.62g DL-乳酸聚合物(重均分子量32,000，數(shù)均分子量17,800，末端羧基水平72.1μmol/g)和0.18g 3-羥基-2-萘甲酸溶于7.5ml二氯甲烷與0.45ml乙醇的溶劑混合物的溶液混合，并用均化器乳化，形成W/O乳劑。其后，將混合物進(jìn)行類似于實施例1的處理，得到微膠囊粉末。微膠囊質(zhì)量的％回收率為51.2％，微膠囊的肽A含量為18.05％，3-羥基-2-萘甲酸含量為2.42％。
實驗3將約250mg的實施例3所得微膠囊分散在1.5ml分散介質(zhì)(0.75mg羧甲基纖維素、1.5mg聚山梨醇酯80、75mg甘露糖醇的蒸餾水溶液)中，經(jīng)由22G注射針頭對beagle狗臀部肌內(nèi)給藥。另一方面，將約125mg的這種微膠囊分散在0.75ml分散介質(zhì)(0.375mg羧甲基纖維素、0.75mg聚山梨醇酯80、37.5mg甘露糖醇的蒸餾水溶液)中，經(jīng)由22G注射針頭對beagle狗臀部皮下給藥。經(jīng)過預(yù)定階段后，從前臂靜脈采血，檢查肽A和睪酮的血清水平，如表2所示。
表2肌內(nèi)給藥肽A(ng/ml) 睪酮(ng/ml)1天7.33 5.312周0.76 0.464周0.91 0.588周3.65 0.25或以下12周1.56 0.25或以下16周1.14 0.25或以下20周0.59 0.25或以下26周0.53 0.25或以下28周0.48 0.25或以下30周0.33 0.2632周0.37 0.7934周0.22 1.4136周0.14 0.94皮下給藥肽A(ng/ml) 睪酮(ng/ml)1天 17.612.792周 0.99 1.954周 0.62 1.508周 0.76 0.6812周1.77 0.25或以下16周1.57 0.25或以下20周1.23 0.25或以下26周1.93 0.3328周0.35 1.5930周0.25 2.00從表2明顯看出，生理活性物質(zhì)的血液水平保持長達(dá)約26周的階段，其間作為功效指數(shù)的睪酮水平保持在正常水平或更低，然后響應(yīng)于生理活性物質(zhì)血液水平降低，在約28周至34周內(nèi)開始恢復(fù)至正常水平。即使制劑中含有羥萘甲酸，生理活性物質(zhì)也長期穩(wěn)定地存在于微膠囊中，而不喪失其活性，由此被持續(xù)釋放。顯然，穩(wěn)定的功效與給藥方式無關(guān)。
實施例4將86.2g DL-乳酸聚合物(重均分子量28,300，數(shù)均分子量14,700，基于標(biāo)記法的羧基水平69.2μmol/g)溶于67g二氯甲烷的溶液與在210g二氯甲烷和16.2g乙醇中溶解9g 3-羥基-2-萘甲酸所得87.7g溶液混合，調(diào)節(jié)在28.8℃。將219.2g該有機溶劑溶液稱重，與保持在54.8℃下的、20.4g肽A的乙酸鹽溶于18.8g蒸餾水的溶液混合，將混合物攪拌5分鐘，僅粗略乳化，然后用均化器在10,000rpm下乳化5分鐘，形成W/O乳劑。然后將該W/O乳劑冷卻至12.7℃，歷經(jīng)5分又11秒倒入預(yù)先保持在12.7℃下的20L 0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，NIPPON SYNTHETICCHEMICAL INDUSTRY CO.，LTD.)的水溶液，用HOMOMIC LINE FLOW(TOKUSHUKIKAI)在9,000rpm下攪拌，形成W/O/W乳劑。將該W/O/W乳劑調(diào)節(jié)在15℃下達(dá)30分鐘，然后攪拌2小時又30分鐘，且不調(diào)節(jié)溫度，使二氯甲烷和乙醇蒸發(fā)或者擴散到外部水層中，然后使油相固化，通過75μm孔徑的篩，在2000rpm下連續(xù)離心(H-600S，KOKUSANENSHINKI)，沉淀出微膠囊，然后回收。將所回收的微膠囊再次分散在少量蒸餾水中，通過90μm孔徑的篩。將12.3g甘露糖醇溶于其中，然后將混合物冷凍干燥，得到粉末。微膠囊質(zhì)量的收率為84.4g，相當(dāng)于％回收率為75.7％，肽A含量為17.8％，3-羥基-2-萘甲酸含量為2.5％。
實施例5將107.8g DL-乳酸聚合物(重均分子量27,700，數(shù)均分子量15,700，基于標(biāo)記法的羧基水平69.8μmol/g)溶于83.9g二氯甲烷的溶液與在175.8g二氯甲烷和13.5g乙醇中溶解7.5g 1-羥基-2-萘甲酸所得110.2g溶液混合，調(diào)節(jié)在28.2℃。將274.2g該有機溶劑溶液稱重，與保持在52.4℃下的、25.6g肽A的乙酸鹽溶于23.52g蒸餾水的溶液混合，將混合物攪拌5分鐘，僅粗略乳化，然后用均化器在10,080rpm下乳化5分鐘，形成W/O乳劑。然后將該W/O乳劑冷卻至12.5℃，歷經(jīng)3分又42秒倒入預(yù)先保持在13.1℃下的25L 0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，NIPPONSYNTHETIC CHEMICAL INDUSTRY CO.，LTD.)的水溶液，用HOMOMIC LINE FLOW(TOKUSHUKIKAI)在7,000rpm下攪拌，形成W/O/W乳劑。將該W/O/W乳劑調(diào)節(jié)在15℃下達(dá)30分鐘，然后攪拌2小時又30分鐘而不調(diào)節(jié)溫度，使二氯甲烷和乙醇蒸發(fā)或者擴散到外部水層中，然后使油相固化，通過75μm孔徑的篩，在2000rpm下連續(xù)離心(H-600S，KOKUSANENSHINKI)，沉淀出微膠囊，然后回收。將所回收的微膠囊再次分散在少量蒸餾水中，通過90μm孔徑的篩。將15.4g甘露糖醇溶于其中，然后將混合物冷凍干燥，得到粉末。微膠囊質(zhì)量的收率為105.7g，相當(dāng)于％回收率為75.8％，肽A含量為17.8％，1-羥基-2-萘甲酸含量為2.8％。
實施例6將107.6g DL-乳酸聚合物(重均分子量30,800，數(shù)均分子量13,900，基于標(biāo)記法的羧基水平66.3μmol/g)溶于83.3g二氯甲烷的溶液與在175g二氯甲烷和13.5g乙醇中溶解7.5g 1-羥基-2-萘甲酸所得109.7g溶液混合，調(diào)節(jié)在28.7℃。將274.3g該有機溶劑溶液稱重，與保持在51.2℃下的24.89g肽A的乙酸鹽溶于23.49g蒸餾水的溶液混合，將混合物攪拌5分鐘，僅粗略乳化，然后用均化器在10,070rpm下乳化5分鐘，形成W/O乳劑。然后將該W/O乳劑冷卻至12.8℃，歷經(jīng)4分又13秒倒入預(yù)先保持在13.3℃下的25L 0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，NIPPONSYNTHETIC CHEMICAL INDUSTRY CO.，LTD.)的水溶液，用HOMOMIC LINE FLOW(TOKUSHUKIKAI)在7,000rpm下攪拌，形成W/O/W乳劑。將該W/O/W乳劑調(diào)節(jié)在15℃下達(dá)30分鐘，然后不調(diào)節(jié)溫度攪拌2小時又30分鐘，使二氯甲烷和乙醇蒸發(fā)或者擴散到外部水層中，然后使油相固化，通過75μm孔徑的篩，在2000rpm下連續(xù)離心(H-600S，KOKUSANENSHINKI)，沉淀出微膠囊，然后回收。將所回收的微膠囊再次分散在少量蒸餾水中，通過90μm孔徑的篩，與15.4g甘露糖醇混合，溶解，然后將混合物冷凍干燥，得到粉末。微膠囊質(zhì)量的收率為101.9g，相當(dāng)于％回收率為73.1％，肽A含量為17.3％，1-羥基-2-萘甲酸含量為2.9％。
實驗3將各約45mg的實施例5和6所得微膠囊分散在0.3ml分散介質(zhì)(0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80、15mg甘露糖醇的蒸餾水溶液)中，經(jīng)由22G注射針頭對7周齡雄性SD大鼠背部皮下給藥。經(jīng)過預(yù)定階段后，處死大鼠，提取剩余在給藥部位的微膠囊，檢查肽A含量，除以最初的含量，得到％殘留率，如表3所示。
表3肽A的％殘留率實施例5 實施例61天87.0％90.5％1周80.0％83.2％2周72.3％73.5％4周57.6％58.0％8周48.2％46.7％12周 34.5％32.8％16周 23.1％22.0％20周 14.7％13.4％26周 6.1％ 3.3％從表3明顯看出，含有1-羥基-2-萘甲酸的實施例5和6微膠囊的區(qū)別在于作為基質(zhì)的乳酸聚合物的分子量，它們即使各自按約125g規(guī)模制備，也都能夠含有高濃度的藥學(xué)活性物質(zhì)，并且對生理活性物質(zhì)的初期過度釋放表現(xiàn)出極高的抑制作用。這些微膠囊都實現(xiàn)了生理活性物質(zhì)在極長階段內(nèi)以恒定速率緩釋。
工業(yè)實用性本發(fā)明的緩釋組合物含有高濃度的藥理活性物質(zhì)，抑制該物質(zhì)的初期過度釋放，長期(優(yōu)選為約6個月或更長)保持穩(wěn)定的釋放速率。
權(quán)利要求
1.一種緩釋組合物，它包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽，其中所述乳酸-乙醇酸聚合物的重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)所述乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)是生理活性肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)是LH-RH衍生物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸是1-羥基-2-萘甲酸或3-羥基-2-萘甲酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸是1-羥基-2-萘甲酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中乳酸與乙醇酸之間的％摩爾比為100/0至40/60。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中乳酸與乙醇酸之間的％摩爾比為100/0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該聚合物的重均分子量為約3,000至約100,000。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的緩釋組合物，其中該重均分子量為約20,000至約50,000。
10.根據(jù)權(quán)利要求3的緩釋組合物，其中該LH-RH衍生物是由下式代表的肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，Z表示NH-C2H5或Gly-NH2。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中每單位質(zhì)量(g)該聚合物的末端羧基量(μmol)為50至90μmol。
12.根據(jù)權(quán)利要求3的緩釋組合物，其中該羥萘甲酸或其鹽與該LH-RH衍生物或其鹽之間的摩爾比為3∶4至4∶3。
13.根據(jù)權(quán)利要求3的緩釋組合物，它包含以該緩釋組合物為基礎(chǔ)的12重量％至24重量％的LH-RH衍生物或其鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該生理活性物質(zhì)或其鹽是一種微水溶性或水溶性物質(zhì)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，它是注射劑。
16.制備根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物的方法，它包括從藥理活性物質(zhì)或其鹽、乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽與羥萘甲酸或其鹽的混合物中除去溶劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，它包括混合該藥理活性物質(zhì)或其鹽與該乳酸-乙醇酸聚合物或其鹽和該羥萘甲酸或其鹽在有機溶劑中的溶液，分散該混合物，然后除去該有機溶劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中該藥理活性物質(zhì)或其鹽是含有該藥理活性物質(zhì)或其鹽的水溶液。
19.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中該藥理活性物質(zhì)的鹽是與游離堿或酸所生成的鹽。
20.一種藥物，包含根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物。
21.含有根據(jù)權(quán)利要求3緩釋組合物的一種抗前列腺癌、前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、青春期早熟、痛經(jīng)或乳腺癌的預(yù)防或治療劑、或一種避孕劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中該藥理活性物質(zhì)或其鹽是在至少6個月或更長的時期內(nèi)釋放的。
23.一種緩釋組合物，包含藥理活性物質(zhì)或其鹽、1-羥基-2-萘甲酸或其鹽和生物可降解聚合物或其鹽。
全文摘要
緩釋組合物,含有生理活性物質(zhì)或其鹽、羥萘甲酸或其鹽和乳酸－乙醇酸聚合物或其鹽,其中該乳酸－乙醇酸聚合物的重均分子量乘以每單位質(zhì)量(g)乳酸－乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下;和含有這些緩釋組合物的藥物等。
文檔編號A61P5/00GK1361685SQ00810405
公開日2002年7月31日 申請日期2000年7月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月15日
發(fā)明者豬狩康孝, 畑善夫, 山本一路 申請人:武田藥品工業(yè)株式會社