專利名稱：肽的緩釋制劑的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及緩釋復(fù)合物，化合物(I)，它包括具有下式的化合物(A)， 或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及包括聚-(I)-乳酸-羥基乙酸-酒石酸(P(I)LGT)，其中所述化合物(A)的氨基與P(I)LGT的羧基進行離子鍵合。本發(fā)明進一步涉及制備所述緩釋復(fù)合物的方法。更進一步地，本發(fā)明涉及包括所述的緩釋復(fù)合物和藥學(xué)上可接受載體的藥物組合物。
進一步地，由于化合物(A)是促生長素抑制素的類似物，它對于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員是公知的，促生長素抑制素的潛在用途是變化和多種的，本發(fā)明也涉及化合物(A)，化合物(I)或化合物(I)的微粒在需要的患者中的治療疾病或病癥的用途，它包括給予所述患者化合物(A)，化合物(I)或化合物(I)的微粒，其中這類要治療的疾病或病癥選自胃腸病病癥和/或疾病，例如克羅恩氏病、系統(tǒng)性硬化、外部和內(nèi)部胰腺假囊腫和腹水、VIP腫瘤(VlPoma)、胰島細胞增殖癥(nesidoblastosis)、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、腹瀉、與AIDS相關(guān)的腹瀉、與化療相關(guān)的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、胰腺炎、上胃腸道出血、尤其肝硬化患者中的飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、胃食管回流、十二指腸回流，以及在治療內(nèi)分泌學(xué)疾病和/或病癥，例如庫興氏綜合征、促性腺激素瘤(gonadotropinoma)、甲狀旁腺機能亢進、格雷夫斯氏病、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病和多囊卵巢疾?。恢委煾鞣N類型的癌，例如甲狀腺癌、白血病、腦膜瘤和與例如癌惡液質(zhì)的癌癥有關(guān)的病癥；治療如低血壓這類病癥，例如起立性低血壓和食后低血壓以及恐慌發(fā)作。
已經(jīng)發(fā)展、試驗和利用了許多藥物釋放系統(tǒng)以便控制藥物組合物在體內(nèi)釋放。例如聚酯，如聚(DL-乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(ε-己內(nèi)酯)和各種其它共聚物已經(jīng)被用于釋放生物學(xué)活性分子，例如孕甾酮；這些已是以微膠囊、薄膜或棒的形式存在(M.Chasin and R.Langer，editors，Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems，Dekker，NY 1990)。接著移植聚合物/治療劑組合物，例如，皮下或肌內(nèi)地，治療劑經(jīng)特定的時間釋放。設(shè)計這樣的生物-相容的生物可降解的聚合體系，以允許含有的治療劑從聚合物基質(zhì)中擴散。當(dāng)治療劑釋放時，該治療劑的前部分(poller)在體內(nèi)降解，除去外科排除的植入物。盡管并未很好理解有助于前部分降解的因素，確信這樣的聚酯降解可以通過酯鍵與聚合成分非酶自動催化的水解的可及性來調(diào)節(jié)。
幾篇EPO公開申請和美國專利已經(jīng)發(fā)表了聚合物基質(zhì)設(shè)計結(jié)果和其在調(diào)節(jié)治療劑體內(nèi)釋放速率和程度中的作用。
例如，Deluca(EPO公開申請0467389A2)介紹了在疏水生物可降解的聚合物和蛋白或多肽之間的物理相互作用。這種形成的組合物是治療劑和疏水聚合物的混合物，其是在引入受治療者之后持續(xù)從該基質(zhì)中進行擴散釋放。
Hutchinson(美國專利No.4,767,628)通過均勻分散在聚合裝置中來控制治療劑的釋放。它公開了這種制劑通過兩階段的重疊來控制連續(xù)釋放首先，藥物從制劑的表面進行依賴性擴散的浸出；第二，通過由聚合物的降解誘導(dǎo)的水通道來釋放。
PCT公布號WO93/24150公開了包含具有堿基和羧基封端的聚酯的緩釋制劑。
美國專利No.5,612,052介紹了陽離子-交換微粒，它通常由帶有羧基的聚酯鏈制成，堿性生物活性劑在其上固定，以在可吸收的形成凝膠液體聚酯內(nèi)提供控制釋放體系。
美國專利No.5,552,520介紹和要求保護化合物(A)，它已指定給這里的受讓人。
PCT公布號WO97/40085，指定給這里的受讓人，公開了生物可降解的聚酯，它包括乳酸單元、羥基乙酸單元和羥基聚羧酸單元，例如酒石酸或撲酸，以及制備所述聚酯的方法。更具體地，它公開了比例分別為65/33/2的聚-丙交酯-乙交酯-酒石酸聚合物。
PCT公布號WO 94/15587，指定給這里的受讓人，公開了聚酯的離子共軛物，它具有游離的COOH基以及具有至少一種有效的離子型胺的生物活性肽。更具體地，它公開了該聚合物是通過將這種共聚物與蘋果酸或檸檬酸反應(yīng)制備的多羧酸。美國專利No.5,672,659是WO 94/15587的美國國家階段連續(xù)申請。美國專利No.5,863,985是美國專利No.5,672,659的連續(xù)部分。待審的美國申請No.09/237,405為美國專利No.5,863,985之CIP，它額外公開了必須包括檸檬酸、ε-己內(nèi)酯和乙交酯的聚酯；包含剛才前述的聚酯和多肽；作為其成分的一種必須包括酒石酸的聚酯；包含剛才前述的聚酯和多肽的組合物；和前述的棒形的組合物，它可以生物可降解的聚合物選擇性地包衣。
PCT公布號WO 97/39738，指定給這里的受讓人，它公開了制備如WO94/15587介紹的緩釋離子型共軛物的微粒的方法。
前述專利號、申請?zhí)柡凸继柕膬?nèi)容本文從它們的整體上一并參考。
本發(fā)明涉及聚合物聚-丙交酯-乙交酯-酒石酸和化合物(A)的緩釋離子型共軛物的優(yōu)選實施方案，也稱之為化合物(I)，它的特征為化合物(A)由這種共軛物的令人驚訝和不明顯性質(zhì)的零級釋放。更優(yōu)選地，這種離子型共軛物，化合物(I)，是以微粒形式存在。
化合物(I)的優(yōu)選的實施方案是其中聚合物由約72％的丙交酯單元、約27％的乙交酯單元和約1％酒石酸單元組成。
剛才前述的化合物(I)的優(yōu)選的實施方案是其中化合物(A)在化合物(I)中的百分比是約8％至約12％。
另一方面，本發(fā)明涉及包括具有下式的化合物(A)和聚合物的化合物(I)的微粒， 其中這種聚合物包括丙交酯單元、乙交酯單元和酒石酸單元，其中聚合物中的比例為包含約71％至約73％的丙交酯單元，包含約26％至約28％的乙交酯單元；以及包含約1％至約3％的酒石酸單元；并且其中化合物(A)的氨基與聚合物酸單元的羧基進行離子鍵合。
本發(fā)明的優(yōu)選的化合物(I)的微粒，如上文介紹的，是具有約10微米至約100微米平均微粒粒度的微粒。
本發(fā)明的更優(yōu)選的化合物(I)的微粒，如上文介紹的，是具有約40微米至約70微米平均微粒粒度的微粒。
本發(fā)明甚至更優(yōu)選的微粒是其中顯示來自微粒的化合物(A)零級釋放曲線的微粒。
在另一方面，本發(fā)明涉及包括含化合物(I)的微粒的藥物組合物，該化合物(I)包括具有下式的化合物(A)和聚合物， 其中這種聚合物包括丙交酯單元、乙交酯單元和酒石酸單元，聚合物中的比例為包含約71％至約73％的丙交酯單元，包含約26％至約28％的乙交酯單元；以及包含約1％至約3％的酒石酸單元；并且其中化合物(A)的氨基與聚合物酸單元的羧基進行離子鍵合；以及選擇性的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或輔助劑。
進一方面，本發(fā)明涉及在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的如上文介紹的化合物(A)，或者其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述疾病或病癥選自以下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤(VIPoma)、胰島細胞增殖癥(nesidoblastosis)、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤(gonadotropinoma)、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。
更進一方面，本發(fā)明涉及在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的如上文介紹的化合物(I)，其中所述疾病或病癥選自以下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤(VIPoma)、胰島細胞增殖癥(nesidoblastosis)、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤(gonadotropinoma)、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。
又進一方面，本發(fā)明涉及在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的如上介紹的化合物(I)的微粒，其中所述疾病和病癥選自以下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤(VIPoma)、胰島細胞增殖癥(nesidoblastosis)、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤(gonadotropinoma)、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。詳細描述本文采用的與參數(shù)和數(shù)量有關(guān)的術(shù)語″約″，意謂參數(shù)或數(shù)量在闡明的參數(shù)或數(shù)量的±5％之內(nèi)。
本文采用的術(shù)語″微?！?，指包括化合物(A)和聚-丙交酯-乙交酯-酒石酸聚合物的離子型共軛物的微米粒度粒子，它本質(zhì)上優(yōu)選球形。
本申請采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)三個字母縮寫表示氨基酸，例如Phe＝苯丙氨酸；Abu＝α-氨基丁酸。
由于對于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員是公知的，促生長素抑制素的已知和潛在的用途是變化和多種的。已知促生長素抑制素可用于下文所列疾病和/或病癥的治療。促生長素抑制素的各種用途如下概述庫興氏綜合征(參見Clark，R.V.等人，Clin.Res.38，p.943A，1990)；促性腺激素瘤(gonadotropinoma)(參見Ambrosi B.，等人，Acta Endocr.(Copenh.)122，569-576，1990)；甲狀旁腺機能亢進(參見Miller，D.，等人，Canad.Med.Ass.J.，Vol.145，pp.227-228，1991)；佩吉特氏疾病(參見，Palmieri，G.M.A.，等人，J.of Bone and Mineral Research，7，(Suppl.1)，p.S240(Abs.591)，1992)；VIP腫瘤(VIPoma)(參見Koberstein，B.，等人，Z.Gastroenterology，28，295-301，1990 and Christensen，C.，Acta Chir.Scand.155，541-543，1989)；胰島細胞增殖癥和胰島素分泌過多(參見Laron，Z.，Israel J.Med.Sci.，26，No.1，1-2，1990，Wi lson，D.C.，Irish J.Med.Sci.，158，No.1，31-32，1989 and Micic，D.，等人，Digestion，16，Suppl.1.70.Abs.193，1990)；促胃液素瘤(gastrinoma)(參見Bauer，F(xiàn).E.，等人，Europ.J.Pharmacol.，183，55 1990)；卓林格-艾麗遜綜合征(參見Mozell，E.，等人，Surg.Gynec.Obstet.，170，476-484，1990)；與AIDS和其它病癥相關(guān)的分泌過多的腹瀉(歸因于AIDS，參見Cello，J.P.，等人，Gastroenterology，98，No.5，Part 2，Suppl.，A163 1990；歸因于升高的促胃液素-釋放肽，參見Alhindawi，R.，等人，Can.J.Surg.，33，139-142，1990；繼發(fā)性的腸移植對宿主疾病(secondary to intestinal graft vs.host disease)，參見Bianco J.A.，等人，Transplantation，49，1194-1195，1990；與化療有關(guān)的腹瀉，參見Petrelli，N.，等人，Proc.Amer.Soc.Clin.Oncol.，Vol.10，P138，Abstr.No.417 1991)；過敏性腸綜合征(參見O’Donnell，L.J.D.，等人，Aliment.Pharmacol.Therap.，Vol.4.，177-181，1990)；胰腺炎(參見Tulassay，Z.，等人，Gastroenterology，98，No.5，Part2，Suppl.，A238，1990)；克羅恩氏病(參見Fedorak，R.N.，等人，Can.J.Gastroenterology，3，No.2，53-57，1989)；系統(tǒng)性硬化(參見Soudah，H.，等人，Gastroenterology，98，No.5，Part 2，Suppl.，A129，1990)；甲狀腺癌(參見Modigliani，E.，等人，Ann.，Endocr.(Paris)，50，483-488，1989)；牛皮癬(參見Camisa，C.，等人，Cleveland Clinic J.Med.，57，No.1，71-76，1990)；低血壓(參見Hoeldtke，R.D.，等人，Arch.Phys.Med.Rehabil.，69，895-898，1988 and Kooner，J.S.，等人，Brit.J.Clin.Pharmacol.，28，735P-736P，1989)；恐慌發(fā)作(參見Abelson，J.L.，等人，Clin.Psychopharmacol.，10，128-132，1990)；硬化瘤(sclerodoma)(參見Soudah，H.，等人，Clin.Res.，Vol.39，p.303A，1991)；小腸梗阻(參見Nott，D.M.，等人，Brit.J.Surg.，Vol.77，p.A691，1990)；胃食管回流(參見Branch，M.S.，等人，Gastroenterology，Vol.100，No.5，Part 2 Suppl.，p.A425，1991)；十二指腸回流(參見Hasler，W.，等人，Gastroenterology，Vol.100，No.5，Part 2，Suppl.，p.A448，1991)；格雷夫斯氏病(參見Chang，T.C.，等人，Brit.Med.J.，304，p.158，1992)；多囊卵巢疾病(參見Prelevic，G.M.，等人，Metabolism Clinical and Experimental，41，Suppl.2，pp76-79，1992)；上胃腸道出血(參見Jenkins，S.A.，等人，Gut.，33，pp.404-407，1992 and Arrigoni，A.，等人，American Journal ofGastroenterology，87，p.1311，(abs.275)，1992)；胰腺假囊腫和腹水(參見Hartley，J.E.，等人，J.Roy.Soc.Med.，85，pp.107-108，1992)；白血病(參見Santini，等人，78，(Suppl.1)，p.429A(Abs.1708)，1991)；腦膜瘤(參見Koper，J.W.，等人，J.Clin.Endocr.Metab.，74，pp.543-547，1992)；和癌惡液質(zhì)(參見Bartlett，D.L.，等人，Surg.Forum.，42，pp.14-16，1991)。前述參考文獻的內(nèi)容本文一并參考。
申請人現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)化合物(A)，其是一種促生長素抑制素激動劑，化合物(I)和化合物(I)的微粒，在治療上文指出的病癥、紊亂和疾病中特別有用。常規(guī)方法共聚物的形成由L-丙交酯、乙交酯和L(+)-酒石酸組成的共聚物可以按照本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的方法制備，并在本文中能夠使用。相應(yīng)地，反應(yīng)器裝填乙交酯、L-丙交酯和L(+)-酒石酸單體以及2-乙基己酸亞錫的甲苯溶液。L-丙交酯、乙交酯和L(+)-酒石酸的摩爾百分比分別優(yōu)選是約72/27/1。
L(+)-酒石酸預(yù)先干燥，優(yōu)選在Abderhalden干燥器中于二氧化硅凝膠上干燥約10小時。反應(yīng)器接著置于真空下并同時攪拌以除去甲苯。然后在一大氣壓的無氧氮氣下加熱反應(yīng)器，優(yōu)選浸漬在油浴中，溫度＝大約180℃至190℃，攪拌升高至約125rpm。浸漬之前，加熱帶置于反應(yīng)器蓋上。記錄徹底熔化反應(yīng)器成分所花費的時間，對于約300g荷載在約180℃下一般約為15分鐘。在合成期間每小時采樣并通過GPC分析以確定殘余單體的百分比，并且通過數(shù)量(Mn)和通過重量(Mw)分布獲得平均分子量的值。一般的反應(yīng)時間大約為9至15小時。通過確定酸值meq/g的滴定和測定殘余的未反應(yīng)的單體含量的GC分析最終的聚合物。進一步的分析包括IR(C＝O特征峰的檢測)；NMR(聚合物內(nèi)丙交酯和乙交酯含量的檢測)和殘余錫(殘余錫的檢測歸因于2-乙基己酸亞錫作為催化劑的使用)。
以上共聚物的純化/鈉鹽形成除去殘余的單體(一般＜5％(W/W))并且共聚物一步內(nèi)轉(zhuǎn)化成其鈉鹽形式(以促進離子鹽形成)。聚-L-乳酸-共-羥基乙酸-共-L(+)酒石酸共聚物(PLGTA)通過在超聲浴中超聲溶于丙酮，以產(chǎn)生濃度為19-21重量％PLGTA的溶液。
向此溶液中加入無機堿例如NaOH或Na2CO3的弱堿溶液，優(yōu)選采用0.2M的碳酸鈉-Na2CO3，以便所得的鈉濃度1至2倍摩爾過剩，優(yōu)選1.2倍摩爾過剩于共聚物羧基基團。溶液室溫下攪拌約15至60分鐘，優(yōu)選30分鐘，以有助于鈉鹽形成。接著以約50至300ml/分鐘，優(yōu)選約100ml/分鐘，加入到含有去離子水的夾套反應(yīng)器，采用循環(huán)浴冷卻至大約1至4℃，優(yōu)選2.5℃；水量大約是20至30倍體積過量于丙酮，優(yōu)選20∶1體積過量于丙酮。采用連接在攪拌馬達上的平槳以足以產(chǎn)生表面湍流的速率攪拌水，以便在沉淀期間避免聚合物結(jié)塊。
一旦沉淀完成，繼續(xù)分散進一步攪拌30至60分鐘以在置入離心瓶之前有助于單體清除，并且旋轉(zhuǎn)。丟棄上層清液并在去離子水中進一步再懸浮餅狀物、再旋轉(zhuǎn)和干燥，優(yōu)選冷凍干燥。
離子型共軛的化合物(A)聚合物的制備該合成需要使得在兩者均可溶的介質(zhì)中結(jié)合化合物(A)成為這種共聚物的鈉鹽，介質(zhì)優(yōu)選3∶1(W/W)乙腈∶水，接著在去離子水中沉淀所得的離子型共軛物并回收形成的水不溶性的共軛沉淀物。
化合物(A)的醋酸鹽的去離子水溶液加入到含有洗過的12,000MW71/28/1至73/26/1 PLGTA的Na鹽乙腈溶液(范圍24-26％(W/W)溶液)中，向其中加入例如0.5M Na2CO3的弱堿以便相對于化合物(A)醋酸鹽的醋酸鹽含量，產(chǎn)生大約1.05摩爾的過量Na，并攪拌大約5分鐘以提供堿性環(huán)境，優(yōu)選pH8，以中和化合物(A)的醋酸基團。乙腈∶水的近似重量比＝3∶1?；谛枰哪繕?biāo)荷載(通常大約8％至大約12％)，測定需要的化合物(A)的數(shù)量。由此，測定中和化合物(A)的醋酸鹽所需的碳酸鈉水溶液的體積，并且基于希望的最后乙腈∶水(包括加入的碳酸鈉)大約3∶1的體積比，計算最后用于化合物(A)溶解的水的體積。
在約0至5℃，優(yōu)選2.5℃，將化合物(A)-共聚物溶液攪拌約10至15分鐘，以在兩種成分之間促進離子鍵合并阻礙共價鍵合(通過使用低溫)。接著溶液以大約50至300ml/分鐘的速率流入約20-30至1體積過量于前述3∶1乙腈-水溶液的乙腈體積的去離子水，以足以提供表面攪動和避免結(jié)塊的速率攪拌，并在連接循環(huán)浴的夾套反應(yīng)器中冷卻至約1至4℃，優(yōu)選1.7℃。
當(dāng)沉淀完成時繼續(xù)分散以進一步攪拌30至60分鐘，以助于在置于離心瓶之前清除水溶性化合物(A)-低聚物化合物(低聚物是PLGTA那些較低的分子量部分，它是不希望的，由于它們是水溶的)，在離心機中以約5000rpm旋轉(zhuǎn)約15分鐘。所得的離心餅狀物再懸浮于去離子水中并再旋轉(zhuǎn)。接著將它們冷凍并通過冷凍干燥進行干燥2天，回收化合物(I)(化合物(A)離子鍵合PLGTA)。通過上層清液的未結(jié)合的化合物(A)的HPLC分析和氮分析測定荷載(化合物(A)氮含量是已知的，無論如何聚合物不含氮)。由化合物(I)提取化合物(A)，接著進行HPLC分析也能夠確定荷載。
化合物(I)霧化為了提供良好適合于注射給患者的制劑，通過溶解在乙酸乙酯中并采用超聲噴霧法(a.k.a.霧化)以將溶液噴入大約-60℃至-78℃的冷溫的乙醇、異丙醇或己烷和異丙醇(優(yōu)選異丙醇)的混合物中，接著與冷卻的異丙醇接觸，這導(dǎo)致化合物(1)微球的形成，從而將化合物(I)配制成微球體。化合物(I)乙酸乙酯溶液可以經(jīng)穿過0.2μm的濾器滅菌。
化合物(I)溶于乙酸乙酯中，優(yōu)選通過超聲/攪拌以產(chǎn)生約8％至約12％(W/W)溶液，優(yōu)選12％，取決于聚合物分子量和化合物(A)荷載，它們都可以改變?nèi)芤赫扯?。它以約4.90ml/分鐘至5.10ml/分鐘(優(yōu)選5.00ml/分鐘)加入到工業(yè)噴霧器或霧化器(功率-約70％，振幅-約80％，頻率-約34至35kHz，優(yōu)選34.50kHz；一般霧化器應(yīng)該是充分大功率的，以產(chǎn)生可均勻霧化的頻率(無″吐沫″)中，化合物(I)乙酸乙酯溶液濃度為約8％至約12％(W/W)，這樣的濃度導(dǎo)致實心微球的形成，并且這種頻率應(yīng)該是能得到在40微米和70微米之間的平均粒度的頻率，這樣的粒度允許容易經(jīng)21-量規(guī)(gauge)或19-量規(guī)針注射)，并且噴霧入與乙酸乙酯體積相比體積過量20至30倍優(yōu)選20倍的異丙醇(IPA)中，將其冷卻至約-60℃至約-78℃，可達到冷卻，(例如，經(jīng)夾套反應(yīng)器，加入干冰或插入冷卻盤管)并在至少約200rpm攪拌(以避免微球體團聚)。溫度約為6℃的去離子水優(yōu)選以1.5L/分鐘的速率流入夾套霧化器以消除任何可引起歸因于乙酸乙酯蒸發(fā)的霧化器噴嘴結(jié)垢的局部熱效應(yīng)。均勻地霧化該溶液，觀察到在IPA中形成的灰白色的顆粒狀分散體。在通過125μm篩(以清除任何大的非注射的小滴/顆粒)之前允許它們在約0℃至約22℃之間、約30分鐘至2小時的時期內(nèi)融解，并且經(jīng)Whatman no.1濾紙真空過濾。濾餅進一步以IPA清洗并且接著真空干燥。
本發(fā)明通過下述實施例舉例說明，但是并不由其細節(jié)限制。
實施例1P(I)LGTA(72/27/1)和化合物A的離子共軛物步驟A300g P(I)LG/酒石酸共聚物(I-丙交酯∶乙交酯∶酒石酸＝72∶27∶1)的合成用乙交酯(Purac Biochem，荷蘭，68.71g)、丙交酯(Purac Biochem，荷蘭，227.53g)和L(+)-酒石酸(Riedel-de Haen，Seelze，德國，品號33801，3.75g)和2-乙基己酸亞錫(Sigma，St.Louis，Missouri，USA，品號S-3252)的甲苯(Riedel-de Haen，Seeize，德國)溶液(0.0982M，4.47ml)的單體填充反應(yīng)器。L-丙交酯、乙交酯和L(+)-酒石酸相應(yīng)的摩爾百分比分別是71.81％；26.82％；和1.36％。
L(+)-酒石酸在Abderhalden干燥器中預(yù)先經(jīng)二氧化硅凝膠(Riedel-de Haen，Seelze，德國)干燥約10小時。接著將該反應(yīng)器(經(jīng)液態(tài)氮阱連接至泵)置于真空下(0.04 mbar)同時攪拌約50分鐘以清除甲苯。然后在無氧氮氣氛下，將該反應(yīng)器(BOC氣體，都柏林，愛爾蘭，8VPM濕量)，浸漬入油浴(溫度＝-180℃)并且攪拌升至125rpm。浸漬之前，加熱帶(Thermolyne型45500，輸入控制裝置＝4)置于反應(yīng)器蓋上。記錄完全熔化反應(yīng)器物料所花費的時間，一般對于300g的荷載在約180℃約為15分鐘。在合成期間每小時采樣并通過GPC分析以測定剩余單體的百分比，并且通過數(shù)量(Mn)和通過重量(Mw)分布獲得平均分子量的值。一般的反應(yīng)時間為約15小時級。通過測定酸值meq/g的滴定和通過測定剩余的未反應(yīng)的單體含量的GC亦分析最終的聚合物。進一步分析包括IR(C＝O特征峰的檢測)；NMR(聚合物內(nèi)丙交酯和乙交酯含量的檢測)和剩余錫(剩余錫的檢測歸因于2-乙基己酸亞錫作為催化劑的使用)。
步驟B純化/以上共聚物的鈉鹽形成除去剩余單體(一般＜5％(W/W))并且共聚物一步轉(zhuǎn)化成其鈉鹽形式(以促進離子鹽形成)。81.05g的12000g/摩爾的72/27/1聚-L-乳酸-共-羥基乙酸-共-L(+)酒石酸共聚物(滴淀的酸值＝0.231meq/g通過在超聲浴中超聲溶于324.24g的丙酮(Riedel-de Haen，Seelze，德國)中，以得到濃度為20.00重量％PLGTA的溶液。
向此溶液中加入56.17ml的0.2M Na2CO3(Aldrich，Gillingham，Dorset，UK)，從而提供基于共聚物羧基基團過量1.2倍摩爾鈉。該溶液于室溫下攪拌約30分鐘以助于鈉鹽形成。接著以約100ml/分鐘流入含有8.2L去離子水的10L夾套反應(yīng)器(約20∶1體積過量于丙酮，采用循環(huán)浴(Huber，Offenburg，德國)冷卻至約2.5℃)。在800rpm攪拌該水以便產(chǎn)生表面湍流，采用連接在攪拌馬達上的平槳以便在沉淀期間避免聚合物結(jié)塊。
一旦沉淀完成，繼續(xù)分散，進一步攪拌30分鐘以在置入離心瓶之前有助于單體清除，在Sorvall離心機(DuPont Sorvall Products，Wilmington，Delaware，USA)中以5000rpm旋轉(zhuǎn)約15分鐘。丟棄上層清液并在去離子水中進一步再懸浮餅狀物、再旋轉(zhuǎn)，以及在下一天于小規(guī)模冷凍干燥機(Edwards，Crawley，West Sussex，UK)干燥之前在冰箱(-13℃)冷凍過夜。這種冷凍干燥機含有非冷凍劑體系。5天的冷凍干燥之后回收65.37g的洗過的共聚物，收率為80.65％。
步驟C化合物(I)的制備1.27g化合物(A)醋酸鹽(愛爾蘭，都柏林，Kinerton有限公司97K-8501批次，效力＝85.8％(效力指存在于肽醋酸鹽內(nèi)的游離堿肽百分比)；醋酸鹽＝10.87％的5.87g去離子水中加入到由8.01g的洗過的12,000MW 71/27/1 PLGTA Na鹽的24.84g乙腈(Riedel de-Haen)(24.38％(W/W)組成的溶液，向其中加入2.41ml 0.5M Na2CO3(這對應(yīng)于基于化合物(A)-醋酸鹽的醋酸根含量過量1.05的Na)，并攪拌約5分鐘以提供用于中和化合物(A)醋酸根的堿性環(huán)境。乙腈∶水的近似重量比＝3∶1?；谛枰哪繕?biāo)荷載，測定需要的化合物(A)的數(shù)量。由此，測定中和化合物(A)的醋酸鹽所需的碳酸鈉水溶液的體積，并且基于希望的最后乙腈∶水(包括加入的碳酸鈉)大約3∶1的體積比，計算最后用于化合物(A)溶解的水的體積。
在約2.5℃下，化合物(A)-共聚物溶液攪拌約15分鐘，以在兩種成分之間促進離子鍵合并阻礙共價鍵合。然后溶液以大約100ml/分鐘的速率流入630ml(大約20∶1體積過量于乙腈)以350rpm攪拌的去離子水(提供表面攪動和避免化合物(A)共聚物結(jié)塊)中，并在6L連接循環(huán)浴的夾套反應(yīng)器中冷卻至約1.7℃。
當(dāng)沉淀完成時繼續(xù)分散進一步攪拌30分鐘，以助于在置于離心瓶之前清除水溶性化合物(A)-低聚物化合物，并在Sorvall離心機(DuPontSorvall Products，Wilmington，Delaware，USA)中以約5000rpm旋轉(zhuǎn)約15分鐘。所得的離心餅狀物在去離子水中再懸浮并再旋轉(zhuǎn)。接著將它們冷凍并通過冷凍干燥將其干燥2天?；厥?.30g的標(biāo)題化合物，相應(yīng)收率91.38％。通過上層清液的未結(jié)合化合物(A)的HPLC分析和氮分析測定荷載(化合物(A)氮含量是已知的，無論如何聚合物都不含有氮)。由化合物(I)提取化合物(A)，接著通過HPLC分析也能夠確定荷載，對于本實施例它是11.25％。
步驟D化合物(I)霧化由步驟C得到的8.27g化合物(I)通過超聲/攪拌(室溫)溶于60.77g的乙酸乙酯中以得到12.00％(W/W)溶液。它以5ml/分鐘流入工業(yè)噴霧器/霧化器(Martin Walter Powersonic Model MW400GSIP，得自Sodeva，法國)，功率＝70％，振幅＝80％，頻率＝34.50kHz并噴霧入到冷卻至-74±4℃(經(jīng)夾套反應(yīng)器得到冷卻)并在夾套反應(yīng)器以200rpm攪拌(以避免微球體結(jié)塊)的1.35L的異丙醇(IPA)(與乙酸乙酯體積相比20倍體積過量)。于6℃溫度下的去離子水以1.5L/分鐘的速率流入夾套霧化器以消除任何可引起歸因于乙酸乙酯蒸發(fā)的霧化器噴嘴結(jié)垢的局部熱效應(yīng)。均勻地霧化溶液，觀察到在IPA中形成的灰白色的顆粒狀分散體。在通過125μm篩(以清除任何大的非注射的小滴/顆粒)之前允許其在約0℃-4℃之間、約30分鐘至2小時的時期內(nèi)融解，并且經(jīng)Whatman no.1濾紙真空過濾。該濾餅進一步以IPA清洗并且接著真空干燥。獲得6.88g的可注射的物質(zhì)，相應(yīng)收率為83.19％?；衔?I)的微粒具有約54微米的平均粒度。
按照下列描述可以測試化合物(A)從化合物(I)微粒的體內(nèi)釋放。設(shè)計體內(nèi)研究，在化合物(I)的微粒肌內(nèi)給予雄性Beagle狗之后，借助于化合物(A)在其給藥之后的藥動學(xué)的曲線來評價化合物(A)的體內(nèi)釋放曲線。
化合物(I)的微粒藥物制劑肌內(nèi)地給予后腿肌。接著對六只狗一組每只狗按藥物形式，以照射過或未照射過的制備的含化合物(I)微粒的藥劑一次肌內(nèi)給藥(注射的微粒數(shù)量對應(yīng)于5mg的化合物(A)，根據(jù)化合物(A)在化合物(I)的荷載測定是11.23％)。在血清樣品中化合物(A)的定量和藥動學(xué)分析如下實施。
在注射(時間0)，和5、15和30分鐘；1、2、4、8和12小時；1、2、3和4天之前從狗中進行血液采集；然后在第一個月之內(nèi)每周兩次(例如在星期一和星期四)；最后從第二個月每周一次直至完成試驗，那時不再檢測到化合物(A)的血清水平。然而，記錄血液采集的實際時間并用于藥動學(xué)分析。時間0(肌注給藥之前)和肌注之后7、21、35、56和84天的血樣(5ml)，以及剩余取樣時間的血樣(4ml)，經(jīng)頸靜脈或頭靜脈在規(guī)定的時間采集。
樣品分兩部分放置在確定的固定取樣時間約2.5ml或3.5ml的一部分位于分別含50和80μl抑肽酶溶液的試管中(10ml的抑肽酶500000KJU凍干(lypophillised)并在2ml p.p.i.水中再稀釋)，約1.5ml的另一部分允許保持試管中。
在紅細胞凝塊之后，該試管在30000r.p.m于+4℃下離心20分鐘。隔離含抑肽酶的血清并在-20℃分兩部分貯藏直至該樣品被用于化合物(A)的分析。
通過放射免疫測定法分析血清樣品內(nèi)化合物(A)濃度。每天繪制空白狗血漿和化合物(A)標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。按這種方法，對于狗血清樣品內(nèi)化合物(A)的定量限度約是0.050納克(ng)/ml。曲線(AUC)下的面積和最大血清濃度(Cmax)通過供應(yīng)的劑量標(biāo)準(zhǔn)化(給予每只動物的劑量以μg/kg表示)。也計算吸收率指數(shù)(Cmax/AUC)。
前述試驗的結(jié)果如

圖1所示。
化合物(A)或其藥學(xué)上可接受的鹽，化合物(I)或化合物(I)微?？梢越?jīng)口服、非腸道的(例如，肌內(nèi)的，腹膜內(nèi)的，靜脈內(nèi)的或皮下注射，或者植入物)、經(jīng)鼻、陰道的、直腸的、舌下的或局部給藥途徑給藥，并且可以與藥學(xué)上可接受的載體配制，以提供適于每種給藥途徑的劑型。
適于口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這類固體劑型中，活性化合物與至少一種藥學(xué)上可接受的惰性載體例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。這類劑型也可包括，當(dāng)為通常的慣例時，除了這樣的惰性稀釋劑外，額外的物質(zhì)，例如，潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊劑、片劑和丸劑情形下，這些劑型也包括緩沖劑。片劑和丸劑可另外以腸衣制備。
口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑、酏劑，它們含有本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如水。除了這類惰性稀釋劑之外，組合物亦包括輔助劑，例如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑，以及增甜劑、調(diào)味劑和香料。
非腸道給藥的制劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液或乳劑。非水溶劑或載體的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油，例如橄欖油和玉米油，明膠，以及可注射的有機酯，例如油酸乙酯。這類劑型也可含有輔助劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。它們可以通過，例如，經(jīng)留住細菌的濾器過濾器，通過向組合物中摻入滅菌劑，通過照射組合物，或者通過加熱組合物來滅菌。它們也可制備成可溶于無菌水中的無菌固體組合物的形式，或一些其它的在使用之前立即可注射的介質(zhì)。
直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選是栓劑，除了活性物質(zhì)之外，它含有賦形劑，例如古柯脂或栓劑蠟。
也可以以本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)賦形劑制備鼻或舌下給藥的組合物。
化合物(I)的微粒優(yōu)選經(jīng)非腸道給藥或經(jīng)口給藥。
通過護理的主治醫(yī)師或獸醫(yī)可確定對患者給藥的化合物(I)的微粒的有效劑量，它取決于預(yù)期的化合物(A)的適當(dāng)劑量以及化合物(A)在化合物(I)的微粒中的荷載。這樣的劑量或者是已知的或者可以通過本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員確定。劑量優(yōu)選應(yīng)在患者中產(chǎn)生至少200微微克/ml水平的化合物(A)。
立即或緩釋組合物的使用取決于目標(biāo)適應(yīng)征的類型。如果適應(yīng)征包括急性的或超急性疾病，相對于緩釋組合物立即釋放形式的治療是優(yōu)選的。反之，對于預(yù)防性或長期治療，緩釋組合物通過是優(yōu)選的。
一般地，上胃腸道出血適應(yīng)征符合在約5天期間以約80至120μg/天每人的劑量急性或超急性治療。在內(nèi)窺鏡檢查治療之后，可以采用化合物(A)的微?；蚱渌忈寗┬妥鳛槌Ｒ?guī)治療的輔助劑進行抗復(fù)發(fā)的預(yù)防性治療。
對于除了上胃腸道出血之外的、需要更長期治療的其它適應(yīng)征，優(yōu)選使用化合物(I)的微粒。
權(quán)利要求
1.一種包括具有下式的化合物(A)和聚合物的化合物(I)， 其中聚合物包括丙交酯單元、乙交酯單元和酒石酸單元，聚合物中的比例為包含約71％至約73％的丙交酯單元，包含約26％至約28％的乙交酯單元；以及包含約1％至約3％的酒石酸單元；并且這里化合物(A)的氨基與聚合物酸單元的羧基基團離子鍵合。
2.按照權(quán)利要求1的化合物(I)，其中聚合物由約72％丙交酯單元、約27％乙交酯單元和約1％酒石酸單元組成。
3.按照權(quán)利要求2的化合物(I)，其中化合物(I)中化合物(A)的百分比是約8％至約12％。
4.按照權(quán)利要求1的化合物(I)，其中所述的化合物(I)是微粒形式。
5.按照權(quán)利要求4的微粒，其中平均微粒粒度是約10微米至約100微米。
6.按照權(quán)利要求5的微粒，其中平均微粒粒度是約40微米至約70微米。
7.按照權(quán)利要求6的微粒，其中所述的微粒顯示化合物(A)的零級釋放曲線。
8.一種藥物組合物，其包括權(quán)利要求4的微粒和藥學(xué)上可接受載體、稀釋劑或輔助劑。
9.一種在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的下式化合物(A)， 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述疾病或病癥選自下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤、胰島細胞增殖癥、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。
10.一種在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的權(quán)利要求1的化合物(I)，其中所述疾病或病癥選自下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤、胰島細胞增殖癥、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。
11.一種在需要的患者中治療疾病或病癥的方法，它包括給予所述患者有效量的權(quán)利要求4的微粒，其中所述疾病和病癥選自下組系統(tǒng)性硬化、胰腺假囊腫、胰腺腹水、VIP瘤、胰島細胞增殖癥、胰島素分泌過多、促胃液素瘤、卓林格-艾麗遜綜合征、分泌過多的腹瀉、硬皮病、過敏性腸綜合征、上胃腸道出血、飯后門靜脈高血壓、門靜脈高血壓并發(fā)癥、小腸梗阻、十二指腸回流、庫興氏綜合征、促性腺激素瘤、甲狀旁腺機能亢進、糖尿病性神經(jīng)病、黃斑變性、惡性腫瘤的高血鈣、佩吉特氏病、腦膜瘤、癌惡液質(zhì)、牛皮癬、低血壓以及恐慌發(fā)作。
全文摘要
本發(fā)明涉及到緩釋復(fù)合物,化合物(I),它包括具有式(A)的化合物(A)或其藥學(xué)上可接受的鹽,和包括聚－(I)－乳酸－羥基乙酸－酒石酸(P(I)LGT)的共聚物,其中所述化合物(A)的氨基與P(I)LGT的羧基進行離子鍵合。本發(fā)明進一步涉及制備所述緩釋復(fù)合物的方法。更進一步地,本發(fā)明涉及包括所述緩釋復(fù)合物和藥學(xué)上可接受載體的藥物組合物。
文檔編號A61K38/00GK1368892SQ00811494
公開日2002年9月11日 申請日期2000年8月16日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月18日
發(fā)明者杰昆西·P·摩里憂 申請人:研究及應(yīng)用科學(xué)協(xié)會股份有限公司