專利名稱：治療和/或抑制體重增加的方法
本申請(qǐng)要求1999年7月6日提交的U.S.臨時(shí)申請(qǐng)第60/142,407號(hào)的優(yōu)先權(quán)。發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種治療和/或預(yù)防肥胖(尤其是腹部肥胖)地方法，并且涉及治療或抑制包括人體在內(nèi)的易感溫血?jiǎng)游镏蝎@得異常胰島素耐藥性的方法。所述的方法包括施用下述通式I的化合物或其藥物組合物。在其他實(shí)施方式中，所述的方法包括施用與性類固醇前體聯(lián)合的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(“SERM”)。相關(guān)
背景技術(shù)：
肥胖，一種以身體脂肪過(guò)多為特征的病癥，被公認(rèn)為是多種疾病的危險(xiǎn)因素，這些疾病諸如是心血管疾病、高血壓、糖尿病和乳腺癌。此外，個(gè)人外表在大多數(shù)人的整體健康形象中起著重要作用。
肥胖的普通療法，如多種飲食(包括節(jié)食性飲食)、體重減輕計(jì)劃和運(yùn)動(dòng)對(duì)于許多人來(lái)說(shuō)產(chǎn)生不同程度的成功效果。然而，對(duì)于那些采用現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有顯著效果的人來(lái)說(shuō)仍然需要其他技術(shù)，或者用來(lái)作為現(xiàn)有技術(shù)的補(bǔ)充。
近來(lái)，公開(kāi)了一些用于治療或預(yù)防肥胖的雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P 0 659 423 A1中的雷洛昔芬(raloxifene)及其有關(guān)化合物；歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P 0 716 855 A2中具有苯并噻吩母核的的雌激素激動(dòng)劑；國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/DK96/00011中的3，4-二苯基色滿類化合物；國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/IB95/00286中的萘基(naphtyl)雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑。
另?yè)?jù)報(bào)導(dǎo)另一種雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑他莫昔芬在雌性大鼠中可以預(yù)防舒必利引起的體重增加(Baptista等，Pharmacol.，Biochem.Behav.(1997)，57(1/2)，215-222)。也有報(bào)導(dǎo)稱，他莫昔芬在大鼠中可以模擬雌二醇對(duì)食物攝取量、體重和機(jī)體組成的作用(Wade等，American Journal of Physiology 1993，33(6)，R1219-1223)。
DHEA在肥胖的治療和/或預(yù)防中也具有有益效果。在老齡Sprague-Dawley大鼠中，Schwartz(在Kent，Geriatrics 37157-160，1982中)已經(jīng)觀察到在DHEA的作用下體重由600減輕到550g，同時(shí)不影響食物攝取量。Schwartz(Cancer 391129-1132，1979)觀察到給予了DHEA(450mg/kg，每周3次)的C3H小鼠體重明顯降低且變得比對(duì)照動(dòng)物衰老，具有較少脂肪，而且更加活躍。體重得以減輕，而不需喪失食欲或節(jié)食。此外，DHEA能夠預(yù)防飼養(yǎng)動(dòng)物導(dǎo)致其在成年期變肥胖的體重增加(在Kent，Geriatrics 37157-160，1982中)。
盡管增加了食物攝取量，DHEA對(duì)瘦型Zucher大鼠的給藥可以降低體重增量。因此，經(jīng)處理動(dòng)物具有較小的脂肪墊，總之，這表明DHEA可以加強(qiáng)食物代謝，由此降低體重和脂肪蓄積(Svec等，Proc.2nd Int.Conf.Cortisol and Anti-Cortisols，Las Vegas，Nevada，USA，p.56 abst.，1997)。
在AVY突變型小鼠(Yen等，Lipids 12409-413，1977)和Zucker大鼠(Cleary和Zisk，F(xiàn)ed.Proc.42536，1983)中發(fā)現(xiàn)肥胖得到改善。DHEA處理的C3H小鼠具有比對(duì)照物更加年輕的外表(Schwartz，Cancer Res.391129-1132，1979)。
腹部脂肪與冠狀乳腺病的代謝危險(xiǎn)因子有關(guān)聯(lián)(Imbault等Metabolism 1999，48(3)，355-62；Ledoux等(CMAJ 1997，157.Suppl.1；46-53)。發(fā)明概述
所以，本發(fā)明的一個(gè)目的在于減少脂肪組織，尤其是腹部脂肪。
本發(fā)明的另一目的是降低冠心病和其他以肥胖或過(guò)度脂肪組織為危險(xiǎn)因素的疾病或病癥的危險(xiǎn)性。
在一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種新的治療或抑制包括人類在內(nèi)的易感溫血?jiǎng)游镏畜w重增加的方法，該方法包括給需要這種治療或抑制的對(duì)象施用治療有效量的含或不含有藥學(xué)稀釋賦形劑或載體的至少一種通式I的化合物
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
在另一實(shí)施方式中，施用選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑或其可藥用鹽以減少腹部脂肪或降低腹部脂肪的蓄積。
在另一實(shí)施方式中，除了選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)以外施用性類固醇前體(如脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇)可用于治療肥胖或用于抑制體重增加。相信年齡等于或大于50歲的人群應(yīng)對(duì)該聯(lián)合療法反應(yīng)良好，這可能是由于前體的水平會(huì)隨著年齡趨于不期望的降低。
所以，在該方面，本發(fā)明提供一種治療肥胖或抑制體重增加的方法，該方法包括給需要上述抑制或治療的對(duì)象施用治療有效量的含或不含藥學(xué)稀釋劑或載體的至少一種SERM和有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇的性類固醇前體和體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為任何上述前體的化合物。
另一方面，本發(fā)明提供一種治療或減小產(chǎn)生胰島素耐藥性的危險(xiǎn)的方法，該方法包括給需要這種治療或減小的對(duì)象施用治療有效量的至少一種SERM。在一些實(shí)施方式中，有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為它們的化合物的性類固醇前體也成為該聯(lián)合療法的組成部分。
另一方面，本發(fā)明提供一種治療肥胖的試劑盒，其包含第一容器和第二容器，該第一容器包含至少一種SERM，并且該第二容器包含至少一種性類固醇前體，所述的性類固醇前體選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為它們的化合物。
也可以在一個(gè)或多個(gè)容器中提供藥學(xué)賦形劑載體或稀釋劑，并且可以包括本領(lǐng)域中已知的防腐劑和其他添加劑。上述物質(zhì)也可以與本發(fā)明多種實(shí)施方式中所用的任何活性成分包含在一起。
在此所用的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)是指在乳房組織中直接或者通過(guò)其活性代謝物起雌激素受體拮抗劑作用(“抗雌激素”)，而且對(duì)機(jī)體脂肪、骨組織和血清膽固醇水平產(chǎn)生雌激素樣作用(即降低血清膽固醇)的化合物。在體外或人體中或大鼠乳腺組織中作為雌激素受體拮抗劑發(fā)揮作用的非甾類化合物可能會(huì)具有SERM的作用(尤其是如果該化合物作為抗雌激素對(duì)人體乳腺癌細(xì)胞起作用)。我們?cè)囼?yàn)并發(fā)現(xiàn)的可作為SERM發(fā)揮作用的非甾類抗雌激素包括EM-800、EM-652、EM-652.HCl(EM-01538)、雷洛昔芬、他莫昔芬、艾多昔芬、托立美芬(Torimefene)、LY353381、LY335563、GW5638和屈洛昔芬(下文將作更加詳細(xì)的描述)。按照本發(fā)明的任意實(shí)施方式，當(dāng)作為抗雌激素使用時(shí)，SERM類物質(zhì)適宜采取現(xiàn)有技術(shù)中已知的相同劑量給藥。
不受任何理論地約束，SERM類物質(zhì)，其中許多優(yōu)選帶有兩個(gè)經(jīng)1或2個(gè)碳原子連接的芳環(huán)，被認(rèn)為可借助于該分子的上述部分與雌激素受體相互作用，這些部分可以被受體很好識(shí)別。所述的SERM類物質(zhì)也帶有側(cè)鏈，其可以選擇性地在乳腺和子宮內(nèi)膜組織中引起拮抗特性但對(duì)其他組織、尤其是骨骼沒(méi)有明顯的拮抗特性。所以，SERM類物質(zhì)可以在乳腺和子宮內(nèi)膜中作為抗雌激素發(fā)揮預(yù)期作用，同時(shí)對(duì)機(jī)體脂肪具有令人驚奇的且為人們所期望的雌激素樣活性。
本發(fā)明還包括按期望抑制附加體重的增加或如愿地減輕體重，即使無(wú)法達(dá)到正常體重。
在此所用的術(shù)語(yǔ)“肥胖”是指導(dǎo)致體重增加的脂肪組織的過(guò)量。本發(fā)明的預(yù)防和治療方法包括抑制體重增加并誘導(dǎo)體重減輕。本發(fā)明包括通過(guò)使肥胖者體重降低至(并維持在)正常來(lái)治療肥胖的方法。本發(fā)明也包括對(duì)于容易獲得該疾病的人發(fā)生肥胖的預(yù)防方法。需要本發(fā)明的患者包括那些超重(與醫(yī)學(xué)上公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)比較)或處于超重危險(xiǎn)下的對(duì)象。
按照本發(fā)明，SERM也可以用來(lái)降低血液甘油三酯水平。譬如，人們相信EM800(本文所述)對(duì)這個(gè)目的十分有效。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供新的化合物和藥物組合物。
需要這種治療或減小上述疾病或病癥的發(fā)病的危險(xiǎn)的患者是指被診斷為患有上述疾病或容易患有上述疾病的對(duì)象。本發(fā)明尤其適合那些由于遺傳、環(huán)境因素或其他公認(rèn)危險(xiǎn)因素獲得本發(fā)明所涉及疾病的危險(xiǎn)性比普通人群更高的個(gè)體。
除非另外指出，本發(fā)明活性化合物的優(yōu)選劑量對(duì)于治療和預(yù)防目來(lái)說(shuō)是相同的。不論被治療(或預(yù)防)的疾病如何，本發(fā)明所述各活性成分的劑量都相同。
雖然討論了兩種或多種不同的活性劑作為本發(fā)明聯(lián)合療法的組成部分(例如酶抑制劑和抗雄激素)，但可以施用多種不同的化合物而不是單一的具有多重活性的化合物。
除非另外指出，術(shù)語(yǔ)“化合物”和任何有關(guān)的分子結(jié)構(gòu)可以包括其任何可能的為外消旋混合物形式或光學(xué)活性的立體異構(gòu)體。
除非另外指出或從本文中明顯看出，在此所述的劑量是指不受藥學(xué)賦形劑、稀釋劑、載體或其他成分影響的活性化合物的重量，盡管這些附加成分是按照期望包含在其中的，如本發(fā)明實(shí)施例所述。任何制藥工業(yè)中常用的劑型(膠囊、片劑、注射等)皆適用于本發(fā)明，并且術(shù)語(yǔ)“賦形劑”、“稀釋劑”或“載體”包括在工業(yè)中常與活性成分一起包含在所述劑型內(nèi)的非活性成分。譬如，包括典型的膠囊、丸劑、腸溶包衣、固體或液體稀釋劑或賦形劑、矯味劑、防腐劑等。
在一些實(shí)施方式中，采用了本發(fā)明活性成分的前藥(即可體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性成分的化合物)。許多官能團(tuán)在制藥工業(yè)中已知可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明所述活性化合物的官能團(tuán)。參見(jiàn)，例如《Textbook of DrugDesign & Development》，第五章“Design and Application ofProdrugs”，Bundgaard & Larsen，Ed.，Harwood Academic PublishersGmbH(Chur，Switzerland，1991)。前藥常常能夠?yàn)橄鄳?yīng)活性化合物提供更加良好的生物利用度、自身穩(wěn)定性和/或制造的靈活性。
任何本發(fā)明所述的療法中所用的活性成分均可以配制為藥物制劑，所述的制劑中還含有一種或多種其他活性成分。另外，它們可以分別單獨(dú)給藥但足以及時(shí)同時(shí)奏效，最終使患者同時(shí)具有提高的血藥水平或享受到各活性成分(或策略)的益處。譬如，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方式中，一種或多種活性成分被配制為一種藥物組合物。在本發(fā)明的順序?qū)嵤┓绞街校峁┮环N包括至少兩個(gè)獨(dú)立容器的試劑盒，其中在至少兩個(gè)獨(dú)立容器的內(nèi)含物中，至少一個(gè)容器的內(nèi)含物在其所含有的活性成分上完全或部分不同于至少另一容器的內(nèi)含物。本發(fā)明的聯(lián)合療法中采用了兩個(gè)或多個(gè)不同的容器。本文所述的聯(lián)合療法還包括所述聯(lián)合療法中的一種活性成分在制造用于治療(或預(yù)防)所述疾病的藥物中的應(yīng)用，其中的治療或預(yù)防進(jìn)一步包含該聯(lián)合的另一種活性成分或策略。
腹部脂肪被認(rèn)為不同于全身性肥胖，并且可以在不存在全身性肥胖的情況下出現(xiàn)。還可以肯定它很大程度上是心臟疾病的一種危險(xiǎn)因子。腹部脂肪對(duì)本發(fā)明反應(yīng)良好。
本發(fā)明的優(yōu)選SERM類物質(zhì)，如上面式I的那些化合物，在子宮內(nèi)膜中沒(méi)有不利的雌激素效應(yīng)，這對(duì)于一些現(xiàn)有方法中所用的SERM療法是一個(gè)非常重大的改進(jìn)。
本發(fā)明所用的SERM類物質(zhì)有益于降低血液甘油三酯以及胰島素耐藥性。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，SERM的作用通過(guò)DHEA或相似的性類固醇前體來(lái)增強(qiáng)。
不受任何理論的約束，對(duì)于通過(guò)聯(lián)合SEMR類物質(zhì)和前體來(lái)獲得協(xié)同作用的一種解釋是它們的作用機(jī)理至少部分不同。譬如，DHEA可以增強(qiáng)食物新陳代謝但不抑制食欲，EM-652.HCl(一種SERM)可以抑制食物攝取量。附圖簡(jiǎn)述


圖1.表示用增加劑量(0.01、0.03、0.1、0.3、1mg/kg，口服，每天1次)的SERM類物質(zhì)EM-800、雷洛昔芬、他莫昔芬和一種無(wú)活性對(duì)映異構(gòu)體EM-776(EM-800的對(duì)映異構(gòu)體)對(duì)卵巢切除大鼠35周治療的全身脂肪的影響。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM.**P＜0.01試驗(yàn)相對(duì)于各自的對(duì)照。
圖2.表示20天的治療對(duì)完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用SERM EM-652.HCl或雌二醇處理的大鼠中體重增量(A)、蛋白質(zhì)增量(B)和脂肪增量(C)的影響。數(shù)據(jù)以克(g)表示為平均值±SEM。*p＜0.05相對(duì)于完整組；p＜0.05相對(duì)于OVX+E2組(只相對(duì)于EM-652.HCl組)。
圖3.表示20天的處理對(duì)完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用EM-652.HCl或雌二醇處理的大鼠中的累積食物攝取量的影響。數(shù)據(jù)以克(g)表示。
圖4.表示20天的處理在完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用EM-652.HCl或雌二醇處理的大鼠中對(duì)于作為蛋白質(zhì)的機(jī)體能量(A)和作為脂肪的機(jī)體能量(B)的影響。數(shù)據(jù)以千焦耳(Kj)計(jì)，表示為平均值±SEM；*p＜0.05相對(duì)于完整組；p＜0.05相對(duì)于OVX+E2組(只相對(duì)于EM-652.HCl組)。
圖5.表示20天的處理在完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用EM-652.HCl或雌二醇治療的大鼠中對(duì)于血清胰島素水平和血清葡萄糖水平的影響。數(shù)據(jù)以nmol/L計(jì)表示為平均值±SEM；*p＜0.05相對(duì)于完整組。
圖6.表示為20天的處理在完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用EM-652.HCl或雌二醇治療的大鼠中對(duì)于白脂肪組織參數(shù)腹股溝(A)和腹膜后(C)脂肪組織重量(數(shù)據(jù)以克(g)計(jì)表示為平均值±SEM)、腹股溝(B)和腹膜后(D)脂肪組織脂蛋白脂酶活性(數(shù)據(jù)以？U/g蛋白計(jì)表示為平均值±SEM；*p＜0.05相對(duì)于完整組；p＜0.05對(duì)OVX+E2組(只對(duì)EM-652.HCl組))的影響。
圖7.表示20天的處理對(duì)肩胛間褐色脂肪組織參數(shù)(A)褐色脂肪組織重量(數(shù)據(jù)以克(g)計(jì)表示為平均值±SEM；*p＜0.05相對(duì)于完整組；p＜0.05對(duì)OVX+E2組(只對(duì)EM-652.HCl組))；(B)蛋白質(zhì)含量(數(shù)據(jù)以組織重量的百分率計(jì)表示為平均值±SEM；*p＜0.05相對(duì)于完整組；p＜0.05對(duì)OVX+E2組(只對(duì)EM-652.HCl組))；(C)脂蛋白脂酶活性(數(shù)據(jù)以？U/g蛋白計(jì))的影響。
圖8.表示20天的處理在完整大鼠、卵巢切除大鼠和卵巢切除且用雌二醇和EM-652.HCl治療的大鼠中對(duì)比目魚(yú)肌重量(數(shù)據(jù)以克(g)計(jì)表示為平均值±SEM)和脂蛋白脂酶(數(shù)據(jù)以？U/g蛋白計(jì)表示為平均值±SEM；*p＜0.05對(duì)完整組)的影響。發(fā)明詳述
優(yōu)選施用一種藥物組合物，其中含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體以及治療有效量的具有下面通式I的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；
其中R3選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)，和性類固醇前體選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為兩者的化合物。
上式I的SERM產(chǎn)生不同于現(xiàn)有技中已知SERM類物質(zhì)的意外優(yōu)越性，其對(duì)子宮內(nèi)膜具有很小或沒(méi)有雌激素效應(yīng)。
優(yōu)選本發(fā)明的SERM具有旋光性，并且含有50％以上的在碳2上具有絕對(duì)構(gòu)型S的立體異構(gòu)體化合物。
鑒于穩(wěn)定性和水溶性(生物利用度)的原因，還優(yōu)選本發(fā)明的SERM是式I的化合物與酸形成的鹽，所述的酸選自乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、氫氯酸、氫氯噻嗪酸(hydrochlorothiazide acid)、羥萘甲酸、乳酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、甲基硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、新戊酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)苯二甲酸、對(duì)甲苯磺酸和戊酸。
本發(fā)明的一種優(yōu)選化合物是PCT/CA96/00097(WO96/26201)中報(bào)導(dǎo)的EM-800。EM-800的分子結(jié)構(gòu)是
本發(fā)明的另一更優(yōu)選的化合物是EM-652.HCl(也稱作EM-01538)
EM-652.HCl提供了其他SERM類物質(zhì)(如EM-800)所沒(méi)有的另外的優(yōu)越性，這是由于它不含有可以增強(qiáng)使血清肉毒堿水平降低的危險(xiǎn)性的新戊?；?。
本發(fā)明的其他優(yōu)選SERM類物質(zhì)包括他莫昔芬((Z)-2-[4-(1，2-二苯基-1-丁烯基)]-N，N-二甲基乙胺)(購(gòu)自Zeneca，UK)、托瑞米芬(購(gòu)自O(shè)rion-Farmos Pharmaceuticla，F(xiàn)inland或Schering-Plough)、屈洛昔芬和CP-336,156(順-1R-[4’-吡咯烷基-乙氧基苯基]-2S-苯基-6-羥基-1，2，3，4，-四氫萘D-(-)-酒石酸鹽)(Pfizer Inc.，USA公開(kāi)在US5,889,042中)(也稱作拉索昔芬(Lasofoxifene))、雷洛昔芬(EliLilly和Co.，USA)、LY335563和LY353381(Eli Lilly&Co.，USA公開(kāi)在WO98/45287、WO98/45288和WO98/45286中)、艾多昔芬(SmithKline Beecham，USA)、來(lái)伏昔芬(Levormel oxifene)(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基色滿)(Novo Nordisk，A/S，Denmark)，其由Shalmi等公開(kāi)在WO97/25034、WO97/25035、WO97/25037、WO97/25038；和Korsgaard等WO97/25036)中，GW5638(由Willson等公開(kāi)在Endocrinology，138(9)，3901-3911，1997中)、吲哚衍生物(由Miller等公開(kāi)在EP0802183A1中)和TSE424，和由Wyeth Ayerst(USA)開(kāi)發(fā)并公開(kāi)在JP10036347(American home products corporation)中的ERA923，和WO97/32837中公開(kāi)的非甾類雌激素衍生物。本發(fā)明的其他SERM物質(zhì)公開(kāi)在WO99/07377；WO98/48806；EP0823437A2；EP0838464A1；EP0835867A1，EP0835868A1；EP0792641A1；EP0873992A1和EP0895989A1。
可以采用任何符合功效需要的SERM(如由制造商推薦用于骨質(zhì)疏松癥或乳腺癌的治療和/或預(yù)防)。所屬領(lǐng)域了解適用的劑量。可以按照本發(fā)明使用任何其他可商購(gòu)的非甾類抗雌激素。也可以使用任何活性與SERM類物質(zhì)(如雷洛昔芬)相似的化合物。
按照本發(fā)明，所施用的SERM適宜在經(jīng)口服給藥時(shí)以0.01-10mg/kg體重/天(優(yōu)選0.05-1.0mg/kg)的劑量范圍給藥，并且60mg/天，尤其是20mg/天對(duì)于平均體重的個(gè)人來(lái)說(shuō)是優(yōu)選的；或者適宜在經(jīng)非腸道給藥(即肌肉內(nèi)、皮下或經(jīng)皮給藥)時(shí)以0.003-3.0mg/kg體重/天(優(yōu)選0.015-0.3mg/kg體重)的劑量范圍給藥，并且20mg/天，尤其是10mg/天對(duì)于平均體重的個(gè)人而言是優(yōu)選的。優(yōu)選SERM類物質(zhì)與下述可藥用稀釋劑或載體一起給藥。
優(yōu)選的性類固醇前體是脫氫表雄酮(DHEA)(購(gòu)自Diosynth Inc.，Chicago，Illinois，USA)、其前藥(購(gòu)自Steraloids，Wilton，NewHampshire，USA)、5-雄甾烯-3b，17b-二醇和其前藥雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸酯和雄甾-5-烯-3b，17b-二醇二半琥珀酸酯(購(gòu)自Steraloids，Wilton，New Hampshire USA)。
性類固醇前體可以配制為醇凝膠，其中含有2.0-10％的辛酸-癸酸甘油三酯(Neobee M-5)；10-20％己二醇；2.0-10％二甘醇一甲醚(Transutol)；2.0-10％的環(huán)甲基硅酮(Cyclomethicone)(Dow Corning345)；1.0-2％芐醇和1.0-5.0％的羥丙基纖維素(Klucel HF)。
載體(用于SERM或前體)也可以包括多種制藥工業(yè)中常用的添加劑。譬如，芳香劑、抗氧劑、香料、膠凝劑、增稠劑(如羧甲基纖維素)、表面活性劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)膚劑、著色劑和其他類似試劑可以存在。當(dāng)活性成分經(jīng)皮給藥時(shí)，應(yīng)改變?cè)谄つw上涂敷的位點(diǎn)，從而避免過(guò)高的活性成分的局部濃度和性類固醇前體的雄激素代謝物可能對(duì)皮膚和皮脂腺的過(guò)度刺激。
在口服給藥的藥物組合物中，DHEA或其他前體優(yōu)選以占購(gòu)自組合物總重量5-98％(重量)的濃度存在，更優(yōu)選50-98％(重量)，尤其是80-98％。單一前體如DHEA可以是唯一的活性成分，或者另外地，可以利用多種前體和/或其類似物(例如DHEA、DHEA-S、5-二醇的聯(lián)合，或兩種或多種可體內(nèi)轉(zhuǎn)化為DHEA、DHEA-S或5-二醇的化合物聯(lián)合，或DHEA或5-二醇和一種或多種其可體內(nèi)轉(zhuǎn)化為DHEA或5-二醇的類似物的聯(lián)合，等等)。DHEA的血液水平是劑量充分的最終標(biāo)準(zhǔn)，其考慮到吸收和代謝的個(gè)體差異。
更加可取地，主治臨床醫(yī)生尤其在治療開(kāi)始時(shí)應(yīng)該監(jiān)測(cè)個(gè)體患者的全身反應(yīng)和DHEA的血清水平(與上述優(yōu)選血清濃度比較)，同時(shí)監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療的全身反應(yīng)，當(dāng)給藥患者的代謝或?qū)χ委煹姆磻?yīng)不適合時(shí)應(yīng)根據(jù)需要調(diào)整劑量。
本發(fā)明的治療適合無(wú)限延續(xù)。DHEA和/或5-二醇或其他前體的治療將直接使DHEA水平保持在類似于絕經(jīng)前婦女中自然存在的(血清濃度為4-10微克/升)或成年男子中自然存在(血清濃度為4-10微克/升)的范圍內(nèi)。
SERM化合物和/或性類固醇前體也可以經(jīng)口服途徑給藥，并可以與常規(guī)賦形劑，如噴霧干燥的乳糖、微晶纖維素和硬脂酸鎂一起配制在口服給藥的片劑或膠囊中。
活性物質(zhì)可以加工在片劑或糖衣劑片芯中，這可以通過(guò)與固體、粉狀載體物質(zhì)(如檸檬酸鈉、碳酸鈣和磷酸二鈣)和粘合劑(如聚乙烯吡咯烷酮、明膠或纖維素衍生物)混合來(lái)實(shí)現(xiàn)，也可以采取加入乳化劑，如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、“Carbowax”或聚乙二醇。顯然，在口服給藥形式的情況中可以加入矯味物質(zhì)。
另外，可以采用插式膠囊，如硬明膠的對(duì)插式膠囊，以及含有軟化劑和增塑劑如甘油的密封軟明膠膠囊。對(duì)插式膠囊含有優(yōu)選為顆粒形式的活性物質(zhì)，譬如與填充劑混合，所述的填充劑例如是乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉類(如土豆淀粉或支鏈淀粉)、纖維素衍生物或高分散硅酸類化合物。在軟明膠膠囊中，活性成分適宜溶解或懸浮于適當(dāng)液體中，如植物油或液態(tài)聚乙二醇類。
洗劑、軟膏、凝膠或霜?jiǎng)┬问揭部尚校⑶覒?yīng)該徹底擦涂到皮膚內(nèi)，使皮膚上看不到過(guò)多的藥物，同時(shí)不應(yīng)該洗滌皮膚的該區(qū)域，直至大多數(shù)的透皮制劑已經(jīng)適當(dāng)存在至少4小時(shí)，更優(yōu)選至少6小時(shí)。
按照已知技術(shù)透皮貼劑可以傳遞前體或SEEM。通常其敷用時(shí)間較長(zhǎng)，例如1至4天，但活性成分通常與較小的表面面積相接觸，使活性成分緩慢和恒定的傳遞。
迄今已經(jīng)開(kāi)發(fā)并使用的多種透皮給藥體系適合于本發(fā)明活性成分的傳遞。釋放的速率一般通過(guò)基質(zhì)擴(kuò)散來(lái)控制，或者利用活性成分穿過(guò)控制膜的通道來(lái)控制。
透皮裝置的機(jī)械方面是所屬技術(shù)領(lǐng)域熟知的并解釋在如美國(guó)專利5,162,037、5,154,922、5,135,480、4,666,441、4,624,665、3,742,951、3,797,444、4,568,343、5,064,654、5,071,644、5,071,657中。其公開(kāi)內(nèi)容在此引入作為參考。其他背景技術(shù)由歐洲專利0279982和英國(guó)專利申請(qǐng)2185187公開(kāi)。
所述的裝置可以是任何該領(lǐng)域中已知的常規(guī)類型，包括膠粘基質(zhì)和儲(chǔ)庫(kù)型透皮給藥裝置。所述的裝置可以包含摻混纖維的含藥物基質(zhì)，其吸收活性成分和/或載體。在儲(chǔ)庫(kù)型裝置中，儲(chǔ)庫(kù)可以由不滲透載體和活性成分的聚合物膜構(gòu)成。
在透皮裝置中，該裝置本身使活性成分保持與指定的局部皮膚表面相接觸。在這種裝置中，對(duì)活性成分所用載體的粘度的考慮要比對(duì)霜?jiǎng)┗蚰z所用載體的粘度少。透皮裝置的溶劑體系包括例如油酸、鏈醇乳酸酯和一縮二丙二醇(dipropylene glycol)，或所屬領(lǐng)域已知的其他溶劑體系?；钚猿煞挚梢匀芙饣驊腋≡谳d體中。
為了與皮膚粘著，將透皮貼劑安放在外科用膠帶上，在該膠帶的中央帶有一個(gè)穿孔。粘合劑適宜被一個(gè)釋放襯墊覆蓋以在使用之前起到保護(hù)作用。適合釋放的典型材料包括聚乙烯和聚乙烯包衣紙，并且優(yōu)選采用容易揭去的聚硅氧烷包衣。在應(yīng)用于該裝置時(shí)，直接揭下釋放襯墊并使粘合劑附著在患者的皮膚上。在美國(guó)專利5,135,480中，其公開(kāi)內(nèi)容在此引入作為參考。Bannon等描述了另一種具有將裝置固定在皮膚上的非膠粘器具的裝置。
本發(fā)明的經(jīng)皮或經(jīng)粘膜給藥體系也可以作為新的和改進(jìn)了的給藥體系用于肥胖的預(yù)防和/或治療。
本發(fā)明方法的有效性的實(shí)施例
實(shí)施例1使用本發(fā)明化合物的35周處理對(duì)于卵巢切除大鼠的總體脂肪和體重的
影響材料和方法動(dòng)物和處理
在處理開(kāi)始時(shí)選用10-12周齡的、體重約225-250g的雌性Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)Br)(Charles River Laboratory，St-Constant，Canada)。試驗(yàn)開(kāi)始之前令動(dòng)物適應(yīng)1周環(huán)境條件(溫度22±3℃；濕度50±20％；12小時(shí)光照-12小時(shí)黑暗循環(huán)，在0715h開(kāi)始光照)。每籠籠養(yǎng)3只動(dòng)物并允許其自由接近自來(lái)水和成丸的合格嚙齒動(dòng)物飼料(Lab Diet 5002，Ralston Purina，St-Louis，MO)。試驗(yàn)在加拿大動(dòng)物保護(hù)委員會(huì)(Canadian Council on Animal Care)批準(zhǔn)的設(shè)備中、按照有關(guān)“試驗(yàn)動(dòng)物的保護(hù)和使用”的CCAC指南進(jìn)行。
將276只大鼠隨機(jī)分配為23組，各組有12只動(dòng)物，這些組分別為1)完整對(duì)照；2)OVX對(duì)照；3至7)OVX+EM-800(0.01、0.03、0.1、0.3或1mg/kg)；8至12)OVX+雷洛昔芬(0.01、0.03、0.1、0.3或1mg/kg)；13至17)OVX+他莫昔芬(0.01、0.03、0.1、0.3或1mg/kg)；18至22)OVX+EM-776(0.01、0.03、0.1、0.3或1mg/kg)；23)OVX+雌二醇(E2，植入物)。在研究的第一天，在異氟烷麻醉?xiàng)l件下對(duì)有關(guān)組的動(dòng)物進(jìn)行兩側(cè)卵巢切除(OVX)。將一個(gè)雌二醇(E2)的硅橡膠植入物皮下埋植在第13組的各動(dòng)物的背側(cè)區(qū)域。植入物具有下述的E2濃度和大小E2(E2膽甾醇(1∶100，w∶w))，0.5cm(長(zhǎng)度)，0.125英寸(外徑)和0.062英寸(內(nèi)徑)。在試驗(yàn)過(guò)程中，每月更換E2植入物。研究第2天開(kāi)始用EM-800、雷洛昔芬、他莫昔芬和EM-776或載體(4％乙醇、4％聚乙二醇-600、1％明膠和0.9％NaCl)處理。通過(guò)口飼管法每天以0.5ml/只大鼠給予1次單獨(dú)的適當(dāng)化合物或載體，共37周。末次給藥后約24小時(shí)，在異氟烷麻醉下將禁食過(guò)夜的動(dòng)物于腹主動(dòng)脈處通過(guò)放血處死。脂肪體組成
處理35周后，用雙能X射線吸光分析法(dual energy X-ranabsorptiometry)(DEXA；QDR 4500A，Hologic，Waltham，MA)和局部高分辨掃描軟件對(duì)異氟烷麻醉下的各個(gè)大鼠的全身骨骼及其右股骨進(jìn)行掃描。用于全身的掃描場(chǎng)大小為30.492×17.912cm，分辨率為0.1512×0.0640cm且掃描速率為2.499mm/秒。測(cè)定全身的脂肪體組成。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。按照Duncan-Kramer(1956)的多范圍檢驗(yàn)(multiple-range test)測(cè)定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果
圖1舉例說(shuō)明通過(guò)DEXA體內(nèi)測(cè)量增加EM-800、雷洛昔芬、他莫昔芬和EM-776的日口服劑量對(duì)身體脂肪的作用?？梢钥吹剑珽M-800在0.01mg/kg的最低劑量下使OVX誘導(dǎo)刺激的身體脂肪減少78％，雷洛昔芬的活性低于EM-800，而EM800的對(duì)映異構(gòu)體EM-776不具有明顯作用。在表1中，報(bào)告了EM-800或雷洛昔芬在卵巢切除大鼠中對(duì)體重的作用。將完整大鼠和卵巢切除對(duì)照大鼠進(jìn)行比較。還可以發(fā)現(xiàn)，小劑量的EM-800對(duì)體重的控制與其非常高劑量的雷洛昔芬相似(例如0.03mg/kgEM-800獲得與0.3mg/kg雷洛昔芬相似的結(jié)果)。兩種物質(zhì)在非常高的劑量下基本上逆轉(zhuǎn)卵巢切除誘發(fā)的體重增加。
表1
實(shí)施例2
利用本發(fā)明化合物的11個(gè)月的聯(lián)合治療1.試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)化合物
DHEA購(gòu)自Steraloids Inc.Wilton，NH.LotH137；
EM-800是在Mol.Endo.，CHUL.的實(shí)驗(yàn)室的UCPO部門合成的。1.2載體
a)明膠Lab-Grade，ACP Chemicals Inc.，Montreal，Qc.Lot#F0195
b)乙醇Commercial Alcohols Inc.，Brampton，Ontario.Lot No.11296
c)聚乙二醇-600(PEG-600)Omega Chemical Company Inc.，Lévis，Quebec.Lot# 00-0117-EZ
d)普通鹽水0.9％氯化鈉沖洗液USP.
Abbott Laboratories Limited，St-Laurent，Qc..
e)丙二醇(1，2-丙二醇，PPG)Sigma Chemical Co.，St-Louis，MO.
g)載體14％ETOH-4％PEG-600-1％明膠-0.9％NaCl-H2O，用于皮下注射。
h)載體250％ETOH-50％PPG用于局部涂敷。2.試驗(yàn)動(dòng)物的說(shuō)明2.1種類褐家鼠(Rattus norvegicus)2.2品種Sprague-Dawley Rat(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)2.3性別雌性2.4來(lái)源Charles River Canada Inc.188 Lasalle RoadSt.Constant，Quebec1-800-561-49752.5給藥開(kāi)始時(shí)的年齡G18至29的大鼠為16周齡2.6籠養(yǎng)和保持a)籠養(yǎng)將2-3只/籠的大鼠籠養(yǎng)在鞋盒籠中。全部籠子用籠標(biāo)簽清楚地標(biāo)明方案號(hào)、組號(hào)和動(dòng)物數(shù)量。b)研究期間，室內(nèi)的環(huán)境條件應(yīng)受到控制(目標(biāo)條件溫度20至25℃；濕度50±20％.)。光周期是12小時(shí)光照12小時(shí)黑暗。c)飲食和水嚙齒動(dòng)物飼料(丸)，和自來(lái)水隨意提供。2.7適應(yīng)期至少2周。2.8隨機(jī)化大鼠應(yīng)在抵達(dá)時(shí)隨機(jī)分配至各組。2.9安死術(shù)的方法異氟烷引起的全身麻醉。3.方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)1 完整 11大鼠/組2 OVX CONT 共44只大鼠3 OVX+DHEA 12.5mg4 OVX+DHEA 12.5mg+EM-800(100μg)3.1載體和試驗(yàn)品的制備 a)EM-800的制備將EM-800或其兩者溶于ETOH∶PEG-600(1∶1)同時(shí)在Fisher ScientificStirring Hot Plate上攪拌，隨后加入1％GNS至預(yù)定體積。
b)DHEA的制備
通過(guò)攪拌將DHEA溶于50％ETOH、50％PPG中。3.2動(dòng)物的準(zhǔn)備和處理
動(dòng)物每天一次按照6.1條所述進(jìn)行處理。每天將體積為0.5ml的在50％ETOH和50％PPG中制備的DHEA給相應(yīng)的動(dòng)物透皮涂敷(P.C.)1次(I.D.)。EM-800在4％ETOH、4％PEG-600、1％明膠、0.9％NaCl中配制，并且每天以0.5ml的體積經(jīng)皮下給相應(yīng)組的動(dòng)物施用1次(S.C.，I.D.)。如果沒(méi)有用任何試驗(yàn)化合物皮下處理，則給該大鼠皮下注射0.5ml的載體1；并且如果沒(méi)有用5-二醇或DHEA處理，則該大鼠局部涂敷0.5ml的載體2。3.3觀察和測(cè)量a)臨床觀察 每天至少觀察1次各大鼠的全身表現(xiàn)。b)體重 在給藥方案開(kāi)始和結(jié)束時(shí)以及在治療期間每3個(gè)月稱重大鼠一次。4.結(jié)果
如表2所示，使用日劑量為12.5mg DHEA的治療的效果是使OVX刺激的體重降低87％。給藥日劑量為100μg的EM-800產(chǎn)生協(xié)同作用并對(duì)OVX刺激的體重具有140％的抑制作用。
表2
實(shí)施例3
采用EM-652.HCl的20天處理對(duì)卵巢切除大鼠中
機(jī)體脂肪和體重參數(shù)的作用材料和方法動(dòng)物和處理
在處理開(kāi)始時(shí)選用10-12周齡的、體重約225-250g的雌性Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)Br)(Charles River Laboratory，St-Constant，Canada)。試驗(yàn)開(kāi)始之前令動(dòng)物適應(yīng)1周環(huán)境條件(溫度22±3℃；10小時(shí)光照-14小時(shí)黑暗循環(huán)，于0600h進(jìn)行光照)。將動(dòng)物各自籠養(yǎng)在普通設(shè)計(jì)的不銹鋼籠中且允許其自由獲取自來(lái)水和高碳水化合物混合飼料(g/100g)玉米淀粉，31.2；葡萄糖，31.2；酪蛋白，20.0；玉米油，6.4；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.0；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，4.9和纖維，5.0。試驗(yàn)在加拿大動(dòng)物保護(hù)委員會(huì)(CanadianCouncil on Animal Care)批準(zhǔn)的設(shè)備中、按照有關(guān)“試驗(yàn)動(dòng)物的保護(hù)和使用”的CCAC指南進(jìn)行。
將40只大鼠隨機(jī)分配為4組，每組10只動(dòng)物，各組為1)完整對(duì)照；2)OVX對(duì)照；3)OVX+EM-652.HCl(0.5mg/大鼠，～2.5mg/kg)；4)OVX+雌二醇(E2，植入物)。在研究的第一天，在異氟烷麻醉下將有關(guān)組的動(dòng)物進(jìn)行兩側(cè)卵巢切除。將一個(gè)雌二醇(E2)的硅橡膠植入物皮下埋植在第4組各動(dòng)物的背側(cè)區(qū)域。在預(yù)備試驗(yàn)中挑選的產(chǎn)生生理水平E2的植入物具有下述類固醇濃度和尺寸E2∶膽固醇(1∶50，w∶w)，0.5cm(硅橡膠管內(nèi)稀釋類固醇的長(zhǎng)度)，0.125英寸(硅橡膠管的外徑)和0.062英寸(硅橡膠管的內(nèi)徑)。在皮下埋植于動(dòng)物體內(nèi)之前，將該雌二醇植入物在0.9％NaCl中37℃下浸漬過(guò)夜。自研究的第2天開(kāi)始用單獨(dú)的EM-652.HCl或載體(0.4％存在于水中的甲基纖維素)處理。通過(guò)口飼管每天給予1次0.5ml/只大鼠的化合物或載體，共20天。每2天記錄1次體重和食物消耗量。
末次給藥后約24小時(shí)，將過(guò)夜禁食的動(dòng)物用氯胺酮-賽拉嗪麻醉并通過(guò)心臟穿刺取血。收集血液以及白色和褐色脂肪組織。能量、脂肪和蛋白質(zhì)測(cè)量中的體重、食物攝取量和體重增量
按照Deshaies等Am.J.Physiol.，1997；273，E355-E362(1997)的方法測(cè)定能量、脂肪和蛋白質(zhì)測(cè)量中的體重、食物攝取量和體重增量。組織的測(cè)量
按照Deshaies等Am.J.Physiol.，1997；273，E355-E362(1997)的方法測(cè)定脂蛋白脂酶活性。結(jié)果
從圖2A和C中可以發(fā)現(xiàn)，使用EM-652.HCl的20天處理分別徹底逆轉(zhuǎn)卵巢切除后所觀察到的4倍體重增量和3倍脂肪增量，而這種作用對(duì)于蛋白質(zhì)增加的影響較弱(圖2B)。雌二醇具有更小的作用。圖3表示累積食物攝取量。處理效果反映在對(duì)體重增加的影響。雌二醇部分防止由Ovx引起的食物攝取量的增高，而EM-652.HCl比雌二醇更加有效，以致能夠使食物攝取量的值降低到低于完整動(dòng)物的食物攝取量值。
表3中概括了能量平衡的主要變量。Ovx使可消化能量攝取量提高44％。雌二醇使Ovx動(dòng)物中的能量攝取量減少，但總的能量攝取量仍然比完整動(dòng)物的高17％，而EM-652.HCl徹底預(yù)防Ovx誘導(dǎo)的能量攝取量的增高。能量增加與食物攝取量成比例。另外，雌二醇可以減少能量的增加(達(dá)到與完整大鼠沒(méi)有明顯差別的水平)，但EM-652.HCl更加有效(明顯不同于雌二醇)。
食物效率在Ovx作用下增高，在Ovx動(dòng)物中被E2降低，并且被EM-652.HCl進(jìn)一步降低。
卵巢切除后由蛋白質(zhì)產(chǎn)生的機(jī)體能量的30％增量以及源自脂肪的機(jī)體能量的80％增量也通過(guò)EM-652.HCl的處理完全逆轉(zhuǎn)，可以參見(jiàn)圖4A和B。如5A所示，在Ovx動(dòng)物中通過(guò)禁食性高胰島素血癥(其常常與胰島素耐藥性的程度成比例)和禁食性高血糖(胰島素喪失維持正常血糖水平的有效性的一種反映)的存在可以證實(shí)胰島素耐藥性的產(chǎn)生。雌二醇和EM-652.HCl兩者均可以預(yù)防這種Ovx誘導(dǎo)的胰島素耐藥性。
圖6A和6C表示OVX增加了腹股溝和腹膜后脂肪組織的質(zhì)量(量)，這是在全身脂肪中觀察到變化的表現(xiàn)。EM-652.HCl的處理可以徹底消除這種增加。對(duì)于雌二醇，該效果較不顯著。在反映脂蛋白脂酶活性的圖6B和6D中也顯示出了相同的模式。所述的酶可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)甘油三酯的水解，并由此調(diào)節(jié)脂肪酸向脂肪儲(chǔ)備的轉(zhuǎn)入。
褐色脂肪組織在嚙齒動(dòng)物中是主要的產(chǎn)熱效應(yīng)器。卵巢切除術(shù)在肩胛間褐色脂肪組織中表現(xiàn)出不同于白色脂肪組織的模式。褐色脂肪組織重量比在白色脂肪組織中觀察到的增高2倍(圖7A)。然而，蛋白質(zhì)含量(圖7B)和脂蛋白活性(圖7C)在OVX后分別降低了33和30％。對(duì)于這三個(gè)參數(shù)，EM-652.HCl的處理可以完全逆轉(zhuǎn)卵巢切除術(shù)的作用。
比目魚(yú)肌的重量通常是機(jī)體的蛋白質(zhì)量狀況的一個(gè)良好指標(biāo)。正如所期望的，圖8顯示出比目魚(yú)肌的重量通過(guò)Ovx有所增高(食物攝取量的增加導(dǎo)致能量沉降成為脂肪和蛋白質(zhì)的增多)。雌二醇和EM-652.HCl的處理都可以預(yù)防肌肉重量的增高。肌肉內(nèi)的脂蛋白脂酶常常明確地與胰島素敏感性相關(guān)(敏感性越好，肌肉內(nèi)的脂蛋白脂酶越多)。Ovx使比目魚(yú)肌中的脂蛋白脂酶活性降低，這是肌肉內(nèi)胰島素耐藥性產(chǎn)生的一個(gè)間接證據(jù)。雌二醇和EM-652.HCl的處理皆可以預(yù)防肌肉內(nèi)脂蛋白脂酶的減少。
可消化能量攝取量是指在20天的處理中攝取能量的總量(考慮不可消化的物質(zhì)，如纖維)。
能量增量是在20天處理期間沉積為脂肪+蛋白質(zhì)的千焦耳的量。
表觀能量消耗量是指代謝需求和運(yùn)動(dòng)所耗費(fèi)的能量的量(由能量攝取量和能量增量計(jì)算)。可以推測(cè)，當(dāng)瘦肉質(zhì)量越大時(shí)，該表觀能量消耗量越高(如Ovx動(dòng)物)。
食物效率是指被攝取能量沉積為脂肪和蛋白的效率(以沉積的kJ/攝取100kJ計(jì))。
實(shí)施例4
本發(fā)明的優(yōu)選化合物的合成實(shí)施例(S)-(+)-7-羥基-3-(4’-羥苯基)-4-甲基-2-(4”-(2-哌啶子基乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃鹽酸鹽EM-01538(EM-652.HCl)合成路線1
步驟ABF3·Et2O，甲苯；100℃；1小時(shí)。步驟C3，4-二氫吡喃，對(duì)甲苯磺酸一水合物，乙酸乙酯；25℃，氮
氣下，16小時(shí)和隨后在異丙醇中結(jié)晶。步驟D、E和F(1)哌啶，甲苯，迪安斯塔克設(shè)備(Dean & Starkapparatus)，氮?dú)庀禄亓鳎?2)1，8-二氮雜雙環(huán)[5，4，0]十一碳-7-烯，DMF，回流3小時(shí)；(3)CH3MgCl，THF，-20至0℃且隨后室溫下24小時(shí)；步驟G、h(1S)-(+)-10-樟腦磺酸，丙酮，水，甲苯，室溫，48小時(shí)。步驟HH95％乙醇，70℃，隨后室溫下3天。步驟HHR母液的再循環(huán)和步驟HH的洗滌(S)-10-樟腦磺酸，回流；36小時(shí)，隨后室溫16小時(shí)。步驟I(1)含水DMF，Na2CO3，乙酸乙酯；(2)乙醇，稀HCl；(3)水。2-四氫吡喃氧基-4-羥基-2’-(4”-四氫吡喃氧基苯基)苯乙酮(4)的合成
在約25℃下，將2，4-二羥基-2’-(4”-羥基苯基)苯乙酮3(97.6g，0.4mole)(購(gòu)自Chemsyn Science Laboratories，Lenexa，Kansas)在3，4-二氫吡喃(218ml，3.39mole)和乙酸乙酯(520ml)中的溶液用對(duì)甲苯磺酸一水合物(0.03g，0.158mmole)處理。在氮?dú)?、無(wú)外部加熱下將反應(yīng)混合物攪拌約16小時(shí)。該混合物用碳酸氫鈉(1g)和氯化鈉(5g)在水(100ml)中的溶液洗滌。分離各相并且用鹽水(20ml)洗滌有機(jī)相。各洗滌液再用50ml乙酸乙酯返提取。合并全部有機(jī)相且經(jīng)硫酸鈉過(guò)濾。
通過(guò)在大氣壓下蒸餾除去溶劑(約600ml)且加入異丙醇(250ml)。在大氣壓下再蒸餾溶劑(約300ml)且加入異丙醇(250ml)。在大氣壓下再蒸餾溶劑(約275ml)且加入異丙醇(250ml)。將該溶液冷卻至約25℃同時(shí)攪拌，約12小時(shí)后，過(guò)濾結(jié)晶固體，用異丙醇洗滌并干燥(116.5g，70％)。4-羥基-4-甲基-2-(4’-[2”-哌啶子基]-乙氧基)苯基-3-(4-四氫吡喃基氧基)苯基-7-四氫吡喃氧基-色滿(10)的合成 在氮?dú)庀掠玫习菜顾嗽O(shè)備回流存在于甲苯(8L)中的2-四氫吡喃基氧基-4-羥基-2’-(4”-四氫吡喃氧基苯基)苯乙酮4(1kg，2.42mole)、4-[2-(1-哌啶子基)乙氧基]苯甲醛5(594g，2.55mole)(購(gòu)自Chemsyn ScienceLaboratories，Lenexa，Kansas)和哌啶(82.4g，0.97mole)(購(gòu)自Aldrich Chemical Company Inc.，Milwaukee，Wis.)，直至收集1當(dāng)量的水(44mL)。
在大氣壓下通過(guò)蒸餾除去溶液中的甲苯(6.5L)。加入二甲基甲酰胺(6.5L)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5，4，0]十一碳-7-烯(110.5g，0.726mole)。室溫下將該溶液攪拌約8小時(shí)使查耳酮8異構(gòu)為苯并二氫吡喃-4-酮9，隨后加入水和冰(8L)和甲苯(4L)的混合物。分離各相且用水(5L)洗滌甲苯層。合并的洗滌水用甲苯提取(3×4L)。最后合并的甲苯提取液用鹽水(3×4L)洗滌，在大氣壓下濃縮為5.5L，隨后冷卻至-10℃。
在氮?dú)庀隆⒃诔掷m(xù)的外部冷卻和攪拌的同時(shí)，加入氯化甲基鎂在THF(2.5L，7.5mole)(購(gòu)自Aldrich Chemical Company Inc.，Milwaukee，Wis.)中的3M溶液，保持溫度低于0℃。在加入全部格氏試劑后，撤去外部冷卻，將該混合物溫至室溫。在此溫度下攪拌該混合物約24小時(shí)。
將該混合物重新冷卻至約-20℃，并且在持續(xù)的外部冷卻和攪拌下緩慢加入飽和氯化銨溶液(200ml)，保持溫度低于20℃。將該混合物攪拌2小時(shí)，隨后加入飽和氯化銨溶液(2L)和甲苯(4L)且攪拌5分鐘。分離各相，水層用甲苯(2×4L)提取。合并的甲苯提取液用稀鹽酸洗滌直至該溶液變均勻，隨后用鹽水(3×4L)洗滌。最后在大氣壓下濃縮該甲苯溶液至2L。該溶液直接用于下一步。(2R，S)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基)-4-甲基-2-(4”-[2-哌啶子基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃(1S)-10-樟腦酸鹽(±12)的合成
向4-羥基-4-甲基-2-(4’-[-2”-哌啶子基]-乙氧基)-苯基-3-(4-四氫吡喃氧基)苯基-7-四氫吡喃氧基色滿(10)的甲苯溶液中中加入丙酮(6L)、水(0.3L)和(S)-10-樟腦磺酸(561g，2.42mole)(購(gòu)自Aldrich Chemical Company Inc.，Milwaukee，Wis.)。在氮?dú)庀聦⒃摶旌衔飻嚢?8小時(shí)，隨后過(guò)濾固體的(2R，S)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基)-4-甲基-2-(4”-[2-哌啶子基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃(1S)-10-樟腦磺酸鹽(12)，用丙酮洗滌且干燥(883g)。該物質(zhì)無(wú)需進(jìn)一步純化就可以用于下一步(HH)。(2S)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基)-4-甲基-2-(4”-[2-哌啶子基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃(1S)-10-樟腦磺酸鹽(13，(+)-EM-652(1S)-CSA鹽)的合成
攪拌下將(2R，S)-7-羥基-3-(4’-羥苯基)-4-甲基-2-(4”-[2-哌啶子基]乙氧基)苯基)-2H-苯并吡喃(1S)-10-樟腦磺酸鹽±12(759g)在95％乙醇中的混懸液加熱至約70℃直至該固體溶解。將該溶液冷卻至室溫同時(shí)攪拌，隨后接種少許(2S)-7-羥基-3-(4’-羥苯基)-4-甲基-2-(4”-[2-哌啶子基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃(1S)-10-樟腦磺酸鹽13的結(jié)晶。室溫下將該溶液共攪拌約三天。過(guò)濾結(jié)晶，用95％乙醇洗滌且干燥(291g，76％)。產(chǎn)物的非對(duì)映體過(guò)量(de)為94.2％且純度為98.8％。(S)-(+)-7-羥基-3-(4’-羥苯基)-4-甲基-2-(4”-(2-哌啶子基乙氧基)苯基)-2H-1-苯并吡喃鹽酸鹽EM-01538(EM-652，HCl)的合成
將化合物13(EM-652-(+)-CSA鹽，500mg，0.726mmol)在二甲基甲酰胺(11μL，0.15mmol)中的混懸液用0.5M碳酸鈉水溶液(7.0mL，3.6mmol)處理，并且攪拌15分鐘。該混懸液用乙酸乙酯(7.0mL)處理且攪拌4小時(shí)。有機(jī)相用飽和碳酸鈉水溶液(2×5mL)和鹽水(1×5mL)洗滌，用硫酸鎂干燥和濃縮。將所得粉色泡沫(EM-652)在乙醇(2mL)中的溶液用2N鹽酸(400μL，0.80mmol)處理，攪拌1小時(shí)后，用蒸餾水(5mL)處理，并且攪拌30分鐘。過(guò)濾所得的混懸液，用蒸餾水(5mL)洗滌，在空氣中且在高真空下(65℃)干燥，得到乳油狀粉末(276mg，77g)細(xì)的米色粉末，掃描量熱學(xué)熔化峰開(kāi)始于219℃，DH＝83J/g；[a]24D＝154°(在甲醇中10mg/ml)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)1.6(寬，2H，H-4)，1.85(寬，4H，H-3””和5)，2.03(s，3H，CH3)，3.0和3.45(寬，4H，H-2””和6””)，3.47(t，J＝4.9Hz，2H，H-3)，4.26(t，J＝4.9Hz，2H，H-2)，5.82(s，1H，H-2)，6.10(d，J＝2.3Hz，1H，H-8)，6.35(dd，J＝8.4，2.43Hz，1H，H-6)，6.70(d，J＝8.6Hz，2H，H-3’，和H-5’)，6.83(d，J＝8.7Hz，2H，H-3”和H-5”)，7.01(d，J＝8.5Hz，2H，H-2’和H-6’)，7.12(d，J＝8.4Hz，1H，H-5)，7.24(d，J＝8.6Hz，2H，H-2”和H-6”)；13C RMN(CD3OD，75MHz)dppm 14.84，22.50，23.99，54.78，57.03，62.97，81.22，104.38，109.11，115.35，116.01，118.68，125.78，126.33，130.26，130.72，131.29，131.59，134.26，154.42，157.56，158.96，159.33。元素組成C，H，N，Cl理論值；70.51，6.53，2.84，7.18，％，實(shí)測(cè)值70.31，6.75，2.65，6.89％。
實(shí)施例5表明單獨(dú)或與作為性激素前體的DHEA聯(lián)合的本發(fā)明化合物EM-652.HCl在完整雌性大鼠中對(duì)LHRH-A誘導(dǎo)的脂肪增加的預(yù)防作用。可以看出，6個(gè)月的LHRH-A處理使完整雌性大鼠的機(jī)體脂肪的百分比明顯增高58％，而采用EM-652.HCl或DHEA的伴隨給藥，這種增量分別只有35％和19％。利用這兩種藥物的聯(lián)合，經(jīng)LHRH-A處理后觀察到?jīng)]有脂肪增加。
在實(shí)施例6中，提供了20天期間對(duì)雌性大鼠中肥胖的抑制作用。卵巢切除術(shù)分別使全身脂肪的百分比和腹膜后脂肪組織的重量提高了20％和68％。EM-652.HCl、雌二醇、DHEA、或EM-652.HCl與DHEA的聯(lián)合藥物形式或EM-652.HCl與雌二醇的聯(lián)合藥物形式的施用可以預(yù)防這些增量，并且甚至可以減少機(jī)體脂肪和腹膜后脂肪組織，它們的施用使機(jī)體脂肪分別減少46％、46％、59％、56％和45％，同時(shí)使腹膜后脂肪組織分別減少59％、78％、75％、69％和68％。實(shí)施例7提供了類似的試驗(yàn)。在該情況中，肥胖的預(yù)防是在34周內(nèi)繼續(xù)，并且隨后通過(guò)卵巢切除術(shù)使機(jī)體脂肪和腹膜后脂肪組織的百分比增加了約60％。通過(guò)乙炔雌二醇、雷洛昔芬(EM-1105)、EM-652.HCl(EM-1538)、DHEA或EM-652.HCl和DHEA聯(lián)合藥物形式的給藥可以預(yù)防這種增加。
實(shí)施例8A(雄性)和8B(雌性)報(bào)告了本發(fā)明在肥胖的預(yù)防以及治療中的有效性的數(shù)據(jù)。給瘦型和肥胖型Zucker雄性和雌性大鼠施用2.5mg/kg/天的EM-652.HCl，共20天。瘦型大鼠代表預(yù)防的模型，同時(shí)肥胖治療的模型由業(yè)已肥胖的大鼠代表。表7提供雄性動(dòng)物且表8提供雌性動(dòng)物的有關(guān)體重增量、腹膜后脂肪組織和比目魚(yú)肌中的脂蛋白脂酶活性以及胰島素、葡萄糖、總膽固醇和甘油三酯的血漿濃度的數(shù)據(jù)。(參見(jiàn)實(shí)施例3有關(guān)這些參數(shù)的意義)。
抗雌激素EM-652.HCl分別使瘦型雄性大鼠和肥胖型雄性大鼠的體重增量顯著降低38％和35％，同時(shí)在兩種性別中沒(méi)有改變腹膜后白脂肪組織和比目魚(yú)肌中的脂蛋白脂酶的活性。瘦型雄性、肥胖型雄性和瘦型雌性的血漿胰島素分別降低35％、57％和48％，但在具有非常高水平的胰島素的肥胖型雌性動(dòng)物中，EM-652.HCl沒(méi)有產(chǎn)生明顯的作用。EM-652.HCl的給藥還可以在肥胖組中降低較高的血漿膽固醇。EM-652.HCl的處理對(duì)血清葡萄糖沒(méi)有影響。
實(shí)施例9中，EM-652.HCl、DHEA或這兩者的聯(lián)合對(duì)于接受含豐富蔗糖和脂肪飼料的完整或卵巢切除雌性大鼠的作用報(bào)告了有關(guān)的總重量、白色脂肪腹股溝和腹膜后組織、褐色脂肪組織、比目魚(yú)肌、股外肌(VLM)的重量和脂蛋白脂酶活性。還報(bào)告了血漿胰島素、葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯和萊普亭(leptin)以及肝臟的膽固醇和甘油三酯。
實(shí)施例10報(bào)告了在用文獻(xiàn)所述的不同選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(TSE424、拉索昔芬(Lasofoxifene)、LY353381和雷洛昔芬)以及用本發(fā)明的優(yōu)選化合物EM-652.HCl的給藥后對(duì)于大鼠中體重增加和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的影響。試驗(yàn)化合物經(jīng)口飼管對(duì)卵巢切除雌性大鼠給藥20天(0.5mg各個(gè)化合物/只大鼠)，所述的化合物存在于0.4％甲基纖維素中。用17β-雌二醇(E2)處理的完整對(duì)照、卵巢切除(OVX)對(duì)照和OVX大鼠用作參照。由卵巢切除術(shù)引起的體重和食物消耗量的增加通過(guò)用試驗(yàn)化合物處理被顯著降低到在完整對(duì)照大鼠中所觀察到的水平。通過(guò)上述處理可以降低白色脂肪腹股溝和腹膜后脂肪組織的重量和脂蛋白脂酶活性(除TSE424和LY353381對(duì)白色脂肪腹股溝組織以及TSE424和拉索昔芬對(duì)腹股溝組織的脂蛋白脂酶活性之外)，而褐色脂肪組織和肌肉似乎沒(méi)有受到顯著影響。可以看出，所有試驗(yàn)化合物可以有效降低膽固醇和甘油三酯的血漿濃度，但對(duì)葡萄糖水平?jīng)]有影響。用EM-652.HCl、TSE424、拉索昔芬、LY353381和雷洛昔芬對(duì)OVX大鼠的處理可以減少血漿胰島素。
實(shí)施例11和12中報(bào)告了已知抗雌激素類物質(zhì)和本發(fā)明的化合物在雌激素依賴性細(xì)胞系中的體外效能。實(shí)施例10的表11中表示出抗雌激素對(duì)于人子宮內(nèi)膜腺癌Ishikawa細(xì)胞中堿性磷酸酶的作用?？勾萍に氐幕钚詧?bào)告在最后一欄中，表示為1nM E2刺激的堿性磷酸酶的抑制作用的IC50(以nM計(jì))，同時(shí)試驗(yàn)化合物的內(nèi)在雌激素活性報(bào)告在倒數(shù)第二欄中，表示為1nM E2刺激的堿性磷酸酶活性的百分比?？梢钥闯觯罹呋钚缘目勾萍に厥荅M-652.HCl、LY353381、雷洛昔芬、拉索昔芬和TSE424。其它物質(zhì)的活性至少低10倍。然而，在最佳活性化合物中，一些化合物具有殘留的不期望的雌激素活性LY353381(16％)、拉索昔芬(18％)和雷洛昔芬(13％)。因此，現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明，化合物EM-652.HCl和TSE424在Ishikawa細(xì)胞中沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的雌激素活性。在實(shí)施例12中，本發(fā)明優(yōu)選化合物EM-652.HCl與和TSE424在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的比較顯示出EM-652.HCl的優(yōu)越性。所以，其活性比TSE424作為抗雌激素高4倍以上(抑制作用的EC50為0.8nM對(duì)3.7nM)(表12)。
實(shí)施例13中，評(píng)估了利用EM-652.HCl、TSE424或拉索昔芬的20天處理在市售嚙齒動(dòng)物飼料飼養(yǎng)的卵巢切除雌性大鼠中對(duì)于體重、腹膜后脂肪組織、子宮重量和膽固醇水平的作用。卵巢切除術(shù)分別引起全身體重和腹膜后脂肪組織重量增加17％和19％，而0.5mg的EM-652.HCl、TSE424或拉索昔芬的給藥分別預(yù)防了64％、59％和127％的體重增加，并且使脂肪組織重量值低于那些在所有試驗(yàn)化合物的完整對(duì)照動(dòng)物中所觀察到的值。EM-652.HCl和TSE424的給藥與OVX對(duì)照動(dòng)物相比對(duì)子宮重量沒(méi)有影響。然而，0.5mg的拉索昔芬可以引起子宮重量增加62％(p＞0.01)，但這種增加可以由2.5mg EM-652.HCl的同時(shí)給藥徹底逆轉(zhuǎn)，這暗示了拉索昔芬的雌激素活性。最后，EM-652.HCl、TSE424和拉索昔芬的給藥可以完全預(yù)防OVX誘導(dǎo)的血清膽固醇水平的增高，并且使膽固醇值明顯低于那些在完整對(duì)照動(dòng)物中所觀察到的值。
實(shí)施例5用EM-652.HCl和DHEA單獨(dú)或聯(lián)合給藥的處理對(duì)于接受或不接受LHRH-A的完整雌性大鼠的脂肪蓄積的影響URMA-r-04-99
本研究的目的在于測(cè)定EM-652.HCl和脫氫表雄酮(DHEA)的處理在接受或未接受黃體化激素釋放激素激動(dòng)劑(LHRH-A，LHRH乙酰胺二乙酸酯)的完整雌性大鼠中對(duì)脂肪的作用。鑒于此目的，用或未用LHRH-A(1μg/只大鼠)處理的完整雌性大鼠每天接受EM-652.HCl(2.5mg/kg)和DHEA(100mg/kg)單獨(dú)或聯(lián)合的給藥，共6個(gè)月。EM-652.HCl經(jīng)口服給藥，DHEA經(jīng)局部施用，而LHRH-A經(jīng)皮下注射。全部處理每天給藥1次。試驗(yàn)動(dòng)物種類褐家鼠(Rattus norvegicus)品系Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)性別雌性年齡開(kāi)始給藥時(shí)，大鼠約10至12周齡?；\養(yǎng)和維持a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在不銹鋼籠內(nèi)。b)溫度和濕度
用計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄大鼠室內(nèi)的環(huán)境條件(溫度，濕度)。目標(biāo)條件是22±3℃和50±20％相對(duì)濕度。c)光照-黑暗周期
光周期是12小時(shí)的光照和12小時(shí)的黑暗。用有效計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄這些參數(shù)。光照是自0715至1915。d)飲食
隨意提供合格的嚙齒動(dòng)物飼料(Lab Diet#5002，丸)和自來(lái)水。大鼠在尸檢前夜禁食(只能接近水)。隨機(jī)化
在適應(yīng)期間隨機(jī)將大鼠分配為各組。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組
將120只大鼠分配為8組，每組15只動(dòng)物，用于進(jìn)行下面的研究試驗(yàn)品的制備
使用濃度為1.0mg/ml的LHRH-A溶液。我們利用下面的載體稀釋這種濃溶液(目的在于獲得0.002mg/ml的終濃度)含0.3％氯化鈉和0.25％單堿價(jià)磷酸鈉一水合物的水。用氫氧化鈉(水溶液)調(diào)節(jié)pH至5.6-6.2。
除LHRH-A溶液之外，按照最近的體重(組的平均值)每2周一次制備給藥混懸液/溶液。為了經(jīng)口服施用EM-652.HCl，在首次給藥日之前至少48小時(shí)向預(yù)先稱重到玻璃瓶中的試驗(yàn)化合物加入載體(0.4％甲基纖維素)。為了確保給藥混懸液的均勻性，在2-8℃下攪拌至少48小時(shí)。給藥混懸液保存在2-8℃下。為了局部施用DHEA溶液，向DHEA中加入乙醇并攪拌該混合物直至DHEA溶解。隨后，加入聚丙二醇且攪拌該溶液直至均勻。該給藥溶液保存在2-8℃(一部分的溶液可以保存在室溫下以便局部施用于動(dòng)物)。為了皮下注射LHRH-A溶液，每個(gè)月用適當(dāng)?shù)妮d體制備濃溶液的稀釋液一次。給藥溶液保存在2-8℃。動(dòng)物的準(zhǔn)備
在首次給藥日之前和在研究期間根據(jù)需要，將一部分的背側(cè)皮膚(約5×5cm)剃凈用于DHEA的局部涂敷。給藥
試驗(yàn)化合物或載體的給藥是在該方案的研究第1天開(kāi)始。試驗(yàn)化合物作為0.4％甲基纖維素的混懸液經(jīng)口飼管(0.5ml/管/只動(dòng)物)每天給藥1次，或在50％乙醇-50％丙二醇中(0.5ml/涂敷/只動(dòng)物)每天局部涂敷1次。5-8組的大鼠通過(guò)皮下注射每天還接受1次LHRH-A(0.5ml/注射/只動(dòng)物)。沒(méi)有經(jīng)口服和/或經(jīng)局部接受試驗(yàn)化合物的大鼠將單獨(dú)接受適當(dāng)?shù)妮d體。機(jī)體脂肪的測(cè)量
在適應(yīng)期期間和6個(gè)月的處理之后，在異氟烷引起的麻醉下用雙能X射線吸光分析(DEXA；QDR 4500A，Hologic)測(cè)定全身骨骼和動(dòng)物右股骨的機(jī)體組成。結(jié)果
表4
實(shí)施例6EM-652.HCl、雌二醇和DHEA的20天處理對(duì)卵巢切除雌性大鼠中機(jī)體脂肪和體重參數(shù)的作用。URMA-r-27-00
本研究的目的是評(píng)價(jià)EM-652.HCl、雌二醇和DHEA經(jīng)口服單獨(dú)或聯(lián)合給藥對(duì)接受含豐富碳水化合物飼料的卵巢切除(OVX)雌性大鼠的機(jī)體脂肪和體重參數(shù)的影響。試驗(yàn)動(dòng)物種類褐家鼠品系Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)性別雌性體重開(kāi)始給藥后，體重約200-250g?；\養(yǎng)和維持a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。b)溫度和濕度
用計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄大鼠室內(nèi)的環(huán)境條件(溫度，濕度)。目標(biāo)條件是22±3℃和50±20％相對(duì)濕度。c)光照-黑暗周期
光周期是12小時(shí)的光照和12小時(shí)的黑暗。用計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄這些參數(shù)。光照是自0715至1915。d)飲食
隨意提供合格的嚙齒動(dòng)物飼料(Lab Diet#5002，丸)和自來(lái)水。研究期間，大鼠隨意接受含豐富碳水化合物的飼料。該濃集飼料(#3飼料)由下列成份(g/100g)組成玉米淀粉，31.2；葡萄糖，31.2；酪蛋白，20.0；玉米油，6.4；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.0；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，4.9；纖維，5.0。
在尸檢前一天，在下午結(jié)束時(shí)(約16h00)使大鼠禁食(只接近水)。隨機(jī)化
在研究的第0天隨機(jī)將大鼠分配為各組。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組
80大鼠被分配為8個(gè)組，每組10只動(dòng)物用于進(jìn)行下面的研究動(dòng)物的準(zhǔn)備
在研究的第0天，在異氟烷引起的麻醉下，將2-8組的大鼠通過(guò)兩側(cè)脅腹切口切除卵巢。對(duì)第1組大鼠進(jìn)行假性手術(shù)。給藥
試驗(yàn)品或載體的給藥在第一天開(kāi)始(卵巢切除術(shù)后第二天)。試驗(yàn)化合物經(jīng)口飼管(0.5ml/管)作為0.4％甲基纖維素的混懸液施用20天。機(jī)體組成的測(cè)量
在研究的第21天(尸檢之前)，在異氟烷引起的麻醉下用雙能X射線吸光分析(DEXA；QDR 4500A，Hologic)測(cè)定全身骨骼和動(dòng)物右股骨的機(jī)體組成，從而測(cè)出處理對(duì)脂肪百分比的影響。采集的器官和組織
收集右和左腹膜后脂肪組織且稱重。結(jié)果
表5
實(shí)施例7利用乙炔雌二醇、EM-652.HCl、雷洛昔芬和DHEA的34周處理對(duì)卵巢切除雌性大鼠中的機(jī)體脂肪和體重參數(shù)的影響URMA-r-42-98
本研究的目的在于評(píng)估利用EM-652.HCl與DHEA的聯(lián)用處理對(duì)卵巢切除大鼠中機(jī)體脂肪和體重參數(shù)的影響。鑒于此目的，卵巢切除大鼠每天接受EM-652.HCl(1mg/kg)和DHEA(80mg/kg)單獨(dú)或聯(lián)合的給藥，共34周。經(jīng)口服給予EM-652.HCl，同時(shí)將DHEA局部涂敷在背側(cè)皮膚上。一組動(dòng)物經(jīng)口服用17α-乙炔雌二醇(0.1mg/kg)和雷洛昔芬(EM-1105；1mg/kg)處理以便比較。材料和方法動(dòng)物和處理
在處理開(kāi)始時(shí)選用10-12周齡的重量約235-250g的雌性Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)Br)。將80只動(dòng)物隨機(jī)分配為7組，每組11-12只動(dòng)物，各組為1)完整對(duì)照；2)OVX對(duì)照；3)OVX+EE2(0.1mg/kg)；4)OVX+雷洛昔芬(1mg/kg)；5)OVX+EM-652.HCl(1mg/kg)；6)OVX-DHEA(80mg/kg)；7)OVX+EM-652.HCl+DHEA。在研究的第一天，在異氟烷麻醉下將適當(dāng)組的動(dòng)物兩側(cè)卵巢切除(OVX)。通過(guò)口飼管每天施用1次在0.4％甲基纖維素中為混懸液(0.5ml/只大鼠)的EM-652.HCl、雷洛昔芬和EE2(Steraloids)，共34周，同時(shí)每天將在50％乙醇-50％丙二醇中為溶液的DHEA每天局部涂敷在背側(cè)皮膚(0.5ml/大鼠)共34周。末次給藥后約24小時(shí)，在異氟烷麻醉下通過(guò)在腹主動(dòng)脈處放血來(lái)處死禁食過(guò)夜的動(dòng)物。收集左和右腹膜后脂肪組織且稱重。機(jī)體組成的測(cè)定
34周的處理之后，在異氟烷麻醉下用雙能X射線吸光分析(DEXA；QDR 4500A，Hologic，Waltham，MA)和局部高分辨掃描軟件掃描各大鼠的全身骨骼。測(cè)定機(jī)體組成(包括脂肪百分比)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。結(jié)果
表6
實(shí)施例8AEM-652.HCl對(duì)瘦型和肥胖型Zucker雄性大鼠中的能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用URMA-r-61-99本研究的目的是測(cè)定EM-652.HCl對(duì)瘦型和肥胖型Zucker雄性大鼠中的能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用。鑒于此目的，EM-659.HCl(2.5mg/kg)經(jīng)口服(口飼管)每天給瘦型和肥胖型Zucker雄性大鼠施用1次，共14天。
試驗(yàn)動(dòng)物
種類褐家鼠
品系Zucker
性別雄性
體重開(kāi)始給藥時(shí)，體重約瘦型大鼠175±15g；肥胖型大鼠235±15g。
適應(yīng)在試驗(yàn)開(kāi)始之前至少5天時(shí)使大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件。籠養(yǎng)和維持a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。b)溫度
每天記錄1次大鼠室內(nèi)的溫度。目標(biāo)溫度為22±3℃c)光照-黑暗周期
光周期是10小時(shí)的光照和14小時(shí)的黑暗。燈光在0700打開(kāi)并且在17h00關(guān)閉。d)飲食
在適應(yīng)期中，大鼠隨意接受市售嚙齒動(dòng)物飼料(Purina，#5075)和自來(lái)水。在研究期間，大鼠接受下面的飼料(#3飼料)，其組成為(g/100g)玉米淀粉，31.2；葡萄糖，31.2；酪蛋白，20.0；玉米油，6.4；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.0；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，4.9；纖維，5.0。
在尸檢當(dāng)天早晨約07h00時(shí)使大鼠禁食(只能接近水)。隨機(jī)化
在首次給藥日前1天，稱重大鼠且分配到各組，以便使各組具有相同的平均體重。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組
將16只瘦型和16只肥胖型完整雄性大鼠分配為4組大鼠，每組8只大鼠用于進(jìn)行下面的研究
給藥
在研究的第一天開(kāi)始施用試驗(yàn)化合物或載體。試驗(yàn)化合物EM-652.HCl作為0.4％甲基纖維素的混懸液經(jīng)口飼管(0.5ml/管/大鼠)每天一次施用14天。在此期間對(duì)照組的大鼠接受單獨(dú)的載體(0.5ml/口飼管/大鼠)。
體重
在適應(yīng)期中，在給藥開(kāi)始前1天稱重動(dòng)物以隨機(jī)化。隨后，在首次給藥日并且此后每2天以及尸檢當(dāng)天稱重大鼠。記錄體重，精確度為1g。
食物消耗在研究期間每2天評(píng)估食物的消耗量。
處死的方法
約6個(gè)小時(shí)的禁食期之后，將動(dòng)物尸檢(末次給藥后約30小時(shí))。用氯胺酮-賽拉嗪麻醉且通過(guò)心臟穿刺放血。血樣
利用Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911分析器(Boehriuger Mannlleim Diagnostic Laboratory Systems)測(cè)定冷凍血漿樣本的血脂(總膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TG))和葡萄糖。用下列試劑盒測(cè)定冷凍血漿樣本的循環(huán)激素和底物(萊普亭，胰島素)萊普亭Linco RIA試劑盒胰島素Linco RIA試劑盒收集的器官和組織
將1片的肝臟(～1g)在液氮中冷凍用于TG和CHOL含量的測(cè)定(Folch氏法)。收集腹膜后脂肪組織和比目魚(yú)肌并且在液氮中冷凍用于脂蛋白脂酶(LPL)活性的進(jìn)一步測(cè)定。收集腹側(cè)前列腺、睪丸和精囊。稱重前列腺、睪丸(右睪丸和左睪丸之和)和右精囊(液體排空)。棄去右精囊。
表7
雄性Zucker大鼠
實(shí)施例8BEM-652.HCl對(duì)瘦型和肥胖型Zucker雌性大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用URMA-r-47-99本研究的目的是測(cè)定EM-652.HCl對(duì)瘦型和肥胖型Zucker雌性大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用。鑒于此目的，EM-659.Cl(2.5mg/kg)經(jīng)口服(口飼管)每天一次給完整瘦型和肥胖型Zucker雌性大鼠施用，共14天。
試驗(yàn)動(dòng)物
種類褐家鼠
品系Zucker
性別雌性
年齡開(kāi)始給藥時(shí)，體重約
瘦型大鼠114±2g；肥胖型大鼠182±6g。適應(yīng)
在試驗(yàn)開(kāi)始之前至少5天時(shí)使大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件。籠養(yǎng)和維持
a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。
b)溫度
每天記錄1次大鼠室內(nèi)的溫度。目標(biāo)溫度為22±3℃
c)光照-黑暗周期
光周期是10小時(shí)的光照和14小時(shí)的黑暗。燈光在0700打開(kāi)并且在17h00關(guān)閉。
d)飲食
在適應(yīng)期期間，大鼠隨意接受市售嚙齒動(dòng)物飼料(Purina，#5075)和自來(lái)水。在研究期間，大鼠接受下面的飼料(#3飼料)，其組成為(g/100g)玉米淀粉，31.2；葡萄糖，31.2；酪蛋白，20.0；玉米油，6.4；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.0；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，4.9；纖維，5.0。在尸檢當(dāng)天早晨約07h00時(shí)使大鼠禁食(只能接近水)。隨機(jī)化
在首次給藥日前2天，稱重大鼠且隨機(jī)分配到各組，以便使各組具有相同的平均體重。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組
將16只瘦型和16只肥胖型完整雌性大鼠分配為4組大鼠，每組8只大鼠用于進(jìn)行下面的研究給藥
在研究的第一天開(kāi)始施用試驗(yàn)化合物或載體。試驗(yàn)化合物EM-652.HCl作為0.4％甲基纖維素的混懸液經(jīng)口飼管(0.5ml/管)每天一次施用14天。在此期間對(duì)照組的大鼠接受單獨(dú)的載體(0.5ml/口飼管/大鼠)。體重
在適應(yīng)期中，在給藥開(kāi)始前1天稱重動(dòng)物以隨機(jī)化。隨后，在研究的第1天且在研究期間每2天以及尸檢當(dāng)天稱重大鼠。記錄體重，精確度為1g。食物消耗
研究期間每2天對(duì)食物的消耗量進(jìn)行評(píng)估。處死的方法
約6個(gè)小時(shí)的禁食期之后，將動(dòng)物尸檢(末次給藥后約30小時(shí))。用氯胺酮-賽拉嗪麻醉且通過(guò)心臟穿刺放血。血樣
利用Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911分析器(Boehriuger Mannlleim Diagnostic Laboratory Systems)測(cè)定冷凍血漿樣本的血脂(總膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TG))和葡萄糖。用下列試劑盒測(cè)定冷凍血漿樣本的循環(huán)激素和底物(萊普亭，胰島素)萊普亭Linco RIA試劑盒胰島素Linco RIA試劑盒收集的器官和組織
收集并稱重肝臟。將1片肝臟(～1g)在液氮中冷凍用于TG和CHOL含量的測(cè)定(Folch氏法)。收集腎上腺，稱重(右側(cè)和左側(cè)之和)并棄去。收集子宮和卵巢、稱重并保存在10％緩沖福爾馬林中用于進(jìn)一步的組織學(xué)檢驗(yàn)。將左卵巢和右卵巢一起稱重(不包括輸卵管)。
表8
實(shí)施例9EM-652.HCl和DHEA單獨(dú)或聯(lián)合給藥對(duì)于大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用URMA-r-03-99
本研究的目的是測(cè)定EM-652.HCl和DHEA單獨(dú)或聯(lián)合給藥對(duì)于大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用。在用EM-652.HCl(0.5mg/只大鼠，～2.5mg/kg，經(jīng)口服)和DHEA(20mg/只大鼠，～100mg/kg，局部涂敷)單獨(dú)或聯(lián)合施用給接受高糖-高脂肪飼料的完整(INT)和卵巢切除(OVX)雌性大鼠后，針對(duì)多個(gè)參數(shù)評(píng)估處理的效果。為了比較，一完整和卵巢切除對(duì)照組接受該濃集飼料，同時(shí)其它對(duì)照動(dòng)物(完整和OVX)接受市售嚙齒動(dòng)物飼料。試驗(yàn)動(dòng)物
種類褐家鼠
品系Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)
性別雌性
年齡開(kāi)始給藥時(shí)，體重約190-220g。適應(yīng)
在試驗(yàn)開(kāi)始之前至少5天時(shí)使大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件?；\養(yǎng)和維持
a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。
b)溫度
每天記錄1次大鼠室內(nèi)的溫度。目標(biāo)溫度為22±3℃
c)光照-黑暗周期
光周期是10小時(shí)的光照和14小時(shí)的黑暗。燈光在0600打開(kāi)并且在16h00關(guān)閉。
d)飲食
在適應(yīng)期期間，大鼠隨意接受市售嚙齒動(dòng)物飼料(Purina，#5075)和自來(lái)水。在研究期間，第1和2組繼續(xù)接受市售飼料，同時(shí)第3-10組接受高蔗糖-高脂肪飼料，其組成如下(g/100g)蔗糖，45；玉米油，10；豬油，10；酪氨酸，22.5；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.2；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，5.5；纖維，5.5。
在其尸檢前夜約22h00時(shí)使大鼠禁食(只能接近水)。隨機(jī)化
在其抵達(dá)后數(shù)天，稱重大鼠且分配為各組，以便使各組具有相同的平均體重。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組將80大鼠分配為10組大鼠，每組8只大鼠用于進(jìn)行下面的研究1市售嚙齒動(dòng)物食物2高糖-高脂肪飼料動(dòng)物的準(zhǔn)備
在研究的第0天，在異氟烷麻醉下將適當(dāng)組的大鼠切除卵巢(兩側(cè)脅腹切口)。完整大鼠進(jìn)行假性手術(shù)。給藥
卵巢切除術(shù)后第二天(第1天)施用試驗(yàn)化合物或載體。試驗(yàn)化合物EM-652.HCl作為0.4％甲基纖維素的混懸液經(jīng)口飼管(0.5ml/管)每天一次施用20天，同時(shí)在此期間將DHEA局部涂敷在背側(cè)皮膚(0.5ml/涂布/只大鼠)。對(duì)照組的大鼠接受單獨(dú)的載體(口服和局部涂敷)。在研究的第21天在末次給藥后約24小時(shí)時(shí)處死大鼠。體重
在第0天、研究期間每2天和在尸檢當(dāng)天稱重大鼠。記錄體重，精確度為1g。食物消耗
研究期間每2天對(duì)食物的消耗量進(jìn)行評(píng)估。處死的方法
在研究的第21天，末次給藥后約24小時(shí)時(shí)處死禁食過(guò)夜的大鼠。它們用氯胺酮-賽拉嗪麻醉且通過(guò)心臟穿刺放血。血樣
利用Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911分析器(Boehriuger Mannlleim Diagnostic Laboratory Systems)測(cè)定冷凍血漿樣本的血脂(總膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TG))和葡萄糖。用下列試劑盒測(cè)定冷凍血漿樣本的循環(huán)激素和底物(胰島素，萊普亭，葡萄糖)胰島素Linco R1A試劑盒，葡萄糖Beckmann自動(dòng)葡萄糖分析儀萊普亭Linco RI試劑盒收集的器官和組織收集所有動(dòng)物的下列組織并稱重
肌肉(比目魚(yú)肌和VLM)、脂肪(腹膜后和腹股溝)、心臟、褐色脂肪組織。
也收集腦。
將1片肝臟冷凍用于TG和CHOL含量的后續(xù)測(cè)定(Folch氏法)，并且其它組織用于測(cè)定LPL活性。取出子宮(和完整組的卵巢)，將殘余脂肪剝?nèi)ィQ重且保存在10％緩沖福爾馬林中。結(jié)果
白色脂肪組織白色脂肪組織褐色脂肪組織
腹股溝 腹膜后
脂蛋白 脂蛋白 脂蛋白
組 總重量 重量 重量 重量
脂酶活性 脂酶活性 脂酶活性 飲食 處理g g μU/g gμU/g gμU/g
蛋白蛋白 蛋白食物 假性手術(shù)對(duì)照239±6 0.410±0.043252±550.983±0.1041526±2170.329±0.0351053±138食物 OVX對(duì)照 294±6 0.888±0.146570±100 1.472±0.1992415±1470.466±0.041688±88蔗糖+脂肪 假性手術(shù)對(duì)照257±10 0.716±0.107344±731.765±0.2921470±2420.376±0.0331073±152蔗糖+脂肪 假性手術(shù)+EM-238±5 0.435±0.043160±231.058±0.1621277±56 0.306±0.0441196±83
652.HCl 蔗糖+脂肪 假性手術(shù)252±5 0.659±0.075194±451.067±0.1491177±1880.373±0.036982±72
+DHEA蔗糖+脂肪 假性手術(shù)+EM-249±4 0.489±0.083224±450.909±0.1241349±1330.322±0.026885±78
652.HCl
+DHEA蔗糖+脂肪 OVX對(duì)照 316±8 1.800±0.251725±106 3.058±0.2972503±2150.519±0.064867±99蔗糖+脂肪 OVX+EM- 268±5 0.709±0.085310±631.370±0.2111612±1860.408±0.025678±65
652.HCl蔗糖+脂肪 OVX+DHEA274±9 0.885±0.156583±134 1.699±0.1511905±1120.342±0.0491069±96蔗糖+脂肪 OVX+EM- 263±5 0.658±0.088306±421.436±0.1621542±1180.373±0.040876±75
652.HCl
+DHEA
比目魚(yú)肌 股外肌 肝總
組 重量 脂蛋白重量 脂蛋白 膽固醇 甘油三酯
脂酶活性 脂酶活性飲食處理 g μU/g 蛋白g μU/g 蛋白 mmol/L mmol/L食物 假性手術(shù)對(duì)照0.106±0.00262.7±3.00.872±0.02711.7±3.50.076±0.004 0.134±0.019食物 OVX對(duì)照 0.116±0.00543.8±3.31.000±0.04213.1±3.70.082±0.004 0.169±0.027蔗糖+脂肪假性手術(shù)對(duì)照0.096±0.00555.0±5.10.927±0.04013.1±3.20.083±0.002 0.123±0.014蔗糖+脂肪假性手術(shù)0.098±0.00553.9±3.30.965±0.03416.2±3.10.096±0.011 0.360±0.102
+EM-652.HCl蔗糖+脂肪假性手術(shù)+DHEA 0.105±0.00453.6±7.50.893±0.04311.5±2.00.068±0.003 0.038±0.007蔗糖+脂肪假性手術(shù)+EM-0.098±0.00556.6±4.50.971±0.02919.5±3.50.101±0.008 0.184±0.033
652.HCl+DHEA蔗糖+脂肪OVX對(duì)照 0.110±0.00439.2±3.91.037±0.02610.9±1.82 0.097±0.007 0.262±0.052蔗糖+脂肪OVX+EM- 0.104±0.00439.1±5.00.944±0.03010.8±3.20.092±0.006 0.348±0.078
652.HCl蔗糖+脂肪OVX+DHEA0.103±0.00545.9±4.70.920±0.04913.1±5.40.079±0.005 0.165±0.047蔗糖+脂肪OVX+EM- 0.101±0.00148.4±4.80.929±0.03811.0±4.10.106±0.008 0.273±0.031
652.HCl+DHEA
血漿 血漿 血漿總 血漿 血漿組 胰島素 葡萄糖膽固醇 甘油三酯萊普亭飲食處理nmol/L mmol/Lmmol/L mmol/L ng/mL食物 假性手術(shù)對(duì)照0.071±0.0107.56±0.241.61±0.17 0.49±0.121.404±0.224食物 OVX對(duì)照 0.146±0.0278.69±0.572.10±0.10 0.68±0.102.388±0.737蔗糖+脂肪假性手術(shù)對(duì)照0.079±0.0139.07±0.481.60±0.12 0.66±0.173.572±0.699蔗糖+脂肪假性手術(shù)+EM-652.HCl 0.057±0.0049.03±0.491.15±0.06 0.60±0.122.019±0.402蔗糖+脂肪假性手術(shù)+DHEA 0.048±0.0128.05±0.511.59±0.17 0.61±0.111.977±0.255蔗糖+脂肪假性手術(shù)+EM-0.049±0.0137.99±0.440.93±0.08 0.95±0.211.071±0.162
652.HCl+DHEA蔗糖+脂肪OVX對(duì)照 0.125±0.02210.46±0.72 1.62±0.26 0.83±0.137.900±1.982蔗糖+脂肪OVX+EM-652.HCl 0.089±0.0139.06±0.301.15±0.11 0.97±0.161.989±0.326蔗糖+脂肪OVX+DHEA0.052±0.0098.64±0.241.57±0.12 0.62±0.082.757±0.631蔗糖+脂肪OVX+EM- 0.060±0.0108.65±0.380.87±0.09 0.92±0.211.672±0.327
652.HCl+DHEA
實(shí)施例10EM-652.HCl、TSE424、拉索昔芬、LY353381和雷洛昔芬對(duì)卵巢切除雌性大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝的作用URMA-r-45-00
本研究的目的測(cè)定用文獻(xiàn)所述的不同選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑測(cè)定大鼠中能量平衡和脂質(zhì)-脂蛋白代謝代謝的作用，并將所得的結(jié)果與EM-652.HCl的結(jié)果比較。鑒于此目的，試驗(yàn)化合物經(jīng)口飼管在0.4％甲基纖維素中施用給卵巢切除雌性大鼠(0.5mg各化合物/只大鼠；0.5ml/只大鼠)，共20天。用17β-雌二醇(E2)處理的完整對(duì)照、卵巢切除(OVX)對(duì)照和OVX大鼠用作參照。試驗(yàn)動(dòng)物
種類褐家鼠
品系Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)
性別雌性
體重開(kāi)始給藥時(shí)，體重約200-225g?；\養(yǎng)和維持
a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。
b)溫度
用計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄大鼠室內(nèi)環(huán)境條件(溫度，濕度)。目標(biāo)條件是22±3℃和50±20％相對(duì)濕度。
c)光照-黑暗周期
光周期是10小時(shí)的光照和14小時(shí)的黑暗。燈光在0715打開(kāi)并且在17h15關(guān)閉。
d)飲食
在適應(yīng)期間，大鼠隨意接受合格的嚙齒動(dòng)物飼料(Lab Diet#5002，丸)和自來(lái)水，同時(shí)在研究期間，它們隨意接受高碳水化合物飼料(#3飼料)和自來(lái)水。飼料組成如下(g/100g)玉米淀粉，31.2；葡萄糖，31.2；酪蛋白，20.0；玉米油，6.4；dl-蛋氨酸，0.3；復(fù)合維生素，1.0；AIN-76復(fù)合礦物質(zhì)，4.9；纖維，5.0。在其尸檢當(dāng)天早晨約07h00時(shí)使大鼠禁食(只能接近水)。隨機(jī)化
大鼠分配為各組以便使各組具有相同的平均體重。方法和試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)組
將77大鼠分配為8組大鼠，每組9-10只大鼠用于進(jìn)行下面的研究動(dòng)物的準(zhǔn)備
在研究的第0天，在異氟烷麻醉下將第2-8組的大鼠切除卵巢(通過(guò)兩側(cè)脅腹切口)。第1組的大鼠進(jìn)行假性手術(shù)。體重
在第0天(手術(shù))、研究期間每2天和在尸檢當(dāng)天稱重大鼠。食物消耗
每2天對(duì)食物的消耗量進(jìn)行評(píng)估。機(jī)體組成(脂肪百分比)
為了測(cè)定處理對(duì)這百分比的作用，在研究的第17天用雙能X射線吸光分析(DEXA；QDR 4500A.Hologic，Waltham，MA)測(cè)定機(jī)體組成。處死的方法
在研究的第21天，末次給藥后約24小時(shí)和禁食6小時(shí)后，在氯胺酮-賽拉嗪麻醉下于腹部主動(dòng)脈處通過(guò)放血處死動(dòng)物。血樣
利用Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911分析器(Boehriuger Mannlleim Diagnostic Laboratory Systems)測(cè)定冷凍血漿樣本的血脂(總膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TG))和葡萄糖。用下列試劑盒測(cè)定血清樣本的循環(huán)激素和底物(胰島素，萊普亭，葡萄糖)胰島素Linco RIA試劑盒，萊普亭Linco RIA試劑盒收集的器官和組織收集所有動(dòng)物的下列組織并稱重
肌肉(右比目魚(yú)肌和右VLM)、脂肪(右腹膜后和右腹股溝)、褐色脂肪組織、心臟、肝臟、子宮和陰道。
將1片(～0.5g)的肝臟冷凍在液氮中用于TG和CHOL含量的后續(xù)測(cè)定(Folch氏法)。將所有組織的一片～0.1g(除子宮和陰道之外)冷凍在液氮中并且在-80℃下保存用于脂蛋白-脂酶(LPL)活性的后續(xù)測(cè)定。子宮和陰道保存在10％緩沖福爾馬林中用于組織學(xué)檢驗(yàn)。動(dòng)物的尸體置于金屬盒內(nèi)并且保存在-20℃下直至測(cè)定的能量平衡。結(jié)果
表10處理 總重量白色脂肪組織腹股溝 白色脂肪組織 褐色脂肪組織
腹膜后
重量脂蛋白 重量 脂蛋白 重量 脂蛋白
脂酶活性脂酶活性 脂酶活性
g gμU/g 蛋白 g μU/g 蛋白 g μU/g 蛋白完整 232±70.350±0.037379±691.31±0.09 1537±2530.410±0.030973±115OVX284±50.320±0.048797±971.55±0.15 2664±3380.380±0.027880±130OVX+EM-252±40.244±0.028684±216 1.32±0.21 1917±3650.339±0.038900±91652.HClOVX+TSE424 260±50.326±0.042766±173 1.27±0.15 1750±1400.350±0.0191017±83OVX+ 210±20.187±0.023801±138 0.867±0.1321417±1630.244±0.022982±98拉索昔芬OVX+LY 231±40.290±0.038559±165 0.968±0.1201365±1190.368±0.031888±65353381OVX+ 230±30.245±0.047579±461.32±0.24 1510±52 0.307±0.26 960±116雷洛昔芬OVX+E2198±40.158±0.019416±740.550±0.1021442±2430.211±0.0211198±62
比目魚(yú)肌肉 股外肌處理重量 脂蛋白 重量 脂蛋白
脂酶活性 脂酶活性
g μU/g 蛋白 g μU/g 蛋白完整 0.113±0.02017.2±2.20.924±0.031NDOVX 0.108±0.00617.6±3.90.963±0.045NDOVX+EM-652.HCl 0.118±0.01814.5±4.11.00±0.047 NDOVX+TSE424 0.100±0.00411.7±1.90.993±0.33 NDOVX+拉索昔芬 0.096±0.00310.9±1.50.800±0.048NDOVX+LY353381 0.092±0.00210.1±1.00.955±0.20 NDOVX+雷洛普芬 0.099±0.00310.2±2.00.795±0.055NDOVX+E2 0.086±0.00310.9±2.00.718±0.026
累積食物 血漿 血漿血漿總 血漿 血漿處理
完整 胰島素 葡萄糖 膽固醇甘油三酯 萊普亭
g nmol/L mmol/Lmmol/Lmmol/L ng/mL完整332±14 0.086±0.11 13.6±0.7 2.41±0.160.62±0.072.46±0.37OVX 389±80.178±0.03015.9±1.9 2.58±0.110.63±0.053.48±0.40OVX+EM-652.HCl 324±50.122±0.02115.9±1.4 1.41±0.0.9 0.91±0.171.10±0.22OVX+TSE424 347±90.113±0.02916.5±2.7 1.66±0.160.93±0.242.12±0.44OVX+拉索昔芬283±14 0.095±0.01715.8±1.321.29±0.060.81±0.210.97±0.29OVX+LY353381312±70.104±0.11 17.1±0.721.15±0.081.23±0.281.22±0.21OVX+雷洛昔芬307±80.077±0.10 13.8±1.2 1.19±0.081.20±0.351.39±0.30OVX+E2 255±90.070±0.00711.8±1.352.03±0.150.43±0.040.309±0.097
實(shí)施例11本發(fā)明的化合物以及現(xiàn)有技術(shù)的化合物對(duì)人子宮內(nèi)膜腺癌Ishikawa細(xì)胞中堿性磷酸酶活性的作用材料儲(chǔ)備細(xì)胞培養(yǎng)基的維持
Dr.Erlio Gurpide，The Mount Sinai Medical Center，New York，NY.友好提供了由良好分化的腺癌衍化的人Ishikawa細(xì)胞。Ishikawa細(xì)胞一般維持在Eagle最小必需培養(yǎng)基(MEM)中，含有5％(vol/vol)FBS且補(bǔ)充有100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、0.1mM非必需氨基酸溶液。在37℃下將細(xì)胞置于Falcon T75燒瓶?jī)?nèi)，密度1.5×106細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)
試驗(yàn)開(kāi)始之前24小時(shí)，近融合的Ishikawa細(xì)胞的培養(yǎng)基用新制的無(wú)雌激素基礎(chǔ)培養(yǎng)基(EFBM)置換，其由1∶1(v∶v)無(wú)酚紅Ham′s F-12和Dulbecco改進(jìn)Eagle培養(yǎng)基(DMEM)的混合物，其中補(bǔ)充了100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素、2mM谷酰胺和5％FBS，該FBS用葡聚糖涂層的炭處理2次除去內(nèi)源性甾類物質(zhì)。細(xì)胞隨后用0.1％胰酶制劑(Sigma)和0.25mM HEPES收獲，重新懸浮在EFBM中且鋪在Falcon 96孔平底微量滴定平板中，在100μl的體積中密度為2.2×104細(xì)胞/孔且令其在平板的表面附著24小時(shí)。此后，培養(yǎng)基用新制的EFBM更換，其中含有指定濃度的化合物，終體積為200μl。將細(xì)胞培養(yǎng)5天，48小時(shí)后改變培養(yǎng)基。堿性磷酸酶試驗(yàn)
在培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，反轉(zhuǎn)微量滴定平板且傾出生長(zhǎng)培養(yǎng)基。在孔內(nèi)用200μL PBS(0.15M NaCl，10mM磷酸鈉，pH7.4)漂洗平板。隨后除去平板的PBS，同時(shí)小心地留下少許殘余PBS，再重復(fù)1次該洗滌過(guò)程。隨后棄去緩沖鹽水，并將反轉(zhuǎn)平板輕輕印跡在紙巾上。隨后更換覆蓋物，將平板在-80℃下放置15分鐘，隨后在室溫下融化10分鐘。然后將平板置于冰上，加入50μl的冰冷溶液，其中含有5mM對(duì)硝基苯基磷酸酯、0.24mM MgCl2和1M的二乙醇胺(pH9.8)。隨后溫?zé)崞桨逯潦覝兀層蓪?duì)硝基苯基的產(chǎn)生黃色顯色(8分鐘)。在405nm下在酶聯(lián)免疫吸著測(cè)定平板讀取器(BIO-RAD，model250 EIA Reader)中監(jiān)測(cè)平板。計(jì)算
利用加權(quán)迭代非線性乘方回歸(weighted iterative nonlinearsquares regression)計(jì)算劑量-反應(yīng)曲線以及IC50。
表11
*1nM E2刺激的％＝
OD 405nm化合物-OD 405nm基礎(chǔ)/OD 405nm 1nME2-OD405nm基礎(chǔ)
請(qǐng)另外參見(jiàn)Labrie等的EM-652(SCH57068)，第三代SERM活性物質(zhì)，可在乳腺和子宮內(nèi)膜中作為純抗雌激素，J.Steroid Biochem.和Mol.Bio.69，51-84，1999。
實(shí)施例12EM-652.HCl和FCE424對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的增殖的作用
方法
儲(chǔ)備細(xì)胞培養(yǎng)基的維持
從American Type Culture Collection#HTB 22的第147傳代得到MCF-7人乳腺癌細(xì)胞并且按常規(guī)在無(wú)酚紅Dulbecco改進(jìn)的Eagle的Ham F12培養(yǎng)基、上述補(bǔ)充物和5％FBS中生長(zhǎng)。MCF-7人乳腺癌細(xì)胞系衍生自69歲高加索女性患者的胸膜滲漏液。采用第148至165傳代之間的MCF-7細(xì)胞并且每周進(jìn)行傳代培養(yǎng)。細(xì)胞增殖研究
用0.1％胰酶制劑(Sigma)收獲其后對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞并且重新懸浮在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有50ng牛胰島素/ml和5％(v/v)FBS，該FBS用葡聚糖涂層炭處理2次以除去內(nèi)源性甾類化合物。將細(xì)胞以指定密度鋪板在24孔Falcon塑料培養(yǎng)平板(2cm2/孔)上且令其附著在平板的表面上72小時(shí)。此后，該培養(yǎng)基用含有指定濃度的化合物的新制培養(yǎng)基更換，該化合物溶液在E2存在或不存在下用99％雙蒸乙醇稀釋1000x儲(chǔ)備溶液得到。對(duì)照細(xì)胞只接受乙醇載體(0.1％EtOH，v/v)。在規(guī)定時(shí)間間隔培養(yǎng)細(xì)胞同時(shí)每隔2-或3-天更換培養(yǎng)基。通過(guò)測(cè)定DNA含量測(cè)定細(xì)胞數(shù)量。
計(jì)算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
用加權(quán)迭代非線性最小二乘方回歸計(jì)算劑量-反應(yīng)曲線以及IC50值。所有結(jié)果表示為平均值±SEM。
表12
實(shí)施例13EM-652.HCl、TSE424以及拉索昔芬單獨(dú)或與EM-652.HCl聯(lián)合給藥對(duì)卵巢切除雌性大鼠的子宮重量、脂肪和脂質(zhì)的相對(duì)作用URMA-r-44-00
本研究的目的是比較EM-652.HCl、TSE424和拉索昔芬單獨(dú)或與EM-652.HCl聯(lián)合給藥對(duì)卵巢切除雌性大鼠的子宮和陰道組織學(xué)的作用。鑒于這個(gè)目的，各化合物經(jīng)口服給卵巢切除雌性大鼠施用20天，并且在處理期結(jié)束時(shí)，收集子宮和脂肪且稱重。
試驗(yàn)動(dòng)物說(shuō)明
種類褐家鼠品系Sprague-Dawley大鼠(CrlCD(SD)BR VAF/PlusTM)
性別雌性
體重開(kāi)始給藥時(shí)，體重約200-225g。籠養(yǎng)和維持
a)籠養(yǎng)
在適應(yīng)期和研究期間將大鼠分別籠養(yǎng)在常規(guī)設(shè)計(jì)的不銹鋼籠內(nèi)。
b)溫度
用計(jì)算機(jī)化自動(dòng)系統(tǒng)連續(xù)記錄大鼠室內(nèi)環(huán)境條件(溫度，濕度)。目標(biāo)條件是22±3℃和50±20％相對(duì)濕度。
c)光照-黑暗周期
光周期是12小時(shí)的光照和12小時(shí)的黑暗。燈光在0715打開(kāi)并且在1915關(guān)閉。
d)飲食
隨意提供合格的嚙齒動(dòng)物飼料(Lab Diet#5002，丸)和自來(lái)水。隨機(jī)化
在卵巢切除術(shù)時(shí)將大鼠隨機(jī)分配為各組。試驗(yàn)組
將70大鼠分配為7組大鼠，每組9-11只大鼠用于進(jìn)行下面的研究動(dòng)物的準(zhǔn)備
在研究的第1天，在異氟烷麻醉下將第2-9組的大鼠切除卵巢。給藥
在研究的第2至21天，載體或試驗(yàn)化合物作為0.4％甲基纖維素中的混懸液經(jīng)口飼管(0.5ml/管/大鼠)給藥。體重
在研究第1天和在尸檢當(dāng)天(SD22)稱重大鼠。處死的方法
在末次給藥后約24小時(shí)，在異氟烷引起的麻醉下于腹部主動(dòng)脈處通過(guò)放血處死過(guò)夜禁食的大鼠。收集的器官和組織
取出子宮和腹膜后脂肪組織且稱重。結(jié)果
表13*，p＜0.05；**，p＜0.001，試驗(yàn)組對(duì)OVX對(duì)照組。藥物組合物實(shí)施例
下面通過(guò)舉例而不是限定的方式給出數(shù)種藥物組合物，所述的組合物使用了優(yōu)選的活性物質(zhì)SERM EM-800或EM-652.HCl，其單獨(dú)或與一種優(yōu)選活性的性類固醇前體DHEA、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸酯或雄甾-5-烯-3b，17b-二醇二半琥珀酸酯聯(lián)合使用。本發(fā)明或其聯(lián)合藥物形式的其它化合物可以用來(lái)代替(或除此之外)EM-800或EM-552.HCl、DHEA、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸鹽和雄甾-5-烯-3b，17b-二醇二半琥珀酸酯。活性成分的濃度可以在本發(fā)明所討論的寬范圍內(nèi)變化。其它可包含的成分的用量和種類為所屬領(lǐng)域熟知。
實(shí)施例A本發(fā)明的優(yōu)選SERM類物質(zhì)經(jīng)口服給藥。
表
實(shí)施例B
膠囊
聯(lián)合療法的藥物組合物
實(shí)施例C
片劑
實(shí)施例D
明膠膠囊
試劑盒實(shí)施例
下面通過(guò)實(shí)施例而不是限定的方式給出數(shù)種試劑盒，這些試劑盒利用另外優(yōu)選的活性SERM EM-800或EM-652.HCl與優(yōu)選的性類固醇前體DHEA、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸酯或雄甾-5-烯-3b，17b-二醇二半琥珀酸酯。
本發(fā)明或其聯(lián)合藥物形式的其它化合物可以用來(lái)代替(或除此之外)EM-800或EM-652.HCl、DHEA、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸酯或雄甾-5-烯-3b，17b-二醇而半琥珀酸酯?；钚猿煞值臐舛瓤梢栽诒景l(fā)明所討論的寬范圍內(nèi)變化。其它可包含的成分的用量和種類為所屬領(lǐng)域熟知。
實(shí)施例A
SERM是經(jīng)口服給藥同時(shí)性類固醇前體是經(jīng)皮給藥，口服給藥的SERM組合物(膠囊)
局部給藥的性類固醇前體組合物
(凝膠)
實(shí)施例BSERM和性類固醇前體是經(jīng)口服給藥的非甾類抗雌激素組合物
(膠囊)
經(jīng)口服給藥的性類固醇前體組合物
(明膠膠囊)
其它SERM類物質(zhì)可以代替上述制劑中的EM-800或EM-652.HCl，以及其它性類固醇抑制劑可以代替DHEA、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇3-乙酸酯或雄甾-5-烯-3b，17b-二醇二半琥珀酸酯。可以含有一種以上的SERM或一種以上的前體，在這種情況中，其重量百分比之和優(yōu)選是上述實(shí)施例中所給出的單一前體或單一SERM的重量百分比。
本發(fā)明描述了優(yōu)選實(shí)施方式和實(shí)施例，但不限于此。所屬領(lǐng)域的那些技術(shù)人員很容易認(rèn)識(shí)到更寬適用性，并且本發(fā)明的范圍只由本文的權(quán)利要求書(shū)限定。
權(quán)利要求
1.一種治療或減少肥胖發(fā)展的方法，該方法包括給需要上述治療或減少的對(duì)象施用治療有效量的具有下面通式的化合物或其可藥用鹽
其中R1和R2獨(dú)立地選自選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和可體內(nèi)轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物是光學(xué)活性的，因?yàn)樗哂写笥?0％的、在碳2上具有絕對(duì)構(gòu)型S的立體異構(gòu)體化合物。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述化合物或其鹽基本上沒(méi)有(2R)-對(duì)映異構(gòu)體。
4.權(quán)利要求3的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的下列化合物
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述的化合物是酸的鹽，所述的酸選自乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、氫氯酸、氫氯噻嗪酸、羥萘甲酸、乳酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、甲基硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、新戊酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)苯二甲酸、對(duì)甲苯磺酸和戊酸。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述的酸是鹽酸。
7. 權(quán)利要求3的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的下面結(jié)構(gòu)化合物的鹽酸鹽
8.一種治療或減少肥胖的發(fā)展的方法，包括給需要這種治療或減少肥胖發(fā)展的患者施用治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，和治療有效量的雌激素或甾類物質(zhì)，其選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇的和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為任何這些甾類物質(zhì)的化合物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下面的通式
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
10.一種藥物組合物，含有可藥用稀釋劑或載體、治療可接受量的具有下面通式的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)轉(zhuǎn)化羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)；和
雌激素或性甾類前體選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為任何所述前體的化合物。
11.一種藥物組合物，含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體，治療可接受量的選自下面的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑
和雌激素或性甾類前體，其選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為任一個(gè)的化合物。
12.一種減少腹部脂肪或減少腹部脂肪蓄積的方法，包括給需要這種治療或減少的對(duì)象施用治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑或其可藥用鹽。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下面通式
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是光學(xué)活性的，因?yàn)樗哂写笥?0％的在碳2上具有絕對(duì)構(gòu)型S的立體異構(gòu)體化合物。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述化合物或其鹽基本上沒(méi)有(2R)-對(duì)映異構(gòu)體。
16.權(quán)利要求14的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的下面的化合物
17.權(quán)利要求12的方法，其中所述的化合物是酸的鹽，所述的酸選自乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、氫氯酸、氫氯噻嗪酸、羥萘甲酸、乳酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、甲基硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、新戊酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)苯二甲酸、對(duì)甲苯磺酸和戊酸。
18.權(quán)利要求12的方法，其中所述的酸是鹽酸。
19.權(quán)利要求15的方法，包括給患者施用治療有效量的下面結(jié)構(gòu)的鹽酸鹽化合物
20.一種減少腹部脂肪或減少腹部脂肪蓄積的發(fā)展的方法，該方法包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的任何選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，和雌激素或治療有效量的選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為任何上述前體的甾類物質(zhì)。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下面的通式
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
22.權(quán)利要求3的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自
23.權(quán)利要求15的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自
24.一種藥物組合物，含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體和治療有效可接受量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，其選自
和選自雌二醇和premarin的雌激素或選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為它們的化合物的性甾族化合物前體。
25.一種治療或降低胰島素耐藥性發(fā)展危險(xiǎn)性的方法，該方法包括給需要這種治療或降低的對(duì)象施用治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑。
26.權(quán)利要求25的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的選自雌二醇和premarin的雌激素或選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為它們的化合物的性甾族化合物前體
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下面通式
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4
29.一種降低血液甘油三酯水平的方法，包括給需要這種降低的患者施用治療有效量的具有下面通式的化合物或其可藥用鹽
其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、羥基、-OM(M選自直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C3-C4鏈烯基、直鏈或支鏈C3-C4炔基)和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為羥基的部分；
其中G是-H或-CH3；和
其中R3是選自吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉代和NRaRb(Ra和Rb獨(dú)立地是氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C3-C6鏈烯基和直鏈或支鏈C3-C6炔基)的基團(tuán)。
30.權(quán)利要求29的方法，其中該化合物是光學(xué)活性的，因?yàn)樗哂写笥?0％的在碳2上具有絕對(duì)構(gòu)型S的立體異構(gòu)體化合物。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述的化合物或鹽基本上不含有(2R)-對(duì)映異構(gòu)體。
32.權(quán)利要求31的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的下面的化合物
33.權(quán)利要求29的方法，其中所述的化合物是酸的鹽，所述的酸選自乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、氫氯酸、氫氯噻嗪酸、羥萘甲酸、乳酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、甲基硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、新戊酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)苯二甲酸、對(duì)甲苯磺酸和戊酸。
34.權(quán)利要求29的化合物，其中該酸是鹽酸。
35.權(quán)利要求31的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的下面結(jié)構(gòu)的鹽酸鹽化合物
36.一種治療或減少肥胖的發(fā)展的方法，包括給需要這種治療或減少的患者施用治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，和治療有效量的甾類物質(zhì)，其選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3b，17b-二醇、雌激素和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為任何所述甾類物質(zhì)的化合物。
37.一種具有下述分子結(jié)構(gòu)的化合物
38.一種藥物組合物，其中含有藥用賦形劑、稀釋劑或載體和治療有效量的EM-652.HCl。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種在易感溫血?jiǎng)游?包括人類)中肥胖、腹部脂肪和胰島素耐藥性的醫(yī)學(xué)治療和/或預(yù)防的新方法,該方法包括施用選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM類物質(zhì))。還公開(kāi)了一種SERM與一定量雌激素或性甾類化合物前體(其選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾－5－烯－3b,17b－二醇和體內(nèi)轉(zhuǎn)化為一種前述前體或雌激素)的聯(lián)合。
文檔編號(hào)A61K31/568GK1390126SQ0081247
公開(kāi)日2003年1月8日 申請(qǐng)日期2000年7月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月6日
發(fā)明者F·拉布里, Y·德謝斯, D·里查德, C·馬特 申請(qǐng)人:恩多研究公司