專利名稱：作為nhe-3抑制劑的雙酚衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及通式I的化合物， 其中R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，其上還可單取代上-COA、-CO-[C(R6)2]n-Ar、-COOA、-OH或傳統(tǒng)氨基保護基團NH-C(＝NH)-NH2、-CO-N＝C(NH2)2， 或 R2、R3、R5每種情況均彼此獨立地是H，A，OR6，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，NHCOAr，NHSO2A，NHSO2Ar，COOR6，CON(R6)2，CONHAr，COR6，COAr，S(O)nA，S(O)nAr，-O-[C(R6)2]m-COOR6，-[C(R6)2]p-COOR6，-O-[C(R6)2]m-CON(R6)2，-[C(R6)2]p-CON(R6)2，-O-[C(R6)2]m-CONHAr或-[C(R6)2]p-CONHAr，X是-[C(R6)2]n-，-CR6＝CR6-，-[C(R6)2]n-O-，-O-[C(R6)2]n-，-COO-，-OOC-，-CONR6-或-NR6CO-，R6是氫、A或芐基，A是1～20個碳原子的烷基，其中一或兩個CH2基團可被O或S原子代替或被-CR6＝CR6-基團代替，和/或1～7個氫原子可被F代替，Ar是苯基或萘基，它們可以是未取代的或者取代上一個、兩個或三個取代基A，Ar′，OR6，OAr′，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，NHCOAr′，NHSO2A，NHSO2Ar′，COOR6，CON(R6)2，CONHAr′，COR6，COAr′，S(O)nA或S(O)nAr′，Ar’是苯基或萘基，它們可以是未取代的或者取代上一個、兩個或三個取代基A，OR6，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，COOR6，CON(R6)2，COR6或S(O)nA，Hal是F、Cl、Br或I，n是0、1或2，m是1或2，p是1或2，及其鹽和溶劑合物，作為NHE-3抑制劑。
鈉/質子交換劑亞型3的其他抑制劑，例如描述在EP 0 825 178中。
本發(fā)明的主要目的是找到具有寶貴性能，特別是可用于生產藥劑的性能的新化合物。
DE 198 19548提到，通式I化合物及其鹽具有因子Xa抑制性能，因此可用于控制和預防血栓栓塞疾病，例如血栓形成、心肌梗塞、動脈硬化、發(fā)炎、中風、心絞痛胸悶、血管成形術后的再狹窄、間歇性跛行。
現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，通式I的化合物及其鹽顯示對鈉/質子交換劑亞型3的抑制作用并具有良好耐受性。通式I化合物可用作人和獸醫(yī)學中的藥物活性化合物。
已知，Na+/H+交換劑是包括至少六種不同同種型(NHE-1～NHE-6)的一個族，現(xiàn)已全部被克隆。雖然亞型NHE-1遍布于整個身體的所有組織中，但是其他NHE亞型則選擇性地表達在特定器官中，例如腎中或小腸的內腔壁和對腔壁中。此種分布反映不同同種型所起到的特定功能，即，一方面亞型NHE-1起到對細胞內pH和細胞體積的調節(jié)，另一方面同種型NHE-2和NHE-3在腸和腎臟起到鈉離子吸收和再吸收作用。同種型NHE-4主要存在于胃中。NHE-5的表達則局限于腦和神經組織。NHE-6是一種在線粒體中形成鈉/質子交換劑的同種型。
同種型NHE-3尤其表達于近中腎小管的頂膜中；NHE-3抑制劑因而尤其起到一種腎保護作用。
NHE-3同種型選擇性抑制劑的治療用途有各種各樣。NHE-3抑制劑能抑制或減輕因病理學缺氧和缺血事件導致NHE活性激活之后的組織受損和細胞壞死，例如在腎缺血期間或腎移植中腎的取出、運輸和再灌注期間的情況。
通式I的化合物具有降血壓作用，因此適合作為治療高血壓的藥物活性化合物。它們也適合作利尿劑。
通式I的化合物本身，或者與不同特定亞型的NHE抑制劑配合，具有抗局部缺血作用，因此可用于治療血栓形成、動脈硬化、血管痙攣以保護器官，例如術前及手術期間保護腎和肝，以及慢性和急性腎衰竭。
它們還可用于治療中風、腦水腫、神經系統(tǒng)局部缺血、各種形式休克乃至用于改善呼吸驅動，例如下列情況中樞睡眠呼吸暫停、嬰兒猝死、術后缺氧以及其他呼吸疾病。與碳脫水酶(carboanhydrase)抑制劑配合還可進一步改善呼吸活動。
通式I化合物具有對細胞增殖的抑制作用，例如對成纖維細胞增殖和血管平滑肌細胞的增殖，因此可用于治療細胞增殖作為主要或次要病因的疾病。
通式I化合物可用于對抗糖尿病晚期并發(fā)癥，惡性腫瘤疾病、纖維化疾病、內皮機能障礙、器官肥大以及增生，特別是前列腺增生或前列腺肥大。
它們也適合用于診斷，以確定和區(qū)分高血壓、動脈硬化、糖尿病和增殖性疾病的特定形式。
鑒于通式I化合物也能有利地影響血清脂蛋白水平，因此它們可單獨或者配合其他藥物用于治療高血脂。
本發(fā)明涉及權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療血栓形成、心肌局部缺血、外周及中樞神經系統(tǒng)以及中風、外周器官局部和手足局部缺血，以及處理休克狀態(tài)等藥物的應用。
本發(fā)明還涉及權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產外科手術和器官移植用藥劑以及用于保存和貯藏外科措施移植物的應用。
本發(fā)明還涉及權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療細胞增殖作為主要或次要病因的疾病，治療或預防脂代謝疾病或呼吸驅動受干擾的藥物的應用。
本發(fā)明還涉及權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療腎臟缺血、缺血性腸道疾病或用于預防急性或慢性腎疾病等藥物的應用。
抑制鈉/質子交換劑亞型3的物質的鑒別方法描述在，例如，US5,871,919中。
對于通式I化合物中的所有基團，凡是出現(xiàn)多次的，例如R6，其條件是它們的含義彼此獨立。
水合物和溶劑合物應理解為，例如半-、單-或二水合物；溶劑合物理解為，例如，醇的加成化合物，例如與甲醇或乙醇的。
在上式中，A是烷基，是線型或支化的，并且具有1～20，優(yōu)選1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個碳原子。A優(yōu)選是甲基，還有乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，另外還有戊基、1-、2-、3-甲基丁基，1，1-、1，2-或2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1，1-、1，2-、1，3-、2，2-、2，3-或3，3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-或1，2，2-三甲基丙基、庚基、辛基、壬基或癸基。
A還可以是，例如，三氟甲基、五氟乙基、烯丙基或巴豆基。
COR6是酰基，優(yōu)選是甲酰、乙酰、丙酰，還有丁酰、戊?；蚣乎；?。
COOR6優(yōu)選是甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基或丁氧基羰基。
Hal優(yōu)選是F、Cl或Br，但也可以是I。
R2、R3和R5每種情況各自獨立地優(yōu)選是氫、氟、氯、溴、碘、羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、硝基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙氨基、二乙氨基、乙酰氨基、亞磺酰氨基、甲基亞磺酰氨基、苯基亞磺酰氨基、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺?；⒁一鶃喕酋；⒓谆酋；⒁一酋；?、苯亞磺酰基、苯磺酰基、氰基、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、羧甲氧基、甲氧羰基甲氧基、羧甲基、甲氧羰基甲基、氨基羰基甲氧基、氨基羰基甲基、N-苯基氨基羰基甲氧基、N-苯基氨基羰基甲基，還有酰基或苯甲?；?br> 特別是，R2、R5是氫。
R3，具體地說例如是氫、COOA或-OCH2COOR6，其中R6是氫或1～4個碳原子烷基。
R6是氫、A或芐基，然而特別是氫或1～4個碳原子烷基。
X優(yōu)選地例如是-CH2-、-CH＝CH-、-CH2O-、-O-CH2-、-COO-、-OOC-、-CONH-或-NHCO-；而-CH2O-、-O-CH2-或-CH2-CH2-是尤其優(yōu)選的。
Ar優(yōu)選是未取代的苯基或萘基，還優(yōu)選例如是取代上下列基團的單-、二-或三取代的苯基或萘基A、氟、氯、溴、碘、羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、芐氧基、苯乙氧基、甲硫基、乙硫基、甲亞磺酰基、乙亞磺酰基、甲磺?；?、乙磺?；⒈絹喕酋；⒈交酋；⑾趸?、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、甲酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、甲亞磺酰氨基、乙亞磺酰氨基、丙亞磺酰氨基、丁亞磺酰氨基、苯亞磺酰氨基、(4-甲基苯基)亞磺酰氨基、羧甲氧基、羧乙氧基、甲氧羰基甲氧基、甲氧羰基乙氧基、羥甲氧基、羥乙氧基、甲氧基乙氧基、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、氰基、苯氨基羰基、酰基或苯甲?；€有聯(lián)苯基。
因此Ar優(yōu)選，例如是鄰-、間-或對-甲苯基、鄰-、間-或對-乙基苯基，鄰-、間-或對-丙基苯基，鄰-、間-或對-異丙基苯基，鄰-、間-或對-叔丁基苯基，鄰-、間-或對-羥苯基、，鄰-、間-或對-硝基苯基，鄰-、間-或對-氨基苯基，鄰-、間-或對-(N-甲基氨基)苯基，鄰-、間-或對-乙酰氨基苯基，鄰-、間-或對-甲氧基苯基，鄰-、間-或對-乙氧基苯基，鄰-、間-或對-羧基苯基，鄰-、間-或對-甲氧羰基苯基，鄰-、間-或對-(N，N-二甲氨基)苯基，鄰-、間-或對-(N-乙氨基)苯基，鄰-、間-或對-(N，N-二乙氨基)苯基，鄰-、間-或對-乙酰苯基，鄰-、間-或對-甲酰苯基，鄰-、間-或對-氟代苯基，鄰-、間-或對-溴代苯基，鄰-、間-或對-氯代苯基，鄰-、間-或對-甲磺?；交?、間-或對-(苯磺酰氨基)苯基，鄰-、間-或對-(甲磺酰氨基)苯基，鄰-、間-或對-甲硫基苯基，另一些優(yōu)選的是，2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4-或3，5-二氟苯基，2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4-或3，5-二氯苯基，2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4-或3，5-二溴苯基，2，4-或2，5-二硝基苯基、2，5-或3，4-二甲氧基苯基、3-硝基-4-氯苯基、3-氨基-4-氯-、2-氨基-3-氯-、2-氨基-4-氯-、2-氨基-5-氯-或2-氨基-6-氯苯基、2-硝基-4-N，N-二甲氨基或3-硝基-4-N，N-二甲氨基苯基、2，3-二氨基苯基-、2，3，4-、2，3，5-、2，3，6-、2，4，6-或3，4，5-三氯苯基、2，4，6-三甲氧基苯基、2-羥基-3，5-二氯苯基、對碘苯基、3，6-二氯-4-氨基苯基、4-氟代-3-氯苯基、2-氟代-4-溴苯基、2，5-二氟-4-溴苯基、3-溴代-6-甲氧基苯基、3-氯代-6-甲氧基苯基、3-氯代-4-乙酰氨基苯基、3-氟代-4-甲氧基苯基、3-氨基-6-甲基苯基、3-氯代-4-乙酰氨基苯基或2，5-二甲基-4-氯代-苯基。
Ar’具體地說例如是，苯基或萘基，還優(yōu)選例如是鄰-、間-或對-甲苯基、鄰-、間-或對-乙基苯基，鄰-、間-或對-丙基苯基，鄰-、間-或對-異丙基苯基，鄰-、間-或對-叔丁基苯基，鄰-、間-或對-羥苯基，鄰-、間-或對-硝基苯基，鄰-、間-或對-氨基苯基，鄰-、間-或對-(N-甲基氨基)苯基，鄰-、間-或對-乙酰氨基苯基，鄰-、間-或對-甲氧基苯基，鄰-、間-或對-乙氧基苯基，鄰-、間-或對-羧基苯基，鄰-、間-或對-甲氧羰基苯基，鄰-、間-或對-(N，N-二甲氨基)苯基，鄰-、間-或對-(N-乙氨基)苯基，鄰-、間-或對-(N，N-二乙氨基)苯基，鄰-、間-或對-乙酰苯基，鄰-、間-或對-甲酰苯基，鄰-、間-或對-氟代苯基，鄰-、間-或對-溴代苯基，鄰-、間-或對-氯代苯基或鄰-、間-或對-甲磺酰基苯基。
據(jù)此，本發(fā)明尤其涉及這樣的通式I化合物的應用，其中至少一個提到的基團具有上述優(yōu)選的含義之一?；衔锏哪承﹥?yōu)選基團可表示為下列子式Ia～Ii，它們對應于通式I，且其中沒有詳細指定的基團則具有通式I給出的含義，不過其中，在Ia中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代；在Ib中，R2、R5是氫；
在Ic中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，并且R3是氫或COOR6；在Id中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，并且R3是氫或COOR6或-O-(CH2)COOR6；在Ie中，X是-CH2-O-或-O-CH2-；在If中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，R3是氫或COOR6，并且X是-CH2-O-或-O-CH2-；在Ig中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，R3是氫或COOR6或-O-(CH2)COOR6，并且X是-CH2-O-或-O-CH2-或-CH2-CH2-；在Ih中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，R3是氫或COOR6、-O-(CH2)-COOR6、CH2-COOR6、-O-CH2-CON(R6)2、CH2-CON(R6)2-O-CH2-CONHAr或CH2-CONHAr，X是-CH2-O-或-O-CH2-或-CH2-CH2-，R6是氫或A，A是1～4個碳原子的烷基；在Ii中，R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，后者也可被OH或-CO-N＝C(NH2)2單取代，R2、R5是氫，R3是氫或COOR6、-O-(CH2)-COOR6、CH2-COOR6、-O-CH2-CON(R6)2或CH2-CON(R6)2，
X是-CH2-O-或-O-CH2-或-CH2-CH2-，R6是氫或A，A是1～4個碳原子的烷基。
通式I化合物及制備它們的原料，在其他方面則按照本身已知的方法來制備，例如按文獻中所述(例如，在標準著作，例如Houben-Weyl，《有機化學方法》(Methoden der organischen Chemie)，Georg-Thieme出版社，斯圖加特)，即，在已知并且適合所述反應的反應條件下實施。在這種情況下，還可采用本身已知但這里并未詳細提及的各種不同方案。
希望的話，原料也可就地生成，以便不需將它們從反應混合物中分離出來，而是立即進一步反應以生成通式I的化合物。
通式I化合物可優(yōu)選地通過，以溶劑分解劑或氫解劑處理而由其官能衍生物之一中釋放出通式I化合物，這樣來制取。
溶劑分解或氫解用的優(yōu)選原料是那些其他方面均與通式I相對應，然而，不是含有一個或多個游離氨基和/或羥基基團，而是含有對應的被保護氨基和/或羥基基團，優(yōu)選那些，在N原子上不是鍵合著氫原子，而是帶有氨基保護基團，特別是那些，替代HN基團而帶有R’-N-基團者，其中R’是氨基保護基團，和/或那些，代替羥基基團的氫原子而帶有羥基保護基團者，例如對應于通式I的那些但代替基團-COOH的是基團-COOR”，其中R”是羥基保護基團。優(yōu)選的原料還有可轉化為相應脒基化合物的噁二唑衍生物。
噁二唑基團的引入例如可通過氰基化合物與羥基胺的反應，以及與光氣、碳酸二烷基酯、氯代甲酸酯、N，N’-羰基-二咪唑或乙酸酐的反應來實現(xiàn)。
也可以有許多相同或不同的被保護氨基和/或羥基基團存在于原料物質的分子中。如果存在的保護基團彼此不同，則許多情況下它們可選擇性地脫除。
術語“氨基保護基團”是普遍已知的，指的是適合用于保護(或封閉)氨基基團以免發(fā)生化學反應，然而在要求的化學反應在分子的其他部位完成以后又很容易脫除的基團。典型的此類型基團尤其是未取代或取代的?；⒎蓟?、芳烷氧基甲基或芳烷基基團。由于氨基保護基團在要求的反應(或反應序列)之后將脫除，它們的大小和性質除此之外便無關緊要；然而，優(yōu)選1～20，尤其是1～8個碳原子的那些。術語“?；鶊F”涉及本發(fā)明方法時應按最廣的意義來解釋。它包括由脂族、芳脂族、芳族和雜環(huán)羧酸或磺酸衍生的?；鶊F，特別是烷氧羰基、芳氧羰基以及，特別是芳烷氧羰基基團。此種類型酰基基團的例子是鏈烷?；?，如乙?；⒈；?、丁?；环纪轷；?，例如苯乙?；环减；绫郊柞；蚣妆锦；?；芳氧烷酰基，如POA；烷氧羰基如甲氧羰基、乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、BOC(叔丁氧基羰基)、2-碘代乙氧羰基；芳烷氧羰基如CBZ(芐酯基)、4-甲氧基芐氧羰基、FMOC；芳基磺?；鏜tr。優(yōu)選的氨基保護基團是BOC和Mtr，還有CBZ、Fmoc、芐基和乙?；?。
術語“羥基保護基團”同樣也是普遍已知的，涉及適合用于保護羥基基團以免化學反應，然而要求的化學反應在分子其他部位完成之后又容易脫除的基團。典型的此類型基團是上面提到的未取代或取代的芳基、芳烷基或?；鶊F，還有烷基基團。羥基保護基團的性質和大小并不嚴格要求，因為它們在要求的化學反應或反應序列之后將再次脫除；優(yōu)選1～20，尤其是1～10個碳原子的基團。羥基保護基團的例子特別是芐基、對硝基苯甲?；?、對甲苯磺酰基、叔丁基和乙?；?，尤其優(yōu)選芐基和叔丁基。
通式I化合物是這樣(視所用保護基團而定)從其官能衍生物中釋放的例如采用強酸，最好采用TFA或高氯酸，但也可采用其他強無機酸如鹽酸或硫酸，強有機羧酸如三氯乙酸或磺酸如苯-或對甲苯磺酸。附加惰性溶劑的存在是可以的但并非總是必須。合適的惰性溶劑優(yōu)選是有機溶劑，例如羧酸如乙酸，醚如四氫呋喃或二氧雜環(huán)己烷，酰胺如DMF、鹵代烴如二氯甲烷，還有醇如甲醇、乙醇或異丙醇，以及還有水。另外，上述溶劑的混合物也是可以的。TFA優(yōu)選以過量使用而不再加入其他溶劑；高氯酸以乙酸與70％高氯酸按9∶1比例的混合物形式使用。該裂解反應溫度以介于約0～約50℃為佳；反應優(yōu)選在15～30℃(室溫)實施。
基團BOC、OBut和Mtr的脫除優(yōu)選地采用，例如TFA的二氯甲烷溶液或者采用約3～5N氯化氫在二氧雜環(huán)己烷中的溶液，在15～30℃實現(xiàn)；Fmoc基團采用約5～50％二甲胺、二乙胺或哌啶在DMF中的溶液在15～30℃來實施。
可氫解脫除的保護基團的脫除(例如，CBZ、芐基的脫除，或脒基基團從其惡二唑衍生物中的釋放)例如可通過以氫在催化劑(例如，貴金屬催化劑如鈀，方便地在諸如碳之類的載體上，或者如濕阮內鎳外加，例如乙酸)存在下的處理來實現(xiàn)。這里，適合的溶劑是上面給出的那些，尤其是，例如醇如甲醇或乙醇，或者酰胺如DMF。一般而言，氫解在約0～100℃和約1～200bar，優(yōu)選在20～30℃的溫度和1～10bar的壓力下進行。CBZ基團的氫解可方便地在例如，用5～10％Pd/C在甲醇中，或者用Pd/C在甲醇/DMF中以及20～30℃采用甲酸銨(替代氫氣)來實施。
通式I化合物，其中R1和R4是-C(＝NH)-NH2，優(yōu)選可以由對應的氰基化合物獲得。
氰基基團通過與，例如羥基胺起反應，隨后以氫氣在諸如Pd/C或阮內鎳之類的催化劑存在下還原N-羥基脒而轉化為脒基基團。
為制備通式I(R1＝-C(＝NH)-NH2)的脒，也可在通式I(R1＝CN)的腈上加成氨。該加成反應優(yōu)選分多個階段實施，即，按照本身已知的方式，a)利用H2S將腈轉化為硫代酰胺，后者再利用烷基化劑如CH3I，轉化為對應的S-烷基亞氨硫代酯，它本身再與氨起反應生成脒，b)利用醇，如乙醇在HCl存在下將腈轉化為對應的亞氨酸酯，然后用氨處理它，或者c)腈與雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰起反應，然后將產物氫解。
氰基化合物是采用本身已知的方法制備的。
通式I化合物，其中R1和R4是-CON(＝NH)-NH2，優(yōu)選可以由對應的烷氧羰基化合物通過與胍起反應來制取。
此外，通式I化合物可能轉化為另一種通式I化合物，只需將一或多個基團R1、R2、R3、R4和/或R5轉變?yōu)橐换蚨鄠€基團R1、R2、R3、R4和/或R5，例如通過將氨基酰化或將硝基基團還原為氨基基團(例如通過在阮內鎳或Pd/C上在惰性溶劑如甲醇或乙醇中的氫化)。
酯的水解例如可以借助乙酸或者氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液、水/THF或水/二氧雜環(huán)己烷在0～100℃的溫度實施。
另一種可能是按傳統(tǒng)方式采用酰氯或酸酐將游離氨基基團酰化，或者利用未取代的或取代的烷基鹵化物，最好在惰性溶劑如二氯甲烷或THF和/或在諸如三乙胺或吡啶之類的堿存在下在-60～+30℃的溫度將它們烷基化。
一般而言，該反應在惰性溶劑中，在酸結合劑，優(yōu)選堿金屬或堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或者堿金屬或堿土金屬，優(yōu)選鉀、鈉、鈣或銫的另一種弱酸鹽存在下進行。
也可能有利的是加入有機堿，如三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉，或者過量的通式II的胺組分或通式III的烷基化衍生物。依所采用條件而定，反應時間介于幾分鐘到14天，反應溫度介于約0℃～150℃，一般在20℃～130℃之間。
合適的惰性溶劑例如是烴類，例如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯代烴如三氯乙烯、1，2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇如甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，例如乙醚、二異丙醚、四氫呋喃(THF)或二氧雜環(huán)己烷；二醇醚，例如乙二醇單甲醚或單乙醚、乙二醇二甲醚；酮，例如丙酮或丁酮；酰胺，例如乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，例如乙腈；亞砜，例如二甲基亞砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，例如甲酸或乙酸；硝基化合物，例如硝基甲烷或硝基苯；酯，例如乙酸乙酯或者上述溶劑的混合物。
通式I的堿可用酸轉化為相關酸的加成鹽，例如通過等當量堿與酸在諸如乙醇之類的惰性溶劑中反應，隨后蒸發(fā)。適合該反應使用的酸尤其是能生成生理可接受鹽的那些。因此，可使用無機酸，例如硫酸、硝酸、氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸，磷酸如正磷酸、氨基磺酸，還有有機酸，特別是脂族、脂環(huán)族、芳脂族、芳族或雜環(huán)單-或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲烷-或乙烷磺酸、乙烷二磺酸、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、萘單-和-二磺酸以及月桂基硫酸。與生理可接受酸所生成的鹽，例如苦味酸鹽，可用于分離和/或提純通式I化合物。
另一方面，通式I化合物利用堿(例如，鈉或鉀的氫氧化物或碳酸鹽)可轉化為相應的金屬鹽，特別是堿金屬鹽或堿土金屬鹽，或者轉化為相應的銨鹽。
生理可接受的有機堿，例如乙醇胺，也可使用。
本發(fā)明還涉及通式1化合物作為NHE-3抑制劑和/或其生理可接受鹽用于生產藥物制劑的應用，尤其是通過非化學路線。就此而論，它們可連同至少一種固體、液體和/或半液體載體或賦形劑一起制成適宜的劑量形式，并且適當?shù)脑捙c一種或多種其他活性化合物組合使用。
本發(fā)明還涉及包含至少一種通式I的NHE-3抑制劑和/或其生理可接受鹽和溶劑合物之一的藥物制劑。
此類制劑可用作人或獸醫(yī)用藥劑?？赡艿妮d體是適合經腸(例如口服)或不經腸服用的或者局部施用并且不與該新化合物起反應的有機或無機物質，例如水、植物油、苯甲醇、鏈烷二醇、聚乙二醇、甘油三乙酸酯、明膠、諸如乳糖或淀粉之類的碳水化合物、硬脂酸鎂、滑石和凡士林。具體地說，片劑、丸劑、包衣片劑、膠囊、粉末、粒劑、糖漿、汁液或滴劑，用于口服；栓劑用于直腸給藥；溶液，優(yōu)選油狀或水溶液，還有懸浮體、乳劑或植入物，可用于不經腸給藥；油膏、霜或粉末用于局部施用，或者經皮用于膏藥。該新化合物還可進行冷凍干燥，獲得的凍干物可用于，例如生產注射制劑。上面提到的制劑可進行消毒和/或可包含賦形劑，例如潤滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑和/或潤濕劑、乳化劑、用于影響滲透壓的鹽、緩沖物質、著色劑、香料和/或一種或多種其他活性化合物，例如一種或多種維生素。適合以氣溶膠或噴霧形式給藥的藥物制劑例如是通式I活性化合物在藥理學可接受溶劑中的溶液、懸浮體或乳液。
通式I化合物及其生理可接受鹽和溶劑合物可用于治療和/或預防上面指出的疾病或疾病狀態(tài)。
就此而論，本發(fā)明物質一般優(yōu)選的給藥劑量介于約0.1～100mg，尤其是1～10mg，每劑量單位。日劑量優(yōu)選介于約0.001～10mg/kg體重。然而，每個患者的具體劑量則取決于各種各樣的因素，例如具體使用的化合物的效力、年齡、體重、一般健康狀況、性別、日常飲食、給藥時間和途徑、排泄速率、藥物組合以及施治對象具體疾病的嚴重程度。優(yōu)選口服給藥。
上面以及下文，所有溫度均指℃而言。在下面的實施例中，“常規(guī)處理”，適用的話是指加水，需要的話再根據(jù)最終產物的組成調節(jié)混合物至pH介于2～10，并以乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，分離掉有機相，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，然后殘余物采用硅膠色譜術和/或通過結晶進行提純。質譜術(MS)EI(電子撞擊電離)M+FAB(快速原子轟擊)(M+H)+實例12.06g3-溴芐腈和1.50g3-甲苯基硼酸在50mL二甲氧基乙烷中的溶液，以247mg乙酸鈀(II)、335mg三-鄰-甲苯基膦、20mL水和954mg無水碳酸鈉處理，然后在100℃、攪拌下加熱18h。混合物常規(guī)處理，殘余物利用石油醚/乙酸乙酯(9∶1)在硅膠柱上進行色譜提純，結果獲得3’-甲基聯(lián)苯基-3-腈，呈無色固體(“A”)，EI193。
1.17g“A”在10mL四氯化碳中的溶液，以1.09g N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)和60mg偶氮二異丁腈處理，然后在70℃加熱18h。混合物常規(guī)處理，殘余物利用石油醚/乙酸乙酯(9∶1)在硅膠柱上進行色譜提純，結果獲得3’-溴甲基聯(lián)苯基-3-腈，呈無色固體(“B”)。
500mg“B”和238mg3-羥基芐腈在10mL乙腈中的溶液，以625mg碳酸銫處理，并在室溫下攪拌40h。常規(guī)處理之后，殘余物在反相柱上采用乙腈/水(65∶35)進行色譜提純。獲得3’-(3-氰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-腈(“C”)，呈無色固體，F(xiàn)AB 311。
90mg“C”和125mg羥基氯化銨在10mL乙醇中的溶液，以1.2g聚合物結合的二甲氨基吡啶(DMAP)處理，并在室溫下攪拌18h。濾掉聚合物，趕出溶劑，于是獲得N-羥基-3’-[3-(N-羥基carbamimidoyl)苯氧基甲基]聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)(“D”)，呈無色固體，F(xiàn)AB 377。
76mg“D”在10mL甲醇中的溶液，以100mg水濕阮內鎳和30mg乙酸處理，并在室溫和常壓下氫化18h。濾除催化劑，趕出溶劑，于是獲得3’-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)的乙酸酯，EI 327(M+-NH3)，310(M+-2NH3) 類似地制取到下列化合物
3’-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)的二乙酸酯，F(xiàn)AB 345；3’-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)的二乙酸酯，F(xiàn)AB 345；3’-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)的二乙酸酯，F(xiàn)AB 345；4’-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)，4’-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)，4’-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)，以及4’-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)。
實例2類似于實例1，利用3-溴芐腈與3-甲氧基苯基硼酸起反應而制成化合物3’-甲氧基聯(lián)苯基-3-腈。隨后通過在乙腈中利用三碘化鋁使醚裂解，然后與3-溴甲基芐腈起反應，獲得3’-(3-氰基芐氧基)聯(lián)苯基-3-腈。
通過與羥胺起反應，并以氫氣在阮內鎳催化劑作用下還原，獲得3’-(3-carbamimidoyl-苯甲酸基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine) 類似地制取下列化合物，4’-(4-carbamimidoyl芐氧基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)的二乙酸酯，F(xiàn)AB 345；4’-(3-carbamimidoyl芐氧基)聯(lián)苯基-4-羰基脒(carboxamidine)的二乙酸酯，F(xiàn)AB 345；
實例3類似于實例1，化合物3’-氰基-5-甲基聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯，通過3-氰基苯基硼酸與3-溴-5-甲基苯甲酸甲酯起反應而制成。通過用NBS溴化并與3-羥基芐腈反應，而獲得3’-氰基-5-(3-氰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯。與羥胺起反應并以H2/阮內鎳還原獲得化合物3’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯。該酯利用氫氧化鈉水溶液水解，結果獲得3’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸。
在反相柱上采用乙腈/水/TFA混合物進行色譜提純，獲得3’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸的雙三氟乙酸酯。
類似地制取下列化合物，4’-carbamimidoyl-4-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403；4’-carbamimidoyl-4-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-2-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403；3’-carbamimidoyl-4-(4-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-2-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403；3’-carbamimidoyl-4-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-2-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403；4’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403；3’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羧酸甲酯，F(xiàn)AB 403。
實例4
類似于實例1，3’-甲基聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯，利用3-溴代苯甲酸甲酯與3-甲苯基硼酸起反應而制成。通過用NBS溴化并與3-羥基苯甲酸甲酯起反應，而獲得3’-(3-甲氧羰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸甲酯。與胍的鹽酸鹽在甲醇鈉的甲醇溶液中起反應，便獲得化合物N-[3’-(3-胍基羰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基]胍， 類似地獲得化合物N-[4’-(4-胍基羰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-4-羰基]胍。
實例57.0g3-溴-5-甲基苯酚和5.97g溴乙酸甲酯，還有13g碳酸銫在100mL乙腈中的溶液，在室溫下攪拌過夜。常規(guī)處理之后，獲得9.70g(3-溴-5-甲基苯氧基)乙酸甲酯(“AB”)。
2.0g“AB”、100mg四(三苯基膦)鈀和0.85g碳酸鈉在50mL甲苯中的懸浮體，加熱至沸騰。隨后滴加2.94g3-氰基苯基硼酸在30mL甲醇中的溶液，然后混合物在回流下加熱14h。將其常規(guī)處理，便獲得2.17g(3’-氰基-5-甲基聯(lián)苯基-3-基氧基)乙酸甲酯(“AC”)。
1.2g“AC”和0.765g NBS在50mL四氯化碳中的溶液在室溫利用紫外線進行輻照。常規(guī)處理之后，獲得1.54g(3’-氰基-5-溴甲基聯(lián)苯基-3-基氧基)乙酸甲酯(“AD”)。
185mg“AD”、63.1mg4-羥基-芐腈和172.7mg碳酸銫在10mL乙腈中的溶液在室溫下攪拌4日。常規(guī)處理之后，獲得[3’-氰基-5-(4-氰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯(“AE”)。
60mg“AE”、69.5mg羥基氯化銨和101mg三乙胺在10mL乙醇中的溶液在回流下加熱14h。趕出溶劑后，殘余物用水調配。分離掉固體，獲得70mg[3’-N-羥基脒基-5-(4-N-羥基脒基苯氧基-甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯(“AF”)。通過采用H2/阮內鎳還原，獲得[3’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯，F(xiàn)AB 433。
類似地，制取下列化合物[4’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯，F(xiàn)AB 433[3’-脒基-5-(3-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯，F(xiàn)AB 433[4’-脒基-5-(3-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯，F(xiàn)AB 433倘若在第一階段將溴乙酸甲酯換成溴乙酸叔丁酯，則在最后階段獲得的叔丁酯可采用三氟乙酸和對應的羧酸進行裂解，結果獲得[3’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸的雙三氟乙酸酯，F(xiàn)AB 419；[4’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸；[3’-脒基-5-(3-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸；[4’-脒基-5-(3-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸。
實例65.0g3’-溴甲基聯(lián)苯基-3-腈的溶液和5mL亞磷酸三乙酯混合并慢慢加熱到150℃?；旌衔镌?50℃攪拌6h，常規(guī)處理后獲得6.05g(3’-氰基-聯(lián)苯基-3-基甲基)膦酸二乙酯(“BA”)。
150mg氫化鈉在冰水冷卻和氮氣保護下加入到1.0g“BA”和3-氰基苯甲醛在20mL乙二醇二甲醚的溶液中。隨后，混合物攪拌4h，常規(guī)處理后獲得0.93g3’-[2-(3-氰基苯基)乙烯基]聯(lián)苯基-3-腈(“BB”)。
360mg“ BB”用5％Pd-C的甲醇溶液氫化之后，獲得360mg3’-[2-(3-氰基苯基)乙基]-聯(lián)苯基-3-腈(“BC”)。與羥基氯化銨起反應并以阮內鎳氫化之后，類似于實例1那樣獲得化合物3’-[2-(3-脒基苯基)乙基]聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)，F(xiàn)AB 343 類似地制取化合物3’-[2-(4-脒基苯基)乙基]聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)，F(xiàn)AB 343。
實例7化合物N-[3’-(4-胍基羰基芐氧基)聯(lián)苯基-3-羰基]胍的二鹽酸鹽，F(xiàn)AB 431， 按例如以下反應順序制取
類似地制取化合物，N-[3’-(3-胍基羰基芐氧基)聯(lián)苯基-3-羰基]胍，F(xiàn)AB 431；
N-[3’-(4-胍基羰基芐氧基)聯(lián)苯基-4-羰基]胍，F(xiàn)AB 431；N-[3’-(3-胍基羰基芐氧基)聯(lián)苯基-4-羰基]胍，F(xiàn)AB 431；藥理學試驗用來表征作為NHE-3抑制劑的通式I化合物的方法學如下。
通式I化合物，就其對同種型NHE-1～NHE-3的選擇性做了鑒定。這三種同種型均穩(wěn)定地表達于鼠的成纖維細胞細胞系中。該化合物的抑制作用，通過確定在胞內酸中毒以后EIPA敏感的22Na+在細胞內的吸收來評估。為鑒定Na+/H+交換抑制劑的同種型選擇性，我們考察了這些化合物對能穩(wěn)定表達于鼠成纖維細胞細胞系中的NHE同種型，包括NHE-1、-2和-3的抑制作用(見操作方法一節(jié))，即確定在胞內酸中毒之后EIPA敏感的22Na+在細胞內的吸收。
材料和方法表達不同NHE同種型的LAP1細胞系表達NHE同種型NHE-1、-2和-3的LAP1細胞系(鼠成纖維細胞細胞系)由J.Pouyssegur教授(Nice，法國)取得。轉染是按照Franchi等人的方法(1986)實施的。細胞培養(yǎng)在加有10％滅活胚胎小牛血清(FCS)的DMEM培養(yǎng)基中。為挑選NHE-表達細胞，采用Sardet等人的所謂“酸破壞方法”(1989)。細胞首先通過用無碳酸氫根、無氯化銨和無鈉離子的緩沖液洗滌，被移到含氯化銨的無碳酸氫根和無鈉離子的緩沖液中，然后用無碳酸氫根、含氯化鈉的緩沖液進行孵育。只有那些具有表達NHE功能的細胞才能在它們所處的胞內酸化的條件下存活。
NHE抑制劑對同種型選擇性的鑒定采用上述表達同種型NHE-1、NHE-2和NHE-3的鼠成纖維細胞細胞系，按照Counillon等人(1993)和Scholz等人(1995)所描述的方法測試了化合物對各種同種型的選擇性。細胞的胞內酸化是通過氯化銨prepulse方法，然后在無碳酸氫根的含22Na+的緩沖液中孵育來完成的。由于胞內酸化，致使NHE激活，于是鈉被吸收到細胞內。試驗化合物的效果用對EIPA乙基異丙基氨氯吡嗪脒敏感的22Na+吸收的抑制程度來表示。表達NHE-1、NHE-2和NHE-3的細胞以5～7.5×104個細胞/孔的密度進行接種，轉移到24孔細胞培養(yǎng)板中并集中培養(yǎng)24～48h。吸去培養(yǎng)基，細胞在37℃于氯化銨緩沖液(50mM氯化銨，70mM氯化膽堿、15mM MOPS，pH7.0)中孵育60min。然后，去掉緩沖液，細胞迅速用氯化膽堿洗滌緩沖液(120mM氯化膽堿、15mMPIPES/tris，0.1mM G毒毛旋花苷、1mM氯化鎂、2mM氯化鈣，pH7.4)洗滌2次；細胞在此緩沖液中孵育6min。孵育時間結束后，吸去孵育緩沖液。為除去細胞外的放射活性，細胞用冰冷卻的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)迅速洗滌4次。然后，通過每孔加入0.3mL 0.1N的氫氧化鈉使細胞增溶。含細胞碎片的溶液轉移到閃爍管中。每孔另外再用0.3mL 0.1N氫氧化鈉洗滌兩次，洗滌溶液也加入到相應閃爍管中。裝有細胞裂解產物的閃爍管與閃爍混合液混合在一起，然后通過測定β-輻射來確定吸收到細胞內的放射活性。
在兔子紅細胞中22Na+吸收的抑制Na+/H+的交換活性還可以通過觀察在酸化后的兔子紅細胞中22Na+離子的吸收加以確定。兔子紅細胞已廣泛應用在關于Na+/H+交換活性的研究中(Escobales & Fugueroa，1991Morgan & Canessa，1990)。在酸化紅細胞中22Na+吸收的EIPA敏感部分被視為Na+/H+依賴的22Na+吸收。
細胞制備紅細胞的制備以及紅細胞的內部酸化，嚴格按照Morgan和Canessa(1990)的方法進行。
血液取自兔子(例如，新西蘭白兔)。將其收集在裝有5mL肝素鈉溶液(250U/ml)的50mL Falcon離心管中。血液和肝素溶液充分混合。通過在4℃、2000xg條件下離心回收紅細胞；血漿和buffy coat則去掉。剩余溶液通過200μm紗布進行過濾。濾液再次懸浮在原來體積的洗滌緩沖液(140mM氯化鉀，0.15mM氯化鎂、10mMTRIS/MOPS，pH7.4)中。再次離心(2000xg，4℃)分離回收紅細胞。該洗滌過程重復兩次。
胞內酸化為實現(xiàn)胞內酸化，5mL沉淀并收集的紅細胞再次懸浮在45mL酸化緩沖液(170mM氯化鉀，0.15mM氯化鎂，0.1mM G毒毛旋花苷，10mM葡糖，10mM蔗糖，20mMtris/Mes，pH6.2)中。紅細胞懸浮體在37℃孵育10min(偶爾攪拌)。為固定內部pH值，用最高200μM到1mM的DIDS或DIAMOX(乙酰唑胺)進行處理?；旌衔锪硗庠僭?7℃孵育30min。
然后，通過離心回收紅細胞(4min，2000xg，4℃)；再次將它們懸浮在冰冷卻的未緩沖洗滌溶液(170mM氯化鉀，40mM蔗糖，0.15mM氯化鎂)中并用其洗滌四次。
孵育及22Na+吸收的測定在規(guī)格8×12的多孔培養(yǎng)管中進行孵育。孵育隨著200μL孵育緩沖液(160mM氯化鉀，22NaCl(37MBq/孔)，10mM氯化鈉，0.15mM氯化鎂，0.1mM G毒毛旋花苷，10mM葡糖，40mM蔗糖，10mMtris/MOPS，pH8.0，0.5mM Diamox，1％DMSO)與20μL(預熱的)紅細胞酸化溶液的混合而開始。試驗物質首先用100％DMSO溶解，然后溶液采用孵育緩沖液稀釋到相應濃度。孵育在37℃進行5min。(在初步實驗中發(fā)現(xiàn)，在這樣的孵育條件下，22Na吸收速率在5min孵育期間內呈線性)。孵育通過加入800μL冰冷卻的終止溶液(112mM氯化鎂，0.1mMG毒毛旋花苷)而終止。試管短時間存放在冰中。然后用封口膜覆蓋試管，并通過2000xg和4℃下離心7min來回收紅細胞。上層清液以自制吸取裝置吸去，使用它可同時吸取彼此相鄰的4個試管；吸管遠端的間隔環(huán)防止吸管過深地插入到試管和吸取的紅細胞粒子中。所有含22Na的上層清液和洗滌溶液全部作為放射活性廢液貯存和處理。
紅細胞以900μL冰冷卻的終止溶液洗滌三次，即，重復上面所述懸浮/離心步驟。最后一次洗滌之后，紅細胞粒子與200μL水混合。然后，試管用超聲波處理2×30min。然后，拆開多孔培養(yǎng)管，然后將每一試管頭朝下放入到單個閃爍管中；紅細胞的溶血處理溶液，借助輕輕搖動而全部倒入到閃爍管中。每個管以3mL閃爍液Aquasafe 300 PS處理，然后給管蓋上蓋子并充分混合。被吸收到紅細胞內的放射活性，借助監(jiān)測β分解從閃爍計數(shù)器上讀取。每種物質濃度，做一式三份測定。將在10μM EIPA存在下的計數(shù)器讀數(shù)的平均值從每個數(shù)值中扣除，以便將非Na+/H+依賴的22Na+吸收包括在紅細胞中。無物質時的剩余讀數(shù)的平均值被當作100％對照例；試驗化合物存在下的平均值則被表示為該對照值的百分數(shù)。吸收數(shù)據(jù)的百分數(shù)在半對數(shù)座標上進行標繪；采用等式(插入34頁圈內)，通過將數(shù)據(jù)擬會為非線性曲線，獲得IC50數(shù)值。
Counillon et al.(1993) Mol.Pharmacol.441041-1045Escobales and Figueroa(1991)J.Membrane Biol.120，41-49Franchi et al.(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 839388-9392Morgan and Canessa(1990) J.Membrane Biol.118，193-214Sardet et al.(1989) Cell 56271-280Scholz et al.(1995) Cardiovasc.Res.29260-268試驗結果
1.
Code EMD 221960IC50(NHE-3)＝1-2μM2.
二乙酸酯；Code EMD 221963IC50(NHE-3)＝1μM3.
二乙酸酯；Code EMD 246326IC50(NHE-3)＝3μM
4.
二乙酸酯；Code EMD 246327IC50(NHE-3)＝3-4μM.
下面是關于藥物制劑的實施例實例A注射管形瓶100g通式I的NHE-3抑制劑和5g磷酸氫二鈉的溶液利用2N鹽酸，在3L二次蒸餾水中調節(jié)到pH6.5，無菌過濾，分配到注射管形瓶中，在無菌條件下冷凍干燥，然后無菌密封。每個注射管形瓶裝有5mg活性化合物。
實例B栓劑20g通式I的NHE-3抑制劑的混合物與100g大豆卵磷脂和1400g可可脂熔融混合，倒入到模具中并使其冷卻。每個栓劑包含20mg活性化合物。
實例C溶液由1g通式I的NHE-3抑制劑、9.38g磷酸二氫鈉合二水、28.48g磷酸氫二鈉合十二水以及0.1g苯扎氯銨，在940mL二次蒸餾水中制備成溶液。將其調節(jié)到pH6.8，注滿至1L，然后通過輻照滅菌。該溶液可以眼睛滴劑的形式使用。
實例D油膏500mg通式I的NHE-3抑制劑與99.5g凡士林在無菌條件下進行混合。
實例E片劑1kg通式I的NHE-3抑制劑、4kg乳糖、1.2g馬鈴薯淀粉、0.2kg滑石粉和0.1kg硬脂酸鎂的混合物按照慣用方式壓制成為片劑，每片含有10mg活性化合物。
實例F包衣片劑片劑按照類似于實例E那樣壓制，然后按照慣用方式涂以蔗糖、馬鈴薯淀粉、滑石粉、西黃蓍膠和著色劑的涂層。
實例G膠囊2kg通式I的NHE-3抑制劑按照慣用方式充填到硬明膠膠囊中，每個膠囊含有20mg活性化合物。
實例H安瓿1kg通式I的NHE-3抑制劑在60L二次蒸餾水中的溶液進行無菌過濾，分配到安瓿瓶中，在無菌條件下冷凍干燥然后無菌密封。每個安瓿含有10mg活性化合物。
權利要求
1.通式I的化合物， 其中R1、R4每種情況均彼此獨立地是-C(＝NH)-NH2，其上還可單取代上-COA、-CO-[C(R6)2]n-Ar、-COOA、-OH或傳統(tǒng)氨基保護基團NH-C(＝NH)-NH2、-CO-N＝C(NH2)2， 或 R2、R3、R5每種情況均彼此獨立地是H，A，OR6，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，NHCOAr，NHSO2A，NHSO2Ar，COOR6，CON(R6)2，CONHAr，COR6，COAr，S(O)nA，S(O)nAr，-O-[C(R6)2]m-COOR6，-[C(R6)2]p-COOR6，-O-[C(R6)2]m-CON(R6)2，-[C(R6)2]p-CON(R6)2，-O-[C(R6)2]m-CONHAr或-[C(R6)2]p-CONHAr，X是-[C(R6)2]n-，-CR6＝CR6-，-[C(R6)2]n-O-，-O-[C(R6)2]n-，-COO-，-OOC-，-CONR6-或-NR6CO-，R6是氫、A或芐基，A是1～20個碳原子的烷基，其中一或兩個CH2基團可被O或S原子代替或被-CR6＝CR6-基團代替，和/或1～7個氫原子可被F代替，Ar是苯基或萘基，它們是未取代的或者取代上一個、兩個或三個取代基A，Ar′，OR6，OAr′，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，NHCOAr′，NHSO2A，NHSO2Ar′，COOR6，CON(R6)2，CONHAr′，COR6，COAr′，S(O)nA或S(O)nAr′，Ar’是苯基或萘基，它們是未取代的或者取代上一個、兩個或三個取代基A，OR6，N(R6)2，NO2，CN，Hal，NHCOA，COOR6，CON(R6)2，COR6或S(O)nA，Hal是F、Cl、Br或I，n是0、1或2，m是1或2，p是1或2，及其鹽和溶劑合物，作為NHE-3抑制劑。
2.權利要求1的化合物a)3’-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)；b)3’-(3-carbamimidoyl芐氧基)聯(lián)苯基-3-羰基脒(carboxamidine)；c)3’-carbamimidoyl-5-(3-carbamimidoyl苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羧酸；d)N-[3’-(3-胍基羰基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-羰基]胍；e)[3’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸甲酯；f)[3’-脒基-5-(4-脒基苯氧基甲基)聯(lián)苯基-3-基氧基]乙酸，及其鹽和溶劑合物，作為NHE-3抑制劑。
3.權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療血栓形成、心肌局部缺血、外周及中樞神經系統(tǒng)以及中風、外周器官局部和手足局部缺血，以及處理休克狀態(tài)的藥物的應用。
4.權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產外科手術和器官移植用藥物以及用于保存和貯藏外科手術移植物的應用。
5.權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療細胞增殖作為主要或次要病因的疾病，治療或預防脂代謝疾病或呼吸驅動受干擾的藥物的應用。
6.權利要求1的通式I化合物及其生理可接受鹽和/或溶劑合物用于生產治療腎臟缺血、腸缺血疾病或用于預防急性或慢性腎疾病的藥物的應用。
7.藥物制劑，其特征在于，它含有至少一種權利要求1的NHE-3抑制劑和/或其生理可接受鹽和/或溶劑合物之一。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中X、R
文檔編號A61P7/00GK1555356SQ00813160
公開日2004年12月15日 申請日期2000年9月4日 優(yōu)先權日1999年9月22日
發(fā)明者D·多施, P·拉達茨, N·貝爾, C·韋姆, D 多施, 锎 申請人:默克專利股份公司