專利名稱：治療肺病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防或減少肺病癥狀發(fā)作或治療或減少肺病嚴(yán)重病情的組合物和方法。具體來說，本發(fā)明涉及將磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑和抗炎性皮質(zhì)類固醇聯(lián)合給藥治療由PDE4調(diào)節(jié)的肺病的組合物和方法。
背景技術(shù)：
肺病的形成是由多種傳遞質(zhì)引起的這一事實(shí)，使得發(fā)現(xiàn)新的肺病治療劑很困難。所以消除單一傳遞質(zhì)的影響似乎不可能對(duì)慢性哮喘的三個(gè)因素都有實(shí)質(zhì)性影響。另外一種“傳遞質(zhì)途徑”是調(diào)節(jié)決定著肺病病理生理的細(xì)胞活性。
這類方法之一是提高cAMP(環(huán)狀3’，5’-單磷酸腺苷)的水平。環(huán)狀A(yù)MP已被證實(shí)它是調(diào)節(jié)多種激素、神經(jīng)傳遞質(zhì)和藥物生物反應(yīng)的第二種信使；[Krebs Endocrinology Proceedinys of the 4th International Congress ExcerptaMedica，17-29，1973]。當(dāng)適當(dāng)?shù)霓卓箘┡c細(xì)胞表面特殊受體結(jié)合時(shí)，腺苷酸環(huán)化酶就被激活，將Mg+2-ATP加速轉(zhuǎn)化為cAMP。環(huán)狀A(yù)MP能夠調(diào)節(jié)大多數(shù)，但不是全部的可對(duì)外源性(過敏性)哮喘的病理生理起作用的細(xì)胞活性。因此，cAMP的升高會(huì)產(chǎn)生的有益效果，包括1)對(duì)氣道平滑肌的松弛，2)對(duì)乳突細(xì)胞傳遞質(zhì)釋放的抑制，3)對(duì)中性粒細(xì)胞脫粒的遏制，4)對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞脫粒的抑制，以及5)對(duì)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞激活的抑制。所以，可激活腺苷酸環(huán)化酶或抑制磷酸二酯酶的化合物應(yīng)當(dāng)有效抑制對(duì)氣道平滑肌和各種炎性細(xì)胞不適宜的激活。cAMP失活的主要細(xì)胞機(jī)理是用稱之為環(huán)狀核苷酸磷酸二酯酶(PDEs)同功酶族中的一種或多種水解3′-磷酸二酯鍵。
現(xiàn)已表明獨(dú)特的環(huán)狀核苷酸磷酸二酯酶(PDE)同功酶PDE4決定著氣道平滑肌和炎性細(xì)胞中的cAMP的降解。[Torphy，“磷酸二酯酶同功酶抗哮喘新藥劑的潛在目標(biāo)”，哮喘新藥，Barnes編輯，IBC技術(shù)服務(wù)有限公司，1989]。研究顯示對(duì)這種酶的抑制不僅產(chǎn)生了氣道平滑肌的松弛，而且也抑制了乳突細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的脫粒，同時(shí)伴有對(duì)單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞激活的抑制。而且，當(dāng)適當(dāng)?shù)募に鼗騼?nèi)分泌物將靶細(xì)胞的腺苷酸環(huán)化酶活性提高時(shí)，PDE4抑制劑的有益效果就被顯著地增強(qiáng)，體內(nèi)的情況可能就是這樣。所以當(dāng)前列腺素E2和前列環(huán)素(腺苷酸環(huán)化酶的激活劑)的水平升高時(shí)，PDE4抑制劑就會(huì)對(duì)肺有效。這類化合物對(duì)支氣管哮喘的藥物療法提供了一種獨(dú)特的方法并且它們比目前市售藥劑有顯著的治療優(yōu)點(diǎn)。
另外，按照許多肺病的病因包括多種傳遞質(zhì)的事實(shí)可以使用結(jié)合療法。在本發(fā)明中，提出了PDE4抑制劑和抗炎性皮質(zhì)類固醇的組合治療肺病，特別是，用吸入法投送一種藥物。這種組合尤其適用于治療慢性梗阻性肺病(COPD)或哮喘。
發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物肺病的方法，包括向需要這種治療的患者將有效量的PDE4-特異性抑制劑和有效量的抗炎性甾族藥劑共同或分開和連續(xù)地給藥，其中連續(xù)給藥的時(shí)間可長(zhǎng)可短。
第二方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物肺病的組合物，它含有有效量的PDE4-特異性抑制劑，有效量的抗炎性甾族藥劑和藥學(xué)上可接受的賦型劑。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明所涉及的組合療法包括將PDE4抑制劑和抗炎性甾族藥劑一起給藥來預(yù)防肺病的發(fā)作或治療已有的癥狀。這些化合物可以單一劑型一起給藥?；蛘咚鼈円詢煞N相同或不同的制劑給藥。更詳細(xì)地說，可以分別以口服制劑提供兩種藥物，或者一個(gè)是口服制劑而另一個(gè)是吸入劑，或者兩種藥物都以吸入劑型提供。它們可以同時(shí)給藥?；蛘咚鼈?cè)谙嘟臅r(shí)間或較遠(yuǎn)的時(shí)間給藥，例如早晨給藥一種藥而晚上給藥第二種藥。
該組合可用于預(yù)防或癥狀發(fā)作之后。有時(shí)，該組合可用來預(yù)防肺病的發(fā)展或阻止功能如肺功能的下降。
用于本發(fā)明的PDE4-特異性抑制劑可以是已知抑制PDE4酶或發(fā)現(xiàn)起PDE4抑制劑作用的和只是PDE4抑制劑的任何化合物，不是既可抑制PDE族的其他成員又可抑制PDE4的化合物。關(guān)于PDE4催化形式的IC50，一般優(yōu)選使用IC50比為0.1左右或更大的PDE4拮抗劑，其中的IC50是與環(huán)戊苯吡酮高親和性結(jié)合的PDE4催化形式的IC50除以與環(huán)戊苯吡酮低親和性結(jié)合形式的IC50。
用于治療炎癥和作為支氣管擴(kuò)張劑象茶堿和己酮可可豆堿(pentoxyfyllin)藥物的PDE抑制劑在所有組織中都能夠無差別地抑制PDE同功酶。但是因?yàn)檫@些化合物明顯能夠非選擇性地抑制所有組織中的全部5種PDE同功酶組，所以它們具有副作用。這類化合物可以有效治療目標(biāo)疾病，但具有不希望的副作用，如果能夠?qū)⑦@些副作用避免或減至最小，就會(huì)增加這種方法治療某些疾病的總治療效果。例如，用已被開發(fā)為抗抑郁劑的PDE4選擇性抑制劑環(huán)戊苯吡酮的臨床研究表明它有促神經(jīng)的活性并對(duì)胃腸道產(chǎn)生影響如胃灼熱、惡心和嘔吐。
為了本公開目的，將可與R和S的環(huán)戊苯吡酮低親和性結(jié)合的cAMP催化部位稱之為“低親和性”結(jié)合部位(LPDE4)而將可與環(huán)戊苯吡酮高親和性結(jié)合的另一種形式的催化部位稱之為“高親和性”結(jié)合部位(HPDE4)。術(shù)語“HPDE4”不應(yīng)當(dāng)與用于表示人PDE4的術(shù)語“hPDE4”相混淆。
建立和證實(shí)[3H]-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合測(cè)定進(jìn)行初始試驗(yàn)。以下實(shí)施例1將給出這項(xiàng)試驗(yàn)的細(xì)節(jié)。
為了測(cè)定高親和性結(jié)合活性和低親和性結(jié)合活性是否都存在于相同基因產(chǎn)物上，用已知方法轉(zhuǎn)化酵母并在6小時(shí)的發(fā)酵期追蹤重組體PDE4的表達(dá)。用直接抗PDE4的抗體的蛋白質(zhì)印跡分析表明PDE4的表達(dá)量隨著時(shí)間而增加，生長(zhǎng)3小時(shí)后達(dá)到最大。另外，大于90％的免疫反應(yīng)產(chǎn)物在酵母溶胞產(chǎn)物的高速(100,00×g)上清液中。用蛋白質(zhì)表達(dá)的同時(shí)也監(jiān)控[3H]R-(-)-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合和PDE活性。PDE4活性與環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合活性是共同表達(dá)的，這表明兩種功能存在于相同基因產(chǎn)物上。與蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果相似，發(fā)現(xiàn)85％以上的環(huán)戊苯吡酮-可抑制的PDE活性和[3H]-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合活性都存在于酵母上清液的部分。
總之，在系統(tǒng)中所表達(dá)的大多數(shù)重組體PDE4以LPDE4存在而只有少部分以HPDE4存在。所以，對(duì)重組體PDE4催化活性的抑制主要反映了化合物對(duì)LPDE4的作用。這樣對(duì)PDE4催化活性的抑制能夠用作化合物對(duì)LPDE4功效的指標(biāo)?；衔飳?duì)HPDE4的功效能夠通過檢測(cè)它們與[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的競(jìng)爭(zhēng)能力來評(píng)價(jià)。為了開發(fā)低親和性和高親和性環(huán)戊苯吡酮結(jié)合部位的SARs，用兩種評(píng)價(jià)系統(tǒng)測(cè)定所選化合物的功效。使用標(biāo)準(zhǔn)化合物的試驗(yàn)結(jié)果用表格表示。正如所預(yù)期的，與其他部位如一種環(huán)戊苯吡酮是低親和性結(jié)合劑的部位相比在環(huán)戊苯吡酮證實(shí)高親和性結(jié)合的部位處，某些化合物在與[3H]-環(huán)戊苯吡酮競(jìng)爭(zhēng)中明顯更有效。高親和性結(jié)合與低親和性之間的SAR聯(lián)系較差，得出結(jié)論是抑制高親和性的[3H]-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合的SAR不同于低親和性環(huán)戊苯吡酮結(jié)合部位結(jié)合的SAR。
現(xiàn)在已知在能與抑制劑相互作用的人單核細(xì)胞重組體PDE4(hPDE4)上至少有兩種結(jié)合形式。對(duì)這些觀察的一種解釋是hPDE4存在兩種不同的形式。一種高親和性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮和旦布茶堿(denbufylline)而另外一種低親和性地結(jié)合這些化合物。用于本發(fā)明的優(yōu)選PDE4抑制劑是那些具有有益于恢復(fù)健康的治療比的化合物，即當(dāng)酶是可低親和性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的形式時(shí)可優(yōu)選抑制cAMP催化活性的化合物，由此降低明顯與環(huán)戊苯吡酮高親和性地結(jié)合的抑制形式有關(guān)的副作用。關(guān)于PDE4催化形式另外一種描述方法是具有0.1或更大的IC50比的優(yōu)選化合物，其中的IC50比是與環(huán)戊苯吡酮高親和性結(jié)合的PDE4催化形式的IC50除以與環(huán)戊苯吡酮低親和性結(jié)合形式的IC50。
這種標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步改進(jìn)是PDE4抑制劑具有0.1或更大的IC50比的那些；該比率是使用1mM[3H]-cAMP作底物與1nM的[3H]R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)形成可與環(huán)戊苯吡酮高親和性結(jié)合的PDE4的IC50值對(duì)可與環(huán)戊苯吡酮低親和性結(jié)合的形式抑制PDE4催化活性的IC50值的比率。對(duì)該試驗(yàn)的進(jìn)一步回顧解釋可以在1995年5月31日申請(qǐng)的共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)08/456274中找到，將該文獻(xiàn)的內(nèi)容引用到本文作為參考，所引用內(nèi)容的程度足以使本發(fā)明得以實(shí)施。
可用的PDE4抑制劑的例子是(R)-(+)-1-(4-溴芐基)-4-[(3-環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮；(R)-(+)-1-(4-溴芐基)-4-[(3-環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮；3-(-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)-1-(4-N′-[N2-氰基-S-甲基-異硫脲基]芐基)-2-吡比咯烷酮；順式-4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸；順式-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇；
(R)-(+)-[4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)吡咯烷-2-亞基]乙酸乙酯；(S)-(+)-[4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)吡咯烷-2-亞基]乙酸乙酯。
最優(yōu)選的是IC50比大于0.5的那些PDE4抑制劑，特別是IC50比大于1.0的那些化合物。優(yōu)選的化合物是順式-4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸、2-甲氧甲?；?4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮和順式-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇；這些都是可優(yōu)先與低親和性結(jié)合部位結(jié)合的并具有0.1或更大的IC50比的化合物的例子。
在1996年9月3日公布的美國(guó)專利5,552,438列出了一些化合物。該專利和其公開的化合物在本文全部引用為參考文獻(xiàn)。公開于美國(guó)專利5,552,438中特別有益的化合物是順式-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸及其鹽、酯、前體藥物或物理形式。
來自Astra的AWD-12-281(Hofgen，N.等，15th EFMC Int Symp MedChem(Sept 6-10，Edinbergh)1998，Abst P.98；名稱為NCS-613的9-芐基腺嘌呤衍生物(INSERM)；Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；鑒定為CI-1018的苯并二吖庚因PDE4抑制劑(PD-168787；Parke-Davis/Warner-Lambert)；在Kyowa Hakko的WO9916766中公開的苯并間二氧雜環(huán)戊烯衍生物；來自Napp的V-11294A(Landells，L.J.等，Eur RespJ[Annu Cong Eur Resp Soc(9月19-23日，日內(nèi)瓦)1998]1998，12(附件28)摘要P2393)；Byk-Gulden的roflumilast(CAS參考號(hào)162401-32-3)和pthalazinone(WO9947505)；或者鑒定為T-440的化合物(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等，J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1)162)。這些化合物中的任何一種或全部都可以或能夠有益于本文所述的方法。
上述列出的沒有俗名或商品名的好幾種特殊化合物都可以按照1992年10月30日申請(qǐng)的同時(shí)待審的美國(guó)專利伸請(qǐng)USSN 862,083，USSN 862,111，USSN 862,030和USSN 862,114或其后續(xù)申請(qǐng)或這些申請(qǐng)中一個(gè)或多個(gè)要求優(yōu)先權(quán)的美國(guó)專利中描述的方法制備。本文將這些申請(qǐng)或相關(guān)專利全部引用為參考，就象列在該文件中列出一樣。
用于本發(fā)明的甾族化合物藥劑是口用和吸入的具有抗炎活性的皮質(zhì)類固醇及其前體藥物。這些甾族化合物的例子是甲強(qiáng)龍、強(qiáng)的松、地塞米松、氟地松、丙酸氯地米松、布地縮松、9-去氟膚輕松、糠酸毛他松和丙酮縮去炎松。甲強(qiáng)龍和強(qiáng)的松是口用和可注射形式的抗炎皮質(zhì)類固醇；它們可以從許多注冊(cè)的普通藥物公司獲得。二丙酸丙酸氯地米松是由GlaxoWellcome作為吸入氣霧劑以名稱為Beconase和Beconase AQ出售的。GlaxoWellcome也出售名稱為Flonase的丙酸氟地松。Rhone-Poulenc Roher出售名稱為Nasacort的鼻用噴霧劑和氣霧劑形式的丙酮縮去炎松。RocheLaboratories出售名稱為Masalide和NasarelTM的鼻溶液形式的9-去氟膚輕松。Medeva制藥公司出售名稱為磷酸DexacortTM的磷酸鈉鹽形式的地塞米松。Schering公司出售名稱為Nasonex的單水合物形式的鼻用制劑的糠酸毛他松。布地縮松還是另外一種用于治療肺病的吸入皮質(zhì)類固醇。它是由Astra Pharmaceuticals，L.P.以Pulmicort Turbohaler的名稱turbohaler裝置中的粉劑形式在市場(chǎng)上出售的。所有這些藥物和鼻用制劑或口用或可注射的制劑都能夠在美國(guó)新澤西州的醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)合作公司出版的1999年版的Physicians’Desk reference(PDR)中找到并可以在因特網(wǎng)http//www. tomescps.com/fraMain.asp？Mnu＝0和鏈接的網(wǎng)頁(yè)上購(gòu)得。表1列出了現(xiàn)在正在開發(fā)的并可以用于本發(fā)明的其他皮質(zhì)類固醇。
表1可吸入的皮質(zhì)類固醇
優(yōu)選的結(jié)合療法是與順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸，cilomalast(Ariflo)一起給藥一種或多種地塞米松、氟地松、丙酸氯地米松、布地縮松、去氟膚輕松、糠酸毛他松和丙酮縮去炎松的療法。優(yōu)選的療法是將甾族化合物以吸入劑和將酸以口服劑型的相伴給藥，其中每種藥一天給藥一次或兩次。就酸而言，最優(yōu)選是控制釋放口服片劑。
可以想到將兩種活性藥劑同時(shí)或非常近的時(shí)間給藥。另外一種方法，一種藥早晨給藥，另一種在這一天中稍后給藥?；蛘吡硗庖环N方案，一種藥一天給藥兩次，而另一種藥在與進(jìn)行一天兩次給藥中的藥物同時(shí)或分開給藥，一天一次。優(yōu)選兩種藥物一起給藥。
口服給藥時(shí)有活性的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的鹽可以被制備成糖漿、片劑、膠囊、控制釋放制劑或錠劑。糖漿劑一般由該化合物或其鹽在液體載體例如乙醇、花生油、橄欖油、甘油或含有矯味劑或著色劑的水中的懸浮液或溶液組成。組合物為片劑時(shí)，可以使用制備固體劑型常用的任何藥用載體。這類載體的例子包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石粉、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。組合物為膠囊時(shí)，任何常規(guī)制備膠囊的技術(shù)都是適用的，例如在硬膠囊殼中使用前述載體。組合物為軟膠囊時(shí)，可以考慮制備懸浮液或分散液常用的任何藥用載體例如含水樹膠、纖維素、硅酸鹽或油類，將其摻入軟明膠膠囊殼中。
一般胃腸外給藥的組合物是由無菌的含水或無水載體任選包括胃腸外可接受的油例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油中的化合物或其鹽的溶液或懸浮液組成。
一般吸入用的組合物是可以干粉形式給藥的溶液、懸浮液或乳濁液形式或用常用拋射劑如氟化烴類如三氯氟甲烷的氣霧劑形式。
PDE4抑制劑組合物優(yōu)選是單位劑型如片劑或膠囊劑。對(duì)甾族化合物來說優(yōu)選是計(jì)量氣霧劑、計(jì)量的干粉吸入劑或鼻用噴霧劑。
該活性成分可以一天給藥1到6次，足夠具有所要求的活性?；钚猿煞值慕o藥優(yōu)選一天一次或兩次，更優(yōu)選一天兩次。
本發(fā)明組合物可用于治療運(yùn)動(dòng)誘發(fā)的哮喘(EIA)、污染誘發(fā)的哮喘(PIA)和寒冷誘發(fā)的哮喘(CIA)的慢性以及間歇型兩種，還要考慮有刺激物的參與。本發(fā)明化合物優(yōu)選用于長(zhǎng)期療法。
就給藥量而言，認(rèn)為對(duì)PDE4抑制劑每位成人每天以1到200毫克之間的量給藥。對(duì)甾族化合物按照審定的標(biāo)簽給藥。
實(shí)施例1-磷酸二酯酶與環(huán)戊苯吡酮結(jié)合的測(cè)定實(shí)施例1A測(cè)定分離出的主要以低親和性形式存在的人單核細(xì)胞PDE4和hPDE4(人重組體PDE4)。所以，以1mM的[3H]cAMP作底物使用PDE4催化活性的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法評(píng)估被測(cè)化合物抗PDE4低親和性形式的活性(torphy等，生物化學(xué)雜志，1992年第267卷，第3期第1798-1804頁(yè))。
用大鼠腦的高速分離的上清液作蛋白源和將[3H]-環(huán)戊苯吡酮的兩種對(duì)映異構(gòu)體制備成25.6Ci/mmol的比重。改良已公開的方法中的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件與PDE測(cè)定條件一致，cAMP除外50mM Tris HCl(pH7.5)、5mM MgCl2、50mM的5’-AMP和1nM的[3H]-環(huán)戊苯吡酮(Torphy等，生物化學(xué)雜志，1992年第267卷，第3期第1798-1804頁(yè))。該測(cè)定在30℃進(jìn)行1小時(shí)。終止反應(yīng)并用Brandel細(xì)胞收獲器從游離配體中分離結(jié)合配體。除了不含[3H]-cAMP外，與測(cè)定低親和性PDE活性使用的條件一致的條件下測(cè)定對(duì)高親和性結(jié)合部位的競(jìng)爭(zhēng)。
實(shí)施例1B磷酸二酯酶活性的測(cè)定用提供者(Amersham Life Sciences)所描述的[3H]cAMP SPA或[3H]cGMPSPA酶測(cè)定PDE活性。在室溫下在96穴平皿上0.1ml的反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行反應(yīng)，該反應(yīng)緩沖液含有(最終濃度)50mM的Tris-HCl，pH7.5、8.3mM的MgCl2、1.7mM的EGTA、[3H]cAMP或[3H]cGMP(大約2000dpm/pmol)、酶和各種濃度的抑制劑。測(cè)定進(jìn)行1小時(shí)并在硫酸鋅存在下通過加入50μl的SPA硅酸釔珠終止反應(yīng)。振蕩平皿并在室溫靜置20分鐘。用閃爍光譜測(cè)定法測(cè)定放射性標(biāo)記的產(chǎn)物形成。R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合測(cè)定用Schneider和同事的改良方法進(jìn)行[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合測(cè)定。參見Nicholson等，Trends Pharmacol.Sci.，Vol.12，第19-27頁(yè)(1991)和McHale等，Mol.Pharmacol.，Vol.39，109-113(1991)。R-環(huán)戊苯吡酮與PDE4的催化部位結(jié)合參見Torphy等，Mol.Pharmacol.，Vol 39，pp.376-384(1991)。所以，[3H]r-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)提供了對(duì)未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)劑的PDE4抑制劑功效的獨(dú)立證明。該測(cè)定是在30℃在0.5ul的緩沖液中進(jìn)行的，其中的緩沖液含有(最終濃度)50mM的Tris-HCl，pH7.5、5mM的MgCl2、0.05％胎牛血清白蛋白、2[3H]R-環(huán)戊苯吡酮(5.7×104dpm/pmol)和各種濃度的非放射性標(biāo)記的抑制劑。加入2.5ml的冰冷的反應(yīng)緩沖液(不含[3H]-R-環(huán)戊苯吡酮)終止反應(yīng)并通過已經(jīng)在0.3％聚乙烯亞胺浸泡過的WhatmanGF/B濾紙快速真空過濾(Brandel Cell Harvester)。用另外7.5ml的冰冷緩沖液沖洗濾紙、干燥并用液晶閃爍光譜測(cè)定法計(jì)數(shù)。
實(shí)施例2Cilomalast/低劑量吸入皮質(zhì)類固醇(CIS)劑量-分布試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)·這是一個(gè)輕度/中度哮喘患者的IIB期隨機(jī)的安慰劑對(duì)照的劑量-分布試驗(yàn)，一周進(jìn)行單盲安慰劑試驗(yàn)，6周雙盲治療期和一周隨訪期。
·試驗(yàn)人群在低劑量吸入皮質(zhì)類固醇(不超過500mcg二丙酸丙酸氯地米松/天或相當(dāng)量)不足以控制的，年齡在18和70歲之間的患有輕度到中度哮喘的男性或女性患者是符合標(biāo)準(zhǔn)的。要求患者有對(duì)身高、年齡、性別和種族所預(yù)測(cè)的≥50％和≤80％普查的FRV1和在給藥β-2拮抗劑后有12％或更大的可逆性。在隨機(jī)選擇的基礎(chǔ)就診進(jìn)行7天中的4天患者就有6或更高的癥狀總分。受試者數(shù)為300個(gè)可評(píng)估的患者。
·將cilomalast以5mg、10mg和15mg一天兩次給藥6周。
·盡管ICS的平均劑量是652mcg，受試者仍用丙酸氯地米松等同物的平均值500mcg。
·第一終點(diǎn)1秒種內(nèi)從起點(diǎn)到終點(diǎn)的水槽臨床呼氣體積(FEV1)變化、每周和雙盲藥物第一次給藥后4小時(shí)內(nèi)的臨床FEV1的變化。
·第二終點(diǎn)使用搶救藥物和過夜癥狀。
·第三終點(diǎn)臨床上用力肺活量(FVC)、臨床上最大呼氣速率(PEFR)/在25-75％(FRF25-75)和75％(FEF75)的用力呼氣速率、家庭PEFR變量、家庭PEFR、癥狀總分。
評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)第一功效的測(cè)定定義為1秒種內(nèi)從起點(diǎn)到終點(diǎn)的臨床上水槽呼氣體積(FEV1)的變化。在雙盲治療期每周和雙盲藥物第一次給藥后4小時(shí)期間也分析臨床FEV1的變化。第二功效變量是吸入/噴霧β-2拮抗劑的使用和過夜的哮喘癥狀。第三功效變量是用力的肺活量(FVC)、臨床最大呼氣速率(PEFR)、在25-75％(FRF25-75)和75％(FEF75)的用力呼氣速度、家庭PEFR變量、家庭PEFR(早晨和夜晚)、癥狀總分(夜晚、早晨和整個(gè)白天哮喘的復(fù)合分?jǐn)?shù))、早晨哮喘、整個(gè)白天的哮喘、吸入皮質(zhì)類固醇使用、咳嗽、喘氣、透不過氣/胸緊、哮喘惡化率和醫(yī)生和患者的整體評(píng)價(jià)。
試驗(yàn)結(jié)果·在終點(diǎn)ITT的分析15g的cilomalast BID對(duì)安慰劑的水槽FEV1沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改進(jìn)(0.16L；p＝0.062)。
·在終點(diǎn)ITT分析水槽FEV1的反應(yīng)是以劑量為順序的。
·如果排除ICS劑量＞500mcg丙酸氯地米松同時(shí)cilomalast 15mg BID的患者水槽FEV1有顯著的改進(jìn)(0.21L；p＝0.033)。
·對(duì)cilomalast的15mg BID的有力支持包括4小時(shí)FEV1、家庭PEFR、FEF25-75和醫(yī)生和患者的總評(píng)估分?jǐn)?shù)。
實(shí)施例3Cilomalast/低劑量吸入皮質(zhì)類固醇(CIS)試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)·患者輕度/中度哮喘的患者在≥800mcg的丙酸氯地米松時(shí)的R、DB、PC、DR。
·cilomalast劑量是5、10和15mg每日兩次共4周。
·2周試驗(yàn)。
·第一終點(diǎn)臨床水槽FEV1。
·第二終點(diǎn)早晨的PEFR、癥狀、PEFR變量、夜晚PEFR、臨床PEFR、PEFR25-75、PEFR75、所用的搶救藥物。
試驗(yàn)結(jié)果·在ITT分析中任何劑量組都沒有顯示出臨床水槽FEV1的統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著變化。
·從第一終點(diǎn)沒有觀察到劑量等級(jí)。
·使用重復(fù)測(cè)定分析在10mg的cilomalast BID時(shí)統(tǒng)計(jì)學(xué)上改良的水槽FEV1是排除在＜800mcg ICS的患者(0.16L；p＝0.009)·ICS(丙酸氯地米松)劑量范圍從100到4000mcg，平均1136mcg。
·對(duì)10g的cilomalast BID作為有效劑量的有力支持也來自于在4小時(shí)臨床FEV1、臨床FVC、PEFR的數(shù)值上的優(yōu)越結(jié)果。
·沒有測(cè)出劑量-反應(yīng)關(guān)系，水槽濃度與劑量成正比并類似于以前的試驗(yàn)。
表1在選擇性試驗(yàn)中化合物間的對(duì)比抗過敏原的試驗(yàn)對(duì)比數(shù)據(jù)抗過敏原的試驗(yàn)
圖例說明cilomalast的數(shù)據(jù)是從＜652mcg的ICS的哮喘患者的協(xié)議分析獲得的。montelukast(MT)、布地縮松(BDP)和二者的數(shù)據(jù)是從可測(cè)定Singulair相對(duì)于吸入皮質(zhì)類固醇的作用的SingulairSBA的單一試驗(yàn)中獲得的。
在兩種試驗(yàn)中安慰劑(Pbo)組間的行為有顯著差異。結(jié)論是盡管在cilomalast試驗(yàn)中Pbo組也有改善的事實(shí)，當(dāng)加入到低劑量的ICS時(shí)cilomalast優(yōu)于Singulair。
以上的描述和實(shí)施例都是為了說明本發(fā)明的，而不是對(duì)其加以限定。發(fā)明人所保護(hù)的內(nèi)容參考本文以下的權(quán)利要求書。
權(quán)利要求
1.一種治療肺病的方法，包括向需要這種治療的患者將有效量的PDE4抑制劑和抗炎性皮質(zhì)膽固醇以結(jié)合形式、分開形式，或分開和連續(xù)形式給藥，其中連續(xù)給藥的時(shí)間可長(zhǎng)可短。
2.權(quán)利要求1的方法，其中PDE4抑制劑是順式4-氰基-4(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧苯基)環(huán)己烷-1-羧酸，甾族化合物選自地塞米松、氟地松、丙酸氯地米松、布地縮松、9-去氟膚輕松、糠酸毛他松和丙酮縮去炎松。
全文摘要
本發(fā)明涉及將磷酸二酯酶4抑制劑與抗炎性皮質(zhì)類固醇結(jié)合給藥治療肺病如慢性梗阻性肺病或哮喘。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1387404SQ00815265
公開日2002年12月25日 申請(qǐng)日期2000年11月1日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月2日
發(fā)明者彼得·N·古德費(fèi)洛, 理查德·尼曼, 西奧多·J·托菲 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司