專利名稱：作為治療劑的吡唑并嘧啶類的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求1999年9月17日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/154,620的利益，其中全部教導(dǎo)引入本文作為參考。發(fā)明背景至少有400種酶被鑒定為蛋白激酶。這些酶催化靶蛋白底物的磷酸化作用。該磷酸化作用一般是將一個(gè)磷酸根基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白底物中的反應(yīng)。此磷酸根轉(zhuǎn)移的靶底物中的特異性結(jié)構(gòu)是酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘基。由于這些氨基酸殘基是磷?；D(zhuǎn)移的靶結(jié)構(gòu)，故這些蛋白激酶一般稱為酪氨酸激酶或絲氨酸/蘇氨酸激酶。
在酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上進(jìn)行的此磷酸化反應(yīng)及中和磷酸酶反應(yīng)參與了無數(shù)的細(xì)胞過程，這些過程構(gòu)成了對(duì)不同細(xì)胞內(nèi)信號(hào)(一般通過細(xì)胞受體介導(dǎo))的反應(yīng)、細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及細(xì)胞過程的激活或滅活的基礎(chǔ)。蛋白激酶的級(jí)聯(lián)常常參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的傳遞，且是實(shí)現(xiàn)這些細(xì)胞過程所必需的。由于這些過程中它們的普遍存在，蛋白激酶作為漿膜的整個(gè)部分、或作為細(xì)胞質(zhì)酶被發(fā)現(xiàn)，或者常常作為酶復(fù)合物的組分位于細(xì)胞核內(nèi)。在很多情況下，這些蛋白激酶是酶和結(jié)構(gòu)蛋白復(fù)合物的必需元素，其決定了細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞過程何時(shí)何地發(fā)生。
蛋白酪氨酸激酶蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是催化細(xì)胞內(nèi)蛋白中的特異性酪氨酸殘基的磷酸化作用的酶。這些底物蛋白的翻譯后修飾，常常是酶本身，作為調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、活化和分化的分子開關(guān)(其綜述，見Schlessinger and Ulrich，1992，Neuron 9383-391)。在很多病癥中已發(fā)現(xiàn)了異常的或過度的PTK活性，這些病癥包括良性和惡性增殖疾病及免疫系統(tǒng)不適當(dāng)?shù)募せ顚?dǎo)致的疾病(如，自身免疫性疾病)，同種移植物排斥和移植物抗宿主病。此外，內(nèi)皮細(xì)胞受體PTKs如KDR和Tie-2介導(dǎo)血管生成過程，并因此參與支持癌癥或涉及不適當(dāng)?shù)难苄纬傻钠渌膊?例如，糖尿病性視網(wǎng)膜病，與年齡有關(guān)的視網(wǎng)膜黃斑變性引起的脈絡(luò)膜血管化，牛皮癬，關(guān)節(jié)炎，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病，嬰兒血管瘤)。
酪氨酸激酶可以是受體型的(具有細(xì)胞外、跨膜和細(xì)胞內(nèi)功能域)或非受體型的(全部在細(xì)胞內(nèi))。
受體酪氨酸激酶(RTKs)RTKs包括具有不同生物活性的一大類跨膜受體。目前，已鑒定了至少19種不同的RTK亞類。此受體酪氨酸激酶(RTK)族包括對(duì)多種類型細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化起決定作用的受體(Yarden and Ullrich，Ann.Rev.Biochem.57433-478，1988；Ullrich and Schlessinger，Cell 61243-254，1990)。RTKs的內(nèi)在功能是在配體結(jié)合時(shí)激活，其導(dǎo)致受體和多種細(xì)胞底物的磷酸化，并隨后帶來多種細(xì)胞反應(yīng)(Ullrich & Schlessinger，1990，Cell 61203-212)。因此，受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)是由與特異性生長(zhǎng)因子(配體)的細(xì)胞外作用引發(fā)的，一般隨之而來的是受體二聚作用、內(nèi)在蛋白酪氨酸激酶活性的刺激和受體磷酸根轉(zhuǎn)移作用。于是創(chuàng)造了細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子的結(jié)合位點(diǎn)，并導(dǎo)致形成與一系列促進(jìn)適當(dāng)細(xì)胞反應(yīng)的細(xì)胞質(zhì)信號(hào)分子的復(fù)合物(例如，細(xì)胞分裂、分化、代謝作用、細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境的變化)，見Schlessinger and Ullrich，1992，Neuron91-20。
帶有SH2的蛋白(src同源性-2)或磷?；野彼峤Y(jié)合(PTB)功能域結(jié)合活化的酪氨酸激酶受體及其具有傳播信號(hào)進(jìn)入細(xì)胞的高親合力的底物。這兩種功能域都識(shí)別磷?；野彼?Fantl等，1992，Cell 69413-423；Songyang等，1994，Mol.Cell.Biol.142777-2785；Songyang等，1993，Cell 72767-778；和Koch等，1991，Science252668-678；Shoelson，Curr.Opin.Chem.Biol.(1997)，1(2)，227-234；Cowburn，Curr.Opin.Struct.Biol.(1997)，7(6)，835-838)。已鑒定了若干種與受體酪氨酸激酶(RTKs)有關(guān)的細(xì)胞內(nèi)底物蛋白。它們被主要分為兩類(1)具有催化功能域的底物；和(2)缺少這樣的功能域但作為接合器并與催化活性分子有聯(lián)系的底物(Songyang等，1993，Cell 72767-778)。受體或蛋白與其底物的SH2或PTB功能域之間的相互作用的特異性由直接圍繞所述磷?；野彼釟埢陌被釟埢鶝Q定。例如，SH2功能域和圍繞特定受體上的磷?；野彼釟埢陌被嵝蛄兄g的結(jié)合親合力的差別與在其底物磷?；匦灾杏^察到的差別相關(guān)(Songyang等，1993，Cell 72767-778)。所觀察到的現(xiàn)象暗示各受體酪氨酸激酶的功能不僅由其表達(dá)的形式和配體有效性決定，還由特定受體激活的下游信號(hào)傳導(dǎo)路徑的排列以及那些刺激物的作用時(shí)間點(diǎn)和持續(xù)時(shí)期決定。因此，磷酸化作用提供了重要的調(diào)節(jié)步驟，該步驟決定了特定生長(zhǎng)因子受體以及分化因子受體反射增進(jìn)的信號(hào)路徑的選擇性。
雖然其中某些會(huì)間接促進(jìn)血管生成，但是已表明若干受體酪氨酸激酶如FGFR-1、PDGFR、TIE-2和c-Met，及與其結(jié)合的生長(zhǎng)因子，在血管生成中起一定作用(Mustonen and Alitalo，J.Cell Biol.129895-898，1995)。此類受體酪氨酸激酶中的一種，稱為“胎肝激酶1”(FLK-1)，是RTKs的III型亞類中的一員。人FLK-1的另一種命名是“含激酶插入功能域的受體”(KDR)(Terman等，Oncogene 61677-83，1991)。FLK-1/KDR的另一種命名是“血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體”(VEGFR-2)，這是由于其以高親合力結(jié)合VEGF。鼠型FLK1/VEGFR-2還被稱為NYK(Oelrichs等，Oncogene 8(1)11-15，1993)。已分離出DNAs編碼小鼠、大鼠和人FLK-1，并報(bào)告了核苷酸和編碼的氨基酸序列(Matthews等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，889026-30，1991；Terman等，1991，出處同上；Terman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.1871579-86，1992；Sarzani等，出處同上；及Millauer等，Cell 72835-846，1993)。一些研究，如在Millauer等在出處同上的文獻(xiàn)中所報(bào)告的，暗示VEGF和FLK-1/KDR/VEGFR-2在血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、血管的形成和抽芽(分別命名為血管生成和血管發(fā)生)中扮演重要角色的配體-受體對(duì)。
命名為“fms樣酪氨酸激酶1”(Flt-1)的另一種RTK的III型亞類與FLK-1/KDR有關(guān)(DeVries等，Science 255；989-991，1992；Shibuya等，Oneogene 5519-524，1990)。Flt-1的另一種命名是“血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1”(VEGFR-1)。目前，已發(fā)現(xiàn)FLK-1/KDR/VEGFR-2和Flt-1/VEGFR-1亞類中的很多成員主要表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞上。這些亞類成員接受血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)類配體的特異性刺激(Klagsburn and D′Amore，Cytokine & Growth Factor Reviews7259-270，1996)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)結(jié)合Flt-1的親合力較結(jié)合FLK-1/KDR的親合力高，并對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有致有絲分裂作用(Terman等，1992，出處同上；Mustonen等出處同上；DeVries等，出處同上)。據(jù)信Flt-1是血管發(fā)育期間內(nèi)皮組織所必需的。Flt-1表達(dá)與小鼠胚胎的早期血管發(fā)育相聯(lián)系，并與傷口愈合期間的新血管形成有關(guān)(Mustonen and Alitalo，出處同上)。Flt-1在單核細(xì)胞、破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞以及在成人組織如腎小球中的表達(dá)暗示了此受體的與細(xì)胞生長(zhǎng)無關(guān)的其它功能(Mustonen and Alitalo，出處同上)。
如上所述，最近的證據(jù)表明VEGF在正常的血管發(fā)生和病理性血管發(fā)生的刺激中起了一定作用(Jakeman等，Endocrinology 133848-859，1993；Kolch等，Breast Cancer Research and Treatment36139-155，1995；Ferrara等，Endocrine Reviews 18(1)；4-25，1997；Ferrara等，Regulation of Angiogenesis(L.D.Goldberg and E.M.Rosen編輯)，209-232，1997)。此外，VEGF已涉足血管滲透性的控制和提高(Connolly等，J.Biol.Chem.26420017-20024，1989；Brown等，Regulation of Angiogenesis(L.D.Goldberg and E.M.Rosen編)，233-269，1997)。已報(bào)告了由mRNA的另一種剪接產(chǎn)生的不同形式的VEGF，按Ferrara等所述包括4種類型(J.Cell.Biochem.47211-218，1991)。VEGF的分泌型和主要與細(xì)胞有關(guān)的類型已由Ferrara等鑒定(出處同上)，且已知該蛋白以二硫鍵連接的二聚體的形式存在。
最近還確定了VEGF的若干相關(guān)同系物。但是，它們?cè)谡Ｉ砗图膊∵^程中的作用還未得到說明。此外，VEGF類的很多成員在一些組織中常常與VEGF共同表達(dá)，且一般能與VEGF形成雜二聚體。此性質(zhì)可能改變受體的特異性和此類雜二聚體的生物作用，并進(jìn)一步使它們的特異性功能的說明復(fù)雜化，如下所述(Korpelainen and Alitalo，Curr.Opin.Cell Biol.，159-164，1998及其其中引用的文獻(xiàn))。
胎盤生長(zhǎng)因子(PlGF)的氨基酸序列與VEGF序列表現(xiàn)出顯著的同種性(Park等，J.Biol.Chem.26925646-54，1994；Maglione等，Oncogene 8925-31，1993)。正如VEGF，不同類型的PlGF由mRNA的另一種剪切產(chǎn)生，且蛋白己二聚形式存在(Park等，出處同上)。PlGF-1和PlGF-2已高親合力結(jié)合Flt-1，而PlGF-2還迫切地與神經(jīng)纖維素(neuropilin)-1結(jié)合(Migdal等，J.Biol.Chem.273(35)22272-22278)，但是它們都不結(jié)合FLK-1/KDR(Park等，出處同上)。已報(bào)告當(dāng)VEGF以低濃度存在時(shí)PlGF加強(qiáng)血管滲透性和內(nèi)皮細(xì)胞上的VEGF的致有絲分裂作用(這意味著歸因于雜二聚體的形成)(Park等，出處同上)。
VEGF-B以兩種異構(gòu)形式產(chǎn)生(167和185殘基)，其似乎也結(jié)合Flt-1/VEGFR-1。它通過調(diào)節(jié)脲激酶型纖溶酶原激活物和纖溶酶原激活物抑制劑1的表達(dá)和活性，可以在細(xì)胞外基質(zhì)降解、細(xì)胞粘附性和遷移的調(diào)節(jié)中起一定作用(Pepper等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(20)11709-11714)。
VEGF-C原本以VEGFR-3/Flt-4的配體形式克隆，其主要由淋巴內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。在其完全處理后的形式中，VEGF-C也可以結(jié)合KDR/VEGFR-2并刺激體內(nèi)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移及體外模型中的血管發(fā)生(Lymboussaki等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)395-403；Witzenbichler等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)，381-394)。VEGF-C的轉(zhuǎn)基因過度表達(dá)只引起淋巴管的增殖和肥大，而對(duì)血管沒有影響。與VEGF不同，VEGF-C不會(huì)由低氧癥引起(Ristimaki等，J.Biol.Chem.(1998)，273(14)，8413-8418)。
多數(shù)最近發(fā)現(xiàn)的VEGF-D與VEGF-C結(jié)構(gòu)非常相似。據(jù)報(bào)告VEGF-D結(jié)合并激活至少兩種VEGFRs，即VEGFR-3/Flt-4和KDR/VEGFR-2。他原本以成骨細(xì)胞的c-fos可誘導(dǎo)的促細(xì)胞分裂劑形式克隆，并最主要表達(dá)在肺和皮膚的間質(zhì)細(xì)胞中(Achen等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(2)，548-553及其中所引用的文獻(xiàn))。
正如VEGF，已有人聲稱當(dāng)注射到皮膚組織內(nèi)時(shí)，VEGF-C和VEGF-D引起Miles檢測(cè)中的體內(nèi)血管滲透性的升高(PCT/US97/14696；WO98/07832，Witzenbichler等，出處同上)。這些配體在調(diào)節(jié)血管滲透性過高和有其表達(dá)的組織中內(nèi)皮反應(yīng)中的生理作用和有效性尚不清楚。
最近已報(bào)告了病毒編碼的、新型血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，VEGF-E(NZ-7VEGF)，其優(yōu)先利用KDR/Flk-1受體并具有強(qiáng)有絲分裂活性而沒有肝素-結(jié)合功能域(Meyer等，EMBO J.(1999)，18(2)，363-374；Ogawa等，J.Biol.Chem.(1998)，273(47)，31273-31282)。VEGF-E序列與哺乳動(dòng)物VEGF具有25％的同源性，并由副痘病毒Orf病毒(OV)編碼。此副痘病毒使綿羊和山羊并偶爾使人產(chǎn)生具有血管發(fā)生的傷害。VEGF-E是約20kDa的二聚體，其沒有基礎(chǔ)功能域，對(duì)肝素也不具親合力，但是具有存在于所有哺乳動(dòng)物VEGF中的特征性半胱氨酸結(jié)節(jié)方式(knot motif)，并令人驚奇地發(fā)現(xiàn)其具有類似于肝素結(jié)合VEGF-A的VEGF165異構(gòu)形式的效力和生物活性，即兩種因子都刺激組織因子(TF)的釋放、體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、趨化和發(fā)芽以及體內(nèi)血管發(fā)生。正如VEGF165，發(fā)現(xiàn)VEGF-E以高親合力與VEGF受體-2(KDR)結(jié)合，導(dǎo)致受體自身磷酸化和在游離的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度中產(chǎn)生二相性，但與VEGF165相反，VEGF-E不結(jié)合的VEGF受體-1(Flt-1)。
基于VEGF和VEGFRs的其它同系物的發(fā)現(xiàn)及配體和受體雜二聚作用的先例，這些VEGF同系物的作用可以涉及VEGF配體雜二聚體的形成、和/或受體的雜二聚作用、或者結(jié)合尚未發(fā)現(xiàn)的VEGFR(Witzenbichler等，出處同上)。另外，最近的報(bào)告表明神經(jīng)纖維素-1(Migdal等，出處同上)或VEGFR-3/Flt-4(Witzenbichler等，出處同上)，或KDR/VEGFR-2以外的受體可以涉及血管滲透性的誘發(fā)(Stacker，S.A.，Vitali，A.，Domagala，T.，Nice，E.和Wilks，A.F.，“Angiogenesis and Cancer”Conference，Amer.Assoc.Cancer Res.，1998年1月，Orlando，F(xiàn)L；Williams，Diabetelogia40S 118-120(1997))。
Tie-2(TEK)是最近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮細(xì)胞特異性受體酪氨酸激酶的一員，其涉及重要的血管發(fā)生過程，如血管分枝、發(fā)芽、改型、成熟和穩(wěn)定。Tie-2是第一種哺乳動(dòng)物受體酪氨酸激酶，其激動(dòng)劑配體(一種或多種)(例如，for which both agonist ligand(s)(例如，血管生成素(Angiopoietin)1(“Ang1”)，其刺激受體自身磷酸化和信號(hào)傳導(dǎo))，及拮抗劑配體(一種或多種)(例如，血管生成素2(“Ang2”))，二者都已得到鑒定。Tie-2及其配體表達(dá)的剔除和轉(zhuǎn)基因操作表明了對(duì)Tie-2信號(hào)的嚴(yán)格的空間和時(shí)間控制是新脈管系統(tǒng)的適當(dāng)發(fā)育所必需的。通用的模型表明Ang1配體對(duì)Tie-2激酶的刺激直接涉及心血管的分枝、發(fā)芽和長(zhǎng)出，而周皮內(nèi)皮支撐細(xì)胞的募集和相互作用在維持血管完整性和誘導(dǎo)靜止中是重要的。對(duì)Tie-2缺乏Ang1刺激或用Ang2抑制Tie-2自身磷酸化，其在血管退化位點(diǎn)以高水平產(chǎn)生，可以引起血管結(jié)構(gòu)和基質(zhì)聯(lián)系的喪失，這導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞死亡，特別是在生長(zhǎng)/存活刺激物不存在時(shí)。但是，由于最近報(bào)告的至少兩種其它Tie-2配體(Ang3和Ang4)，且已表明多種激動(dòng)性或拮抗性血管生成素的雜低聚化的能力會(huì)因此修飾它們的活性，這樣情況變得更加復(fù)雜。靶向Tie-2配體-受體相互作用作為抗血管生成治療手段便倍受冷落，而激酶抑制策略成為優(yōu)選。
Tie-2的可溶性細(xì)胞外功能域(“ExTek”)可以破壞乳腺癌異種移植和肺轉(zhuǎn)移模型中腫瘤脈管系統(tǒng)的建立以及腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的眼新血管生成。由于腺病毒感染，嚙齒類中可以在7-10天內(nèi)造成體內(nèi)mg/ml水平的ExTek的產(chǎn)生，而沒有副作用。這些結(jié)果暗示在正常健康的動(dòng)物中破壞Tie-2信號(hào)路徑可以很好地被耐受。對(duì)ExTek的這些Tie-2抑制性反應(yīng)可以是配體(一種或多種)的隨之而來的螯合作用和/或全長(zhǎng)Tie-2非生產(chǎn)性雜二聚體的產(chǎn)生。
最近，在人關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)的血管滑膜關(guān)節(jié)翳內(nèi)已發(fā)現(xiàn)了Tie-2表達(dá)的顯著上調(diào)，這與其在不適當(dāng)?shù)男卵苄纬芍械慕巧恢?。此發(fā)現(xiàn)暗示在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展中Tie-2起了一定作用。已確定產(chǎn)生Tie-2基本活化形式的點(diǎn)突變與人靜脈畸形病有關(guān)。因此，Tie-2抑制劑被用于治療這些疾病，并用于不適當(dāng)新血管生成的其它情形中。
非受體酪氨酸激酶非受體酪氨酸激酶代表了缺乏細(xì)胞外和跨膜序列的細(xì)胞酶的集合。目前，已確定了24種以上的具體非受體酪氨酸激酶，其中包括11種亞類(Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，Zap70，F(xiàn)es/Fps，F(xiàn)ak，Jak，Ack和LIMK)。目前，非受體酪氨酸激酶的Src亞類由最多的PTK成員組成，并包括包括Src、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk。該Src亞類已與瘤形成和免疫反應(yīng)建立了聯(lián)系。對(duì)非受體酪氨酸激酶的更詳細(xì)的討論由Bohlen，1993，Oncogene 82025-2031提供，將其引入作為參考。
已發(fā)現(xiàn)很多酪氨酸激酶，不論是RTK還是非受體酪氨酸激酶，參與了涉及多種致病性癥狀的細(xì)胞信號(hào)路徑，包括癌癥、牛皮癬及其它過度增殖性紊亂或過度免疫反應(yīng)。
調(diào)節(jié)PTKs的化合物的開發(fā)考慮到PTKs對(duì)細(xì)胞增殖、與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病和紊亂的控制、調(diào)節(jié)和調(diào)制的臆測(cè)重要性，人們?yōu)榱舜_定受體和非受體酪氨酸激酶“抑制劑”進(jìn)行了很多嘗試，其中使用了多種手段，包括使用突變配體(美國(guó)專利No.4,966,849)、可溶性受體和抗體(WO 94/10202；Kendall & Thomas，1994，Proc.Natl.Acad.Sci 9010705-09；Kim等，1993，Nature 362841-844)、RNA配體(Jellinek等，Biochemistry 3310450-56；Takano等，1993，Mol.Bio.Cell4358A；Kinsella等1992，Exp.Cell Res.19956-62；Wright等，1992，J.Cellular Phys.152448-57)和酪氨酸激酶抑制劑(WO 94/03427；WO 92/21660；WO 91/15495；WO94/14808；美國(guó)專利No.5,330,992；Mariani等，1994，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.352268)。
最近，人們?cè)噲D識(shí)別作為酪氨酸激酶抑制劑的小分子。例如，雙單環(huán)、雙環(huán)或雜環(huán)芳基化合物(PCT WO 92/20642)和亞乙烯基-吖吲哚衍生物(PCT WO 94/14808)普遍被描述為酪氨酸激酶抑制劑。苯乙烯基化合物(美國(guó)專利No.5,217,999)、苯乙烯基-取代的吡啶基化合物(美國(guó)專利No.5,302,606)、某些喹唑啉衍生物(EP申請(qǐng)No.0 566 266A1；Expert Opin.Ther.Pat.(1998)，8(4)475-478)、硒代吲哚和硒化物(PCT WO 94/03427)、三環(huán)多羥基化合物(PCT WO 92/21660)和芐基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)已被描述為用作酪氨酸激酶抑制劑用于治療癌癥的化合物。苯氨基噌啉(PCT WO 97/34876)和喹唑啉衍生物化合物(PCT WO97/22596；PCT WO97/42187)已被描述為血管發(fā)生和血管滲透性的抑制劑。
此外，人們嘗試確定作為絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑的小分子。例如，已描述了雙(吲哚基馬來酰亞胺)化合物抑制特定PKC絲氨酸/蘇氨酸激酶異構(gòu)形式，這些異構(gòu)形式的信號(hào)傳遞功能與VEGF相關(guān)的疾病中的血管滲透性有關(guān)(PCT WO97/40830；PCT WO 97/40831)。Plk-1激酶抑制劑Plk-1是絲氨酸/蘇氨酸激酶，其是細(xì)胞循環(huán)過程的重要調(diào)節(jié)劑。其在有絲分裂紡錘體的裝配和動(dòng)力功能中扮演關(guān)鍵角色。業(yè)已表明Plk-1和相關(guān)激酶緊密涉及其它細(xì)胞循環(huán)調(diào)節(jié)劑如細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的活化和滅活。Plk-1的高水平表達(dá)與細(xì)胞增殖活性有關(guān)。其常常發(fā)現(xiàn)于不同起因的惡性腫瘤中。預(yù)計(jì)Plk-1的抑制劑通過中斷涉及有絲分裂紡錘體和不適當(dāng)活化的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的過程來阻斷癌細(xì)胞增殖。Cdc2/細(xì)胞周期蛋白B激酶抑制劑(Cdc2也稱為cdkl)Cdc2/細(xì)胞周期蛋白B是屬于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cdks)類的其它絲氨酸/蘇氨酸激酶。這些酶涉及細(xì)胞周期過程的不同相之間的臨界過渡。據(jù)信作為癌癥的證明的失控的細(xì)胞增殖，依賴于這些細(xì)胞中的升高的cdk活性。cdc2/細(xì)胞周期蛋白B激酶抑制劑對(duì)癌細(xì)胞中升高的cdk活性的抑制，可以抑制增殖，并可以恢復(fù)對(duì)細(xì)胞周期過程的正?？刂啤?br> CDK活化的調(diào)節(jié)很復(fù)雜，但是需要將CDK與細(xì)胞周期蛋白類的調(diào)節(jié)性亞單元的一員相聯(lián)系(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992))。水平更進(jìn)一步的調(diào)節(jié)通過激活或滅活CDK亞單元的磷酸化作用而得以發(fā)生(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Ducommun等，EMBO Journal，103311-3319(1991)；Gautier等，Nature 339626-629(1989)；Gould和Nurse，Nature，34239-45(1989)；Krek和Nigg，EMBO Journal，103331-3341(1991)；Solomon等，Cell，631013-1024(1990))。不同細(xì)胞周期蛋白/CDK復(fù)合物的協(xié)調(diào)激活和滅活是細(xì)胞周期的正常過程所需要的(Pines，Trendsin Biochemical Sciences，18195-197(1993)；Sherr，Cell，731059-1065(1993))。臨界G1-S和G2-M轉(zhuǎn)變都由不同細(xì)胞周期蛋白/CDK活性的激活來控制。在G1中，細(xì)胞周期蛋白D/CDK4和細(xì)胞周期蛋白E/CDK2都被認(rèn)為能介導(dǎo)S期的開始(Matsushima等，Molecular & Cellular Biology，142066-2076(1994)；Ohtsubo和Roberts，Science，2591908-1912(1993)；Quelle等，Genes & Development，71559-1571(1993)；Resnitzky等，Molecular & Cellular Biology，141669-1679(1994))。通過S期的過程需要細(xì)胞周期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedings of the National Academy of ScienceUSA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & Biophysical ResearchCommunications，1821144-1154(1992))，其中細(xì)胞周期蛋白A/cdc2(CDK1)和細(xì)胞周期蛋白B/cdc2的激活是中期的開始所需要的(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedings of the National Academyof Science USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & BiophysicalResearch Communications，1821144-1154(1992))。因此，人們并不奇怪，CDK調(diào)節(jié)的失控是過度增殖性疾病和癌癥中時(shí)常發(fā)生的事件(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4144-148(1992)；Lees，Current Opinion in Cell Biology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))。
參與了介導(dǎo)和維持疾病狀態(tài)的激酶的抑制劑代表了對(duì)這些疾病的新的治療方法。這些激酶的實(shí)例包括但不限于(1)抑制癌癥中的c-Src(Brickell，Critical Reviews in Oneogenesis，3401-406(1992)；Courtneidge，Seminars in Cancer Biology，5236-246(1994)、抑制raf(Powis，Pharmacology & Therapeutics，6257-95(1994))和抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)1、2和4(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4144148(1992)；Lees，Current Opinion in Cell Biology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))，(2)抑制再狹窄中的CDK2或PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proceedings of the National Academyof Science USA，922258-2262(1995))，(3)抑制早老性癡呆中的CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，Journal of Biochemistry(Tokyo)，117741-749(1995)；Aplin等，Journal of Neurochemistry，67699-707(1996)，(4)抑制骨質(zhì)疏松中的c-Src激酶(Tanaka等，Nature，383528-531(1996)，(5)抑制II型糖尿病中的GSK-3激酶(Borthwick等，Biochemical & Biophysical ResearchCommunications，210738-745(1995)，(6)抑制炎癥中的p38激酶(Badger等，The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，2791453-1461(1996))，(7)抑制涉及血管發(fā)生的疾病中的VEGF-R 1-3和TIE-1及-2激酶(Shawver等，DrugDiscovery Today，250-63(1997))，(8)抑制病毒感染中的UL97激酶(He等，Journal of Virology，71405-411(1997))，(9)抑制骨和造血疾病中的CSF-1R激酶(Myers等，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，7421-424(1997)，以及(10)抑制自身免疫性疾病和移植排斥中的Lck激酶(Myers等，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，7417-420(1997))。
在所述激酶并未失調(diào)但是其是維持該疾病要素時(shí)，某些激酶的抑制劑還可能用于治療這些疾病。在此情況下，對(duì)激酶活性的抑制將是為了治療或減輕這些疾病。例如，很多病毒，如人乳頭狀瘤病毒，中斷細(xì)胞周期并使細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)的S期(Vousden，F(xiàn)ASEB Journal，78720879(1993))。通過抑制必要的S期起始活性如CDK2來阻止在病毒感染后細(xì)胞進(jìn)入DNA合成階段，可以通過阻止病毒復(fù)制來中斷病毒生命周期。這一相同的原理可以用來保護(hù)機(jī)體的正常細(xì)胞免受周期特異性化療劑的毒性(Stone等，Cancer Research，563199-3202(1996)；Kohn等，Journal of Cellular Biochemistry，5444-452(1994))。抑制CDKs 2或4將阻止進(jìn)入正常細(xì)胞的周期并限制在S期、G2或有絲分裂期起作用的細(xì)胞毒素的毒性。此外，還表明CDK2/細(xì)胞周期蛋白E活性調(diào)節(jié)NF-kB。抑制CDK2活性刺激NF-kB依賴性基因表達(dá)，這是通過與p300輔激活蛋白作用階段的事件(Perkins等，Science，275523-527(1997))。NF-kB調(diào)節(jié)牽涉炎性反應(yīng)的基因(如造血生長(zhǎng)因子、趨化因子和白細(xì)胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，Annual Review of Immunology，12141-179(1994))并可能涉及細(xì)胞內(nèi)編程性細(xì)胞死亡信號(hào)的抑制(Beg and Baltimore，Science，274782-784(1996)；Wang等，Science，274784-787(1996)；Van Antwerp等，Science，274787-789(1996))。因此，抑制CDK2可以抑制細(xì)胞毒藥物通過涉及NF-kB的機(jī)理引起的編程性細(xì)胞死亡。因此，這表明抑制CDK2活性還在其中NF-kB的調(diào)節(jié)在疾病的病因中起一定作用的其它情況中具有應(yīng)用價(jià)值?？梢詮恼婢腥局辛信e其它實(shí)例曲霉病是免疫遭到危害的患者中的常見感染(Armstrong，Clinical Infectious Diseases，161-7(1993))。對(duì)曲霉屬激酶Cdc2/CDC28或Nim A的抑制(Osmani等，EMBO Journal，102669-2679(1991)；Osmani等，Cell，67283-291(1991))可以引起該真菌的抑制或死亡，以便改進(jìn)這些感染患者的治療結(jié)果。
因此需要對(duì)有效的小化合物進(jìn)行鑒定，這些化合物通過調(diào)節(jié)受體和非受體酪氨酸及絲氨酸/蘇氨酸激酶的活性，來調(diào)節(jié)和調(diào)制反?；虍惓５募?xì)胞增殖、分化或代謝，特異性地抑制信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞增殖。具體地講，對(duì)特異性抑制酪氨酸激酶功能的方法和化合物的鑒定將是有利的，該酪氨酸激酶是血管生成(antiogenic)過程或血管滲透性過高的形成所必需的，血管滲透性過高導(dǎo)致水腫、腹水、滲漏、流出和大分子溢出及基質(zhì)沉積以及相關(guān)的紊亂。發(fā)明概述本發(fā)明提供了式I的化合物， 其外消旋-非對(duì)映異構(gòu)混合物、旋光異構(gòu)體、藥用鹽、前藥或生物活性代謝物，其中G是 其中Z100是 或被R1任選地取代的基團(tuán)，其選自如下環(huán)烷基、萘基、四氫萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、 噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氫苯并呋喃基、吲哚基、異噁唑基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氫吲哚基、吲唑基、苯并異噻唑基、吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并噁唑基、嘧啶并噻唑基和苯并咪唑基；Z110是共價(jià)鍵，或是任選地被取代的(C1-C6)，其任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代烷基、CN、OH、鹵素、NO2、COOH、被取代或未被取代的氨基和被取代或未被取代的苯基；Z111是共價(jià)鍵，任選地被取代的(C1-C6)或任選地被取代的-(CH2)n-環(huán)烷基-(CH2)n-；其中此任選地被取代的基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代烷基、CN、OH、鹵素，NO2、COOH、被取代或未被取代的氨基和被取代或未被取代的苯基；Ra和R1各表示一個(gè)或多個(gè)取代基，其每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下氫原子，鹵素，-CN，-NO2，-C(O)OH，-C(O)H，-OH，-C(O)O-烷基，被取代或未被取代的甲酰氨基，四唑基，三氟甲基羰基氨基，三氟甲基磺酰氨基，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的鏈烯基，被取代或未被取代的芳基氧基，被取代或未被取代的雜芳基氧基，被取代或未被取代的芳基烷基，被取代或未被取代的鏈炔基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的氨基烷基，被取代或未被取代的酰氨基，被取代或未被取代的雜芳硫基，被取代或未被取代的芳硫基，-Z105-C(O)N(R)2，-Z105-N(R)-C(O)-Z200，-Z105-N(R)-S(O)2-Z200，-Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200，Rc和CH2ORc；其中Rc每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，-CH2-NRdRe，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是共價(jià)鍵或(C4-C6)；Z200每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是被取代或未被取代的(C1-C6)，被取代或未被取代的苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；Rd和Re每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H，烷基，烷?；騍O2-烷基；或Rd、Re和它們所連接的氮原子一起形成5或6員雜環(huán)；t每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是2至6的整數(shù)；W每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是化學(xué)鍵或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H或烷基；或者R1是被取代或未被取代的與環(huán)2稠合的碳環(huán)或雜環(huán)；R3是氫原子，羥基，被取代或未被取代的烷基或者被取代的或未被取代的烷氧基；A是-O-；-S-；-S(O)p-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)-；-CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-；-CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-；-N(R)C(O)-；-N(R)S(O)p；-OC(O)N(R)-；-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-，-N(R)C(O)O-；-N(R)-(CH2)n+1-C(O)-，-S(O)pN(R)-；-O-(CR2)n+1-C(O)-，-O-(CR2)n+1-O-，-N(C(O)R)S(O)p-；-N(R)S(O)pN(R)-；-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-，-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)pN(R)C(O)-；-OS(O)pN(R)-；-N(R)S(O)pO-；-N(R)S(O)pC(O)-；-SOpN(C(O)R)-；-N(R)SOpN(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(ORb)O-；-N(R)P(ORb)-；-N(R)P(O)(ORb)O-；-N(R)P(O)(ORb)-；-N(C(O)R)P(ORb)O-；-N(C(O)R)P(ORb)-；-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或-N(C(O)R)P(ORb)-；其中R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基烷基或者被取代的或未被取代的芳基；Rb每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基烷基、被取代或未被取代的環(huán)烷基或者被取代的或未被取代的芳基；p是1或2；或在含磷的基團(tuán)中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6員雜環(huán)；或A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成被取代或未被取代的與環(huán)1稠合的5或6員雜環(huán)；R2是-Z101-Z102；Z101是共價(jià)鍵，-(C1-C6)-，-(C1-C6)-O-，-(C1-C6)-C(O)-，-(C1-C6)-C(O)O-，-(C1-C6)-C(O)-NH-，-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或被取代或未被取代的苯基；Z102是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的環(huán)烷基，被取代或未被取代的飽和或不飽和的雜環(huán)基團(tuán)，或被取代或未被取代的飽和或不飽和的雜雙環(huán)基團(tuán)；所述被取代的雜環(huán)或者被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自羥基，氰基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代或未被取代的磺酰氨基，被取代或未被取代的脲基，被取代或未被取代的甲酰氨基；被取代或未被取代的氨基，氧代基團(tuán)，飽和的、不飽和的或芳族的被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)，該雜環(huán)中含有一個(gè)或多個(gè)氮原子、一個(gè)或多個(gè)氧原子或二者兼而有之；其中所述氮原子獨(dú)立地任選地被如下基團(tuán)取代被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；或R2是式B-E，其中B是被取代或未被取代的環(huán)烷基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的氨基烷基磺?；?，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代或未被取代的氨基烷基羰基，羥基，被取代或未被取代的亞烷基，被取代或未被取代的氨基烷基，被取代或未被取代的亞烷基羰基或者被取代的或未被取代的氨基烷基羰基；且E是被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基羰基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基磺?；?，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基烷基，被取代或未被取代的雜芳基，被取代或未被取代的雜芳基羰基，被取代或未被取代的雜芳基磺酰基，被取代或未被取代的雜芳基烷基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基羰基氨基，被取代或未被取代的雜芳基羰基氨基或者被取代的或未被取代的芳基；a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自獨(dú)立地選自CRa和N，其條件是D1、G1、J1、L1和M1中至少兩個(gè)是CRa；或a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一是CRa，且其余獨(dú)立地選自CRa和N，其中Ra定義如上；b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自獨(dú)立地選自CRa和N，其條件是D2、G2、J2、L2和M2中至少兩個(gè)是CRa；或b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一是CRa，且其余獨(dú)立地選自CRa和N，其中Ra定義如上；且n每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是0至6的整數(shù)。
優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R1每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，-CH2NRdRc，叔丁基，吡啶基，被取代或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代或未被取代的苯磺?；?，被取代或未被取代的苯氧基，被取代或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，羧基，被取代或未被取代的四唑基及被取代或未被取代的苯乙烯基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；Ra每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，被取代或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代或未被取代的苯磺?；?，被取代或未被取代的苯氧基，被取代或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，羧基，被取代或未被取代的四唑基及被取代或未被取代的苯乙烯基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中n是1、2或3。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3，且
Rg是H或-(CH2)pN(R4)R5，其中p是2至6的整數(shù)，而R4和R5各自獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的部分，其選自烷基、烷氧基、氨基、芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基，或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3，a和b各自獨(dú)立地是0至6的整數(shù)；Q是-OR6或-NR4R5；各R4和R5獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q，-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基、氨基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7員被取代或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中n是1、2或3；且
R4是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-)-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3；R5是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自如下共價(jià)鍵、-C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-、-(CH2)qC(O)-、-C(O)(CH2)q-和-(CH2)qS(O)r-，其中(CH2)q-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-、-(CH2)qC(O)-、-C(O)(CH2)q-和-(CH2)qS(O)r的烷基部分任選地被下列基團(tuán)取代鹵素、羥基或烷基；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的烷氧基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或Y和Z一起是天然或非天然氨基酸，其胺的氮原子上可以單或二烷基化；且R6表示一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自氫原子、羥基、氧代基團(tuán)、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜環(huán)基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基、被取代或未被取代的芳基羰基、被取代或未被取代的雜環(huán)基羰基、被取代或未被取代的氨基烷基和被取代或未被取代的芳基烷基；其條件是與氮原子相鄰的碳原子不被羥基取代。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中R4是H、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中m是1至6的整數(shù)；且R4和R5各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)，-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7員被取代或未被取代的雜環(huán)或者被取代的或未被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中n是0至4的整數(shù)；r是0而m是1至6的整數(shù)；或r是1而m是0至6的整數(shù)；Q是-OR6或-NR4R5；各R4和R5獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式
n是0至4的整數(shù)；m是0至6的整數(shù)；R4是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0，1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；或R7和R9中至少一個(gè)是氰基、CONHR15、COOR15、CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、(CH2)p-、-S(O)2-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R15、R16與氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或被取代或未被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)；X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且t是0或1。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán) 其中R19和R20各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基；或R19和R20一起是一個(gè)氧原子；R21和R22各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自如下-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0，1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；m是1至6的整數(shù)；且n是0至6的整數(shù)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中
m是1至6的整數(shù)；且R23是CH2OH、NRR′、C(O)NRR′或COOR，其中R和R′各自獨(dú)立地是氫原子或者被取代的或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R24是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代或未被取代的芳烷基、羧基、氰基、C(O)OR25、CH2OR25、CH2NR26R27或C(O)NHR26，其中R25是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳烷基、被取代或未被取代的雜環(huán)基或者被取代或未被取代的雜環(huán)芳基；且R26和R27各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R26、R27和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是下式 其中T是C(O)、S、SO、SO2、CHOR或NR，其中R是氫原子或被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且n是0、1或2。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各自獨(dú)立地是被取代或未被取代的羧基烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的烷基磺?；?、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的氰基烷基；或R28和R29與氮原子一起形成5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14中至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；或R7和R9的至少一個(gè)是氰基、CONHR15、COOR15、CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自如下-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R15、R16和氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)；X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R11或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且t是0或1。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R19和R20各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基；或R19和R20一起是一個(gè)氧原子；R21和R22各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；m是1至6的整數(shù)；且n是0至6的整數(shù)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中m是1至6的整數(shù)；且
R23是CH2OH、NRR′、C(O)NRR′或COOR，其中R是氫原子或被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R24是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基、羧基、氰基、C(O)OR25、CH2OR25、CH2NR26R27或C(O)NHR26，其中R25是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳基烷基、被取代或未被取代的雜環(huán)基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)芳基；且R26和R27各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R26、R27和氮原子一起形成3、4、5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0或1；
T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各自獨(dú)立地是被取代或未被取代的羧基烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的烷基磺酰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的氰基烷基；或R28和R29與氮原子一起形成5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是式N(R30)R31，其中R30和R31各自獨(dú)立地是氫原子、烷基、烷氧基羰基、烷氧基烷基、羥基烷基、氨基羰基、氰基、烷基羰基或芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中各X獨(dú)立地是CH或N；且R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0或1；T是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的芳基烷基、C(O)NH2、-C(NH)NH2、-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0、1或2；且R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代或未被取代的烷基、芳基、芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；g是0或1；且R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中R32是氫原子、氰基、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的羥基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基，烷基羰基、被取代或未被取代的硫代烷氧基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且R33是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的烷氧基羰基、被取代或未被取代的烷氧基烷基、被取代或未被取代的氨基羰基、全鹵代烷基、被取代或未被取代的鏈烯基、被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中m是0或1；R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40和R41各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R34和R35；R36；和R37；R38和R39；或R40和R41中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R42是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R42是下式 其中u是0或1；R43、R44、R45、R46、R47、R48、R49和R50各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R43和R44；R45和R46；R47和R48；或R49和R50中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R51是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是下式 其中h、i、j、k和l獨(dú)立地是0或1；R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、Rg和Rh各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R52和R53；R54和R55；R56和R57；或R58和R59中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R60是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R60是下式 其中v是0或1；R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67和R68各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或R61和R62；R63和R64；R65和R66；且R67和R68中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且
R69是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-1，其中V選自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氨基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是Z101-Z102，其中Z101是共價(jià)鍵、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)-C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或被取代的苯基；且Z102是氫原子、被取代或未被取代的烷基或被取代或未被取代的飽和或不飽和的雜環(huán)基團(tuán)。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z101選自-CH2-C(O)O-、-CH2-C(O)-、-CH2-C(O)-NH-、-CH2-C(O)-N(Me)-、-CH(Me)-C(O)O-、(CH2)3-C(O)O-、-CH(Me)-C(O)-NH-和-(CH2)3-C(O)-NH-；且Z102選自如下氫原子、甲基、乙基、N，N-二甲基氨基乙基、N，N-二乙基氨基乙基、2-苯基-2-羥基乙基、4-嗎啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基和2-羥基甲基吡咯烷基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 或 其中Z100是被取代或未被取代的苯并噁唑基或被取代或未被取代的苯并噻唑基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 或 其中只有一個(gè)Ra且其是H或F。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z101是共價(jià)鍵；且Z102是任選地被取代的吡啶基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中R3是H；R2是環(huán)戊基；且G是 另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z110是氫原子；A是O；且Z100是任選地被取代的苯基、呋喃基或噻吩基，其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自如下F、COOH、NO2、-OMe、COOMe、OCF3和CF3。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z110是氫原子；A是-O-、-O-(CR2)n-C(O)-或-O-(CR2)n-O-；n每次出現(xiàn)時(shí)是0至3；Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自環(huán)己基、苯基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、異噁唑基和哌啶基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代烷基、烷氧基、鹵素、羥基和烷氧基羰基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R2是任選地被取代的基團(tuán)，其選自環(huán)丁基和環(huán)己基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R2任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代羥基，烷基、羥基烷基、羧基烷基和苯基烷氧基烷基。
另一種優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是4-苯氧基苯基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中m是2；a是0；R6是H；b是1或2；且R4和R5各是氫原子。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中m是0、1或2；R6是氫原子；R5是H或Y-Z；其中Y是共價(jià)鍵，-C(O)-、-(CH2)qO-、-(CH2)q、-(CH2)qC(O)-或-C(O)(CH2)q，其中-(CH2)qO-、-(CH2)p-、-(CH2)qC(O)-和-C(O)(CH2)q的烷基部分任選地被下列基團(tuán)取代鹵素、羥基或烷基；且Z是氫原子、烷基、任選地被取代的烷基、烷氧基烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的雜芳基、或任選地被取代的氨基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z是氫原子、甲基、乙基、羥基甲基、甲氧基乙基、N-甲基-哌啶基、(叔丁氧基羰基)(羥基)哌啶基、羥基哌啶基、(羥基甲基)哌啶基、(羥基)(甲基)哌啶基、4-嗎啉基、(甲氧基乙基)哌嗪基、甲基哌嗪基、4-哌啶基哌啶基、咪唑基、甲基咪唑基、N-甲基氨基、N，N-二甲基氨基、N-異丙基氨基、N，N-二乙基氨基、2，3-二羥基丙基氨基、2-羥基乙基氨基、3-羥基丙基氨基、甲氧基乙基氨基、乙氧基羰基甲基氨基、苯基甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基氨基、 呋喃基甲基氨基、哌啶基乙基氨基、N-(2-N，N-二甲基氨基乙基)-N-甲基氨基、2-N，N-二甲基氨基乙基氨基、N-甲基-N-(N-甲基哌啶-4-基)氨基、2-(4-嗎啉基)-乙基氨基、3-(4-嗎啉基)-丙基氨基、3-咪唑基丙基氨基或3-(2-氧代吡咯烷基)丙基氨基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中m是2；R5是Y-Z；Y是-C(O)-；且Z是 其中n是0、1、2或3。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是氫原子或甲基；G是 A選自O(shè)、-N(R)-和-N(R)C(O)-；Z111是-(CH2)n-環(huán)烷基-(CH2)n-；R是氫原子或烷基；n是0至5；Ra是一個(gè)或多個(gè)各自獨(dú)立地選自H、OH、F、Cl、甲基和甲氧基的取代基；R1是一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自H、CN、F、CF3、OCF3、甲基、甲氧基和任選地被取代的氨基；且其中所述氨基任選地被一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代，其各自獨(dú)立地選自烷基、烷氧基烷基、苯基、被取代的苯基及任選地被取代的雜芳基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R1是4-甲基苯硫基或2-吡啶硫基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 其中Z100選自苯并[b]噻吩基、呋喃基和噻吩基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Ra是烷氧基；A是-NH-C(O)-；且在A和Z100之間存在一個(gè)共價(jià)鍵。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 其中A選自-N(R)-C(O)-N(R)-、-(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-、-N(R)-和-N(R)-SO2-；R是氫原子或烷基；Z100是 吡啶基，噻唑基，呋喃基，苯并呋喃基或噁唑基；X是S、O或NR′，其中R′每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H或Me；Ra是一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自H和F；且R1是一個(gè)或多個(gè)取代基，各自獨(dú)立地選自H、F、Cl、Br、NO2、CF3、烷基、烷氧基和烷氧基羰基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基；m是1、2或3；R5是Y-Z，其中Y是-C(O)O-、-C(O)-或-C(O)-(CH2)p-；且Z是氨基烷基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基或羥基烷基氨基烷基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基；G是 其中n是0至3；Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自吲哚基、茚基、甲基茚基、甲基吲哚基、二甲基氨基苯基、苯基、環(huán)己基和苯并呋喃基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯基、咪唑基、吲哚基、呋喃基、苯并呋喃基和2，3-二氫苯并呋喃基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基自獨(dú)立地選自如下F、Cl、CN、任選地被取代的烷基、-O-(任選地被取代的烷基)、-COOH、-Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200和-Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200；Z105是共價(jià)鍵或(C1-C6)；Z200是任選地被取代的基團(tuán)，其選自(C1-C6)、苯基和-(C1-C6)-苯基；Z110和Z111各自獨(dú)立的是共價(jià)鍵或(C1-C3)基團(tuán)，其任選地被如下基團(tuán)取代烷基、羥基、COOH、CN或苯基；且A是O、-N(R)-C(O)-N(R)-、-N(R)-C(O)-O-、-N(R)-或-N(R)-C(O)-，其中R是H或烷基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 其中Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯并噁唑基、苯并噻唑基和苯并咪唑基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基；A是-NH-；只有一個(gè)Ra且其是H或F；且Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自烷基、鹵素、CF3和烷氧基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯基，吡咯基，吡啶基，苯并咪唑基，萘基和 其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自如下F、Cl、Br、NO2、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、CN、任選地被取代的烷基、-O-(任選地被取代的烷基)和苯基；
Z110和Z111每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是(C0-C3)，其任選地被任選地被取代的苯基取代；且A是-N(R)-C(O)-N(R)-、-N(R)-S(O)2-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-或-N(R)-C(O)-O-。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基和只有一個(gè)Ra且其是F。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯基、異噁唑基、四氫萘基、呋喃基、苯并呋喃基、吡啶基和吲哚基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自F、CN、NO2、-C(O)H、-CONH2、-NHSO2CF3、任選地被取代的烷基、任選地被取代的雜芳基和-O-(任選地被取代的烷基)；Z110和Z111各自獨(dú)立地是任選地被取代的(C0-C3)；且A是O、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)、-C(O)-N(R)-、-N(R)-C(O)-O-、-N(R)-C(O)-或-N(R)-。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中R4是甲基；Ra是H或甲氧基；且Z110和Z111各自是未被取代的。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 其中R是H或低級(jí)烷基而n每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是1 to 6。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中Z100是被取代或未被取代的苯基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是 其中Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯并噁唑基、苯并噻唑基和苯并咪唑基。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中n是2；R6是H；m是1；r是1；且R4和R5各自是氫原子。
另一種更優(yōu)選的式(I)化合物是，其中在任何適宜的上述優(yōu)選化合物中G是4-苯氧基苯基。
在本發(fā)明的另一方面中，其涉及抑制患者的一種或多種蛋白激酶活性的方法，其中包括給所述患者使用治療有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。優(yōu)選的方法是其中所述蛋白激酶選自如下KDR、FGFR-1、PDGFRβ、PDGFRα、IGF-1R、c-Met、Flt-1、Flt-4、TIE-2、TIE-1、Lck、Src、fyn、Lyn、Blk、hck、fgr和yes。另一個(gè)優(yōu)選的方法是其中所述蛋白激酶是蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。更優(yōu)選的方法是其中所述蛋白激酶是TIE-2，而另一種更優(yōu)選的方法是其中所述蛋白激酶活性涉及T細(xì)胞活化、B細(xì)胞活化、肥大細(xì)胞脫粒、單核細(xì)胞活化、炎性反應(yīng)的加強(qiáng)或其聯(lián)合。
本發(fā)明的另一個(gè)方面中，涉及影響患者的過度增殖性紊亂的方法，其中包括給所述患者使用治療有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，涉及影響患者的血管生成的方法，其中包括給所述患者使用治療有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。優(yōu)選的方法是其中所述化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物是以促進(jìn)血管發(fā)生或血管生成的有效量給藥的。更優(yōu)選的方法是其中所述患者患有貧血，局部出血，梗塞，移植排斥，創(chuàng)傷，壞疽或壞死。
在本發(fā)明的另一方面中，涉及治療患者的一種或多種潰瘍的方法，包括給所述患者使用治療有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。優(yōu)選的方法是其中所述一種或多種潰瘍是由細(xì)菌或真菌感染引起的；或所述一種或多種潰瘍是莫倫氏潰瘍；或所述一種或多種潰瘍是潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀。
在本發(fā)明的另一方面中，涉及治療患者的病癥的方法，包括給所述患者使用治療有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物，其中所述病癥是眼部病癥，心血管病，癌癥，Crow-Fukase(POEMS)綜合征，糖尿病，鐮刀細(xì)胞貧血病，慢性炎癥，系統(tǒng)性狼瘡，腎小球性腎炎，滑膜炎，炎性腸疾病，克羅恩氏病，腎小球性腎炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，移植物排斥，萊姆病，敗血癥，von Hippel Lindau病，類天皰瘡，牛皮癬，佩吉特氏病，多囊性腎病，纖維變性疾病，肉樣瘤病，肝硬化，甲狀腺炎，粘滯性過高綜合征，Osler-Weber-Rendu疾病，慢性梗塞性肺病，哮喘或燒傷、外傷、輻射、中風(fēng)、低氧癥、局部出血后水腫，卵巢高刺激性綜合征，子癇前期，月經(jīng)過多，子宮內(nèi)膜異位，或單純性皰疹、帶狀皰疹、人類免疫缺陷病毒、副痘病毒、原生動(dòng)物或弓形體病引起的感染。
優(yōu)選的方法是其中所述眼部病癥是眼或視網(wǎng)膜黃斑水腫，眼新血管病，鞏膜炎，光角膜切開術(shù)，眼色素層炎，玻璃體炎，近視，眼凹，慢性視網(wǎng)膜脫離，激光治療后并發(fā)癥，結(jié)膜炎，遺傳性黃斑變性，Eales病，視網(wǎng)膜病或視網(wǎng)膜黃斑變性；所述心血管病是動(dòng)脈粥樣硬化，再狹窄，局部出血/再灌注損傷，血管閉塞或頸動(dòng)脈梗塞性疾??；所述癌癥是實(shí)體瘤，肉瘤，纖維肉瘤，骨瘤，黑素瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，成橫紋肌細(xì)胞肉瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，畸胎樣瘤，造血系統(tǒng)惡性腫瘤，Kaposi′s肉瘤，何杰金氏病，淋巴瘤，骨髓瘤，白血病或惡性腹水；且所述糖尿病病癥是胰島素依賴性糖尿病青光眼，糖尿病性視網(wǎng)膜病或微血管病。
在本發(fā)明的另一方面中，涉及降低患者生育力的方法，所述方法包括給所述患者使用有效量的式(I)的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物的步驟。
在本發(fā)明的另一方面中，涉及一種方法，其中所述式I的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物與原血管生成生長(zhǎng)因子聯(lián)合給藥。優(yōu)選的方法是其中所述原血管生成生長(zhǎng)因子選自VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、HGF、FGF-1、FGF-2、其衍生物及其抗獨(dú)特型抗體。發(fā)明詳述在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如上所述的式I化合物。在式I化合物的優(yōu)選基團(tuán)中取代基的含義給出如下。
優(yōu)選R1選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，被取代或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代或未被取代的苯磺酰基，被取代或未被取代的苯氧基，被取代或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，羧基，被取代的和未被取代的四唑基，被取代的和未被取代的苯乙烯基，被取代的和未被取代的芳硫基，被取代或未被取代的硫代烷氧基，被取代的和未被取代的雜芳硫基；CH2ORc，其中Rc是氫原子或者被取代的或未被取代的烷基或芳基；及W-(CH2)t-NRdRe，其中t是約1至約6的整數(shù)；W是化學(xué)鍵、O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf是H或烷基，而Rd和Re獨(dú)立地是H、烷基、烷?；騍O2-烷基；或Rd、Re和它們所連接的氮原子一起形成5或6員雜環(huán)。
優(yōu)選Ra選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，被取代或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代或未被取代的苯磺?；?，被取代或未被取代的苯氧基，被取代或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的硫代烷氧基，羧基，被取代的和未被取代的四唑基，被取代的和未取代的苯乙烯基，被取代的和未被取代的芳硫基，被取代的和未被取代的雜芳硫基；CH2ORc，其中Rc是氫原子或者被取代的或未被取代的烷基或芳基；且-W-(CH2)t-NRdRe，其中t是約1至約6的整數(shù)；W是化學(xué)鍵、O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf是H或烷基，而Rd和Re獨(dú)立地是H、烷基、烷?；騍O2-烷基；或Rd、Re和它們所連接的氮原子一起形成5或6員雜環(huán)。
式(I)的化合物可以以與藥用酸形成的鹽的形式存在。本發(fā)明包括這些鹽。此類鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽[例如(+)-酒石酸鹽、(-)-酒石酸鹽或其混合物，包括外消旋混合物]、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽，以及與氨基酸如谷氨酸形成的鹽。這些鹽可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。
具有酸性取代基的某些式(I)的化合物可以以與藥用堿形成的鹽的形式存在。本發(fā)明包括這樣的鹽。此類鹽的實(shí)例包括鈉鹽、鉀鹽、賴氨酸鹽和精氨酸鹽。這些鹽可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。
某些式(I)的化合物及其鹽可以存在一種以上的結(jié)晶形式，本發(fā)明包括了各結(jié)晶形式及其混合物。
某些式(I)的化合物及其鹽還可以以溶劑化物的形式存在，例如水合物，本發(fā)明包括了各種溶劑化物及其混合物。
某些式(I)的化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)手性中心，并可以存在不同的旋光活性形式。當(dāng)式I的化合物含有一個(gè)手性中心時(shí)，這些化合物已兩種對(duì)映異構(gòu)體的形式存在，本發(fā)明包括了這兩種對(duì)映異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)體的混合物，如外消旋混合物。這些對(duì)映體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法拆分，例如，通過結(jié)晶；形成非對(duì)映異構(gòu)體衍生物或復(fù)合物，它們可以分離，例如，通過結(jié)晶、氣-液相或液相色譜；用對(duì)映體特異性試劑對(duì)一種對(duì)映體進(jìn)行選擇性反應(yīng)，例如酶酯化；或在手性環(huán)境中進(jìn)行氣-液相或液相色譜，例如，在手性載體如結(jié)合了手性配體的硅膠，或者在手性溶劑的存在下。應(yīng)領(lǐng)會(huì)當(dāng)通過上述分離方法之一將需要的對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N化學(xué)物質(zhì)時(shí)，進(jìn)一步需要釋放所需的對(duì)映異構(gòu)形式的步驟。或者，特定的對(duì)映異構(gòu)體可以通過不對(duì)稱合成用旋光性試劑、底物、催化劑或溶劑來合成，或通過不對(duì)稱轉(zhuǎn)化反應(yīng)將一種對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N。
當(dāng)式(I)的化合物含有一個(gè)以上的手性中心時(shí)，其可以已非對(duì)映異構(gòu)體的形式存在?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法分離這些非對(duì)映異構(gòu)體對(duì)，例如，通過色譜或結(jié)晶，而每對(duì)中的單一對(duì)映體可以如上所述進(jìn)行分離。本發(fā)明包括了式I化合物的各非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物。
某些式(I)的化合物可以存在不同的互變異構(gòu)形式或幾何異構(gòu)體，本發(fā)明包括了式I化合物的各互變異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體及其混合物。
某些式(I)的化合物存在不同的穩(wěn)定構(gòu)象形式，它們是可以分離的。由于圍繞不對(duì)稱單鍵的受限制的旋轉(zhuǎn)(例如，由于空間位阻或環(huán)張力)帶來的扭轉(zhuǎn)不對(duì)稱性，為不同構(gòu)象異構(gòu)體的分離提供了可能。本發(fā)明包括了式(I)化合物的各構(gòu)象異構(gòu)體及其混合物。
某些式(I)的化合物可以存在兩性離子形式，本發(fā)明包括了式(I)化合物的各種兩性離子形式及其混合物。
雜芳基，在本文中，包括雜芳基環(huán)系(例如，其目的是舉例，不視為對(duì)本發(fā)明范圍的限制噻吩基，吡啶基，吡唑基，異噁唑基，噻二唑基，噁二唑基，吲唑基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，嘧啶基，吡嗪基，噻唑基，異噻唑基，噁唑基或四唑基)及其中碳環(huán)芳環(huán)、碳環(huán)非芳環(huán)或雜芳基環(huán)與一個(gè)或多個(gè)其它雜芳基環(huán)稠合的雜芳基環(huán)系(例如，目的是舉例，其不視為對(duì)本發(fā)明范圍的限制苯并(b)噻吩基，苯并咪唑基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，苯并噁二唑基，吲哚基，四氫吲哚基，氮雜吲哚基，吲唑基，喹啉基，咪唑并吡啶，喹唑啉嘌呤，吡咯并[2，3-d]嘧啶，吡唑并[3，4-d]嘧啶)及其N-氧化物。被取代的雜芳基優(yōu)選被一個(gè)或多個(gè)各自獨(dú)立地選自如下的取代基取代鹵素、羥基、烷基、烷氧基、烷基-O-C(O)-、烷氧基烷基、雜環(huán)烷基、任選地被取代的苯基、硝基、氨基、單-取代的氨基或二-取代的氨基。
雜環(huán)(雜環(huán)基)基團(tuán)，在本文中，指雜芳基和雜環(huán)烷基。
雜雙環(huán)基團(tuán)，在本文中，指含有一個(gè)或多個(gè)雜原子的雙環(huán)基團(tuán)，其是飽和的、部分不飽和的或不飽和的。
芳基烷基，在本文中，是通過具有1至約6個(gè)碳原子的脂族基團(tuán)與某化合物連接的芳族取代基。優(yōu)選的芳基烷基是芐基。
雜芳烷基，在本文中，是通過具有1至約6個(gè)碳原子的脂族基團(tuán)與某化合物連接的雜芳族的取代基。
雜環(huán)烷基，在本文中，是具有3至8個(gè)原子并包括至少一個(gè)雜原子如氮原子、氧原子或硫原子的非芳族環(huán)系。
在本文中，脂族基團(tuán)或符號(hào)如“(C0-C6)”包括直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的烴，它們完全飽和或者含有一個(gè)或多個(gè)不飽和單元。當(dāng)該基團(tuán)是C0時(shí)，這意味著該部分不存在，或換言之該部分是一個(gè)化學(xué)鍵。
在本文中，芳族基團(tuán)(或芳基)包括芳族的碳環(huán)環(huán)系(例如，苯基)和稠合的多環(huán)芳族環(huán)系(例如，萘基和1，2，3，4-四氫萘基)。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“天然氨基酸”指本領(lǐng)域已知的23種天然氨基酸，它們是(以其前3個(gè)字母表示)Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Cys-Cys，Glu，Gln，Gly，His，Hyl，Hyp，Ile，Leu，Lys，Met，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val。術(shù)語(yǔ)非天然氨基酸指式NH2-(C(X)2)n-COOH的化合物，它們是α-(當(dāng)n是1時(shí))或β-(當(dāng)n是2時(shí))氨基酸，其中X每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)可的任何側(cè)鏈部分；非天然氨基酸的實(shí)例，包括但不限于羥基脯氨酸、高脯氨酸、4-氨基-苯基丙氨酸、β-(2-萘基)丙氨酸、正亮氨酸、環(huán)己基丙氨酸、β-(3-吡啶基)丙氨酸、β-(4-吡啶基)丙氨酸、α-氨基異丁酸、尿刊酸、N，N-四甲基脒基-組氨酸、N-甲基丙氨酸、N-甲基-甘氨酸、N-甲基-谷氨酸、叔丁基甘氨酸、α-氨基丁酸、叔丁基丙氨酸、鳥氨酸、α-氨基異丁酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、5-氨基戊酸、12-氨基十二烷酸、2-氨基二氫化茚-2-甲酸等，及其衍生物，特別是其中所述胺的氮原子已被單-或二-烷基化的。
在本文中，很多部分或取代基被命名為“被取代或未被取代的”或“任選地被取代的”。當(dāng)某部分被這些術(shù)語(yǔ)之一修飾時(shí)，其表示該部分中任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的可被取代的部分可以被取代，其包括一個(gè)或多個(gè)取代基，其中如果存在一個(gè)以上的取代基，則各取代基是獨(dú)立地進(jìn)行選擇的。這意味著取代是本領(lǐng)域熟知的和/或是本公開文本中所教導(dǎo)的。出于舉例目的，其不視為對(duì)本發(fā)明范圍的限制，作為取代基的基團(tuán)的一些實(shí)例為烷基(其本身也可被取代，如CF3)，烷氧基(其本身也可被取代，如OCF3)，鹵素或鹵素基團(tuán)(F，Cl，Br，I)，羥基，硝基，氧代基團(tuán)，CN，COH，COOH，氨基，N-烷基氨基或N，N-二烷基氨基(其中烷基也可被取代)，酯(-C(O)-OR，其中R是如烷基、芳基等，其可以被取代)，芳基(首選苯基，其可以被取代)和芳基烷基(其可以被取代)。
式I化合物的適當(dāng)?shù)暮铣陕肪€在方案I-XII中給出。方案I說明了3-鹵代-4-氯吡唑并嘧啶向N1-取代的3-芳基-4-氨基吡唑并嘧啶的轉(zhuǎn)變。方案II說明了在3-鹵代-4-氨基吡唑并嘧啶的N-1位進(jìn)行的取代，接著用芳基置換鹵素。方案III闡明了在3-芳基-4-氨基吡唑并嘧啶的N-1位進(jìn)行的取代。方案IV說明了4-羥基吡唑并嘧啶向1-取代的3-溴-4-氯吡唑并嘧啶的轉(zhuǎn)變。方案V闡明了吡唑并嘧啶核的形成。方案VI說明了3-芳基-4-氨基吡唑并嘧啶的形成。方案VII說明了對(duì)N-1取代基的進(jìn)一步處理。P表示一種適宜的氨基保護(hù)基。方案VIII闡明了用于方案I中的芳基硼酸酯的制備。方案IX和X顯示了對(duì)N-1取代基的修飾。方案XI闡明3-芳基的官能基化。在方案I-XI中，正如本領(lǐng)域已知的，某些反應(yīng)可能需要對(duì)不參與反應(yīng)的官能團(tuán)進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)/脫保護(hù)。
本發(fā)明的化合物具有抗血管生成性質(zhì)。這些抗血管生成性質(zhì)至少部分是由于對(duì)血管生成過程中必需的蛋白酪氨酸激酶的抑制。為此，這些化合物可以用作抗如下疾病的活性劑，例如，關(guān)節(jié)炎，動(dòng)脈粥樣硬化，再狹窄，牛皮癬，血管瘤，心肌血管生成，冠狀和腦血管側(cè)支，局部缺血性四肢血管生成，局部出血/再灌注損傷，傷口愈合，消化潰瘍性螺桿菌屬相關(guān)的疾病，病毒引起的血管生成紊亂，骨折，Crow-Fukase綜合征(POEMS)，子癇前期，月經(jīng)過多，貓抓熱，潮紅，新血管性青光眼和視網(wǎng)膜病如與糖尿病性視網(wǎng)膜病有關(guān)的，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病或與年齡有關(guān)的視網(wǎng)膜黃斑變性。此外，一些此類化合物可以用作抗如下疾病的活性劑實(shí)體瘤，惡性腹水，yon Hippel Lindau病，造血系統(tǒng)癌癥和過度增殖性紊亂如甲狀腺增生(特別是Graves病)，及囊腫(如多囊卵巢綜合征(Stein-Leventhal綜合征)的卵巢基質(zhì)血管過多和多囊性腎病。
此外，一些此類化合物可以用作治療如下疾病的活性劑燒傷，慢性肺病，中風(fēng)，息肉，過敏癥，慢性和急性炎性反應(yīng)，延遲型過敏癥，卵巢高刺激性綜合征，與腦瘤有關(guān)的腦水腫，高空、外傷或低氧癥誘發(fā)的腦或肺水腫，眼和視網(wǎng)膜黃斑水腫，腹水，腎小球性腎炎和其它其中血管滲透性、流出、滲出、蛋白溢出或水腫是疾病病癥的疾病。這些化合物還可用于治療其中蛋白溢出導(dǎo)致纖維和細(xì)胞外基質(zhì)沉積，促進(jìn)基質(zhì)增殖的疾病(例如瘢痕疙瘩，纖維變性疾病，肝硬化和腕管綜合征)。VEGF產(chǎn)生的增加強(qiáng)化了炎癥過程如單核細(xì)胞募集和活化。本發(fā)明的化合物還可用于治療炎性疾病如炎性腸疾病(IBD)和克羅恩氏病。方案I 方案II 方案III 方案IV 方案V 方案VI 方案VII 方案VIII 方案IX 方案X 方案XI
VEGF是已知的造成血管滲透性過高和水腫形成的僅有的血管生成生長(zhǎng)因子，就此而言它們是獨(dú)一無二的。實(shí)際上，與很多其它生長(zhǎng)因子的表達(dá)和使用有關(guān)的血管滲透性過高和水腫似乎是通過VEGF的產(chǎn)生來介導(dǎo)的。炎性細(xì)胞因子刺激VEGF的產(chǎn)生。低氧癥導(dǎo)致很多組織中VEGF的明顯上調(diào)，于是，涉及梗塞、閉塞、局部出血、貧血或循環(huán)損傷的情況一般引起VEGF/VPF介導(dǎo)的反應(yīng)。血管滲透性過高、相關(guān)性水腫、透皮交換的變化和大分子外滲(其常常伴發(fā)白血球滲出)，可以導(dǎo)致過量的基質(zhì)沉積、異常的基質(zhì)增殖、纖維變性疾病等。因此，VEGF介導(dǎo)的滲透性過高可顯著地造成具有這些病因?qū)W特征的紊亂。
由于胚泡植入、胎盤發(fā)育和胚胎發(fā)生是血管生成依賴性的，本發(fā)明的某些化合物用作避孕藥和抗生育藥。
考慮到上述紊亂非常大的程度上是由涉及KDR/VEGFR-2和/或Flt-1/VEGFR-2和/或TIE-2酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的。通過抑制這些酪氨酸激酶的活性，上述紊亂的發(fā)展受到抑制，這是因?yàn)榇思膊顟B(tài)的血管生成或血管滲透性過高因素被嚴(yán)重地縮減。相對(duì)于使用低選擇性的酪氨酸激酶抑制劑帶來的副作用而言，本發(fā)明某些化合物通過它們對(duì)特異性酪氨酸激酶的選擇性，其的作用使副作用降低至最小。本發(fā)明的某些化合物還是FGFR、PDGFR、c-Met和IGF-1-R的有效抑制劑。這些受體激酶可以直接或間接加強(qiáng)多種疾病中的血管生成和過度增殖反應(yīng)，因此，它們的抑制可以阻止疾病的惡化。
本發(fā)明的化合物對(duì)蛋白激酶具有抑制活性，即這些化合物通過蛋白激酶調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)。本發(fā)明的化合物抑制絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶類的蛋白激酶。具體地講，這些化合物選擇性地抑制KDR/FLK-1/VEGFR-2酪氨酸激酶的活性。本發(fā)明的某些化合物還抑制其它酪氨酸激酶如Flt-1/VEGFR-1，F(xiàn)lt-4，Tie-1，Tie-2，F(xiàn)GFR，PDGFR，IGF-1R，c-Met，Src-亞類激酶如Lck、Src、hck、fgr、fyn、yes等的活性。此外，本發(fā)明的一些化合物顯著抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶如如PKC、MAP激酶、erk、CDKs、Plk-1或Raf-1，它們?cè)诩?xì)胞增殖和細(xì)胞循環(huán)過程中扮演了重要的角色。本發(fā)明通式化合物對(duì)特定蛋白激酶的效力和特異性常常是可以改變的，并通過取代基(即R1、R2、R3、A和環(huán)1)的性質(zhì)、數(shù)目和排列的改變以及構(gòu)象限制得以實(shí)現(xiàn)最佳化。此外，某些化合物的代謝物也可以具有顯著的蛋白激酶抑制活性。
當(dāng)給需要這些化合物的個(gè)體使用時(shí)，本發(fā)明的化合物抑制這些個(gè)體中血管滲透性過高和水腫的形成。據(jù)信，這些化合物通過抑制參與血管滲透性過高和水腫形成過程的KDR酪氨酸激酶的活性而發(fā)揮作用。KDR酪氨酸激酶也可稱作FLK-1酪氨酸激酶、NYK酪氨酸激酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)或其它活化配體(如VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E或HIV Tat蛋白)結(jié)合細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞表面上的KDR酪氨酸激酶受體時(shí)，KDR酪氨酸激酶被激活。這些KDR酪氨酸激酶活化后，產(chǎn)生血管滲透性過高，并有流體從血流中通過血管壁進(jìn)入到組織間隙中，于是形成水腫區(qū)域。血細(xì)胞滲出還常常伴發(fā)此反應(yīng)。類似地，過度的血管高滲透性可以阻斷跨關(guān)鍵組織和器官(如肺和腎)中內(nèi)皮的正常分子交換，于是引起大分子外滲和沉積。對(duì)KDR刺激的此急性反應(yīng)(據(jù)信其加速隨后的血管生成過程)后，延長(zhǎng)的KDR酪氨酸激酶刺激導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和趨化性以及新血管的形成。通過抑制KDR酪氨酸激酶活性，或者通過阻斷激活配體的產(chǎn)生，或者通過阻斷激活配體與KDR酪氨酸激酶受體結(jié)合，或通過阻止受體二聚化和磷酸根轉(zhuǎn)移作用，或通過抑制KDR酪氨酸激酶活性(抑制此酶的磷酸化功能)或者通過一些干擾下游信號(hào)的其它機(jī)理(D.Mukhopedhyay等，Cancer Res.581278-1284(1998)和其中引用的文獻(xiàn))，滲透性過高及相關(guān)的外滲、隨后的水腫形成和基質(zhì)沉積以及血管生成反應(yīng)，可以受到抑制或最小化。
本發(fā)明一組優(yōu)選的化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性而不顯著抑制Flt-1酪氨酸激酶活性(Flt-1酪氨酸激酶也稱為VEGFR-1酪氨酸激酶)的性質(zhì)。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶通過VEGF分別結(jié)合KDR酪氨酸激酶受體和Flt-1酪氨酸激酶受體而被激活。本發(fā)明某些優(yōu)選的化合物是獨(dú)一無二的，因?yàn)樗鼈円种仆ㄟ^激活配體激活的一種VEGF受體酪氨酸激酶(KDR)的活性而不抑制其它受體酪氨酸激酶。因此，本發(fā)明的某些優(yōu)選化合物以此方式在它們的酪氨酸激酶抑制性中是有選擇性的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療患者的蛋白激酶介導(dǎo)的病癥的方法，包括給所述患者使用治療或預(yù)防有效量的一種或多種式I的化合物。
“蛋白激酶介導(dǎo)的病癥”或“蛋白激酶活性介導(dǎo)的病癥”是一種病癥，如一種疾病或其它不需要的身體癥狀，其發(fā)生或發(fā)展至少部分依賴于至少一種蛋白激酶的活性。此蛋白激酶可以是，例如，蛋白酪氨酸激酶或蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶。
接受治療的患者可以是任何動(dòng)物，并優(yōu)選哺乳動(dòng)物，如馴養(yǎng)的動(dòng)物或家畜。更優(yōu)選，該患者是人。
“治療有效量”是完全或部分抑制病癥的發(fā)展或者至少部分減輕該病癥的一種或多種癥狀的式I化合物或者兩種或多種此類化合物的聯(lián)合形式的量。治療有效量也可以是預(yù)防有效的量。治療有效量依賴于患者的體形大小性別、被治療的病癥、該病癥的嚴(yán)重性及要獲得的結(jié)果。對(duì)于指定的患者，治療有效量可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法確定。
本發(fā)明的方法用于治療蛋白激酶介導(dǎo)的病癥，如上述病癥中的任何一種。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白激酶介導(dǎo)的病癥的特征是不需要的血管生成、水腫或基質(zhì)沉積。例如，此病癥可以是一種或多種潰瘍，如細(xì)菌或真菌引起的潰瘍、莫倫氏潰瘍和潰瘍性結(jié)腸炎。病癥也可以由微生物感染引起，如萊姆病、敗血癥、膿毒性休克或單純性皰疹、帶狀皰疹、人類免疫缺陷病毒、原生動(dòng)物、弓形體病或副痘病毒的感染；血管生成紊亂，如von Hippel Lindau病、多囊性腎病、類天皰瘡、佩吉特氏病和牛皮癬；生殖系統(tǒng)病癥，如子宮內(nèi)膜異位、卵巢高刺激性綜合征、子癇前期或月經(jīng)過多；纖維變性和水腫病癥，如肉樣瘤病、纖維變性疾病、肝硬化、甲狀腺炎、系統(tǒng)性粘滯性過高綜合征、Osler-Weber-Rendu病、慢性梗塞性肺病、哮喘和燒傷、外傷、輻射、中風(fēng)、低氧癥或局部出血后水腫；或炎性/免疫性病癥，如系統(tǒng)性狼瘡、慢性炎癥、腎小球性腎炎、滑膜炎、炎性腸疾病、克羅恩氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和移植物排斥。適宜的蛋白激酶介導(dǎo)的病癥還包括鐮刀細(xì)胞貧血病、骨質(zhì)疏松、骨硬化病，腫瘤誘發(fā)的血鈣過多和骨轉(zhuǎn)移瘤。除了視網(wǎng)膜病而視網(wǎng)膜黃斑變性外，可以通過本發(fā)明方法治療的其它蛋白激酶介導(dǎo)的病癥包括眼部病癥，如眼和視網(wǎng)膜黃斑水腫、眼新血管病、鞏膜炎、光角膜切開術(shù)、眼色素層炎、玻璃體炎、近視、眼凹、慢性視網(wǎng)膜脫離、激光治療后并發(fā)癥、結(jié)膜炎、遺傳性黃斑變性和Eales病。
本發(fā)明的化合物也可以用于治療心血管病癥，如動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、血管閉塞和頸動(dòng)脈梗塞性疾病。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療與癌癥相關(guān)的適應(yīng)征，如實(shí)體瘤，肉瘤(特別是Ewing氏肉瘤和骨肉瘤)，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，成橫紋肌細(xì)胞肉瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，造血系統(tǒng)惡性腫瘤，包括白血病和淋巴瘤，腫瘤誘發(fā)的胸膜或心包滲漏和惡性腹水。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療Crow-Fukase(POEMS)綜合征和糖尿病，如青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病而微血管病。
Src、Tec、Jak、Map、Csk、NFκB和Syk類的激酶在調(diào)節(jié)免疫功能中起關(guān)鍵作用。Src類通常包括Fyn、Lck、Fgr、Fes、Lyn、Src、Yrk、Fyk、Yes、Hck和Blk。Syk類通常理解為只包括Zap和Syk。TEC類包括Tec、Btk、Rlk和Itk。Janus類激酶涉及生長(zhǎng)因子和原炎性細(xì)胞因子信號(hào)通過一些受體的傳導(dǎo)。雖然Tec類激酶的成員BTK和ITK，在免疫生物學(xué)中起的作用還不明確，抑制劑對(duì)它們的調(diào)節(jié)可以改善治療效果。Csk類通常被認(rèn)為包括Csk和Chk。激酶RIP、IRAK-1、IRAK-2、NIK、p38 MAP激酶、Jnk、IKK-1和IKK-2涉及關(guān)鍵原炎性細(xì)胞因子如TNF和IL-1的信號(hào)傳導(dǎo)路徑。借助它們抑制一種或多種這些激酶的能力，式I的化合物可以作為免疫調(diào)節(jié)劑，用于維持同種移植物、治療自身免疫性疾病和治療敗血癥和膿毒性休克。通過它們調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞、肝細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的遷移或滅活，這些化合物可以用來治療自身免疫性疾病和敗血癥。預(yù)防移植排斥，或者是固體器官的宿主抗移植物病，或者是骨髓的移植物抗宿主病，受到目前使用的免疫抑制劑的限制，應(yīng)得益于具有改進(jìn)的治療指數(shù)的有效藥物?；虬邢?qū)嶒?yàn)已表明了Src在破骨細(xì)胞(負(fù)責(zé)骨吸收的細(xì)胞)的生物學(xué)中的重要作用。式I的化合物，通過它們調(diào)節(jié)Src的能力，還可以用于治療骨質(zhì)疏松、骨硬化病、佩吉特氏病、腫瘤引起的血鈣過多并用于治療骨轉(zhuǎn)移瘤。
已表明一些蛋白激酶是原致癌基因。染色體破壞(在染色體5上的ltk激酶斷裂位點(diǎn))、象對(duì)Abl基因的情況那樣用BCR易位(肺城染色體)、在如c-Kit或EGFR情況下的截短，或突變(例如，Met)，導(dǎo)致調(diào)節(jié)障礙的蛋白產(chǎn)生，將其從原致癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)橹掳┗虍a(chǎn)物。在其它腫瘤中，瘤形成是由自分泌或旁分泌配體/生長(zhǎng)因子受體相互作用驅(qū)動(dòng)的。src類激酶的一些成員一般參與下游信號(hào)傳導(dǎo)，于是加強(qiáng)了癌形成，且通過過度表達(dá)或突變它們本身可以變成致癌性。通過抑制這些蛋白的蛋白激酶活性，可以破壞這些疾病過程。血管再狹窄可以包括FGF和/或PDGF-促進(jìn)的平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞增殖。對(duì)FGFR、PDGFR、IGF1-R和c-Met在體內(nèi)的配體刺激是原血管生成性的，并強(qiáng)化血管生成依賴性的疾病。抑制FGFr、PDGFr、c-Met或IGF1-R激酶活性，不論針對(duì)個(gè)別的或是聯(lián)合的，都可以是抑制這些現(xiàn)象的有效策略。因此，抑制正?；虍惓５腸-kit、c-met、c-fms、src-類成員、EGFr、erbB2、erbB4、BCR-Abl、PDGFr、FGFr、IGF1-R和其它受體或胞質(zhì)酪氨酸激酶的激酶活性的式I化合物，可能對(duì)治療良性和腫瘤性增殖疾病是有價(jià)值的。
在很多病理癥狀中(例如，原發(fā)實(shí)體瘤和轉(zhuǎn)移瘤、Kaposi氏肉瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由于不適當(dāng)?shù)难坌卵苄纬蓪?dǎo)致的失明、牛皮癬和動(dòng)脈粥樣硬化)，疾病進(jìn)展伴隨持久的血管生成。多肽生長(zhǎng)因子常常由疾病組織或相關(guān)炎性細(xì)胞產(chǎn)生的，而其相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞特異性受體酪氨酸激酶(例如，KDR/VEGFR-2、Fltl/VEGFR-1、Flt-4、Tie-2/Tek和Tie)是刺激內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、組構(gòu)、分化及必不可少的新功能性血管的建立所必需的。在介導(dǎo)血管高滲透性中VEGF的血管滲透性因子活性的結(jié)果，人們還確信VEGFR激酶的VEGF刺激在以下問題的形成中起重要作用腫瘤腹水，腦和肺水腫，胸膜和心包滲漏，延遲型過敏反應(yīng)，外傷、燒傷、局部出血、糖尿病性并發(fā)癥、子宮內(nèi)膜異位、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、心肺搭橋術(shù)后相關(guān)低血壓和高滲透性后組織水腫和器官功能不全，以及由于不適當(dāng)?shù)男卵苄纬蓪?dǎo)致青光眼或失明的眼水腫。除VEGF外，最近鑒定的VEGF-C和VEGF-D，及病毒編碼的VEGF-E或HIV-Tat蛋白也可以通過刺激VEGFR激酶引起血管滲透性過高反應(yīng)。KDR/VEGFR-2和/或Tie-2也在造血干細(xì)胞的選擇群落中表達(dá)。此群落的某些成員本質(zhì)上是多能的，并可以被生長(zhǎng)因子刺激分化為內(nèi)皮細(xì)胞，并參與血管發(fā)生性血管生成過程。為此，這些物質(zhì)已被人們稱為內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)(J.Clin.Investi.1031231-1236(1999))。在一些內(nèi)皮祖細(xì)胞中，Tie-2可以在它們的募集、粘附、調(diào)節(jié)和分化中起一定作用(Blood，4317-326(1997))。因此，能阻斷內(nèi)皮細(xì)胞特異性激酶的激酶活性的式I的某些試劑可以抑制涉及這些情形的疾病的發(fā)展。
據(jù)信Tie-2(Ang2)的拮抗劑配體的血管去穩(wěn)定作用在內(nèi)皮中引起不穩(wěn)定的“塑料”態(tài)。在高VEGF水平的存在下，可以導(dǎo)致強(qiáng)有力的血管發(fā)生反應(yīng)；但是，在VEGF或VEGF-血管刺激物不存在時(shí)，可以發(fā)生直接的血管退化和內(nèi)皮編程性細(xì)胞死亡(Genes和Devel.131055-1066(1999))。在類似的方式中，在VEGF相關(guān)刺激物的存在或不存在下，Tie-2激酶抑制劑分別可以是原血管形成性的或抗血管生成性的。因此，Tie-2抑制劑可以與適當(dāng)?shù)脑苌尚源碳ぷ尤鏥EGF一起使用，以促進(jìn)某些情形如傷口愈合、梗塞和局部出血中的治療性血管生成。
式I的化合物或其鹽或含其治療有效量的藥物組合物，可以用于治療蛋白激酶介導(dǎo)的病癥，如上述良性或腫瘤性增殖疾病或免疫系統(tǒng)的紊亂。例如，這些疾病包括自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，甲狀腺炎，I型糖尿病，多發(fā)性硬化，肉樣瘤病，炎性腸疾病，克羅恩氏病，重癥肌無力和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；牛皮癬，器官移植排斥(如腎排斥、移植物抗宿主病)，良性和腫瘤性增殖疾病，人癌癥如肺、乳腺、胃、膀胱、結(jié)腸、胰腺、卵巢、前列腺和直腸癌癥以及造血系統(tǒng)惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)，以及涉及不適當(dāng)?shù)难芑募膊±缣悄虿⌒砸暰W(wǎng)膜病，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病，人類的由于與年齡有關(guān)的視網(wǎng)膜黃斑變性引起的脈絡(luò)膜新血管形成和嬰兒血管瘤。此外，這些抑制劑可以用于治療涉及VEGF介導(dǎo)的水腫、腹水、滲漏和滲出的疾病，包括，例如，視網(wǎng)膜黃斑水腫，腦水腫，急性肺損傷和成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)。
本發(fā)明的化合物還可以用于預(yù)防上述疾病。
考慮到上述紊亂很大程度上由涉及VEGF受體(例如，KDR、Flt-1和/或Tie-2)的蛋白酪氨酸激酶活性所介導(dǎo)。通過抑制這些受體酪氨酸激酶的活性，上述紊亂的進(jìn)展受到抑制，這是由于此疾病態(tài)的血管生成因素被嚴(yán)重縮減。本發(fā)明化合物的作用，通過它們對(duì)特異性酪氨酸激酶的選擇性，使如果使用選擇性小的酪氨酸激酶抑制劑造成的副作用最小化。
在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上所定義的式I化合物用作藥物，特別是用作蛋白激酶活性如酪氨酸激酶活性、絲氨酸激酶活性和蘇氨酸激酶活性的抑制劑。在本發(fā)明的另一方面中，提供了如上所定義的式I化合物在制備用于抑制蛋白激酶活性的藥物中的用途。
在本發(fā)明中，使用了下列定義“生理可接受鹽”指保留游離堿的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，其可以通過與無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)制備，無機(jī)酸例如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，有機(jī)酸如磺酸、羧酸、有機(jī)膦酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、乳酸、酒石酸等。藥物制劑本發(fā)明的化合物可以以其本身或在藥物組合物給病人使用，在藥物組合物中它們以治療或改善血管滲透性過高、水腫和相關(guān)疾病的劑量與適宜的載體或賦形劑(一種或多種)混合。這些化合物的混合物也可以已簡(jiǎn)單的混合物形式或以適宜的配制藥物組合物給該患者使用。治療有效量還指足以給不適當(dāng)?shù)男卵苄纬伞⑦^度增殖性疾病、水腫、VEGF相關(guān)性滲透性過高和/或VEGF相關(guān)性低血壓帶來預(yù)防或減輕作用的化合物(一種或多種)的量。有關(guān)本申請(qǐng)化合物的配制和使用技術(shù)，請(qǐng)見“Remington′s Pharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版本。給藥途徑給藥的適宜途徑，例如，可以包括口服、滴眼、直腸、透粘膜、局部或腸道給藥。非腸道給藥，包括肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。
或，可局部使用此化合物，而不是采用系統(tǒng)方式，例如，通過直接給水腫部位注射此化合物，該注射常常采用貯庫(kù)或緩釋制劑的形式。
此外，可以在靶向藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)中使用此藥物，例如，在用內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗體包被的質(zhì)脂體中。組合物/制劑本發(fā)明的藥物組合物可以以已知的方式制備，例如，通過常規(guī)混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨細(xì)、乳化、包囊、包載或凍干方法。
因此，本發(fā)明使用的藥物組合物可以已常規(guī)方式配制，使用一種或多種生理可接受的包括賦形劑和輔劑的載體，它們有利于將活性化合物加工為可藥用的制劑。適宜的制劑依賴于所選擇的給藥途徑。
對(duì)于注射，本發(fā)明的試劑可以在水溶液中配制，優(yōu)選生理相容的緩沖劑，如Hanks溶液、Ringer氏溶液或生理鹽水緩沖劑。對(duì)于透粘膜給藥，在該制劑中使用適于所透過屏障的滲透劑。這樣的滲透劑一般是本領(lǐng)域已知的。
對(duì)于口服給藥，該化合物可以容易地通過將活性化合物與本領(lǐng)域已知的藥用載體混合進(jìn)行配制。這些載體能使本發(fā)明的組合物配制為片劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、溶液劑、凝膠、糖漿、漿液、混懸劑等，以使接受治療的患者口服攝入。口服用藥物制劑可以按照如下方法制備將活性化合物與固體賦形劑混合，任選地研磨所得混合物，如果需要?jiǎng)t加入適宜的輔劑，之后加工顆粒的混合物，以獲得片劑或糖衣丸核芯。具體地講，適宜的賦形劑為填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑如玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸或其鹽如藻酸鈉。
對(duì)糖衣丸核芯進(jìn)行適當(dāng)包衣。為此，可以使用濃的糖溶液，瓊脂可以任選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液以及適宜的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢韵蚱瑒┗蛱且峦璋轮屑尤肴玖匣蛏匾宰R(shí)別或區(qū)別活性化合物劑量的不同聯(lián)合形式。
可以口服使用的藥物制劑包括明膠制成的推入配合膠囊，以及明膠和增塑劑如甘油和山梨醇制成的軟的密封膠囊。推入配合膠囊可以含有活性組分，其與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤(rùn)滑劑如滑石或硬脂酸鎂以及任選地存在的穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物可以溶解于或懸浮于適當(dāng)?shù)囊后w如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。此外，可以加入穩(wěn)定劑?？诜o藥的所有制劑的劑量應(yīng)適于此給藥方式。
對(duì)于頰部給藥，組合物可以是以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。
對(duì)于吸入給藥，用于本發(fā)明的化合物已從加壓包裝或噴霧器中提供的噴霧形式方便地給藥，其中使用適宜的拋射劑，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜的氣體。在加壓氣霧劑中，劑量單位可以通過提供轉(zhuǎn)運(yùn)計(jì)量量的閥來確定。例如，用于吸入器或吹入器的膠囊和藥筒可以配制為含有該化合物和適宜的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物的形式。
可以配制這些化合物以通過注射進(jìn)行非腸道給藥，例如，快速濃注或連續(xù)輸液。注射劑可以以單位劑型的形式存在，例如，在安瓿或多劑量容器中，其中加入了防腐劑。這些組合物可以采用，例如，在含油或含水載體的混懸劑、溶液劑或乳液的形式，并可以含有配制試劑如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
非腸道給藥的藥物組合物包括水溶形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的混懸劑可以制備為適當(dāng)?shù)暮妥⑸浠鞈覄?。適宜的親脂溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油，或者合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或者質(zhì)脂體。含水注射混懸劑可以含有增加該混懸劑粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖酐。該混懸劑可以任選地含有適宜的穩(wěn)定劑或增加這些化合物溶解度的試劑，以制備高濃度的溶液。
或者，活性組分可以是在使用前，用適宜載體，例如，滅菌無熱原的水重新配制的粉末形式。
這些化合物還可以配制為直腸用組合物，如栓劑或保留灌腸劑，例如，其中含有常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可脂或其它甘油酯。
除上述制劑外，這些化合物還可以配制為貯庫(kù)制劑。此類長(zhǎng)效制劑可以通過埋入法給藥(例如，透皮或肌內(nèi)埋入，或通過肌內(nèi)注射)。因此，例如，這些化合物可以與適宜的聚合物或疏水性物質(zhì)(例如，在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂一起配制，或?qū)⑵渲瞥扇芙舛刃〉难苌铮?，溶解度小的鹽。
用于疏水性的本發(fā)明化合物的藥物載體的實(shí)例是助溶劑系統(tǒng)，包括芐醇、非極性表面活性劑、與水混溶的有機(jī)聚合物以及水相。該助溶劑系統(tǒng)可以是VPD助溶劑系統(tǒng)。VPD是3％w/v芐醇、8％w/v的非極性表面活性劑吐溫80和65％w/v聚乙二醇300的溶液，在純乙醇中達(dá)到規(guī)定的體積。該VPD助溶劑系統(tǒng)(VPD5W)由在5％葡萄糖水溶液中進(jìn)行1∶1稀釋的VPD組成。此助溶劑系統(tǒng)很好地溶解疏水性化合物，而其本身在系統(tǒng)給藥時(shí)只產(chǎn)生很低的毒性。當(dāng)然，在不破壞其溶解性和毒性的前提下，助溶劑系統(tǒng)的比例可以作很大變化。此外，助溶劑組分的特性可以變化例如，可以使用其它低毒非極性表面活性劑代替吐溫80；聚乙二醇的餾份大小可以變化；可以用其它生物相容性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮代替聚乙二醇；且其它糖或多糖可以代替葡萄糖。
或者，可以使用疏水性藥物化合物的其它轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。質(zhì)脂體和乳液是疏水性藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)載體的熟知實(shí)例。雖然通常要付出較大毒性的代價(jià)，但是也可以使用某些有機(jī)溶劑如二甲基亞砜。此外，這些化合物可以用緩釋系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)，例如含治療劑的固體疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)。多種緩釋物質(zhì)已得以確認(rèn)，且它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，緩釋膠囊可以在幾周至100天以上釋放這些化合物。根據(jù)治療劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，可以使用蛋白穩(wěn)定化的其它策略。
這些藥物組合物還可以含有固體或凝膠相載體或賦形劑。此類載體或賦形劑的實(shí)例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、多種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。
本發(fā)明的很多化合物可以以與藥學(xué)相容性相反離子形成的鹽的形式提供。藥學(xué)相容性鹽可以與很多酸形成，包括但不限于氫氯酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等。鹽在水或其它質(zhì)子溶劑中比相應(yīng)的游離堿形式更易溶解。有效劑量適用于本發(fā)明的藥物組合物包括含有達(dá)到預(yù)定目的有效量的活性組分的組合物。更具體地講，治療有效量指有效防止接受治療對(duì)象的現(xiàn)存癥狀的發(fā)展或減輕該癥狀的量。有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
對(duì)于用于本發(fā)明方法中的任何化合物，可以先由細(xì)胞試驗(yàn)評(píng)估此治療有效量。例如，可以在細(xì)胞或動(dòng)物模型中使用某劑量以達(dá)到包括在細(xì)胞試驗(yàn)中測(cè)定的IC50(即對(duì)指定的蛋白激酶活性達(dá)到半數(shù)最大抑制的被測(cè)化合物濃度)的循環(huán)濃度范圍。在一些情況下，適于在3至5％血清白蛋白的存在下測(cè)定IC50，這是由于這樣的檢測(cè)接近血漿蛋白對(duì)此化合物的結(jié)合作用。如此獲得的信息可以用來更準(zhǔn)確地確定在人體內(nèi)的有用的劑量。進(jìn)一步講，首選的系統(tǒng)給藥的本發(fā)明的化合物，以在血漿中可以安全達(dá)到的濃度，有效地抑制完整細(xì)胞中的蛋白激酶信號(hào)。
治療有效量指減輕患者癥狀的化合物的量。這些化合物的毒性和療效可以提供標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)物或試驗(yàn)動(dòng)物中測(cè)定，例如，測(cè)定最大耐受劑量(MTD)和ED50(產(chǎn)生50％最大反應(yīng)的有效量)。毒性和療效之間的劑量比是治療指數(shù)，且可以可以以MTD和ED50之比表示。優(yōu)選表現(xiàn)出高治療指數(shù)的化合物。由這些細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)可以用于形成用于人的劑量范圍。這些化合物的劑量?jī)?yōu)選在包括ED50的循環(huán)濃度又幾乎沒有或沒有毒性的范圍內(nèi)。根據(jù)所用劑型和所用給藥途徑，此劑量可以在此范圍內(nèi)變化。確切的制劑、給藥途徑和劑量可以由具體醫(yī)生基于患者的情況作出選擇(見，例如，F(xiàn)ingl等，1975，“治療藥學(xué)基礎(chǔ)(The Pharmacological Basis ofTherapeutics)”，第一章，第1頁(yè))。在危象的治療中，可能需要達(dá)到MTD的緊急快速濃注或輸液以獲得快速反應(yīng)。
可以具體調(diào)整給藥劑量和間隔以提供足以為此激酶調(diào)節(jié)作用的活性組分的血漿濃度，即最低有效濃度(MEC)。MEC應(yīng)隨各化合物有所變化，但是可以由體外數(shù)據(jù)估計(jì)；例如，用本文中描述的試驗(yàn)檢測(cè)的達(dá)到對(duì)蛋白激酶50-90％抑制所需要的濃度。獲得MEC所需要的劑量應(yīng)根據(jù)個(gè)體的特性和給藥的途徑變化。但是，可以用HPLC檢測(cè)或生物檢測(cè)來測(cè)定血漿濃度。
也可以用MEC值確定給藥間隔?；衔飸?yīng)使用的給藥方案中，應(yīng)為維持此時(shí)的血漿水平高于MEC 10-90％，優(yōu)選30-90％并首選50-90％，直到癥狀獲得了所要求程度的減輕。在局部給藥或選擇性吸收的情況中，藥物的有效局部濃度可能與血漿濃度不相關(guān)。
當(dāng)然，組合物的給藥量應(yīng)依賴于接受治療的對(duì)象、對(duì)象的體重、疾病的嚴(yán)重性、給藥方式和主治醫(yī)的診斷。包裝如果需要，這些組合物可以存在于包裝或分配器中，其中可以裝有含有活性組分的一個(gè)或多個(gè)單位劑型。例如，此包裝可以包括金屬或塑料箔片，如凸泡包裝。此包裝或分配器可以附加給藥的說明。含有在相容藥用載體中配制的本發(fā)明化合物的組合物，也可以制備并置于適當(dāng)?shù)娜萜鳎?biāo)示治療的適應(yīng)征。
在一些制劑中，以非常小的顆粒形式使用本發(fā)明的化合物可能是有利的，例如，該顆?？梢杂昧髂苣カ@得。
通過下面的描述舉例說明本發(fā)明化合物在制備藥物組合物中的用途。在本說明書中，術(shù)語(yǔ)“活性化合物”指本發(fā)明的任何化合物，但是特別是指作為上述實(shí)施例之一的終產(chǎn)物的化合物。a)膠囊在膠囊的制備中，可以將10重量份的活性化合物和240重量份的乳糖去凝聚化并混合。將此混合物填充入硬明膠膠囊中，每個(gè)膠囊含有單位劑量或部分單位劑量的活性化合物。b)片劑可以由下列組分制備片劑。
重量份活性化合物10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯吡咯烷酮10硬脂酸鎂 3可以將活性化合物、乳糖和一些淀粉去凝聚化、混合并將所得混合物用聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液制粒。干燥的顆?？梢耘c硬脂酸鎂和其余的淀粉混合。然后在制片機(jī)中壓縮此混合物以獲得片劑，每片含有單位劑量或部分單位劑量的活性化合物。c)腸溶包衣片劑可以通過上述(b)描述的方法制備片劑。這些片劑可以按照常規(guī)方式用20％鄰苯二甲酸乙酸纖維素和3％鄰苯二甲酸二乙酯在乙醇∶二氯甲烷(1∶1)中的溶液進(jìn)行腸溶包衣。d)栓劑在栓劑的制備中，100重量份的活性化合物可以摻混在1300重量份的甘油三酯栓劑基質(zhì)中，并將此混合物制成栓劑，每個(gè)栓劑含有治療有效量的活性組分。
在本發(fā)明的組合物中，如果需要，這些活性化合物可以與其它相容的藥學(xué)活性組分結(jié)合。例如，本發(fā)明的化合物可以與一種或多種其它藥物試劑聯(lián)合使用，這些其它的藥物能抑制或防止VEGF或血管生成素產(chǎn)生、減弱對(duì)VEGF或血管生成素的細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)、阻斷細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，抑制血管滲透性過高、降低炎癥，或者抑制或防止水腫形成或新血管形成。本發(fā)明的化合物可以在其它藥劑給藥前、后或同時(shí)給藥，其中任何一種給藥方式都是適當(dāng)?shù)?。其它藥劑包括但不限于抗水腫甾類、NSAIDS、ras抑制劑、抗TNF劑、抗-IL-1劑、抗組胺藥、PAF拮抗劑、COX-1抑制劑、COX-2抑制劑、NO合酶抑制劑、Akt/PTB抑制劑、IGF-1R抑制劑、PKC抑制劑和PI3激酶抑制劑。本發(fā)明的化合物和其它藥劑的作用或者是加和的或者是協(xié)同的。因此，抑制血管生成、血管滲透性過高和/或抑制水腫形成的物質(zhì)的此聯(lián)合給藥，與其中任何一種物質(zhì)單獨(dú)給藥相比，能更大地減輕過度增殖性疾病、血管生成、血管滲透性過高或水腫的有害作用。在惡性疾病的治療中，可先進(jìn)行與抗增殖或細(xì)胞毒化療或放療的聯(lián)合治療。
本發(fā)明還包括式I化合物作為藥物的用途。
本發(fā)明的另一方面，提供了式I化合物或其鹽在制備治療哺乳動(dòng)物特別是人的血管滲透性過高、血管生成依賴性疾病、增殖性疾病和/或免疫系統(tǒng)紊亂的藥物方面的用途。
本發(fā)明還提供了治療血管滲透性過高、不適當(dāng)?shù)男卵苌?、增殖性疾病?或免疫系統(tǒng)紊亂的方法，該方法包括給需要的哺乳動(dòng)物特別是人使用治療有效量的式I化合物。
在抑制這些蛋白激酶方面化合物的體外效果，可以通過詳述如下的方法測(cè)定。
化合物的效力可以通過比較被測(cè)化合物和對(duì)照組抑制外源性底物(如合成肽)磷酸化的量來測(cè)定(Z.Songyang等，Nature.373536-539)。用桿狀病毒系統(tǒng)產(chǎn)生KDR酪氨酸激酶通過PCR用從HUVEC細(xì)胞中分離的cDNA生成人KDR細(xì)胞內(nèi)功能域(aa789-1354)的編碼序列。將聚-His6序列引入此蛋白的N末端。將此片斷克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1393的Xbal和Not1位點(diǎn)。用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)通過共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生重組桿狀病毒(BV)。通過Western分析將重組BV進(jìn)行噬斑純化和檢驗(yàn)。為了產(chǎn)生蛋白，SF-9細(xì)胞以2×106/ml生長(zhǎng)于SF-900-II培養(yǎng)基中，并以0.5噬斑形成單位每細(xì)胞(MOI)感染。感染后在第48小時(shí)收集細(xì)胞。KDR的純化通過向得自1L細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞顆粒中加入50ml的TritonX-100裂解緩沖液(20mM Tris，pH8.0，137mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，1mM PMSF，10μg/ml抑蛋白酶肽，1μg/ml亮抑蛋白酶肽)將表達(dá)了(His)6KDR(aa 789-1354)的SF-9細(xì)胞裂解。在4℃，在Sorval SS-34轉(zhuǎn)子中以19000rpm將此裂解物離心30分鐘。將此細(xì)胞裂解物加到5ml NiCl2螯合瓊脂糖凝膠柱上，用50mM HEPES，pH7.5，0.3 M NaCl進(jìn)行平衡。用含0.25M咪唑的相同緩沖液洗脫KDR。用SDS-PAGE和檢測(cè)激酶活性的ELISA試驗(yàn)(如下)分析柱餾份。純化的KDR交換到25mM HEPES，pH7.5，25mM NaCl，5 mM DTT緩沖液中，并在-80℃下保存。人Tie-2激酶的產(chǎn)生和純化通過PCR用從人胎盤模板中分離的cDNA生成人Tie-2細(xì)胞內(nèi)功能域(aa 775-1124)的編碼序列。將聚-His 6序列引入此蛋白的N末端并將此構(gòu)成物克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1939的Xba1和Not1位點(diǎn)。用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)通過共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生重組桿狀病毒(BV)。通過Western分析將重組BV進(jìn)行噬斑純化和檢驗(yàn)。為了產(chǎn)生蛋白，SF-9細(xì)胞以2×106/ml生長(zhǎng)于SF-900-II培養(yǎng)基中，并以0.5的MOI感染。用于篩選的His標(biāo)記的激酶類似于KDR所述進(jìn)行純化。人Flt-1酪氨酸激酶的產(chǎn)生和純化用桿狀病毒表達(dá)載體pVL1393(Phar Mingen，Los Angeles，CA)。將編碼聚-His6的核苷酸序列的5′端置于編碼人Flt-1的整個(gè)細(xì)胞內(nèi)激酶功能域(氨基酸786-1338)的核苷酸區(qū)域。編碼此激酶功能域的核苷酸序列通過PCR用分離自HUVEC細(xì)胞的cDNA文庫(kù)產(chǎn)生。此組氨酸殘基使蛋白的親和純化成為可行，如類似用于KDR和ZAP70的方式。以0.5的多重性感染SF-9昆蟲細(xì)胞，并在感染后48小時(shí)收集。EGFR酪氨酸激酶來源EGFR購(gòu)自Sigma(Cat # E-3641；500單位/50μl)，而EGF配體得自O(shè)ncogene Research Products/Calbiochem(Cat # PF011-100)。ZAP70的表達(dá)用桿狀病毒表達(dá)載體pVL1393(Phar Mingen，Los Angeles，CA)。將編碼氨基酸M(H)6 LVPR9S的核苷酸序列的5′端置于編碼ZAP70整體(氨基酸786-1338)的區(qū)域。編碼ZAP70編碼區(qū)域的核苷酸序列通過PCR用分離自Jurkat無限增殖化T細(xì)胞的cDNA文庫(kù)產(chǎn)生。此組氨酸殘基使蛋白的親和純化成為可行(參見紅外)。此LVPR9S橋構(gòu)成了通過凝血酶進(jìn)行蛋白水解的識(shí)別序列，能從該酶中除去親和端。以0.5的感染多重性感染SF-9昆蟲細(xì)胞，并在感染后48小時(shí)收集。ZAP70的提取和純化將SE-9細(xì)胞在20 mM Tris，pH 8.0，137 mM NaCl，10％甘油，1％ Triton X-100，1 mM PMSF，1μg/ml亮抑蛋白酶肽，10μg/ml抑蛋白酶肽和1mM原釩酸鈉組成的緩沖液中裂解。將可溶性裂解物加到螯合瓊脂糖凝膠HiTrap柱(Pharmacia)上，該柱在50 mM HEPES，pH7.5，0.3 M NaCl中平衡。用250mM咪唑洗脫融合蛋白。將該酶保存在含50 mM HEPES，pH 7.5，50mM NaCl和5 mM DTT的緩沖液中。蛋白激酶來源Lck、Fyn、Src、Blk、Csk和Lyn，及其截短形式可以商購(gòu)(例如，購(gòu)自Upstate Biotechnology Inc.(Saranac Lake，N.Y)和SantaCruz Biotechnology Inc.(Santa Cruz，Ca.))或由已知的天然或重組原料用常規(guī)方法純化。PTKs的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)用于發(fā)現(xiàn)和檢測(cè)酪氨酸激酶活性的存在。ELISA按照已知方案進(jìn)行，這些方案描述于，例如，Voller等，1980，“酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定”，Manual of Clinical Immunology，第2版，Rose和Friedman編，pp 359-371 Am.Soc.of Microbiology，Washington，D.C。
所公開的方案適于檢測(cè)特異性的PTK活性。例如，進(jìn)行ELISA試驗(yàn)的優(yōu)選方案如下。用這些方案來檢測(cè)化合物對(duì)PTK類其它成員以及非受體酪氨酸激酶的活性，是本領(lǐng)域技術(shù)人員力所能及的。為了測(cè)定抑制劑選擇性，在此檢測(cè)中使用通用的PTK底物(例如，聚(Glu4Tyr)的無規(guī)共聚物，20,000-50,000MW)，以約兩倍于外觀Km的濃度與其一起使用ATP(一般5μM)。
下面的方法用來檢測(cè)本發(fā)明化合物對(duì)KDR、Flt-1、Flt-4/VEGFR-3、Tie-1、Tie-2、EGFR、FGFR、PDGFR、IGF-1-R、c-Met、Lck、Blk、Csk、Src、Lyn、Fyn和ZAP70酪氨酸激酶活性的抑制作用緩沖液和溶液PGT聚(Glu，Tyr)4∶1將粉末保存在-20℃。在磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中溶解粉末，形成50mg/ml的溶液。在-20℃下保存多個(gè)1ml等份。當(dāng)制板時(shí)，在GibcoPBS中稀釋至250μg/ml。
反應(yīng)緩沖液100mM Hepes，20mM MgCl2，4mM MnCl2，5mM DTT，0.02％ BSA，200μM NaVO4，pH 7.10。
ATP在-20℃下的保存等份。在水中稀釋至20μM。
洗滌緩沖液含0.1％Tween 20的PBS。
抗體稀釋緩沖液在PBS中的0.1％牛血清白蛋白(BSA)。
TMB底物臨用前混合的TMB底物和過氧化物溶液9∶1或使用Neogen的K-藍(lán)底物。
終止溶液1M磷酸。方法1.制板在PBS中將PGT貯存液(50mg/ml，冷凍)稀釋至250μg/ml。在Corning改良平底高親和性ELISA培養(yǎng)板(Corning # 25805-96)的每個(gè)孔中加入125μl。向空白孔中加入125μl PBS。用密封帶覆蓋并在37℃下孵育過夜。用250μl洗滌緩沖液洗滌1次，并在37℃干燥恒溫箱中干燥約2小時(shí)。在4℃下在密封袋中保存包被板直到使用。
2.酪氨酸激酶反應(yīng)—以4倍的濃度在20％DMSO水溶液中制備抑制劑溶液。
—制備反應(yīng)緩沖液。
—制備酶溶液，以便所需的單位是50μl，例如，在這些反應(yīng)中每孔50ng總量的KDR的濃度為1ng/μl。保存在冰上。
—由100mM貯存液在水中制備4份20μM的ATP溶液。保存在冰上。
—每孔加入50μl的酶溶液(一般5-50ng酶/孔，視該激酶的具體活性而定)。
—加入25μl的4×抑制劑。
—加入25μl的4×ATP，以進(jìn)行抑制劑檢測(cè)。
—室溫下孵育10分鐘。
—通過每孔加入50μl 0.05N HCl停止反應(yīng)。
—洗板。
**反應(yīng)的最終濃度5μM ATP，5％DMSO。
3.抗體結(jié)合—通過2步稀釋法(100×，然后200×)，在含0.1％ BSA的PBS中將1mg/ml等份的PY20-HRP(Pierce)抗體(一種磷酸酪氨酸抗體)稀釋至50ng/ml。
—每孔加入100μl Ab。室溫下孵育1小時(shí)。在4℃下孵育1小時(shí)。
—洗滌4×培養(yǎng)板。
4.呈色反應(yīng)—制備TMB底物并每孔加入100μl。
—在650nm監(jiān)控OD值直到達(dá)到0.6。
—用1M磷酸停止反應(yīng)。在培養(yǎng)板讀數(shù)器上搖動(dòng)。
—在450nm立即讀取OD值。
最佳的孵育時(shí)間和酶反應(yīng)條件隨酶制劑有輕微的變化，并對(duì)每批通過經(jīng)驗(yàn)確定。對(duì)于Lck，所用反應(yīng)緩沖液為100 mM MOPSO，pH 6.5，4 mM MnCl2，20mM MgCl2，5 mM DTT，0.2％ BSA，200mM NaVO4，檢測(cè)條件類似。
式I的化合物在治療涉及包括本文中沒有提及的已確定的蛋白酪氨酸激酶和式I化合物能抑制的尚未確定的蛋白酪氨酸激酶的疾病中具有治療用途。本文中所列舉的所有化合物在濃度等于或低于50μM時(shí)顯著地抑制FGFR、PDGFR、KDR、Tie-2、Lck、Fyn、Blk、Lyn或Src。本發(fā)明的一些化合物在濃度等于或低于50μM時(shí)還顯著抑制其它酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸激酶如cdc2(cdk1)。Cdc2來源人重組酶和檢測(cè)緩沖液可以商購(gòu)(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)或由已知的天然或重組原料用常規(guī)方法純化。Cdc2檢測(cè)用所購(gòu)買試劑提供的方法，只稍加修改。簡(jiǎn)言之，該反應(yīng)在如下組成的緩沖液中進(jìn)行50mM Tris pH7.5，100mM NaCl，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％ Brij，5％ DMSO和10mM MgCl2(商購(gòu)緩沖液)，其中添加了新鮮的最終濃度為300μM ATP(31μCi/ml)和30μg/ml IIIss型組織蛋白。含酶單位的80μl反應(yīng)體積在25℃下在存在或不存在抑制劑的條件下反應(yīng)20分鐘。通過加入120μL的10％乙酸停止此反應(yīng)。通過點(diǎn)混合物在磷酸纖維素紙上，接著用75mM磷酸洗滌5分鐘，洗滌3次，將此底物與未標(biāo)記的物質(zhì)分離。在液體閃爍體的存在下用倍他計(jì)數(shù)器檢測(cè)計(jì)數(shù)。本發(fā)明一些化合物在濃度低于50μM時(shí)顯著抑制cdc2。PKC激酶來源PKC的催化亞單位可以商購(gòu)(Calbiochem)。PKC激酶檢測(cè)按照以下公開的方法進(jìn)行A放射性激酶檢測(cè)(Yasuda，I.，Kirshimoto，A.，Tanaka，S.，Tominaga，M.，Sakurai，A.，Nishizuka，Y.，Biochemical and Biophysical ResearchCommunication 3166，1220-1227(1990))。簡(jiǎn)言之，所有的反應(yīng)在組成如下的激酶緩沖劑中進(jìn)行50mM Tris-HCl pH7.5，10mM MgCl2，2mM DTT，1mM EGTA，100μM ATP，8μM肽，5％ DMSO和33P ATP(8Ci/mM)。在該反應(yīng)容器中混合化合物和酶，通過加入ATP和底物混合物引發(fā)此反應(yīng)。加入10μL停止緩沖液(5 mM ATP在75mM磷酸中)停止該反應(yīng)后，將部分混合物點(diǎn)在磷酸纖維素濾紙上。在室溫下以75mM磷酸將所點(diǎn)樣品洗滌3次，每次5至15分鐘。通過液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)量放射標(biāo)記物的摻入。Erk2酶來源重組鼠酶和檢測(cè)緩沖液可以商購(gòu)(New England Biolabs，BeverlyMA.USA)或由已知天然或重組原料用常規(guī)方法純化。Erk2酶檢測(cè)簡(jiǎn)言之，該反應(yīng)在組成如下的緩沖液中在供應(yīng)商推薦的條件下進(jìn)行50mM Tris pH7.5，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％ Brij，5％ DMSO和10mM MgCl2(商購(gòu)緩沖液)，其中添加了新鮮的100μM ATP(31μCi/ml)和30μM髓鞘堿性蛋白。反應(yīng)體積和檢測(cè)摻入放射活性的方法如PKC檢測(cè)所述(參見上文)。T細(xì)胞活化的體外模型一旦促細(xì)胞分裂劑或抗原活化時(shí)，誘發(fā)T細(xì)胞分泌IL-2，一種支持其隨后增殖期的生長(zhǎng)因子。因此，可以檢測(cè)初級(jí)T細(xì)胞或適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞系中IL-2的產(chǎn)生或其中的細(xì)胞增殖，作為T細(xì)胞活化的替代指標(biāo)。這兩種檢測(cè)方法在文獻(xiàn)中進(jìn)行了充分的描述，其參數(shù)得到適當(dāng)記載(見Current Protocols in immunology，Vol 2，7.10.1-7.11.2)。
簡(jiǎn)言之，通過與同種異體的刺激細(xì)胞共同培養(yǎng)可以激活T細(xì)胞，此方法稱為單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。按照制造商的說明通過Ficoll-Hypaque梯度(Pharmacia)純化反應(yīng)和刺激外周血單核細(xì)胞。通過用絲裂霉素C(Sigma)或γ輻射處理來通過抑制有絲分裂來滅活刺激子細(xì)胞。反應(yīng)和刺激細(xì)胞以2∶1的比例在被測(cè)化合物存在或不存在下共同培養(yǎng)。一般105的反應(yīng)細(xì)胞與5×104刺激細(xì)胞混合并置于(200μl體積)U型底微量滴定板(Costar Scientific)中。將這些細(xì)胞在RPMI1640中培養(yǎng)，其中添加了熱滅活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)或得自男性供者的人混合AB血清，5×10-5M 2-巰基乙醇和0.5％DMSO，在收集細(xì)胞前一天(一般是第3天)將此培養(yǎng)物用0.5μCi的3H胸苷(Amersham)調(diào)制。收集培養(yǎng)物(Betaplate harvester，Wallac)并通過液體閃爍技術(shù)(Betaplate，Wallac)評(píng)價(jià)同位素的吸收。
通過檢測(cè)IL-2的產(chǎn)生，可以用相同的培養(yǎng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)T細(xì)胞活化。培養(yǎng)開始后18至24小時(shí)，移出上清液并按照制造商的說明通過ELISA(R和D系統(tǒng))檢測(cè)IL-2濃度。T細(xì)胞活化的體內(nèi)模型化合物的體內(nèi)效果可以在已知直接檢測(cè)T細(xì)胞活化的或其中已證明T細(xì)胞是效應(yīng)物的動(dòng)物模型中檢測(cè)。在體內(nèi)，通過帶有單克隆抗-CD3抗體(Ab)的T細(xì)胞受體的固定部分的連接，可以激活T細(xì)胞。在此模型中，在放血前2小時(shí)，給BALB/c小鼠腹膜內(nèi)注射10μg的抗-CD3Ab。在抗-CD3 Ab使用前，用單劑量的化合物預(yù)處理接受被測(cè)藥物的動(dòng)物。通過ELISA檢測(cè)T細(xì)胞活化的指示劑原炎性細(xì)胞因子干擾素-γ(NFN-γ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。使用類似的模型用特異性抗原如匙孔嘁血藍(lán)蛋白(K1H)體內(nèi)引發(fā)T細(xì)胞，接著用相同的抗原二次刺激引流出的淋巴節(jié)細(xì)胞。如上所述，用對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生的檢測(cè)評(píng)價(jià)培養(yǎng)細(xì)胞的活化狀態(tài)。簡(jiǎn)言之，用在完全福氏佐劑(CFA)中乳化的100μg KLH在第0天皮下免疫C57BL/6小鼠。在免疫前1天用此化合物預(yù)處理動(dòng)物，并在免疫后第1、2、3天用此化合物處理動(dòng)物。在第4天收集引流出的淋巴節(jié)，并在組織培養(yǎng)基(添加了熱滅活的胎牛血清(HycloneLaboratories)、5×10-5M 2-巰基乙醇和0.5％ DMSO的RPMI 1640)中以6×106個(gè)細(xì)胞每毫升將其中的細(xì)胞培養(yǎng)24和48小時(shí)。然后，用ELISA評(píng)價(jià)培養(yǎng)物上清液的自分泌T細(xì)胞生長(zhǎng)因子白細(xì)胞介素-2(IL-2)和/或IFN-γ水平。
重要的化合物也可在人疾病的動(dòng)物模型中進(jìn)行檢測(cè)。這些通過實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)和膠原引起的關(guān)節(jié)炎(CIA)例證。在大鼠和小鼠中已描述了模擬人多發(fā)性硬化多個(gè)方面的EAE模型(綜述見FASEB J. 52560-2566，1991；鼠模型Lab.Invest.4(3)278，1981；嚙齒動(dòng)物模型J.Immuno l146(4)1163-8，1991)。簡(jiǎn)言之，用髓鞘堿性蛋白(MBP)或其神經(jīng)原性肽衍生物和CFA免疫小鼠或大鼠。加入細(xì)菌毒素如百日咳桿菌抗原引起急性疾病。從MBP/肽免疫的動(dòng)物中過繼轉(zhuǎn)移T細(xì)胞來誘發(fā)復(fù)發(fā)的/恢復(fù)原狀的疾病。
通過用II型膠原免疫可以在DBA/1小鼠中誘發(fā)CIA(J.Immunol142(7)2237-2243)。早在抗原刺激后10天小鼠就對(duì)產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎征兆，且在免疫后長(zhǎng)達(dá)90天內(nèi)可以進(jìn)行評(píng)分。在EAF和CIA模型中，化合物可以預(yù)防性給藥或者疾病開始時(shí)給藥。有效的藥物應(yīng)降低嚴(yán)重性和/或發(fā)病率。
抑制一種或多種血管生成受體PTK和/或參與介導(dǎo)炎性反應(yīng)的蛋白激酶如lck的本發(fā)明的某些化合物，可以降低這些模型中關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重性和發(fā)病率。
在小鼠同種異體移植模型中也可檢測(cè)化合物，或者是皮膚(在Ann.Rev.Immunol.，10333-58，1992；Transplantation57(12)1701-1706，1994中綜述)或是心臟(Am.J.Anat.113273，1963)。簡(jiǎn)言之，完整厚度的皮膚移植物由C57BL/6小鼠移植給BALB/c小鼠。在第6天開始每天檢查移植物以尋找排斥反應(yīng)的證據(jù)。在小鼠新生心臟移植模型中，新生心臟由C57BL/6小鼠異位移植到成年CBA/J小鼠的耳廓。移植后心臟開始跳動(dòng)4至7天，用解剖顯微鏡觀察跳動(dòng)的停止以目測(cè)評(píng)價(jià)排斥反應(yīng)。細(xì)胞受體PTK檢測(cè)下列細(xì)胞檢測(cè)用來測(cè)定本發(fā)明不同化合物對(duì)KDR/VEGFR2的活性和作用水平。按照與其它酪氨酸激酶的相同路線，用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)可以設(shè)計(jì)使用特異性配體刺激的類似的受體PTK檢測(cè)。
在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中VEGF誘導(dǎo)的KDR磷酸化作用以Western印跡法檢測(cè)1.由Clonetics(San Diego，CA)購(gòu)買HUVEC細(xì)胞(來自聯(lián)營(yíng)供者)，并按照制造商的說明培養(yǎng)。只有前面幾代(3-8)用于此檢測(cè)。在100mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞(組織培養(yǎng)用Falcon；Becton Dickinson；Plymouth，England)，使用完全EBM培養(yǎng)基(Clonetics)。
2.為了評(píng)價(jià)化合物的抑制活性，將細(xì)胞胰蛋白酶化并以0.5-1.0×105個(gè)細(xì)胞/孔接種6孔簇合培養(yǎng)板(Costar；Cambridge，MA)的每個(gè)孔中。
3.接種3-4天后，培養(yǎng)板90-100％融合。從所有孔中除去培養(yǎng)基，用5-10ml的PBS清洗細(xì)胞，并用不含補(bǔ)充成分(即沒有血清)的5ml的EBM堿性培養(yǎng)基培養(yǎng)18-24小時(shí)。
4.將在1ml的EBM培養(yǎng)基中系列稀釋的抑制劑加入到(25μM，5μM或1μM最終濃度)細(xì)胞中，并在37℃下孵育1小時(shí)。然后向所有孔中加入存在于2ml的EBM培養(yǎng)基中的人重組VEGF165(R & D Systems)，最終濃度為50ng/ml，并在37℃下孵育10分鐘。用未處理的或只用VEGF處理的對(duì)照細(xì)胞評(píng)價(jià)背景磷酸化作用和由VEGF誘發(fā)的磷酸化作用。
再用含1mM原釩酸鈉(Sigma)的5-10ml冷PBS清洗所有細(xì)胞，并在200μl的RIPA緩沖液(50mM Tris-Cl)pH7，150mM NaCl，1％NP-40，0.25％脫氧膽酸鈉，1mM EDTA)裂解并擊打細(xì)胞，該緩沖液中含有蛋白酶抑制劑(PMSF 1mM，抑蛋白酶肽1μg/ml，胃蛋白酶抑制劑1μg/ml，亮抑蛋白酶肽1μg/ml，釩酸鈉1mM，氟化鈉1mM)和1μg/ml的脫氧核糖核酸酶(所有化學(xué)品得自Sigma Chemical Company，St Louis，MO)。將此裂解物以14000rpm離心30分鐘以除去核。
然后，通過加入冷(-20℃)乙醇(2倍體積)，最少放置1小時(shí)，或最多放置過夜，沉淀等量的蛋白。在含5％巰基乙醇(BioRad；Hercules，CA)的Laemli樣品緩沖液中重新構(gòu)建顆粒并煮沸5分鐘。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(6％，1.5mm Novex，San Deigo，CA)解離蛋白質(zhì)，并用Novex系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。用牛血清白蛋白(3％)阻斷后，用抗-KDR多克隆抗體(C20，Santa Cruz Biotechnology；Santa Cruz，CA)或用抗磷酸酪氨酸單克隆抗體(4G10，Upstate Biotechnology，Lake Placid，NY)在4℃下過夜探測(cè)這些蛋白質(zhì)。洗滌并用綿羊抗兔或綿羊抗小鼠IgG的HRP-軛合F(ab)2孵育1小時(shí)后，用發(fā)射化學(xué)發(fā)光(ECL)系統(tǒng)(Amersham Life Sciences，Arlington Height，IL)可以看到譜帶。在濃度低于50μM時(shí)，本發(fā)明的某些實(shí)施例顯著抑制細(xì)胞VRGF誘導(dǎo)的KDR酪氨酸激酶磷酸化作用。體內(nèi)子宮水腫模型此試驗(yàn)檢測(cè)化合物抑制小鼠子宮重量快速增加的能力，此現(xiàn)象發(fā)生在雌激素刺激后的頭若干小時(shí)內(nèi)。已知此子宮重量增加的早期發(fā)作是由于子宮脈管系統(tǒng)滲透性增加引起的水腫導(dǎo)致的。Cullinan-Bove和Koss(Endocrinology(1993)，133829-837)證明了雌激素刺激的子宮水腫與該子宮中VEGF mRNA表達(dá)增加之間的緊密的暫時(shí)聯(lián)系。這些結(jié)果已通過使用VEGF的中和性單克隆抗體得到了證實(shí)，此抗體顯著降低了雌激素刺激后子宮重量的急性增加(WO 97/42187)。因此，此系統(tǒng)可以作為體內(nèi)抑制VEGF信號(hào)和相關(guān)滲透性過高和水腫的模型。
材料所有激素以凍干粉末的形式購(gòu)自Sigma(St.Louis，MO)或Cal Biochem(La Jolla，CA)，并按照供應(yīng)商的指示制備。
載體組分(DMSO，Cremaphor EL)購(gòu)自Sigma(St.Louis，MO)。
小鼠(Balb/c，8-12周齡)購(gòu)自Taconic(Germantown，NY)，并按照動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)準(zhǔn)則飼養(yǎng)在無熱原動(dòng)物房中。方法第1天給Balb/c小鼠腹膜內(nèi)(i.p.)注射12.5單位的妊娠母驢的血清促性腺素(PMSG)。
第3天小鼠i.p.接受15單位的人絨毛膜促性腺素(hCG)。
第4天將小鼠隨機(jī)分組，每組5-10只。根據(jù)溶解度和載體，以1-100mg/kg的劑量，通過i.p.、i.v.或p.o.途徑使用被測(cè)化合物。載體對(duì)照組只接受載體，并保留兩組不進(jìn)行處理。
30分鐘后，試驗(yàn)組、載體組和一個(gè)未處理組接受腹膜內(nèi)注射的17-雌二醇(500g/kg)。2-3小時(shí)后，通過吸入二氧化碳處死動(dòng)物。剪開中線后，分離出各個(gè)子宮，并通過恰在子宮頸下和在子宮和輸卵管的接合處切割摘除。在稱重(濕重)前小心地除去脂肪和結(jié)締組織，避免破壞子宮的完整性。將子宮置于在兩頁(yè)過濾紙之間壓出流體以吸干此子宮，用裝有水的1升玻璃瓶盛接。吸干后稱重子宮(吸干后重量)。將濕重和吸干后重量的差作為子宮流體的含量。將治療組的平均流體含量和未治療或載體處理組的作比較。通過t檢驗(yàn)確定顯著性。用未刺激對(duì)照組監(jiān)控雌二醇反應(yīng)。
結(jié)果表明當(dāng)通過多種途徑進(jìn)行系統(tǒng)給藥時(shí)本發(fā)明的某些化合物抑制水腫的形成。
抑制血管生成受體酪氨酸激酶的本發(fā)明的某些化合物，對(duì)新血管生成的Matrigel移植模型也能顯示出活性。Matrigel新血管生成模型包括在皮下移植的細(xì)胞外基質(zhì)的清晰大理石花紋內(nèi)新血管的形成，其是由生成腫瘤細(xì)胞的原血管生成因子的存在下引起的(例如，見Passaniti，A.，等，Lab.Investig.(1992)，67(4)，519528；Anat.Rec.(1997)，249(1)，63-73；Int.J.Cancer(1995)，63(5)，694-701；Vasc.Biol.(1995)，15(11)，1857-6)。此模型優(yōu)選進(jìn)行3-4天，終點(diǎn)包括從未用抑制劑治療動(dòng)物中排除移植物對(duì)對(duì)照組后新血管生成的肉眼目視/圖象評(píng)分、顯微鏡下微血管密度檢測(cè)和血紅蛋白定量測(cè)定(Drabkin方法)。或者該模型使用bFGF或HGF作為刺激物。
抑制一種或多種致癌的、原致癌的或增殖依賴性或者血管生成受體PTK的蛋白激酶的本發(fā)明的某些化合物，也抑制初生鼠、大鼠或人異種移植腫瘤在小鼠中的生長(zhǎng)，或者抑制鼠模型中的腫瘤轉(zhuǎn)移。實(shí)施例實(shí)施例11-(1-芐基-4-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物1)3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-醇(中間體A)將1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-醇(10g，73.5mmol)懸浮于700ml水中。加入溴(10ml，194mmol)并將所得反應(yīng)混合物加熱至91℃，保持過夜。在冰水上冷卻后，過濾收集固體得到1.508 g的3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-醇，為淡黃色固體。1H NMR(DMSO)8.06(s 1H)，12.25(bs，1H)，14.06(bs，1H)。
3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體B)將3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-醇(中間體A)(15.08g，70.5mmol)懸浮于189ml的磷酰氯中。加入二乙胺(19ml，119.4mmol)并將所得反應(yīng)混合物加熱至106℃，保持2小時(shí)。冷卻至室溫后，除去溶劑并將所得琥珀色漿倒入到300ml冰水中。20分鐘后，用乙醚(500ml×4)萃取水層。將合并的有機(jī)層洗滌，干燥并蒸發(fā)得到6.87g的3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，為淡黃色固體。1H NMR(DMSO)8.857(s 1H)，14.84(bs，1H)；LC/MS(MH+＝233)。
1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體C)將3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體B)(5.0g，21.42mmol)、1-芐基-4-哌啶醇(8.2g，42.83mmol)和三苯基膦(11.23g，42.83mmol)懸浮于250ml四氫呋喃中。該反應(yīng)混合物在冰水浴中冷卻并滴加偶氮二甲酸二乙酯(6.8ml，42.83mmol)。10分鐘后，該反應(yīng)混合物升溫至室溫。攪拌2小時(shí)后，除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯中回收。將有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。粗品通過Biotage快速柱，用二氯甲烷/乙酸乙酯(90∶10)作為流動(dòng)相，得到10.56g的1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。產(chǎn)物純度61％，HPLC保留時(shí)間為12.46分鐘(HPLC條件5至95％ CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中在20分鐘內(nèi)，柱規(guī)格為3.9×150mm，300A)。
1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體D)將1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體C)(9g，純度61％)與二噁烷(100ml)和氫氧化銨(100ml)在壓力容器中混合。此混合物加熱至120℃過夜。除去溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得到1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(CDCl3)1.94(d，J＝11.23Hz，2H)，2.21(m，2H)，2.35(m，2H)，3.04(d，J＝11.48Hz)，3.57(s，2H)，4.71(m，1H)，5.98(s，2H)，7.34(m，5H)，8.33(s，1H)；LC/MS(MH+＝389)。
1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺將1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體D)(4.3g，11.10mmol)、4-苯氧基苯基羥基代硼酸(中間體V)(2.61g，12.21mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.77g，0.67mmol)和碳酸鈉(2.82g，26.65mmol)與乙二醇二甲醚(100ml)和水(50ml)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。除去有機(jī)溶劑并將水層用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯/甲醇(98/2)作為流動(dòng)相，得到2.65g的1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1HNMR(CDCl3)1.99(d，J＝11.02Hz，2H)，2.25(m，2H)，2.47(m，2H)，3.07(d，J＝11.12Hz)，3.59(s，2H)，4.80(m，1H)，5.52(s，2H)，7.07(d，J＝0.67，1H)，7.15(m，3H)，7.37(m，6H)，7.66(d，J＝8.51，2H)，8.37(s，1H)；LC/MS(MH+＝477)。
實(shí)施例23-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1 H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將1-(1-芐基-4-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物1)(1.224g，2.57mmol)、10％鈀碳(1.22g)和甲酸銨(0.81g，12.84mmol)與21ml甲醇混合。室溫下攪拌6小時(shí)后，該反應(yīng)混合物過濾并用熱甲醇洗滌。除去溶劑并將此殘余物在二氯甲烷中回收，并將有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)得到0.77g的3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(CDCl3)2.05(d，J＝12.17Hz，2H)，2.26(m，2H)，2.87(m，2H)，3.29(d，J＝12.76Hz)，4.89(m，1H)，5.54(s，2H)，7.09(m，2H)，7.15(m，3H)，7.39(m，2H)，7.67(d，J＝9.39Hz，2H)，8.37(s，1H)；LC/MS(MH+＝387)。
實(shí)施例31-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽(化合物3)1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體E)將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物2)(199mg，0.515mmol)、1-甲基-4-哌啶酮(70μl，0.566mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(163mg，0.772mmol)和冰醋酸(34mg，0.566mmol)與3ml的1，2-二氯乙烷混合。室溫下攪拌過夜后，加入2ml水，接著加入固體碳酸氫鈉直到pH達(dá)到約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化得到92mg的1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO)1.47(m，2H)，1.72(d，J＝11.75Hz，2H)，1.88(m，4H)，2.14(s，3H)，2.35(m，5H)，2.81(d，J＝11.32Hz，2H)，3.01(d，J＝11.26Hz，2H)，4.62(m，1H)，7.16(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(d，J＝8.69Hz，2H)，8.23(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽將1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(92mg，0.190mmol)溶解于25ml的熱乙酸乙酯中，并加入存在于5ml熱乙酸乙酯中的馬來酸(66mg，0.571mmol)。室溫下放置2小時(shí)后，濾出此固體再干燥得到135mg的1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO)1.87(m，2H)，2.22(m，4)，2.45(m，2H)，2.77(s，3H)，2.18(bm，9H)，5.06(m，1H)，6.11(s，6H)，7.15(m，5H)，7.45(m，2H)，7.67(d，J＝8.51Hz，2H)，8.27(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
實(shí)施例41-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽(化合物4)1-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體F)將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(化合物2)(221mg，0.572mmol)、1-異丙基-4-哌啶酮(89mg，0.63mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(182mg，0.86mmol)和冰醋酸(40μl，0.63mmol)與3ml的1，2-二氯乙烷混合。室溫下攪拌過夜后，加入2ml水，接著加入固體碳酸氫鈉直到pH達(dá)到約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化得到132mg的1-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO)0.99(d，J＝6.54Hz，6H)，1.42(m，2H)，1.72(d，J＝11.41Hz，2H)，1.88(d，J＝9.61Hz，2H)，2.14(s，3H)，2.16(m，6H)，2.66(m，2H)，2.83(d，J＝10.98Hz，2H)，2.98(d，J＝8.25Hz，2H)，4.62(m，1H)，7.16(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(d，J＝8.69Hz，2H)，8.23(s，1H)；LC/MS(MH+＝512)1-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽將1-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體F)(132mg，0.258mmol)溶解于30ml的熱乙酸乙酯中并加入存在于5ml熱乙酸乙酯中的馬來酸(90mg，0.774mmol)。室溫下放置2小時(shí)后，濾出此固體再干燥得到205mg的1-[1-(1-異丙基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO)1.26(d，J＝6.34Hz，6H)，1.90(m，2H)，2.23(m，4H)，2.50(m，2H)，3.53(bm，9H)，5.08(m，1H)，7.16(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(d，J＝8.30Hz，2H)，8.28(s，1H)；LC/MS(MH+＝512)。
實(shí)施例51-[1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽(化合物5)1-[1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體G)將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物2)(350mg，0.906mmol)、1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(198mg，0.996mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(288mg，1.358mmol)和冰醋酸(60μl，0.996mmol)與5ml的1，2-二氯乙烷混合。室溫下攪拌過夜后，加入2ml水，接著加入固體碳酸氫鈉直到pH達(dá)到約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化得到254mg的1-[1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO)1.39(m，13H)，1.75(m，2H)，1.91(m，2H)，2.17(m，2H)，2.35(m，2H)，2.72(m，2H)，3.0(m，2H)，3.63(m，1H)，3.98(m，2H)，4.63(m，1H)，7.16(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(d，J＝8.60Hz，2H)，8.23(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
1-[1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽將1-[1-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(254 mg，0.446mmol)在存在于二氯甲烷中的25ml的10％三氟乙酸中攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入飽和碳酸氫鈉并將所得混合物攪拌30分鐘。分層并將水層用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)得到108mg的1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體GG)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
將1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(108mg，0.230mmol)溶解于25ml的乙醇中并加入存在于5ml熱乙醇中的馬來酸(80mg，0.690mmol)。室溫下放置2小時(shí)后，濾出此固體并干燥得到155mg的1-[1-(4哌啶基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO)1.80(m，2H)，2.42(m，4)，2.51(m，2H)，2.95(m，3H)，3.44(bm，7H)，5.06(m，1H)，6.10(s，6H)，7.15(m，5H)，7.45(m，2H)，7.67(d，J＝8.51Hz，2H)，8.27(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
實(shí)施例61-(反-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，二馬來酸鹽(化合物6)
1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶4-胺(化合物9)(中間體I)將3-(4-苯氧基苯基)-1 H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物15)(3.36g，11.1mmol)、1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)(5.26g，33.3mmol)、三苯基膦(5.81g，22.2mmol)懸浮于130ml四氫呋喃中。該反應(yīng)混合物在冰水浴中冷卻并滴加偶氮二甲酸二乙酯(3.9ml，22.2mmol)。10分鐘后，該反應(yīng)混合物升溫至室溫。攪拌2小時(shí)后，除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯中回收。將有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。粗品通過Biotage急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/乙酸乙酯(由50∶50至10∶90)作為流動(dòng)相，得到3.829g的1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(CDCl3)1.83(m，2H)，1.945(m，2H)，2.05(m，2H)，2.45(m，2H)，3.99(s，4H)，4.86(m，1H)，5.74(bs，2H)，7.09(m，2H)，7.15(m，3H)，7.39(m，2H)，7.66(d，J＝8.70Hz，2H)，8.37(s，1H)；LC/MS(MH+＝444)。
4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(化合物10)(中間體J)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物9)(3.80g，8.57mmol)懸浮于190ml的丙酮中并冷卻至0℃。通過加液漏斗緩慢加入48ml的5.0N鹽酸。除去冰水浴并將反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。除去丙酮并用1.0N氫氧化鈉將水層中和至pH約為10。濾出固體并干燥得到2.926g的4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮。1H NMR(CDCl3)2.39(m，2H)，2.62(m，6H)，5.30(m，1H)，6.08(b s，2H)，7.09(m，2H)，7.15(m，3H)，7.42(m，2H)，7.64(d，J＝8.70Hz，2H)，8.39(s，1H)；LC/MS(MH+＝400)。
1-(反-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體K)和1-(順-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體L)將4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(化合物10)(2.916g，7.30mmol)、4-甲基哌嗪(2.4ml，21.90mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(2.01mg，9.49mmol)和冰醋酸(1.31g，21.90mmol)與147ml的1，2-二氯乙烷混合。室溫下攪拌6小時(shí)后，加入57ml的水，接著加入3.8g的固體碳酸氫鈉。分層并將水層用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層洗滌、干燥并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氨水(90/10/0.2至80/20/0.5)作為流動(dòng)相，得到(A)，0.47g的反-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO)1.49(m，2H)，2.00(m，6H)，2.23(s，3H)，2.59(m，9H)，4.66(m，1H)，7.17(m，5H)，7.44(m，2H)，7.64(d，J＝8.69Hz，2H)，8.23(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
(B)，2.582g的1-(順-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO)1.58(m，2H)，1.68(m，2H)，2.08(m，2H)，2.15(s，3H)，2.28(m，11H)，4.79(m，1H)，7.17(m，5H)，7.44(m，2H)，7.64(d，J＝8.69Hz，2H)，8.23(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
1-(反-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，二馬來酸鹽將反-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.47g，0.972mmol)溶解于140ml的熱乙醇中并加入存在于10ml熱乙醇中的馬來酸(0.40g，2.47mmol)。室溫下放置2小時(shí)后，濾出此固體再干燥得到0.62g of 1-(反-4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO)1.58(m，2H)，2.04(m，6)，2.67(m，3H)，2.79(vbm，9H)，4.70(m，1H)，7.41(s，4H)，7.17(m，5H)，7.44(m，2H)，7.66(d，J＝8.63Hz，2H)，8.24(s，1H)；LC/MS(MH+＝484)。
實(shí)施例71-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽(化合物7)將4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(化合物10)(中間體J)(4.45g)在300mL二氯甲烷中在氮?dú)夥障聰嚢?，同時(shí)加入3.72 mLN-甲基哌嗪和1.92 mL乙酸。30分鐘后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.40g)并將此混合物攪拌過夜。第二天加入2 mLN-甲基哌嗪、1.2 mL乙酸和1.85g三乙酰氧基硼氫化鈉并攪拌過夜。再加入2 mLN-甲基哌嗪、1.2mL乙酸和1.85g三乙酰氧基硼氫化鈉并攪拌過夜。將混合物真空蒸發(fā)，將此殘余物與250 mL水和100 mL 6M鹽酸一起攪拌并放置過夜。此混合物用乙酸乙酯洗滌兩次。將水層堿化(過量的氨水)，用乙酸乙酯萃取并將此萃取物干燥并蒸發(fā)得到3.5g淡棕色膠狀物，其通過急驟色譜純化，用8∶1∶1乙酸乙酯∶乙醇∶三乙胺洗脫，得到1.2g純品，為無色膠狀物。用存在于乙酸乙酯中的0.9g馬來酸處理此膠狀物的乙酸乙酯溶液得到馬來酸鹽，為無定形固體，其經(jīng)收集并用乙酸乙酯洗滌。在空氣中干燥，然后在80℃/20 mbar下干燥，得到1.9g 1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽，為0.8乙酸乙酯溶劑化物，熔點(diǎn)169-170℃。理論值C43.2H51.4N7O14.6C57.5，H5.7，N10.9，實(shí)測(cè)值C57.7，H5.7，N10.9。
實(shí)施例8N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-4-氟-1-苯磺酰胺二馬來酸鹽(化合物8)1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體KA)將3-氨基-4-吡唑基甲腈(26.85g，0.248mol)在甲酰胺(140mL)中的懸浮液在180℃下氮?dú)夥障录訜?小時(shí)。冷卻時(shí)產(chǎn)生沉淀，其經(jīng)過濾收集并用水洗滌。將此固體凍干得到1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺，為黃褐色粉末(87％，29.25g，0.217mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)13.34(br s，1H)，8.13(s，1H)，8.07(s，1H)，7.56(br s，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)Rf0.16。
3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體LA)將4-氨基吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體KA)(11.75g，0.087mol)和N-碘代琥珀酰亞胺(25.45g，0.113mol)在二甲基甲酰胺(300mL)中的混合物在50℃下加熱24小時(shí)。再加入N-碘代琥珀酰亞胺(3.92g，0.017mol)，并在50℃下再繼續(xù)加熱24小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并通過減壓濃縮將體積降低1/3。將水(500mL)加入到所得漿狀物中得到暗棕色沉淀，其經(jīng)過濾收集，用水和乙醇洗滌并真空干燥得到3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺，為淡黃色粉末(97％，22g，0.084mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)13.81(s，1H)，8.17(s，1H)，2.73(s，1H)，2.57(s，1H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)Rf0.4。
1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)將1，4-環(huán)己烷二酮單亞乙基縮酮(125g，0.8mol)的甲醇(21)溶液冷卻至0℃，然后在30分鐘內(nèi)分批加入硼氫化鈉(30.3g，0.8mol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3小時(shí)并減壓除去溶劑。黃色漿狀物再溶解于二氯甲烷/異丙醇(3∶1，1.51)并用2N氫氧化鈉洗滌(1L)。水層再用二氯甲烷/異丙醇(3∶1)萃取并將合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。收集的1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇，為無色油狀物(65％，82.4g，0.65mol)1H NMR(CDCl3400MHz)3.95(m，4H)，3.79(m，1H)，1.84(m，4H)，1.60(m，4H)。TLC(乙酸乙酯/庚烷＝1∶1)Rf0.16。
1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體N)在室溫、氮?dú)夥障聦?-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體LA)(11g，0.042mol)懸浮于四氫呋喃(500mL)中。將1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)(19.98g，0.126mol)的四氫呋喃(50mL)溶液，并隨后將三苯基膦(22.1g，0.084mol)加入到此懸浮液中。將此懸浮液冷卻至0℃，然后緩慢加入偶氮二甲酸二乙酯(14.67g，0.084mol)。在0℃攪拌此反應(yīng)混合物15分鐘后，其升溫至室溫，保持1小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘余物溶解于乙酸乙酯(300-400mL)并放置過夜。形成沉淀，其經(jīng)過濾收集，用乙酸乙酯洗滌，并凍干得到1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺，為淡黃色固體(54％，9.12g，0.023mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.19(s，1H)，4.70(m，1H)，3.90(m，4H)，2.13(m，2H)，1.74(m，6H)。TLC(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)Rf0.61。
N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(中間體P)在氮?dú)夥障拢?5分鐘內(nèi)將雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉(1.0M四氫呋喃溶液，270mL，0.27mol)溶液滴加到4-溴-2-氟苯胺(24.78g，0.130 mol)的四氫呋喃(250 mL)溶液中。再過15分鐘后，分批加入二碳酸二叔丁基酯(34.12g，0.156mol)(注意觀察到輕微的放熱)并繼續(xù)攪拌4小時(shí)。該反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮并將此殘余物在乙酸乙酯(300mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(150mL)之間分配。水層進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×200mL)萃取并將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。通過柱色譜在硅膠上用10％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度純化得到淡黃色蠟狀固體(中間體O)(79％，30.0g)，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.51(9H，s)，7.22(1H，m)，及7.24(2H，m)。
被保護(hù)的溴苯胺(中間體O)(54.0g，0.186mol)、雙-頻哪醇合二硼烷(pinacolatodiborane)(56.8g，0.223mol)、醋酸鉀(54.7g，0.558mol)和[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(4.65g，5.58mmol)在二甲基甲酰胺(1L)中的溶液在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將二甲基甲酰胺減壓除去并將所得深色固體殘余物溶解于二氯甲烷(500mL)。通過硅膠墊過濾除去無機(jī)殘余物并將此濾液通過柱色譜在硅膠上純化，用10％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脫得到產(chǎn)物，為黃色粘稠油狀物，其放置時(shí)產(chǎn)生結(jié)晶(92％，56.5g)，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.33(12H，s)，1.53(9H，s)，6.82(1H，br s)，7.46(1H，d)，7.55(1H，br d)，及8.12(1H，br t)。
N-{4-[4-氨基-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁基酯(中間體Q)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體N)(6.5g，0.016mol)、N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(中間體P)(24.3g，0.024mol)，四(三苯基膦)鈀(0)(749mg，0.648mmol)和碳酸鈉(4.29g，0.04mol)在脫氣水(50mL)和二甲氧基乙烷(300mL)中的懸浮液，在80℃下加熱18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，然后用乙酸乙酯(500mL)和鹽水(500mL)稀釋。形成固體，其經(jīng)過濾收集，用乙酸乙酯洗滌并真空干燥得到N-{4-[4-氨基-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}氨基甲酸叔丁基酯，為黃褐色固體(81％，6.38g，0.013mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)9.19(s，1H)，8.23(s，1H)，7.83(t，1H)，7.43(m，2H)，4.78(m，1H)，3.91(m，4H)，2.24(m，2H)，1.79(m，6H)，1.49(s，9H)。TLC(二氯甲烷/甲醇＝95∶5)Rf0.42。
4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(中間體R)將叔丁基N-{4-[4-氨基-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}氨基甲酸酯(中間體Q)(6.38g，0.013mol)懸浮于丙酮(400mL)中并冷卻至室溫。向此懸浮液緩慢加入5M鹽酸(96mL)。該反應(yīng)混合物再在60℃下加熱3小時(shí)并減壓濃縮。用碳酸氫鈉水溶液將剩余的酸性層調(diào)節(jié)至pH8。形成沉淀，其經(jīng)過濾收集，用水洗滌，并凍干得到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮，為黃褐色固體(91％，4.1g，0.012mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.24(s，1H)，7.20(m，2H)，6.89(m，1H)，5.48(s，1H)，5.21(m，1H)，2.69(m，2H)，2.37(m，4H)，2.20(m，2H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷)＝4∶1；MH+341。
順-和反-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體S和T)將N-甲基哌嗪(3.6g，0.036mol)和乙酸(2.17g，0.036mol)加入到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(中間體R)(4.1g，0.012mol)在二氯乙烷(200mL)中的懸浮液中。然后向該反應(yīng)混懸液中分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.32g，0.016mol)。該反應(yīng)混合物室溫下攪拌18小時(shí)。在5天內(nèi)分兩批再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.79g，0.084mol和1.28g，0.06mol)。將該反應(yīng)混合物過濾，用二氯乙烷(100mL)洗滌并將此濾液減壓濃縮得到3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為黃色固體(14.5g，0.034mol)。將黃色固體純化并將順/反異構(gòu)體通過急驟柱色譜在硅膠上分離，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(93∶5∶2)作為洗脫劑，得到反式3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(流出較慢組分)，為白色固體(115mg，0.27mmol)。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)8.19(s，1H)，7.18(m，2H)，6.88(m，1H)，5.46(s，2H)，4.60(m，1H)，2.35(br m，4H)，2.14(s，3H)，1.95(brm，6H)，1.44(m，2H)，1.26(m，4H)，0.86(m，2H)。TLC(二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝95∶5)Rf0.31。
還收集到順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(1.1g，2.59mmol)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.19(s，1H)，7.20(m，2H)，6.90(m，1H)，5.47(s，2H)，4.75(m，1H)，3.40(m，4H)，2.23(m，6H)，2.17(m，2H)，1.98(s，3H)，1.61(m，4H)；TLC(二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝95∶5)Rf0.37。
N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-4-氟-1-苯磺酰胺二馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體T)(107mg，0.252mmol)和4-氟苯磺?；?49mg，0.252mmol)在吡啶(2.5mL)中的混合物在40℃下加熱20小時(shí)。在24小時(shí)內(nèi)再加入4-氟苯磺酰基氯(15mg，0.063mmol和10mg，0.051mmol)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到桔黃色油狀物(220mg，0.378mmol)。將粗品油狀物通過制備RP-HPLC(Gilson C18)純化，用醋酸銨梯度/乙腈梯度洗脫得到N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-4-氟-1-苯磺酰胺(中間體U)，為白色固體(220mg)。將馬來酸(55mg，0.474mmol)和游離堿N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-4-氟-1-苯磺酰胺(92mg，0.158mmol)溶解于熱乙醇(3mL)。冷卻時(shí)產(chǎn)生沉淀，其經(jīng)過濾收集，并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-4-氟-1-苯磺酰胺二馬來酸鹽，為白色固體(100mg，0.172mmol)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)10.42(s，1H)，8.23(s，1H)，7.86(m，2H)，7.41(m，5H)，6.16(s，4H)，4.67(br m，1H)，2.62(br m，6H)，2.01(br m，6H)，1.56(b rm，2H)；MH+583.6。
實(shí)施例9(中間體I)1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(化合物9，中間體I)4-苯氧基苯基羥基代硼酸(中間體V)向4-苯氧基溴苯(98.2g，0.39mol)的干燥THF(800mL)溶液中，在氮?dú)夥障略?78℃下滴加n-BuLi(2.5M己烷溶液)(172mL，0.43mol)。觀察到溫度升高至-65℃。加畢，此混合物在-78℃下攪拌15分鐘。在30分鐘內(nèi)，滴加硼酸三異丙基酯(109.2mL，0.473mol)。加畢，觀察到形成懸浮液。在1小時(shí)內(nèi)將此混合物升溫至0℃，在0℃下攪拌4小時(shí)。通過加入水(300mL)使內(nèi)部溫度＜20℃(需要冰浴)停止該反應(yīng)。此混合物升溫至室溫過夜，然后蒸發(fā)至干。將殘余物懸浮于水(600mL)并通過小心地加入濃鹽酸進(jìn)行酸化。通過過濾收集所得沉淀并在45℃下真空干燥。將此固體磨為細(xì)粉并用石油醚研磨(40-60℃)。將此淡色固體過濾并干燥得到4-苯氧基苯基羥基代硼酸(68.8g，83％)。1H NMR(250MHz，d6-DMSO)7.99(1H，m)，7.91(1H，t)，7.83(1H，d)，7.4(2H，m)，7.14(1H，m)，6.92-7.07(5H，m)。微量分析理論值C(71.4％)，H(5.45％)，實(shí)測(cè)值C(70.25％)，H(4.7％)1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)將1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-酮(150g，0.96mol)與MeOH(1200mL)在氮?dú)夥障聰嚢柚钡桨l(fā)生溶解。干冰(drykold)/丙酮浴中冷卻至-5℃并在2小時(shí)內(nèi)分批用NaBH4(72.6g，1.82mol)處理(T＜10℃)。加畢，此混合物冷卻至-10℃并再使其升溫至室溫。室溫下攪拌過夜。將所得混合物蒸發(fā)并用冰冷的5N NaOH(400mL)處理，用CH2Cl2(2×500mL)萃取，接著用4∶1二氯甲烷∶異丙醇(2×250mL)萃取。合并的萃取物用鹽水(2×200mL)洗滌，干燥過夜(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到無色油狀物。將其進(jìn)一步真空干燥得到1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(141.8g，93％收率)1H NMRCDCl3(250MHz)3.91(4H，m)，3.81(1H，m)，1.21-1.88(8H，m，脂族H的)。
3-溴-4-氯-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體W)在0℃下在氮?dú)夥障孪?-溴-4-氯吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體B)(7.5g，32mmol)、1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)(15.17g，96mmol)、三苯基膦(16.86g，64mmol)的THF(275mL)溶液中加入存在于THF(50mL)中的偶氮二甲酸二乙酯(11.14g，64mmol)。該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，升溫至室溫并再在室溫下攪拌3小時(shí)。將該反應(yīng)混合物真空濃縮并溶解于熱庚烷/EtOAc/DCM(5∶1∶5)。進(jìn)行急驟硅膠柱色譜，用庚烷、庚烷/EtOAc(5/1)然后用庚烷/EtOAc(4/1)洗脫得到固體，其用庚烷研磨，并將此固體過濾移出得到8.2g的3-溴-4-氯-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，為白色固體(69％)[在1∶1庚烷EtOAc中Rf＝0.5]1HNMR(400MHz，d6-DMSO)8.89(1H，s)，4.92(1H，m)，3.90(4 H，m)，2.16(2H，m)，1.96(2H，m)，1.81(6H，m)HPLCTr＝17.11分鐘，96.6％。
3-溴-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體X)將3-溴-4-氯-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(中間體W)(8.2g，21mmol)、濃氨水(100mL)和二噁烷(100mL)在Parr壓力容器中在120℃下加熱20小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-溴-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺固體(4.7g，61％)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.21(1H，s)，4.71(1H，m)，3.90(4H，m)，2.11(2H，m)，1.72-1.88(6H，m)HPLCTr＝11.84分鐘，92.1％。
1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺將3-溴-1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體X)(4.0g，11.3mmol)、4-苯氧基苯基羥基代硼酸(中間體V)(2.66g，12mmol)、碳酸鈉(2.87g，27mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.78g，0.6mmol)在二甲氧基乙烷(120mL)/水(60mL)的混合物中在85℃氮?dú)夥障录訜?小時(shí)。冷卻至室溫并放置72小時(shí)。過濾沉淀的固體并用水和乙醚(各100ml)洗滌。真空干燥3小時(shí)得到4.2g的1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺，為米色固體(87％)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.24(1H，s)，7.67(2H，m)，7.45(2H，m)，7.19(5H，m)，4.78(1H，m)，3.90(4H，m)，2.25(2H，m)，1.71-1.84(6H，m)，質(zhì)譜MH+＝444.21-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺。
第二路線將在200mL干燥的二甲基乙酰胺中的4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(化合物15)(4.9g)在氮?dú)夥障掠?0％氫化鈉(2.0g)處理并攪拌30分鐘。加入1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基-1-苯磺酸酯(中間體Y)(15g)并將此混合物在105℃下加熱42小時(shí)。真空蒸發(fā)并用水處理得到固體，其經(jīng)收集并用水充分洗滌然后在空氣中干燥。將此固體用乙醚(6×120mL)煮沸并將此經(jīng)過濾的溶液蒸發(fā)。用丙酮處理得到1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺，為米白色固體，其經(jīng)收集并用丙酮洗滌，然后在空氣中干燥，熔點(diǎn)200-202.5℃。理論值C25H25N5O3C67.7，H5.6，N15.8；實(shí)測(cè)值C67.6，H5.8，N15.4。
實(shí)施例104-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(化合物10，中間體J)向在丙酮(200mL)中的1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(4-苯氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(化合物9)(4.2g，95mmol)中滴加HCl(5N，50mL)。室溫下攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)丙酮并用氫氧化鈉(5N，60mL)堿化。用EtOAc(3×200mL)萃取。干燥、過濾并蒸發(fā)得到固體，其用EtOAcEt2O(1∶20)研磨并過濾得到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮，為霜狀固體(3.4g，90％)，熔點(diǎn)203-205℃。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.28(1H，s)，7.66(2H，m)，7.44(2H，m)，7.08-7.20(5H，m)，6.1-7.3(2H，bs)，5.26(1H，m)，2.71(2H，m)，2.41(4H，m)，2.24(2H，m)HPLCTr＝15.43分鐘，95％。
實(shí)施例114-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)己基-1-哌嗪甲酸叔丁基酯(化合物11和12)向4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(化合物10)(2.0g，5mmol)和叔丁氧基羰基哌嗪(2.8g，15 mmol)的二氯乙烷(200 mL)溶液中，加入冰醋酸(0.9g，15 mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.59g，7.5 mmol)。室溫氮?dú)夥障聰嚢?0小時(shí)。用NaOH溶液(2.5N，200mL)停止反應(yīng)。分離有機(jī)層并用二氯甲烷(2×100mL)萃取水層。用水洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)并過濾。將此溶液蒸發(fā)得到紅色油狀物，其進(jìn)行急驟硅膠柱色譜，用乙酸乙酯至10％ MeOH/乙酸乙酯(2.5％甲醇的增量)。合并相應(yīng)于快速流出物質(zhì)的餾份(在9∶1 EtOAc∶MeOH中Rf＝0.27)并蒸發(fā)得到4-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)己基-1-哌嗪甲酸叔丁基酯，為白色固體(1.48g，53％)，熔點(diǎn)170-172℃，鑒定為順式非對(duì)映異構(gòu)體(化合物11)1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.23(1H，s)，7.65(2H，d，J＝8.8Hz)，7.43(2H，m)，7.12-7.20(5H，m)，4.82(1H，m)，3.34(4H，m)，2.40(4H，m)，2.30(3H，m)，2.04(2H，m)，1.60-1.72(4H，m)，1.39(9H，s)。HPLCTr＝15.74分鐘，98.16％，質(zhì)譜MH+＝570.1。
合并相應(yīng)于流出較慢的物質(zhì)的餾份(在9∶1 EtOAc∶MeOH中Rf＝0.18)并蒸發(fā)得到4-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)己基-1哌嗪甲酸叔丁基酯，為霜狀固體(0.5g，18％)，熔點(diǎn)178-179℃，鑒定為反式非對(duì)映異構(gòu)體(化合物12)1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.23(1H，s)，7.65(2H，d，J＝8.4Hz)，7.42(2H，m)，7.11-7.20(5H，m)，4.63(1H，m)，3.34(4H，m)，2.47(5H，m)，1.89-2.06(6H，m)，1.34-1.55(11H，m)HPLCTr＝15.29分鐘，98.15％，質(zhì)譜MH+＝570.1。
實(shí)施例12順-3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌嗪基環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽(化合物13)在0℃下在氮?dú)夥障?，向二氯甲?35mL)中的順-叔丁基4-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶1-基]環(huán)己基-1-哌嗪甲酸酯(化合物11)(1.4g，2.46mmol)中滴加TFA(6mL)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌48小時(shí)，用NaOH(5N水溶液，50mL)停止反應(yīng)并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發(fā)得到無色油狀物(1.23g)，其溶解于EtOAc(40mL)。向此溶液中加入馬來酸(913mg)的EtOAc(10mL)溶液。在氮?dú)饬飨逻^濾所得固體并在真空下再干燥2小時(shí)。這樣得到1.8g(90％)的順-3-(4苯氧基苯基)-1-(4-哌嗪基環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽，為白色固體熔點(diǎn)173-175℃。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.26(1H，s)，7.67(2H，d，J＝8.8Hz)，7.42(2H，m)，7.12-7.21(5H，m)，6.19(6H，s)，4.86(1H，m)，3.18(4H，m)，2.89(4H，m)，2.67(1H，m)，2.28(2H，m)，2.05(2 H，m)，1.7 4-1.80(4H，m)HPLCTr＝12.52分鐘，100％，質(zhì)譜MH+＝470.3，微量分析C39H43N7O13理論值C57.3％，H5.3％，N12.0％；實(shí)測(cè)值C57.0％，H5.3％，N11.97％。
實(shí)施例13反式-3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌嗪基環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽(化合物14)在0℃下在氮?dú)夥障?，向在二氯甲?15mL)中的反-叔丁基4-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)己基-1-哌嗪甲酸酯(化合物12)(0.5g，0.88mmol)中滴加TFA(4 mL)。室溫下攪拌48小時(shí)。用氫氧化鈉溶液(5N，25 mL)停止反應(yīng)并用二氯甲烷(3×25mL)萃取。用水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發(fā)得到米色固體(0.39g)，其溶解于EtOAc(20mL)。向此溶液中加入馬來酸(290mg)的EtOAc(5mL)溶液。在氮?dú)饬飨逻^濾所得固體并在真空下再干燥2小時(shí)。這樣得到0.6g(83％)的反-3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌嗪基環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺三馬來酸鹽，為白色固體熔點(diǎn)153-155℃。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.25(1H，s)，7.65(2H，m)，7.43(2H，m)，7.11-7.21(5H，m)，6.17(6H，s)，4.69(1H，m)，3.20(4H，m)，2.97(4H，m)，2.84(1H，m)，2.04-2.09(6H，m)，1.59(2H，m)。HPLCTr＝12.65分鐘，100％，質(zhì)譜MH+＝470.1微量分析理論值C39H43N7O13C57.3％ H5.3％ N12.0％，實(shí)測(cè)值C57.1％ H5.4％ N12.10％。
實(shí)施例144-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(化合物15)1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)在氮?dú)夥障聦?，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-酮(150g，0.96mol)與MeOH(1200 mL)一起攪拌直到發(fā)生溶解。將該反應(yīng)混合物在干冰(drykold)/丙酮浴中冷卻至-5℃并在2小時(shí)內(nèi)分批用NaBH4處理(72.6g，1.82mol)(T＜10℃)。加畢，將此混合物冷卻至-10℃，然后使其升溫至室溫并室溫下攪拌過夜。將所得混合物蒸發(fā)并用冰冷的5N NaOH(400mL)處理，并用二氯甲烷(2×500mL)萃取，接著用4∶1二氯甲烷∶異丙醇(2×250mL)萃取。合并的萃取物用鹽水洗滌(2×200mL)，干燥過夜(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到無色油狀物。將其進(jìn)一步真空干燥(除去殘余的異丙醇)得到1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(141.8g，93％收率)1H NMRCDCl3(250MHz)3.91(4H，m)，3.81(1H，m)，1.21-1.88(8H，m，脂族H的)。
1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基-1-苯磺酸酯(中間體Y)向攪拌的1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(中間體M)(99.8g，0.63mol)的吡啶(450mL)溶液中，在0℃在氮?dú)夥障路峙尤爰妆交酋Ｂ?132.4g，0.69mol)使T＜2℃。加畢，此混合物緩慢升溫至室溫并室溫下攪拌過夜。用水(750mL)處理并用乙酸乙酯(500mL，然后2×250mL)萃取。合并的萃取物用3N HCl(3×300mL)、鹽水(300mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。過濾并蒸發(fā)得到淡黃色油狀物(200g粗品)。將此油狀物用石油醚(40-60℃)(200mL)處理并刮劃以誘發(fā)固體形成。過濾1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基1-苯磺酸酯，用石油醚(40-60℃)(200mL)洗滌并真空干燥。收率＝181.0g，92％。
1，1-二氰基-2-羥基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯(中間體Z)將4-苯氧基苯甲酸(48g)加入到100mL亞硫酰氯中并在溫和回流下加熱1小時(shí)。蒸餾除去亞硫酰氯，殘余的油狀物溶解于甲苯，并在80℃/20毫巴下除去揮發(fā)性物質(zhì)。所得酰氯溶解于200mL甲苯和35mL四氫呋喃中。加入14.8g丙二腈，并將此溶液在-10℃攪拌，同時(shí)在0℃以下加入存在于150mL甲苯中的57.9g二異丙基乙基乙胺。再在0℃下1小時(shí)后，將此混合物在20℃攪拌過夜。將胺鹽酸鹽過濾移出并將此濾液真空蒸發(fā)，在乙酸乙酯中回收此殘余物并用1.25M硫酸洗滌，然后用鹽水洗滌并用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)得到半固體殘余物，將其用少量乙酸乙酯處理得到4.1g純品，為白色固體熔點(diǎn)160-162℃。將此濾液蒸發(fā)得到56.5g(96％)的1，1-二氰基-2-羥基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯，為灰棕色固體，其純度足以符合進(jìn)一步使用的要求。1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.18(寬s，1H)，7.62(d，2H)，7.42(m，2H)，7.19(m，1H)，7.07(d，2H)，6.94(d，2H)。
1，1-二氰基-2-甲氧基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯(中間體AA)將1，1-二氰基-2-羥基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯(中間體Z)(56.5g)在780mL乙腈和85mL甲醇中，在氮?dú)夥障?，?℃下攪拌，同時(shí)加入52.5mL二異丙基乙胺，然后加入150mL 2M三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷的THF溶液。在20℃下攪拌2天后，加入2g硅膠進(jìn)行色譜沒有注意到再放出氮?dú)?。將此棕紅色溶液真空蒸發(fā)，殘余物溶解于乙酸乙酯，并用水充分洗滌，然后用鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。殘余物用乙醚(3×250mL)萃取，從不溶性油狀物中傾析。蒸發(fā)醚萃取物得到22.5g的1，1-二氰基-2-甲氧基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯，為淡桔黃色固體，通過TLC(3∶2乙酸乙酯∶環(huán)己烷)檢測(cè)其幾乎是純的。不溶性油狀物通過急驟色譜純化得到15.0g橘紅色油狀物。合并的收率(63％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)7.71(d，2H)，7.48(m，2H)，7.29(m，1H)，7.16(m，4H)，3.93(s，3H)。
3-氨基-4-氰基-5-(4-苯氧基苯基)吡唑(中間體AB)將1，1-二氰基-2-甲氧基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯(中間體AA)(22.5g)和1，1-二氰基-2-甲氧基-2-(4-苯氧基苯基)乙烯油狀物(15g)用18mL肼水合物的25mL乙醇溶液處理，并在蒸汽浴上加熱1小時(shí)，加入15mL乙醇，接著加入10mL水。收集沉淀的固體并用4∶1乙醇∶水洗滌，然后在空氣中干燥得到3-氨基-4-氰基-5-(4-苯氧基苯基)吡唑，為淡桔黃色固體30.0g(80％)熔點(diǎn)187-188.5℃。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)12.11(寬s，1H)，7.80(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，1H)，7.09(m，4H)，6.47(寬s，2H)。理論值C16H12N4O，C 69.6，H4.3，N20.3；實(shí)測(cè)值C69.5，H4.4，N 20.2。
4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶將3-氨基-4-氰基-5-(4-苯氧基苯基)吡唑(中間體AB)(29.5g)懸浮于300mL甲酰胺中并在在氮?dú)夥障略?80℃加熱4小時(shí)，冷卻至30℃，加入300mL水并收集固體，用水然后用甲醇充分洗滌并在空氣中干燥得到24.6g純品(80％)的4-氨基3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶熔點(diǎn)267-269℃，為淡棕色-灰色固體。理論值C17H13N5OC67.3，H4.3，N23.1；實(shí)測(cè)值C67.0，H4.4，N23.1。
實(shí)施例15
4-氨基-1-環(huán)戊基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(化合物16)將4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(化合物15)(0.91g)在50mL干燥二甲基乙酰胺中在25℃氮?dú)夥障聰嚢?，同時(shí)加入60％氫化鈉(0.20g)。攪拌30分鐘后，加入溴代環(huán)戊烷(0.8mL)并將此混合物攪拌過夜。真空蒸發(fā)后，殘余物用水處理并用乙酸乙酯萃取。進(jìn)行急驟色譜(3∶2環(huán)己烷∶乙酸乙酯)純化得到0.36g的1-環(huán)戊基-4-(環(huán)戊基氨基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，為無色油狀物。1H n.m.r.(DMSO)8.319(s，1H)，7.65-7.69(m，2H)，7.40-7.48(m，2H)，7.09-7.23(m，5H)，5.926/5.955(d，1H)，5.17-5.29(五重峰，1H)，4.44-4.52(m，1H)，1.86-2.12(m，8H)，1.39-1.72(m，8H)。
用乙酸乙酯進(jìn)一步洗脫得到4-氨基-1-環(huán)戊基-3-(4-苯氧基苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。用甲基叔丁基醚重結(jié)晶得到無色針狀物熔點(diǎn)134.7-135.6℃(0.2g，18％)。理論值C22H21N5O C71.2，H5.7，N18.9；實(shí)測(cè)值C71.05，H5.7，N18.8。1H n.m.r.(DMSO)8.237(s，1H)，7.64-7.68(m，2H)，7.40-7.47(m，2H)，7.10-7.22(m，5H)，6.85(特寬s，2H)，5.17-5.30(五重峰，1H)，1.67-2.09(m，8H)。
實(shí)施例163-(4-苯氧基苯基)-1-(四氫吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(化合物17)將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(化合物15)(0.97g)在33mL干燥二甲基乙酰胺中在氮?dú)夥障聰嚢?，同時(shí)加入60％氫化鈉(0.22g)。30分鐘后加入四氫吡喃-4-基甲苯磺酸酯(1.0g)并將此混合物在105℃下加熱4小時(shí)，然后在135℃下加熱3.5小時(shí)。真空蒸發(fā)并用水處理得到淡棕色固體，其經(jīng)收集并用水充分洗滌然后在空氣中干燥。在19∶1乙酸乙酯∶三乙胺中進(jìn)行急驟色譜得到0.22g(18％)的3-(4-苯氧基苯基)-1-(四氫吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺熔點(diǎn)187-187.5℃。理論值C22H21N5O2C68.2，H5.4，N 18.1；實(shí)測(cè)值C 68.1，H 5.5，N18.0。
實(shí)施例17順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽(化合物18)和反-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽(化合物19)苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮(中間體AL)將4-溴二苯酮(2.97g，0.011mol)、乙硼烷頻哪醇酯(diboronpinacol ester)(3.47g，0.014mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.28g，0.00034mol)和醋酸鉀(3.34g，0.034mol)在N，N-二甲基甲酰胺(65mL)中的混合物，在80℃下氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(50mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其通過急驟色譜純化，在硅膠上用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮(2.01g，0.0065mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)7.85(d，2H)，7.71(m，5H)，7.56(d，2H)，1.32(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.364-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(中間體AK)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(中間體N)(13.12g，32.7mmol)懸浮于丙酮(240mL)并將此混合物冷卻至0℃。滴加5N鹽酸(200mL)，在加入期間保持溫度低于4℃。加畢，混合物升溫至室溫并攪拌18小時(shí)。濾出剩余的固體，并用飽和碳酸氫鈉水溶液中和此濾液。沉淀通過過濾收集并用水洗滌并真空干燥得到4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(8.20g，32.8mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.23(s，1H)，5.18(m，1H)，2.64-2.73(m，2H)，2.26-2.37(m，4H)，2.17-2.30(m，2H)。
順-和反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AC和AD)將4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(中間體AK)(1.32g，0.0037mol)、N-甲基哌嗪(1.11g，0.011mol)和乙酸(0.66g，0.011mol)在1，2-二氯乙烷(50mL)中的混合物在40℃下攪拌10分鐘，并立即加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.09g，0.0052mol)。將此混合物在室溫氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)，并加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.25g，0.0012mol)。此混合物攪拌再攪拌48小時(shí)，減壓除去溶劑并將此殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(80mL)和氯仿(50mL)之間分配。分離有機(jī)層并將水層進(jìn)一步用氯仿(3×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑得到黃色油狀物。此化合物在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)一步純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(88∶11∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.93g，0.0021mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.18(s，1H)，4.71(m，1H)，2.38-1.9(m，13H)，2.17(s，3H)，1.63-1.5(m，4H)；TLC(二氯甲烷/三乙胺＝9∶1)Rf0.24和反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.38g，0.00086mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.18(s，1H)，4.55(m，1H)，2.38-1.9(m，15H)，2.15(s，3H)，1.42(m，2H)；TLC(二氯甲烷/三乙胺＝9∶1)Rf0.11。
順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽將苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮(中間體AL)(0.241g，0.00078mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AC)(0.30g，0.00068mol)、四(三苯基膦)鈀(0.047g，0.000041mol)和碳酸鈉(0.18g，0.0017mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(10mL)和水(5mL)的混合物中，在80℃下氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和乙酸乙酯之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(95∶4∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-{4-[4-氨基-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基)]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-]-苯基}(苯基)甲酮，為白色固體(0.195g，0.0004mol)。其溶解于回流的乙醇(17mL)中并加入預(yù)熱的馬來酸(0.137g，0.0018mol)溶液。此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽，為白色固體(0.221g，0.0003mol)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)8.28(s，1H)，7.90(d，2H)，7.83(m，4H)，7.73(t，1H)，7.61(m，2H)，6.15(s，4H)，4.88(m，1H)，3.1(br，9H)，2.71(s，3H)，2.28(m，2H)，2.07(m，2H)，1.74(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.63min。MSMH+496。
反-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽類似的方法用于反式異構(gòu)體得到反-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮二馬來酸鹽，為白色固體(0.155g，0.0002mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.27(s，1H)，7.90(d，2H)，7.83(m，4H)，7.73(t，1H)，7.61(m，2H)，6.17(s，4H)，4.77(m，1H)，3.1(br，9H)，2.68(s，3H)，2.05(br，6H)，1.61(br，2H)RP-HPLC(Hypersil C18，5m，100A，25cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt12.59min。MSMH+496。
實(shí)施例18順-3-(4-苯氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽(化合物20)N-苯基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(中間體AE)將N，N-(4-溴苯基)-苯基胺(0.60g，0.0024mol)、乙硼烷頻哪醇酯(0.74g，0.0029mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.059g，0.000073mol)和醋酸鉀(0.71g，0.0073mol)在N，N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(50mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相，得到N-苯基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.33g，0.0011mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.42(s，1H)，7.51(d，2H)，7.27(m，2H)，7.12(d，2H)，7.01(d，2H)，6.83(t，1H)，1.27(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.54順-3-(4-苯氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽將N-苯基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(中間體AE)(0.33g，0.0011mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AC)(0.43g，0.00097mol)、四(三苯基膦)鈀(0.0067g，0.000058mol)和碳酸鈉(0.26g，0.0024mol)在乙二醇二甲基醚(16mL)和水(8mL)的混合物中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓蒸發(fā)得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(92∶7∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到3-(4-苯氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.400g，0.00074mol)。其溶解于回流的乙醇(17mL)中并加入預(yù)熱的馬來酸(0.342g，0.003mol)的乙醇(8mL)溶液。將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-3(4-苯氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽(0.44g，0.00053mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.45(s，1H)，8.23(s，1H)7.52(d，2H)，7.28(m，2H)，7.20(m，4H)，6.89(t，1H)，6.19(s，6H)，4.83(m，1H)，3.1(br，9H)，2.72(s，3H)，2.28(m，2H)，2.07(m，2H)，1.74(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.12min。MH+483。
實(shí)施例19順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽(化合物21)和反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺馬來酸鹽(化合物2 2)5-溴-2-苯氧基吡啶(中間體AF)將苯酚(1.99g，0.021mol)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液冷卻至0℃并立即加入在石蠟中的氫化鈉(0.89g，0.022mol)的60％混懸液。此混合物在此溫度下攪拌10分鐘并立即加入2，4-二溴吡啶。此混合物升溫至室溫同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢?2小時(shí)并在70℃下加熱24小時(shí)。減壓除去溶劑；此殘余物溶解于乙酸乙酯(150mL)中并飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)、鹽水(80mL)洗滌，用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)。殘余物通過制備RP-LC/MS純化(Gilson-Micromass C18，5m，130A，21cm，0％-100％乙腈-0.1M醋酸銨在9分鐘內(nèi)，25mL/min)得到2-溴-5-苯氧基吡啶，為黃色油狀物(1.40g，0.0056mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.28(s，1H)，8.07(d，1H)，7.45(t，2H)，7.25(t，1H)，7.16(d，2H)，7.04(d，1H)；MSMH+2502-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶(中間體AG)將5-溴-2-苯氧基吡啶(1.40g，0.0056mol)、乙硼烷頻哪醇酯(中間體AF)(1.71g，0.0067mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.137g，0.00017mol)和醋酸鉀(1.65g，0.0168mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(40mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶9)作為流動(dòng)相，得到2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-吡啶，為白色固體(純度93％(HPLC)，1.20g，0.004mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.36(s，1H)，8.03(d，1H)，7.45(t，2H)，7.25(t，1H)，7.16(d，2H)，7.01(d，1H)，1.30(s，12H)；MSMH+2981-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AH)將2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶(中間體AG)(1.1g，0.0037mol)、1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-吲哚-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體N)(1.29g，0.0032mol)、四(三苯基膦)鈀(0.22g，0.00019mol)和碳酸鈉(0.85g，0.008mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(40mL)和水(20mL)的混合物中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并將乙二醇二甲基醚減壓除去。通過過濾收集沉淀，用水洗滌1次，用乙腈洗滌2次，用乙醚洗滌2次，得到1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為米白色固體(1.03g，0.0023mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.36(s，1H)，8.24(s，1H)，8.03(d，1H)，7.45(t，2H)，7.22(m，3H)，7.16(d，1H)，4.81(m，1H)，3.93(s，4H)，2.24(m，2H)，1.88(m，6H)；MSMH+4454-[4-氨基-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(中間體AI)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AH)(1.00g，0.0022 mol)在丙酮(20mL)中研磨，并滴加5N鹽酸溶液。此混合物室溫下攪拌20小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液中和。通過過濾收集沉淀，用水洗滌兩次并干燥得到4-[4-氨基-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮，為米白色固體(純度94％(HPLC)，0.90g，0.0022mol))1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.36(s，1H)，8.24(s，1H)，8.07(d，1H)，7.45(t，2H)，7.22(m，3H)，7.16(d，1H)，5.27(m，1H)，2.74(m，2H)，2.35(m，6H)；RP-HPLC(C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.29 min。
順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽和反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺馬來酸鹽將4-[4-氨基-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(中間體AI)(0.90g，0.0022mol)、N-甲基哌嗪(0.676g，0.0067mol)和乙酸(0.405g，0.0067mol)在1，2-二氯乙烷(40mL)中的混合物攪拌10分鐘，并立即加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.62g，0.0029mol)。將此混合物室溫下氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)，并加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.30g，0.0014mol)。將此混合物再攪拌48小時(shí)，減壓除去溶劑并將此殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(80ml)和二氯甲烷(50mL)之間分配。分離有機(jī)層，并將水層用二氯甲烷再萃取兩次(50mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑得到黃色油狀物。此化合物在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)一步純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(89∶10∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AJ)TLC(二氯甲烷/三乙胺＝9∶1)Rf0.29和反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺TLC(二氯甲烷/三乙胺＝9∶1)Rf0.14。
將順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AJ)(0.53g，0.0011mol)在乙酸乙酯(25mL)和乙醇(4mL)混合物中的溶液加熱回流并加入預(yù)熱的馬來酸(0.51g，0.0044mol)的乙酸乙酯(15mL)溶液。將此混合物再回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽，為白色固體(0.61g，0.00084 mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.38(s，1H)，8.25(s，1H)，8.06(d，1H)，7.46(t，2H)，7.22(m，4H)，6.15(s，4H)，4.85(m，1H)，3.1(br，9H)，2.70(s，3H)，2.25(m，2H)，2.04(m，2H)，1.74(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.93 min。MSMH+485。
類似的方法用于反式異構(gòu)體得到反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(6-苯氧基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺馬來酸鹽，為白色固體(0.049g，0.00008mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.35(s，1H)，8.25(s，1H)，8.06(d，1H)，7.46(t，2H)，7.22(m，4H)，6.21(s，4H)，4.70(m，1H)，3.1(br，9H)，2.69(s，3H)，2.05(br，6H)，1.61(br，2H)RP-HPLC(Hypersil C18，5m，100A，25cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.40min。MSMH+485。
實(shí)施例20反-芐基-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸酯二馬來酸鹽(化合物23)芐基N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸酯(中間體AM)將碳酸氫鈉(3.12g，0.0371mol)的水(35mL)溶液加入到4-溴-2-甲氧基苯胺(3.00g，0.0148mol)的二噁烷(50mL)溶液中。將所得混合物攪拌5分鐘并在3分鐘內(nèi)滴加氯甲酸芐基酯(3.8g，0.022mol)。該反應(yīng)混合物反應(yīng)2小時(shí)，然后將二噁烷減壓除去并用乙酸乙酯兩次萃取水相(每次100mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并在過濾后減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸芐基酯(3.75g，0.011mol)，為白色固體1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.72(s，1H)，7.61(d，1H)，7.38(m，5H)，7.20(s，1H)，7.10(d，1H)，5.14(s，2H)，3.81(s，3H)；
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.21N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸芐基酯(中間體AN)將N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸芐基酯(中間體AM)(3.0g，0.0089mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.72g，0.0107mol)、[1，1′雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.219g，0.00027mol)和醋酸鉀(2.65g，0.027mol)在N，N-二甲基甲酰胺(70mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(70mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶9)作為流動(dòng)相，得到N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸芐基酯(1.6g，0.0042mol)，為白色固體1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.66(s，1H)，7.80(d，1H)，7.38(m，5H)，7.25(d，1H)，7.17(s，1H)，5.15(s，2H)，3.81(s，3H)，1.29(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.13反-芐基N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并-[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸酯二馬來酸鹽將N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]氨基甲酸芐基酯(中間體AD)(1.26g，0.0033mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(1.21g，0.0027mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.19g，0.00016mol)和碳酸鈉(0.726g，0.00685mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(40mL)和水(20mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)和乙酸乙酯(100mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(每次600mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(94∶5∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到反-N-({4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸芐基酯(中間體AO)，為白色固體(1.29g，0.0023mol)。將反-N-({4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸芐基酯(中間體AO)(0.222g，0.00039mol)溶解于回流的乙醇(17mL)中，并加入預(yù)熱的馬來酸(0.135g，0.00117mol)的乙醇(8mL)溶液。將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到反-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}-氨基甲酸芐基酯二馬來酸鹽，為白色固體(0.250g，0.00031mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.76(s，1H)，8.23(s，1H)，7.89(d，1H)，7.40(m，5H)，7.20(m，2H)，6.15(s，4H)，5.18(s，2H)，4.69(m，1H)，3.87(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.86 min。
MSMH+570。
實(shí)施例21反-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}苯甲酰胺二馬來酸鹽(化合物24)3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AP)向攪拌的反-N-(4-4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基)-氨基甲酸芐基酯(中間體AO)(0.95g，0.00167mol)的乙醇(35mL)溶液中，加入10％鈀碳(0.33g)并將所得混合物在一個(gè)大氣壓的氫氣中氫化18小時(shí)。通過硅藻土板過濾除去催化劑并將此濾液減壓濃縮得到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.71g，0.00164mol)RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.81 min。
MSMH+437。
反-N-(4-4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基)苯甲酰胺二馬來酸鹽向攪拌的3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AP)(0.31g，0.00071mol)和苯甲?；?0.105g，0.00075mol)的無水二氯甲烷(10mL)溶液中，在5分鐘內(nèi)滴加N-乙基-N，N-二異丙基胺(0.11g，0.00085mol)。在氮?dú)夥障略倮^續(xù)攪拌4小時(shí)，減壓除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(30mL)和水(25mL)之間分配。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到黃色油狀物，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(94∶5∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到反-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}苯甲酰胺，為白色固體(0.250g，0.00045mol)。其溶解于回流的乙醇(17mL)并加入預(yù)熱的馬來酸(0.155g，0.00133mol)的乙醇(8mL)溶液。此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到反-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}苯甲酰胺二馬來酸鹽，為白色固體(0.196g，0.000254mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)9.49(s，1H)，8.25(s，1H)，8.08(d，1H)，7.98(d，2H)，7.62(m，3H)，7.29(m，2H)，6.16(s，4H)，4.71(m，1H)，3.94(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.20min。
MSMH+571。
實(shí)施例22N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}-N′-苯基磺酰胺二馬來酸鹽(化合物25)在0℃，將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AP)(0.37g，0.00085mol)和三乙胺(0.086g，0.00085mol)懸浮于無水乙腈(15mL)中，并在5分鐘內(nèi)滴加N-苯基氨磺酰基氯(0.88g，0.0046mol)的無水乙腈(15mL)溶液。此混合物在氮?dú)夥障律郎刂潦覝夭嚢?.5小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin，Hypersil C18，8m，100A，25cm；5％-85％乙腈-0.1％醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，21ml/min)得到N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}-N′-苯基磺酰胺(0.1g，0.00017mol)。其溶解于回流的乙酸乙酯(17mL)并加入預(yù)熱的馬來酸(0.039g，0.00034mol)的乙酸乙酯(8mL)溶液。將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}-N′-苯基磺酰胺二馬來酸鹽，為白色固體(0.089g，0.00011mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)10.12(s，1H)，9.31(s，1H)，8.23(s，1H)，7.50(d，1H)，7.19(m，6H)，6.99(m，1H)，6.15(s，4H)，4.67(m，1H)，3.83(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.83 min。
MSMH+592。
實(shí)施例23順-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽(化合物27)反式{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽(化合物26)(4-溴苯基)(苯基)甲酮O-甲基肟(中間體AQ)將4-溴二苯酮(3.02g，0.0116mol)和甲氧基胺鹽酸鹽(4.83g，0.0578mol)的混合物在乙醇(90mL)和吡啶(18mL)的混合物中在氮?dú)夥障录訜峄亓?小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物在水(150mL)和二氯甲烷(100mL)之間分配。水相進(jìn)一步用二氯甲烷萃取兩次(各80mL)并將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑并將此殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相洗脫得到(4-溴苯基)(苯基)甲酮O-甲基肟，為無色油狀物(3.13g，0.0108mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)7.67(d，1H)，7.59(d，1H)，7.48(m，4H)，7.32(m，1H)，7.26(m，2H)，3.93(s，3H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.44苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮O-甲基肟(中間體AR)將(4-溴苯基)(苯基)甲酮O-甲基肟(中間體AQ)(2.41g，0.0083mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.53g，0.010mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.203g，0.00025mol)和醋酸鉀(2.44g，0.025mol)的混合物在N，N-二甲基甲酰胺(65mL)中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(50mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相，得到苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮O-甲基肟(1.9g，0.0056mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)7.76(d，1H)，7.67(d，1H)，7.41(m，5H)，7.26(d，2H)，3.88(s，3H)1.30(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.27順-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽將苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-甲酮O-甲基肟(中間體AQ)(0.701g，0.0021mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(中間體AC)(0.80g，0.0018mol)、四(三苯基膦)鈀(0.125g，0.00011mol)和碳酸鈉(0.48g，0.0045mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(40mL)和水(20mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)和乙酸乙酯(100mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各自70mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(96∶3∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟，為白色固體(0.700g，0.00133mol)。
將順-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟(0.201g，0.00039mol)溶解于回流的乙醇(17mL)并加入預(yù)熱的馬來酸(0.178g，0.0015mol)的乙醇(8mL)溶液。將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽，為白色固體(0.212g，0.00028mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz) 8.26(s，1H)，7.74(d，1H)，7.66(d，1H)，7.51(m，6H)，7.33(d，1H)，6.14(s，4H)，4.85(m，1H)，3.91(s，3H)3.1(br，9H)，2.71(s，3H)，2.33(m，2H)，2.07(m，2H)，1.74(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.25min。
MSMH+525。
反-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽類似方法(c)用于反式異構(gòu)體，以反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AD)(0.317g，0.00072mol)開始得到反-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基}(苯基)甲酮O-甲基肟二馬來酸鹽，為白色固體(0.255g，0.000337mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.25(s，1H)，7.75(d，1H)，7.66(d，1H)，7.51(m，6H)，7.33(d，1H)，6.17(s，4H)，4.71(m，1H)，3.91(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(br，6H)，1.59(br，2H)RP-HPLC(HypersilC18，5m，100A，25cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.10min。
MSMH+525。
實(shí)施例24反-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲酮肟二馬來酸鹽(化合物28)(4-溴苯基)(苯基)甲酮肟(中間體AS)將4-溴二苯酮(10.0g，0.0383mol)和羥基胺鹽酸鹽(13.3g，0.192mol)的混合物在乙醇(250mL)和吡啶(50mL)的混合物中在氮?dú)夥障录訜峄亓?小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物在水(300mL)和二氯甲烷(300mL)之間分配。水相再用二氯甲烷萃取兩次(每次180mL)并將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑并將此殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶9)作為流動(dòng)相洗脫得到(4-溴苯基)(苯基)甲酮肟，為白色固體(9.93g，0.036mol)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)7.66(d，1H)，7.57(d，1H)，7.33(m，7H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.38；苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮肟(中間體AT)將(4-溴苯基)(苯基)甲酮肟(1.02g，0.0037mol)、乙硼烷頻哪醇酯(1.13g，0.0044mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.09g，0.00011mol)和醋酸鉀(1.09g，0.011mol)的混合物在N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(50mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶7)作為流動(dòng)相，得到苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮肟(0.82g，0.00254mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)11.40(s，1H)，7.76(d，1H)，7.66(d，1H)，7.41(m，5H)，7.26(d，2H)，1.32(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.22反-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基}(苯基)甲酮肟二馬來酸鹽將苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲酮肟(0.357g，0.0011mol)、反式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AD)(0.80g，0.00096mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.067g，0.00006mol)和碳酸鈉(0.26g，0.0024mol)在乙二醇二甲基醚(22mL)和水(11mL)的混合物中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各40mL)。將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(93∶6∶1)作為流動(dòng)相，得到反式-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基}(苯基)甲酮肟，為白色固體(0.211g，0.00041mol)。將其懸浮于回流的氯仿(17mL)中，并加入甲醇(4mL)，此時(shí)此混合物變得透明。加入預(yù)熱的馬來酸(0.096g，0.00082mol)的甲醇(8mL)溶液，并將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將殘余物懸浮于乙酸乙酯并通過過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到反-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基}(苯基)甲酮肟二馬來酸鹽，為白色固體(0.295g，0.0004mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.26(s，1H)，7.75(d，1H)，7.65(d，1H)，7.51(m，6H)，7.33(d，1H)，6.14(s，4H)，4.72(m，1H)，3.1(b1，9H)，2.68(s，3H)，2.05(m，6H)，1.60(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min) Rt11.82 min。
MSMH+511。
實(shí)施例25反-1-{4-[4-氨基-3-(4-(1-苯基銨基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-環(huán)己基}-4-甲基六氫吡嗪二鎓三[(Z)-3-羧基-2-丙烯酸鹽](化合物29)與用于化合物20的方法類似，以反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AD)(0.33g，0.00075mol)開始，得到反-1-{4-[4-氨基-3-(4-(1-苯基銨基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-環(huán)己基}-4-甲基六氫吡嗪二鎓三[(Z)-3-羧基-2-丙烯酸鹽](0.245g，0.00034mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.43(s，1H)，8.22(s，1H)7.51(d，2H)，7.28(m，2H)，7.20(m，4H)，6.89(t，1H)，6.17(s，6H)，4.67(m，1H)，3.1(br，9H)，2.73(s，3H)，2.08(m，6H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.63 min。MH+483。
實(shí)施例26順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物30)5-溴-2-苯氧基嘧啶(中間體AU)將5-溴-2-氯嘧啶(5.00g，0.0259mol)、苯酚(3.16g，0.0336mol)、二苯并-18-冠-6(0.47g，0.0013mol)和研磨過的氫氧化鉀(3.51g，0.0626mol)在甲苯(75ml)中的混合物加熱回流5小時(shí)，共沸下除去水。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在水和氯仿之間分配。分層并將水相用氯仿萃取三次。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用正庚烷/乙酸乙酯(98∶2)作為洗脫劑，得到5-溴-2-苯氧基-嘧啶，為白色固體(3.55g，0.0141mol)1H MNR(DMSO-d6，400MHz)8.80(s，2H)，7.45(t，2H)，7.27(t，1H)，7.22(d，2H)；TLC(正己烷/乙酸乙酯＝95∶5) Rf0.20；
2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)嘧啶(中間體AV)將5-溴-2-苯氧基-嘧啶(中間體AU)(3.00g，0.0119mol)、乙硼烷頻哪醇酯(3.64g，0.0143mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.29g，0.00036mol)和醋酸鉀(3.52g，0.0358mol)的混合物在N，N-二甲基甲酰胺(70mL)中在80℃下在氮?dú)夥障录訜徇^夜。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去大部分溶劑。將二氯甲烷(70ml)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到深色油狀物。殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)并加入到庚烷(75mL)中。將此混合物過濾，并將此沉淀在庚烷(75mL)成漿17小時(shí)。過濾并干燥后，并真空干燥，得到2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-嘧啶，為灰色固體(2.95g，0.00989mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.75(s，2H)，7.45(t，2H)，7.27(t，1H)，7.20(d，2H)，1.31(s，12H)；順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AW)將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AC)(0.297g，0.000674mol)、2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)嘧啶(中間體AV)(0.221g，0.000741mol)、碳酸鈉(0.179g，0.001684mol)在1，2-二甲氧基乙烷(10mL)和水(20mL)中的混合物，快速攪拌并加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.047g，0.000040mol)。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌18小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(50mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)之間分配。進(jìn)行相分離并將水相用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。產(chǎn)物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶0.5)。真空下除去溶劑得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.185g，0.000381mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.79(s，2H)，8.24(s，1H)，7.48(t，2H)，7.28(t，1H)，7.27(d，2H)，4.81(m，1H)，1.55-2.56(m，20H)；TLC(二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝90∶10∶0.5)Rf0.23。
順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽將順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AW)(0.193g，0.00040mol)在無水乙醇(15mL)中的溶液加熱回流。加入加熱至78℃的馬來酸(0.184g，0.00159mol)的無水乙醇(10mL)溶液并將此混合物加熱回流10分鐘。讓此混合物冷卻至室溫，并將所形成的白色沉淀通過過濾收集并用無水乙醇(2×10mL)洗滌。將此殘余物真空下除去溶劑得到1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽，為白色固體(0.254g，0.00035mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.81(s，2H)，8.26(s，1H)，7.49(t，2H)，7.28(t，1H)，7，26(d，2H)，6.14(s，4H)，4.87(m，1H)，1.60-2.85(m，20H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.12 min。MSMH+486實(shí)施例27反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽(化合物31)反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AX)將反式3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AD)(0.300g，0.00068mol)、2-苯氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)嘧啶(中間體AV)(0.304g，0.00102mol)、碳酸鈉(0.180g，0.00170mol)在1，2-二甲氧基乙烷(10mL)和水(20mL)中的混合物，快速攪拌并加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.047g，0.000040mol)。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌18小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(50mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)之間分配。進(jìn)行相分離并將水相用乙酸乙酯萃取(3×25mL)。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。產(chǎn)物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶0.5)。真空下除去溶劑得到反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.155g，0.00032mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.78(s，2H)，8.25(s，1H)，7.48(t，2H)，7.28(t，1H)，7.27(d，2H)，4.65(m，1H)，1.44-2.36(m，20H)；TLC(二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝90∶10∶0.5)Rf0.33。
反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽(化合物31)將反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體AX)(0.155g，0.00032mol)的無水乙醇(15mL)溶液加熱回流。加入加熱至78℃的馬來酸(0.148g，0.000128mol)的無水乙醇(10mL)溶液，并將此混合物加熱回流10分鐘。讓此混合物冷卻至室溫，并將所形成的白色沉淀通過過濾收集并用無水乙醇(2×10mL)洗滌。將此殘余物真空下除去溶劑得到反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(2-苯氧基-5-嘧啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽，為白色固體(0.082g，0.00011mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.78(s，2H)，8.26(s，1H)，7.48(t，2H)，7.28(t，1H)，7.26(d，2H)，4.70(m，1H)，1.50-3.00(m，20H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.83 min。MSMH+486實(shí)施例28順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(化合物32)2-苯氧基嘧啶(中間體AY)將5-氯嘧啶(5.00g，0.0437mol)、苯酚(5.38g，57.2mmol)、二苯并-18-冠-6(0.84g，0.0023mol)和研磨過的氫氧化鉀(5.92g，0.1055mol)在甲苯(75ml)的混合物加熱回流3小時(shí)，共沸下除去水。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在水和氯仿之間分配。分層并將水相用氯仿萃取三次。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到2-苯氧基嘧啶，為白色粉末(95％純，4.56g，0.0265mol)1H NMR(CDCl3400MHz)8.57(d，2H)，7.43(t，2H)，7.26(t，1H)，7.20(d 2H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝1∶1)Rf0.422-(4-碘苯氧基)嘧啶(中間體AZ)將2-苯氧基嘧啶(中間體AY)(4.03g，0.0234mol)和N-碘代琥珀酰亞胺(10.52g，0.0468mol)在三氟乙酸(40mL)和三氟乙酸酐(8mL)中的混合物加熱回流4小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并加入水(75mL)。此混合物用50mL萃取三次。合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)洗滌兩次，用10％硫代硫酸鈉水溶液(50mL)和鹽水(50mL)洗滌兩次。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并真空下除去溶劑。粗品固體在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用正庚烷/乙酸乙酯(3∶1)作為洗脫劑，得到2-(4-碘苯氧基)嘧啶，為淡黃色固體(3.49g，0.0117mol)1H NMR(CDCl3400MHz)8.57(d，2H)，7.73(d，2H)，7.07(t，1H)，6.98(d 2H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝1∶1)Rf0.452-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]嘧啶(中間體BA)將2-(4-碘苯氧基)嘧啶(中間體AZ)(3.50g，0.0118mol)、乙硼烷頻哪醇酯(3.58g，0.0141mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.29g，0.00035mol)和醋酸鉀(3.46g，0.00346mol)在N，N-二甲基甲酰胺(70ml)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜徇^夜。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去大部分溶劑。二氯甲烷(70ml)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到深色油狀物，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用正庚烷/乙酸乙酯(2∶1)作為洗脫劑，得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]嘧啶，為白色固體(2.95g，0.00989mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.65(d，2H)，7.74(d，2H)，7.29(t，1H)，7.20(d，2H)，1.31(s，12H)；
1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體BB)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體N)(1.50g，0.00374mol)、2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]-嘧啶(中間體BA)(1.23g，0.00412mol)、四(三苯基膦)鈀(0)(0.26g，0.00022mol)和碳酸鈉(0.993g，0.00937mol)在40mL 1，2-二甲氧基乙烷和20mL水中的混合物，在80℃下加熱18小時(shí)，之后再加入1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.15g，0.00037mol)。將此混合物再攪拌1小時(shí)，然后冷卻至室溫。過濾此沉淀并用1，2-二甲氧基乙烷洗滌，并真空干燥，得到1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(1.26g，0.00283mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.68(d，2H)，8.254(s，1H)，7.73(d，2H)，7.37(d，2H)，7.31(t，1H)，6.30-7.20(bs，2H)，4.78-4.84(m，1H)，3.91(s，4H)，2.22-2.30(m，2H)，1.73-1.92(m，6H)；4-{4-氨基-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}環(huán)己酮(中間體BC)將1-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體BB)(1.22g，0.00274mol)在丙酮中的漿狀物冷卻至0℃，并滴加5N鹽酸(15mL)，保持溫度低于5℃。加畢，將此混合物室溫下攪拌3小時(shí)。將此溶液通過硅藻土過濾并用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。過濾所形成的沉淀，用水洗滌并真空干燥過夜，得到4-{-4-氨基-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-環(huán)己酮，為白色固體(0.937g，0.00243mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)8.68(d，2H)，8.29(s，1H)，7.56(d，2H)，7.37(d，2H)，7.31(t，1H)，6.30-7.20(bs，2H)，5.25-5.30(m，1H)，2.67-2.75(m，2H)，2.24-2.43(m，6H)；順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體BD)將4-{4-氨基-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]-嘧啶-1-基}-1-環(huán)己酮(中間體BC)(0.925g，0.0024mol)、N-甲基哌嗪(0.721g，0.0072mol)和乙酸(0.432g，0.0072mol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物，快速攪拌并以30分鐘的間隔分2批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.661g，0.00312mol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌18小時(shí)。再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.300g，0.00142mol)并將此混合物再攪拌4小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在二氯甲烷(25mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。進(jìn)行相分離并用二氯甲烷將水相萃取3次(25mL)。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。將順-和反式異構(gòu)體在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行分離，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(87∶10∶3)洗脫。從反式1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基1-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺餾份中真空下除去溶劑(TLC(二氯甲烷/三乙胺/甲醇＝90∶8∶2)Rf0.45)，并將此殘余物溶解于二氯甲烷并用1.0M碳酸鈉水溶液萃取兩次。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過濾并真空下除去溶劑得到反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.272g，0.00056mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.68(d，2H)，8.25(s，1H)，7.73(d，2H)，7.39(d，2H)，7.31(t，1H)，6.30-6.20(bs，2H)，4.79-4.84(m，1H)，2.06-2.75(m，12H)，2.24-2.43(m，4H)；順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽將順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)-苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體BD)(0.193g，0.0004mol)的無水乙醇(15mL)溶液加熱回流。加入加熱至78℃的馬來酸(0.184g，0.00159mol)的無水乙醇(10mL)溶液并將此混合物加熱回流10分鐘。讓此混合物冷卻至室溫，并將所形成的白色沉淀通過過濾收集并用無水乙醇(2×10mL)洗滌。將此殘余物真空下除去溶劑得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽，為白色固體(0.222g，0.00027mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.68(d，2H)，8.26(s，1H)，7.72(d，2H)，7.39(d，2H)，7.32(t，1H)，6.17(s，6H)，4.85-4.87(m，1H)，3.85-2.85(br，9H)，2.71(s，3H)，2.23-2.43(bs，2H)，2.03-2.18(bs，2H)，1.71-2.89(bs，4H)RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.56 min。
MSMH+486反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中間體BE)用類似的方法，以反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.06g，0.000124mol)開始，得到反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-嘧啶基氧基)-苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽(化合物33)，為白色固體(0.06g，0.000084mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.68(d，2H)，8.25(s，1H)，7.71(d，2H)，7.37(d，2H)，7.31(t，1H)，6.18(s，4H)，4.71(m，1H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)2.06(m，6H)1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.45min。
MSMH+486實(shí)施例29向一系列5ml蓋著隔膜的小瓶中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基甲基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(300mg，0.776mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(247mg，1.16mmol)和適當(dāng)?shù)娜┗蛲?0.85mmol)。依次加入二氯乙烷(5mL)和冰醋酸(50μl，0.87mmol)。將小瓶蓋上并在軌道式震動(dòng)器上搖動(dòng)過夜。該反應(yīng)混合物的HPLC表明對(duì)于一些反應(yīng)，仍存在一些起始的胺。對(duì)這些反應(yīng)，再加入醛或酮(0.85mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(247mg，1.16mmol)和冰醋酸(50μL)并將所得混合物再次搖動(dòng)過夜。加入水(2mL)，接著加入過量的固體碳酸氫鈉，直到?jīng)]有氣體放出。通過將此混合物通過3MEmpore萃取圓盤柱(Octadecyl C18 SD)，移出水層。粗品用Supelco′s超凈(supelclean)硅膠固相柱(10g大小)純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為洗脫劑，得到適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)物。
分析LC/MS條件柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min。LCMS數(shù)據(jù)詳述如下實(shí)施例30順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)(4-溴苯基)(苯基)甲胺將甲酸銨(20.1g，0.318mol)置于裝備有溫度控制器、磁力攪拌器和冷凝器的三頸燒瓶中，并在150℃下加熱。立即加入4-溴二苯酮(7.2g，0.0276mol)，將溫度升高到165℃并將此混合物攪拌加熱回流24小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在乙酸乙酯(350mL)中研磨，用炭處理并通過硅藻土板過濾。濃縮此濾液，懸浮于濃鹽酸(120mL)并加熱回流8小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并通過過濾收集沉淀。將其在水(120mL)中研磨，用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化并用乙酸乙酯(2×250mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到(4-溴苯基)(苯基)甲胺(5.25g，0.02mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46(d，2H)，7.36(m，4H)，7.27(t，2H)，7.18(t，1H)，5.07(s，1H)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.54min。
b)N-[(4-溴苯基)(苯基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯將二-叔丁基-二碳酸酯(5.63g，0.0258mol)溶解于無水二氯甲烷(150mL)中，冷卻至0℃并滴加(4-溴苯基)(苯基)甲胺(5.2g，0.0198mol)的無水二氯甲烷(30mL)溶液。將此混合物升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢?6小時(shí)。有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液(120mL)洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相，得到N-[(4-溴苯基)(苯基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯(5.9g，0.0163mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(d，1H)，7.51(d，2H)，7.36(m，7H)，5.81(d，1H)，1.39(s，9H)。TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.24c)N-{苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁基酯將N-[(4-溴苯基)(苯基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯(4.5g，0.0123mol)、乙硼烷頻哪醇酯(3.79g，0.0149mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)的復(fù)合物與二氯甲烷(1∶1)(0.305g，0.000373mol)和醋酸鉀(3.66g，0.0373mol)在N，N-二甲基甲酰胺(80mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(80mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶9)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-{苯基-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁基酯(3.0g，0.00733mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(d，1H)，7.61(d，2H)，7.33(d，2H)，7.28(m，5H)，5.81(d，1H)，1.39(s，9H)，1.27(s，12H)。TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.34；d)順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯將N-{苯基[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁基酯(3.0g，0.00733mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.4g，0.0054mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.381g，0.00033mol)和碳酸鈉一水合物(1.69g，0.0136mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(80mL)和水(40mL)的混合物中在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各100mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(96∶3∶1)作為流動(dòng)相洗脫，得到順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)-甲基]氨基甲酸叔丁基酯(2.24g，0.00375mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，8.01(d，1H)，7.60(d，2H)，7.49(d，2H)，7.35(m，4H)，7.23(t，1H)，5.91(d，4H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，9H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，1.42(m，4H)，1.40(s，9H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.45 min。
e)順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯(2.05g，0.00344mol)在無水二氯甲烷(50mL)中研磨，并將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃。滴加三氟乙酸(10mL)并將所得溶液升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢枰粋€(gè)半小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物懸浮于水(50mL)并用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化。將其用二氯甲烷萃取(3×150mL)，合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑得到順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-{4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.60g，0.00322mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.57(m，4H)，7.45(d，2H)，7.31(dd，2H)，7.20(t，1H)，5.17(s，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.36 min。
f)順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]乙酰胺二乙酸鹽將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)中，加入乙酸酐(0.010g，0.0001mol)，并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]乙酰胺二乙酸鹽(0.015g，0.000021mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.84(d，1H)，8.23(s，1H)，7.62(d，2H)，7.46(d，2H)，7.35(m，4H)，7.28(m，1H)，6.21(d，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.95(s，3H)，1.90(s，6H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.15 min。
MSMH+539。
實(shí)施例31順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]苯甲酰胺二乙酸鹽將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入苯甲?；?0.014g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]苯甲酰胺二乙酸鹽(0.017g，0.000024mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.32(d，1H)，8.23(s，1H)，7.96(d，2H)，7.62(d，2H)，7.58-7.29(b，10H)，6.51(d，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.90(s，6H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.53 min。
MSMH+601。
實(shí)施例32順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]甲烷磺酰胺將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入甲烷磺?；?0.011g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N-[(4{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]甲烷磺酰胺二乙酸鹽(0.021g，0.00003mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.39(d，1H)，8.23(s，1H)，7.65(d，2H)，7.57(d，2H)，7.47(d，2H)，7.37(t，2H)，7.27(t，1H)，5.72(d，1H)，4.78(m，1H)，2.70(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.90(s，6H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.81 min。
MSMH+575。
實(shí)施例33順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-1-苯磺酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入苯磺?；?0.018g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-1-苯磺酰胺乙酸鹽(0.045g，0.000065mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.89(d，1H)，8.23(s，1H)，7.65(d，2H)，7.57-7.27(br，12H)，5.66(d，1H)，4.78(m，1H)，2.70(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.90(s，3H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.78min。
MSMH+637。
實(shí)施例34順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-3-羥基丁酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)和β-丁內(nèi)酯(0.009g，0.0001mol)在二噁烷中加熱回流3小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-N1-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-3-羥基丁酰胺乙酸鹽(0.027g，0.000042mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.78(d，1H)，8.23(s，1H)，7.62(d，2H)，7.45(d，2H)，7.35(m，4H)，7.27(t，1H)，6.21(d，1H)，4.78(m，1H)，4.67(d，1H)，4.02(m，1H)，2.5-2.1(br，15H)，2.17(s，3H)，1.90(s，3H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)，1.07(d，3H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.97和11.13 min。
MSMH+583。
實(shí)施例35順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺a)4-(4-溴苯氧基)芐腈將4-溴苯酚(4.56g，0.0264mol)、4-氟芐腈(0.0264mol)、18-冠-6(0.7g，0.00264mol)和40％在氧化鋁上的氟化鉀(10.8g)在無水乙腈(100mL)的混合物，在氮?dú)夥障录訜峄亓?2小時(shí)。將其冷卻至室溫，通過硅藻土板過濾并減壓濃縮。殘余物在乙醚(120mL)和水(100mL)之間分配，有機(jī)相進(jìn)一步用氯化鉀飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(3∶97)作為流動(dòng)相，得到4-(4-溴苯氧基)芐腈(3.7g，0.0135mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.85(d，2H)，7.64(d，2H)，7.13(dd，4H)，TLC(乙酸乙酯/庚烷3∶97)Rf0.21b)4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈將4-(4-溴苯氧基)芐腈(4.55g，0.0166mol)、乙硼烷頻哪醇酯(5.06g，0.020mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.407g，0.000498mol)和醋酸鉀(4.88g，0.0498mol)在N，N-二.甲基甲酰胺(90mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(120mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相。將合并的餾份減壓濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈(2.75g，0.0086mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.85(d，2H)，7.64(d，2H)，7.13(dd，4H)，1.28(s，12H)，TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.63c)順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈將4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈(2.63g，0.00819mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.01g，0.00683mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.473g，0.00041mol)和碳酸鈉一水合物(2.12g，0.0171mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(80mL)和水(40mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各100mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(96∶3∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(2.45g，0.00483mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.87(d，2H)，7.71(d，2H)，7.30(d，2H)，7.25(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.04 min。
d)順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺將順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.200g，0.000394mol)溶解于二噁烷(3mL)，加入氫氧化鈉(0.15g，0.00197mol)的水(2mL)溶液，接著加入30％過氧化氫水溶液(5滴)。該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障录訜峄亓?.5小時(shí)，冷卻至室溫并用5％枸櫞酸水溶液中和。減壓除去溶劑并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺(0.120g，0.000223mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.93(m，3H)，7.68(d，2H)，7.30(s，1H)，7.24(d，2H)，7.15(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta PakC18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.87 min。
MSMH+527。
實(shí)施例36順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酸將順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.200g，0.000394mol)溶解于乙酸(15mL)和6N鹽酸(15mL)的混合物中，并將此溶液加熱回流12小時(shí)。將其冷卻至室溫并減壓濃縮并將此殘余物用N，N-二甲基甲酰胺重結(jié)晶得到順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酸(0.100g，0.00019mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.97(d，2H)，7.70(d，2H)，7.24(d，2H)，7.15(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.95 min。
MSMH+528。
實(shí)施例37順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]乙酰胺乙酸鹽a)順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.600g，0.00118mol)溶解于甲醇(50mL)和濃氫氧化銨水溶液(3mL)中，加入50％的阮內(nèi)鎳在水(2mL)中的漿狀物，并將所得混合物在一個(gè)大氣壓下氫化18小時(shí)。該反應(yīng)混合物通過硅藻土板過濾，減壓濃縮并將此殘余物用二氯甲烷(50mL)浸提。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥，減壓濃縮并將此殘余物懸浮于乙醚(25mL)中。過濾收集此沉淀并干燥得到順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.45g，0.0088mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.39(d，2H)，7.12(d，2H)，7.08(d，2H)，4.78(m，1H)，3.73(s，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.72 min.
b)順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]乙酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.051g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入乙酸酐(0.010g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]乙酰胺乙酸鹽(0.046g，0.0000749mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.38(t，1H)，8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.31(d，2H)，7.12(d，2H)，7.08(d，2H)，4.78(m，1H)，4.25(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.87(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.33 min。
MSMH+555。
實(shí)施例38順-N-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]甲烷磺酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.051g，0.0001 mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入甲烷磺?；?0.011g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N-[4(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]甲烷磺酰胺乙酸鹽(0.011g，0.000017mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.64(d，2H)，7.57(t，1H)，7.40(d，2H)，7.13(m，4H)，4.78(m，1H)，4.17(d，2H)，2.89(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.97 min。
MSMH+591。
制備順-3-{4-[3-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺及其衍生物的方法與制備順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺及其衍生物的方法相同，其中使用適當(dāng)?shù)钠鹗嘉铩?br> 實(shí)施例39
順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺二乙酸鹽a)3-(4-溴苯氧基)芐腈1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.59(m，5H)，7.38(m，1H)，7.06(d，2H)，TLC(乙酸乙酯/庚烷3∶97)Rf0.19b)3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.65(m，5H)，7.41(m，1H)，7.06(d，2H)，1.27(s，12H)TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.56c)順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.68(d，2H)，7.61(m，3H)，7.47(m，1H)，7.25(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.96 min。
d)順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺二乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，8.02(s，1H)，7.68(m，3H)，7.60(s，1H)，7.50(t，1H)，7.44(s，1H)，7.27(m，1H)，7.15(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s.6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.99min。
MSMH+527。
實(shí)施例40順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酸1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.75(d，1H)，7.68(d，2H)，7..56(m，2H)，7.39(m，1H)，7.20(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.01 min。
MSMH+528。
實(shí)施例41順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]乙酰胺乙酸鹽a)順-3-{4-[3-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.38(m，1H)，7.15(m，4H)，6.96(d，1H)，4.78(m，1H)，3.73(s，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.32 min。
b)順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]乙酰胺乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.38(t，1H)，8.23(s，1H)，7.65(d，2H)，7.36(t，1H)，7.15(d，2H)，7.07(d，1H)，7.00(m，2H)，4.78(m，1H)，4.25(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.87(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.44 min。
MSMH+555。
實(shí)施例42順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]苯甲酰胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(t，1H)，8.23(s，1H)，7.86(d，2H)，7.63(d，2H)，7.48(m，4H)，7.10(m，5H)，4.78(m，1H)，4.49(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.58 min。
MSMH+617。
實(shí)施例43順-N-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]甲烷磺酰胺乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.64(d，2H)，7.58(t，1H)，7.42(t，1H)，7.16(m，3H)，7.12(s，1H)，7.03(d，1H)，4.78(m，1H)，4.17(d，2H)，2.89(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.12 min。
MSMH+591實(shí)施例44順-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并-[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸芐基酯二馬來酸鹽將N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]氨基甲酸芐基酯(2.00g，0.0052mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.92g，0.0044mol)、四(三苯基膦)鈀(0.300g，0.00026mol)和碳酸鈉(1.35g，0.0109mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(70mL)和水(35mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(150mL)和乙酸乙酯(180mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各250mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(96∶3∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}氨基甲酸芐基酯，為白色固體(1.88g，0.0023mol)。將順-N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸芐基酯(0.206g，0.00036mol)溶解于回流的乙醇(17mL)中并加入預(yù)熱的馬來酸(0.126g，0.00108mol)的乙醇(8mL)溶液。將此混合物回流10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-芐基N-{4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基}-氨基甲酸酯二馬來酸鹽，為白色固體(0.224g，0.00028mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.76(s，1H)，8.23(s，1H)，7.89(d，1H)，7.40(m，5H)，7.20(m，2H)，6.15(s，4H)，5.18(s，2H)，4.85(m，1H)，3.87(s，3H)，3.1(br，11H)，2.67(s，3H)，2.05(m，2H)，1.57(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.83 min。
MSMH+571。
實(shí)施例45順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-N′-芐基脲乙酸鹽將順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.082g，0.000188mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入異氰酸芐基酯(0.025g，0.000188mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-N’-芐基脲乙酸鹽(0.009g，0.0000142mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.29(d，1H)，8.18(m，2H)，7.33(m，5H)，7.26(t，1H)，7.19(s，1H)，7.13(d，1H)，4.78(m，1H)，4.33(d，2H)，3.91(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.90(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.35 min。
MSMH+570。
將順-或反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的總方法步驟A將順-或反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(或者只是順或反式)(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)的混合物在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。將此反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)，并再次濃縮。將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需的產(chǎn)物。
步驟B合成和純化(方法A)后，將此殘余物用二氯甲烷(1mL)浸提，加樣到Trikonex柱(7cm)上并用二氯甲烷(5mL)洗脫。切下需要的帶(UV-檢測(cè))并將此化合物用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺＝90∶5∶5的混合物(10mL)萃取，過濾并將此濾液減壓濃縮。殘余物懸浮于乙醚(4mL)并過濾收集此沉淀并干燥。
實(shí)施例46順-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.34(m，4H)，7.22(t，1H)，7.06(s，1H)，6.99(d，1H)，6.55(d，1H)，5.90(t，1H)，4.78(m，1H)，4.40(d，2H)，3.88(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.81 min。
MSMH+527。
實(shí)施例47順-3-(3-甲氧基-4-[4-(三氟甲基)芐基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.69(d，2H)，7.59(d，2H)，7.06(s，1H)，6.99(d，1H)，6.49(d，1H)，6.14(t，1H)，4.78(m，1H)，4.50(d，2H)，3.88(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.50 min。
MSMH+595。
實(shí)施例48順-3-{4-[(1H-4-咪唑基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.85(br，1H)，8.19(s，1H)，7.59(s，1H)，7.06(br，3H)，6.77(d，1H)，5.30(br，1H)，4.78(m，1H)，4.24(d，2H)，3.88(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.70 min。
MSMH+517。
實(shí)施例49反-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽反-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺按照步驟A進(jìn)行制備。將反-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.190g，0.00036mol)溶解于乙醇(20mL)中并將此溶液加熱回流。立即加入馬來酸(0.126g，0.00108mol)溶液并再繼續(xù)回流10分鐘。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，此沉淀通過過濾收集并干燥。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.34(m，4H)，7.22(t，1H)，7.06(s，1H)，6.99(d，1H)，6.55(d，1H)，6.16(d，4H)，4.68(m，1H)，4.40(d，2H)，3.88(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.89min。
MSMH+527。
實(shí)施例50反-3-{4-[(2，6-二甲氧基芐基)氨基]-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.25(t，1H)，7.09(d，1H)，7.02(s，1H)，6.92(d，1H)，6.69(d，2H)，4.68(m，1H)，4.60(t，1H)，4.31(d，2H)，3.83(m，9H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.87min。
MSMH+587。
實(shí)施例51反-3-{4-[(2-氯-6-氟芐基)氨基]-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.39(m，2H)，7.26(t，1H)，7.10(d，1H)，7.02(s，1H)，6.86(d，1H)，5.21(t，1H)，4.68(m，1H)，4.31(d，2H)，3.83(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.23min。
MSMH+579。
還原烷基化中間體順-和反-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)N-(4-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯將二-叔丁基-二碳酸酯(16.5g，0.0756mol)溶解于無水二氯甲烷(150mL)，冷卻至0℃并滴加4-溴苯胺(9.75g，0.0567mol)的無水二氯甲烷(50mL)溶液。將此混合物升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢?6小時(shí)。有機(jī)相用碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌(120mL)，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(3∶97)作為流動(dòng)相，得到N-[(4-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯(7.1g，0.0257mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.49(s，1H)，7.42(s，4H)1.47(s，9H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.74b)N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-[(4-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯(5.95g，0.0219mol)、乙硼烷頻哪醇酯(6.67g，0.0263mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.536g，0.00066mol)和醋酸鉀(6.47g，0.066mol)在N，N-二甲基甲酰胺(120mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(6.0g，0.0188mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.50(s，1H)，7.55(d，2H)，7.46(d，2H)，1.47(s，9H)，1.27(s，12H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.56c)順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯將N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(3.71g，0.0116mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(4.46g，0.0101mol)、四(三苯基膦)鈀(0.700g，0.00061 mol)和碳酸鈉一水合物(3.13g，0.0253mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(140mL)和水(70mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(300mL)和乙酸乙酯(300mL)之間分配，分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯再萃取兩次(各150mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到黃褐色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用二氯甲烷/三乙胺/甲醇(95∶4∶1)作為流動(dòng)相洗脫得到順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.1g，0.0081mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.57(s，1H)，8.21(s，1H)，7.63(d，2H)，7.52(d，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，9H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，1.50(s，9H)，1.42(m，4H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.41 min。
順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.0g，0.0079mol)在無水二氯甲烷(75mL)中研磨并將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃。滴加三氟乙酸(10mL)并將所得溶液升溫至室溫，并在氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物懸浮于水(70mL)并用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化。將其用二氯甲烷(3×150mL)萃取，合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑得到順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.0g，0.00739mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.18(s，1H)，7.30(d，2H)，6.71(d，2H)，5.41(s，2H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.64 min。
通過類似于順-3-(4-氨基苯基)-1-[4(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的路線，制備反-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。
反-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.30(d，2H)，6.69(d，2H)，5.40(s，2H)，4.60(m，1H)，4.40(d，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.50(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.32min。
將順-或反-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的一般方法步驟C將順-或反-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(或者是中間體...或者...)(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)的混合物，在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并再次濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需產(chǎn)物。
步驟D合成和純化(步驟C)后，將殘余物用二氯甲烷浸提(1mL)，加樣到Trikonex柱(7cm)上并用二氯甲烷(5mL)洗脫。切下所需譜帶(UV-檢測(cè))并將此化合物用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺＝90∶5∶5(10mL)的混合物萃取，過濾并將此濾液減壓濃縮。殘余物懸浮于乙醚(4mL)并過濾收集此沉淀并干燥。
實(shí)施例52順-3-[4-(芐基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.34(m，6H)，7.26(t，1H)，6.74(d，1H)，6.62(t，1H)，4.78(m，1H)，4.35(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.10 min。
MSMH+497。
實(shí)施例53順-3-{4-[(2-甲基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)-己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.37(m，3H)，7.18(m，3H)，6.75(d，2H)，6.43(t，1H)，4.76(m，1H)，4.28(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.35(s，3H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.25 min。
MSMH+511。
實(shí)施例54順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(4-[2-(三氟甲基)芐基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.76(d，1H)，7.64(d，2H)，7.48(t，1H)，7.36(d，2H)，6.75(t，1H)，6.69(d，2H)，4.76(m，1H)，4.52(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.95 min。
MSMH+565。
實(shí)施例55順-3-{4-[(2-氯芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.38(m，6H)，6.74(d，2H)，6.55(t，1H)，4.76(m，1H)，4.39(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.43 min。
MSMH+531。
實(shí)施例56順-3-{4-[(2-溴芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.68(d，1H)，7.38(m，4H)，7.20(t，1H)，6.70(m，3H)，4.76(m，1H)，4.39(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.76 min。
MSMH+576。
實(shí)施例57順-3-{4-[(2-乙氧基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.34(d，2H)，7.29(s，1H)，7.20(t，1H)，6.99(d，1H)，6.88(t，1H)，6.72(d，2H)，6.42(t，1H)，4.76(m，1H)，4.30(d，2H)，4.12(q，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)，1.38(t，3H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.71 min。
MSMH+541。
實(shí)施例58順-3-(4-[2-(二氟甲氧基)芐基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.33(m，7H)，6.83(d，2H)，6.62(t，1H)4.76(m，1H)，4.38(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.25min。
MSMH+563。
實(shí)施例59順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(4-[2-(三氟甲氧基)芐基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.62(d，1H)，7.38(m，4H)，6.73(d，2H)，6.64(t，1H)，4.76(m，1H)，4.40(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.33min。
MSMH+581。
實(shí)施例60順-2-[2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]苯氧基-1-乙醇二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.32(m，3H)，7.21(t，1H)，7.00(d，1H)，6.90(t，1H)，6.74(d，2H)，6.42(t，1H)，4.76(m，1H)，4.33(d，2H)，4.07(t，2H)，3.78(t，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.08min。
MSMH+557。
實(shí)施例61順-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]芐腈二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.86(d，1H)，7.69(t，1H)，7.59(d，1H)，7.47(t，1H)，7.37(d，2H)，6.73(m，3H)，4.76(m，1H)，4.53(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.72min。
MSMH+522。
實(shí)施例62順-3-{4-[(2，6-二氟芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.40(m，3H)，7.17(dd，2H)，6.82(d，2H)，6.38(t，1H)，4.78(m，1H)，4.33(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.59 min。
MSMH+533。
實(shí)施例63順-3-4-[(2-氯-6-氟芐基)氨基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.41(m，4H)，7.30(t，1H)，6.84(d，2H)，6.29(t，1H)，4.76(m，1H)，4.38(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.36min。
MSMH+549。
實(shí)施例64順-3-(4-[2-氟-6-(三氟甲基)芐基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.67(m，3H)，7.39(m，2H)，6.84(d，2H)，6.18(t，1H)，4.76(m，1H)，4.38(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.02min。
MSMH+583。
實(shí)施例65順-3-{4-[(2-氟-6-甲氧基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)2-氟-6-甲氧基苯甲醛將3-氟茴香醚(3.36g，0.0266mol)的無水四氫呋喃溶液冷卻至-78℃，并滴加1.4M正丁基鋰的己烷溶液(19mL，0.0266mol)，保持該反應(yīng)混合物溫度低于-75℃。加畢，滴加N，N，N′，N′，N″-五甲基二亞乙基三胺，并在-78℃下在氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌2小時(shí)。滴加N，N-二甲基甲酰胺(3.89g，0.0532mol)并將該反應(yīng)混合物緩慢升溫同時(shí)攪拌半小時(shí)。通過滴加1N鹽水停止反應(yīng)并分層。水相進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×150mL)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。有機(jī)相減壓濃縮并將此殘余物在正庚烷中研磨。過濾收集此沉淀并干燥得到2-氟-6甲氧基苯甲醛(2.95g，0.0191mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.31(s，1H)，7.66(dd，1H)，7.06(d，1H)，6.89(dd，1H)，3.92(s，3H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.24b)順-3-{4-[(2-氟-6-甲氧基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.35(m，3H)，6.90(m，4H)，6.08(t，1H)，4.76(m，1H)，4.25(d，2H)，3.87(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.84min。
MSMH+550。
實(shí)施例66順-3-4-[(2，6-二氯芐基)氨基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.54(d，2H)，7.39(m，3H)，6.84(d，2H)，6.18(t，1H)，4.76(m，1H)，4.44(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.20min。
MSMH+566。
實(shí)施例67順-3-{4-[(2，6-二甲氧基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.34(d，2H)，7.26(t，1H)，6.82(d，2H)，6.69(d，2H)，5.75(t，1H)，4.78(m，1H)，4.22(d，2H)，3.82(s，6H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.01min。
MSMH+557。
實(shí)施例68順-3-{4-[(2-氟-4-甲基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)2-氟-4-甲基苯甲醛將3-氟甲苯(2.91g，0.0266mol)的無水四氫呋喃溶液冷卻至-78℃并加入1.4M正丁基鋰的己烷溶液(19mL，0.0266mol)，保持該反應(yīng)混合物溫度低于-75℃。加畢，滴加N，N，N′，N′，N″-五甲基二亞乙基三胺并在-78℃下在氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌2小時(shí)。滴加N，N-二甲基甲酰胺(3.89g，0.0532mol)并將該反應(yīng)混合物緩慢升溫，同時(shí)攪拌0.5小時(shí)。通過滴加1N鹽酸停止反應(yīng)并分層。水相進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×150mL)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥。有機(jī)相減壓濃縮并將此殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到2-氟-4-甲基苯甲醛(0.83g，0.006mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.17(s，1H)，7.74(d，1H)，7.23(m，2H)，2.41(s，3H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.18b)順-3-{4-[(2-氟-4-甲基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.33(m，3H)，7.00(m，2H)，6.74(d，2H)，6.52(t，1H)，4.76(m，1H)，4.32(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.34(s，3H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.58min。
MSMH+529。
實(shí)施例69順-3-{4-[(1H-2-吲哚基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.04(s，1H)，8.18(s，1H)，7.44(d，1H)，7.35(m，3H)，7.01(t，1H)，6.95(t，1H)，6.83(d，2H)，6.48(t，1H)，6.36(s，1H)，4.76(m，1H)，4.46(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.75 min。MSMH+536。
實(shí)施例70
順-3-(4-[(1-甲基-1H-2-吲哚基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.49(d，1H)，7.41(d，1H)，7.33(d，2H)，7.11(t，1H)，7.00(t，1H)，6.87(d，2H)，6.50(t，1H)，6.43(s，1H)，4.76(m，1H)，4.56(d，2H)，3.77(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.84 min。MSMH+550。
實(shí)施例71反-3-[4-(芐基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽反-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺按照步驟C制備。將反-3-[4-(芐基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.215g，0.00043mol)溶解于乙醇(20mL)并將此溶液加熱回流。立即加入馬來酸(0.151g，0.00129mol)溶液并再繼續(xù)回流10分鐘。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾收集此沉淀并干燥。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.34(m，7H)，6.74(d，2H)，6.16(s， 6H)，4.65(m，1H)，4.33(s，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.09 min。
MSMH+497。
實(shí)施例72反-3-{4-[(2-甲基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.35(d，2H)，7.30(t，1H)，7.17(m，3H)，6.74(d，2H)，6.42(t，1H)，4.60(m，1H)，4.28(d，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.14(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.44(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.24 min。
MSMH+511。
實(shí)施例73反-3-{4-[(2，6-二甲氧基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.35(d，2H)，7.24(t，1H)，6.81(d，2H)，6.69(d，2H)，5.75(t，1H)，4.60(m，1H)，4.20(d，2H)，3.82(s，6H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.15 min。
MSMH+557。
實(shí)施例74反-3-{4-[(2-氯芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.40(m，6H)，6.65(m，3H)，4.60(m，1H)，4.40(d，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.53 min。
MSMH+531。
實(shí)施例75反-3-{4-[(2-溴芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟D1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.64(d，1H)，7.39(m，4H)，7.22(t，1H)，6.65(m，3H)，4.60(m，1H)，4.36(d，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt14.79 min。
MSMH+576。
3-(4-氨基-苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的總方法步驟E將3-(4-氨基-苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)的混合物在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。該反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并再次濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需產(chǎn)物。
步驟F合成和純化(步驟E)后，將殘余物用二氯甲烷浸提(1mL)，加樣到Trikonex柱(7cm)上并用二氯甲烷(5mL)洗脫。切下所需譜帶(UV-檢測(cè))并將此化合物用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺＝90∶5∶5(10mL)的混合物萃取，過濾并將此濾液減壓濃縮。殘余物懸浮于乙醚(4mL)并過濾收集此沉淀并干燥。
實(shí)施例763-[4-(芐基氨基)苯基]-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟E1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.33(m，4H)，7.22(t，1H)，7.07(s，1H)，6.98(d，1H)，6.54(d，1H)，5.89(t，1H)，4.60(m，1H)，4.39(d，2H)，3.89(s，3H)，2.98(d，2H)，2.79(d，2H)，2.25(br，5H)，2.15(s，3H)，1.91(m，7H)，1.69(d，2H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.88min。
MSMH+527。
實(shí)施例773-{4-[(2，6-二甲氧基芐基)氨基]苯基}-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟E1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.24(t，1H)，7.12(d，1H)，7.04(s，1H)，6.93(d，1H)，6.68(d，2H)，4.81(t，1H)，4.60(m，1H)，4.31(d，2H)，3.82(s，9H)，2.98(d，2H)，2.79(d，2H)，2.25(br，5H)，2.15(s，3H)，1.91(m，7H)，1.69(d，2H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.71 min。
MSMH+587。
實(shí)施例78
3-{4-[(2-氯-6-氟芐基)氨基]苯基}-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺步驟F1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.37(m，2H)，7.25(t，1H)，7.11(d，1H)，7.07(s，1H)，6.86(d，1H)，5.21(t，1H)，4.60(m，1H)，4.49(d，2H)，3.83(s，3H)，2.98(d，2H)，2.79(d，2H)，2.25(br，5H)，2.15(s，3H)，1.89(m，4H)，1.69(d，2H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.94 min。
MSMH+579。
實(shí)施例79順-3-4-[芐基(甲基)氨基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)N-芐基-N-甲基-N-苯基胺在0℃下，將60％氫化鈉在礦物油中的分散液(2.37g，0.0592mol)加入到N-苯基-N-芐基胺(10.33g，0.0564mol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液中。該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌45分鐘。滴加碘代甲烷(7.99g，0.0564mol)并在室溫下在氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(250mL)和水(200mL)之間分配。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相，得到N-芐基-N-甲基-N-苯基胺(4.4g，0.0223mol)，為黃色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 7.30(m，2H)，7.20(m，5H)，6.70(d，2H)，6.60(t，1H)，4.55(s，2H)，2.99(s，3H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.53b)N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-甲基胺將N-芐基-N-苯基-N-甲基胺(4.41g，0.0224mol)溶解于無水二氯甲烷(150mL)中，并在30分鐘內(nèi)以10個(gè)相等的批量加入2，4，4，6-四溴環(huán)己二烯-1-酮(9.16g，0.0224mol)。室溫下繼續(xù)攪拌20小時(shí)。有機(jī)相依次用0.5N氫氧化鈉水溶液(100mL)、1N氫氧化鈉水溶液(100mL)、水(120mL)和鹽水(120mL)洗滌。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶99)作為流動(dòng)相，得到N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-甲基胺(3.52g，0.0127mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.27(m，7H)，6.65(d，2H)，4.55(s，2H)，2.99(s，3H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.67c)N-芐基-N-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺將N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-甲基胺(3.52g，0.0128mol)、乙硼烷頻哪醇酯(3.89g，0.0153mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.312g，0.00038mol)和醋酸鉀(3.72g，0.038mol)在N，N-二甲基甲酰胺(75mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(120mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-芐基-N-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.75g，0.00232mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 7.45(d，2H)，7.30(m，5H)，6.68(d，2H)，4.62(s，2H)，3.03(s，3H)，1.27(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.62d)順-3-{4-[芐基(甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將N-芐基-N-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.076g，0.000235mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.080g，0.000181mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.012g，0.000011mol)和碳酸鈉一水合物(0.056g，0.00045mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈0.1M醋酸銨在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-3-{4-[芐基(甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.069g，0.00011mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)8.19(s，1H)，(d，2H)，7.34(m，2H)，7.26(m，3H)，6.89(d，2H)，4.78(m，1H)，4.66(s，2H)，3.09(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.60 min。
MSMH+511。
實(shí)施例80順-3-{4-[芐基(乙基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-乙胺將N-芐基-N-苯基-N-乙胺(2.25g，0.0107mol)溶解于無水二氯甲烷(80mL)中，并在20分鐘內(nèi)以6個(gè)相等的批量加入2，4，4，6-四溴環(huán)己二烯-1-酮(4.36g，0.0107mol)。室溫下繼續(xù)攪拌20小時(shí)；有機(jī)相依次用0.5N氫氧化鈉水溶液(50mL)、1N氫氧化鈉水溶液(50mL)、水(70mL)和鹽水(75mL)洗滌。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶99)作為流動(dòng)相，得到N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-乙胺(2.38g，0.0082mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 7.27(m，7H)，6.59(d，2H)，4.51(s，2H)，3.46(q，2H)，1.11(t，3H)；
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶99)Rf0.23b)N-芐基-N-乙基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺將N-芐基-N-(4-溴苯基)-N-乙胺(2.22g，0.00765mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.33g，0.00919mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.188g，0.00023mol)和醋酸鉀(2.25g，0.023mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(3∶97)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-芐基-N-乙基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.24g，0.000712mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.42(d，2H)，7.30(m，2H)，7.20(m，3H)，6.63(d，2H)，4.57(s，2H)，3.48(q，2H)，1.27(s，12H)，1.09(t，3H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶99)Rf0.14c)順-3-{4-[芐基(乙基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將N-芐基-N-乙基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.065g，0.000193mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.071g，0.000161mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.011g，0.00001mol)和碳酸鈉一水合物(0.056g，0.00045mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，5μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-3-{4-[芐基(乙基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.049g，0.000076mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.42(d，2H)，7.34(m，2H)，7.26(m，3H)，6.83(d，2H)，4.78(m，1H)，4.61(s，2H)，3.55(q，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，1.19(t，3H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.47 min。
MSMH+525。
實(shí)施例81順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-2-苯基乙酰胺二乙酸鹽將順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.255g，0.00063mol)和苯基乙?；?0.102g，0.00066mol)溶解于無水二氯甲烷(20mL)并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?分鐘。滴加N，N-二異丙基乙胺(0.097g，0.00076mol)并繼續(xù)攪拌16小時(shí)。有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液(25mL)洗滌，減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-2-苯基乙酰胺二乙酸鹽(0.250g，0.000388mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.37(s，1H)，8.20(s，1H)，7.77(d，2H)，7.57(d，2H)，7.33(m，4H)，7.23(t，1H)，4.78(m，1H)，3.68(s，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.86 min。
MSMH+525。
實(shí)施例82
順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(苯乙基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-2-苯基乙酰胺二乙酸鹽(0.200g，0.00031mol)懸浮于無水四氫呋喃(15mL)中，將此懸浮液冷卻至0℃并立即加入氫化鋰鋁(0.177g，0.00416mol)。將所得混合物升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。通過滴加水停止反應(yīng)，減壓除去溶劑并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(苯乙基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.039g，0.0000619mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.37(d，2H)，7.31(m，4H)，7.22(m，1H)，6.75(d，2H)，6.07(t，1H)，4.78(m，1H)，3.32(m，2H)，2.86(t，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.03 min。
MSMH+511。
實(shí)施例83順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-3-苯基丙酰胺二乙酸鹽將順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.250g，0.000616 mol)和3-苯基丙酰氯(0.109g，0.000646mol)溶解于無水二氯甲烷(20mL)中，并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?分鐘。滴加N，N-二異丙基乙胺(0.095g，0.00074mol)并繼續(xù)攪拌16小時(shí)。有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌(25mL)，減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25m；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-3-苯基}丙酰胺二乙酸鹽(0.225g，0.00034mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.12(s，1H)，8.20(s，1H)，7.77(d，2H)，7.57(d，2H)，7.29(m，4H)，7.19(t，1H)，4.78(m，1H)，2.94(m，2H)，2.67(m 2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.57 min。
MSMH+539。
實(shí)施例84順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(3-苯基丙基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-3-苯基丙酰胺二乙酸鹽(0.090g，0.000167mol)懸浮于無水四氫呋喃(5mL)，將此懸浮液冷卻至0℃并立即加入氫化鋰鋁(0.01g，0.00025mol)。將所得混合物升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。通過滴加水停止反應(yīng)，減壓除去溶劑并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21 mL/min)得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(3-苯基丙基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.037g，0.000057mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.29(m，7H)，6.70(d，2H)，6.02(t，1H)，4.78(m，1H)，3.08(m，2H)，2.71(m，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(m，8H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.84 min。
MSMH+525。
中間體A3-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸向3-芐基氧代溴苯(0.590g，2.24mmol，1當(dāng)量)在THF(10mL)中的-78℃混合物中，加入正丁基鋰(1.6M在己烷中，2.9mL，4.7mmol，2.1當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物攪拌45分鐘，然后加入硼酸三異丙基酯(0.77mL，3.4mmol，1.5當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌30分鐘，并在2小時(shí)內(nèi)升溫至室溫。加入鹽酸(2.5M，10mL)并將此混合物劇烈攪拌16小時(shí)。分離有機(jī)層并用兩部分乙醚萃取水層(各50mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到棕色油狀物。殘余物用庚烷(100mL)研磨并通過過濾收集沉淀得到3-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸，為淡紫色固體(0.111g，0.486mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.00(2H，bs)，7.02-7.46(9H，m)，及5.09(2H，s)。
中間體B4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚將3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.47g，6.41mmol，1當(dāng)量)、Pb黑(0.341g，3.20mmol，0.5當(dāng)量)及甲酸銨(2.02g，32mmol，5當(dāng)量)在乙醇(50mL)中的混合物在80℃下加熱4小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將所得固體通過硅藻土板借助于乙醇(300mL)過濾移出。濃縮此濾液得到淡黃色固體，其通過用二氯甲烷洗滌(200mL)純化，得到4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚，為白色固體(1.89g，6.4mmol)1HNMR(d6DMSO，400MHz)δH8.22(1H，s)，7.45(2H，d，J＝8.5Hz)，6.92(2H，d，J＝8.5Hz)，5.17-5.24(1H，m)，2.01-2.10(4H，m)，1.87-1.90(2H，m)，1.67-1.70(2H，m)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt13.13 min。MSMH+296。
中間體CN-(3-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯向二-叔丁基二碳酸酯(9mL，39mmol，1.3當(dāng)量)在二氯甲烷(75mL)中的0℃混合物中，加入3-溴苯胺(3.3mL，30mmol，1當(dāng)量)的二氯甲烷(75mL)溶液。該反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫并攪拌16小時(shí)。粗品反應(yīng)混合物在飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和EtOAc(50mL)之間分配。分離有機(jī)層，并將水層用乙酸乙酯(100mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到紅色油狀物。通過柱色譜在硅膠上純化(以1L的3％ EtOAc/庚烷和1L 5％ EtOAc/庚烷洗脫)得到N-(3-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯，為粘稠的黃色固體(9.0g，33mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 9.54(1H，s)，7.75(1H，s)，7.37-7.39(1H，m)，7.12-7.22(2H，m)，及1.47(9H，s)。
中間體DN-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(3-溴苯基)氨基甲酸叔丁基酯(8.19g，30.1mmol，1當(dāng)量)、PdCl2(dppf)2(0.675g，0.90mmol，0.03當(dāng)量)、乙硼烷頻哪醇酯(9.17g，36.1mmol，1.2當(dāng)量)及醋酸鉀(8.86g，90.3mmol，3.0當(dāng)量)在DMF(150mL)中的混合物，在80℃下加熱12小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(100mL)并將固體通過硅藻土板借助于二氯甲烷(100mL)和Et2O(100mL)過濾移出。減壓除去溶劑并將此殘余物通過硅膠柱色譜純化(以1L的5％EtOAc/庚烷洗脫)得到N-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯，為白色固體(6.77g，21.2mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 9.30(1H，s)，7.85(1H，s)，7.45-7.50(1H，m)，7.25-7.30(2H，m)，1.47(9H，s)，及1.29(12H，s)。
中間體E順-N-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.89g，4.28mmol，1當(dāng)量)、叔丁基N-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸酯(1.64g，5.14mmol，1.2當(dāng)量)、四(三苯基膦)鈀(0.271g，0.257mmol，0.06當(dāng)量)及碳酸鈉一水合物(1.28g，10.3mmol，2.4當(dāng)量)在水(13mL)和DME(18mL)中的混合物在85℃下加熱14小時(shí)。讓此混合物冷卻至室溫。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(15mL)并將此水相用乙酸乙酯(30mL)萃取。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到淡黃色固體。通過柱色譜在硅膠上純化(以2L的95∶4∶1二氯甲烷∶Et 3N∶MeOH洗脫)得到順-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯，為白色固體(1.76g，3.47mmol)1H NMR(d6DMS0，400 MHz)δH 9.55(1H，s)，8.23(1H，s)，7.81(1H，s)，7.40-7.52(2H，m)，7.24(1H，d，J＝7.5Hz)，4.79-4.81(1H，m)，2.05-2.44(11H，m)，2.14(3H，s)，1.54-1.70(6H，m)，1.49(9H，s)；RP HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.61min。
中間體F順-3-(3-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-N-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.7g，3.3mmol，1當(dāng)量)和二氯甲烷(40mL)的混合物在0℃下冷卻，然后加入三氟乙酸(10.5mL，137mmol，41當(dāng)量)。在3小時(shí)內(nèi)將該反應(yīng)混合物升溫至室溫，減壓除去溶劑，并將此殘余物在二氯甲烷(50mL)和水(50mL)之間分配。分離有機(jī)層并用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)處理。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到順-3-(3-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(1.34g，3.30mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.21(1H，s)，7.17-7.21(1H，m)，6.85(1H，s)，6.72-6.74(1H，m)，6.65-6.68(1H，m)，5.36(2H，bs)，4.75-4.80(1H，m)，2.22-2.51(11H，m)，2.20(3H，s)，2.06-2.08(2H，m)，1.58-1.68(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.06 min。MSMH+407。
中間體G2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈將[2-(4-溴苯氧基)苯基](次甲基)銨(4.00g，14.6mmol，1當(dāng)量)、PdCl2(dppf)2(0.320g，0.44mmol，0.03當(dāng)量)、乙硼烷頻哪醇酯(4.45g，17.5mmol，1.2當(dāng)量)及醋酸鉀(4.30g，43.8mmol，3.0當(dāng)量)在DMF(70mL)中的混合物，在80℃下加熱16小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑得到黑色泥狀沉淀。所得固體通過硅藻土板借助于二氯甲烷(200mL)和EtOAc(200mL)過濾移出。濃縮此濾液得到暗棕色油狀物，其通過柱色譜在硅膠上純化(用500ml的5％MeOH/二氯甲烷洗脫)得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈，為淡黃色油狀物(2.04g，6.35mmol)1HNMR(d6DMSO，400MHz)H7.92-7.94(1H，m)，7.69-7.92(3H，m)，7.33-7.37(1H，m)，7.08-7.12(3H，m)，及1.30(12H，s)。
實(shí)施例851-環(huán)戊基-3-[4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1 H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.195g，0.660mmol，1當(dāng)量)、3-甲氧基羥基代硼酸(0.240g，1.58mmol，2.4當(dāng)量)、醋酸酮(II)(0.180g，0.990mmol，1.5當(dāng)量)和4分子篩在吡啶(0.27mL)中的混合物加熱回流5小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并將所得固體通過硅藻土板借助于二氯甲烷(20mL)和MeOH(20mL)濾出。濃縮此濾液得到油狀綠色固體，其通過柱色譜在硅膠上純化(用1L的二氯甲烷、600ml的20％MeOH/二氯甲烷和600ml的40％ MeOH/二氯甲烷洗脫)得到1-環(huán)戊基-3-[4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為黃棕色固體(0.072g，0.179mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.23(1H，s)，7.67(2H，d，J＝8.6Hz)，7.34(1H，t，J＝8.2Hz)，7.16(2H，d，J＝8.6Hz)，6.78(1H，d，J＝8.3Hz)，6.65-6.70(2H，m)，5.21-5.25(1H，m)，3.76(3H，s)，2.02-2.11(4H，m)，1.87-1.91(2H，m)，1.67-1.71(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)。Rt13.35 min。MSMH+402。
實(shí)施例863-[4-(芐基氧基)苯基]-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺向1-環(huán)戊基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.41g，17.1mmol，1當(dāng)量)和4-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸(4.87g，21.4mmol，1.2當(dāng)量)的DME(100mL)混合物中，加入四(三苯基膦)鈀(1.19g，1.03mmol，0.06當(dāng)量)和碳酸鈉一水合物(5.09g，41mmol，2.4當(dāng)量)的水(54mL)溶液。將此混合物在85℃下加熱2小時(shí)。再加入四(三苯基膦)鈀(1.19g，1.03mmol，0.06當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物在85℃下加熱3小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并過濾收集白色結(jié)晶固體(3.868g)。為了回收更多的產(chǎn)物，將此濾液真空濃縮并將此殘余物在水(50mL)和EtOAc(50mL)之間分配。水層用3部分乙酸乙酯萃取(各150mL)并將合并的有機(jī)萃取物用3部分水(各100mL)和鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色固體(0.916g)。合并這兩批固體并用熱EtOAc重結(jié)晶，得到3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(3.41g，8.8mmol)1HNMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.22(1H，s)，7.19-7.62(7H，m)，7.18(2H，d，J＝6.9Hz)，5.18-5.23(1H，m)，5.22(2H，s)，2.00-2.10(4H，m)，1.87-1.89(2H，m)，1.66-1.70(2H，m)。RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)。Rt13.05 min。
實(shí)施例871-環(huán)戊基-3-[4-(4-氟苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.151g，0.511mmol，1當(dāng)量)、4-(氟苯基)羥基代硼酸(0.357g，2.55mmol，5.0當(dāng)量)、醋酸酮(II)(0.139g，0.766mmol，1.5當(dāng)量)，及4分子篩在吡啶(0.21mL)和二氯乙烷(5mL)中的混合物，加熱回流48小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并將所得固體通過硅藻土板借助于MeOH(20mL)過濾移出。濃縮此濾液得到棕色油狀物，其通過柱色譜在硅膠上純化(用300ml的二氯甲烷、400ml的10％ MeOH/二氯甲烷和400ml的20％ MeOH/CH2Cl2洗脫)得到紅色油狀物，其進(jìn)一步通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，21mL/min)。真空下除去溶劑得到1-環(huán)戊基-3-[4-(4-氟苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.010g，0.025mmol)1H NMR(d6CDCl3，400MHz)δH8.37(1H，s)，7.65(2H，d，J＝8.6Hz)，7.03-7.26(6H，m)，5.59(2H，bs)，5.27-5.35(1H，m)，2.09-2.21(4H，m)，1.95-2.02(2H，m)，1.68-1.79(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.63 min。MSMH+390。
實(shí)施例881-環(huán)戊基-3-4-[3-(三氟甲基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.170g，0.576mmol，1當(dāng)量)、3-(三氟甲基苯基)羥基代硼酸(0.328g，1.73mmol，3.0當(dāng)量)、醋酸酮(II)(0.108g，0.594mmol，1.0當(dāng)量)及4分子篩在吡啶(0.23mL)和二氯乙烷(5.8mL)中的混合物，加熱回流6小時(shí)。加入醋酸酮(II)(0.050g，0.5當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物加熱回流16小時(shí)。再加入分子篩和3-(三氟甲基苯基)羥基代硼酸(0.250g，2.3當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物加熱回流54小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將所得固體通過硅藻土板借助于MeOH(20mL)濾出。濃縮此濾液得到棕色固體，其通過硅膠柱色譜純化(用400ml的庚烷、400ml的10％ EtOAc/庚烷、400ml的20％ EtOAc/庚烷和400ml的50％ EtOAc/庚烷洗脫)得到黃色固體。通過制備RP-LC/MS進(jìn)一步純化(Gilson-Micromass C18，5μm，130，21cm，在9分鐘內(nèi)0％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25mL/min)，真空下除去乙腈，并將此含水混合物凍干得到1-環(huán)戊基-3-4-[3-(三氟甲基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為淡棕色固體(0.017g，0.039mmol)1HNMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.29(1H，s)，7.68-7.74(3H，m)，7.6(1H，d，J＝8.1Hz)，7.52-7.54(2H，m)，7.24(2H，d，J＝8.7Hz)，7.7(2H，bs)，5.20-5.28(1H，m)，2.03-2.11(4H，m)，1.90-1.91(2H，m)，1.68-1.70(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.72min。MSMH+440。
實(shí)施例891-環(huán)戊基-3-[4-(3-硝基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.202g，0.684mmol，1當(dāng)量)、3-硝基苯基羥基代硼酸(0.571g，3.42mmol，5.0當(dāng)量)、醋酸酮(II)(0.186g，1.02mmol，1.5當(dāng)量)及4分子篩在吡啶(0.28mL)和二氯乙烷(6.8mL)中的混合物，加熱回流24小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將二氯甲烷(25mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板借助于MeOH(20mL)濾出。濃縮此濾液得到棕色液體，其通過柱色譜在硅膠上純化(用400ml的庚烷、400ml的10％ EtOAc/庚烷、400ml的20％ EtOAc/庚烷和800ml的MeOH洗脫)得到紅色油狀物，其進(jìn)一步通過制備RP-LC/MS純化(Gilson-Micromass C18，5μm，130，21cm，在9分鐘內(nèi)0％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到1-環(huán)戊基-3-[4-(3-硝基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為淡黃色固體(0.034g，0.081mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH8.22(1H，s)，7.28-7.74(6H，m)，7.18(2H，d，J＝8.6Hz)，7.7(2H，bs)，5.13-5.26(1H，m)，2.02-2.10(4H，m)，1.89-1.91(2H，m)，1.68-1.70(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt19.98 min。MSMH+417。
實(shí)施例901-環(huán)戊基-3-4-[4-(三氟甲氧基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.100g，0.339mmol，1當(dāng)量)、4-三氟甲氧基苯基羥基代硼酸(0.349g，1.69mmol，5.0當(dāng)量)、醋酸酮(II)(0.092g，0.51mmol，1.5當(dāng)量)及4A分子篩在吡啶(0.12mL)和二氯乙烷(3.4mL)中的混合物，加熱回流72小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫。加入二氯甲烷(25mL)并將所得固體通過硅藻土板濾出。減壓除去溶劑得到棕色油狀物其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到1-環(huán)戊基-3-4-[4-(三氟甲氧基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.020g，0.044mmol)1HNMR(d6CDCl3，400MHz)δH 8.53(1H，s)，7.69(2H，d，J＝8.6Hz)，7.07-7.26(6H，m)，5.55(2H，bs)，5.28-5.36(1H，m)，2.16-2.21(4H，m)，1.94-2.04(2H，m)，1.72-1.79(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt16.33 min。MSMH+456。
實(shí)施例911-環(huán)戊基-3-4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺用合成1-環(huán)戊基-3-4-[4-(三氟甲氧基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺時(shí)所詳述的方法，制備了1-環(huán)戊基-3-4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.008g，0.018mmol)1H NMR(d6CDCl3，400MHz)δH8.34(1H，s)，7.60-7.73(4H，m)，7.05-7.32(4H，m)，5.89(2H，bs)，5.27-5.34(1H，m)，2.17-2.21(4H，m)，2.00-2.03(2H，m)，1.72-1.79(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.77min。MSMH+440。
實(shí)施例923-[3-(芐基氧基)苯基]-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺向1-環(huán)戊基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.631mmol，1當(dāng)量)和3-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸(0.110g，0.487mmol，1.0當(dāng)量)在DME(6mL)中的混合物中，加入四(三苯基膦)鈀(0.044g，0.038mmol，0.07當(dāng)量)和碳酸鈉一水合物(0.187g，1.51mmol，2.4當(dāng)量)的水(2mL)溶液。將此混合物在85℃下加熱16小時(shí)，然后冷卻至室溫。減壓除去溶劑并將此殘余物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到油狀橘紅色固體。用熱乙酸乙酯重結(jié)晶得到橘紅色固體，其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到3-[3-(芐基氧基)苯基]-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.023g，0.060mmol)1H NMR(d6CDCl3，400MHz)δH8.34(1H，s)，7.27-7.46(8H，m)，7.07-7.10(1H，m)，5.63(2H，bs)，5.31(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，5.16(2H，s)，2.15-2.20(4H，m)，1.96-2.01(2H，m)，1.72-1.75(2H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.00min。MSMH+386。
實(shí)施例93-99合成[被取代的(甲基氨基)]苯基吡唑并嘧啶的總方法如下向順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的二氯乙烷的0.10M溶液中，加入1.5當(dāng)量的被取代的苯甲醛、3.8當(dāng)量的冰醋酸和3.5當(dāng)量的三乙酰氧基硼氫化鈉。此混合物室溫下攪拌16小時(shí)。再加入3.3當(dāng)量的三乙酰氧基硼氫化鈉(如果需要)。將該反應(yīng)混合物攪拌1.5小時(shí)，然后用二氯乙烷(5mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)稀釋。分離有機(jī)層并將此水層用二氯甲烷(10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到所需產(chǎn)物。
通過上述方式合成的化合物包括
名稱 HPLC rt M+(分鐘)實(shí)施例93 順-3-{4-[(3-氟芐基)氨基]苯 13.25515.3基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽實(shí)施例94 順-3-{4-[(2-氟芐基)氨基]苯 13.24515.3基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽實(shí)施例95 順-3-{4-[(4-甲氧基芐基)氨13.08527.3基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽實(shí)施例96 順-3-{4-[(3-甲氧基芐基)氨13.12527.3基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽實(shí)施例97 順-3-{4-[(4-氟芐基)氨基]苯 13.35515.3基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽實(shí)施例98 順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán) 10.19498.5己基]3-4-[(3-吡啶基甲基)氨基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺實(shí)施例99 順-3-{4-[(2-甲氧基芐基)氨13.57527.4基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺RP-HPLC(Delta Pak C18，5mm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)實(shí)施例100順-3-[3-(芐基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽向順-3-(3-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.104g，0.256mmol，1當(dāng)量)的二氯乙烷(2mL)溶液中，加入苯甲醛(0.03mL，0.282mmol，1.1當(dāng)量)、冰醋酸(0.06mL，1.0mmol，3.9當(dāng)量)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.212g，1.0mmol，3.9當(dāng)量)。此混合物室溫下攪拌16小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)，分離有機(jī)層，并將此水層用兩部分二氯甲烷萃取(各15mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色油狀物，其通過制備RP-HPLC純化(兩次)(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-3-[3(芐基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三乙酸鹽，為白色固體(0.023g，0.046mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.21(1H，s)，7.40(4H，m)，7.20-7.25(2H，m)，6.88(1H，s)，6.78(1H，d，J＝7.7Hz)，6.67-6.69(1H，m)，6.56-6.58(1H，m)，4.75-4.79(1H，m)，4.32(2H，d，J＝5.8Hz)，2.21-2.49(11H，m)，2.14(3H，s)，2.05-2.14(2H，m)，1.89(9H，s)，1.54-1.68(4H，m)；RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.04min。
MSMH+497。
實(shí)施例101順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.29g，5.19mmol，1當(dāng)量)、2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]芐腈(2.0g，6.2mmol，1.2當(dāng)量)、四(三苯基膦)鈀(0.329g，0.311mmol，0.06當(dāng)量)、DME(21mL)及碳酸鈉一水合物(1.54g，12.5mmol，2.4當(dāng)量)在水(16mL)中的混合物，在85℃下加熱60小時(shí)。再加入四(三苯基膦)鈀(0.100g，0.02當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物在85℃下加熱6.5小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并在飽和碳酸氫鈉水溶液(25mL)和EtOAc(25mL)之間分配。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。殘余物用乙醚研磨，并通過柱色譜在硅膠上純化(用1L的5％甲醇/二氯甲烷、1L的10％甲醇/二氯甲烷、1L的20％甲醇/二氯甲烷和1L的25％甲醇/二氯甲烷洗脫)得到順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈，為淡黃色固體(1.79g，3.52mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.24(1H，s)，7.94(1H，d，J＝7.7Hz)，7.68-7.73(3H，m)，7.31-7.34(3H，m)，7.18(1H，d，J＝8.5Hz)，4.78-4.83(1H，m)，2.21-2.51(11H，m)，2.19(3H，s)，2.05-2.08(2H，m)，1.56-1.71(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.16min。MSMH+509。
實(shí)施例102順-2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺三乙酸鹽將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.111g，0.218mmol，1當(dāng)量)、25％氫氧化鈉水溶液(1mL)及30％H2O2(1mL)在二噁烷(1mL)中的混合物，在100℃下加熱16小時(shí)。再加入部分30％H2O2(1mL)并將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱2小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用二氯甲烷(15mL)稀釋。分離有機(jī)層并減壓除去溶劑得到淡黃色固體，其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲酰胺三乙酸鹽，為米白色固體(0.020g，0.038mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH8.23(1H，s)，7.75(1H，d，J＝7.7Hz)，7.64(3H，d，J＝6.7Hz)，7.56(1H，s)，7.48(1H，t，J＝7.5Hz)，7.27(1H，t，J＝7.4Hz)，7.19(2H，d，J＝8.6Hz)，7.06(1H，d，J＝7.7Hz)，4.76-4.82(1H，m)，2.20-2.50(11H，m)，2.14(3H，s)，2.04-2.08(2H，m)，1.89(9H，s)，1.58-1.70(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.79min。MSMH+527。
實(shí)施例103順-3-4-[2-(氨基甲基)苯氧基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.097g，0.19mmol，1當(dāng)量)和氫化鋰鋁(0.036g，0.95mmol，5當(dāng)量)在THF(2mL)中的混合物在66℃下加熱2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并在冰水(30mL)和二氯甲烷(50mL)之間分配。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色固體，其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-3-4-[2-(氨基甲基)苯氧基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.078g，0.152mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH8.22(1H，s)，7.57-7.64(3H，m)，7.21-7.29(2H，m)，7.04(2H，d，J＝8.7Hz)，7.01(1H，d，J＝7.9Hz)，4.76-4.81(1H，m)，3.74(2H，s)，2.20-2.51(11H，m)，2.14(3H，s)，2.05-2.08(2H，m)，1.57-1.70(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.85min。
MSMH+513。
實(shí)施例104順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-4-[2-(2H-1，2，3，4-四唑-5-基)苯氧基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐腈(0.070g，0.14mmol，1當(dāng)量)和疊氮基三丁基錫(0.8mL，2.4mmol，17當(dāng)量)的混合物，在85℃下加熱80小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用EtOAc(15mL)稀釋。過濾收集所得沉淀得到米色固體，其通過制備RP-HPLC純化(RaininC18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)處理以除去殘余的乙酸。此含水混合物用二氯甲烷(25mL)萃取，并將有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-4-[2-(2H-1，2，3，4-四唑-5-基)苯氧基]苯基1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽，為白色固體(0.009g，0.016mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.20(1H，s)，7.94(1H，d，J＝7.7Hz)，7.54(2H，d，J＝8.7Hz)，7.32-7.37(1H，m)，7.24-7.28(1H，m)，7.11(1H，d，J＝9.1Hz)，6.99(2H，d，J＝8.7Hz)，4.73-4.80(1H，m)，2.23-2.34(11H，m)，2.14(3H，s)，2.05-2.07(2H，m)，1.68(6H，s)，1.56-1.65(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.86min。MSMH+552。
實(shí)施例105順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-硝基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(0.200g，0.491mmol，1當(dāng)量)和60％氫化鈉(0.020g，0.49mmol，1當(dāng)量)在二噁烷(4.9mL)中的混合物，室溫下攪拌20分鐘。加入2-氟硝基苯(0.06mL，0.6mmol，1.1當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱3小時(shí)。再加入氫化鈉(0.010g，0.24mmol，0.5當(dāng)量)和2-氟硝基苯(0.02mL，0.2mmol，0.4當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱3小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將所得固體過濾移出，其中借助二氯甲烷(10mL)和EtOAc(10mL)。濃縮此濾液得到黃色半固體，其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-硝基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽，為白色固體(0.023g，0.043mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.23(1H，s)，8.10(1H，d，J＝8.2Hz)，7.68-7.73(3H，m)，(1H，m)，7.33-7.40(1H，m)，7.31(1H，d，J＝7.3Hz)，7.24(2H，d，J＝8.7Hz)，4.76-4.82(1H，m)，2.26-2.51(11H，m)，2.24(3H，s)，2.17-2.21(2H，m)，2.05(6H，s)，1.56-1.71(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.09min。
實(shí)施例106順-3-[4-(2-氨基苯氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-[4-(2-硝基苯氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.059g，0.091mmol，1當(dāng)量)、冰醋酸(0.03mL，0.5mmol，5當(dāng)量)及10％ Pd-C(0.024g，0.4wt/wt當(dāng)量)在乙醇(1mL)中的混合物，室溫下在氫氣的正壓下攪拌16小時(shí)。將固體過濾移出，其中借助二氯甲烷(10mL)，并將此濾液濃縮得到黃色油狀物。殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-3-[4-(2-氨基苯氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為米白色固體(0.018g，0.036mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.22(1H，s)，7.59(2H，d，J＝8.6Hz)，7.05(2H，d，J＝8.7Hz)，6.85-6.98(3H，m)，6.58-6.61(1H，m)，4.93(2H，bs)，4.78-4.80(1H，m)，2.20-2.50(11H，m)，2.14(3H，s)，2.05-2.09(2H，m)，1.55-1.70(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.00min。MSMH+499。
實(shí)施例107[2-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-苯氧基苯基]甲醇
a)(2-溴-5-苯氧基苯基)甲醇向3-苯氧基苯基甲醇(4.0g，0.020mol)的無水乙腈溶液中，室溫下加入1-溴-2，5-吡咯烷二酮(3.73g，0.021mol)。將此混合物室溫下攪拌1.5小時(shí)在氮?dú)夥障?。減壓除去溶劑。將四氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中，并將此混合物過濾。將此濾液濃縮為殘余物，并將此殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相洗脫得到(2-溴-5-苯氧基苯基)甲醇(4.7g，0.017mol)RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt11.7min。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.18b)5-苯氧基-1，3-二氫-2，1-苯并氧雜硼雜環(huán)戊二烯-1-醇在-78℃下在氮?dú)夥障?，將正丁基鋰的正己烷溶?2.24M，8.6mL，0.019mol)緩慢加入到(2-溴-5-苯氧基苯基)甲醇(2.21g，0.0079mol)的無水四氫呋喃(50mL)溶液中。在-78℃下將該反應(yīng)攪拌30分鐘，然后在-25℃下攪拌20分鐘。將該反應(yīng)冷卻至-50℃并緩慢加入硼酸三異丙基酯(4.075g，0.0216mol)。該反應(yīng)升溫至室溫并攪拌1小時(shí)。加入1N鹽酸(20mL)使pH達(dá)到5，然后將該反應(yīng)室溫下攪拌1小時(shí)。該反應(yīng)混合物用乙醚(3×40mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(60mL)和鹽水(60mL)洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到殘余物，并將此殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)，接著用乙酸乙酯/正庚烷(1∶4)作為流動(dòng)相，得到5-苯氧基-1，3-二氫-2，1-苯并氧雜硼雜環(huán)戊二烯-1-醇(1.3g，0.0058mol)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt10.8min。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶2)Rf0.24c)[2-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5苯氧基苯基]甲醇將1-環(huán)戊基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.36g，0.0011mol)，5-苯氧基-1，3-二氫-2，1-苯并氧雜硼雜環(huán)戊二烯-1-醇(0.30g，0.0013mol)、四(三苯基膦)鈀(0.077g，0.000067mol)和碳酸鈉一水合物(0.34g，0.0028mol)在乙二醇二甲基醚(7mL)和水(5mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?7小時(shí)。讓此混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。殘余物在乙酸乙酯(20mL)和飽和碳酸鈉水溶液(20mL)之間分配。水層進(jìn)一步用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。減壓下除去有機(jī)溶劑。將乙酸乙酯(15mL)加入到殘余物中并形成白色沉淀。將此固體過濾并用丙酮(2×15mL)和二氯甲烷(1×15mL)洗滌得到[2-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-苯氧基苯基]甲醇(0.267g，0.00067mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.46(m，2H)，7.38(m，1H)，7.28(m，1H)，7.13(m，3H)，7.00(m，1H)；5.28(m，1H)，5.17(m，1H)，4.48(d，2H)，2.08(br，2H)，1.98(br，2H)，1.86(br，2H)，1.68(br，2H)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt10.5min。
MSMH+402實(shí)施例108順-1-(氨基甲基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽a)順-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將氧化锍三甲基碘(0.33g，0.0015mol)和氫化鈉(60％在油中，0.055g，0.00138mol)在甲基亞砜(4mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘。將該反應(yīng)混合物冷卻至10℃并加入存在于甲基亞砜(2mL)中的4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(0.5g，0.00125mol)。該反應(yīng)混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。此混合物在飽和氯化銨水溶液(20mL)和二氯甲烷之間分配，并將水層用二氯甲烷(3×20mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到順-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.527g，0.00125mmol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.68(d，2H)，7.42(m，2H)，7.19(m，5H)，4.90(br，1H)，2.70(s，2H)，2.17(br，4H)，1.97(br，2H)，1.32(br，2H)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在23分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt11.7min。
MSMH+413b)順-1-(氨基甲基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽將在氨(2M在甲醇中，15mL)的順-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.62g，0.0015mol)和20％N，N-二甲基甲酰胺的異丙醇(15mL)溶液在65℃下在壓力容器中加熱18小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶5∶93)，接著用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶8∶90)作為流動(dòng)相，得到順-1-(氨基甲基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇(0.11g，0.00026mol)。在40℃下將此化合物溶解于乙酸乙酯(10mL)并加入預(yù)熱的馬來酸(0.060g，0.000512mol)的乙酸乙酯(2mL)溶液。將此混合物在40℃下加熱10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-1-(氨基甲基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽(0.140g，0.00026mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.73(br，3H)，7.64(d，2H)，7.42(m，2H)，7.13(m，5H)，6.01(s，2H)，4.94(s，1H)，4.70(br，1H)，2.79(s，2H)，2.36(br，2H)，1.76(br，4H)，1.58(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.9min。
MSMH+431實(shí)施例109順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽a)順-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}甲腈向順-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(4.4g，0.011mol)和高氯酸鋰(1.7g，0.016mol)的混合物中，加入在乙腈(600ml)中的氰化鉀(1.04g，0.016mol)。將該反應(yīng)混合物回流6小時(shí)。減壓除去溶劑。將此混合物用水(200mL)稀釋并用乙醚(2×300mL)萃取。合并的有機(jī)相用水和鹽水洗滌并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑得到順-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}甲腈(4.30g，0.0098mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.4min。
MSMH+441b)順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽向在甲醇(100ml)和氫氧化銨(5mL)的順-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}甲腈(3.4g，0.0077mol)中，加入阮內(nèi)鎳(50％在水中的漿狀物，3mL)。將此混合物在氫氣氛下(1atm)攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾并真空下除去溶劑得到粗品順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇(1.82g，0.0041mol)。將0.8g的粗品順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇在硅膠上通過急驟色譜純化，用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶3∶95)，接著用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶12∶86)作為流動(dòng)相，得到順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇(0.423g，0.00095mol)。在40℃下將此化合物溶解于乙酸乙酯(40mL)中，并加入預(yù)熱的馬來酸(0.13g，0.0014mol)的乙酸乙酯(5mL)溶液。此混合物在40℃下加熱10分鐘，冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌并干燥得到順-1-(2-氨基乙基)-4-[4-氨基-3-(4苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己醇馬來酸鹽(0.186g，0.00033mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.67(m，2H)，7.60(br，3H)，7.42(m，2H)，7.16(m，5H)，6.01(s，2H)，4.73(br，1H)，4.53(s，1H)，2.92(br，2H)，2.38(br，2H)，1.72(br，6H)，1.54(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.1min。
MSMH+455c)順-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1羥基環(huán)己基}乙酰胺向順-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基)甲腈(0.972g，0.0022mol)和碳酸鉀(1.28g，0.00093)的甲基亞砜(20mL)混合物中，在20℃下緩慢加入30％過氧化氫水溶液(3mL)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌18小時(shí)。該反應(yīng)燒瓶置于冰浴中，并將冰水(20mL)緩慢倒入到此反應(yīng)中。將此混合物用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌并用硫酸鎂干燥。真空下除去溶劑。殘余物用二氯甲烷(8mL)研磨，并將此固體過濾得到順式-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酰胺(0.542g，0.0012mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.67(m，2H)，7.42(m，3H)，7.16(m，5H)，7.06(s，1H)，4.95(br，1H)，4.65(m，1H)，2.39(m，2H)，2.24(s，2H)，1.70(br，6H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+459實(shí)施例1101-(3-氮雜環(huán)丁烷基(azetanyl))-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺
a)3-羥基-1-氮雜環(huán)丁烷(azetane)甲酸叔丁基酯向1-二苯甲基-3-氮雜環(huán)丁醇(azetanol)(7.5g，0.031mol)和二碳酸二叔丁基酯(10.3g，0.047mol)的混合物中，加入在乙酸乙酯(200mL)中的20％氫氧化鈀-碳(1.0g)。此混合物在Parr-氫化儀中室溫下在氫氣氛下?lián)u動(dòng)20小時(shí)。此混合物通過硅藻土過濾，并將此濾液減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用二氯甲烷、接著用甲醇/二氯甲烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到3-羥基-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯(5.015g，0.029mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ4.59(m，1H)，4.14(m，2H)，3.80(m，2H)，2.55(br，1H)，1.50(s，9H)TLC(甲醇/二氯甲烷＝2∶98)Rf0.13b)3-[(甲基磺?；?氧基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯向3-羥基-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯(4.0g，0.023mol)的無水吡啶(50mL)溶液中，在-20℃氮?dú)夥障拢尤爰淄榛酋；?5.3g，0.046mol)。在-20℃至-30℃下，將此黃色不均勻的混合物攪拌1小時(shí)，然后在0℃至-5℃下攪拌2小時(shí)。將此混合物倒入到冰水(50mL)中。水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×50mL)、5％枸櫞酸水溶液(4×50mL)、水(1×50mL)、飽和碳酸氫鈉(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到3-[(甲基磺酰基)氧基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯，為褐色油狀物(4.85g，0.019mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ5.19(m，1H)，4.25(m，2H)，4.07(m，2H)，3.04(s，3H)，1.42(s，9H)TLC(甲醇/二氯甲烷＝2∶98)Rf0.28c)3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯向3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.0g，0.0033mol)和碳酸銫(2.14g，0.0066mol)在無水N，N-一甲基甲酰胺(30mL)中的混合物中，室溫氮?dú)夥障录尤氪嬖谟跓o水N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的3-[(甲基磺?；?氧基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯(1.66g，0.0066mol)。此混合物在75℃下攪拌22小時(shí)。將此混合物倒入到冰水(50mL)中。水相用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×70mL)和鹽水(1×70mL)洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用二氯甲烷接著用甲醇/二氯甲烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯(0.81g，0.0018mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(m，2H)，7.19(m，5H)，5.70(br，1H)，4.35(br，4H)，1.39(s，9H)RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt12min。
MSMH+4591-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺向3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷甲酸叔丁基酯(0.81g，0.0018mol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，在0℃氮?dú)夥障戮徛尤?0％三氟乙酸的二氯甲烷(10mL)溶液。將此混合物升溫至室溫并攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。在0℃下將5N氫氧化鈉水溶液加入到殘余物中，使pH為11。水相用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×60mL)和鹽水(1×60mL)洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.44g，0.0012mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.28(s，1H)，7.70(d，2H)，7.45(m，2H)，7.18(m，5H)，5.70(m，1H)，4.20(m，2H)，4.05(m，2H)RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.8min。
MSMH+359總方法
將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺烷基化向1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol，1當(dāng)量)和碳酸鉀(0.058g，0.00042mol，3當(dāng)量)在無水乙腈的混合物中，室溫下加入相應(yīng)的烷基溴(0.00014mol，1當(dāng)量)。將此混合物攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到相應(yīng)的烷基氮雜環(huán)丁烷。
實(shí)施例111a)烷基溴2-溴-1-乙醇2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-乙醇1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(m，2H)，7.14(m，5H)，5.41(m，1H)，4.69(br，1H)，3.83(m，2H)，3.63(m，2H)，3.42(m，2H)，2.62(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+403實(shí)施例112b)烷基溴2-溴乙基甲基醚1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-氮雜環(huán)丁烷基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.09(br，1H)，8.27(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，5H)，5.69(m，1H)，4.13(m，2H)，3.94(m，2H)，3.51(m，2H)，3.36(s，3H)，2.95(m，2H)，2.08(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+417實(shí)施例113c)烷基溴1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷1-{1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(m，2H)，7.14(m，5H)，5.41(m，1H)，3.79(m，2H)，3.62(m，2H)，3.44(br，6H)，3.23(s，3H)，2.69(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+461實(shí)施例1141-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-3-氮雜環(huán)丁烷基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.06g，0.00017mol)、1-甲基-4-哌啶酮(0.057g，0.0005mol)，及乙酸(0.03g，0.0005mol)在二氯乙烷(2.5mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢枰粋€(gè)半小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.072g，0.00034mol)加入到此混合物中，并在室溫氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。減壓除去溶劑，并將此殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶15∶83)作為流動(dòng)相，得到1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)-3-氮雜環(huán)丁烷基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.029g，0.000064mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.68(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，3H)，7.08(d，2H)，5.64(m，1H)，5.57(br，2H)，3.93(m，2H)，3.73(m，2H)，2.83(br，2H)，2.40(br，3H)，2.00(br，1H)，1.78(br，4H)，1.46(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt8.9min。
MSMH+456實(shí)施例1151-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]-3-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.06g，0.00017mol)、1-甲基-1H-2-咪唑甲酸(0.056g，0.0005mol)及乙酸(0.03g，0.0005mol)在二氯乙烷(2.5mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢枰粋€(gè)半小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.072g，0.00034mol)加入到此混合物中，并在室溫氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。減壓除去溶劑，并將此殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HSC18，8μm，250×21.1mm；在25分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]-3-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.020g，0.000044mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.35(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.20(d，3H)，7.18(d，2H)，6.93(s，1H)，6.85(s，1H)，5.59(m，3H)，3.93(m，6H)，3.85(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.5min。
MSMH+453實(shí)施例1161-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-乙酮向1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.020g，0.000056mol)和碳酸鉀(0.016g，0.00012mol)在無水N，N，-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物中，室溫下加入乙酸酐(0.009g，0.000084mol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，5μm，100×20mm；在7.5分鐘內(nèi)含0.05M乙酸銨的20％-85％，251mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-乙酮(0.014g，0.000035mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.71(d，2H)，7.44(m，2H)，7.17(m，5H)，5.72(m，1H)，4.66(m，1H)，4.58(m，1H)，4.35(m，1H)，4.29(m，1H)，1.84(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.9min。
MSMH+401實(shí)施例117 順-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇a)3-亞丙基環(huán)丁基甲烷磺酸酯將3-亞丙基-1-環(huán)丁醇(0.344g，0.00307mol)的吡啶(5mL)溶液冷卻至0℃。滴加甲烷磺?；?0.422g，0.00369mol)，保持溫度低于2℃。將此混合物攪拌2小時(shí)，然后倒入到冰水(15mL)中，并用乙醚(2×10mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌(3×10mL)。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑得到3-亞丙基環(huán)丁基甲烷磺酸酯(0.492g，0.00221mol)，為黃色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ5.25-5.29(m，1H)，4.98-5.04(m，1H)，3.17(s，3H)，2.98-3.16(m，2H)，2.78-2.96(m，2H)，1.86-1.91(m，2H)，0.91(t，3H)。
b)3-(4-苯氧基苯基)-1-(3-亞丙基環(huán)丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.743g，0.00245mol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液與3-亞丙基環(huán)丁基甲烷磺酸酯(0.699g，0.00367mol)和碳酸銫(0.866g，0.00367mol)在70℃下反應(yīng)3天。將該反應(yīng)混合物倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(2×20mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)。真空下除去溶劑得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(3-亞丙基環(huán)丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.655g，0.00165mol)，為黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(t，2H)，7.10-7.19(m，5H)，5.35-5.40(m，1H)，5.38-5.33(m，1H)，3.09-3.38(m，4H)1.90-1.97(m，2H)，0.96(t，3H)；MSMH+398；TLC(二氯甲烷/甲醇95∶5)Rf0.52。
c)3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁酮將3-(4-苯氧基苯基)-1-(3-亞丙基環(huán)丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.156g，0.00039mol)的二氯甲烷(25mL)溶液冷卻至-78℃并通入臭氧直到該溶液變藍(lán)。將該反應(yīng)混合物攪拌5分鐘并通氮?dú)庵钡剿{(lán)色消失。加入二甲硫(0.12mL，0.097g，0.00157mol)并將此混合物溫度回到室溫下。真空下除去溶劑得到3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁酮(0.144g，0.00038mol)，為黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.29(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，5.61-5.66(m，1H)，3.65-3.74(m，4H)；MSMH+372；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90∶10)Rf0.62。
順-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇將3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁酮(0.208g，0.00056mol)在四氫呋喃(10mL)和無水乙醇(5mL)中的溶液與硼氫化鈉(0.021g，0.00056mol)室溫下反應(yīng)4小時(shí)。加入水(5mL)并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)。真空下除去溶劑得到順-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇(0.090g，0.00024mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.68(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，5.31(d，1H)，4.82-4.89(m，1H)，4.04-4.10(m，1H)，2.70-2.73(m，2H)，2.50-2.60(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.50min.；MSMH+374實(shí)施例118反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇a)反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基4-硝基苯甲酸酯將順-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇(0.113g，0.000302mol)、4-硝基苯甲酸(0.101g，0.000605mol)和三苯基膦(0.159g，0.000605mol)的四氫呋喃(5mL)溶液冷卻至0℃。滴加偶氮二甲酸二乙酯(0.096mL，0.159g，0.000605mol)，保持溫度低于10℃。在18小時(shí)內(nèi)讓此混合物溫度回到室溫下。真空下除去溶劑并將此殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(3∶1)。真空下除去溶劑得到反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基4-硝基苯甲酸酯(0.081g，0.000164mmol)，為黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.39(d，2H)，8.29(d，2H)，8.26(s，1H)，7.72(d，2H)，7.44(t，2H)7.12-7.22(m，5H)，5.60-5.69(m，1H)，3.03-3.12(m，2H)，2.85-2.94(m，2H)。
反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇將反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基4-硝基苯甲酸酯(0.081g，0.000164mol)的甲醇(5mL)溶液與氫氧化鉀(0.091g，0.00164mol)加熱回流1小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在水(10mL)和乙酸乙酯(5mL)之間分配。分層并將水層用乙酸乙酯(2×5mL)萃取。合并的有機(jī)相用1N氫氧化鈉水溶液(5mL)和鹽水(5mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。殘余物懸浮于水并凍干得到反式3-[4氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇(0.055g，0.000147mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.68(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，5.43-5.52(m，1H)，4.53-4.65(m，1H)，2.75-2.80(m，2H)，2.39-2.44(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.77min。
MSMH+374實(shí)施例1191-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基}-4-甲基六氫吡嗪二鎓二馬來酸鹽將3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁酮(0.300g，0.00081mol)、N-甲基哌嗪(0.243g，0.00242mol)和乙酸(0.146g，0.00242mol)在1，2-二氯乙烷(20ml)中的混合物，在40℃下攪拌20分鐘，并在1小時(shí)內(nèi)分三批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.223g，0.00105mol)。將此混合物在40℃下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)和氯仿(15ml)之間分配。分離有機(jī)層并將水層再用萃取氯仿3次(每次15ml)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(97∶3)作為流動(dòng)相。真空下除去溶劑并將此殘余物(0.120g，0.000263mol)溶解于無水乙醇(10mL)。加入馬來酸(0.122g，0.001053mol)的無水乙醇(5mL)溶液并將此混合物回流攪拌15分鐘。將此溶液冷卻至室溫并過濾此沉淀，用無水乙醇(3×5mL)洗滌。真空下除去溶劑得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基}-4-甲基六氫吡嗪二鎓二馬來酸鹽(0.181g，0.000397mmol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.25(s，1H)，7.67(d，2H)，7.44(t，2H)，7.10-7.20(m，5H)，6.14(s，4H)，5.05-5.16(m，1H)，2.77(s，1H)，2.48-3.00(m，5H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.35min。
MSMH+456。
實(shí)施例120反式1-{3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)順-3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基甲烷磺酸酯將順-3-((芐基氧基)甲基)-1-環(huán)丁醇(2.50g，0.0130mol)的吡啶(50mL)溶液冷卻至0℃。滴加甲烷磺?；?1.21mL，1.79g，0.0126mol)，保持溫度低于2℃。將此混合物攪拌4小時(shí)，然后倒入到冰水(100mL)并用乙醚(2×50mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(3×50mL)和鹽水(50mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑得到順3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基甲烷磺酸酯(2.73g，0.0101mol)，為黃色油狀物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.29-7.38(m，5H)，4.88-4.94(m，1H)，4.52(s，2H)，3.45(d，2H)，2.99(s，3H)，2.50-2.56(m，2H)，2.12-2.19(m，3H)。
b)反式1-{3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.452g，0.00149mol)的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液與順3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基甲烷磺酸酯(0.483g，0.00179mol)和碳酸銫(0.582g，0.00179mol)在70℃下反應(yīng)2天。將該反應(yīng)混合物倒入水中(30mL)并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(2×20mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)洗脫。真空下除去溶劑得到反式1-{3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.325g，0.000681mol)，為黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(t，2H)，7.37-7.39(m，4H)，7.29-7.31(m，1H)，7.11-7.21(m，5H)，5.42-5.47(m，1H)，4.57(s，1H)，3.63(d，2H)，2.76-2.81(m，2H)，2.60-2.70(m，1H)，2.28-2.34(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt21.92min。
MSMH+478。
反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基甲醇將反式1-{3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.244g，0.00051mol)的二氯甲烷(10mL)溶液冷卻至-78℃，并滴加1.0M三氯化硼的二氯甲烷溶液(1.53mL，0.00153mol)，保持溫度低于-70℃。在-78℃下將該反應(yīng)混合物攪拌7小時(shí)，之后加入8M氨的甲醇溶液(1.5mL)。真空下除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(93∶7)洗脫。真空下除去溶劑得到反式3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]環(huán)丁基甲醇(0.192g，0.00049mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.23(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，5.36-5.46(m，1H)，4.70-4.80(br，1H)，3.58(d，2H)2.70-2.75(m，2H)，2.43-2.50(m，1H)，2.26-2.32(m，2H)；
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.31min。
MSMH+388。
實(shí)施例121-137合成芳基烷基順-3(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺類的總方法將順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.118mmol)懸浮于1，2-二氯乙烷(4mL)中。將適當(dāng)?shù)娜?0.177mmol)、乙酸(35mg，0.59mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(50mg，0.236mmol)加入到此懸浮液中。再將該反應(yīng)混合物在100℃加熱1.5小時(shí)。所有反應(yīng)完成的確定基于TLC和/或HPLC分析。在共3-5天內(nèi)分兩批再將三乙酰氧基硼氫化鈉(100mg，0.472mmol)加入到各反應(yīng)中，并在室溫下繼續(xù)搖動(dòng)。各反應(yīng)用二氯甲烷(4mL)稀釋，然后用飽和碳酸氫鈉(4mL)停止反應(yīng)。形成乳液時(shí)，加入鹽水(1mL)。分離有機(jī)層再減壓濃縮。粗品通過RP-HPLC純化，或者用質(zhì)譜檢測(cè)(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；在12.5分鐘內(nèi)0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH 4.5，25mL/min)或紫外檢測(cè)(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min。λ＝254nm，梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。以80％-100％的純度獲得了所需最終化合物，純度通過分析RP-HPLC(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)獲得。
生成馬來酸鹽的總方法實(shí)施例137順-3-{4-[(4-溴芐基)氨基]-3-氟苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽將游離堿形式的順-3-{4-[(4-溴芐基)氨基]-3-氟苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(36mg，0.061mmol)溶解于乙醇(2mL)中，然后加入馬來酸(14mg，0.121mmol)。將此混合物加熱得到幾乎清澈的溶液。此溶液冷卻時(shí)形成沉淀。過濾收集固體，用最小量的乙醇洗滌，然后減壓干燥。收集到16mg的順-3-{4-[(4-溴芐基)氨基]-3-氟苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺三馬來酸鹽。 實(shí)施例138-153合成順和反-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的磺酰胺衍生物的總方法將順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.236mmol)溶解于吡啶(3mL)。然后，或者以在吡啶(0.25mL)中的溶液形式或者以固體形式加入適當(dāng)?shù)幕酋；?0.472mmol)。該反應(yīng)混合物在40℃在氮?dú)夥障录訜峒s1-7天。如果需要，則再加入磺?；?0.5當(dāng)量)。將各反應(yīng)濃縮至其原體積的-半，然后用N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)稀釋。這些樣品通過RP-HPLC純化，或者用質(zhì)譜檢測(cè)(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；在12.5分鐘內(nèi)0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH4.5，25mL/min)或紫外檢測(cè)(WatersPrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm，梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。以90％-100％的純度獲得所需最終化合物，純度通過分析RP-HPLC獲得(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)。在某些情況下制備馬來酸鹽。 實(shí)施例154順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N′-(2，4-二氟苯基)脲將順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.236mmol)溶解于乙酸(6mL)中，然后室溫下緩慢加入2，4-二氟苯基異氰酸酯(44mg，0.283mmol)。2天后，將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到粗品，為淡黃色油狀物(185mg)。粗品物質(zhì)通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。收集所需產(chǎn)物，為白色固體(52mg，0.090mmol)。
HPLC-RT13.19分鐘(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝580.3。
實(shí)施例155反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N’-(3-甲氧基苯基)脲單乙酸鹽。
將反-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(77mg，0.182mmol)懸浮于吡啶(1mL)。將3-甲氧基苯基異氰酸酯(30mg，0.200mmol)的吡啶(1mL)加入到該反應(yīng)混合物中并繼續(xù)攪拌19小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到粗品，為淡黃色油狀物(149mg)。粗品物質(zhì)通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak，C18，300A，15μm，40×100mm柱)得到反-N’-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-(3-甲氧基苯基)脲，為白色固體(76mg，0.133mmol)。HPLC-RT12.33min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝574.2。
實(shí)施例156反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N’-(3-甲基苯基)脲單乙酸鹽，以如上所詳述的方式制備。
HPLC-RT13.02min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝558.3。
實(shí)施例157順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N′-(3-甲基苯基)脲，用與反式異構(gòu)體所述的相同方法制備。
HPLC-RT13.03min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝558.5。
實(shí)施例158順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-乙基-N′-(3-甲基苯基)脲a.順-3-[4-(乙基氨基)-3-氟苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(75mg，0.177mmol)懸浮于1，2-二氯乙烷(6mL)。加入乙醛(12mg，0.266mmol)的1，2-二氯乙烷(0.300mL)溶液和乙酸(42mg，0.708mmol)并將此混合物攪拌1小時(shí)。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(75mg，0.354mmol)。16小時(shí)后，再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(37mg，0.175mmol)并將該反應(yīng)再繼續(xù)3小時(shí)。該反應(yīng)混合物再進(jìn)行減壓濃縮。殘余物溶解于二氯甲烷(75mL)中，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)和鹽水(100mL)洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。收集粗品(80mg)，為無色油狀物。m/z(MH+)＝453.3。
b.順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-乙基-N′-(3-甲基苯基)脲將順-3-[4-(乙基氨基)-3-氟苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(80mg，0.177mmol)溶解于吡啶(3mL)，然后冷卻至0℃。將間甲苯基異氰酸酯(26mg，0.194mmol)加入到該反應(yīng)中并在0℃下繼續(xù)攪拌2.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過夜。再將間甲苯基異氰酸酯(13mg，0.101mmol)加入到該反應(yīng)混合物中并繼續(xù)攪拌1周。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到粗品，為淡黃色油狀物(110mg)。通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。收集順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-乙基-N′-(3-甲基苯基)脲，為白色固體(10mg)。HPLC-RT13.18min，(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝586.5。
實(shí)施例159順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-芐基-N′-(2，4-二氟苯基)脲將順-3-[4-(芐基氨基)-3-氟苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(28mg，0.054mmol)溶解于乙酸(3mL)，然后在4天內(nèi)加入2，4-二氟苯基異氰酸酯(28mg，0.183mmol)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到淡黃色油狀物(65mg)。通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；DeltapakC18，300A，15μm，40×100mm柱)得到順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N-芐基-N′-(2，4-二氟苯基)脲，為白色固體(13mg，0.019mmol)。HPLC-RT14.66min，(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝670.1。
實(shí)施例160順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-N′-(3-甲基苯基)脲將順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.123mmol)溶解于吡啶(3.5mL)，然后冷卻至0℃。加入間甲苯基異氰酸酯(18mg，0.135mmol)并在16小時(shí)內(nèi)將該反應(yīng)升溫至室溫。該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到淡黃色油狀物(200mg)。通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。收集所需產(chǎn)物，為白色固體(52mg)。HPLC-RT12.58min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝540.1。
實(shí)施例161-164N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲的酰胺類物質(zhì)
a.4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁基酯將3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.12g，6.48mmol)溶解于1∶1二噁烷/水(20mL)中。將碳酸鈉(1.03g，9.72mmol)和二碳酸二叔丁基酯(1.55g，7.12mmol)加入到該反應(yīng)混合物。3小時(shí)后，將該反應(yīng)減壓濃縮。剩余的殘余物在二氯甲烷(100mL)和水(100mL)之間分配，然后用二氯甲烷(200mL)萃取。合并有機(jī)層并用鹽水(100mL)洗滌。有機(jī)層再用硫酸鈉干燥并減壓濃縮得到黃棕色泡沫(2.85g，6.67mmol)。HPLC-RT14.41min，(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝428.1。
a.4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁基酯(600mg，1.41mmol)溶解于吡啶(25mL)，并冷卻至0℃。加入間甲苯基異氰酸酯(206mg，1.54mmol)并將該反應(yīng)在0℃下攪拌2.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮得到粗品，為棕黃色泡沫(841mg)。通過柱色譜在硅膠上純化，用25％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度、接著用5％甲醇/二氯甲烷作為洗脫劑，得到4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯，為淡黃色固體(243mg，0.434mmol)。HPLC-RT17.82min，(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝561.4。
a.N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲二鹽酸鹽將4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(117mg，0.209mmol)懸浮于丙酮(7mL)，并冷卻至0℃。將鹽酸(6N，1.6mL)緩慢加入到該反應(yīng)混合物中。將該反應(yīng)混合物升溫至室溫，然后在50℃下加熱4小時(shí)。減壓下濃縮該反應(yīng)混合物，接著用二氯甲烷(25mL)研磨，得到N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲二鹽酸鹽，為米白色固體(111mg，0.241mmol)。HPLC-RT11.98min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝461.3。
a.合成N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲的酰胺類物質(zhì)的總方法i).總方法(A)未保護(hù)的氨基酸實(shí)施例161N-[4-(4-氨基-1-{1-[2-(二甲基氨基)乙酰基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-N′-(3-甲基苯基)脲將N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲二鹽酸鹽(50mg，0.109mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)和N-乙基-N-異丙基胺(0.095mL)中。將N，N-二甲基甘氨酸(14mg，0.136mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(15mg，0.109mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(26mg，0.136mmol)加入到該反應(yīng)混合物中。16小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(100mL)稀釋，然后用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。剩余的殘余物用乙醚(25mL)研磨得到淡黃色固體(52mg，0.097mmol)。通過RP-HPLC純化(WatersPrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)得到N-[4-(4氨基-1-{1-[2-(二甲基氨基)乙?；鵠-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-N′-(3-甲基苯基)脲，為白色固體(27mg，0.050mmol)。HPLC-RT12.48min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝546.0。
實(shí)施例162N-[4-(4-氨基-1-{1-[3-(二乙基氨基)丙酰基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-N′-(3-甲基苯基)脲單乙酸鹽如總方法A所述制備。
HPLC-RT13.16min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝588.2。
d.ii).總方法(B)叔丁氧基羰基保護(hù)的氨基酸實(shí)施例163N-[4-(4-氨基-1-{1-[2-(甲基氨基)乙?；鵠-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-N′-(3-甲基苯基)脲將N-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲二鹽酸鹽(63mg，0.118mmol)溶解于二氯甲烷(7mL)和N-乙基-N-異丙基胺(0.113mL)中，將2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙酸(28mg，0.147mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(16mg，0.118mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(28mg，0.147mmol)加入到該反應(yīng)混合物中。16小時(shí)后，該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(75mL)稀釋，然后用水(75mL)洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。分離粗品，為淡黃色固體(75mg，0.119mmol)。
將粗品N-{2-[4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-氧代乙基}-N-甲基氨基甲酸叔丁基酯(75mg，0.119mmol)溶解于丙酮(5mL)，然后緩慢加入鹽酸(6N，1mL)。該反應(yīng)混合物在45℃下加熱2.5小時(shí)再減壓濃縮。剩余的殘余物用二氯甲烷(25mL)研磨得到淡黃色固體。通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度在40分鐘內(nèi)10％至30％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；DeltapakC18，300A，15μm，40×100mm柱)得到N-[4-(4-氨基-1-{1-[2-(甲基氨基)乙酰基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-N′-(3-甲基苯基)脲，為白色固體(40mg，0.075mmol)。HPLC-RT12.22min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝532.1。
實(shí)施例164N-{4-[4-氨基-1-(1-{3-[(2-羥基乙基)氨基]丙?；鶀-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲單乙酸鹽a).3-[(叔丁氧基羰基)(2-羥基乙基)氨基]丙酸將商購(gòu)的3-[(2-羥基乙基)氨基]丙酸(76mg，0.571mmol)溶解于二噁烷/水(1.5mL/1.5mL)中，然后加入碳酸鈉(91mg，0.886mmol)和二碳酸二叔丁基酯(137mg，0.628mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌2天，過濾并減壓濃縮得到3-[(叔丁氧基羰基)(2羥基乙基)氨基]丙酸，為無色油狀物(135mg，0.579mmol)。1H NMR(d6-DMSO)δ1.40(s，9H)；2.36(br s，2H)；3.27(br s，3H)；3.46(br s，2H)；3.64(br s，2H)；5.71(br s，1H)。
b).N-{4-[4-氨基-1-(1-{3-[(2-羥基乙基)氨基]丙?；鶀-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲單乙酸鹽通過d.ii).總方法B中描述的方法制備。
HPLC-RT12.19min，(流速1mL/min λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝576.3。
實(shí)施例165順-3-{4-[(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺
a)N2-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺將2-氯-1-甲基-苯并咪唑(0.639g，3.84mmol)和4-溴苯胺(0.710g，4.12mmol)在170℃加熱21小時(shí)。將所得棕色固體冷卻至室溫，用3份5mL的庚烷洗滌，然后用甲苯研磨得到N2-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(1.120g，90％)，為棕色粉末。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中的25至100％ CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝10.85分鐘，96％；m/z 302(MH+)。
b)N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺向N2-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(1.12g，3.71mmol)的二甲基甲酰胺(15mL)溶液中，在氮?dú)夥障录尤腚p(頻哪醇合)乙硼烷(1.129g，4.448mmol)，醋酸鉀(1.204g，12.27mmol)，和[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.334g，0.409mmol)。將此紫色溶液在80℃下攪拌18小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得暗棕色混合物真空濃縮得到暗棕色固體。此物質(zhì)用二氯甲烷研磨，過濾，并濃縮此濾液得到暗棕色油狀物。通過急驟色譜在硅膠上純化(用30％乙酸乙酯/庚烷洗脫)得到N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2胺(0.515g，40％)，為白色粉末1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.10(s，1H)，7.88(d，2H)，7.63(d，2H)，7.40(m，1H)，7.30(m，1H)，7.08(m，2H)，3.72(s，3H)，1.29(s，12H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝11.70分鐘，90％；m/z 350(MH+)。
c)順-3-{4-[(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺向順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.227mmol)的乙二醇二甲基醚(3mL)和水(1.5mL)溶液中，在氮?dú)夥障录尤隢2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(0.099g，0.28mmol)、四(三苯基膦)鈀(0)(0.013mg，0.011mmol)及碳酸鈉(0.060mg，0.568mmol)。將此溶液在83℃下攪拌15小時(shí)。將所得黃色混合物真空濃縮得到黃色油狀物。通過制備HPLC純化(在20分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，tr＝7.3-11.2min)得到順-3-{4-[(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為米白色固體(0.061g，50％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.17(s，1H)，8.23(s，1H)，8.08(d，2H)，7.62(d，2H)，7.42(m，1H)，7.33(m，1H)，7.08(m，1H)，4.80(m，1H)，3.76(s，3H)，2.50-2.07(m，12H)，1.80-1.60(m，8H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％ CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝5.92min.，99％；m/z 537(MH+)。
實(shí)施例166-170得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺典型方法向存在于二氯甲烷(1.5ml)中適當(dāng)?shù)募姿?0.46mmol)加入草酰氯(400μl，0.2mmol)和DMF(1滴)。給小瓶蓋上隔膜，并在每個(gè)蓋上插入小孔針以釋放壓力。將小瓶在J-Kem震動(dòng)器上搖動(dòng)過夜。分離50％的溶液，并將過量的草酰氯和二氯甲烷在12-孔Supelco支管上真空下隨氮?dú)饬鞒?。將粗品酰?0.23mmol)加入到存在于干燥吡啶(800μl)的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.09mmol)中并室溫下攪拌。將所得溶液直接通過制備HPLC純化(Hypersil BSD C18，5μm，100×21mm，在10分鐘內(nèi)0％-100％乙腈/0.05M醋酸銨，25.0mL/min)。所得產(chǎn)物通過在二氯甲烷(4ml)和1.0N氫氧化鈉(2ml)之間分配，并通過Empor高效萃取圓盤柱(C18-SD十八烷基)進(jìn)行純化，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。此化合物相應(yīng)的LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min)數(shù)據(jù)在下頁(yè)詳述。
實(shí)施例171順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺向順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(75mg，0.17mmol)和三乙胺(34mg，0.34mmol)的二氯甲烷(2.5ml)溶液中，滴加存在于二氯甲烷(0.5ml)中的氫化肉桂酰氯(34mg，0.20mmol)。將此溶液在室溫下攪拌48小時(shí)，并再加入一個(gè)等份的氫化肉桂酰氯。將此反應(yīng)混合物再攪拌24小時(shí)。將所得混合物在二氯甲烷(4ml)和2N NaOH(1.5ml)之間分配，并通過Empore萃取筒。蒸發(fā)溶劑得到油狀固體，其通過硅膠色譜純化，用10-20％ MeOH/二氯甲烷洗脫得到順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺(12mg，13％)。1H NMR(CDCl3)δH 8.55(1H，d)，8.36(1H，s)，7.75(1H，s)，7.25(7H，m)，5.51(2H，bs)，4.91(1H，m)，3.92(3H，s)，3.09(2H，m)，2.76(2H，m)，2.34-2.59(9H，m)，2.29(3H，s)，2.16(2H，m)，1.85(4H，m)，1.66(2H，m)。
LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)Rt＝1.92分鐘，MH+＝569.6。
實(shí)施例172反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺三馬來酸鹽向反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.15mmol)的吡啶(5ml)溶液中，滴加4-(二甲基氨基)苯甲?；?420mg，2.28mol)。將此溶液攪拌過夜，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物在二氯甲烷和2N NaOH溶液之間分配。水層用二氯甲烷(X3)萃取。將有機(jī)相干燥，過濾并蒸發(fā)得到固體，其用EtOAc/Et2O(1∶4)研磨得到固體，其溶解于EtOAc并用馬來酸(3當(dāng)量)處理得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺(320mg，30％)。1H NMR(d6-DMSO)δH 9.05(1H，s)，8.25(1H，s)，8.18(1H，d，J＝8Hz)，7.84(2H，d，J＝9.2Hz)，7.29(1H，s)，7.25(1H，d，J＝8Hz)，6.78(2H，d，J＝8.8Hz)，6.17(6H，s)，4.71(1H，m)，3.95(3H，s)，3.01(6H，s)，2.83-3.18(9H，m)，2.68(3H，s)，2.08(6H，m)，1.56(2H，m)。HPLC(5.23分鐘，100％)實(shí)施例173N-4-[4-氨基-1-(3-氰基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基-N′-(3-甲基苯基)脲a).2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-3-吡啶甲腈將氫化鈉(60％在礦物油中的分散液，3.825mmol，153mg)加入到4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.0g，3.825mmol)的DMF(5mL)懸浮液中。10分鐘后，加入2-氯-3-氰基吡啶(531mg)并將該反應(yīng)在60℃下加熱16小時(shí)。所得深色混合物倒入到冰水(50mL)中并過濾收集固體得到2-(4-氨基-3碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-3-吡啶甲腈，為棕色固體(1.1g，79％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.82(1H，m)，8.29(1H，s)，8.64(1H，m)和8.93(1H，m)；RP-HPLC(Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm柱，在50mM乙酸胺中0％至100％乙腈，緩沖至pH 4.5，3.5mL/min)Rt2.16min.
b)2-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-3-吡啶甲腈將2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-3-吡啶甲腈(1.35g)、N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(1.5g)、四-三苯基膦鈀(253mg)和碳酸鈉(1.153g)懸浮于脫氣的水(10mL)和DME(20mL)中并在85℃下加熱16小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)之間分配。移出固體沉淀并分離有機(jī)層，用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物用最少量的乙酸乙酯結(jié)晶得到N-4-[4-氨基-1-(3-氰基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基氨基甲酸叔丁基酯，為米白色固體(400mg)。將TFA(4 mL)緩慢加入到N-4-[4-氨基-1-(3-氰基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基氨基甲酸叔丁基酯(400mg)的二氯甲烷(4mL)懸浮液中。1小時(shí)后，將所得紅色溶液減壓濃縮并用飽和碳酸鈉水溶液中和油狀殘余物得到2-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-3-吡啶甲腈，為黃色沉淀(300mg)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ5.61(2H，br s)，6.92(1H，t)，7.36(2H，m)，7.76(1H，m)，8.32(1H，s)，8.62(1H，m)和8.93(1H，m)；RP-HPLC(Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm柱，在50mM乙酸胺中0％至100％乙腈，緩沖至pH 4.5，3.5mL/min)Rt2.25min。
c).N-4-[4-氨基-1-(3-氰基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基-N′-(3-甲基苯基)脲將間甲苯基異氰酸酯(0.1mmol)加入到(2-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-3-吡啶甲腈(35mg，0.1mmol)的吡啶溶液中，并將該反應(yīng)室溫下攪拌2天。該反應(yīng)真空濃縮。用質(zhì)量驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC純化(Micromass/Gilson，Hypersil BDSC18，5μm，100×21.2mm柱；在12.5分鐘內(nèi)0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH 4.5，25mL/min)得到N-4-[4-氨基-1-(3-氰基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基-N′-(3-甲基苯基)脲(4mg)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ2.30(3H，s)，6.84(1H，d)，7.19(1H，t)，7.25(1H，m)，7.33(1H，br s)，7.58(2H，m)，7.80(1H，m)，8.35(1H，s)，8.43(1H，t)，8.65(1H，m)，8.80(1H，br s)，8.95(1H，m)和9.10(1H，br s)，及RP-HPLC(Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm柱；在50mM乙酸胺中0％至100％乙腈，緩沖至pH 4.5，3.5mL/min)Rt3.09min。
實(shí)施例174-185制備N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2氟苯基-1-芳基磺酰胺的總路線a)4-(4-氨基-3-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(8.756g，20.26mmol)、N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(10.25g，30.38mmol)、四-三苯基膦鈀(940mg，0.81mmol)和碳酸鈉(4.20g，50.64mmol)的混合物懸浮于脫氣的水(57mL)和DME(323mL)中，并在80℃下加熱18小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(200mL)和10％碳酸鈉水溶液(200mL)之間分配。有機(jī)層進(jìn)一步用10％碳酸鈉水溶液(2×200mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。在硅膠上通過柱色譜純化，用1∶1乙酸乙酯庚烷接著用純乙酸乙酯作為洗脫劑，得到不純的餾份。此餾份進(jìn)一步通過用乙酸乙酯重結(jié)晶來純化得到4-(4-氨基-3-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(7.256g，68％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.43(9H，s)，1.49(9H，s)，1.93(2H，m)，2.01(2H，m)，3.00(2H，br m)，4.04(2H，br d)，4.90(1H，m)，7.42(2H，m)，7.83(1H，t)，8.24(1H，s)和9.17(1H，br s)。
b)3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-3-{4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3氟苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(6.26g，11.9mmol)、5M HCl(95mL)和丙酮(390mL)的混合物，室溫下攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)用碳酸鈉堿化并減壓濃縮。殘余物在二氯甲烷(200mL)和水(200mL)之間分配，并將此水相再用二氯甲烷(2×200mL)萃取。合并的有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干得到3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.427g，88％)；1H NMR(DMSOd6，400MHz)δ1.85(2H，br t)，2.06(2H，m)，2.65(2H，m)，3.10(2H，m)，4.72(1H，m)，5.45(2H，br s)，6.89(1H，m)，7.22(2H，m)和8.19(1H，s)。
c)N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基苯胺向3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.0g，6.11mmol)、N-甲基哌啶-4-酮(0.69g，6.11mmol，0.8mL)和冰醋酸(1.25mL)的N-甲基吡咯烷酮(100mL)溶液中，在氮?dú)夥障录尤肴阴Ｑ趸饸浠c(1.5當(dāng)量，1.94g，9.16mmol)。將此溶液攪拌18小時(shí)，再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.6當(dāng)量，0.78g)和N-甲基哌啶-4-酮(0.4當(dāng)量，0.32mL)并將該反應(yīng)再繼續(xù)18小時(shí)。該反應(yīng)真空濃縮，在二氯甲烷(100mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)之間分配。水層再用二氯甲烷(4×100mL)萃取并將合并的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，并蒸發(fā)至干得到黃色泡沫(0.95g)。在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(4∶1)作為洗脫劑得到N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基苯胺(1.67g，72％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.44(2H，m)，1.69(3H，m)，1.83(4H，m)，2.13(3H，s)，2.28(4H，m)，2.78(2H，br d)，2.98(2H，br d)，4.58(1H，m)，5.25(2H，br s)，6.89(1H，t)，7.18(1H，d)，7.24(1H，d)和8.19(1H，s)。
d)將N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基苯胺磺酰基化的總方法將N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基苯胺(100mg，0.236mmol)和芳基磺?；?2當(dāng)量，0.471mmol)在吡啶(2mL)中的混合物，在40℃下加熱3天。真空下除去溶劑。用質(zhì)量驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC純化(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；在12.5分鐘內(nèi)在0.05M醋酸銨中0-100％乙腈，緩沖至pH 4.5，25mL/min)得到下列化合物 分析RP-HPLC條件10至90％CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中，緩沖至pH 4.5，在12分鐘內(nèi)，2mL/min，用Waters Symmetry C18，5μm，250×4.6mm柱。
實(shí)施例186-189順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺類似物a.合成磺酰胺和甲酰胺衍生物的總方法將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.10mmol)、相應(yīng)的親電子試劑(磺?；然蝓Ｂ?(1當(dāng)量)和吡啶(1mL)的混合物，在40℃下加熱24-72小時(shí)。(在一些情況下，需要再加入親電子試劑(一般1當(dāng)量)以便使完成反應(yīng))。真空下除去溶劑。用質(zhì)量驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC純化(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH 4.5，在12.5分鐘內(nèi)，25mL/min)得到下列化合物 分析RP-HPLC條件在0.1N醋酸銨水溶液中10至90％CH3CN，緩沖至pH 4.5，在12分鐘內(nèi)，2mL/min，用Waters Symmetry C18，5μm，250×4.6mm柱。
實(shí)施例1951-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(苯乙基氨基)(苯基)甲基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺向順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.10mmol)、苯乙醛(13mg)和冰醋酸(0.013mL)的1，2-二氯乙烷(1mL)溶液中，在氮?dú)夥障录尤肴阴Ｑ趸饸浠c(2當(dāng)量，43mg)。將此溶液攪拌18小時(shí)，然后真空濃縮，在二氯甲烷(10mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)之間分配，并分離有機(jī)層。水層再用二氯甲烷(4×10mL)萃取，并將合并的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥并蒸發(fā)至干。用質(zhì)量驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC純化(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH 4.5，在12.5分鐘內(nèi)，25mL/min)得到1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(苯乙基氨基)(苯基)甲基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(28mg)；RP-HPLC(在0.1N醋酸銨水溶液中10至90％ CH3CN，緩沖至pH 4.5，在12分鐘內(nèi)，2mL/min，用Waters Symmetry C18，250×4.6mm柱)Rt＝12.269分鐘，95.2％；m/z(MH+)601.3。
實(shí)施例196N-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲將間甲苯基異氰酸酯(1.2當(dāng)量，37.7mg，0.283mmol)加入到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(80.3mg，0.236mmol)的吡啶溶液中。在40℃下16小時(shí)后，用水(2mL)停止該反應(yīng)并蒸發(fā)至干。通過制備RP-HPLC純化(10％至40％CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中，緩沖至pH 4.5，在60分鐘內(nèi)，10mL/min，用水Deltapak C18，15μm，100×40mm柱，λ＝254nm)得到N-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N′-(3-甲基苯基)脲(91mg，84％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ2.26(2H，br t)，2.30(3H，s)，2.43(4H，m)，2.69(2H，m)，5.26(1H，m)，6.82(1H，d)，7.18(1H，t)，7.25(1H，br d)，7.32(1H，br s)，7.45(2H，m)，8.26(1H，s)，8.36(1H，t)，8.72(1H，d)和9.05(1H，s)和RP-HPLC(10至90％CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中，緩沖至pH 4.5，在12分鐘內(nèi)，2mL/min，用Waters SymmetryC18，5μm，250×4.6mm柱)Rt＝15.433分鐘，97.9％。
實(shí)施例1972-[4-氨基-3-(4-[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯a)2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯將氫化鈉(60％，0.138g，3.45mmol)加入到3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.750g，2.87mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(9mL)懸浮液中，并將此混合物室溫下攪拌1小時(shí)，直到獲得均勻溶液。加入溴乙酸乙酯(0.447mL，4.03mmol)，并將此混合物在室溫氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得固體依次用水(25mL)和乙醚/石油醚(4∶1，50mL)研磨，得到2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯(0.791g，2.28mmol)，為棕色固體1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.21(s，1H)，5.17(s，2H)，4.15(qt，2H)，1.20(t，3H)；RP-HPLC(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt6.87min。
b)2-(4-氨基-3-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯將2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯(0.790g，2.28mmol)、N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(1.08g，3.19mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.105g，0.091mmol)及碳酸氫鈉(0.478g，5.69mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(12mL)和水(2mL)中的懸浮液，在90℃下在氮?dú)夥障录訜?4小時(shí)。減壓除去溶劑，并將此殘余物在飽和氯化鈉水溶液(50mL)和乙酸乙酯(30mL)之間分配。分離水層并進(jìn)一步用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/庚烷(9∶1)作為流動(dòng)相洗脫，得到2-(4-氨基-3-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯(0.193g，0.449mmol)，為黃色油狀物1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.41(s，1H)，8.30(m，1H)，7.47(m，2H)，6.81(s，1H)，5.47(br，2H)，5.20(s，2H)，4.25(qt，2H)，1.55(s，9H)，1.27(t，3H)；RP-HP(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt9.47min.
c)2-[4-氨基-3-(4-[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯向其中裝有氯化氫的二噁烷溶液(4M，6mL)和乙醇(6mL)的50mL燒瓶中，加入2-(4-氨基-3-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯(0.452g，1.05mmol)。在此燒瓶上安裝空氣冷凝器，并將此混合物在50℃在氮?dú)夥障聰嚢琛?6小時(shí)后，該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。殘余物在鹽酸(0.5M，30mL)和乙醚(20mL)之間分配。分離有機(jī)層并傾析掉。將水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)堿化，并將所得混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的乙酸乙酯萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色固體(0.295g)。
將黃色固體加入到2，3-二氯苯磺酰基氯(0.263g，1.07mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.005g，0.041mmol)的吡啶(5mL)溶液中，并將所得溶液并在氮?dú)夥障聰嚢?天。加入甲醇/二氯甲烷(1∶19，100mL)并將所得混合物用碳酸氫鈉水溶液(3×10mL)萃取。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。將此物質(zhì)的一部分通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt12.4-13.9min)得到2-[4-氨基-3-(4-[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯，為白色固體(0.011g，0.020mmol)RP-HP(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt9.78min。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(s，1H)，8.25(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.43(m，3H)，5.21(s，2H)，4.15(qt，2H)，1.20(t，3H)；MSMH+539。
實(shí)施例198N1-4-[4-氨基-1-(2-羥基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基-2，3-二.氯-1-苯磺酰胺將2-[4-氨基-3-(4-[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(0.120g，0.222mmol)懸浮于乙二醇二甲基醚(2mL)中，并將此懸浮液冷卻至0C。加入氫化鋰鋁(0.025g，0.660mmol)。并將該反應(yīng)混合物升溫至室溫。24小時(shí)后，通過加入鹽酸(0.5M，10mL)來停止過量的氫化物的反應(yīng)。水層用乙酸乙酯(2×7mL)萃取，并將有機(jī)萃取物傾析掉。將水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)堿化，用氯化鈉飽和，并用甲醇/二氯甲烷(1∶9，4×20mL)萃取。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.93-9.90min)得到N1-4-[4-氨基-1-(2-羥基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為米白色固體(0.004g，0.008mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.82(s，1H)，8.23(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.39(m，3H)，6.90(br，2H)，4.86(t，1H)，4.35(t，2H)，4.04(t，2H)；MS(M-H)-495。
實(shí)施例199N1-(4-{4-氨基-1-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基｝-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.172g，0.66mmol)、氫化鈉(60％，0.030g，0.75mmol)、2，5-二氟芐腈(0.105g，0.75mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)的懸浮液在100℃下加熱24小時(shí)。將此反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓濃縮。將此萃取物在二氯甲烷(50mL)和水(10mL)之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。
將此物質(zhì)(0.045g)和碳酸銫(0.115g，0.353mmol)懸浮液1-甲基哌嗪(1mL)中，并將此混合物在110℃下在密封試管中加熱20小時(shí)。將此反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物用鹽酸(1M，10mL)酸化，并將水相用乙醚(10mL)萃取。傾析有機(jī)相，并將此水相用碳酸鈉水溶液(3M，10mL)堿化。將水相用二氯甲烷(3×15mL)萃取，并將合并的有機(jī)餾份用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。此物質(zhì)用(b)中的方法加工，并用(c)中的方法脫保護(hù)并磺?；?。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.4-9.4min)得到N1-(4-{4-氨基-1-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為黃色固體(0.007g，0.011mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.98(d，1H)，7.86(d，1H)，7.69(d，1H)，7.53(m，6H)，3.30(m，4H)，2.70(m，4H)，2.40(s，3H)；MS(M-H)-650。
實(shí)施例200順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺a)4-溴-2-甲氧基芐腈在-50℃下，將甲醇鉀(4.24g，60.0mmol)的四氫呋喃(40mL)懸浮液分批加入到4-溴-2-氟芐腈(8.0g，40.0mmol)的四氫呋喃(50mL)溶液中。1小時(shí)后，除去干冰浴并將該反應(yīng)混合物升溫至室溫，并室溫下攪拌6小時(shí)。該反應(yīng)混合物倒入到水(250mL)中，并過濾收集此固體得到4-溴-2-甲氧基芐腈(7.85g，92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.94(s，3H)，7.32(d，J＝8.23Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.69(d，J＝8.23Hz，1H)。
b)4-溴-2-甲氧基苯甲酸將4-溴-2-甲氧基芐腈(7.35g，35mmol)溶解于二噁烷(400mL)。加入氫氧化鈉(2.0N，200mL)并將此懸浮液在100℃下加熱16小時(shí)。減壓除去有機(jī)溶劑并將此含水混合物過濾并用水洗滌。此濾液用鹽酸(5.0N)中和至pH 1。過濾收集固體得到4-溴-2-甲氧基苯甲酸(3g，37％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.84(s，3H)，7.21(d，J＝8.25Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.58(d，J＝8.23Hz，1H)。
c)4-溴-2-甲氧基-1-苯羰基氯將4-溴-2-甲氧基苯甲酸(2.934g，12.70mmol)與碳酸鈉(2.2g，26.51mmol)混合。加入亞硫酰氯(20mL)并將該反應(yīng)混合物在80℃下加熱16小時(shí)。蒸餾掉過量的亞硫酰氯后，加入庚烷并過濾收集固體，得到4-溴-2-甲氧基-1-苯羰基氯(3.16g，100％)。1H NMR(CDCl3)δ3.94(s，3H)，7.16(s，1H)，7.20(d，J＝8.51Hz，1H)，7.95(d，J＝8.51Hz，1H)。
d)N1-苯基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺將苯胺(1.24mL，13.62mmol)緩慢加入到4-溴-2-甲氧基-1-苯羰基氯(3.24g，12.98mmol)和三乙胺(2.7mL，19.48mmol)在二氯甲烷(130mL)中的混合物中。3小時(shí)后，減壓除去溶劑。加入乙酸乙酯并將此混合物過濾。此濾液減壓濃縮并將此殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到N1-苯基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(2.92g，74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.92(s，3H)，7.09(s，1H)，7.27(m，1H)，7.33(m，2H)，7.39(s，1H)，7.55(d，J＝8.15Hz，1H)，7.71(m，2H)，10.10(s，1H)。
e)4-(苯氨基羰基)-3-甲氧基苯基羥基代硼酸在-78℃下將正丁基鋰(1.6M在己烷溶液中，5.1ml，8.16mmol)緩慢加入到N1-苯基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.0g，3.26mmol)的四氫呋喃(25mL)溶液中。30分鐘后，快速加入硼酸三異丙基酯(1.13mL，4.90mmol)。15分鐘后將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并在室溫下攪拌16小時(shí)。加入鹽酸(2.5N，18mL)并將此混合物攪拌5小時(shí)。分層并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶，得到4-(苯氨基羰基)-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(0.549g，62％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.91(s，3H)，7.08(m，1H)，7.33(m，2H)，7.47(d，J＝7.57Hz，1H)，7.59(m，2H)，7.73(d，J＝7.36Hz，2H)，8.24(s，2H)，10.10(s，1H)。
f)順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(148mg，0.335mmol)、4-(苯氨基羰基)-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(100mg，0.369mmol)、四(三苯基膦)鈀(23mg，0.020mmol)和碳酸鈉(85mg，0.845mmol)與乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(125mg，69％)。1H NMR(CDCl3)δ1.69(m，2H)，1.86(m，2H)，2.17(m，2H)，2.31(s，3H)，2.44(m，11H)，4.15(s，3H)，4.96(m，1H)，5.69(bs，2H)，7.14(m，1H)，7.37(m，2H)，7.45(m，2H)，7.68(m，2H)，8.41(m，2H)，9.77(s，1H)。LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝541.2，Rt＝2.58min。
實(shí)施例201反-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(266mg，0.604mmol)、4-(苯氨基羰基)-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(180mg，0.664mmol)、四(三苯基膦)鈀(42mg，0.036mmol)和碳酸鈉(154mg，1.449mmol)與乙二醇二甲醚(8mL)和水(4mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到反-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(226mg，69％)。1H NMR(CDCl3)δ1.58(m，4H)，2.17(m，7H)，2.32(s，3H)，2.52(m，2H)，2.69(2.69，3H)，4.16(s，3H)，4.78(m，1H)，5.49(bs，2H)，7.14(m，1H)，7.43(m，4H)，7.69(m，2H)，8.44(m，2H)，9.77(s，1H)。LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+541.2，Rt＝2.61min。
實(shí)施例202順-N1-芐基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺a)N1-芐基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺將芐基胺(0.69mL，6.31mmol)緩慢加入到4-溴-2-甲氧基-1-苯羰基氯(1.5g，6.01mmol)和三乙胺(1.3mL，9.02mmol)在二氯甲烷(60mL)中的混合物中。3小時(shí)后，減壓除去溶劑。加入乙酸乙酯并將此混合物過濾。此濾液減壓濃縮并將此殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到N1-芐基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.654g，86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.92(s，3H)，4.67(d，J＝5.67Hz，32H)，7.31(m，7H)，8.03(bs，1H)，8.13(d，J＝8.41，1H)。
b)4-[(芐基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸在-78℃下將正丁基鋰(1.6M在己烷溶液中，8.0ml，12.88mmol)緩慢加入到N1-芐基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.65g，5.15mmol)的四氫呋喃(40mL)溶液中。30分鐘后，快速加入硼酸三異丙基酯(1.8mL，7.73mmol)。13分鐘后將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌16小時(shí)。加入鹽酸(2.5N，36mL)并將此混合物攪拌過夜。除去有機(jī)溶劑并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到4-[(芐基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(0.675g，46％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.90(s，3H)，4.51(d，J＝6.18Hz，2H)，7.24(m，1H)，7.34(m，4H)，7.43(d，J＝7.55Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.69(d，J＝7.55Hz，1H)，8.23(s，2H)，8.69(m，1H)。
c)順-N1-芐基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(141mg，0.319mmol)、4-[(芐基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(100mg，0.351mmol)、四(三苯基膦)鈀(22mg，0.019mmol)和碳酸鈉(81mg，0.765mmol)與乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到順-N1-芐基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(126mg，71％)。1H NMR(CDCl3)δ1.83(m，6H)，2.34(s，3H)，2.45(m，11H)，4.02(s，3H)，4.43(d，J＝5.66Hz，2H)，4.95(m，1H)，5.52(bs，2H)，7.37(m，7H)，8.18(m，1H)，8.41(m，1H)；LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％ B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+555.5，Rt＝2.65min。
實(shí)施例203順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺a)N1-苯乙基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺將苯乙胺(0.79mL，6.31mmol)緩慢加入到4-溴-2-甲氧基-1-苯羰基氯(1.5g，6.01mmol)和三乙胺(1.3mL，9.02mmol)在二氯甲烷(60mL)中的混合物中。2小時(shí)后，減壓除去溶劑。加入乙酸乙酯并將此混合物過濾。此濾液減壓濃縮并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/乙酸乙酯(97∶3)作為流動(dòng)相，得到N1-苯乙基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.81g，90％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.83(m，2H)，3.50(m，2H)，3.84(s，3H)，7.31(m，7H)，7.65(d，J＝8.28Hz，1H)，8.15(m，1H)。
b)4-[(苯乙基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸在-78℃下將正丁基鋰(1.6M在己烷溶液中，8.5ml，13.54mmol)緩慢加入到N1-苯乙基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.81g，5.41mmol)的四氫呋喃(40mL)溶液中。30分鐘后，快速加入硼酸三異丙基酯(1.87mL，8.12mmol)。13分鐘后將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌3小時(shí)。加入鹽酸(2.5N，40mL)并將此混合物攪拌過夜。分層并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到4-[(芐基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(0.916g，56％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.85(m，2H)，3.53(m，2H)3.88(s，3H)，7.31(m，7H)，7.70(d，J＝7.61Hz，1H)，8.19(m，2H)，9.10(m，1H)。
c)順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(154mg，0.349mmol)、4-[(苯乙基氨基)羰基]-3-甲氧基苯基羥基代硼酸(115mg，0.384mmol)、四(三苯基膦)鈀(24mg，0.021mmol)和碳酸鈉(89mg，0.839mmol)與乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(64mg，32％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.62(m，4H)，2.16(m，16H)，2.87(m，2H)，3.57(m，2H)，3.90(s，3H)，4.83(m，1H)，7.31(m，7H)，7.95(m，1H)，8.22(m，2H)；LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝569.3，Rt＝2.50min。
實(shí)施例204順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺a)N1-苯基-4-溴苯甲酰胺將苯胺(0.87mL，9.57mmol)緩慢加入到4-溴-1-苯羰基氯(2.0g，9.11mmol)和三乙胺(1.9mL，13.67mmol)在二氯甲烷(95mL)的混合物中。3小時(shí)后，減壓除去溶劑。加入乙酸乙酯并將此混合物過濾。將此濾液減壓濃縮并將此殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到N1-苯基-4-溴苯甲酰胺(1.00g，40％)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.11(m，1H)，7.38(m，2H)，7.76(m，4H)，7.92(m，2H)，10.30(s，1H)。
b)4-(苯氨基羰基)苯基羥基代硼酸在-78℃下將正丁基鋰(1.6M在己烷溶液中，5.7ml，9.05mmol)緩慢加入到N1-苯基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.0g，3.62mmol)的四氫呋喃(27mL)溶液中。30分鐘后，快速加入硼酸三異丙基酯(1.25mL，5.43mmol)。13分鐘后將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌6小時(shí)。加入鹽酸(2.5N，27mL)并將此混合物攪拌過夜。分層并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到4-(苯氨基羰基)苯基羥基代硼酸(0.354g，40％)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.10(m，1H)，7.35(m，2H)，7.80(m，4H)，7.92(m，2H)，8.23(s，2H)，10.23(s，1H)。
c)順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.226mmol)、4-(苯氨基羰基)苯基羥基代硼酸(60mg，0.249mmol)、四(三苯基膦)鈀(16mg，0.014mmol)和碳酸鈉(58mg，0.544mmol)與乙二醇二甲醚(3mL)和水(1.5mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過制備薄層柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶05)作為流動(dòng)相，得到順-N1-苯基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺(32mg，27％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，4H)，1.73(m，2H)，2.08(m，2H)，2.19(s，3H)，2.28(m，11H)，4.84(m，1H)，7.12(m，1H)，7.38(m，2H)，7.81(m，4H)，8.16(d，J＝8.30Hz，2H)，8.27(s，1H)，10.34(s，1H)。LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝511.2，Rt＝2.41min。
實(shí)施例205順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺a)N1-苯乙基-4-溴苯甲酰胺將苯乙胺(1.2mL，9.57mmol)緩慢加入到4-溴-1-苯羰基氯(2.0g，9.11mmol)和三乙胺(1.9mL，13.67mmol)在二氯甲烷(95mL)中的混合物中。3小時(shí)后，減壓除去溶劑。加入乙酸乙酯并將此混合物過濾。將此濾液減壓濃縮并將此殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到N1-苯基-4-溴苯甲酰胺(1.925g，69％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.84(m，2H)，3.47(m，2H)，7.28(m，5H)，7.67(d，J＝8.59Hz，2H)，7.76(d，J＝8.59Hz，4H)，8.64(m，1H)。
b)4-[(苯乙基氨基)羰基]苯基羥基代硼酸在-78℃下將正丁基鋰(1.6M在己烷溶液中，10ml，15.78mmol)緩慢加入到N1-苯基-4-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(1.92g，6.31mmol)的四氫呋喃(47mL)溶液中。30分鐘后，快速加入硼酸三異丙基酯(2.2mL，9.47mmol)。13分鐘后將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌16小時(shí)。加入鹽酸(2.5N，47mL)并將此混合物攪拌5小時(shí)。分層并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物用乙酸乙酯/庚烷重結(jié)晶得到4-[(苯乙基氨基)羰基]苯基羥基代硼酸(0.486g，28％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.85(m，2H)，3.49(m，2H)，7.22(m，5H)，7.73(m，4H)，8.17(s，2H)，8.54(m，1H)。
c)順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.226mmol)、4[(苯乙基氨基)羰基]苯基羥基代硼酸(60mg，0.249mmol)、四(三苯基膦)鈀(16mg，0.014mmol)和碳酸鈉(58mg，0.544mmol)與乙二醇二甲醚(3mL)和水(1.5mL)混合。將該反混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過制備薄層柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到順-N1-苯乙基-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲酰胺(28mg，23％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.62(m，4H)，2.24(m，16H)，2.88(m，2H)，3.54(m，2H)，4.82(m，1H)，7.29(m，7H)，8.73(d，J＝8.10Hz，2H)，7.99(d，8.17Hz，1H)，8.67(m，1H)。LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝539.3，Rt＝2.50min。
實(shí)施例206反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(4.0g，9.06mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(3.48g，9.97mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.63g，0.64mmol)和碳酸鈉(2.30g，21.75mmol)與乙二醇二甲醚(100ml)和水(50ml)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.75g，98％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(m，11H)，2.02(m，6H)，2.15(s，3H)，2.35(m，5H)，2.53(m，4H)，3.87(s，3H)，4.64(m，1H)，7.20(m，2H)，7.90(d，J＝8.15，1H)，8.03(s，1H)，8.22(s，1H)。
b)反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下，將三氟乙酸/二氯甲烷(20∶80，150mL)的混合物加入到N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.75g，8.85mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中。2小時(shí)后，除去冰浴并蒸發(fā)溶劑，并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入氫氧化鈉(1.0N)以調(diào)節(jié)pH約為10。過濾收集除去有機(jī)溶劑時(shí)形成的固體，得到反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.85g，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.44(m，2H)，1.96(m，6H)，2.21(s，3H)，2.33(m，5H)，2.53(m，4H)，3.83(s，3H)，4.60(m，1H)，5.03(bs，2H)，6.76(d，J＝7.91Hz，1H)，6.98(d，J＝7.89Hz，1H)，7.03(m，2H)，8.19(s，1H)。
c)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺向存在于二氯甲烷(14mL)的1H-2-吲哚基甲酸(0.738g，4.58mmol)中加入草酰氯(4mL，45.8mmol)和DMF(1滴)。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)。在0℃，將此二氯甲烷溶液的一半(2.5mL)加入到存在于吡啶(6mL)的反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.50g，1.145mmol)中。30分鐘后，過濾收集此固體。然后將水加入到此固體中并用氫氧化鈉(1.0N)將此溶液的pH調(diào)節(jié)至10，水相用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺(0.312g，47％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(m，2H)，2.05(m，6H)，2.15(s，3H)，2.32(m，5H)，2.51(m，4H)，3.97(s，3H)，4.66(m，1H)，7.10(m，1H)，7.22(m，1H)，7.30(d，J＝7.98Hz，1H)，8.11(d，J＝8.14Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44(s，1H)。
d)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺，三馬來酸鹽將反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺(312mg，0.539mmol)溶解于熱乙酸乙酯(35mL)中并加入存在于熱乙酸乙酯(5mL)的馬來酸(187mg，1.614mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚基甲酰胺，二馬來酸鹽(473mg，95％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，2.09(m，6H)，2.68(s，3H)，2.84-3.19(bm，9H)，3.97(s，3H)，4.73(m，1H)，6.17(s，6H)，7.11(m，1H)，7.25(m，1H)，7.30(m，1H)，7.34(s，1H)，7.41(s，1H)，7.49(d，J＝8.21，1H)，7.68(d，J＝8.02Hz，1H)，8.13(d，J＝8.15Hz，1H)，8.26(s，1H)，9.44(s，1H)，11.38(s，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝580.4，Rt＝2.01min。
實(shí)施例207反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺向存在于二氯甲烷(14mL)的1-甲基-1H-2-吲哚基甲酸(0.802g，4.58mmol)中加入草酰氯(4mL，45.8mmol)和DMF(1滴)。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)。在0℃，將此二氯甲烷溶液的一半(2.5mL)加入到存在于吡啶(6mL)的反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.50g，1.145mmol)中。30分鐘后，過濾收集固體。然后將水加入到此固體中并用氫氧化鈉(1.0N)將此溶液的pH調(diào)節(jié)至10。水相用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺(0.545g，80％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(m，2H)，2.02(m，6H)，2.17(s，3H)，2.36(m，5H)，2.55(m，4H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.66(m，1H)，7.15(m，1H)，7.28-7.35(m，4H)，7.58(d，J＝8.42Hz，1H)，7.70(d，J＝7.96Hz，1H)，8.11(d，J＝8.14，1H)，8.24(s，1H)，9.43(s，1H)。
b)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺，三馬來酸鹽將反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺(545mg，0.917mmol)溶解于熱乙酸乙酯(60mL)并加入存在于熱乙酸乙酯(5mL)的馬來酸(320mg，2.75mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺，二馬來酸鹽(473mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，2.06(m，6H)，2.68(s，3H)，2.83-3.57(bm，9H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.72(m，1H)，6.18(s，6H)，7.16(m，1H)，7.28-7.36(m，4H)，7.59(d，J＝8.44Hz，1H)，7.72(d，J＝7.94Hz，1H)，8.13(d，J＝8.15，1H)，8.28(s，1H)，9.44(s，1H)。LC/MS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝594.4，Rt＝2.24。
實(shí)施例208
反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺在0℃下，將存在于二氯甲烷(1mL)的4-(三氟甲基)-1-苯羰基氯(262mg，1.256mmol)加入到反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.145mmol)的吡啶(8mL)溶液中。30分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(516mg，74％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.55(m，2H)，1.74(m，2H)，2.10-2.27(m，6H)，2.30(s，3H)，2.51(m，4H)，2.66(m，3H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.78(m，1H)，5.57(bs，2H)，7.30(m，2H)，7.79(d，J＝8.25Hz，2H)，8.04(d，J＝8.05Hz，2H)，8.38(s，1H)，8.64(s，1H)，8.68(d，J＝8.20Hz，1H)。
b)反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺三馬來酸鹽將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(510mg，0.838mmol)溶解于熱乙酸乙酯(55mL)，并加入存在于熱乙酸乙酯(5mL)的馬來酸(292mg，2.513mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺，二馬來酸鹽(802mg，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，2.06(m，6H)，2.68(s，3H)，2.83-3.17(bm，9H)，3.93(s，3H)，4.72(m，1H)，6.17(s，6H)，7.29(d，J＝8.12Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.92(d，J＝8.34Hz，2H)，8.02(d，J＝8.12Hz，1H)，8.17(d，J＝8.12Hz，2H)，8.26(s，1H)，9.83(s，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝609.4，Rt＝2.16min。
實(shí)施例209反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺在0℃下，將存在于二氯甲烷(1mL)的4-(三氟甲氧基)-1-苯羰基氯(283mg，1.256mmol)加入到反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.145mmol)的吡啶(8mL)溶液中。30分鐘后，除去冰浴，將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(526mg，74％)。1H NMR(CDCl3)δ1.57(m，2H)，1.74(m，2H)，2.10-2.27(m，6H)，2.30(s，3H)，2.51(m，4H)，2.66(m，3H)，4.03(s，3H)，4.77(m，3H)，5.56(bs，2H)，7.26-7.37(m，4H)，7.99(m，2H)，8.38(s，1H)，8.59(s，1H)，8.67(d，J＝8.21Hz，1H)。
b)反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(520mg，0.832mmol)溶解于熱乙酸乙酯(55mL)并加入存在于熱乙酸乙酯(5mL)的馬來酸(290mg，2.497mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺，二馬來酸鹽(780mg，96％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，2.06(m，6H)，2.68(s，3H)，2.83-3.17(bm，9H)，3.93(s，3H)，4.72(m，1H)，6.18(s，6H)，7.28(d，J＝8.14Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.54(d，J＝8.47Hz，2H)，8.01(d，J＝8.12Hz，1H)，8.10(d，J＝8.69Hz，2H)，8.26(s，1H)，9.69(s，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝625.4，Rt＝2.21min。
實(shí)施例210N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-3-苯基丙酰胺a)4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯在0℃下，將硼氫化鈉(3.8g，100.4mmol)分批加入到4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁基酯(20g，100.4mmol)的甲醇(600mL)溶液中。15分鐘后，除去冰水浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌3小時(shí)。加入氫氧化鈉(1.0N，100mL)并蒸發(fā)有機(jī)溶劑。水層用乙醚萃取4次。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到叔丁基4-羥基-1-哌啶甲酸酯(20.48g，100％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.48(s，9H)，1.63(m，2H)，1.87(m，2H)，3.03(m，2H)，3.83(m，3H)。
b)4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10g，38.3mmol)、4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(16.96g，84.2mmol)和三苯基膦(20.09g，76.0mmol)懸浮于四氫呋喃(425mL)。將該反應(yīng)混合物在冰水浴中冷卻并滴加偶氮二甲酸二乙酯(12.09mL，76.0mmol)。10分鐘后，該反應(yīng)混合物升溫至室溫。5小時(shí)后，減壓除去溶劑并在加熱下加入二氯甲烷(65mL)。將此固體過濾并用二氯甲烷(20ml)洗滌。此固體進(jìn)-步用乙酸乙酯(5×20mL)洗滌得到二乙基1，2-肼二甲酸酯和叔丁基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸酯(1∶1，14.98g，63％)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。1H NMR(CDCl3)δ1.48(s，9H)，1.95(m，2H)，2.20(m，2H)，2.92(m，2H)，4.23(m，2H)，4.84(m，1H)，8.31(s，1H)。
c)3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下，將三氟乙酸/二氯甲烷(20∶80，250mL)的混合物加入到存在于二氯甲烷(100mL)的4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(10.72g，24.1mmol)中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入鹽酸(5.0N)并將水層用二氯甲烷洗滌3次。加入氫氧化鈉(50％)以調(diào)節(jié)pH為約10。將此懸浮液凍干，將體積降低到原體積的三分之一。過濾收集此固體得到3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(8.109g，97％)。1H NMR(CDCl3)δ1.81(m，2H)，1.99(m，2H)，2.65(m，2H)，3.07(m，2H)，4.68(m，1H)，8.19(s，1H)。
d)3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.00g，5.81mmol)、1-甲基-4-哌啶酮(2.14mL，17.42mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(2.45g，11.62mmol)和冰醋酸(1.05g，17.42mmol)與1，2-二氯乙烷(75mL)混合。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌6小時(shí)并加入飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)PH為約8。過濾收集固體得到3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.39g，93％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.52(m，2H)，1.75(m，2H)，1.87(m，2H)，2.05(m，4H)，2.24(s，3H)，2.28(m，3H)，2.91(m，2H)，3.00(m，2H)，4.55(m，1H)，8.18(s，1H)。
e)N-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯將3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.39g，5.41mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(2.08g，5.96mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.375g，0.32mmol)和碳酸鈉(1.38g，13.00mmol)與乙二醇二甲醚(80mL)和水(40mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶0.5)作為流動(dòng)相，得到N-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，57％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(m，11H)，1.71(m，2H)1.86(m，4H)，2.14(s，3H)，2.18(m，3H)，2.32(m，2H)，2.80(m，2H)，3.89(s，3H)，4.64(m，1H)，7.22(m，2H)，7.91(d，J＝8.12，1H)，8.03(s，1H)，8.21(s，1H)。
f)N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-3-苯基丙酰胺將3-苯基丙酰氯(77mg，0.458mmol)加入到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.229mmol)的吡啶(1.2mL)溶液中。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化得到N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-3-苯基丙酰胺(24mg，18％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.70(m，2H)，1.85(m，2H)，2.04(m，4H)，2.30(s，3H)，2.41(m，5H)，2.75(m，2H)，2.97(m，2H)，3.08(m，4H)，3.90(s，3H)，4.75(m，1H)，5.71(bs，2H)，7.24(m，8H)，7.76(s，1H)，8.34(s，1H)，8.52(d，J＝8.12，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝569.5，Rt＝1.65min。
實(shí)施例211N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺將4-(三氟甲氧基)-1-苯羰基氯(103mg，0.458mmol)加入到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.229mmol)的吡啶(1.0mL)溶液中。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化得到N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(40mg，28％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.67(m，2H)，1.84(m，2H)，1.97(m，2H)，2.06(m，2H)，2.28(s，3H)，2.45(m，5H)，2.94(m，2H)，3.10(m，2H)，4.03(s，3H)，4.77(m，1H)，5.53(bs，2H)，7.34(m，4H)，7.98(d，J＝8.73Hz，2H)，8.38(s，1H)，8.59(s，1H)，8.66(d，J＝8.73Hz，1H)。
LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.0mL/min.)MH+＝625.5，Rt＝2.00min。
實(shí)施例212N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽a)N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺將4-(三氟甲基)-1-苯羰基氯(48mg，0.231mmol)加入到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(101mg，0.231mmol)的吡啶(1.0mL)溶液中。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化得到N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(83mg，59％)。1H NMR(CDCl3-d)δ1.68(m，2H)，1.82(m，4H)，2.01(m，4H)，2.29(s，3H)，2.44(m，3H)，2.93(m，2H)，3.30(m，2H)，4.03(s，3H)，4.77(m，1H)，5.60s，2H)，7.33(m，2H)，1.79d，J＝8.19Hz，2H)，8.04(d，J＝8.04Hz，2H)，8.37(s，1H)，8.66(m，2H)。LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝609.4，Rt＝2.50min。
b)N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽將N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(78mg，0.128mmol)溶解于熱乙酸乙酯(10mL)中，并加入在熱乙酸乙酯(1mL)中的馬來酸(45mg，0.387mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。除去溶劑并加入乙酸乙酯，過濾收集固體得到N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺，三馬來酸鹽(115mg，94％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.87(m，2H)，2.24(m，4H)，2.79(s，3H)，3.01-3.57(bm，11H)，3.93(s，3H)，5.09(m，1H)，6.12(s，6H)，7.32(m，2H)，7.93(d，J＝8.37Hz，2H)，8.04(d，J＝8.11Hz，1H)，8.16(d，J＝8.18Hz，2H)，8.29(s，1H)，9.84(s，1H)。LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝609.4，Rt＝2.50min。
實(shí)施例2131-[1-(1H-2-咪唑基甲基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡咯烷甲酸叔丁基酯將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.5g，1.648mmol)，3-｛[(4-甲基苯基)磺?；鵠氧基}-1-吡咯烷甲酸叔丁基酯(1.12g，3.30mmol)和碳酸銫(1.07g，3.30mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(12mL)中在75℃下加熱過夜。將該反應(yīng)混合物倒入到冰水(100mL)中。水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得到3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡咯烷甲酸叔丁基酯(0.20g，28％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，9H)，2.37(m 2H)，3.32(s，3H)，3.44(m，1H)，3.59(m，1H)，3.65(m，1H)，3.75(m，1H)，5.44(m，1H)，7.16(m，5H)，7.43(m，2H)，7.65(m，2H)，8.26(s，1H)。
b)3-(4-苯氧基苯基)-1-四氫-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下，將三氟乙酸/二氯甲烷(20∶80，8mL)的混合物加入到3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡咯烷甲酸叔丁基酯(240mg，0.508mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯。加入飽和碳酸氫鈉以調(diào)節(jié)pH為約8。分層并將水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-(4-苯氧基苯基)-1-四氫-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.157mg，91％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.99-2.21(m，2H)，2.94(m，1H)，3.04-3.23(m，3H)，5.31(m，1H)，7.14(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(m，2H)，8.24(s，1H)。
c)1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(4-苯氧基苯基)-1-四氫-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，5.81mmol)、1H-2-咪唑甲醛(77mg，0.806mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(113mg，0.537mmol)和冰醋酸(48mg，0.806mmol)與1，2-二氯乙烷(4mL)混合。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌6小時(shí)，并加入飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)pH為約9。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(90∶10)作為流動(dòng)相，得到1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，83％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.33(m，2H)，2.81(m，4H)，3.15(m，1H)，3.69(s，2H)，5.38(m，1H)，6.90(s，2H)，7.15(m，5H)，7.44(m，2H)，7.66(m，2H)，8.24(s，1H)。LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)MH+453.4，Rt＝2.17min。
實(shí)施例2141-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽a)1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(4-苯氧基苯基)-1-四氫-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(150mg，0.403mmol)、1-甲基-4-哌啶酮(0.099mL，0.806mmol)，三乙酰氧基硼氫化鈉(113mg，0.537mmol)和冰乙酸(48mg，0.806mmol)與1，2-二氯乙烷(4mL)混合。將反應(yīng)混合物室溫下攪拌6小時(shí)，并加入飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)pH為約9。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(85∶15)作為流動(dòng)相，得到1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(148mg，78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.42(m，2H)，1.81(m，2H)，1.92(m，2H)，2.15(m，1H)，2.26(m，2，3H)，2.28(m，2H)，2.75(m，4H)，2.86(m，1H)，3.22(m，1H)，5.36(m，1H)，7.16(m，5H)，7.44(m，2H)，7.67(m，2H)，8.24(s，1H)。LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝470.4，Rt＝2.01。
b)1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽將1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(148mg，0.315mmol)溶解于熱乙酸乙酯(20mL)，并加入存在于熱乙酸乙酯(1mL)的馬來酸(110mg，0.946mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到1-[1-(1-甲基-4-哌啶基)四氫-1H-3-吡咯基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，三馬來酸鹽(230mg，90％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.81(m，2H)，2.27(m，2H)，2.78(s，3H)，2.97-3.84(bm，11H)，5.63(m，1H)，6.12(s，6H)，7.17(m，5H)，7.45(m，2H)，7.68(m，2H)，8.29(s，1H)。LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5mL/min.)MH+＝470.4，Rt＝2.01。
實(shí)施例215N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺a)1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.5g，1.45mmol)、1H-2-咪唑甲醛(0.42g，4.34mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(0.61g，2.90mmol)和冰醋酸(0.26g，4.36mmol)與1，2-二氯乙烷(20mL)混合。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌6小時(shí)，并加入飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)pH為約9。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.57g，92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.85(m，2H)，2.17(m，4H)，2.92(m，2H)，3.55(s，2H)，4.57(m，1H)，6.92(s，2H)，8.14(s，1H)。
b)N-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(127mg，0.299mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(115mg，0.329mmol)、四(三苯基膦)鈀(21mg，0.018mmol)和碳酸鈉(76mg，0.718mmol)與乙二醇二甲醚(3mL)和水(1.5mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到N-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(64mg，41％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(m，9H)，1.87(m，2H)，2.23(m，4H)，2.94(m，2H)，3.56(s，2H)，3.88(s，3H)，4.66(m，1H)，6.92(s，2H)，7.21(m，2H)，7.90(d，J＝8.14，1H)，8.04(s，1H)，8.22(s，1H)。
c)3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下，將三氟乙酸/二氯甲烷(20∶80，2mL)的混合物加入到N-(4-{4-氨基-1-[1-(1H 2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(55mg，0.106mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入飽和碳酸氫鈉以調(diào)節(jié)PH為約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1H 2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，68％)。1H NMR(CDCl3-d)δ2.20(m，2H)，2.44(m，2H)，3.04(m，2H)，3.75(s，2H)，3.93(s，3H)，4.01(s，2H)，4.80(m，1H)，5.58(bs，2H)，6.82(m，1H)，7.01(m，4H)，8.34(s，1H)。
e)N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺在0℃下將3-苯基丙酰氯(0.011mL，0.0715mmol)加入到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.0715mmol)的吡啶(1.2mL)溶液中。2小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺(20mg，51％)。1H NMR(CDCl3)δ2.27(m，2H)，2.61(m，2H)，2.76(m，4H)，3.09(m，2H)，3.93(s，3H)，4.07(s，2H)，4.96(m，1H)，5.61(bs，2H)，7.06-7.33(m，10H)，7.78(s，1H)，8.35(s，1H)，8.55(d，J＝8.15Hz，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝552.5，Rt＝1.83min。
實(shí)施例216-221得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺典型方法向存在于二氯甲烷(1.4mL)的適當(dāng)羧酸(0.46mmol)中加入草酰氯(0.4mL，4.6mmol)和DMF(1滴)。將小瓶用隔膜蓋上并在各蓋上插入小號(hào)針頭以釋放壓力。這些小瓶在J-Kem震搖器上搖動(dòng)過夜。分離50％的溶液，然后將過量的草酰氯和二氯甲烷在12孔Supelco支管上真空下隨氮?dú)饬鞒ァ⒋制孵Ｂ?0.23mmol)加入到存在于干燥吡啶(0.6mL)中的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.11mmol)中，并室溫下攪拌過夜。所得溶液直接通過制備HPLC進(jìn)行純化(HypersilBSD C18，5μm，100×21mm，在10分鐘內(nèi)0％-100％乙腈/0.05M醋酸銨，25.0mL/min)。所得產(chǎn)物通過在二氯甲烷(4ml)和1.0N氫氧化鈉(2ml)之間分配并通過Empore高效萃取圓盤柱(C18-SD十八烷基)來進(jìn)一步純化，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。對(duì)這些化合物的詳細(xì)描述見下頁(yè)，其中給出了相應(yīng)的LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH 4.5)，3.5L/min.)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例221順-3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.41g，7.74mmol)在乙二醇二甲基醚(50mL)中的混合物用4-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸(1.94g，8.51mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.537g，0.464mmol)和碳酸鈉(1.97g，18.58mmol)的水(25mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在85℃氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。減壓下除去有機(jī)溶劑。將乙酸乙酯(300mL)加入到水層中。分層，并將水層用乙酸乙酯(200mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各1L)，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。將乙酸乙酯加到此固體中。大部分此固體不溶于乙酸乙酯，接著過濾得到2.95g(77％)的順-3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.217(s，1H)，7.592-7.570(m，2H)，7.504-7.483(m，2H)，7.440-7.369(m，3H)，7.206-7.184(m，2H)，5.186(s，2H)，4.802-4.755(m，1H)，2.497-2.354(m，7H)，2.256-2.228(m，4H)，2.151(s，3H)，2.076-1.989(m，2H)，1.694-1.673(m，2H)，1.607-1.545(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.128min(100％)。
實(shí)施例222順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶3-基}苯酚將順-3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.005mmol)的無水乙醇(25mL)溶液用10wt.％鈀-活性炭(0.100g，0.201mmol)和甲酸銨(0.317g，5.03mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌2小時(shí)；通過薄層色譜觀察不到起始物。將該反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾，用乙醇(500mL)洗滌。減壓下除去有機(jī)層。所得固體真空下干燥過夜，得到0.406g(99％)的順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.204-8.194(m，2H)，7.472-7.437(m，2H)，6.947-6.912(m，2H)，4.791-4.744(m，1H)，2.418(m，9H)，2.249-2.243(m，2H)，2.193(s，3H)，2.077-2.050(m，2H)，1.688-1.666(m，2H)，1.656-1.578(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt3.47min(99％)。
2-氟-6-[(2-甲氧基乙基)氨基]芐腈將2，6-二氟芐腈(3.5g，25.16mmol)的二甲基甲酰胺(50mL)溶液用3-甲氧基丙基胺(2.24g，25.16mmol)和碳酸鉀(6.94g，50.32mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。將水(100mL)加入到該反應(yīng)溶液中。分層，并將水層用乙酸乙酯(1.2L)萃取。將合并的有機(jī)層用水洗滌(1.5L)，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用7∶1庚烷∶乙酸乙酯作為洗脫劑。過柱后得到3.5g(68％)的2-氟-6-[(2-甲氧基乙基)氨基]芐腈。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.48-7.39(m，1H)，6.64-6.48(m，2H)，3.45-3.31(m，2H)，3.30-3.20(m，5H)，1.85-1.75(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt6.57min(97％)。
順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈將順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(0.200g，0.491mmol)的二甲基甲酰胺(25mL)溶液，用2-氟-6-[(2-甲氧基乙基)氨基]芐腈(0.124g，0.589mmol)和碳酸鉀(0.136，0.982mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在120℃下在氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。該反應(yīng)18小時(shí)后還沒有完成，因此再將2-氟-6-[(2-甲氧基乙基)氨基]芐腈(0.12g，0.574mmol)加入到該反應(yīng)混合物中并攪拌過夜。將乙酸乙酯加入到該反應(yīng)混合物中，并用1N氫氧化鈉溶液(300mL)洗滌。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各300mL)，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。產(chǎn)物通過急驟色譜在硅膠Supelco柱上純化，用存在于二氯甲烷中的20％甲醇作為洗脫劑。過柱后得到0.050g的產(chǎn)物，其中含有一些起始物。粗品通過制備HPLC純化(Hypersil C18，100×21mm柱，5μm，15-100％乙腈梯度在8分鐘內(nèi)，總過柱時(shí)間-10min，緩沖液-50mM醋酸銨，25ml/min)。將得自HPLC柱的產(chǎn)物溶解于二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌以除去殘余的醋酸銨。分層，用Empore萃取圓盤柱純化得到0.010g(3％)順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.328(s，1H)，7.706-7.678(m，2H)，7.305-7.211(m，4H)，6.433-6.411(d，1H，J＝8.8Hz)，4.925-4.904(m，1H)，3.574-3.547(m，2H)，3.400(s，3H)，3.389-3.343(m，2H)，2.441-2.418(m，3H)，2.382(s，3H)，2.25-2.10(m，2H)，2.031(s，3H)，1.973-1.944(m，2H)，1.851-1.829(m，2H)，1.700-1.679(m，3H)，1.355-1.200(m，5H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.185min(100％)。
實(shí)施例223順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈三馬來酸鹽2-氟-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈將2，6-二氟芐腈(5.18g，37.26mmol)的二甲基甲酰胺(100mL)溶液用對(duì)甲苯硫酚(4.628g，37.26mmol)和碳酸鉀(10.28g，74.52mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)。將水(150mL)和乙酸乙酯(250mL)加入到該反應(yīng)混合物中。分層，并將水層用乙酸乙酯(500mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌(1L)，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用7∶1庚烷∶乙酸乙酯洗脫。過柱后得到3.341g(37％)的2-氟-6-[(4甲基苯基)硫基]芐腈。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.66-7.61(m，1H)，7.47-7.45(m，2H)，7.36-7.32(m，3H)，6.83-6.79(m，1H)，2.36(s，3H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt8.04min(93％)。
順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈三馬來酸鹽將順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(0.300g，0.736mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液，用2-氟-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈(0.447g，1.84mmol)和碳酸鉀(0.203，1.47mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在120℃下在氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。將乙酸乙酯(150mL)和1N氫氧化鈉溶液加入到該反應(yīng)溶液中。分層，并將有機(jī)層用1N氫氧化鈉溶液(300mL)洗滌。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各400mL)，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。粗品通過急驟硅膠柱色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇作為流動(dòng)相。淡棕色固體用乙酸乙酯研磨并過濾得到0.050g(11％)順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈。將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈(0.050g，0.079mmol)在乙酸乙酯/甲醇中的溫溶液用馬來酸(0.028g，0.240mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。立即形成沉淀并在氮?dú)夥障逻^濾，得到0.028g的順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(4-甲基苯基)硫基]芐腈三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.251(s，1H)，7.72-7.70(d，2H，J＝8Hz)，7.55-7.48(m，3H)，7.37-7.33(m，4H)，6.96-6.93(d，1H，J＝12Hz)，6.74-6.72(d，1H，J＝8Hz)，6.18(s，6H)，4.85(m，1H)，3.15-2.90(m，4H)，2.85-2.75(m，3H)，2.38(s，3H)，2.05-1.99(m，2H)，1.90-1.60(m，5H)；HPLC Waters 2690 AllianceHPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt6.359min(100％)。
實(shí)施例224順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-(2-吡啶基硫基)芐腈二馬來酸鹽順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-(2-吡啶基硫基)芐腈二馬來酸鹽將順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(0.300g，0.736mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液，用2-氟-6-(2-吡啶基硫基)芐腈(0.424g，1.84mmol)和碳酸鉀(0.203，1.47mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在120℃氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。將乙酸乙酯(125mL)和1N氫氧化鈉溶液(50mL)加入到該反應(yīng)混合物中。分層，并將有機(jī)層用1N氫氧化鈉溶液(300mL)洗滌。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各250mL)，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。此固體用乙酸乙酯研磨得到0.310g(68％)的順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-(2-吡啶基硫基)芐腈。將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-(2-吡啶基硫基)芐腈(0.310g，0.502mmol)的溫乙醇溶液用馬來酸(0.175g，1.503mmol)的溫乙醇溶液處理。冷卻時(shí)產(chǎn)生沉淀并在氮?dú)夥障逻^濾，得到0.356g的順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-(2-吡啶基硫基)芐腈二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.47-8.46(d，1H，J＝4Hz)，8.26(s，1H)，7.79-7.72(m，4H)，7.53-7.51(d，1H，J＝8Hz)，7.38-7.34(m，3H)，7.28-7.24(m，2H)，6.14(s，4H)，4.85(m，1H)，3.60-3.10(m，7H)，3.1-2.85(m，2H)，2.71-2.67(m，2H)，2.32-2.27(m，3H)，2.05-1.99(m，2H)，1.78-1.71(m，4H)；HPLC Waters2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.196min(98％)。
實(shí)施例225反-3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.50g，3.4mmol)在乙二醇二甲基醚(100mL)中的混合物用4-(芐基氧基)苯基羥基代硼酸(0.853g，3.74mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.236g，0.204mmol)和碳酸鈉(0.864g，8.16mmol)的水(35mL)溶液處理。該反應(yīng)混合物在85℃氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。減壓下除去有機(jī)溶劑。將乙酸乙酯(100mL)加入到水層中。分層，并將水層用乙酸乙酯(300mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各500mL)，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的5％甲醇、存在于二氯甲烷中的10％甲醇、存在于二氯甲烷中的20％甲醇、再用存在于二氯甲烷中的30％甲醇洗脫。過柱后得到0.817g(49％)的反-3-[4(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.22(s，1H)，7.59-7.57(m，2H)，7.53-7.50(m，2H)，7.48-7.21(m，3H)，7.19-7.17(d，2H，J＝8Hz)，5.18(s，2H)，4.65-4.60(m，1H)，2.5(s，3H)，2.45-2.25(m，5H)，2.15(s，3H)，2.04-1.92(m，7H)，1.50-1.44(m，2H)；HPLC Waters2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.021min(95％)。
實(shí)施例226反-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈三馬來酸鹽反-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚將反-3-[4-(芐基氧基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.806g，1.62mmol)的無水乙醇(40mL)溶液用10wt.％鈀-活性炭(0.161g，0.324mmol)和甲酸銨(0.511g，8.1mmol)處理。將此反應(yīng)混合物在80℃下攪拌3小時(shí)。通過薄層色譜只觀察到極少的產(chǎn)物。加入10wt.％鈀-活性炭(0.161g，0.324mmol)，并再攪拌1小時(shí)，還是只檢測(cè)到極少的產(chǎn)物。加入甲酸銨(0.204g，3.24mmol)并攪拌過夜。將此反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾，將其用乙醇(500mL)洗滌。減壓下除去有機(jī)層。將所得固體用乙酸乙酯研磨，并在高真空下干燥過夜，得到0.491g(75％)的反-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.74(s，1H)，8.2(s，1H)，7.46-7.44(d，2H，J＝8Hz)，6.92-6.90(d，2H，J＝8Hz)，4.64-4.58(m，1H)，2.67-2.50(m，5H)，2.39-2.34(m，4H)，2.17(s，3H)，2.06-1.92(m，6H)，1.50-1.42(m，2H)；HPLC Waters 2690 AllianceHPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt3.337min(96％)。
反-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈三馬來酸鹽將反-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(0.100g，0.245mmol)的二甲基甲酰胺(25mL)溶液，用2-氟-6-[(2-甲氧基乙基)氨基]芐腈(0.128g，0.613mmol)和碳酸鉀(0.068g，0.49mmol)處理。將此反應(yīng)混合物在120℃下在氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。將乙酸乙酯和1N氫氧化鈉溶液加入到該反應(yīng)混合物中。有機(jī)層用1N氫氧化鈉溶液(1L)洗滌。分層，并將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌(各500mL)，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇作為洗脫劑，得到71mg(48％)的反-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3甲氧基丙基)氨基]芐腈。將反-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈(0.071g，0.119mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.042g，0.358mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并高真空下干燥，得到反-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)-6-[(3-甲氧基丙基)氨基]芐腈三馬來酸鹽。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.69-7.67(d，2H，J＝8Hz)，7.37-7.33(m，1H)，7.25-7.23(d，2H，J＝8Hz)，6.53-6.51(d，1H，J＝8Hz)，6.30-6.29(m，1H)，6.19-6.17(d，1H，J＝8Hz)，6.17(s，6H)，4.65-4.64(m，1H)，3.45-3.42(m，2H)，3.27(s，3H)，2.55-2.50(m，4H)，2.50-2.30(m，5H)，2.33(br.s.，3H)，2.01-1.96(m，8Hz)，1.84-1.80(m，2H)，1.49-1.46(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.181min(95％)。
實(shí)施例227反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺三馬來酸鹽4-溴-2-甲氧基苯胺將鄰甲氧基苯胺(5.46g，44.3mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液用2，4，4，6-四溴-2，5-環(huán)己二烯-1-酮(18.16g，44.3mmol)在-5℃下在1小時(shí)內(nèi)分批處理。加入溴化試劑后，除去干冰/丙酮浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。將氫氧化鈉溶液(1N)加入到該反應(yīng)混合物中，并分層。有機(jī)層用1N氫氧化鈉溶液(1L)洗滌，用水(750mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)，得到8.096g(89％)的4-溴-2-甲氧基苯胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ6.90(s，1H)，6.83-6.76(m，1H)，6.57-6.55(m，1H)，4.86(s，2H)，3.76(s，3H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.635min(89％)。
N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺將4-溴-2-甲氧基苯胺(8.096g，40.04mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液用三乙胺(6.06g，60.06mmol)處理，然后用氫化肉桂酰氯(7.08g，42.04mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。減壓除去溶劑，并加入乙酸乙酯。過濾此沉淀，并將濾液減壓下蒸發(fā)為固體。將此固體溶解于乙酸乙酯，并用5N鹽酸溶液、5N氫氧化鈉溶液、水和鹽水洗滌。粗品(薄層色譜存在兩個(gè)點(diǎn))用甲醇研磨。過濾不溶固體，得到6g(50％)的N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.17(s，1H)，7.92-7.90(m，1H)，7.30-7.24(m，4H)，7.20-7.18(m，2H)，7.09-7.07(m，1H)，3.83(s，3H)，2.90-2.86(m，2H)，2.72-2.69(m，2H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt7.491min(97％)。
3-甲氧基-4-[(3-苯基丙?；?氨基]苯基羥基代硼酸將N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺(1.004g，3mmol)的無水四氫呋喃(30mL)溶液，在-78℃下用1.6M正丁基鋰的己烷溶液(4.7mL，7.5mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌40分鐘。將三異丙基硼酸酯(1.05mL，4.5mmol)加入到此反應(yīng)混合物中，并在-78℃下攪拌20分鐘。除去丙酮/干冰浴。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌4小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用2.5N鹽酸溶液(30mL)停止反應(yīng)。減壓下除去有機(jī)層。將乙酸乙酯加入到酸性水層。分層，并將水層用乙酸乙酯(250mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用1∶1二氯甲烷∶乙酸乙酯作為洗脫劑。梯度變?yōu)榇嬖谟诙燃淄橹械?5％甲醇，以除去基線產(chǎn)物，得到0.209g(23％)的3-甲氧基-4-[(3-苯基丙?；?氨基]苯基羥基代硼酸。1H NMR(DMS0-d6，400MHz)δ9.08(s，1H)，7.89-7.95(m，3H)，7.45-7.42(s，1H)，7.35-7.16(m，5H)，3.82(s，3H)，2.91-2.81(m，2H)，2.74-2.70(s，2H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.389min(95％)。
反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺三馬來酸鹽將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.268g，0.607mmol)的乙二醇二甲基醚(20mL)溶液用3-甲氧基-4-[(3-苯基丙?；?氨基]苯基羥基代硼酸(0.200g，0.669mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.042g，0.036mmol)和碳酸鈉(0.154，1.46mmol)的水(10mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在85℃在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。加入四(三苯基膦)鈀(0.035g，0.03mmol)并將此混合物攪拌過夜(15小時(shí))。減壓下除去有機(jī)層，并加入乙酸乙酯。分層，并將水層用乙酸乙酯(300mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇(6L)作為洗脫劑。需要在Supelco急驟色譜柱上進(jìn)行二次純化，用存在于二氯甲烷中的20％甲醇作為洗脫劑。第二次過柱得到0.132g(38％)的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺。產(chǎn)物進(jìn)行制備HPLC純化(Hypersil C18，100×21mm柱，5μm，15-100％乙腈梯度，在8分鐘內(nèi)，總過柱時(shí)間-10min，緩沖液-50mM醋酸銨，25ml/min)，得到0.026g的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺。將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺(0.026g，0.046mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.016g，0.137mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并高真空下干燥，得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.25(s，1H)，8.23-8.19(m，2H)，7.33-7.27(m，5H)，7.23-7.18(m，2H)，6.17(s，6H)，4.72-4.69(m，1H)，3.87(s，3H)，2.94-2.90(m，4H)，2.79-2.75(m，5H)，2.67(s，4H)，2.10-1.99(m，8H)，1.59-1.56(m，3H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt4.844min(90％)。
實(shí)施例228順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺將N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺(1.0g，3mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液，在0℃下用經(jīng)過洗滌(用庚烷洗滌3次)的氫化鈉(0.158g，6.6mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時(shí)。滴加碘代甲烷(0.511g，3.6mmol)，并將此溶液在0℃下攪拌15分鐘。除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。該反應(yīng)過夜后仍沒有反應(yīng)完全；再加入碘代甲烷(0.511g，3.6mmol)并將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。該反應(yīng)混合物用水(30mL)停止反應(yīng)。加入乙酸乙酯，并分層。水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用3∶1庚烷∶乙酸乙酯洗脫，得到0.729g(70％)的N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.330-7.326(s，1H)，7.235-7.178(m，2H)，7.161-7.116(m，3H)，7.058-7.040(m，2H)，3.811(s，3H)，3.002(s，3H)，2.753-2.708(m，2H)，2.282-2.204(m，1H)，2.138-2.061(m，1H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt7.366min(96％)。
N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-3-苯基丙酰胺將N1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺(0.729g，2.09mmol)的二甲基甲酰胺(10mL)溶液，用乙硼烷頻哪醇酯(0.637g，2.51mmol)、醋酸鉀(0.615g，6.27mmol)處理，再用[1，1′-雙(二苯基膦基二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.052g，0.063mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌26小時(shí)，再加入乙硼烷頻哪醇酯(0.318g，1.254mmol)、醋酸鉀(0.312g，3.135mmol)和1，1′-雙(二苯基膦基二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.025g，0.031mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌48小時(shí)。減壓除去溶劑，并在高真空下干燥。將二氯甲烷加入到此黑色固體中，再通過硅藻土板和硅膠墊過濾。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用1∶1乙酸乙酯庚烷作為洗脫劑。過柱后得到0.290g(35％)的N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-3-苯基丙酰胺，和0.148g(18％)的勻偶聯(lián)的二聚產(chǎn)物。N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-3-苯基丙酰胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.33(s，1H)，7.29-7.27(m，2H)，7.22-7.13(m，5H)，7.06-7.03(m，1H)，3.81(s，3H)，3.03-3.00(m，3H)，2.75-2.71(m，4H)，2.30-2.15(m，2H)，2.15-2.05(m，2H)，1.30(s，12H)；HPLC Waters 2690 AllianceHPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.296min(100％)。勻偶聯(lián)的二聚產(chǎn)物1H NMR(DMSO，400MHz)δ7.374(s，2H)，7.293-7.276(m，4H)，7.258-7.188(m，4H)，7.142-7.107(m，2H)，7.067-7.049(m，4H)，3.921(s，6H)，2.992(s，6H)，2.756-2.741(m，4H)，2.339-2.263(m，2H)，2.196-2.070(m，2H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt7.910min(100％)。
順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.293g，0.664mmol)的乙二醇二甲基醚(10mL)溶液，用3-甲氧基-4-[甲基(3苯基丙?；?氨基]苯基羥基代硼酸(0.290g，0.730mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.046g，0.040mmol)和碳酸鈉(0.169g，1.59mmol)的水(5mL)溶液處理。該反應(yīng)混合物在85℃氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。減壓除去溶劑，并加入乙酸乙酯到水層。分層，并將水層用乙酸乙酯(150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的4％甲醇、存在于二氯甲烷中的8％甲醇、以及存在于二氯甲烷中的12％甲醇作為洗脫劑。第二次過柱采用Supelco急驟色譜硅膠柱，用存在于二氯甲烷中的30％甲醇洗脫，得到0.037g(10％)的順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-N1-甲基-3-苯基丙酰胺。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.374(s，1H)，7.315-7.312(m，1H)，7.285-7.213(m，3H)，7.174-7.087(m，4H)，5.795(br.s.，2H)，4.965-4.922(m，1H)，3.892(s，3H)，3.213(s，3H)，2.948-2.918(m，2H)，2.667(m，6H)，2.455-2.349(m，10H)，2.25-2.15(m，2H)，1.867-1.845(m，2H)，1.718-1.710(m，2H)；HPLC Waters 2690Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt4.947min(98％)。
實(shí)施例229N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺三馬來酸鹽N-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.667g，6.04mmol)的乙二醇二甲基醚(95mL)溶液，用N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(2.32g，6.64mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.419g，0.362mmol)和碳酸鈉(1.54g，14.5mmol)的水(40mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在85℃在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。減壓下除去有機(jī)層。加入乙酸乙酯(100mL)，并分層。水層用乙酸乙酯(1L)萃取。合并的有機(jī)層用水(1L)和鹽水(500mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)得到3.71g的粗品。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的20％甲醇(4L)、存在于二氯甲烷中的30％甲醇(1L)、及1∶1甲醇二氯甲烷(1L)作為洗脫劑，得到2.305g(71％)的N-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.221(s，1H)，8.030(s，1H)，7.921-7.901(m，1H)，7.239-7.195(m，2H)，4.652-4.594(m，1H)，3.890(s，3H)，2.988-2.804(m，2H)，2.776-2.507(m，2H)，2.40-2.21(m，5H)，2.190(s，3H)，1.898-1.815(m，4H)，1.716-1.686(m，2H)，1.482-1.446(m，11H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt4.541min(98％)；TLC(存在于二氯甲烷中的20％甲醇)Rt＝0.4。
3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將N-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.298g，4.28mmol)的二氯甲烷(26mL)溶液，在0℃下用三氟乙酸(9.2mL)的二氯甲烷(20mL)溶液處理。將該反應(yīng)溶液在0℃下攪拌20分鐘，之后除去冰浴，并在室溫下再攪拌2小時(shí)。減壓除去溶劑，并將此殘余物在高真空下干燥。將乙酸乙酯(150mL)和5N鹽酸溶液(100mL)加入到此油狀物中。分層，并將有機(jī)層用5N鹽酸溶液(400mL)萃取。在冰浴中將合并的水層冷卻至0℃，并用50％氫氧化鈉溶液中和至pH 10。中和后的層用二氯甲烷(700mL)萃取。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)得到1.769g(95％)的3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.189(s，1H)，7.048-7.043(s，1H)，7.004-6.980(d.d.，1H，J＝1Hz，J＝4Hz)，6.775-6.755(m，1H)，5.039(s，2H)，4.605-4.565(m，1H)，3.831(s，3H)，2.992-2.882(m，2H)，2.882-2.794(m，2H)，2.40-2.15(m，5H)，2.149(s，3H)，1.876-1.849(m，4H)，1.727-1.698(m，2H)，1.486-1.448(m，2H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt2.83min(99％)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺三馬來酸鹽向3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.450g，1.03mmol)的吡啶(8mL)溶液中，在-5℃下滴加4-(三氟甲氧基)-1-苯羰基氯(0.231g，1.03mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液進(jìn)行處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌30分鐘。除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌3小時(shí)。加入1N氫氧化鈉溶液(10mL)，并攪拌1小時(shí)。減壓下除去有機(jī)溶劑。加入二氯甲烷(10mL)并用Empore萃取柱分層。減壓除去有機(jī)溶劑并將粗品化合物在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇作為洗脫劑，得到0.430g(67％)的N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(0.430g，0.688mmol)的乙酸乙酯(15mL)熱溶液用馬來酸(0.240g，2.07mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。形成沉淀，在氮?dú)夥障逻^濾，并高真空下干燥，得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.70(s，1H)，8.28(s，1H)，8.11-8.08(m，2H)，8.05-8.03(m，1H)，7.56-7.54(m，2H)，7.34(m，1H)，7.31-7.29(m，1H)，6.11(s，6H)，5.10-5.00(m，1H)，3.93(s，3H)，3.54(m，4H)，2.99(m，2H)，2.79(s，3H)，2.22-2.19(m，4H)，1.84(m，2H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt4.999min(100％)。
實(shí)施例2304-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮二馬來酸鹽將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(0.300g，0.780mmol)的吡啶(5mL)溶液在0℃下用4-甲基-1-哌嗪羰基氯鹽酸鹽(0.127g，0.780mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌5分鐘，之后除去冰浴，并將該反應(yīng)室溫下攪拌過夜。再加入等量的4-甲基-1-哌嗪羰基氯鹽酸鹽(0.127g，0.780mmol)并攪拌2小時(shí)。減壓除去溶劑。將二氯甲烷(10mL)和碳酸氫鈉(5mL)飽和水溶液加入到此固體中。分層，用Empore萃取柱。減壓下除去有機(jī)層得到0.417g的粗品。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的8％甲醇、存在于二氯甲烷中的15％甲醇、以及存在于二氯甲烷中的20％甲醇作為洗脫劑，得到0.178g(45％)的4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮。將4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(0.178g，0.347mmol)的乙酸乙酯熱溶液用馬來酸(0.081g，0.693mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。溶劑冷卻時(shí)形成沉淀，在氮?dú)夥障逻^濾，并高真空下干燥，得到0.124g的4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.257(s，1H)，7.661-7.639(d，2H，J＝8.8Hz)，7.441-7.42(m，2H)，7.210-7.112(m，5H)，6.142(s，4H)，4.963-4.908(m，1H)，3.784-3.754(d，2H，J＝12Hz)，3.7-3.2(br.s.，11H)，3.15-3.05(m，2H)，2.922(s，3H)，2.161-2.138(m，2H)，1.989-1.93(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(SymmetryShield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.159min(97％)。
實(shí)施例231N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.398g，0.912mmol)的吡啶(7mL)懸浮液，在-5℃用4-(二甲基氨基)-1-苯羰基氯(0.167g，0.912mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌2.5小時(shí)，并除去冰浴。將1N氫氧化鈉溶液(10mL)加入到該反應(yīng)混合物中并攪拌1小時(shí)。減壓下除去有機(jī)層，并加入二氯甲烷(15mL)。分層，用Empore萃取柱。減壓下除去有機(jī)層。粗品固體通過急驟色譜在硅膠上純化兩次，用存在于二氯甲烷中的12％(甲醇，其中含5％氫氧化銨)作為洗脫劑，得到0.284g(53％)的N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺的(0.284g，0.487mmol)在乙酸乙酯和幾滴乙醇中的熱溶液，用馬來酸(0.169g，1.46mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾形成的沉淀并高真空下干燥，得到0.409g的N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.054(s，1H)，8.278(s，1H)，8.215-8.194(m，1H)，7.851-7.828(m，2H)，7.312-7.308(m，1H)，7.288-7.263(m，1H)，6.794-6.772(m，2H)，6.096(s，6H)，5.10-5.00(m，1H)，3.951(s，3H)，3.538(s，4H)，3.061(s，8H)，2.215-2.183(m，4H)，1.90-1.81(m，2H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(SymmetryShield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt4.496min(97％)。
實(shí)施例232-237順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酰胺順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺將存在于二氯甲烷(100μL)的商購(gòu)酰氯(0.23mmol)加入到存在于吡啶(800μL)的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.115mmol)中。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。該反應(yīng)混合物用1N氫氧化鈉溶液驟冷。在Supelco-支管上真空和氮?dú)饬飨鲁ト軇?。剩余的固體進(jìn)行制備HPLC(Hypersil C18，100×21mm柱，5μm，15-100％乙腈梯度，在8分鐘內(nèi)，總過柱時(shí)間-10min，緩沖液50mM醋酸銨，25ml/min)。將二氯甲烷和1N氫氧化鈉溶液加入到此固體中。分層，用Empore萃取柱，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5ml/min)
實(shí)施例238順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯氨基)-2-苯基-1-乙醇將順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.075g，0.000172mol)和氧化苯乙烯(0.029g，0.000172mol)溶解于異丙醇(3mL)，并將所得混合物加熱回流24小時(shí)。除去溶劑并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)，得到順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯氨基)-2-苯基-1-乙醇(0.005g，0.0000089mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.36(m，5H)，7.06(s，1H)，6.91(d，1H)，6.36(d，1H)，5.55(d，1H)，5.20(s，1H)4.78(m，1H)，4.43(d，2H)，3.88(s，3H)，3.74(m，1H)，3.58(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.97min。
MSMH+557。
中間體順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-或反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的總方法步驟A將順-或反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的混合物(或者單獨(dú)的順式或反式)(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并再次濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需產(chǎn)物。
步驟B合成和純化(步驟A)后，將殘余物用二氯甲烷浸提(1mL)，加樣到Trikonex柱(7cm)上并用二氯甲烷(5mL)洗脫。切下所需譜帶(UV-檢測(cè))并將此化合物用二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺＝90∶5∶5(10mL)的混合物萃取，過濾并將此濾液減壓濃縮。殘余物懸浮于乙醚(4mL)并過濾收集此沉淀并干燥。
實(shí)施例239順-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.57(s，1H)，7.06(br，2H)，6.77(d，1H)，6.38(d，1H)，6.32(d，1H)，5.65(t，1H)，4.78(m，1H)，4.38(d，2H)，3.88(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.65min。
MSMH+517。
實(shí)施例240順-5-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯氨基)甲基]-2-呋喃基甲醇乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.06(br，2H)，6.77(d，1H)，6.23(d，1H)，6.19(d，1H)，5.63(t，1H)，5.18(t，1H)，4.78(m，1H)，4.35(d，4H)，3.88(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.91min。
MSMH+547。
實(shí)施例241反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺按照步驟A進(jìn)行制備。將反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1當(dāng)量)溶解于乙醇(20mL)并將此溶液加熱回流。立即加入馬來酸溶液(3當(dāng)量)并再繼續(xù)回流10分鐘。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾收集此沉淀并干燥。
反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.57(s，1H)，7.06(br，2H)，6.77(d，1H)，6.38(d，1H)，6.32(d，1H)，6.16(s，4H)，5.65(t，1H)，4.67(m，1H)，4.38(d，2H)，3.88(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.62min。
MSMH+517。
實(shí)施例242反-3-(3-甲氧基-4-[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽其以與上述反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二馬來酸鹽相同的方式制備。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.08(d，2H)，6.77(d，1H)，6.16(m，5H)，5.95(d，1H)，5.65(t，1H)，4.67(m，1H)，4.32(d，2H)，3.88(s，3H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.22(s，3H)，2.05(m，6H)，1.57(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.73min。
MSMH+531。
將順-或反-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的總方法步驟C將順-或反-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(或者中間體…或…)(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)的混合物在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并再次濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例243順-2-[2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]苯氧基乙酸二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.33(m，3H)，7.17(t，1H)，6.83(m，4H)，4.76(m，1H)，4.46(s，2H)，4.29(s，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.78min。
MSMH+571。
實(shí)施例244順-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.58(s，1H)，7.36(d，2H)，6.81(d，2H)，6.46(t，1H)，6.41(d，1H)，6.34(d，1H)，4.78(m，1H)，4.31(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.29min。
MSMH+487。
實(shí)施例245順-3-(4-[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.36(d，2H)，6.79(d，2H)，6.43(t，1H)，6.21(d，1H)，5.98(d，1H)，4.78(m，1H)，4.24(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.86min。
MSMH+501。
實(shí)施例246順-3-{4-[(3-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.64(d，2H)，7.37(d，2H)，6.79(d，2H)，6.52(s，1H)，6.29(t，1H)，4.76(m，1H)，4.18(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.17min。
MSMH+488。
實(shí)施例247順-3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.58(d，1H)，7.53(d，1H)，7.38(d，2H)，7.23(m，2H)，6.86(d，2H)，6.80(s，1H)，6.66(t，1H)，4.78(m，1H)，4.52(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.00min。
MSMH+537。
實(shí)施例248反-3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.59(s，1H)，7.35(d，2H)，6.79(d，2H)，6.45(t，1H)，6.39(d，1H)，6.33(d，1H)，4.60(m，1H)，4.30(d，2H)，3.1(br，9H)，2.67(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.96min。
MSMH+487。
將3-(4-氨基-苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺還原烷基化的總方法步驟D將3-(4-氨基-苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1當(dāng)量)、醛(1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.4當(dāng)量)和乙酸(3.4當(dāng)量)的混合物在無水1，2-二氯乙烷中攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應(yīng)并再次濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例2493-(4-[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟D1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.07(br，2H)，6.76(d，1H)，6.17(d，1H)，5.97(d，1H)，5.57(t，1H)，4.60(m，1H)，4.30(d，2H)，3.86(s，3H)，2.98(d，2H)，2.79(d，2H)，2.27(s，3H)，2.25(br，5H)，2.15(s，3H)，1.91(m，7H)，1.69(d，2H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.97min。
MSMH+531。
實(shí)施例250順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(1-苯基乙基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)N-(4-溴苯基)-N-(1-苯基乙基)胺向冷卻至-78C的N-(4-溴苯基)-N-(1-苯基亞甲基)胺(1.0g，0.00385mol)的甲苯(30mL)溶液中，滴加1.4M甲基鋰的乙醚(5.5mL)溶液，保持溫度低于-75℃。將此溶液升溫至-40℃并在此溫度下在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。通過滴加水將該反應(yīng)混合物驟冷并分層。有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到N-(4-溴苯基)-N-(1-苯基乙基)胺(1.03g，0.00373mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.30(m，4H)，7.18(t，1H)，7.09(d，2H)，6.43(d，2H)，6.38(d，1H)，4.43(m，1H)，1.40(d，3H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.27b)N-(1-苯基乙基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺將N-(4-溴苯基)-N-(1-苯基乙基)胺(0.87g，0.00315mol)、乙硼烷頻哪醇酯(0.96g，0.00378mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.077g，0.0000945mol)和醋酸鉀(0.93g，0.00945mol)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(60mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-(1-苯基乙基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.3g，0.00093mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.30(m，6H)，7.18(t，1H)，6.58(d，1H)，6.46(d，2H)，4.51(m，1H)，1.40(d，3H)，1.27(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5.95)Rf0.17c)順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(1-苯基乙基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將N-(1-苯基乙基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.070g，0.000235mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.080g，0.000181mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.012g，0.000011mol)和碳酸鈉一水合物(0.056g，0.00045mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈0.1M醋酸銨在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-{4-[(1-苯基乙基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.062g，0.0000984mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.42(d，2H)，7.30(m，4H)，7.19(t，1H)，6.68(d，2H)，6.52(d，1H)，4.78(m，1H)，4.53(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，1.44(d，3H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.96min。
MSMH+511。
實(shí)施例251和實(shí)施例252順-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺反-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)N-(4-溴苯基)-N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)胺將60％氫化鈉在礦物油中的分散液(0.145g，0.00362mol)加入到氧化锍三甲基碘(0.8g，0.00362mol)的無水二甲基亞砜(10mL)溶液中，并將所得混合物并在氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘。滴加2-{[(4-溴苯基)亞氨基]甲基}苯酚(0.4g，0.00145mol)的無水二甲基亞砜(5mL)溶液并將所得混合物室溫下攪拌2.5小時(shí)。將其倒入到冰冷的水(100mL)中并用乙醚(2×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到N-(4-溴苯基)-N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)胺(0.321g，0.0011mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.34(d，1H)，7.23(m，3H)，6.90(m，2H)，6.67(d，2H)，6.34(d，1H)，5.23(m，1H)，4.72(dd，1H)，4.19(dd，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.52b)N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺將N-(4-溴苯基)-N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)胺(1.65g，0.00569mol)、乙硼烷頻哪醇酯(1.73g，0.00683mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.139g，0.000171mol)和醋酸鉀(0.81g，0.0171mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.59g，0.00176mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.42(d，2H)，7.34(d，1H)，7.23(t，1H)，6.89(m，2H)，6.68(d，2H)，6.52(d，1H)，5.23(m，1H)，4.74(dd，1H)，4.20(dd，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.37c)順-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.080g，0.000237mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.087g，0.000198mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.014g，0.000012mol)和碳酸鈉一水合物(0.061g，0.000495mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)。隨后，將粗品溶解于二氯甲烷，加樣到Trikonex柱(7cm)并用二氯甲烷洗脫(5mL)。切下所需譜帶，產(chǎn)物用二氯甲烷/甲醇/三乙胺90∶5∶5的混合物(10mL)萃取，并減壓除去溶劑。殘余物用乙醚研磨，過濾收集此沉淀并干燥得到順-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.021g，0.00004mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.40(m，3H)，7.25(t，1H)，6.90(m，4H)，6.50(d，1H)，5.35(m，1H)，4.80(m，2H)，4.28(dd，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.39min。
MSMH+525。
反-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將N-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.089g，0.000265mol)、反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.090g，0.000204mol)、四(三苯基膦)鈀(0.014g，0.000012mol)和碳酸鈉一水合物(0.063g，0.00051mol)的混合物，在乙二醇二甲醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到反-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.078g，0.000121mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.40(m，3H)，7.25(t，1H)，6.90(m，4H)，6.50(d，1H)，5.33(m，1H)，4.79(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.28(dd，1H)，3.1(br，9H)，2.17(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.49(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt13.05min。
MSMH+525。
實(shí)施例253順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-1-苯基-1-乙酮二乙酸鹽將順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.6g，0.00148mol)和溴苯乙酮(0.295g，0.00148mol)溶解于無水N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?分鐘。滴加N，N-二異丙基乙胺(0.095g，0.00074mol)并在氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌16小時(shí)。該反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-1-苯基-1-乙酮二乙酸鹽(0.410g，0.00064mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.99(d，2H)，7.75(t，1H)，7.61(t，2H)，7.29(d，2H)，6.69(d，2H)，5.41(br，3H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.16min。
MSMH+525。
實(shí)施例254順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-1-苯基-1-乙醇二乙酸鹽將順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-1-苯基-1-乙酮二乙酸鹽(0.050g，0.000077mol)的無水甲醇(5mL)溶液冷卻至0℃，并立即加入硼氫化鈉(0.018g，0.0000477mol)。將此混合物升溫至室溫同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。通過滴加乙酸停止該反應(yīng)，將該反應(yīng)混合物減壓濃縮，并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-1-苯基-1-乙醇二乙酸鹽(0.035g，0.000054mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.31(m，7H)，6.69(d，2H)，5.41(br，2H)，5.31(d，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，14H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.34min。
MSMH+527。
實(shí)施例255順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-N′-芐基脲乙酸鹽將順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入異氰酸芐基酯(0.013g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲基]-N′-芐基脲乙酸鹽(0.015g，0.000022mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.62(d，2H)，7.45(d，2H)，7.57-7.27(br，10H)，7.04(d，1H)，6.41(t，1H)，6.03(d，1H)，4.78(m，1H)，4.25(d，2H)，2.70(s，3H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.90(s，3H)，1.68(m，2H)，1.56(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.39min。
MSMH+630。
實(shí)施例256順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]苯甲酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.051g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入苯甲酰基氯(0.014g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]苯甲酰胺乙酸鹽(0.042g，0.000062mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(t，1H)，8.23(s，1H)，7.91(d，2H)，7.63(d，2H)，7.49(m，3H)，7.38(t，2H)，7.12(d，2H)，7.08(d，2H)，4.78(m，1H)，4.49(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.62min。
MSMH+617。
實(shí)施例257順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-1-苯磺酰胺乙酸鹽將順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.051g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入苯磺?；?0.018g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-1-苯磺酰胺乙酸鹽(0.042g，0.000048mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，8.18(t，1H)，7.79(d，2H)，7.63(m，3H)，7.58(t，2H)，7.26(d，2H)，7.09(d，2H)，7.01(d，2H)，4.78(m，1H)，4.01(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.31min。
MSMH+653。
實(shí)施例258順-N-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-N′-芐基脲乙酸鹽將順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.051g，0.0001mol)溶解于無水吡啶(1mL)，加入異氰酸芐基酯(0.013g，0.0001mol)并將所得溶液室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈0.1M醋酸銨在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-N-[4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-N′-芐基脲乙酸鹽(0.019g，0.000027mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.27(m，7H)，7.13(d，2H)，7.09(d，2H)，6.46(m，2H)，4.78(m，1H)，4.24(d，4H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.49min。
MSMH+646。
制備順-3-{4-[3-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺及其衍生物的方法與制備順-3-{4-[4-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺及其衍生物的方法相同。
實(shí)施例259順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]苯甲酰胺二乙酸鹽a)順-3-{4-[3-(氨基甲基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.38(m，1H)，7.15(m，4H)，6.96(d，1H)，4.78(m，1H)，3.73(s，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.32min。
b)順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]苯甲酰胺二乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(t，1H)，8.23(s，1H)，7.86(d，2H)，7.63(d，2H)，7.48(m，4H)，7.10(m，5H)，4.78(m，1H)，4.49(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.58min。
MSMH+617。
實(shí)施例260順-N1-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-1-苯磺酰胺乙酸鹽
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(m，2H)，7.78(d，2H)，7.62(m，5H)，7.31(m，1H)，7.04(m，5H)，4.78(m，1H)，4.03(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.36min。
MSMH+653。
實(shí)施例261順-N-[3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]-N′-芐基脲乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.63(d，2H)，7.35(t，1H)，7.27-7.04(m，10H)，6.46(m，2H)，4.78(m，1H)，4.25(d，2H)，4.22(d，2H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.44min。
MSMH+646。
實(shí)施例262和實(shí)施例263順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮乙酸鹽反-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮a)2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙酮向含4-溴苯胺(7.42g，0.0431mol)和2-溴苯乙酮(8.58g，0.0431mol)的N，N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液中，滴加N，N-二異丙基乙胺并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物在二氯甲烷(150mL)和水(100mL)之間分配。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物懸浮于乙醚，過濾收集此沉淀并干燥得到2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙酮(10.03g，0.0346mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.06(d，2H)，7.69(t，1H)，7.58(m，2H)，7.20(d，2H)，6.66(d，2H)，6.11(t，1H)，4.68(d，2H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶2)Rf0.39b)2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙醇將2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙酮(3.50g，0.0121mol)的無水甲醇(200mL)溶液冷卻至0℃，并立即加入硼氫化鈉(2.28g，0.0603mol)。將此混合物升溫至室溫同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。通過滴加乙酸停止該反應(yīng)，將該反應(yīng)混合物減壓濃縮并將此殘余物在二氯甲烷(120mL)和水(85mL)之間分配。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙醇(3.49g，0.0117mol)，為黃色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.39(d，2H)，7.33(m，2H)，7.24(t，1H)，7.17(d，2H)，5.81(t，1H)，5.47(d，1H)，4.71(m，1H)，3.18(m，1H)，3.07(m，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶2)Rf0.22c)3-(4-溴苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮將含2-(4-溴苯氨基)-1-苯基-1-乙醇(0.74g，0.00253mol)、N，N-二異丙基乙胺(1.01g，0.00786mol)和N，N-二甲基氨基吡啶(0.092g，0.00076mol)的無水二氯甲烷(32mL)溶液冷卻至0℃，并滴加三光氣(0.38g，0.00127mol)的無水二氯甲烷(8mL)溶液。將該反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液(40mL)、鹽水(30mL)洗滌并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑并將此殘余物通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相，得到3-(4-溴苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮(0.62g，0.00192mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.58(s，4H)，7.47(m，5H)，5.77(m，1H)，4.46(t，1H)，4.01(t，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶2)Rf0.28d)5-苯基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮將3-(4-溴苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮(0.6g，0.00189mol)、乙硼烷頻哪醇酯(0.58g，0.00226mol)、[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.046g，0.000057mol)和醋酸鉀(0.56g，0.0057mol)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到5-苯基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮(0.19g，0.00052mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.69(d，2H)，7.62(d，2H)，7.47(m，5H)，5.77(m，1H)，4.46(t，1H)，4.01(t，1H)，1.27(s，12H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶2)Rf0.19e)順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮乙酸鹽將5-苯基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮(0.085g，0.000233mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.086g，0.000194mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.013g，0.000012mol)和碳酸鈉一水合物(0.060g，0.000485mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮乙酸鹽(0.074g，0.000121mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.79(d，2H)，7.68(d，2H)，7.47(m，5H)，5.82(t，1H)，4.78(m，1H)，4.57(t，1H)，4.09(t，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt12.84min。
MSMH+553。
f)反-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮此化合物通過類似于制備順-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮乙酸鹽的合成途徑來制備。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.79(d，2H)，7.68(d，2H)，7.47(m，5H)，5.82(t，1H)，4.64(m，1H)，4.57(t，1H)，4.09(t，1H)，3.1(br，9H)，2.17(s，3H)，2.05(m，6H)，1.49(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.72min。
MSMH+553。
實(shí)施例264反-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-芐基-1，3-噁唑烷-2-酮二乙酸鹽a)1-(4-溴苯氨基)-3-苯基-2-丙醇將4-溴苯胺(1.75g，0.0102mol)和2，3-環(huán)氧基丙基苯(1.77g，0.0132mol)在甲醇(40mL)中的混合物加熱回流16小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相，得到1-(4-溴苯氨基)-3-苯基-2-丙醇(2.2g，0.00719mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.33(m，7H)，6.50(d，2H)，5.76(t，1H)，4.83(d，1H)，3.82(m，1H)，2.98(m，1H)，2.90(m，1H)，2.78(dd，1H)，2.67(dd，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.29b)5-芐基-3-(4-溴苯基)-1，3-噁唑烷-2-酮將含1-(4-溴苯氨基)-3-苯基-2-丙醇(1.90g，0.00621mol)、N，N-二異丙基乙胺(2.48g，0.0193mol)和N，N-二甲基氨基吡啶(0.152g，0.00124mol)的無水二氯甲烷(64mL)溶液冷卻至0℃，并滴加三光氣(0.92g，0.0031mol)的無水二氯甲烷(16mL)溶液。將該反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液(70mL)、鹽水(60mL)洗滌并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑并將此殘余物通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相，得到5-芐基-3-(4-溴苯基)-1，3-噁唑烷-2-酮(1.25g，0.00377mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.54(d，2H)，7.47(d，2H)，7.27(m，5H)，4.95(m，1H)，4.12(t，1H)，3.78(t，1H)，3.07(d，2H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.37c)5-芐基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮將5-芐基-3-(4-溴苯基)-1，3-噁唑烷-2-酮(1.25g，0.00377mol)、乙硼烷頻哪醇酯(1.15g，0.00452mol)、[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.092g，0.000114mol)和醋酸鉀(1.12g，0.0113mol)在N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到5-芐基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮(1.03g，0.0027mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.65(d，2H)，7.54(d，2H)，7.27(m，5H)，4.95(m，1H)，4.12(t，1H)，3.78(t，1H)，3.07(d，2H)，1.28(s，12H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.25。
d)反-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-芐基-1，3-噁唑烷-2-酮二乙酸鹽將5-芐基-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-噁唑烷-2-酮(0.110g，0.00029mol)、反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.080g，0.000181mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.012g，0.000011mol)和碳酸鈉一水合物(0.056g，0.00045mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-芐基-1，3-噁唑烷-2-酮二乙酸鹽(0.049g，0.000072mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.65(m，4H)，7.32(m，5H)，5.02(m，1H)，4.64(m，1H)，4.19(t，1H)，3.85(t，1H)，3.11(d，2H)，3.1(br，9H)，2.17(s，6H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.49(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt13.13min。
MSMH+567。
實(shí)施例265順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-2-甲基-2-苯基丙酰胺二乙酸鹽將含順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.1g，0.000246mol)、α，α-二甲基苯基乙酸(0.045g，0.000271mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.071g，0.000369mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.0037g，0.000271mol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液攪拌5分鐘。滴加N，N-二異丙基乙胺(0.098g，0.00076mol)并在氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌16小時(shí)。減壓濃縮此反應(yīng)混合物并將殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)-2-甲基-2-苯基丙酰胺二乙酸鹽(0.014g，0.000021mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.29(s，1H)，8.20(s，1H)，7.82(d，2H)，7.55(d，2H)，7.83(m，4H)，7.27(m，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.59(s，6H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt13.59min。
MSMH+553。
實(shí)施例266和實(shí)施例267順-4(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-2-苯基丁酸乙酸鹽順-4(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-3-苯基丁酸乙酸鹽a)1-(4-溴苯基)-3-苯基-2，5-吡咯烷二酮將4-溴苯胺(5.48g，0.0318mol)和苯基琥珀酸酐(5.89g，0.0334mol)的無水苯(80mL)溶液加熱回流1.5小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。向此殘余物中，加入乙酰基氯(60mL)并將此溶液加熱回流1.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過濾收集沉淀，用乙醚洗滌并干燥得到1-(4-溴苯基)-3-苯基-2，5-吡咯烷二酮(8.7g，0.0264mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.72(d，2H)，7.40(m，7H)，4.33(dd，1H)，3.33(dd，1H)，2.94(dd，1H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶4)Rf0.34
b)3-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-2，5-吡咯烷二酮將1-(4-溴苯基)-3-苯基-2，5-吡咯烷二酮(2.00g，0.00602mol)、乙硼烷頻哪醇酯(1.85g，0.00727mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.148g，0.000182mol)和醋酸鉀(1.784g，0.0182mol)在N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶4)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到3-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-2，5吡咯烷二酮(0.78g，0.00207mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.79(d，2H)，7.40(m，7H)，4.33(dd，1H)，3.33(dd，1H)，2.97(dd，1H)，1.31(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶4)Rf0.21c)順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-2-苯基丁酸乙酸鹽，和順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-3-苯基丁酸乙酸鹽將3-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-2，5-吡咯烷二酮(0.35g，0.00093mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.34g，0.000773mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.053g，0.000046mol)和碳酸鈉一水合物(0.24g，0.00193mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(14mL)和水(7mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-2-苯基丁酸乙酸鹽(0.150g，0.000233mol)和順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-3-苯基丁酸乙酸鹽(0.11g，0.000171mol)，都是白色固體。
順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-2-苯基丁酸乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.37(s，1H)，8.21(s，1H)，7.73(d，2H)，7.55(d，2H)，7.25(m，5H)，4.76(m，1H)，4.00(m，1H)，3.12(dd，1H)，2.71(dd，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.54min。
MSMH+583。
順-4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)-4-氧代-3-苯基丁酸乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.46(s，1H)，8.21(s，1H)，7.78(d，2H)，7.54(d，2H)，7.41(d，5H)，7.31(t，2H)，7.24(t，1H)，4.76(m，1H)，4.16(m，1H)，3.08(dd，1H)，2.51(dd，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.11min。
MSMH+583。
實(shí)施例268順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲腈a)2-苯基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]乙腈將(4-溴苯基)(苯基)甲腈(0.604g，0.00222mol)、乙硼烷頻哪醇酯(0.677g，0.00266mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.054g，0.000067mol)和醋酸鉀(0.52g，0.00666mol)在N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(80mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶9)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到2-苯基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]乙腈(0.110g，0.000345mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.67(d，2H)，7.40(m，7H)，5.87(s，1H)，1.31(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.18b)順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲腈將2-苯基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]乙腈(0.120g，0.000376mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.083g，0.000188mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.013g，0.000011mol)和碳酸鈉一水合物(0.058g，0.00047mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到順-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(苯基)甲腈(0.025g，0.0000494mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.70(d，2H)，7.58(d，2H)，7.47(m，4H)，7.38(t，1H)，5.93(s，1H)，4.76(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.95min。
MSMH+507。
實(shí)施例269順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸鹽a)N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-(4-溴苯基)胺將4-溴苯胺(3.9g，0.0227mol)加入到2-氯苯并噁唑(1.16g，0.00755mol)的二甲苯溶液中，并將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱2小時(shí)。將其冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之間分配，將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀，并干燥得到N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-(4-溴苯基)胺(1.48g，0.00512mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.78(s，1H)，7.74(d，2H)，7.57(d，2H)，7.50(m，2H)，7.23(t，1H)，7.16(t，1H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.34b)N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺將N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-(4-溴苯基)胺(0.800g，0.00277mol)、乙硼烷頻哪醇酯(0.84g，0.00332mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.068g，0.000083mol)和醋酸鉀(0.81g，0.0083mol)的混合物在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。讓此混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(100mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.59g，0.00176mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.80(s，1H)，7.78(d，2H)，7.68(d，2H)，7.50(d，2H)，7.23(t，1H)，7.16(t，1H)，1.26(s，12H)TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.29
c)順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸鹽將N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.073g，0.000217mol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.080g，0.000181mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.012g，0.000011mol)和碳酸鈉一水合物(0.056g，0.000453mol)的混合物，在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，在25分鐘內(nèi)，21mL/min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸鹽(0.082g，0.000128mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.95(d，2H)，7.66(d，2H)，7.51(m，2H)，7.25(t，1H)，7.15(t，1H)，4.78(m，1H)，2.5-2.1(br，13H)，2.17(s，3H)，1.91(s，6H)，1.68(m，2H)，1.58(m，2H)，RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.80min。
MSMH+524。
中間體A2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]苯甲醛將2-(4-碘苯氧基)苯甲醛(1.31g，4.03mmol，1當(dāng)量)、PdCl2(dppf)2(0.092g，0.13mmol，0.03當(dāng)量)、乙硼烷頻哪醇酯(1.23g，4.84mmol，1.2當(dāng)量)及醋酸鉀(1.19g，12.1mmol，3.0當(dāng)量)在DMF(15mL)中的混合物，在80℃下加熱5.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(50mL)并將固體通過硅藻土板借助于二氯甲烷(100mL)和Et2O(100mL)濾出。濃縮此濾液得到棕色油狀物，其通過柱色譜在硅膠上純化(用500ml的5％MeOH/二氯甲烷洗脫)得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]苯甲醛，為紅色-棕色油狀物(0.875g，2.70mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 10.30(1H，s)，7.87-7.89(1H，m)，7.69-7.75(3H，m)，7.36-7.38(1H，m)，7.05-7.22(3H，m)及1.29(12H，s)。
實(shí)施例2702-[4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯氧基]乙酰胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.050g，0.17mmol，1.0當(dāng)量)、二噁烷(1.7mL)及氫化鈉(60％，0.010g，0.17mmol，1.0當(dāng)量)的混合物室溫下攪拌10分鐘。加入碘代乙酰胺(0.031g，0.17mmol，1.0當(dāng)量)。該反應(yīng)混合物室溫下攪拌30分鐘，然后在110℃下加熱3.5小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并將所得固體過濾移出，其中借助二氯甲烷(5mL)和EtOAc(5mL)。減壓除去溶劑得到黃色固體，其用乙酸乙酯研磨得到2-[(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)氧基]乙酰胺，為米色固體(0.045g，0.13mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.22(1H，s)，7.60(2H，d)，7.12(2H，d)，5.20-5.25(1H，m)，4.50(2H，s)，2.02-2.10(4H，m)，1.87-1.90(2H，m)，1.68-1.71(2H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.38min。MSMH+353。
實(shí)施例2715-[4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯氧基]-2-呋喃甲酸甲酯將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.107g，0.362mmol，1.0當(dāng)量)、DMSO(0.5mL)、氫化鈉(60％，0.030g，0.72mmol，2.0當(dāng)量)和甲基-5-硝基-2-呋喃甲酸酯(0.062g，0.36mmol，1.0當(dāng)量)在90℃下加熱3小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入到冰水(10mL)，并用3部分二氯甲烷(各50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用5％KOH溶液(50mL)洗滌，并將有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到紅色油狀物，其通過柱色譜在硅膠上純化(用300ml的5％MeOH/二氯甲烷洗脫)得到5-[4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯氧基]-2-呋喃甲酸甲酯，為紅色固體(0.070g，0.17mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.24(1H，s)，7.70-7.74(2H，m)，7.35-7.39(3H，m)，6.9(2H，bs)，6.02(1H，s)，5.22-5.26(1H，m)，3.79(3H，s)，2.01-2.11(4H，m)，1.88-1.91(2H，m)，1.67-1.71(2H，m)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt18.17min。MSMH+420。
實(shí)施例2725-[4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯氧基]-2-呋喃甲酸將5-[4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯氧基]-2-呋喃甲酸甲酯(0.030g，0.072mmol，1當(dāng)量)和氫氧化鈉(0.020g，0.50mmol，7當(dāng)量)在50％ EtOH水(1mL)中的混合物，在80℃下加熱6小時(shí)。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用水(10mL)稀釋。通過加入1M HCl中和此混合物并用兩部分二氯甲烷(各20mL)和兩部分EtOAc(各20mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色油狀物，其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到淡棕色固體(0.009g，0.022mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 13.0(1H，bs)，8.23(1H，s)，7.74(2H，d)，7.35(2H，d)，7.29(1H，s)，6.03(1H，s)，5.21-5.28(1H，m)，2.01-2.11(4H，m)，1.89-1.90(2H，m)，1.68-1.71(2H，m)。RP-HPLC(Hypercil C18，5μm，100，15cm；在15分鐘內(nèi)5％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt6.45min。MSMH+406。
實(shí)施例2731-環(huán)戊基-3-[4-(3-噻吩基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氨基-1-環(huán)戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(0.212g，0.718mmol，1當(dāng)量)、碳酸鉀(0.060g，0.43mmol，0.6當(dāng)量)、銅粉末(0.015g，0.24mmol，0.33當(dāng)量)及3-溴噻吩(0.09mL，0.9mmol，1.3當(dāng)量)在DMF(7.2mL)的混合物在153℃下加熱24小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，濃縮，并將此殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到1-環(huán)戊基-3-[4-(3-噻吩基氧基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為淡棕色固體(0.060g，0.16mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 9.77(1H，s)，8.46(1H，s)，8.41(1H，s)，7.73-7.74(1H，m)，7.57(2H，d，J＝4.5Hz)，7.46-7.48(1H，m)，7.15(1H，d，J＝5.2Hz)，6.96(2H，d，J＝8.6Hz)，5.24-5.30(1H，m)，2.03-2.05(4H，m)，1.89-1.93(2H，m)，1.70-1.72(2H，m)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt18.76min。MSMH+378。
實(shí)施例274順-3-{3-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺單乙酸鹽將順-3-(3-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.107g，0.263mmol，1當(dāng)量)、冰醋酸(0.06mL，1.0mmol，3.8當(dāng)量)、苯并[B]呋喃-2-甲醛(0.1g，0.3mmol，1當(dāng)量)、三乙酰氧基硼氫化鈉(0.212g，1.0mmol，3.8當(dāng)量)及二氯乙烷(2mL)的混合物，室溫下攪拌4.5小時(shí)。加入碳酸氫鈉水溶液，分離有機(jī)層，并將水層用兩部分的二氯甲烷萃取(各10mL)。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色油狀物其通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-3-{3-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺單乙酸鹽，為白色固體(0.017g，0.031mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH8.22(1H，s)，7.51-7.58(2H，m)，7.22-7.28(3H，m)，6.98(1H，s)，6.79-6.84(2H，m)，6.59-6.62(1H，m)，4.76-4.81(1H，m)，4.50(2H，d，J＝5.6Hz)，2.19-2.24(14H，m)，2.05-2.07(2H，m)，1.91(3H，s)，1.60-1.75(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.99min。MSMH+537。
實(shí)施例275順-3-{3-[二(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-3-(3-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.120g，0.296mmol，1當(dāng)量)、糠醛(0.03mL，0.3mmol，1.1當(dāng)量)、冰醋酸(0.07mL，1.1mmol，3.8當(dāng)量)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.314g，1.48mmol，5.0當(dāng)量)在二氯乙烷(2mL)中的混合物，室溫下攪拌60小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)，分離有機(jī)層，并將水層用兩部分的二氯甲烷萃取(各10mL)。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黃色油狀物。通過柱色譜在硅膠上純化(用200ml的5％ MeOH/二氯甲烷，100ml的10％ MeOH/二氯甲烷，和300ml的10∶20∶70％ MeOH/Et3N/二氯甲烷洗脫)得到順-3-{3-[二(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為白色固體(0.051g，0.10mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.22(1H，s)，7.60(2H，s)，7.31-7.35(1H，m)，7.19(1H，s)，7.00(1H，d，J＝8.4Hz)，6.93(1H，d，J＝7.6Hz)，6.39(2H，s)，6.32(2H，s)，4.77-4.80(1H，m)，4.60(4H，s)，2.23-2.39(11H，m)，2.16(3H，s)，2.05-2.07(2H，m)，1.59-1.71(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.52min。MSMH+567。
實(shí)施例276順-N-[2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]三氟甲烷磺酰胺二乙酸鹽向順-3-4-[2-(氨基甲基)苯氧基]苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.018g，0.035mmol，1當(dāng)量)和吡啶(0.4mL)的混合物中，在0℃下在20秒內(nèi)滴加CF3SO2Cl(0.05mL，0.04mmol，1.2當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫并攪拌3小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶劑并將此油狀黃色殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-N-[2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)芐基]三氟甲烷磺酰胺二乙酸鹽(0.004g，0.006mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH8.22(1H，s)，7.61-7.67(3H，m)，7.25-7.30(2H，m)，7.19-7.23(2H，m)，6.96-6.98(1H，m)，4.77-4.81(1H，m)，4.25(2H，s)，2.09-2.54(14H，m)，2.05-2.08(2H，m)，1.91(6H，s)，1.57-1.74(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.15min。MSMH+645。
實(shí)施例277順-2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲醛將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.970g，2.20mmol，1當(dāng)量)、2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯氧基]苯甲醛(0.842g，2.60mmol，1.2當(dāng)量)、四(三苯基膦)鈀(0.186g，0.180mmol，0.08當(dāng)量)、DME(9mL)及碳酸鈉一水合物(0.655g，5.30mmol，2.4當(dāng)量)在水(7mL)中的混合物，在85℃下加熱7小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)，并將此溶液用EtOAc(25mL)萃取。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到淡棕色固體。用乙醚(35mL)研磨得到順-2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲醛，為米白色固體(0.830g，1.62mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 10.42(1H，s)，8.24(1H，s)，7.89(1H，d，J＝7.7Hz)，7.69-7.71(3H，m)，7.30-7.36(1H，m)，7.29(2H，d，J＝6.3Hz)，7.16(1H，d，J＝8.2Hz)，4.79-4.81(1H，m)，2.18-2.55(11H，m)，2.17(3H，s)，2.05-2.09(2H，m)，1.56-1.71(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.56min。MSMH+512。
實(shí)施例278順-3-{3-[2-(1H-2咪唑基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將順-2-(3-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氧基)苯甲醛(0.102g，0.199mmol，1當(dāng)量)、乙二醛(0.12mL，0.99mmol，5當(dāng)量)和碳酸銨(0.078g，0.99mmol，5當(dāng)量)在甲醇(1mL)中的混合物，室溫下攪拌16小時(shí)。再加入乙二醛(0.20mL，1.6mmol，8.3當(dāng)量)和碳酸銨(0.130g，1.66mmol，8.4當(dāng)量)，并將此反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。粗品反應(yīng)混合物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-3-{3-[2-(1H-2-咪唑基)苯氧基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為棕色固體(0.010g，0.018mmol)1H NMR(d6DMSO，400MHz)δH 8.23(1H，s)，8.11-8.13(1H，dd，J＝7.7，1.9Hz)，7.95(1H，s)，7.66(2H，d，J＝8.5Hz)，7.34-7.39(1H，m)，7.23-7.27(3H，m)，7.07-7.19(3H，m)，4.77-4.82(1H，m)，2.16-2.56(11H，m)，2.14(3H，s)，2.05-2.11(2H，m)，1.55-1.71(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.43min。MSMH+550。
實(shí)施例279
順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-苯氨基乙酰胺將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.151g，0.356mmol，1當(dāng)量)、碳酸鉀(0.098g，0.711mmol，2當(dāng)量)及氯乙酰基氯(0.04mL，0.5mmol，1.5當(dāng)量)在DMF(1.5mL)中的混合物，室溫下攪拌20分鐘，然后加入苯胺(0.32mL，3.5mmol，10當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌72小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300，25cm；在20分鐘內(nèi)10％-60％乙腈0.1M醋酸銨，21mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)洗滌，然后用二氯甲烷(25mL)萃取。有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-苯氨基乙酰胺，為黃色固體(0.010g，0.017mmol)1H NMR(d6DMS0，400MHz)δH 9.30(1H，s)，8.35-8.38(1H，m)，8.21(1H，s)，7.21-7.23(2H，m)，7.12-7.16(2H，m)，6.64-6.66(3H，m)，6.31-6.34(1H，m)，4.77-4.81(1H，m)，3.90(2H，d，J＝6.0Hz)，3.82(3H，s)，2.21-2.51(11H，m)，2.16(3H，s)，2.06-2.08(2H，m)，1.55-1.70(4H，m)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.37min。MSMH+570。
實(shí)施例280(2S)-3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}丙烷-1，2-二醇室溫下，在氮?dú)夥障孪?-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)的溶液中加入(R)-(+)-縮水甘油(0.05M在異丙醇中，2.8mL，0.00014mol)。此混合物在80℃下攪拌3小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶7∶91)，接著用氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(2∶10∶88)作為流動(dòng)相洗脫，得到(2S)-3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}丙烷-1，2-二醇(0.023g，0.000053mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.31(s，1H)，7.64(d，2H)，7.38(m，2H)，7.15(m，5H)，5.90(br，2H)，5.60(m，1H)，3.97(m，3H)，3.88(m，1H)，3.75(m，2H)，3.61(m，1H)，2.80(m，2H)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt8.6min。
MSMH+433實(shí)施例281(2R)-3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}丙烷-1，2-二醇實(shí)驗(yàn)方法類似于(2S)-3-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基丙烷-1，2-二醇的合成，其中使用(S)-(-)-縮水甘油。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.39(m，2H)，7.15(m，5H)，5.65(br，3H)，4.00(m，3H)，3.90(m，1H)，3.75(m，2H)，3.62(m，1H)，2.85(m，2H)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt8.76min。
MSMH+433實(shí)施例2824-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯a)1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯將氧化锍三甲基碘(2.62g，0.012mol)和氫化鈉(0.44g，0.011mol)在無水二甲基亞砜(30mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘。將該反應(yīng)混合物冷卻至10℃，并加入存在于無水二甲基亞砜(10mL)中的4-氧代-1-哌啶甲酸(2.0g，0.010mol)。將該反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1.5小時(shí)。此混合物倒入到飽和氯化銨水溶液(60mL)中。水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×60mL)和鹽水(1×50mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯(2.12g，0.0099mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ3.74(br，2H)，3.44(m，2H)，2.69(s，2H)，1.80(m，2H)，1.47(s，9H)，1.46(m，2H)TLC(乙酸乙酯/二氯甲烷＝20∶80)Rf0.574-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯室溫下，在氮?dú)夥障孪?-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.4g，0.0011mol)在異丙醇(40mL)中的混合物中，加入1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯(0.27g，0.0013mol)。此混合物在80℃下攪拌3.5小時(shí)。再加入1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯(0.13g，0.00061mol)并將此混合物在80℃下攪拌7小時(shí)。再加入1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯(0.13g，0.00061mol)并將此混合物在60℃下攪拌18小時(shí)，然后在80℃攪拌8小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物懸浮于水(50mL)中并將水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用甲醇/二氯甲烷(5∶95)，接著用甲醇/二氯甲烷(10∶90)作為流動(dòng)相，得到4-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.243g，0.000425mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.43(t，2H)，7.17(m，3H)，7.10(d，2H)，5.78(m，1H)，5.48(br，2H)，4.34(br，2H)，4.20(br，2H)，3.89(br，2H)，3.18(br，2H)，2.91(br，2H)，1.60(br，2H)，(s，9H)。
RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250×4.6mm；在10分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的25％-100％，1mL/min)Rt10.7min。
MSMH+572
實(shí)施例2834-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-哌啶醇在0℃下在氮?dú)夥障?，?-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.090g，0.00016mol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，緩慢加入20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10mL)。將此混合物升溫至室溫并攪拌4小時(shí)。減壓除去溶劑。在0℃下加入5N氫氧化鈉水溶液至pH為11。水相用二氯甲烷(2×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×60mL)和鹽水(1×60mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到4-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-哌啶醇(0.045g，0.000096mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.68(d，2H)，7.42(t，2H)，7.11(m，3H)，7.00(d，2H)，5.64(m，1H)，5.43(br，2H)，4.02(m，4H)，3.28(br，1H)，3.10(m，4H)，2.67(s，2H)，1.67(m，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.5min。
MSMH+472實(shí)施例2844-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-1-甲基-4-哌啶醇將4-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-4-哌啶醇(0.035g，0.000074mol)和甲醛(0.006mL，37％在水中，0.000082mol)在二氯乙烷(4mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.022g，0.000104mol)加入到此混合物中并在室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。加入分子篩(0.05g，3A，4-8目)和甲醛(0.006mL，37％在水中，0.000082mol)并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑，并將此殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersil HS C18，8μm，250×21.1mm；在25分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到4-(3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基甲基)-1-甲基-4-哌啶醇(0.020g，0.000041mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.63(s，1H)，7.69(d，2H)，7.42(t，2H)，7.17(m，5H)，5.42(m，1H)，3.88(m，2H)，3.67(m，2H)，2.37(m，2H)，2.25(m，2H)，2.14(s，3H)，1.90(s，2H)，1.50(m，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.5min。
MSMH+486總方法將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.06g，0.00017mol，1當(dāng)量)、相應(yīng)的氯乙酰胺(0.0005mol，3當(dāng)量)及N，N-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol，1.5當(dāng)量)在乙腈(2.5mL)中的混合物，在75℃氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。將此混合物倒入水中(10mL)，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水相。合并的有機(jī)萃取物用水(1×10mL)和鹽水(1×10mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；5％-100％在25分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺，21mL/min)得到相應(yīng)的酰胺。
實(shí)施例285N-甲基-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺a)氯乙酰胺N-甲基-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.35(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，3H)，7.08(d，2H)，5.80(br，2H)，5.60(m，1H)，4.00(m，4H)，3.37(s，2H)，2.85(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.2min。
MSMH+430實(shí)施例286N，N-二甲基-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺b)氯乙酰胺N，N-二甲基-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.33(s，1H)，7.65(d，2H)，7.41(m，2H)，7.16(m，3H)，7.08(d，2H)，5.86(br，2H)，5.67(m，1H)，4.15(m，2H)，3.90(m，2H)，3.57(s，2H)，3.00(s，3H)，2.90(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.3min。
MSMH+444實(shí)施例287N-異丙基-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺c)氯乙酰胺N-異丙基-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.40(m，2H)，7.18(m，3H)，7.09(d，2H)，6.90(br，1H)，5.66(m，3H)，4.11(m，1H)，3.99(m，4H)，3.39(s，2H)，1.19(d，6H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.8min。
MSMH+458實(shí)施例288N-(3-羥基丙基)-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺d)氯乙酰胺N-(3-羥基丙基)-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.31(s，1H)，7.67(d，2H)，7.40(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(d，2H)，5.99(br，2H)，5.62(m，1H)，3.95(m，4H)，3.78(m，2H)，3.63(m，2H)，3.40(s，2H)，1.71(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.9min。
MSMH+474實(shí)施例2892-[(2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙?；?氨基]乙酸乙酯(4037150)e)氯乙酰胺2-[(2-氯乙?；?氨基]乙酸乙酯1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.66(d，2H)，7.65(br，1H)，7.40(m，2H)，7.18(m，3H)，7.09(d，2H)，5.67(m，1H)，5.56(br，2H)，4.23(m，2H)，4.10(m，4H)，4.00(m，2H)，3.47(s，2H)，1.29(t，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，I mL/min)Rt9.9min。
MSMH+502實(shí)施例290N-芐基-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺f)氯乙酰胺N-芐基-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.63(d，2H)，7.40(m，2H)，7.33(m，5H)，7.16(m，5H)，5.72(m，1H)，4.49(d，2H)，3.97(m，4H)，3.44(s，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.7min。
MSMH+506實(shí)施例291N，N-甲氧基甲基-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺g)氯乙酰胺N，N-甲氧基甲基-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，3H)，7.08(d，2H)，5.71(m，1H)，5.48(br，2H)，4.16(m，2H)，3.92(m，2H)，3.72(s，3H)，3.69(s，2H)，3.18(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.5min。
MSMH+460實(shí)施例2922-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-(4-嗎啉基)-1-乙酮h)氯乙酰胺2-氯-1-(4-嗎啉基)-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，3H)，7.08(d，2H)，5.71(m，3H)，4.13(m，2H)，3.93(m，2H)，3.69(br，4H)，3.60(br，4H)，3.51(s，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.3min。
MSMH+486實(shí)施例293N-(3-甲基-5-異噁唑基)-2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}乙酰胺
i)氯乙酰胺N-(3-甲基-5-異噁唑基)-2-氯乙酰胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ10.10(br，1H)，8.37(s，1H)，7.66(d，2H)，7.40(m，2H)，7.19(m，3H)，7.09(d，2H)，6.26(s，1H)，5.65(m，1H)，4.07(m，4H)，3.54(s，2H)，2.28(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，I mL/min)Rt10.3min。
MSMH+497實(shí)施例2941-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(1H-4-咪唑基)-1-乙酮將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)、2-(1H 4-咪唑基)乙酸鈉(0.0026g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(1H-4-咪唑基)-1-乙酮(0.018g，0.00004mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.90(br，1H)，8.27(s，1H)，7.71(d，2H)，7.53(s，1H)，7.42(m，2H)，7.19(m，5H)，6.92(br，1H)，5.73(m，1H)，4.74(m，1H)，4.61(m，1H)，4.42(m，2H)，3.42(s，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+467
實(shí)施例2951-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(1H-4-咪唑基)-1-丙酮將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.10g，0.00028mol)、3-(1H-4-咪唑基)丙酸(0.050g，0.00035mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0068g，0.00035mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.068g，0.00053mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.038g，0.00028mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(13mL)的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(1H-4-咪唑基)-1-丙酮(0.040g，0.00008mol)。
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.96(s，1H)，7.77(br，1H)，7.64(d，2H)，7.40(m，2H)，7.17(m，3H)，7.08(m，2H)，6.90(br，1H)，5.78(m，1H)，5.56(br，2H)，4.76(m，1H)，4.57(m，3H)，2.98(m，2H)，2.55(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+481總方法向1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol，1當(dāng)量)和碳酸鉀(0.039g，0.00028mol，2當(dāng)量)在無水N，N-二甲基甲酰胺中的混合物中，室溫下加入氯乙酰基氯(0.031g，0.00028mol，2當(dāng)量)。將此混合物攪拌10分鐘，之后加入此胺(0.0014mol，10當(dāng)量)。根據(jù)所用的胺，將此混合物室溫下攪拌-個(gè)半小時(shí)至兩天。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到相應(yīng)的乙酰胺。
實(shí)施例2961-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(2-羥基乙基)氨基]-1-乙酮a)胺2-氨基-1-乙醇1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.15(m，3H)，7.08(m，2H)，5.83(m，1H)，5.57(br，2H)，4.82(m，1H)，4.65(m，3H)，3.71(m，2H)，3.45(m，2H)，2.92(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+460實(shí)施例2971-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(2-甲氧基乙基)氨基]-1-乙酮b)胺2-甲氧基-1-乙胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.83(m，1H)，5.54(br，2H)，4.81(m，1H)，4.64(m，2H)，4.56(m，1H)，3.55(t，2H)，3.41(s，2H)，3.37(s，3H)，2.88(t，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。MSMH+474實(shí)施例2981-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(3-羥基丙基)氨基]-1-乙酮
c)胺3-氨基-1-丙醇1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.86(m，1H)，5.54(br，2H)，4.81(m，1H)，4.64(m，3H)，3.87(m，2H)，3.48(m，2H)，3.01(m，2H)，1.83(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+474實(shí)施例2991-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(2，3-二羥基丙基)氨基]-1-乙酮d)胺3-氨基-1，2-丙烷二醇1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.72(d，2H)，7.46(m，2H)，7.16(m，5H)，5.73(m，1H)，4.67(m，1H)，4.59(m，2H)，4.37(m，2H)，3.53(m，1H)，3.30(m，1H)，3.22(m，2H)，2.59(m，1H)，2.45(m，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，ImL/min)Rt8.6min。
MSMH+490實(shí)施例3001-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(四氫-2-呋喃基甲基)氨基]-1-乙酮e)胺四氫-2-呋喃基甲胺1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.81(m，1H)，5.54(br，2H)，4.80(m，1H)，4.64(m，2H)，4.57(m，1H)，4.05(m，1H)，3.87(m，1H)，3.76(m，1H)，3.42(m，2H)，2.83(m，1H)，2.74(m，1H)，2.00(m，1H)，1.89(m，2H)，1.57(m，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，ImL/min)Rt9.3min。
MSMH+500實(shí)施例301f)胺2-哌啶子基-1-乙胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(2-哌啶子基乙基)氨基]-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.70(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，5H)，5.73(m，1H)，4.60(m，2H)，4.36(m，2H)，3.24(d，2H)，2.60(m，2H)，2.36(m，6H)，1.49(m，4H)，1.36(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.4min。
MSMH+527實(shí)施例302g)胺N，N，N-三甲基-1，2-乙二胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基]-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.70(d，2H)，7.44(m，2H)，7.17(m，5H)，5.75(m，1H)，4.70(m，2H)，4.40(m，2H)，3.22(d，2H)，2.75(br，2H)，2.61(m，2H)，2.47(s，6H)，2.29(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.4min。
MSMH+501實(shí)施例303h)胺N，N-二甲基-1，2-乙二胺
1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-1-乙酮乙酸鹽1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.33(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，3H)，7.11(m，2H)，5.81(br，3H)，4.81(m，1H)，4.59(m，3H)，3.38(s，2H)，2.89(t，2H)，2.68(t，2H)，2.43(s，6H)，2.05(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+487實(shí)施例304i)胺N-甲基-N-(1-甲基-4-哌啶基)胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[甲基(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.76(m，1H)，5.58(br，2H)，4.87(m，1H)，4.79(m，1H)，4.62(m，1H)，4.55(m，1H)，3.27(m，2H)，2.97(br，2H)，2.51(br，1H)，2.35(s，3H)，2.31(s，3H)，2.04(br，2H)，1.79(br，2H)，1.65(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.1min。
MSMH+527實(shí)施例305j)胺2-(4-嗎啉基)-1-乙胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(2-(4-嗎啉基)乙基)氨基]-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.40(m，2H)，7.19(m，3H)，7.09(m，2H)，5.86(m，1H)，5.50(br，2H)，4.82(m，1H)，4.67(m，3H)，3.77(m，4H)，3.50(s，2H)，2.92(t，2H)，2.66(t，2H)，2.57(br，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.1min。
MSMH+529實(shí)施例306k)胺3-(4-嗎啉基)-1-丙胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[(3-(4-嗎啉基)丙基)氨基]-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.68(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.85(m，1H)，5.54(br，2H)，4.81(m，1H)，4.64(m，3H)，3.74(m，4H)，3.40(s，2H)，2.83(br，2H)，2.52(br，6H)，1.80(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.9min。
MSMH+543實(shí)施例3071)胺3-(1H-1-咪唑基)-1-丙胺1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-{[3-(1H-1-咪唑基)丙基]氨基}-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.65(d，2H)，7.40(m，3H)，7.15(m，3H)，7.08(m，3H)，6.93(s，1H)，5.82(m，1H)，5.62(br，2H)，4.75(m，1H)，4.62(m，3H)，4.07(t，2H)，3.27(s，2H)，2.58(t，2H)，1.97(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+524實(shí)施例308m)胺1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮1-{3-[(2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-氧代乙基)氨基]丙基}-2-吡咯烷酮
1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.82(m，1H)，5.54(br，2H)，4.81(m，1H)，4.64(m，3H)，3.42(m，6H)，2.79(t，2H)，2.42(t，2H)，2.07(m，2H)，1.86(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+541實(shí)施例309n)胺4-哌啶醇1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(4-羥基哌啶子基)-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.67(d，2H)，7.38(m，2H)，7.18(m，3H)，7.09(m，2H)，5.77(m，1H)，5.57(br，2H)，4.90(m，1H)，4.78(m，1H)，4.63(m，1H)，4.56(m，1H)，3.73(br，1H)，3.18(s，2H)，2.91(br，2H)，2.38(br，2H)，1.95(br，2H)，1.62(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.9min。
MSMH+500實(shí)施例310o)胺4-哌啶基甲醇1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[4-(羥基甲基)哌啶子基]-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，3H)，7.10(m，2H)，5.78(m，1H)，5.64(br，2H)，4.89(m，1H)，4.81(m，1H)，4.62(m，1H)，4.55(m，1H)，3.49(m，2H)，3.13(s，2H)，2.97(m，2H)，2.10(m，2H)，1.74(m，2H)，1.49(br，1H)，1.30(m，2H)。
RP-HPLC(De1ta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+514實(shí)施例311p)胺1-(2-甲氧基乙基)哌嗪1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[4-(2-甲氧基乙基)哌啶子基]-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.71(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，5H)，5.69(m，1H)，4.73(m，2H)，4.38(m，2H)，3.39(t，2H)，3.30(s，2H)，3.21(s，3H)，3.05(m，2H)，2.43(br，8H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+543實(shí)施例312q)胺嗎啉1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(4-嗎啉基)-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.70(d，2H)，7.42(m，2H)，7.18(m，5H)，5.70(m，1H)，4.73(m，2H)，4.40(m，2H)，3.57(m，4H)，3.08(m，2H)，2.44(m，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+486實(shí)施例313r)胺1-甲基哌嗪1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.70(d，2H)，7.44(m，2H)，7.16(m，5H)，5.70(m，1H)，4.70(m，2H)，4.35(m，2H)，3.29(s，2H)，3.06(m，2H)，2.45(br，6H)，2.16(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+499實(shí)施例314s)胺4-哌啶子基哌啶1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-[4-(哌啶-1-基)哌啶子基]-1-乙酮1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.70(d，2H)，7.44(m，2H)，7.18(m，5H)，5.70(m，1H)，4.73(m，2H)，4.40(m，1H)，4.30(m，1H)，2.88(m，4H)，2.38(br，4H)，2.13(m，1H)，2.00(m，2H)，1.61(br，2H)，1.43(br，6H)，1.34(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.2min。
MSMH+567實(shí)施例315t)胺1H-咪唑1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(1H-1-咪唑基)-1-乙酮1H NMR(氯仿-d，400MHz)δ8.31(s，1H)，7.87(br，1H)，7.65(d，2H)，7.41(m，2H)，7.18(m，4H)，7.10(m，3H)，5.90(br，2H)，5.80(m，1H)，4.82(m，1H)，4.72(m，3H)，4.59(m，1H)，4.47(m，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.2min。
MSMH+467實(shí)施例3161-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)、2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙酸(0.0033g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N-(2-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁基酯。將此固體溶解于二氯甲烷(2mL)并在0℃下將2 5％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(4mL)緩慢加入到該反應(yīng)中。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。減壓除去溶劑。在0℃下加入5N氫氧化鈉水溶液至pH為11。水相用二氯甲烷(2×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×60mL)和鹽水(1×60mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(二甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽(0.022g，0.00004mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.69(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，5H)，5.75(m，1H)，4.70(m，1H)，4.60(m，1H)，4.40(m，1H)，4.35(m，1H)，3.18(s，2H)，2.25(s，3H)，1.90(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，I mL/min)Rt8.9min。
MSMH+430實(shí)施例3171-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(二甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)、2-(二甲基氨基)乙酸(0.0018g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-2-(二甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽(0.022g，0.00004mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.69(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，5H)，5.69(m，1H)，4.70(m，2H)，4.40(m，2H)，2.97(m，2H)，2.20(s，6H)，1.89(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+444實(shí)施例3181-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(二乙基氨基)-1-丙酮將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)、3-(二乙基氨基)丙酸鹽酸鹽(0.0032g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′-二異丙基乙胺(0.068g，0.00053mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-(二乙基氨基)-1-丙酮(0.025g，0.00005mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(m，2H)，7.14(m，5H)，5.70(m，1H)，4.67(m，2H)，4.37(m，2H)，2.66(m，2H)，2.45(m，4H)，2.21(m，2H)，0.95(m，6H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.3min。
MSMH+486實(shí)施例3191-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-(甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.054g，0.00014mol)、2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙酸(0.0033g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N-(2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁基酯。將此固體溶解于二氯甲烷(2mL)并在0℃下將存在于二氯甲烷(4mL)的25％三氟乙酸緩慢加入到該反應(yīng)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。減壓除去溶劑。在0℃下向此殘余物中加入5N氫氧化鈉水溶液至pH為11。水相用二氯甲烷(2×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(1×60mL)和鹽水(1×60mL)洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-(甲基氨基)-1-乙酮乙酸鹽(0.010g，0.00002mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.67(d，2H)，7.45(m，2H)，7.13(m，5H)，4.94(br，1H)，4.53(br，1H)，3.99(br，1H)，3.36(m，2H)，3.21(br，1H)，2.85(br 1H)，2.26(s，3H)，2.10(br，1H)，1.96(br，3H)，1.85(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.1min。
MSMH+458實(shí)施例320 1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-(二甲基氨基)-1-乙酮將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.054g，0.00014mol)、2-(二甲基氨基)乙酸(0.0018g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′-二異丙基乙胺(0.033g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-(二甲基氨基)-1-乙酮(0.031g，0.00007mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，5H)，4.97(br，1H)，4.50(br，1H)，4.22(br，1H)，3.25(br，1H)，3.12(m，2H)，2.83(br，1H)，2.21(s，6H)，2.16(br，1H)，1.90(br，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.3min。
MSMH+472實(shí)施例3211-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-(二乙基氨基)-1-丙酮乙酸鹽將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.054g，0.00014mol)、3-(二乙基氨基)丙酸鹽酸鹽(0.0032g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0034g，0.000175mol)、N，N′二異丙基乙胺(0.068g，0.00053mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-(二乙基氨基)-1-丙酮乙酸鹽(0.038g，0.00006mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.15(m，5H)，4.97(br，1H)，4.52(br，1H)，4.03(br，1H)，3.27(br，1H)，2.80(br，1H)，2.66(m，2H)，2.49(m，8H)，2.11(br，1H)，1.95(br，3H)，1.87(s，3H)，0.93(m，6H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.7min。
MSMH+514總方法向3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00013mol，1當(dāng)量)和碳酸鉀(0.036g，0.00026mol，2當(dāng)量)在無水N，N-二甲基甲酰胺(3mL)的混合物中，室溫下加入氯乙?；?0.028g，0.00026mol，2當(dāng)量)。此混合物攪拌10分鐘，之后加入胺(0.0013mol，10當(dāng)量)。將此混合物攪拌室溫下3小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到相應(yīng)的乙酰胺。
實(shí)施例322a)胺嗎啉
1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}2-(4-嗎啉基)-1-乙酮乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.44(m，2H)，7.16(m，5H)，4.99(m，1H)，4.47(br，1H)，4.19(br，1H)，3.58(m，4H)，3.25(m，2H)，3.11(m，1H)，2.83(br，1H)，2.43(m，4H)，2.25(br，1H)，1.99(br，3H)，1.89(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.7min。
MSMH+514實(shí)施例323b)胺1-甲基哌嗪1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-乙酮乙酸鹽1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.44(m，2H)，7.16(m，5H)，4.99(m，1H)，4.47(br，1H)，4.19(br，1H)，3.29(m，2H)，3.22(m，2H)，3.05(m，1H)，2.80(br，1H)，2.33(br，6H)，2.22(br，1H)，2.13(s，3H)，1.94(br，3H)，1.89(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.3min。
MSMH+527實(shí)施例324和實(shí)施例325順式和反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸a)順式和反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯將用酸洗滌的鋅粉(0.350g，0.00535mol)和氯化亞銅(0.053g，0.000535mol)的無水四氫呋喃(10mL)懸浮液加熱回流30分鐘。中斷加熱并立即加入部分(1mL)的2-溴乙酸叔丁基酯(0.261g，0.00134mol)的四氫呋喃(10mL)溶液。將此混合物攪拌5分鐘，然后滴加剩余的混合物。將此混合物加熱回流30分鐘。將此混合物冷卻至室溫，并在5分鐘內(nèi)滴加4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-環(huán)己酮(0.200g，0.00053mol)的無水四氫呋喃(5mL)溶液。將此混合物攪拌室溫下4小時(shí)。過濾除去未反應(yīng)的鋅，用乙醚(3×5mL)洗滌。此濾液用水(3×5mL)和鹽水(10mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。粗品物質(zhì)1∶1的順式反式比例。此異構(gòu)體在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行分離，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)洗脫。真空下除去溶劑得到低極性的反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯，為白色固體(0.092g，0.00018mol)和高極性的順式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯，為白色固體(0.049g，0.000096mol)。
順式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.66(d，2H)，7.43(t，2H)，7.11-7.20(m，5H)，4.70-4.84(m，1H)，2.36(s，2H)，1.89-2.12(m，4H)，1.51-1.67(m，2H)，1.43(s，9H)，1.37-1.42(m，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt19.31min.；MSMH+516。
反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.23(s，1H)，7.66(d，2H)，7.43(t，2H)，7.11-7.20(m，5H)，4.45-4.61(m，1H)，2.36(s，2H)，1.78-1.85(m，2H)，1.64-1.71(m，2H)，1.43(s，9H)，1.36-1.45(m，4H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，I mL/min)Rt19.64min.；MSMH+516。
順式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1羥基環(huán)己基}乙酸順式2-(4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯(0.092g，0.000178mol)與20％三氟乙酸的二氯甲烷(10mL)溶液在室溫、氮?dú)夥障路磻?yīng)45分鐘。真空下除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯(25mL)并用水(3×10mL)洗滌。此溶液用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑。殘余物懸浮于水(25mL)并凍干得到順式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸，為白色粉末(0.078g，0.000170mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.32(s，1H)，7.66(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，4.62-4.67(m，1H)，2.39(s，2H)，2.27-2.43(m，2H)，1.55-1.90(m，6H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.65min。
MSMH+460。
反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸叔丁基酯(0.049g，0.000096mol)與20％三氟乙酸二氯甲烷(10mL)溶液在室溫在氮?dú)夥障路磻?yīng)45分鐘。真空下除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯(25mL)，并用水(3×10mL)洗滌。此溶液用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。殘余物懸浮于水(25mL)并凍干，得到反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸，為白色粉末(0.038g，0.000083mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.36(s，1H)，7.67(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.22(m，5H)，4.72-4.79(m，1H)，1.99(s，2H)，1.91-2.09(m，6H)，1.61-1.65(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt13.46min。
MSMH+460。
實(shí)施例326反式1-{3-[(芐基氧基)甲基]環(huán)丁基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.69(d，2H)，7.44(t，2H)，7.37-7.39(m，4H)，7.29-7.31(m，1H)，7.11-7.21(m，5H)，5.42-5.47(m，1H)，4.57(s，1H)，3.63(d，2H)，2.76-2.81(m，2H)，2.60-2.70(m，1H)，2.28-2.34(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt21.92min。
MSMH+478。
實(shí)施例327[3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-(羥基甲基)環(huán)丁基]甲醇a)3-[(甲基磺?；?氧基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯將3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯(0.268g，0.00116mol)的吡啶(7mL)溶液冷卻至0℃。滴加甲磺酰氯(0.11mL，0.160g，0.00140mol)，保持溫度低于2℃。將此混合物攪拌4小時(shí)，然后倒入冰水(20mL)中并用乙醚(2×10mL)除去。合并的有機(jī)層用水(3×10mL)和鹽水(10mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑得到3-[(甲基磺?；?氧基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯(0.302g，0.00102mol)，為黃色油狀物1H NMR(CDCl3400MHz)5.08-5.11(m，1H)，4.23(q，4H)，3.01(s，3H)，2.98-3.03(m，2H)，2.81-2.86(m，2H)，1.27(t，6H)。
b)3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.129g，0.00042mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液與3-[(甲基磺?；?氧基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯(0.150g，0.00051mmol)和碳酸銫(0.166g，0.00051mmol)在70℃下反應(yīng)5天。將該反應(yīng)混合物倒入水中(20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(2×10mL)和鹽水(10mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)洗脫。真空下除去溶劑得到3-[4-氨基-3-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯(0.060g，0.00012mol)，為黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.67(d，2H)，7.44(t，2H)，7.12-7.21(m，5H)，5.38-5.42(m，1H)，4.16-4.28(m，4H)，3.14-3.17(m，2H)，2.96-3.00(m，2H)，1.17-1.28(m，6H)。
c)[3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-(羥基甲基)環(huán)丁基]甲醇向3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1，1-環(huán)丁烷二甲酸二乙酯(0.045g，0.000089mol)的四氫呋喃(10mL)溶液中，加入氫化鋰鋁(0.010g，0.000270mol)。室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)，之后加入水(1.0mL)。將此混合物過濾通過Celite521墊過濾。真空下除去此濾液中的溶劑。殘余物在水(15mL)和乙酸乙酯(15mL)之間分配。水層用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑。殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300A，25cm；5分鐘內(nèi)40％恒溶劑成分，然后在30分鐘內(nèi)40％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，21ml/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到[3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-(羥基甲基)環(huán)丁基]甲醇，為白色固體(0.007g，0.000017mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.22(s，1H)，7.68(d，2H)，7.44(t，2H)，7.11-7.20(m，5H)，5.28-5.34(m，1H)，4.76(t，1H)，4.58(t，1H)，3.55(d，2H)3.47(d，2H)，2.46-2.55(m，2H)，2.24-2.31(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.81min。
MSMH+418。
實(shí)施例328-334合成芳基烷基順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺類物質(zhì)的總方法用上述合成芳基烷基順-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺類物質(zhì)的方法進(jìn)行合成這些化合物。 實(shí)施例335N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-5-氯-2-噻吩磺酰胺馬來酸鹽用上述順和反-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的方法合成此化合物，為馬來酸鹽HPLC-RT12.39min，(流速1mL/min，λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝606.1。
實(shí)施例3361-(4-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}哌啶子基)-2-(二甲基氨基)-1-乙酮a).4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁基酯(20g，100.4mmol)溶解于甲醇(250mL)，然后冷卻至0℃，并在10分鐘內(nèi)加入硼氫化鈉(3.8g，100.4mmol)。將該反應(yīng)混合物由0℃升溫至室溫。4小時(shí)后，將該反應(yīng)減壓濃縮并將剩余的漿狀物溶解于3∶1二氯甲烷/異丙醇(400mL)。有機(jī)層用1N氫氧化鈉水溶液(200mL)洗滌。水層再用3∶1二氯甲烷/異丙醇(3×150mL)萃取。將此有機(jī)層用鹽水(400mL)洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮得到4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯，為淡黃色漿狀物(20g，100.4mmol)。
1H NMR(d6-DMSO)δ1.21-1.28(m，2H)，1.38(s，9H)，1.65-1.69(m，2H)，2.94-2.96(m，2H)，3.59-3.68(m，3H)，4.68(d，1H)。
b).4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(17.3g，66.33mmol)懸浮于四氫呋喃(800mL)，并加入4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(20g，99.5mmol)的四氫呋喃(300mL)溶液和三苯基膦(34.8g，132.66mmol)。將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃并滴加偶氮二甲酸二乙酯(23.1g，132.66mmol)。室溫下放置2小時(shí)后，該反應(yīng)減壓濃縮得到粗品4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯，為桔黃色油狀物(69.44g)。HPLC-RT14.29min.，19％，(流速1mL/min λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)。
c).3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽將粗品4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1哌啶甲酸叔丁基酯(69.4g，156.30mmol)溶解于丙酮(900mL)，并緩慢滴加6N鹽酸(300mL)。然后在45℃下加熱該反應(yīng)，得到沉淀。1.5小時(shí)后，通過真空過濾收集沉淀，用最小量的丙酮洗滌并凍干，得到3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽，為黃色固體(16.61g，39.8mmol)。
HPLC-RT6.16min，(流速1mL/min λ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300A，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝345.0。
d).1-[4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-(二甲基氨基)-1-乙酮將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽(3g，7.19mmol)懸浮于二氯甲烷(350mL)，然后在4天內(nèi)加入N，N-二甲基甘氨酸(1.02g，9.88mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(1.08g，7.91mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.89g，9.89mmol)及N-乙基-N-異丙基胺(5.06g，39.2mmol)。該反應(yīng)用二氯甲烷稀釋(300mL)，再用水(150mL)和鹽水(150mL)洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮得到1-[4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-(二甲基氨基)-1-乙酮，為黃褐色固體(2.74g，6.39mmol)。HPLC-RT7.40min，(流速1mL/minλ＝254nm梯度在20分鐘內(nèi)5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝430.3。
e).1-(4-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}哌啶子基)-2-(二甲基氨基)-1-乙酮將1-[4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-(二甲基氨基)-1-乙酮(100mg，0.233mmol)溶解于乙二醇二甲基醚(10mL)和水(1.5mL)。加入N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(103mg，0.291mmol)、四(三苯基膦)鈀(13mg，0.051mmol)和碳酸鈉(62mg，0.583mmol)并將該反應(yīng)在80℃下加熱24小時(shí)。減壓濃縮該反應(yīng)。剩余的殘余物在二氯甲烷(100mL)和最小量的水之間分配。將有機(jī)層減壓濃縮并用乙醚(25mL)研磨，得到黃色-棕色固體(172mg)。通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min.，λ＝254nm梯度15％至35％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在40分鐘內(nèi)；Deltapak C18，300，15μm，40×100mm柱)得到1-(4-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}哌啶子基)-2-(二甲基氨基)-1-乙酮，為米白色固體(64mg，0.121mmol)。HPLC-RT7.27min，(流速1mL/min λ＝254nm梯度5％至95％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在20分鐘內(nèi)；Waters Symmetry Shield C18，3.5μm，50×2.1mm柱)；m/z(MH+)＝530.2。
實(shí)施例3371-(4-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}哌啶子基)-2-(二甲基氨基)-1-乙酮HPLC-RT10.09min，(流速1mL/min λ＝254nm梯度5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在20分鐘內(nèi)；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝546.2。
實(shí)施例338-364a)烷基化的典型方法將氫化鈉(60％，0.138g，3.45mmol)加入到3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.750g，2.87mmol)的DMF(9mL)懸浮液中，并將此混合物室溫下攪拌1小時(shí)，直到獲得均勻的溶液。加入烷基溴(4.03mmol)，并將此混合物室溫下在氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)。減壓下除去溶劑并將所得固體依次用水(25mL)和乙醚/石油醚(4∶1，50mL)研磨得到產(chǎn)物。
b)Suzuki偶聯(lián)的典型方法將芳基碘(2.28mmol)、N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(1.08g，3.19mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.105g，0.091mmol)、碳酸氫鈉(0.478g，5.69mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(12mL)和水(2mL)中的懸浮液，在90℃下在氮?dú)夥障录訜?4小時(shí)。減壓下除去溶劑，并將此殘余物在飽和氯化鈉(50mL)和乙酸乙酯(30mL)之間分配。分離水層并再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/庚烷(9∶1)作為流動(dòng)相洗脫，得到該被保護(hù)的苯胺產(chǎn)物。
c)脫保護(hù)的典型方法向裝有氯化氫的二噁烷溶液(4M，6mL)和乙醇(6mL)的50mL燒瓶中，加入該被保護(hù)的苯胺(1.05mmol)。將空氣冷凝器固定在該燒瓶上，并將此混合物在50℃氮?dú)夥障聰嚢琛?6小時(shí)后，該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。殘余物在鹽酸(0.5M，30mL)和乙醚(20mL)之間分配。分離有機(jī)層并傾析掉。將水層用飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)堿化，并將所得混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的乙酸乙酯萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到該苯胺產(chǎn)物。
d)磺?；牡湫头椒▽⒃摫桨?1.0mmol)加入到2，3-二氯苯磺?；?0.263g，1.07mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.005g，0.041mmol)的吡啶(5mL)溶液中，并將所得溶液在氮?dú)夥障聰嚢?天。加入甲醇/二氯甲烷(1∶19，100mL)并將所得混合物用半飽和的碳酸氫鈉水溶液(3×10mL)萃取。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到該磺酰胺產(chǎn)物。
e)酯交換的典型方法將此乙基酯(2.76mmol)加入到三乙胺(3.8mL，28mmol)和甲醇(30mL)的溶液中。將回流冷凝器安裝到該反應(yīng)器上，并將此反應(yīng)混合物在75℃下在氮?dú)夥障录訜帷?4小時(shí)后，將反應(yīng)冷卻至室溫，減壓下除去溶劑得到該甲基酯產(chǎn)物。
f)酯交換的另一種方法將乙基酯(0.279mmol)和甲醇鈉(0.015g，0.279mmol)的甲醇(2mL)溶液在密封的試管中在75℃下加熱2小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫。加入甲醇/二氯甲烷(1∶19，100mL)，并將所得混合物用半飽和碳酸氫鈉水溶液(3×10mL)萃取。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到此甲基酯產(chǎn)物。
g)酰胺形成的典型方法在可再密封的Schlenk燒瓶中，將該酯(0.056mmol)懸浮于某種胺溶劑(1mL)中。用聚四氟乙烯螺旋蓋密封此燒瓶，并在80℃下加熱2天。將該反應(yīng)冷卻至室溫得到酰胺產(chǎn)物。
h)伯酰胺形成的典型方法在可密封的Schlenk燒瓶中裝入該甲基酯(0.086mmol)。加入用氨(1mL)飽和的甲醇溶液，并密封此Schlenk燒瓶，并在90℃下加熱24小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫，并減壓除去溶劑得到此伯酰胺產(chǎn)物。
i)形成脲的典型方法將苯胺(0.152mmol)溶解于吡啶(1mL)，并將此溶液冷卻至-20℃。加入間甲苯基異氰酸酯(0.143mmol)，并讓此溶液自然升溫至室溫。6小時(shí)后，減壓濃縮產(chǎn)物得到此脲產(chǎn)物。
實(shí)施例3382-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化(用溴乙酸乙酯作為此烷基溴)、Suzuki偶聯(lián)、脫保護(hù)和磺酰基化的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersilHS C18，250×21mm柱，Rt12.4-13.9min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯，為白色固體(0.011g，0.020mmol)RP-HP(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)R 9.78min。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(s，1H)，8.25(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.43(m，3H)，5.21(s，2H)，4.15(qt，2H)，1.20(t，3H)；MSMH+539。
實(shí)施例339N1-{4-[4-氨基-1-(2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-2，3-二氯-1-苯磺酰胺用酰胺形成的典型方法用嗎啉處理2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯。通過制備HPLC純化(25至100％CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.3-9.8min)得到N1-{4-[4-氨基-1-(2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為白色固體(0.005g，0.009mmol)RP-HP(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用HypersilHS C18，250×4.6mm柱)Rt8.22min。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.82(s，1H)，8.21(s，1H)，7.96(d，1H)，7.94(m，1H)，7.53(t，1H)，7.39(m，3H)，6.97(br，2H)，5.32(s，2H)，3.5(m，8H)；MSMH+580。
實(shí)施例340N1-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺用酰胺形成的典型方法，用1-甲基哌嗪處理2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯。通過制備HPLC純化(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.4-7.0min)得到N1-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為白色固體(0.005g，0.009mmol)RP-HP(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt6.83min。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.96(d，1H)，7.88(d，1H)，7.50(t，1H)，7.36(m，3H)，5.31(s，2H)，3.45(m，4H)，2.50(m，4H)，2.30(s，3H)，MSMH+593。
實(shí)施例341N1-[(1R，2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基]-N1-甲基-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺將(+)-偽麻黃堿(0.037g，0.224mmol)的乙二醇二甲基醚(0.75mL)的溶液用正丁基鋰的溶液(2.5M在己烷中，0.060mL，0.150mmol)處理。20分鐘后，通過套管將此溶液轉(zhuǎn)移至2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(0.040g，0.074mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(0.75mL)溶液中。所得溶液在50℃下攪拌15小時(shí)。然后冷卻至室溫并在甲醇/二氯甲烷(1∶9，50mL)和水(15mL)之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HSC18，250×21mm柱，Rt11.88-12.65min)得到N1-[(1R，2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基]-N1-甲基-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色固體(0.010g，0.015mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用HypersilHS C18，250×4.6mm柱)Rt9.63min；MS(MH)+658。
實(shí)施例342N1-[(1S，2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基]-N1-甲基-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺用與上述類似的方法，將(+)-麻黃堿鹽酸鹽(0.061g，0.302mmol)和2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(0.054g，0.10mmol)混合。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt11.4-11.9min)得到N1-[(1S，2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基]-N1-甲基-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色固體(0.010g，0.015mmol)RP-HPLC(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt9.36min；MS(M-H)-656。
實(shí)施例343N1-[4-(4-氨基-1-{2-[(2S)-2-(羥基甲基)四氫-1H-1-吡咯基]-2-氧代乙基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-2，3-二氯-1-苯磺酰胺用與上述類似的方法，將(R)-吡咯烷甲醇(0.038mL，0.385mmol)和2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(0.060g，0.111mmol)混合。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.45-9.90min)得到N1-[4-(4-氨基-1-{2-[(2S)-2-(羥基甲基)四氫-1H-1-吡咯基]-2-氧代乙基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為米白色固體(0.024g，0.040mmol)RP-HPLC(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.05min；MS(M-H)-592。
實(shí)施例344N1-[4-(4-氨基-1-{2-[(2R)-2-(羥基甲基)四氫-1H-1-吡咯基]-2-氧代乙基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-2，3-二氯-1-苯磺酰胺用與上述類似的方法，將(S)-吡咯烷甲醇(0.038mL，0.385mmol)和2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(0.060g，0.111mmol)混合。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.15-9.70min)得到N1-[4-(4-氨基-1-{2-[(2R)-2-(羥基甲基)四氫-1H-1-吡咯基]-2-氧代乙基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基}-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，為米白色固體(0.022g，0.037mmol)RP-HPLC(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt7.98min；MS(M-H)-592。
實(shí)施例3452-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯用酯交換的典型方法，2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯(1.49g，2.76mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的甲基酯。一部分粗品物質(zhì)通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt11.0-12.3min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯，為白色固體(0.016g，0.030mmol)RP-HP(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt9.22min；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(s，1H)，8.25(s，1H)，7.96(m，2H)，7.60(m，1H)，7.56(m，3H)，5.23(s，2H)，3.68(s，3H)；MSMH+525。
實(shí)施例3462-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸在可再密封的Schlenk燒瓶中，將2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.030g，0.057mmol)溶解于甲醇/水(1∶1，1mL)。用聚四氟乙烯螺旋蓋密封此燒瓶，并在90℃下加熱。2天后，將此反應(yīng)冷卻至室溫。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.3-6.7min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸，為白色固體(0.006g，0.030mmol)RP-HP(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt6.42min；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.13(s，1H)，7.97(d，1H)，7.62(d，1H)，7.36(t，1H)，7.19(m，3H)，7.15(d，1H)，4.59(s，2H)；MS(M-H)-509。
實(shí)施例347N1-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺酰胺形成的典型方法用于2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.035g，0.067mmol)與N，N-二甲基亞乙基二胺(1mL)的反應(yīng)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.85-7.45min)得到N1-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色固體(0.008g，0.014mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.20(br，1H)，8.22(m，2H)，7.96(d，1H)，7.80(d，1H)，7.45(t，1H)，7.31(m，3H)，6.90(br，2H)，4.96(s，2H)，3.40(m，2H)，2.75(m，2H)，2.07(s，6H)；MS(M-H)-579。
實(shí)施例348N1-[2-(二乙基氨基)乙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺酰胺形成的典型方法用于2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.035g，0.067mmol)與N，N-二乙基亞乙基二胺(1mL)的反應(yīng)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.12-7.98min)得到N1-[2-(二乙基氨基)乙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色固體(0.017g，0.028mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.22(s，1H)，8.12(br，1H)，7.96(d，1H)，7.78(d，1H)，7.44(t，1H)，7.31(m，3H)；6.95(br，2H)，4.96(s，2H)，3.35(m，2H)，2.82(m，2H)，2.50(m，4H)，1.05(t，6H)；MS(M-H)-607。
實(shí)施例3492-(二甲基氨基)乙基2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸酯酰胺形成的典型方法用于2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.035g，0.067mmol)與N，N-二甲基乙醇胺(1mL)的反應(yīng)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.50-8.07min)得到2-(二甲基氨基)乙基2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸酯，為米白色固體(0.008g，0.014mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.96(d，1H)，7.83(d，1H)，7.48(t，1H)，7.32(m，3H)，5.23(s，2H)，4.29(t，2H)，2.86(m，2H)，2.39(s，6H)；MS(M-H)-580。
實(shí)施例350
N1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺酰胺形成的典型方法用于2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.025g，0.048mmol)與3-(二甲基氨基)丙基胺(1mL)的反應(yīng)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.7-7.3min)得到N1-[3(二甲基氨基)丙基]-2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色粉末(0.015g，0.025mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(m，1H)，7.96(m，1H)，7.76(m，1H)，7.43(t，1H)，7.30(m，2H)，4.93(s，2H)，3.12(m，2H)，2.82(m，2H)，2.50(s，6H)，1.73(m，2H)；MS(M-H)-593。
實(shí)施例3512-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺伯酰胺形成的典型方法用來將2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸甲酯(0.045g，0.086mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的伯酰胺。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.9-8.5min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酰胺，為米白色粉末(0.015g，0.029mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.83(br，2H)，8.84(br，1H)，7.93(s，1H)，7.82(s，1H)，7.80(s，1H)，7.62(s，1H)，7.50(m，2H)，7.36(m，1H)；3.87(s，2H)；MS(M-H)-508。
實(shí)施例3522-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化(用溴乙酸乙酯作為此烷基溴)、Suzuki偶聯(lián)、脫保護(hù)和脲形成的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HSC18，250×21mm柱，Rt12.1-13.5min)得到2-(4-氨基-3-{3氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-17吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯，為黃色粉末(0.015g，0.032mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(br，1H)，8.73(br，1H)，8.38(t，1H)，8.26(s，1H)，7.48(m，2H)，7.32(s，1H)，7.25(d，1H)，7.19(t，1H)，6.82(d，1H)，5.23(s，2H)，4.17(qt，2H)，2.30(s，3H)，1.21(t，3H)；MS(M-H)-462。
實(shí)施例353N-{4-[4-氨基-1-(2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基)-N″-(3-甲基苯基)脲用酯交換的典型方法，將2-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯(0.025g，0.054mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的甲基酯。將此產(chǎn)物溶解于嗎啉(1mL)并將此溶液在50℃下在密封的試管中加熱2天。將該反應(yīng)冷卻至室溫，濃縮，并通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.3-10.2min)得到N-{4-[4-氨基-1-(2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-N″-(3-甲基苯基)脲，為黃色固體(0.009g，0.018mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(s，1H)，8.72(s，1H)，8.37(t，1H)，8.23(s，1H)，7.45(m，2H)，7.33(t，1H)，7.27(m，1H)，7.19(t，1H)，6.83(d，1H)，5.34(s，2H)，3.5(m，8H)，2.30(s，3H)；MS(M-H)-503。
實(shí)施例354N-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N″-(3-甲基苯基)脲使用與上述類似的方法，不同的是用1-甲基哌嗪(1mL)代替嗎啉作為溶劑，接著通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.1-7.8min)得到N-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N″-(3-甲基苯基)脲，為米白色固體(0.008g，0.015mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.07(s，1H)，8.72(s，1H)，8.37(t，1H)，8.22(s，1H)，7.45(m，2H)，7.32(s，1H)，7.25(m，1H)，7.19(t，1H)，6.90(br，2H)，6.83(d，1H)，5.33(s，2H)，3.39(m，4H)，2.40(m，4H)，2.30s，3H)；MS(M-H)-516。
實(shí)施例3552-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化(用乙基2-溴丙酸酯作為此烷基溴)，Suzuki偶聯(lián)，脫保護(hù)和磺?；牡湫头椒āＭㄟ^制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt10.1-11.0min)得到2-[4氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸乙酯(0.016g，0.029mmol)，為灰色固體1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(br，1H)，8.24(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)；7.41(m，3H)，7.0(br，1H)，5.61(qt，1H)，4.10(qt，2H)，1.73(d，3H)，1.11(t，3H)；MS(M-H)-551。
實(shí)施例3562-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸甲酯(4032811)
用酯交換的典型方法將2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸乙酯(0.400g，0.723mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的甲基酯。通過制備HPLC純化部分此物質(zhì)(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt12.4-12.9min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸甲酯(0.008g，0.015mmol)，為灰色固體1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(s，1H)，8.24(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.40(m，3H)，4.10(m，1H)，3.62(s，3H)，1.73(d，3H)；MS(MH)+539。
實(shí)施例3572-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酰胺用伯酰胺形成的典型方法將2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸甲酯(0.040g，0.074mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的伯酰胺。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.1-9.6min)得到2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酰胺(0.015g，0.029mmol)，為白色粉末1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.82(s，1H)，8.22(s，1H)，7.98(s，1H)，7.96(s，1H)，7.56(t，1H)，7.42(m，3H)，7.31(br，1H)，7.21(br，1H)，5.34(qt，1H)，1.71(d，3H)；MS(MH)+524。
實(shí)施例3582-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化(用2-溴丙酸乙基酯作為此烷基溴)，Suzuki偶聯(lián)，脫保護(hù)和脲形成的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt13.3-14.3min)得到2-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酸乙酯，為白色固體(0.022g，0.046mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.06(s，1H)，8.73(s，1H)，8.37(t，1H)，8.25(s，1H)，7.46(m，2H)，7.32(s，1H)，7.25(m，1H)，7.19(t，1H)，6.83(d，1H)，5.63(qt，1H)，4.12(qt，2H)，2.30(s，3H)，1.76(d，3H)，1.15(t，3H)；MS(M-H)-476。
實(shí)施例3592-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺按順序進(jìn)行烷基化(用2-溴丙酸乙基酯作為此烷基溴)、Suzuki偶聯(lián)、脫保護(hù)的典型方法、酯交換的另一種方法和伯酰胺形成和脲形成的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.1-10.1min)得到2-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺，為灰色固體(0.010g，0.022mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.08(s，1H)，8.38(s，1H)，8.37(t，1H)，8.23(s，1H)，7.46(m，2H)，7.33(m，2H)，7.24(m，2H)，7.12(d，1H)，6.97(br，2H)，6.82(d，1H)，5.35(qt，1H)，2.30(s，3H)，1.75(d，3H)；MS(MH)+449。
實(shí)施例3604-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化(用4-溴丁酸乙酯作為此烷基溴)，Suzuki偶聯(lián)，脫保護(hù)和磺?；牡湫头椒āＭㄟ^制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ HypersilHS C18，250×21mm柱，Rt12.8-13.8min)得到4-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸乙酯(0.010g，0.018mmol)，為米白色固體1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.83(s，1H)，8.23(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.40(m，3H)，6.95(m，2H)，4.35(t，2H)，3.97(qt，2H)，2.30(t，2H)，2.08(m，2H)，1.12(t，3H)；MS(M-H)-565。
實(shí)施例3614-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸甲酯按順序進(jìn)行烷基化(用4-溴丁酸乙酯作為此烷基溴)、Suzuki偶聯(lián)、脫保護(hù)的典型方法，酯交換的另一種方法和磺?；牡湫头椒āＭㄟ^制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt11.7-12.2min)得到4-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸甲酯，為黃色固體(0.015g，0.027mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.84(br，1H)，8.23(s，1H)，7.95(m，2H)，7.52(m，1H)，7.40(m，3H)，4.35(t，2H)，3.52(s，3H)，2.32(t，2H)，2.09(m，2H)；MS(MH)+553。
實(shí)施例3624-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酰胺用伯酰胺形成的典型方法將4-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸甲酯(0.026g，0.047mmol)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的伯酰胺。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.0-9.0min)得到4-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酰胺，為白色固體(0.007g，0.013mmol)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.82(s，1H)，8.24(s，1H)，7.97(s，1H)，7.95(s，1H)，7.54(t，1H)，7.45(m，3H)，7.24(br，1H)，6.93(br，2H)，6.73(br，1H)，4.31(t，2H)，2.05(m，4H)；MS(M-H)-536。
實(shí)施例3634-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丁酸乙酯(4032812)按順序進(jìn)行烷基化(用4-溴丁酸乙酯作為此烷基溴)，Suzuki偶聯(lián)，脫保護(hù)和脲形成的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HSC18，250×21mm柱，Rt12.6-13.6min)得到4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丁酸乙酯，為米白色粉末(0.015g，0.030mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.06(s，1H)，8.72(s，1H)，8.36(t，1H)，8.24(s，1H)，7.47(m，2H)，7.32(s，1H)，7.22(m，1H)，7.19(t，1H)，6.82(d，1H)，4.37(t，3H)，3.99(qt，3H)，2.34(t，2H)，2.30(s，3H)，2.11(m，2H)，1.13(t，3H)；RP-HPLC(25至100％ CH3CN，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt10.00min。
實(shí)施例3644-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丁酰胺按順序進(jìn)行烷基化(用4-溴丁酸乙酯作為烷基溴)、Suzuki偶聯(lián)、脫保護(hù)的典型方法，酯交換的另一種方法和伯酰胺形成和脲形成按的典型方法。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.4-9.1min)得到4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丁酰胺，為白色固體(0.010g，0.022mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.08(s，1H)，8.73(s，1H)，8.38(t，1H)，8.25(s，1H)，7.47(m，2H)，7.32(s，1H)，7.25(m，2H)，7.19(m，1H)，6.83(d，1H)，6.75(s，1H)，4.34(t，2H)，2.30(s，3H)，2.05(m，4H)；MS(MH)+463。
實(shí)施例3652-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-5-(4-甲基哌嗪-1-基)芐腈將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.172g，0.66mmol)、氫化鈉(60％，0.030g，0.75mmol)、2，5-二氟芐腈(0.105g，0.75mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)的懸浮液在100℃下加熱24小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物在二氯甲烷(50mL)和水(10mL)之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。
將一部分此物質(zhì)(0.045g，0.118mmol)和碳酸銫(0.115g，0.353mmol)懸浮于1-甲基哌嗪(1mL)，并將此化合物在110℃下在密封試管中加熱20小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物用鹽酸(1M，10mL)酸化，并將水相用乙醚(10mL)萃取。傾析有機(jī)相，并將此水相用碳酸鈉水溶液(3M，10mL)堿化。水相用二氯甲烷(3×15mL)萃取，合并的有機(jī)餾份用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓濃縮。
此物質(zhì)進(jìn)行Suzuki偶聯(lián)，用典型方法，不同的是用N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺代替N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.0-8.6min)得到2-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-5-(4-甲基哌嗪-1-基)芐腈，為灰色固體(0.009g，0.017mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.93(s，1H)，8.29(s，1H)，7.98(d，2H)，7.78(d，2H)，7.73(d，1H)，7.52(m，3H)，7.44(m，1H)，7.26(t，1H)，7.17(t，1H)，3.24(m，4H)，2.45(m，4H)，2.28(s，3H)；MS(MH)+543。
實(shí)施例3662-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}丙酸乙酯按順序進(jìn)行烷基化的典型方法(用2-溴丙酸乙酯作為此烷基溴)和Suzuki偶聯(lián)的典型方法(不同的是用N-(1，3-苯并噻唑-2-基)-N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺代替N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HSC18，250×21mm柱，Rt14.4-14.9min)得到2-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基)-3-氟苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}丙酸乙酯，為米白色固體(0.022g，0.046mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.52(s，1H)，8.82(t，1H)，8.26(s，1H)，7.85(d，1H)，7.66(d，1H)，7.55(m，2H)，7.36(t，1H)，7.22(t，1H)，5.65(qt，1H)，4.14(qt，2H)，1.77(d，3H)，1.14(t，3H)；MS(MH)+478。
實(shí)施例367順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺向4-溴-2-氟苯胺(1.00g，5.26mmol)的甲苯(25mL)溶液中加入2-氯苯并噁唑(0.66mL，5.79mmol)。將此紫色溶液加熱回流30分鐘，然后在100℃下加熱17小時(shí)。將所得白色混懸液/紫色溶液冷卻至室溫并過濾此沉淀。此濾餅用5個(gè)2mL每部分的庚烷洗滌得到N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(1.480g，92％)，為淡紫色粉末。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)，在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝12.87分鐘，97％；m/z 307(MH+)。
N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺向4-溴-2-氟苯胺(1.00g，5.26mmol)的甲苯(25mL)溶液中加入2-氯苯并噻唑(0.75mL，5.79mmol)。將此紫色溶液在110-150℃在可再密封的試管中加熱66小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得棕色溶液濃縮得到紫色固體，其用庚烷研磨得到N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺(1.699g，99％)，為淡紫色粉末。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)，在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％ CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝13.82分鐘，95％；m/z325(MH+)。
N2-(4-溴苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺使用的方式從4-溴苯胺(1.00g，5.81mmol)制備N2-(4-溴苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺。得到淡紫色粉末(0.867g，49％)。RP-HPLC(10分鐘，25-100％乙腈的0.1N醋酸銨溶液，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝13.82min，100％；m/z 307(MH+)。
N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺向N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(1.480g，4.819mmol)的二甲基甲酰胺(15mL)溶液中在氮?dú)夥障录尤腚p(頻哪醇合)乙硼烷(1.468g，5.781mmol)、醋酸鉀(1.419g，14.45mmol)和[1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.119g，0.146mmol)。將此紫色溶液在80℃下攪拌18小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得深棕色混合物真空濃縮得到暗棕色固體。此物質(zhì)用二氯甲烷研磨，過濾，并濃縮此濾液得到暗棕色油狀物。通過急驟色譜在硅膠上純化(用30％乙酸乙酯/庚烷洗脫)得到2.28g的黃色固體。此物質(zhì)用庚烷研磨并收集此固體得到N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.961g，56％)，為白色粉末。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)，在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝13.80分鐘，88％；m/z 355(MH+)。
N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似于用于N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由N2-(4-溴-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺(1.699g，5.258mmol)制備N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺。形成此化合物，為米白色粉末(0.825g，42％)。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)，在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝14.48分鐘，90％；m/z371(MH+)。
N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似于用于N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由N2-(4-溴苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺(0.909g，2.98mmol)制備N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺。形成此化合物，為米白色粉末(0.321g，31％)。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用HypersilHSC18，250×4.6mm柱)tr＝13.82min.，92％；m/z 351(MH+)。
實(shí)施例367順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺向順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.150g，0.340mmol)在乙二醇二甲基醚(3mL)和水(1.5mL)的溶液中，在氮?dú)夥障录尤隢2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.151g，0.425mmol)、四(三苯基膦)鈀(0)(0.020mg，0.017mmol)及碳酸鈉一水合物(0.105mg，0.850mmol)。此溶液在83℃下攪拌19小時(shí)。將所得黃色混合物真空濃縮得到黃色油狀物。通過制備RP-HPLC純化(在20分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，21mL/min，用8m Hypersil HS C18，250×21mm柱，tr＝5.7-8.1min.)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺，為米白色固體(0.046g，25％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.65(s，1H)，8.49(m，1H)，8.25(s，1H)，7.53(d，2H)，7.48(d，2H)，7.26(t，1H)，7.20(t，1H)，4.80(m，1H)，3.51-2.50(m，11H)，2.33-2.32(m，4H)，2.09-2.06(m，2H)，1.80-1.40(m，3H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝6.95min.，99％；m/z 542(MH+)。
實(shí)施例368順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.227mmol)和N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷2-基)苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺(0.105g，0.283mmol)，制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺。形成此化合物，為米白色粉末(0.051g，41％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.51(s，1H)，8.80(m，1H)，8.24(s，1H)，7.85(d，1H)，7.65(d，1H)，7.51(m，2H)，7.36(t，1H)，7.20(t，1H)，4.82(m，1H)，3.51-2.25(m，14H)，2.15-2.10(m，2H)，1.80-1.50(m，4H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.63min.，100％；m/z 558(MH+)。
實(shí)施例369順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.227mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺(0.100g，0.283mmol)，制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺。形成此化合物，為米白色粉末(0.035g，28％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.71(s，1H)，8.23(s，1H)，7.98(d，2H)，7.84(d，1H)，7.65(d，3H)，7.35(t，1H)，7.19(t，1H)，4.80(m，1H)，3.50(m，1H)，2.67-2.09(m，15H)，1.71-1.57(m，4H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.47min.，100％；m/z 540(MH+)。
實(shí)施例370反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.036g，0.082mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.034g，0.10mmol)，制備反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成此化合物，為米白色粉末(0.021g，50％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.86(s，1H)，8.23(s，1H)，7.93(d，2H)，7.66(d，2H)，7.51(t，1H)，7.25(t，1H)，7.16(t，1H)，4.65(m，1H)，3.51(m，1H)，2.67-1.91(m，17H)，1.49-1.46(m，2H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％ CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.17min.，100％；m/z524(MH+)。
實(shí)施例371反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺以類似于用于此順-異構(gòu)體的方式，由反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(0.100g，0.227mmol)和N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.151g，0.425mmol)，制備反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成此化合物，為白色粉末(0.053g，43％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.63(s，1H)，8.45(m，1H)，8.24(s，1H)，7.55-7.48(m，4H)，7.25(t，1H)，7.17(t，1H)，4.65(m，1H)，3.36(m，1H)，3.31-1.93(m，16H)，1.46-1.23(m，3H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝6.73min.，99％；m/z 542(MH+)。
實(shí)施例372反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺以類似于用于此順-異構(gòu)體的方式，由反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(0.100g，0.227mmol)和N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1，3-苯并噻唑-2-胺(0.105g，0.283mmol)，制備反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噻唑-2-胺。形成此化合物，為白色粉末(0.052g，41％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.51(s，1H)，8.79(m，1H)，8.24(s，1H)，7.85(d，1H)，7.66(d，1H)，7.51(m，2H)，7.36(t，1H)，7.20(t，1H)，4.66(m，1H)，3.69(m，1H)，2.89-1.94(m，17H)，1.50-1.4 (m，2H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用HypersilHS C18，250×4.6mm柱)tr＝6.30min.，99％；m/z 558(MH+)。
實(shí)施例373順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺在0℃下，將1，1′-硫羰基二-2(1H)-吡啶酮(0.086g，0.369mmol)加入到順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.150g，0.369mmol)的吡啶(7mL)溶液中，并將此混合物在0℃下攪拌1小時(shí)。所得桔黃色溶液在二氯甲烷(10mL)和水(10mL)之間分配。分離有機(jī)層并用0.5N HCl(10mL)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。將2-氨基-間甲酚(0.045g，0.369mmol)加入到所得桔黃色固體和甲苯(10mL)的懸浮液中，并將此混合物在80℃下加熱1小時(shí)。加入1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(0.114g，0.554mmol)并將該反應(yīng)混合物在80℃下再加熱18小時(shí)。將所得桔黃色棕色溶液冷卻至室溫并濃縮得到淡棕色玻璃狀固體。通過制備HPLC純化(在20分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，tr＝8.1-10.3min.)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺，為米白色固體(0.024g，12％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.81(s，1H)，8.24(s，1H)，7.96(d，2H)，7.66(d，2H)，7.33(d，1H)，7.06(m，2H)，4.80(m，1H)，3.391(m，1H)，2.67-2.10(m，18H)，1.71-1.60(m，4H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.57min.，99％；m/z 538(MH+)。
實(shí)施例374順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.246mmol)和2-氨基-4-氯苯酚(0.035g，0.246mmol)，制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成此化合物，為淡黃色固體(0.020g，15％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.03(s，1H)，8.24(s，1H)，7.92(d，2H)，7.67(d，2H)，7.56(m，2H)，7.20(m，1H)，7.16(t，1H)，4.81(m，1H)，3.41-1.60(m，20H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.83min.，99％；m/z 558(MH+)實(shí)施例375順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.057g，0.140mmol)和2-氨基-對(duì)甲酚(0.017g，0.140mmol)，制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成此化合物，為米白色固體(0.010g，13％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.81(s，1H)，8.23(s，1H)，7.93(d，2H)，7.66(d，2H)，7.38(d，1H)，7.30(s，1H)，6.96(d，1H)，4.80(m，1H)，2.60-2.07(m，12H)，2.39(s，3H)，2.15(s，3H)，1.71-1.59(m，5H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝7.48min.，90％；m/z 538(MH+)。
實(shí)施例376順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺以類似于用于順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺的方式，由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.246mmol)和6-氨基-2，4-二甲苯酚(0.034g，0.246mmol)，制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成此化合物，為米白色固體(0.031g，23％)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.85(s，1H)，8.23(s，1H)，7.93(d，2H)，7.65(d，2H)，7.11(s，1H)，6.80(s，1H)，4.80(m，1H)，2.60-2.17(m，12H)，2.41(s，3H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.71-1.59(m，5H)；RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)tr＝8.00min.，93％；m/z 552(MH+)。
實(shí)施例377N2-[4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-5-氯-2-噻吩磺酰胺用上述方法，由N1-4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基苯胺(100mg，0.236mmol)制備此化合物，得到N2-[4-(4-氨基-1-{4-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶基]}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯基]-5-氯-2-噻吩磺酰胺(51mg)；RP-HPLC條件10至90％CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中，緩沖至pH 4.5，在20分鐘內(nèi)，2mL/min，用WatersSymmetry C18，300，5μm，250×4.6mm柱Rt11.219min.，98.5％和m/z(MH+)605.2。
實(shí)施例378-383合成順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的脲和磺酰胺類物質(zhì)的總方法這些類似物由順-3-{4-[氨基(苯基)甲基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.10mmol)用上述方法制備，得到下列實(shí)施例 分析RP-HPLC條件10至90％CH3CN在0.1N醋酸銨水溶液中，緩沖至pH 4.5，在20分鐘內(nèi)，2mL/min，用Waters Symmetry C18，5μm，300，250×4.6mm柱。
實(shí)施例384反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-N′-(3-甲基苯基)脲將含反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(850mg，1.93mmol)、N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)芐基]氨基甲酸叔丁基酯(1.25當(dāng)量，812mg，2.41mmol)、四-(三苯基膦)鈀(135mg)和碳酸鈉(2.5當(dāng)量，511mg，4.83mmol)的在脫氣水(10mL)和DME(30mL)中的混合物，加熱并在85℃下攪拌16小時(shí)。減壓除去溶劑得到棕色泡沫，其在硅膠上通過柱色譜純化，用10％甲醇和存在于二氯甲烷中的1％氫氧化銨作為洗脫劑。形成反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)氨基甲酸叔丁基酯，為米白色泡沫(800mg，80％)。
將N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)氨基甲酸叔丁基酯(800mg)的TFA(4mL)和二氯甲烷(4mL)溶液，室溫下攪拌2小時(shí)。真空下除去溶劑并將此油狀殘余物用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化并將水層用二氯甲烷(3×20mL)洗滌。濃縮水層并加入DMF(20mL)。過濾移出鹽并真空下除去DMF。殘余物在硅膠上通過柱色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇作為洗脫劑得到3-[4-(氨基甲基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，為黃色固體(70mg，11％)。
將間甲苯基異氰酸酯(1.1當(dāng)量，13.7mg，0.1mmol)加入到3-[4-(氨基甲基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(35mg，0.083mmol)的吡啶(0.5mL)溶液中，然后攪拌2天。將該反應(yīng)混合物純化，用質(zhì)量驅(qū)動(dòng)的制備RP-HPLC(Micromass/Gilson，Hypersil BDS C18，5μm，100×21.2mm柱；0-100％乙腈和0.05M醋酸銨，緩沖至pH 4.5，在12.5分鐘內(nèi)，25mL/min)得到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-N′-(3-甲基苯基)脲(17mg，37％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.46(2H，m)，2.05(4H，m)，2.18(2H，m)，2.25(3H，s)，2.33(4H，m)，2.45-2.53(8H，m)，4.38(2H，br d)，4.65(1H，m)，6.52(1H，t)，6.66(1H，d)，7.10(1H，t)，7.19(1H，br d)，7.26(1H，br s)，7.46(2H，d)，7.63(2H，d)，8.23(1H，s)和8.51(1H，s)和m/z(MH+)554.2。
實(shí)施例385反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-N′-(3-甲氧基苯基)脲用實(shí)施例240所述的相同的方法和用量來制備反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-N′-(3-甲氧基苯基)脲(17mg，36％)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.46(2H，m)，2.05(4H，m)，2.18(2H，m)，2.35(4H，m)，2.45-2.53(8H，m)，3.70(3H，s)，4.38(2H，br d)，4.65(1H，m)，6.49(1H，m)，6.67(1H，m)，6.90(1H，br d)，7.12(1H，t)，7.17(1H，m)，7.46(2H，d)，7.63(2H，d)，8.23(1H，s)和8.62(1H，s)，m/z(MH+)570.2。
實(shí)施例386順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺2，2-二甲基-3-苯基丙腈將N-異丙基環(huán)己基胺(2.8g，19.72mmol)的無水四氫呋喃(25mL)溶液，在-78℃下，通過在15分鐘內(nèi)滴加1.6M正丁基鋰己烷溶液(12.23mL，19.72mmol)進(jìn)行處理。將該反應(yīng)溶液在-78℃下攪拌10分鐘。此溶液由無色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。將異丁腈(1.36g，19.72mmol)加入到該反應(yīng)溶液中，并將該反應(yīng)混合物在-78℃下再攪拌10分鐘。在-78℃下在氮?dú)夥障聦⒋巳芤鹤⑷氲狡S基氯(2.62g，20.71mmol)的無水四氫呋喃溶液中。將此紅色/棕色反應(yīng)溶液在-78℃下攪拌1小時(shí)。然后移出此干冰/丙酮浴，并將此溶液室溫下攪拌5小時(shí)。該反應(yīng)溶液用飽和氯化銨水溶液(10mL)驟冷。將乙酸乙酯(25mL)加入到此驟冷后的反應(yīng)溶液中。分層，并將水層用乙酸乙酯(150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)得到3.18g的粗品。粗品物質(zhì)在2N鹽酸溶液和乙酸乙酯之間分配。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到2.18g(69％)2，2-二甲基-3-苯基丙腈。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.369-7.333(m，2H)，7.309-7.270(m，3H)，2.832(s，2H)，1.294(s，6H)。將此化合物不經(jīng)進(jìn)一步分析用于接下來的反應(yīng)中。
2，2-二甲基-3-苯基丙酸將2，2-二甲基-3-苯基丙腈(1.0g，6.28mmol)的乙二醇(5mL)溶液用固體氫氧化鉀(1.06g，18.84mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在196℃在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。真空下蒸餾除去乙二醇。將1N氫氧化鈉溶液(25mL)和乙酸乙酯(15mL)加入到此棕色殘余物中。分層，并將水層用乙酸乙酯(375mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)得到0.856g(76％)的2，2-二甲基-3-苯基丙酸。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.20(s，1H)，7.28-7.24(m，2H)，7.22-7.20(m，1H)，7.15-7.13(m，2H)，2.78(s，2H)，1.07(s，6H)。將此化合物不經(jīng)進(jìn)一步分析用于接下來的反應(yīng)中。
2，2-二甲基-3-苯基丙酰氯將2，2-二甲基-3-苯基丙酸(0.856g，4.8mmol)的氯仿(6mL)溶液在0℃下用草酰氯(3.05g，24mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將此反應(yīng)溶液在0℃下攪拌1小時(shí)。移出冰浴，并將此反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。減壓下除去溶劑，并在高真空下干燥，得到定量的2，2-二甲基-3-苯基丙酰氯。此油狀物直接用于下面的反應(yīng)。
順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺將順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.23mmol)的吡啶(2.5mL)溶液用2，2-二甲基-3-苯基丙酰氯(0.120g，0.61mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)，并將該反應(yīng)混合物攪拌20分鐘。減壓除去溶劑。將二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液加入到此殘余物。分層，用Empore萃取柱。減壓下除去有機(jī)溶劑。粗品化合物在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇作為洗脫劑洗脫，得到0.085g(62％)的順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.595-8.574(m，1H)，8.372(s，1H)，7.985(s，1H)，7.292-7.158(m，7H)，4.923(m，1H)，3.891(s，3H)，3.050-3.013(m，1H)，2.965(s，2H)，2.65-2.55(m，5H)，2.440-2.346(m，4H)，2.244-2.166(m，4H)，1.854-1.823(m，3H)，1.688(m，3H)，1.334(s，6H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(SymmetryShield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.517min(100％)。
實(shí)施例387反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺三馬來酸鹽將反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.250g，0.573mmol)的吡啶(3mL)溶液，在0℃下用2，2-二甲基-3-苯基丙酰氯(0.304g，1.55mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌10分鐘。除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。減壓除去溶劑至干。將二氯甲烷(15mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(5mL)加入到此固體。分層，用Empore萃取柱。減壓下除去有機(jī)溶劑。粗品固體通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的10％甲醇，然后用存在于二氯甲烷中的15％(含5％氫氧化銨的甲醇)作為洗脫劑。用乙酸乙酯和庚烷將上一純化步驟得到粗品固體重結(jié)晶。過濾此沉淀得到0.201g(59％)的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺。將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺(0.201，0.337mmol)的乙酸乙酯熱溶液用馬來酸(0.117g，1.011mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀，并高真空下干燥，得到0.265g的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.46(s，1H)，8.241(s，1H)，8.107-8.086(d，1H，J＝8.4Hz)，7.248-7.183(m，7H)，6.170(s，6H)，4.697(m，1H)，3.883(s，3H)，2.931(s，3H)，2.9-2.75(br.s.，4H)，2.671(s，3H)，2.104-1.990(m，7H)，1.588-1.5632(m，2H)，1.226(s，7H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.413min(95％)。
實(shí)施例388反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺三馬來酸鹽將反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.162g，0.371mmol)的吡啶(2mL)溶液，在0℃下在氮?dú)夥障掠梅?2-苯基-1-環(huán)丙基羰基氯(0.134g，0.742mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20分鐘，除去冰浴并將此反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。再加入反-2-苯基-1-環(huán)丙基羰基氯(0.034g，0.186mmol)，并將此反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。減壓下除去有機(jī)層，再加入二氯甲烷(15mL)。分層，用Empore萃取柱。減壓下除去有機(jī)層。粗品在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的15％甲醇，然后用存在于二氯甲烷中的20％甲醇作為洗脫劑。過柱后得到0.150g(70％)的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺。將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺(0.147，0.253mmol)的乙酸乙酯熱溶液，用馬來酸(0.088g，0.759mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾所形成的沉淀，并高真空下干燥，得到0.204g的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.64(s，1H)，8.23-8.21(m，2H)，7.33-7.29(m，2H)，7.24-7.17(m，4H)，6.16(s，6H)，4.69-4.66(m，1H)，3.90(s，3H)，2.90-2.60(m，7H)，2.37-2.35(m，2H)，2.10-1.99(m，8H)，1.70-1.50(m，3H)，1.32(m，1H)；HPLCWaters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.346min(97％)。
實(shí)施例389順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]噻吩-2-甲酰胺實(shí)施例390順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-噻吩甲酰胺實(shí)施例391順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-呋喃甲酰胺得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺將存在于二氯甲烷(100μL)中的商購(gòu)的酰氯(0.23mmol)加入到存在于吡啶(800μL)的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.115mmol)中。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。該反應(yīng)混合物用1N氫氧化鈉溶液驟冷。在Supelco-支管上真空和氮?dú)饬飨鲁ト軇?。剩余的固體進(jìn)行制備HPLC(Hypersil C18，100×21mm柱，5μm，15-100％乙腈梯度，在8分鐘內(nèi)，總過柱時(shí)間-10min，緩沖液50mM醋酸銨，25ml/min)。將二氯甲烷和1N氫氧化鈉溶液加入到此固體中。分層，用Empore萃取柱，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5ml/min)。
實(shí)施例392反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-甲基-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽
3-甲基-3-苯基丁?；葘⒋嬖谟诙燃淄?10mL)的3-甲基-3-苯基丁酸(0.508g，2.85mmol)在-78℃下用草酰氯(3.62，28.5mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌10分鐘，并除去干冰/丙酮浴，室溫下攪拌過夜。減壓除去溶劑，并高真空下干燥。產(chǎn)物不經(jīng)分析直接用于下一步反應(yīng)。
反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-甲基-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽將反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.458mmol)的吡啶(4mL)溶液，在-5℃下通過滴加存在于二氯甲烷(1mL)3-甲基-3-苯基丁?；?0.101g，0.514mmol)進(jìn)行處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌4小時(shí)。加入1N氫氧化鈉溶液(5mL)并將此混合物攪拌過夜。減壓除去溶劑。粗品固體在高真空下干燥。加入二氯甲烷(10mL)和1N氫氧化鈉溶液(10mL)。分層，用Empore萃取柱。從頂部吹入氮?dú)獬ビ袡C(jī)溶劑，得到0.240g(88％)的反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-甲基-3-苯基丁酰胺。將反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-甲基-3-苯基丁酰胺(0.240g，0.402mmol)在乙酸乙酯和幾滴乙醇中的熱溶液，用馬來酸(0.140g，1.206mmol)的乙酸乙酯熱溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾所形成的沉淀，并凍干得到0.323g反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-甲基-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.807(s，1H)，8.226(s，1H)，8.109-8.088(d，1H，J＝8.4Hz)，7.489-7.470(d，2H，J＝7.6Hz)，7.345-7.306(m，2H)，7.213-7.134(m，3H)，6.151(s，5H)，4.680(m，1H)，3.836(s，3H)，3.3(br.s.，7H)，2.655(s，3H)，2.541(s，4H)，2.085-1.989(m，6H)，1.574-1.551(m，2H)，1.431(s，6H)；HPLC Waters 2690 AllianceHPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt5.407min(99％)。
實(shí)施例393-397得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺典型方法向存在于二氯甲烷(1.4mL)的適當(dāng)甲酸(0.46mmol)中，加入草酰氯(0.4mL，4.6mmol)和DMF(1滴)。將小瓶用隔膜蓋上并在各蓋上插入小號(hào)針頭以釋放壓力。這些小瓶在J-Kem震搖器上搖動(dòng)過夜。分離50％的溶液，然后將過量的草酰氯和二氯甲烷在12孔Supelco支管上真空下隨氮?dú)饬鞒?。將此粗品酰?0.23mmol)加入到存在于干燥吡啶(0.6mL)的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.11mmol)中并室溫下攪拌過夜。所得溶液直接通過制備HPLC進(jìn)行純化(HypersilBSD C18，5μm，100×21mm，在10分鐘內(nèi)0％-100％乙腈/0.05M醋酸銨，25.0mL/min)。所得產(chǎn)物通過在二氯甲烷(4ml)和1.0N氫氧化鈉(2ml)之間分配來進(jìn)一步純化并通過EmporeTM高效萃取圓盤柱(C18-SD十八烷基)得到相應(yīng)的產(chǎn)物。這些化合物詳見下頁(yè)，其中給出了相應(yīng)的LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.5mL/min.)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例398順-N4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-4-異噁唑甲酰胺a)順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10g，22.66mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(9.49g，27.17mmol)、四(三苯基膦)鈀(1.57g，1.36mmol)和碳酸鈉(5.76g，54.38mmol)與乙二醇二甲醚(180mL)和水(90mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過制備薄層柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到順-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(10.859g，89％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(s，9H)，1.58(m，2H)，1.71(m，2H)，2.08(m，2H)，2.17(s，3H)，2.45(m，4H)，2.38(m，4H)，2.45(m，3H)，3.87(s，3H)，4.80(m，1H)，7.22(m，2H)，7.91(d，J＝8.14，1H)，8.04(s，1H)，8.22(s，1H)。
b)順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下將三氟乙酸/二氯甲烷的混合物(20∶80，200mL)加入到存在于二氯甲烷(100mL)的N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(10.85g，20.24mmol)中。2小時(shí)后，除去冰浴并蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入氫氧化鈉(1.0N)以調(diào)節(jié)pH為約10。過濾收集除去有機(jī)溶劑時(shí)形成的固體得到順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(8.84g，100％)。1H NMR(CDCl3)δ1.65(m，2H)，1.83(m，2H)，2.18(m，2H)，2.31(s，3H)，2.35-2.60(m，11H)，3.90(s，3H)，4.00(bs，2H)，4.89(m，1H)，5.61(bs，2H)，6.83(d，J＝7.78Hz，1H)，7.12(m，2H)，8.35(s，1H)。
c)順-N4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-4-異噁唑甲酰胺將3，5-二甲基-4-異噁唑羰基氯(22mg，0.137mmol)加入到順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.067mmol)的吡啶(0.5mL)溶液中。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物用DMSO重結(jié)晶得到順-N4-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-4-異噁唑甲酰胺(33mg，87％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.91(m，2H)，2.24(m，2H)，2.36(m，2H)，2.41(s，3H)，2.63(s，3H)，2.77(m，3H)，3.17(s，3H)，3.37(bm，8H)，3.95(s，3H)，4.95(m，1H)，7.37(m，2H)，8.17(d，J＝8.17，1H)，8.30(s，1H)，9.26(s，1H)。LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.5mL/min.)，MH+＝560.2，Rt＝2.44min。
實(shí)施例399順-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-5-甲基-3-異噁唑甲酰胺將5-甲基-3-異噁唑羰基氯(20mg，0.137mmol)加入到順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.067mmol)的吡啶(0.5mL)溶液。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil BSD C18，5μm，100×21mm，在10分鐘內(nèi)0％-100％乙腈/0.05M醋酸銨，25.0mL/min)。所得產(chǎn)物進(jìn)一步通過在二氯甲烷(4ml)和1.0N氫氧化鈉(2ml)之間分配進(jìn)行純化，并通過EmporeTM高效萃取圓盤柱(C18-SD十八烷基)得到順-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-5-甲基-3-異噁唑甲酰胺(14mg，38％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.81(m，2H)，2.14(m，2H)，2.35(m，2H)，2.53(s，3H)，2.76(m，3H)，3.37(bm，8H)，3.99(s，3H)，4.93(m，1H)，6.74(s，1H)，7.36(m，2H)，8.26(m，1H)，9.48(s，1H)；LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝546.4，Rt＝1.82min。
實(shí)施例400順-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺，二馬來酸鹽將順-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(100mg，0.172mmol)溶解于熱乙酸乙酯(12mL)，并加入存在于熱乙酸乙酯(3mL)中的馬來酸(60mg，0.515mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到順-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺，二馬來酸鹽(117mg，87％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.25(d，J＝6.96，3H)，1.73(m，42H)，2.09(m，2H)，2.26(m，2H)，2.71(s，3H)，2.74(m，2H)，2.85-3.70(bm，7H)，3.89(s，3H)，4.85(m，1H)，6.14(s，4H)，7.20(m，3H)，7.31(d，J＝4.33，4H)，8.12(d，J＝8.17Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.20(s，1H)。LC/MS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝583.4 Rt＝2.14min。
實(shí)施例401反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺向存在于二氯甲烷(14mL)的苯并[b]呋喃-2-甲酸(0.743g，4.58mmol)中加入草酰氯(4mL，45.8mmol)和DMF(1滴)。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)。在0℃下將此二氯甲烷溶液的一半(2.5mL)加入到存在于吡啶(6mL)的反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.50g，1.145mmol)。30分鐘后，過濾收集此固體。然后將水加入到此固體并用氫氧化鈉(1.0N)將此溶液的pH調(diào)節(jié)至10。水相用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺(0.497g，75％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(m，2H)，2.01(m，6H)，2.15(s，3H)，2.40(m，3H)，2.51(m，4H)，4.00(s，3H)，4.66(m，1H)，7.31(m，1H)，7.39(m，2H)，7.54(m，1H)，7.81(m，3H)，8.24(m，1H)，9.50(s，1H)。
b)反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺，三馬來酸鹽將反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺(497mg，0.855mmol)溶解于熱乙酸乙酯(56mL)，并加入存在于熱乙酸乙酯(5mL)的馬來酸(298mg，2.566mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺，三馬來酸鹽(117mg，92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，2.09(m，6H)，2.68(s，3H)，2.82-3.17(bm，9H)，4.00(s，3H)，4.69(m，1H)，6.16(s，6H)，7.30-7.42(m，3H)，7.54(m，1H)，7.76-7.85(m，3H)，8.25(m，2H)，9.51(s，1H)；LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝581.4，Rt＝2.12min。
實(shí)施例402
反-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺，三馬來酸鹽a)反-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺向存在于二氯甲烷(7mL)的(3R)-3-苯基丁酸(376mg，2.29mmol)中，加入草酰氯(2mL，22.9mmol)和DMF(1滴)。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)。在0℃下將此二氯甲烷溶液加入到反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(448mg，1.026mmol)的吡啶(6mL)溶液中。2小時(shí)后，該反應(yīng)混合物倒入到乙酸乙酯(60ml)中并過濾收集此固體。然后將水加入到此固體中，并用氫氧化鈉(1.0N)調(diào)節(jié)此溶液的pH至10。用二氯甲烷萃取水層。用水和鹽酸洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。將此殘余物通過急驟色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(80∶20)作為流動(dòng)相，得到反-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(383mg，64％)。1HNMR(CDCl3)δ1.40(d，J＝6.96，3H)，1.57(m，2H)，2.08-2.21(m，6H)，2.30(s，3H)，2.50(m，5H)，2.63-2.74(m，6H)，3.40(m，1H)，3.88(s，3H)，4.74(m，1H)，5.69(br，2H)，7.16-7.34(m，7H)，7.66(s，1H)，8.34(s，1H)，8.49(d，J＝8.21，1H)。
b)反-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺，三馬來酸鹽將反-N1-[(2R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺(383mg，0.657mmol)溶解于熱乙酸乙酯(42mL)，并加入馬來酸(229mg，1.971mmol)的熱乙酸乙酯(5mL)溶液。將此反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。過濾收集固體得到反-N1-[(2 R)-2-苯基丙基]-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯甲酰胺，三馬來酸鹽(571mg，93％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.25(d，J＝6.95，3H)，1.57(m，2H)，2.03(m，6H)，2.60-3.40(bm，18H)，3.89(s，3H)，4.67(m，1H)，6.16(s，6H)，7.20(m，3H)，7.31(d，J＝4.37Hz，4H)，8.14(d，J＝8.22Hz，1H)，8.23(s，1H)，9.18(s，1H)；LC/MS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.5mL/min.)MH+＝583.2，Rt＝2.89min。
實(shí)施例403N-{4-[4-氨基-1-(1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯a)4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯在0℃下將硼氫化鈉(3.8g，100.4mmol)分批加入到4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁基酯(20g，100.4mmol)的甲醇(600mL)溶液中。15分鐘后，除去冰水浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌3小時(shí)。加入氫氧化鈉(1.0N，100mL)并蒸發(fā)有機(jī)溶劑。水層用乙醚萃取4次。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(20.48g，100％)。1H NMR(CDCl3)δ1.48(s，9H)，1.63(m，2H)，1.87(m，2H)，3.03(m，2H)，3.83(m，3H)。
b)4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10g，38.3mmol)、4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(16.96g，84.2mmol)和三苯基膦(20.09g，76.0mmol)懸浮于四氫呋喃(425mL)中。將該反應(yīng)混合物在冰水浴中冷卻并滴加偶氮二甲酸二乙酯(12.09mL，76.0mmol)。10分鐘后，將該反應(yīng)混合物升溫至室溫。5小時(shí)后，減壓除去溶劑，加熱下加入二氯甲烷(65mL)。將此固體過濾并用二氯甲烷(20ml)洗滌。此固體進(jìn)一步用乙酸乙酯(5×20mL)洗滌得到1，2-肼二甲酸二乙酯和4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯的混合物(1∶1，14.98g，63％)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。1H NMR(CDCl3)δ1.48(s，9H)，1.95(m，2H)，2.20(m，2H)，2.92(m，2H)，4.23(m，2H)，4.84(m，1H)，8.31(s，1H)。
c)3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下將三氟乙酸/二氯甲烷的混合物(20∶80，250mL)加入到4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(10.72g，24.1mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入鹽酸(5.0N)，并將此水層用二氯甲烷洗滌3次。加入氫氧化鈉(50％)調(diào)節(jié)pH為約10。將此懸浮液凍干至原體積的三分之一。過濾收集此固體得到3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(8.109g，97％)。1H NMR(CDCl3)δ1.81(m，2H)，1.99(m，2H)，2.65(m，2H)，3.07(m，2H)，4.68(m，1H)，8.19(s，1H)。
d)3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.00g，5.81mmol)、1-甲基-4-哌啶酮(2.14mL，17.42mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(2.45g，11.62mmol)和冰醋酸(1.05g，17.42mmol)與1，2-二氯乙烷(75mL)混合。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌6小時(shí)并加入飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)pH為約9。過濾收集固體得到3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.39g，93％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.52(m，2H)，1.75(m，2H)，1.87(m，2H)，2.05(m，4H)，2.24(s，3H)，2.28(m，3H)，2.91(m，2H)，3.00(m，2H)，4.55(m，1H)，8.18(s，1H)。
e)N-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯將3-碘-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.39g，5.41mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(2.08g，5.96mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.375g，0.32mmol)和碳酸鈉(1.38g，13.00mmol)與乙二醇二甲醚(80mL)和水(40mL)混合。該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶0.5)作為流動(dòng)相，得到N-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，57％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(m，11H)，1.71(m，2H)1.86(m，4H)，2.14(s，3H)，2.18(m，3H)，2.32(m，2H)，2.80(m，2H)，3.89(s，3H)，4.64(m，1H)，7.22(m，2H)，7.91(d，J＝8.12，1H)，8.03(s，1H)，8.21(s，1H)。
實(shí)施例4043-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下將三氟乙酸/二氯甲烷的混合物(20∶80，28mL)加入到N-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(0.914g，1.70mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入飽和碳酸氫鈉以調(diào)節(jié)pH為約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.726g，97％)。1H NMR(CDCl3)δ1.67(m，2H)1.83(m，4H)，2.00(m，2H)，2.27(s，3H)，2.39(m，5H)，2.91(m，2H)，3.08(m，2H)，3.92(s，3H)，3.99(m，2h)，4.73(m，1H)，5.56(bs，2H)，6.82(d，J＝7.87，1H)，7.08(d，J＝7.84，1H)，7.13(s，1H)，8.34(s，1H)。
b)3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.229mmol)、2-呋喃甲醛(0.027mL，0.321mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(193mg，0.916mmol)和冰醋酸(55mg，0.916mmol)與1，2-二氯乙烷(5mL)混合。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。飽和碳酸氫鈉溶液以調(diào)節(jié)pH為約8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(95∶5∶0.2)作為流動(dòng)相，得到3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(57mg，48％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.45(m，2H)，1.71(m，2H)，1.87(m，4H)，2.14(s，3H)，2.28(m，5H)，2.80(m，2H)，3.01(m，2H)，3.86(s，1H)，4.37(d，J＝3.13，1H)，6.76(d，J＝8.62，1H)，7.07(m，2H)，7.57(s，1H)，8.19(s，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH 4.5)，3.0mL/min.)MH+517.3，Rt＝2.28min。
實(shí)施例405N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺，二馬來酸鹽a)N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺將反-2-苯基-1-環(huán)丙烷羰基氯(42mg，0.231mmol)加入到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.229mmol)的吡啶(1.0mL)溶液中。5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化得到N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺(80mg，60％)。1H NMR(CDCl3)δ1.42(m，1H)，1.77(m，2H)，1.85(m，2H)，2.06(m，3H)，2.36-2.45(m，8H)，2.62(m，1H)，3.00(m，2H)，3.10(m，2H)，3.96(s，3H)，4.75(m，1H)，5.54(bs，2H)，7.14-7.33(m，7H)，8.10(s，1H)，8.36(s，1H)，8.54(d，J＝8.50，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝581.4，Rt＝1.77min。
b)N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺，二馬來酸鹽將N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺(75mg，0.129mmol)溶解于乙醇(2mL)并加入存在于乙醇(1mL)的馬來酸(45mg，0.387mmol)。將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌5小時(shí)。除去溶劑并加入乙酸乙酯，過濾收集固體得到N1-{4-[4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺，二馬來酸鹽(75mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.17(m，1H)，1.32(m，2H)，1.48(m，2H)，1.48，(m，2H)，2.19(m，4H)，2.37(M，1H)，2.46(m，1H)，2.59(m，1H)，2.78(s，3H)，2.98-3.52(bm，9H)，3.90(s，3H)，5.02(m，1H)，6.08(s，4H)，7.17-7.33(m，7H)，8.25(m，2H)，9.65(s，1H)。LCMS(Finigan-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑0％B/A至100％B/A，在4分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，3.0mL/min.)MH+＝581.4，R＝1.77min。
實(shí)施例406和407得自順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的酰胺典型方法
向存在于二氯甲烷(1.5ml)的適當(dāng)甲酸(0.46mmol)中，加入草酰氯(400μl，0.2mmol)和DMF(1滴)。將小瓶用隔膜蓋上并在各蓋上插入小號(hào)針頭以釋放壓力。這些小瓶在J-Kem震搖器上搖動(dòng)過夜。分離50％的溶液，然后將過量的草酰氯和二氯甲烷在12孔Supelco支管上真空下隨氮?dú)饬鞒?。將粗品酰?0.23mmol)加入到存在于干燥吡啶(800μl)的順-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.09mmol)中并室溫下攪拌。所得溶液直接通過制備HPLC進(jìn)行純化(Hypersil BSD C18，5μm，100×21mm，在10分鐘內(nèi)0％-100％乙腈/0.05M醋酸銨，25.0mL/min)。所得產(chǎn)物通過在二氯甲烷(4ml)和1.0N氫氧化鈉(2ml)之間分配來進(jìn)一步純化并通過EmporeTM高效萃取圓盤柱(C18-SD十八烷基)得到相應(yīng)的產(chǎn)物。這些化合物詳見下頁(yè)，其中給出了相應(yīng)的LCMS(Micromass-柱Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑在4.5分鐘內(nèi)0％B/A至100％B/A，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，PH4.5)，3.5mL/min.)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例408N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二鹽酸鹽 a)4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯將二碳酸二叔丁基酯(0.287g，1.32mmol)加入到3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽(0.50g，1.20mmol)和碳酸鈉(0.445g，4.20mmol)在二噁烷(10mL)和水(10mL)中的混合物中，并將該反應(yīng)攪拌18小時(shí)。加入二氯甲烷(100mL)，并將有機(jī)層用水(30mL)和鹽水(30mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯，為淡黃色固體(0.524g，98％)；RP-HPLC 12.227分鐘，100％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝445.1。
b)4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(524mg，1.18mmol)溶解于乙二醇二甲基醚(50mL)和水(10mL)。加入N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(537mg，1.47mmol)、四(三苯基膦)鈀(68mg，0.059mmol)和碳酸鈉(313mg，2.95mmol)并將該反應(yīng)在80℃下加熱19小時(shí)。再加入羥基硼酸酯(188mg，0.515mmol)和四(三苯基膦)鈀(27mg，0.024mmol)并將該反應(yīng)在80℃下再加熱23小時(shí)。減壓濃縮該反應(yīng)。剩余的殘余物在二氯甲烷(100mL)和水(100mL)之間分配。將此有機(jī)層干燥(硫酸鈉)再減壓濃縮得到桔黃色油狀物(1.4g)。在硅膠上通過色譜純化，用2∶1至9∶1乙酸乙酯∶庚烷梯度，接著用存在于二氯甲烷中的2％至5％甲醇梯度洗脫，得到4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯，為黃褐色固體(577mg，85％)；RP-HPLC 17.090分鐘，98％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；DeltapakC18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝555.2。
c).N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二鹽酸鹽將4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(142mg，0.256mmol)溶解于丙酮(7mL)和6N鹽酸(1.4mL)中。然后將該反應(yīng)在45℃下加熱，得到沉淀。2.5小時(shí)后，通過真空過濾收集沉淀，用最小量的丙酮洗滌并凍干得到N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二鹽酸鹽，為桔黃色固體(130mg，96％)；-HPLC 10.436分鐘，96％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝455.3。
實(shí)施例409-416合成N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺的哌啶酰胺類似物的總方法 在各20mL的閃爍小瓶中，加入N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二鹽酸鹽(45mg，0.085mmol)、N-未保護(hù)的或N-保護(hù)的氨基酸(1.25當(dāng)量)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(12mg，0.085mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(20mg，1.06mmol)、N-乙基-N，N-二異丙基胺(74μl，0.425mmol)和二氯甲烷(5mL)。將該反應(yīng)在室溫下振動(dòng)2.5天。對(duì)于沒有完全的反應(yīng)，再加入N-乙基-N，N-二異丙基胺(15μl，0.085mmol)和)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(8mg，0.0425mmol)。此外，對(duì)于溶解度低的反應(yīng)，還加入DMF(1mL)。將反應(yīng)真空濃縮，溶解于二氯甲烷(2mL)，用鹽水(2mL)洗滌并通過Empore柱(6mL)來分層。將有機(jī)層減壓濃縮。對(duì)于純度小于80％的產(chǎn)物，將樣品通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC4000，流速10mL/min，λ＝254nm梯度15％至35％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在40分鐘內(nèi)；Deltapak C18，300，15μm，40×100mm柱)。將N-叔丁氧基羰基保護(hù)的產(chǎn)物(0.11mmol)脫保護(hù)用6N HCl(0.7mL)和丙酮(3.5mL)，在45℃下處理4.5小時(shí)。將丙酮減壓除去，并將此產(chǎn)物通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min.λ＝254nm梯度15％至35％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在40分鐘內(nèi)；Deltapak C18，300A，15μm，40×100mm柱)。
將N-(9-芴基甲氧基羰基)保護(hù)的產(chǎn)物(0.126mmol)脫保護(hù)用哌啶(0.4mL)在DMF(1.6ml)中室溫下處理3.5小時(shí)脫保護(hù)。產(chǎn)物再通過RP-HPLC純化(Waters PrepLC 4000，流速10mL/min.，λ＝254nm梯度15％至35％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液梯度，在40分鐘內(nèi)；Deltapak C18，300，15μm，40×100mm柱)。
產(chǎn)物通過RP-HPLC(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)和質(zhì)譜進(jìn)行分析，給下列化合物定性 實(shí)施例417順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基2，3-二氯-1-苯磺酸酯將含順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯酚(100mg，0.245mmol)、2，3二氯苯磺酰基氯(180mg，0.735mmol)和三乙胺(0.34mL，2.45mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液，室溫下攪拌17小時(shí)。再加入二氯甲烷(20mL)，并將該反應(yīng)用鹽水(10mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并減壓濃縮得到順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基2，3-二氯-1-苯磺酸酯，為白色固體(135mg，90％)；RP-HPLC 11.787分鐘，97％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝616.2。 實(shí)施例418N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-胺(a)順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲醛將順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.0g，11.33mmol)、4-甲?；交u基代硼酸(2.55g，16.98mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.47g，0.4mmol)和碳酸鈉(3.002g，28.32mmol)的混合物在乙二醇二甲醚(170mL)和水(30mL)中在80℃加熱18小時(shí)。再加入羥基硼酸酯(1.567當(dāng)量)和催化劑(0.0135當(dāng)量)并將該反應(yīng)再繼續(xù)40小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫，并真空濃縮。殘余物在乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)之間分配。通過過濾收集所得沉淀并冷凍干燥得到順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲醛，為淡棕色固體(2.1g，43％)；RP-HPLC 7.003分鐘，98％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.60(2H，brt)，1.72(2H，m)，2.06(2H，m)，2.17(3H，s)，2.27(3H，m)，2.35-2.50(6H，m)，3.39(2H，m)，4.84(1H，m)，7.88(2H，d)，8.07(2H，d)，8.26(1H，s)，及10.11(1H，s)。
b)N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-胺將含順-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲醛(100mg，0.24mmol)和2-氨基-5-甲基噻唑(33mg，0.29mmol)在異丙醇鈦(0.48mL)中的漿狀物，室溫下攪拌4小時(shí)。加入甲醇(2mL)，接著小心加入硼氫化鈉(13.5mg，0.36mmol)。10分鐘后，泡騰停息，并用氫氧化鈉水溶液(0.1N，10mL)將該反應(yīng)驟冷。所得混合物放置過夜，再通過硅藻土板過濾，再用加入甲醇(約10mL)。將濾液蒸發(fā)至干，再溶解于二氯甲烷(50mL)并用鹽水(50mL)洗滌。水層進(jìn)一步用二氯甲烷(3×50mL)萃取并將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。通過RP-HPLC純化(Pecosphere，C18，3μm，33×4.6mm柱，在50mM乙酸銨中0％至100％乙腈，緩沖至pH4.5，3.5mL/min)得到2個(gè)餾份。第一個(gè)餾份含有(4-{4-氨基-7-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-7H-環(huán)戊烷并[d]嘧啶-5-基}苯基)甲醇(5mg，5％)；RP-HPLC 6.261分鐘，82％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；m/z(MH+)＝422.1。
第二個(gè)餾份中得到N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-胺(4mg，3％)；RP-HPLC 8.344分鐘，100％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.59(2H，br t)，1.70(2H，m)，2.07(2H，m)，2.10-2.50(9H，m)，2.16(3H，s)，2.54(3H，s)，3.29(2H，m)，4.47(2H，d)，4.80(1H，m)，6.66(1H，s)，7.49(2H，d)，7.61(2H，d)，7.88(1H，m)，及8.23(1H，s)。 實(shí)施例419N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-4-甲基-1，3-噻唑-2-胺用對(duì)于5-甲基類所詳述的相同的方法和用量(見上)，制備N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}芐基)-4-甲基-1，3-噻唑-2-胺(11mg，8％)；RP-HPLC 8.177分鐘，97％純度(5％至85％乙腈/0.1M醋酸銨水溶液，緩沖至pH4.5，在20分鐘內(nèi)，1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150×3.9mm柱)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.57(2H，br t)，1.67(2H，m)，2.07(2H，m)，2.10-2.50(9H，m)，2.19(3H，s)，2.54(3H，s)，3.29(2H，m)，4.50(2H，br s)，4.79(1H，m)，6.17(1H，s)，7.50(2H，d)，7.62(2H，d)，7.99(1H，m)，及8.23(1H，s)。
實(shí)施例420順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-胺a)2-氨基-6-氯苯酚將2-氯-6-硝基苯酚(1.210g，6.972mmol)的乙醇(50mL)溶液用鐵粉(1.947g，34.86mmol)和濃HCl(3mL)處理。將黃色混合物加熱回流18小時(shí)，再冷卻至室溫。將該反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾，并將此濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。所得灰色混懸液通過硅藻土墊過濾，并將此濾液用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到黑色固體。用庚烷研磨得到2-氨基-6-氯苯酚(0.577g，58％)，為暗棕色固體。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝7.30min.，91％；m/z 143(MH+)。
b)順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-胺由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.245mmol)和2-氨基-4，6-二氯苯酚(0.044 g，0.245mmol)以類似于合成順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(PH4042235)所用的方式來制備。形成此化合物，為米白色固體(0.008g，6％)RP-HPLC(25至100％CH3CN，在0.1N醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝8.93min.，95％；m/z 594(MH+)。
實(shí)施例421順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺a)2-氨基-4，6-二氯苯酚2-氨基-4，6-二氯苯酚由2，4-二氯-6-硝基苯酚(0.625g，2.40mmol)類似于2-氨基-6-氯苯酚所述的方式來制備。形成此化合物，為黑色固體(0.044g，10％)。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝9.033min.，74％；m/z 177(MH+)。
b)順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.245mmol)和2-氨基-6-甲基苯酚(0.030g，0.245mmol)以類似于合成順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(PH4052419F)所用的方式來制備。形成此化合物，為米白色固體(0.018g，14％)RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝7.37min.，85％；m/z 539(MH+)。
實(shí)施例422順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺a)2-氨基-6-甲基苯酚2-氨基-6-甲基苯酚由2-甲基-6-硝基苯酚(0.500g，3.26mmol)以類似于2-氨基-6-氯苯酚所述的方式來制備。形成的此化合物為黑色固體(0.030g，8％)。RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝5.78min.，86％；m/z 123(MH+)。
b)順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺由順-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.100g，0.245mmol)和2-氨基-6-氯苯酚(0.053g，0.367mmol)以類似于合成順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(PH4052419F)所用的方式來備。形成此化合物，為米白色固體(0.018g，13％)RP-HPLC(在10分鐘內(nèi)在0.1N醋酸銨水溶液中25至100％CH3CN，1mL/min，用Hypersil HS C18，100，5μm，250×4.6mm柱)tr＝7.78min.，94％；m/z 558(MH+)。
實(shí)施例4232-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-3-吡啶甲腈制備2-[4氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯的Suzuki偶聯(lián)方法，用來將N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.052g，0.155mmol)與2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-3-吡啶甲腈(0.045g，0.124mmol)偶聯(lián)。通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt10.1-11.2min)得到2-{4-氨基3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-3吡啶甲腈，為黃色粉末(0.004g，0.009mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱) Rt8.55min；MS(MH)+446。
實(shí)施例424N1-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺用制備4-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丁酸甲酯所描述的酯化方法，將2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酸乙酯(2.03g，5.62mmol)，制備2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺酰基]氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]丙酸乙酯所述的中間體，轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的甲基酯(1.90g，5.47mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μHypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt6.88min再將一部分此甲基酯(0.110g，0.32mmol)用N，N-二甲基亞乙基二胺，用制備N1-{4-[4-氨基-1-(2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-氟苯基}-2，3-二氯-1-苯磺酰胺所用的酰胺形成的方法轉(zhuǎn)變?yōu)橹脔０稲P-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt3.47min。
用制備2-[4-氨基-3-(4-{[(2，3-二氯苯基)磺?；鵠氨基}-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸乙酯所用的Suzuki偶聯(lián)方法，將此仲酰胺(0.12g，0.30mmol)與N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.100g，0.275mmol)偶聯(lián)。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.3-8.3min)得到N1-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺，為黃色粉末(0.0015g，0.003mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HSC18，250×4.6mm柱)Rt7.60min；MS(MH)+514。
實(shí)施例425N-(4-{4-氨基-1-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N′-(3-甲基苯基)脲使用與制備N1-(4-{4-氨基-1-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺相同的方法，不同的是最后步驟使用制備2-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(3-甲苯氨基羰基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸乙酯所用的脲形成的方法，行2-[4-氨基-3-(4-氨基-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-5-(4-甲基哌嗪-1-基)芐腈(0.018g，0.041mmol)與間甲苯基異氰酸酯(0.005mL，0.040mmol)的反應(yīng)。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.3-10.3min)得到N-(4-{4-氨基-1-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-N′-(3-甲基苯基)脲，為黃色粉末(0.008g，0.014mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μHypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.03min；MS(MH)+577。
實(shí)施例426順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺在裝備有空氣冷凝器的燒瓶中，將固體4-溴苯胺(1.00g，5.81mmol)和2，6-二氯苯并噻唑(1.18g，5.81mmol)在140℃加熱3天(在幾分鐘內(nèi)發(fā)生融合得到清澈液體，其在3天內(nèi)固化)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫得到N-(4-溴苯基)-N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)胺(1.97g，5.81mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt14.65min。
羥基硼酸酯的形成方法將粗品N-(4-溴苯基)-N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)胺(0.178g，0.525mmol)、雙(頻哪醇合)乙硼烷(0.180g，0.709mmol)、醋酸鉀(0.154g，1.57mmol)和[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(0.043g，0.053mmol[與二氯甲烷的1∶1復(fù)合物])在N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中在一個(gè)可再密封的Schlenk燒瓶中在90℃下加熱24小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，并將粗品通過急驟柱色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶3)洗脫得到此羥基硼酸酯中間體N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺，為白色粉末(0.116g，0.30mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt15.15min。
Suzuki偶聯(lián)的方法將N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.116g，0.30mmol)、順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.106g，0.24mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.014g，0.012mmol)在乙二醇二甲基醚(3.0mL)中的混合物，碳酸鈉(0.064g，0.60mmol)和水(1.5mL)在密封的Schlenk燒瓶中在90℃加熱24小時(shí)。將此混合物冷卻，用水(10mL)稀釋并用甲醇/二氯甲烷(1∶19，3×20mL)萃取。將合并的有機(jī)餾份干燥(硫酸鎂)，過濾，濃縮并通過制備HPLC純化(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.8-10.0min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6氯-1，3-苯并噻唑-2-胺，為黃色粉末(0.036g，0.062mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.42min；MS(MH)+574。
實(shí)施例427順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-胺用類似于制備順-N2-(4-4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺所用的方法，不同的是使用2-氯-6-甲氧基苯并噻唑(0.352g，2.05mmol)，通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.3-8.3min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-胺，為白色粉末(0.046g，0.080mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt7.40min；MS(MH)+570。
實(shí)施例428順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺將芴基甲基氧基羰基異硫氰酸酯(1.36g，4.84mmol，Kearney，P.C.；Fernandez，M.；Flygare，J.A.J.Org.Chem.1998，63，196-200)的二氯甲烷(40mL)溶液，通過移液管加入到維持在0℃的4-溴苯胺(0.86g，5.00mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，并將所得混合物室溫下攪拌14小時(shí)。將該反應(yīng)用二氯甲烷(60mL)稀釋并用鹽酸(0.5M，2×10mL)洗滌。將此有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，過濾，并濃縮得到9H-9-芴基-甲基-N-[(4-溴苯氨基)硫羰基]氨基甲酸酯(2.25g，4.97mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt14.25min。
噻唑合成的方法將9H-9-芴基-甲基-N-[(4-溴苯氨基)硫羰基]氨基甲酸酯(0.25g，0.55mmol)溶解于哌啶/N，N-二甲基甲酰胺(1∶6，3.5mL)并將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)。減壓除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸(1mL)、乙醇(2mL)和二噁烷(2mL)的混合物中。加入1-溴-2-丁酮(90％，0.11mL，1.10mmol)并將此混合物室溫下攪拌14小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用半飽和的碳酸鈉水溶液(15mL)稀釋并用甲醇/二氯甲烷(1∶19，3×20mL)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，過濾，濃縮并通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶4)洗脫，得到該溴噻唑N-(4-溴苯基)-N-(4-乙基-1，3-噻唑-2-基)胺(0.15g，0.53mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt13.15min。
用制備N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺所述的方法，將上述溴噻唑中間體轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基硼酸酯，得到該羥基硼酸酯中間體N-(4-乙基-1，3-噻唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]胺(0.158g，0.48mmol)RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μHypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt13.60min。
用制備N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺所述的Suzuki偶聯(lián)方法，將該羥基硼酸酯中間體(0.15g，0.45mmol)與順-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.182g，0.41mmol)偶聯(lián)。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μHypersil HS C18，250×21mm柱，Rt7.0-8.0min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺，為米白色粉末(0.069g，0.133mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt7.05min；MS(MH)+518。
實(shí)施例429順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4，5-二甲基-1，3-噻唑-2-胺使用制備順-N2(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺所述的噻唑合成的方法，不同的是將3-溴-2-丁酮(0.183g，1.21mmol)用作烷基化試劑，而烷基化反應(yīng)在40℃下進(jìn)行2 4小時(shí)。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt6.7-7.7min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4，5-二甲基-1，3-噻唑-2-胺，為米白色粉末(0.069g，0.133mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt6.83min；MS(MH)+518。
實(shí)施例430順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺使用制備順-N2(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺所描述的噻唑合成方法，不同的是將2-溴苯乙酮(0.131g，0.66mmol)用作烷基化試劑。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt8.7-9.8min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺，為黃色粉末(0.036g，0.064mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.22min；MS(MH)+566。
實(shí)施例431順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺使用制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺所述的噻唑合成方法，不同的是用2-溴-4′-甲基苯乙酮(0.118g，0.554mmol)作為烷基化試劑。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.1-10.7min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺，為米白色粉末(0.022g，0.038mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.88min；MS(MH)+580。
實(shí)施例432順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-甲基-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺使用制備順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺所述的噻唑合成方法，不同的是用2-溴苯基丙基酮(0.081ml，0.532mmol)作為烷基化試劑。烷基化反應(yīng)在50℃進(jìn)行24小時(shí)。通過制備HPLC純化產(chǎn)物(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在20分鐘內(nèi)，21mL/min，用8μ Hypersil HS C18，250×21mm柱，Rt9.1-10.3min)得到順-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-甲基-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺，為米白色粉末(0.015g，0.026mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈，在0.1M醋酸銨水溶液中，在10分鐘內(nèi)，1mL/min，用5μ Hypersil HS C18，250×4.6mm柱)Rt8.67min；MS(MH)+580。
實(shí)施例433N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽(3R)-3-苯基丁酰氯將R-3-苯基丁酸(0.755g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將此反應(yīng)混合物在室溫下氮?dú)夥障聯(lián)u動(dòng)15小時(shí)。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的(3R)-3-苯基丁?；?。將此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用(3R)-3-苯基丁酰基氯(0.420g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?。?3R)-3-苯基丁?；?0.210g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。將合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷中的15％(含2％氫氧化銨甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷中的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷中的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.378g(57％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺(0.378g，0.649mmol)的乙酸乙酯溫溶液，用馬來酸(0.226g，1.95mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.200(s，1H)，8.263(s，1H)，8.1747-8.1543(d，1H，J＝8.16Hz)，7.312-7.282(m，4H)，7.235-7.232(s，1H)，7.211-7.168(m，2H)，6.114(s，6H)，5.061(m，1H)，3.890(s，3H)，3.301(m，4H)，2.997(m，2H)，2.783-2.741(m，6H)，2.541(m，8H)，2.261-2.185(m，4H)，1.879(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.64min(100％)。
實(shí)施例434N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽苯并[b]呋喃-2-羰基氯將2-苯并呋喃甲酸(0.746g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)懸浮液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的苯并[b]呋喃-2-羰基氯。將此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用苯并[b]呋喃-2-羰基氯(0.415g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫下氮?dú)夥障聰嚢?。將苯并[b]呋喃-2-羰基氯(0.207g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.143g(21％)純N1-(4-{4-氨基1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺(0.143g，0.246mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.086g，0.739)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.518(s，1H)，8.282(s，1H)，8.2652-8.2447(d，1H，J＝8.2Hz)，7.849-7.814(m，2H)，7.7813-7.7603(d，1H，J＝8.4Hz)，7.562-7.523(m，1H)，7.418-7.369(m，2H)，7.338-7.313(m，1H)，6.088(s，5H)，5.10-5.00(m，1H)，4.003(s，3H)，3.529(m，4H)，3.314(m，2H)，2.971(m，2H)，2.778(s，3H)，2.497(m，3H)，2.209(m，4H)，1.909(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.73min(100％)。
實(shí)施例435N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽(3S)-3-苯基丁?；葘-3-苯基丁酸(0.755g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物在室溫、氮?dú)夥障聯(lián)u動(dòng)15小時(shí)。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的(3S)-3-苯基丁酰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用(3S)-3-苯基丁?；?0.420g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?。?3S)-3-苯基丁?；?0.210g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.455g(68％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺(0.455g，0.782mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.272g，2.35)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.199(s，1H)，8.261(s，1H)，8.1733-8.1528(d，1H，J＝8.2Hz)，7.312-7.282(m，4H)，7.236-7.232(m，1H)，7.211-7.168(m，2H)，6.094(s，6H)，5.046(m，1H)，3.890(s，3H)，3.534(m，4H)，2.994(m，2H)，2.784-2.740(m，6H)，2.506-2.470(m，8H)，2.442-2.200(m，4H)，1.855(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.64min(100％)。
實(shí)施例436N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.00g，7.66mmol)在二甲基甲酰胺(40mL)中的懸浮液用碳酸銫(3.74g，11.49mmol)和對(duì)氟硝基苯(1.08g，7.66mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入到冰中。過濾此沉淀并用水洗滌。將產(chǎn)物4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶凍干過夜得到2.55g(87％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.4952-8.4720(m，2H)，8.4142-8.3654(m，3H)；LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝3.73min(100％)M+380.6.
N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(0.500g，1.31mmol)在二甲基甲酰胺(8mL)中的懸浮液，用N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.915g，2.62mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.091g，0.06mmol)及碳酸鈉(0.333g，3.14mmol)的水(4mL)溶液進(jìn)行處理。將該反應(yīng)混合物在85℃下在氮?dú)夥障聰嚢?6小時(shí)。將水加入到該反應(yīng)混合物。過濾此沉淀并用水洗滌。將此固體用乙醚研磨，得到0.431g(63％)的N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.6862-8.6634(d，2H，J＝9.12Hz)，8.4897-8.4423(m，3H)，8.1117(s，1H)，8.0074-7.9872(d，1H，J＝8.08Hz)，7.3743-7.3293(m，2H)，3.9189(s，3H)，1.4959(s，9H)；LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝4.38min M+478.1。
實(shí)施例4374-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶將N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，0.808mmol)的二氯甲烷(8mL)懸浮液，在0℃下用三氟乙酸(1.6mL)處理。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后除去冰浴，在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?。將該反?yīng)混合物攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。將二氯甲烷(15mL)和氫氧化鈉1N溶液加入到此油狀物殘余物。將所形成的沉淀過濾并凍干過夜得到0.286g(94％)的4氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.7826-8.759(m，2H)，8.4892-8.4296(m，3H)，7.1861-7.1338(m，2H)，6.8320-6.8121(d，1H，J＝7.96Hz)，5.2225(s，2H)，3.8672(s，3H)；LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝3.48min M+377.6。
實(shí)施例438N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯將1-甲基吲哚基-2-甲酸(0.805g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)的懸浮液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)18小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液在-5℃下用1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯(0.445g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫下氮?dú)夥障聰嚢琛?-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯(0.221g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.463g(68％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H 2-吲哚基甲酰胺(0.463g，0.781mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.272，2.34mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀，并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.4495(s，1H)，8.2848(s，1H)，8.1505-8.1301(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7232-7.7034(d，1H，J＝7.92Hz)，7.6054-7.5844(d，1H，J＝8.4Hz)，7.3583-7.3012(m，4H)，7.1778-7.1406(m，1H)，6.0804(s，4H)，5.10-5.00(m，1H)，4.0403(s，3H)，3.9614(s，3H)，3.5336(m，4H)，3.1879(m，2H)，2.9937(m，2H)，2.7836(s，3H)，2.4979(m，3H)，2.2157(m，4H)，1.8513(m，2H)；HPLC Perkin Elmer，PecosphereC18，3μM，33×4.6mm，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.76min(100％)。
實(shí)施例439N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽1H-2-吲哚基羰基氯將吲哚基-2-甲酸(0.742g，4.6mmol)在二氯甲烷(3mL)中的懸浮液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)18小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的1H-2-吲哚基羰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用1H-2-吲哚基羰基氯(0.413g，2.3mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘。除去干冰/丙酮浴并將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。加入1H-2-吲哚基羰基氯(0.207g，1.15mmol)并再攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌30分鐘。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(25mL)。分層，并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并在減壓下得到粗品N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)洗脫還是得到粗品。第二次過柱用梯度10％(含2％氫氧化銨的甲醇)至50％(含2％氫氧化銨的甲醇)洗脫，得到0.139g(21％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺(0.139g，0.24mmol)在溫乙酸乙酯中用馬來酸(0.083g，0.719mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾所形成的沉淀得到0.166g的N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.83(s，1H)，9.442(s，1H)，8.283(s，1H)，8.154-8.134(d，1H，J＝8.12Hz)，7.694-7.674(d，1H，J＝8.04Hz)，7.498-7.477(d，1H，J＝8.20Hz)，7.407-7.402(m，1H)，7.352-7.325(m，2H)，7.267-7.229(m，1H)，7.112-7.074(m，1H)，6.078(s，4H)，5.10-5.00(m，1H)，3.974(s，3H)，3.525(m，4H)，3.178(m，2H)，2.975(m，2H)，2.771(s，3H)，2.457(s，3H)，2.208(m，4H)，1.909(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.67min(100％)。
實(shí)施例4403-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.0g，11.5mmol)在二甲基甲酰胺(50mL)中的懸浮液用碳酸銫(5.62g，17.25mmol)和三苯基甲基氯(3.85g，13.8mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在70℃下在氮?dú)夥障聰嚢?2.5小時(shí)。將碳酸銫(3.75g，11.5mmol)和三苯基甲基氯(3.2g，11.5mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌6.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入到冰水中。過濾此沉淀并用水洗滌。將產(chǎn)物3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺凍干過夜。所得固體用乙酸乙酯研磨得到3.05g(53％)的3-碘1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.3190-7.1106(m，16H)；TLC(Baker Pre-coated Hard Layer硅膠TLC板，Si250F254，30％乙酸乙酯在庚烷中)Rf＝0.33。
3-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.0g，1.99mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液用苯基羥基代硼酸(0.485g，3.8mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.138g，0.119mmol)及碳酸鈉(0.506g，4.78mmol)的水(10mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下在氮?dú)夥障聰嚢?8.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入水(15mL)。過濾此沉淀并用水洗滌。粗品固體用乙醚研磨(30mL)。將所得固體凍干過夜，得到0.407g(45％)的3-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.9416(s，1H)，7.6190-7.6011(m，2H)，7.5369-7.4493(m，3H)，7.3995-7.2248(m，15H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt＝11.813min(97％)。
實(shí)施例441N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(3R)-3-苯基丁酰胺在-10℃下將存在于二氯甲烷(10mL)中的(3R)-3-苯基丁?；?2.22g，12.18mmol)加入到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(2.86g，8.12mmol)的吡啶(50mL)溶液中。15分鐘后，除去冰水浴并將此反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。加入氫氧化鈉(1.0N，15mL)并蒸發(fā)有機(jī)溶劑。將此水殘余物用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。將此殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(3R)-3-苯基丁酰胺(3.11g，77％)。1H NMR(CDCl3)δ1.40(d，J＝6.97Hz，3H)，2.04(m，1H)，2.59-2.78(m，9H)，3.40(m，1H)，3.98(s，3H)，5.28(m，1H)，5.70(bs，2H)，7.15-7.35(m，7H)，7.66(s，1H)，8.38(s，1H)，8.51(d，J＝8.18，1H)。HPLC(Waters Alliance-柱Symmetry ShieldRP183.5μm，2.1×50mm；洗脫劑5％B/A至95％B/A，9.0分鐘(B乙腈，A100mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.5mL/min)Rt＝6.273min。
實(shí)施例442{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇a)4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.0g，6.59mmol)與4-氟苯甲醛(1.06mL，9.89mmol)、碳酸銫(4.30g，13.19mmol)在DMF(6mL)中混合。將此反應(yīng)混合物在86℃下加熱過夜。冷卻至室溫后，將此反應(yīng)混合物倒入到冰水上。過濾收集此固體得到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(2.46g，92％)。1H NMR(CDCl3)δ7.19(m，5H)，7.46(m，2H)，7.78(d，J＝8.64Hz，2H)，8.10(d，J＝8.70Hz，2H)，8.44(s，1H)，8.59(d，J＝8.70Hz，2H)，10.03(s，1H)。
b){4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇將硼氫化鈉(19mg，0.491mmol)加入到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(100mg，0.245mmol)的甲醇(2mL)溶液中。16小時(shí)后，加入THF(1mL)和硼氫化鈉(19mg，0.491mmol)。5小時(shí)后，除去溶劑并加入水。將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(80∶20至100∶0)作為流動(dòng)相，得到{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇(36mg，36％)。1H NMR(DMSO-d6)δ4.56(s，2H)，5.27(bs，1H)，7.16(m，5H)，7.47(m，4H)，7.76(d，J＝8.64Hz，2H)，8.18(d，J＝8.52，2H)，8.37(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA singleQuad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝410.1，Rt＝2.43min。
實(shí)施例4431-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將三乙酰氧基硼氫化鈉(67mg，0.319mmol)加入到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(100mg，0.245mmol)、4-甲基哌嗪(37mg，0.369mmol)、冰醋酸(35mg，0.589mmol)在二氯乙烷(4mL)中的混合物中。室溫下攪拌過夜后，再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(67mg，0.319mmol)并將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。加入水(2mL)，接著加入碳酸氫鈉(250mg)。劇烈攪拌1小時(shí)后，分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(97∶3 to 80∶20)作為流動(dòng)相，得到1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(25mg，21％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.30(s，3H)，2.48(bm，8H)，3.56(s，3H)，5.75(bs，2H)，7.11(d，J＝8.50，2H)，7.18(m，3H)，7.40(m，2H)，7.48(d，J＝8.50Hz，2H)，7.29(d，J＝8.63Hz，2H)，8.12(d，J＝8.50Hz，2H)，8.47(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A，在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝492.2，Rt＝2.97min。
實(shí)施例444N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯a)1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯在0℃下將叔丁醇鉀(1.0N在THF中，38mL，38mmol)加入到存在于THF(30mL)的甲醇(1.54mL，38.0mmol)中。30分鐘后，在-78℃下將此絮狀溶液通過導(dǎo)管加入到1-溴-2，5-二氟-4-硝基苯(9.04g，38.0mmol)的THF(27mL)溶液中。30分鐘后，除去冷卻浴并將該反應(yīng)混合物升溫至0℃。加入水(250mL)，并在10分鐘后，除去有機(jī)溶劑。過濾收集固體得到1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(9.28g，98％)。1H NMR(CDCl3)δ3.97(s，3H)，7.30(d，J＝5.48Hz，2H)，7.71(d，J＝7.58Hz，2H)。
b)4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺在80℃下，分三批，將亞硫酸氫鈉(14.7g，84.4mmol)加入到1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(9.28g，37.12mmol)在乙醇(180mL)和水(130mL)中的溶液中。5小時(shí)后除去有機(jī)溶劑并通過過濾收集水層中的固體。將此固體進(jìn)一步用庚烷/乙酸乙酯(3∶2，400mL)洗滌。將濾液蒸發(fā)得到4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺(3.29g，40％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.75(s，3H)，5.22(s，2H)，6.56(d，J＝10.68Hz，2H)，6.94(d，J＝6.57Hz，2H)。
c)N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將二-叔丁基二碳酸酯(3.42g，15.70mmol)與4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺(3.29g，14.95mmol)在THF(30mL)中混合。將該反應(yīng)混合物在65℃下加熱3天，每天加入二碳酸二叔丁基酯(3.42g，15.70mmol)。除去溶劑后，將殘余物通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5至85∶15)作為流動(dòng)相，得到所需產(chǎn)物N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯和二碳酸二叔丁基酯的混合物(10.4g)。在0℃下將氫氧化鈉(50％溶液，2.0mL)加入到存在于甲醇(30mL)中的此混合物中，并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。除去溶劑后，加入水并將水層用庚烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.24g，89％)。1H NMR(CDCl3)δ1.52(s，9H)，3.85(s，3H)，6.93(d，J＝6.10Hz，1H)，7.06(s，1H)，8.01(d，J＝10.4Hz，1H)。
d)N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.24g，13.26mmol)、乙硼烷頻哪醇酯(4.04g，15.91mmol)、醋酸鉀(3.90g，39.78mmol)和[1，1′-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)二氯鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(0.32g，0.40mmol)在DMF(75mL)中，在85℃下加熱過夜。加入乙硼烷頻哪醇酯(2.02g，7.96mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)二氯鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(0.32g，0.40mmol)，并再繼續(xù)加熱5小時(shí)。除去溶劑后，將此黑色殘余物溶解于二氯甲烷，并通過硅藻土過濾。將粗品混合物通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5至85∶15)作為流動(dòng)相，得到N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和乙硼烷頻哪醇酯(1∶1，4.23g)的混合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。
e)反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.60g，1.36mmol)、N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，2.72mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.094g，0.082mmol)和碳酸鈉(0.35g，3.27mmol)與乙二醇二甲醚(14mL)和水(7mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5 to 70∶30)作為流動(dòng)相，得到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.264g，35％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(s，9H)，1.97(m，6H)，2.16(s，3H)，2.33(m，5H)，2.53(m，4H)，3.84(s，3H)，4.64(m，1H)，7.60(d，J＝6.78Hz，1H)，7.83(d，J＝11.96Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.24(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA single QuadMS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝555.3，Rt＝2.00min。
實(shí)施例445
反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下將三氟乙酸/二氯甲烷的混合物(20∶80，7mL)加入到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.451mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌4小時(shí)。再蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入飽和碳酸氫鈉以調(diào)節(jié)pH至8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(179mg，87％)。1H NMR(CDCl3)δ1.56(m，2H)，2.15(m，7H)，2.31(s，3H)，2.51(m，4H)，2.67(m，4H)，3.88(s，3H)，4.16(bs，2H)，4.74(m，1H)，5.64(bs，2H)，6.56(d，J＝10.84Hz，1H)，6.88(d，J＝6.55Hz，1H)，8.33(s，1H)。LCMS(ThermoquestAQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝455.2，Rt＝0.63min。
實(shí)施例446反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)-反-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺在0℃下將存在于二氯甲烷(0.3mL)中的反-2-苯基-1-環(huán)丙烷羰基氯(32mg，0.176mmol)加入到反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(80mg，0.176mmol)的吡啶(1.5mL)溶液中。5分鐘后，除去冰水浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌3小時(shí)。再加入反-2-苯基-1-環(huán)丙烷羰基氯(32mg，0.176mmol)以保證此反應(yīng)進(jìn)行完全。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物通過急驟柱色譜純化得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(93mg，88％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.35(m，1H)，1.50(m，3H)，1.98(m，6H)，2.19(s，3H)，2.37-2.68(m，11H)，3.87(s，3H)，4.64(m，1H)，7.09(m，1H)，7.21(m，3H)，7.31(m，2H)，8.21(m，2H)，9.82(m，1H)。LCMS(ThermoquestAQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝599.3，Rt＝1.97min。
實(shí)施例447N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯a)3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.5g，1.45mmol)、甲醛(30％在水中，0.16mL，1.60mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.43g，2.03mmol)在二氯乙烷(5mL)中混合。4小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉，接著加入氫氧化鈉(1.0N)以使pH為10。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.275g，53％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.85(m，2H)，2.09(m，4H)，2.22(s，3H)，2.88(m，2H)，4.75(m，1H)，8.19(s，1H)，8.32(s，1H)。
b)N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯將3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(270mg，0.754mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(290mg，0.829mmol)、四(三苯基膦)鈀(52mg，0.045mmol)和碳酸鈉(192mg，1.81mmol)與乙二醇二甲醚(8mL)和水(4mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(90∶10 to 70∶30)作為流動(dòng)相，得到N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(250mg，73％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(s，9H)，1.88(m，2H)，2.10(m，2H)，2.24(m，5H)，2.92(m，2H)，3.69(s，3H)，4.64(m，1H)，7.21(m，2H)，7.91(d，J＝8.16Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.23(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQAsingle Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝454.2，Rt＝1.67min。
實(shí)施例448N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽(3R)-3-苯基丁?；葘-3-苯基丁酸(0.755g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物在室溫、氮?dú)夥障聯(lián)u動(dòng)15小時(shí)。該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的(3R)-3-苯基丁?；取４擞蜖钗镏苯佑糜谝韵碌姆磻?yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用(3R)-3-苯基丁?；?0.420g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫、氮?dú)夥障聰嚢琛?3R)-3-苯基丁?；?0.210g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物中并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.378g(57％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺(0.378g，0.649mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.226g，1.95mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3R)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.200(s，1H)，8.263(s，1H)，8.1747-8.1543(d，1H，J＝8.16Hz)，7.312-7.282(m，4H)，7.235-7.232(s，1H)，7.211-7.168(m，2H)，6.114(s，6H)，5.061(m，1H)，3.890(s，3H)，3.301(m，4H)，2.997(m，2H)，2.783-2.741(m，6H)，2.541(m，8H)，2.261-2.185(m，4H)，1.879(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.64min(100％)。
實(shí)施例449N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽苯并[b]呋喃-2-羰基氯將2-苯并呋喃甲酸(0.746g，4.6mmol)在二氯甲烷(3mL)中的懸浮液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的苯并[b]呋喃-2-羰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液在-5℃下用苯并[b]呋喃-2-羰基氯(0.415g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫下氮?dú)夥障聰嚢?。將苯并[b]呋喃-2-羰基氯(0.207g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.143g(21％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺(0.143g，0.246mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.086g，0.739)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-苯并[b]呋喃-2-甲酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.518(s，1H)，8.282(s，1H)，8.2652-8.2447(d，1H，J＝8.2Hz)，7.849-7.814(m，2H)，7.7813-7.7603(d，1H，J＝8.4Hz)，7.562-7.523(m，1H)，7.418-7.369(m，2H)，7.338-7.313(m，1H)，6.088(s，5H)，5.10-5.00(m，1H)，4.003(s，3H)，3.529(m，4H)，3.314(m，2H)，2.971(m，2H)，2.778(s，3H)，2.497(m，3H)，2.209(m，4H)，1.909(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.73min(100％)。
實(shí)施例450N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽(3S)-3-苯基丁?；葘-3-苯基丁酸(0.755g，4.6mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物在室溫、氮?dú)夥障聯(lián)u動(dòng)15小時(shí)。該反應(yīng)混合物搖動(dòng)15小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的(3S)-3-苯基丁?；取４擞蜖钗镏苯佑糜谝韵碌姆磻?yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用(3S)-3-苯基丁酰基氯(0.420g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?。?3S)-3-苯基丁?；?0.210g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.455g(68％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺(0.455g，0.782mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.272g，2.35)的乙酸乙酯的溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(3S)-3-苯基丁酰胺三馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.199(s，1H)，8.261(s，1H)，8.1733-8.1528(d，1H，J＝8.2Hz)，7.312-7.282(m，4H)，7.236-7.232(m，1H)，7.211-7.168(m，2H)，6.094(s，6H)，5.046(m，1H)，3.890(s，3H)，3.534(m，4H)，2.994(m，2H)，2.784-2.740(m，6H)，2.506-2.470(m，8H)，2.442-2.200(m，4H)，1.855(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecospher C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.64min(100％)。
實(shí)施例451N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯
4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.00g，7.66mmol)在二甲基甲酰胺(40mL)中的懸浮液，用碳酸銫(3.74g，11.49mmol)和對(duì)氟硝基苯(1.08g，7.66mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。將此反應(yīng)混合物加入到冰中。濾出沉淀并用水洗滌。將產(chǎn)物4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶凍干過夜，得到2.55g(87％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.4952-8.4720(m，2H)，8.4142-8.3654(m，3H)；LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝3.73min(100％)M+380.6。
N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將4-氨基-1-[4-硝基苯基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(0.500g，1.31mmol)在二甲基甲酰胺(8mL)中的懸浮液，用N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.915g，2.62mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.091g，0.06mmol)及碳酸鈉(0.333g，3.14mmol)的水(4mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在85℃下在氮?dú)夥障聰嚢?6小時(shí)。將水加入到此反應(yīng)混合物中。過濾此沉淀并用水洗滌。將此固體用乙醚研磨得到0.431g(63％)的N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.6862-8.6634(d，2H，J＝9.12Hz)，8.4897-8.4423(m，3H)，8.1117(s，1H)，8.0074-7.9872(d，1H，J＝8.08Hz)，7.3743-7.3293(m，2H)，3.9189(s，3H)，1.4959(s，9H)；LCMS(Perkin Elmer，PecosphereC18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝4.38min M+478.1。
實(shí)施例4524-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶將N-(4-{4-氨基-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，0.808mmol)在二氯甲烷(8mL)中的懸浮液，在0℃下用三氟乙酸(1.6mL)處理。該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后除去冰浴，在室溫、氮?dú)夥障聰嚢琛⒃摲磻?yīng)混合物攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。將二氯甲烷(15mL)和氫氧化鈉1N溶液加入到此油狀物殘余物。將所形成的沉淀過濾并凍干過夜得到0.286g(94％)的4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-硝基苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.7826-8.759(m，2H)，8.4892-8.4296(m，3H)，7.1861-7.1338(m，2H)，6.8320-6.8121(d，1H，J＝7.96Hz)，5.2225(s，2H)，3.8672(s，3H)；LCMS(Perkin Elmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)tR＝3.48min M+377.6。
實(shí)施例453N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯將1-甲基吲哚基-2-甲酸(0.805g，4.6mmol)在二氯甲烷(3mL)的懸浮液，用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)18小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用1-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯(0.445g，2.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘，然后除去干冰/丙酮浴并在室溫下氮?dú)夥障聰嚢?。?-甲基-1H-2-吲哚基羰基氯(0.221g，1.15mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌過夜。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(20mL)。分層，并將水層用二氯甲烷(125mL)萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)(10min)、存在于二氯甲烷的20％(含2％氫氧化銨的甲醇)(15min)、存在于二氯甲烷的50％(含2％氫氧化銨的甲醇)(7min)洗脫，得到0.463g(68％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺(0.463g，0.781mmol)的乙酸乙酯溫溶液用馬來酸(0.272，2.34mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾此沉淀，并凍干得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1-甲基-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.4495(s，1H)，8.2848(s，1H)，8.1505-8.1301(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7232-7.7034(d，1H，J＝7.92Hz)，7.6054-7.5844(d，1H，J＝8.4Hz)，7.3583-7.3012(m，4H)，7.1778-7.1406(m，1H)，6.0804(s，4H)，5.10-5.00(m，1H)，4.0403(s，3H)，3.9614(s，3H)，3.5336(m，4H)，3.1879(m，2H)，2.9937(m，2H)，2.7836(s，3H)，2.4979(m，3H)，2.2157(m，4H)，1.8513(m，2H)；HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(Perkin Elmer，PecosphereC18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.76min(100％)。
實(shí)施例454
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽1H-2-吲哚基羰基氯將吲哚基-2-甲酸(0.742g，4.6mmol)在二氯甲烷(3mL)的懸浮液，用草酰氯(0.700g，5.52mmol)和1滴二甲基甲酰胺處理。將該反應(yīng)混合物搖動(dòng)18小時(shí)。減壓除去溶劑并高真空下干燥，得到定量的1H-2-吲哚基羰基氯。此油狀物直接用于以下的反應(yīng)。
N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽將3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.15mmol)的吡啶(8mL)溶液，在-5℃下用1H-2-吲哚基羰基氯(0.413g，2.3mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌20分鐘。除去干冰/丙酮浴并將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。加入1H-2-吲哚基羰基氯(0.207g，1.15mmol)并再攪拌2小時(shí)。加入氫氧化鈉(1N)溶液(10mL)并攪拌30分鐘。減壓除去有機(jī)溶劑，并加入二氯甲烷(25mL)。分層，并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并在減壓下得到粗品N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺在硅膠上通過急驟色譜純化，用存在于二氯甲烷的15％(含2％氫氧化銨的甲醇)洗脫仍得到粗品。第二此過柱用梯度10％(含2％氫氧化銨的甲醇)至50％(含2％氫氧化銨的甲醇)洗脫，得到0.139g(21％)純N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺。將N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺(0.139g，0.24mmol)在溫乙酸乙酯中用馬來酸(0.083g，0.719mmol)的乙酸乙酯溫溶液處理。在氮?dú)夥障逻^濾所形成的沉淀得到0.166g的N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲基哌啶-4-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基))-1H-2-吲哚基甲酰胺二馬來酸鹽。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.83(s，1H)，9.442(s，1H)，8.283(s，1H)，8.154-8.134(d，1H，J＝8.12Hz)，7.694-7.674(d，1H，J＝8.04Hz)，7.498-7.477(d，1H，J＝8.20Hz)，7.407-7.402(m，1H)，7.352-7.325(m，2H)，7.267-7.229(m，1H)，7.112-7.074(m，1H)，6.078(s，4H)，5.10-5.00(m，1H)，3.974(s，3H)，3.525(m，4H)，3.178(m，2H)，2.975(m，2H)，2.771(s，3H)，2.457(s，3H)，2.208(m，4H)，1.909(m，2H)；HPLC Perkin ElmerPecosphere C18，3μM，33×4.6，3.5ml/min 100-100％50mM醋酸銨至乙腈，在4.5分鐘內(nèi)，C36H44N6O3(581.2)，95％。LCMS(PerkinElmer，Pecosphere C18柱，3μm粒度，33×4.6mm；100％50mM醋酸銨水溶液至100％乙腈，在5分鐘內(nèi)，3.0至3.5mil/min)Rt2.67min(100％)。
實(shí)施例4553-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.0g，11.5mmol)在二甲基甲酰胺(50mL)中的懸浮液用碳酸銫(5.62g，17.25mmol)和三苯基甲基氯(3.85g，13.8mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在70℃下在氮?dú)夥障聰嚢?2.5小時(shí)。將碳酸銫(3.75g，11.5mmol)和三苯基甲基氯(3.2g，11.5mmol)加入到該反應(yīng)混合物并攪拌6.5小時(shí)。該反應(yīng)混合物加入到冰水。過濾此沉淀并用水洗滌。將產(chǎn)物3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺凍干過夜。所得固體用乙酸乙酯研磨得到3.05g(53％)的3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.3190-7.1106(m，16H)；TLC(BakerPre-coated Hard Layer硅膠TLC板，Si250F254，30％乙酸乙酯在庚烷中)Rf＝0.33。
3-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.0g，1.99mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液，用苯基羥基代硼酸(0.485g，3.8mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.138g，0.119mmol)及碳酸鈉(0.506g，4.78mmol)的水(10mL)溶液處理。將該反應(yīng)混合物在80℃下在氮?dú)夥障聰嚢?8.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入水(15mL)。過濾此沉淀并用水洗滌。粗品固體用乙醚(30mL)研磨。將所得固體凍干過夜得到0.407g(45％)的3-苯基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.9416(s，1H)，7.6190-7.6011(m，2H)，7.5369-7.4493(m，3H)，7.3995-7.2248(m，15H)；HPLC Waters 2690 Alliance HPLC(Symmetry Shield RP183.5μm，2.1×50mm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在15分鐘內(nèi)，0.5mL/min)Rt＝11.813min(97％)。
實(shí)施例456N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(3R)-3-苯基丁酰胺在-10℃下將存在于二氯甲烷(10mL)的(3R)-3-苯基丁?；?2.22g，12.18mmol)，加入到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(2.86g，8.12mmol)的吡啶(50mL)溶液中。15分鐘后，除去冰水浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。加入氫氧化鈉(1.0N，15mL)并蒸發(fā)有機(jī)溶劑。將此含水殘余物用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作為流動(dòng)相，得到N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(3R)-3-苯基丁酰胺(3.11g，77％)。1H NMR(CDCl3)δ1.40(d，J＝6.97Hz，3H)，2.04(m，1H)，2.59-2.78(m，9H)，3.40(m，1H)，3.98(s，3H)，5.28(m，1H)，5.70(bs，2H)，7.15-7.35(m，7H)，7.66(s，1H)，8.38(s，1H)，8.51(d，J＝8.18，1H)。HPLC(Waters Alliance-柱WatersSymmetryShield，RP18，3.5μm，2.1×50mm。洗脫劑5％B/A至95％B/Ain 9.0min，(B乙腈，A100mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.5mL/min.)Rt＝6.273min。
實(shí)施例457{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.0g，6.59mmol)與4-氟苯甲醛(1.06mL，9.89mmol)、碳酸銫(4.30g，13.19mmol)在DMF(6mL)中混合。將該反應(yīng)混合物在86℃下加熱過夜。冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混合物倒入到冰水中。過濾收集固體得到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(2.46g，92％)。1H NMR(CDCl3)δ7.19(m，5H)，7.46(m，2H)，7.78(d，J＝8.64Hz，2H)，8.10(d，J＝8.70Hz，2H)，8.44(s，1H)，8.59(d，J＝8.70Hz，2H)，10.03(s，1H)。
b){4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇將硼氫化鈉(19mg，0.491mmol)加入到4-[4氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(100mg，0.245mmol)的甲醇(2mL)溶液中。16小時(shí)后，加入THF(1mL)和硼氫化鈉(19mg，0.491mmol)。5小時(shí)后，除去溶劑并加入水。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(80∶20至100∶0)作為流動(dòng)相，得到{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯基}甲醇(36mg，36％)。1H NMR(DMSO-d6)δ4.56(s，2H)，5.27(bs，1H)，7.16(m，5H)，7.47(m，4H)，7.76(d，J＝8.64Hz，2H)，8.18(d，J＝8.52，2H)，8.37(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA singleQuad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝410.1，Rt＝2.43min。
實(shí)施例4581-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將三乙酰氧基硼氫化鈉(67mg，0.319mmol)加入到4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲醛(100mg，0.245mmol)、4-甲基哌嗪(37mg，0.369mmol)、冰醋酸(35mg，0.589mmol)在二氯乙烷(4mL)中的混合物中。室溫下攪拌過夜后，再加入三乙酰氧基硼氫化鈉(67mg，0.319mmol)并將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。加入水(2mL)，并接著加入碳酸氫鈉(250mg)。劇烈攪拌1小時(shí)后，分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(97∶3至80∶20)作為流動(dòng)相，得到1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(25mg，21％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.30(s，3H)，2.48(bm，8H)，3.56(s，3H)，5.75(bs，2H)，7.11(d，J＝8.50，2H)，7.18(m，3H)，7.40(m，2H)，7.48(d，J＝8.50Hz，2H)，7.29(d，J＝8.63Hz，2H)，8.12(d，J＝8.50Hz，2H)，8.47(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝492.2，Rt＝2.97min。
實(shí)施例459N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯c)1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯在0℃下將叔丁醇鉀(1.0N在THF中，38mL，38mmol)加入到存在于THF(30mL)的甲醇(1.54mL，38.0mmol)。30分鐘后，在-78℃下將絮狀溶液通過導(dǎo)管加入到1-溴-2，5-二氟-4-硝基苯(9.04g，38.0mmol)的THF(27mL)溶液中。30分鐘后，除去冷卻浴并將該反應(yīng)混合物升溫至0℃。加入水(250mL)，并在10分鐘后，除去有機(jī)溶劑。過濾收集固體得到1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(9.28g，98％)。1H NMR(CDCl3)δ3.97(s，3H)，7.30(d，J＝5.48Hz，2H)，7.71(d，J＝7.58Hz，2H)。
d)4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺在80℃下分三批將亞硫酸氫鈉(14.7g，84.4mmol)加入到1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(9.28g，37.12mmol)在乙醇(180mL)和水(130mL)的溶液中。5小時(shí)后，除去有機(jī)溶劑并通過過濾收集水層中的固體。將此固體進(jìn)一步用庚烷/乙酸乙酯(3∶2，400mL)洗滌。將濾液蒸發(fā)得到4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺(3.29g，40％)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.75(s，3H)，5.22(s，2H)，6.56(d，J＝10.68Hz，2H)，6.94(d，J＝6.57Hz，2H)。
c)N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將二-叔丁基二碳酸酯(3.42g，15.70mmol)與4-溴-5氟-2-甲氧基苯胺(3.29g，14.95mmol)在THF(30mL)中混合。將該反應(yīng)混合物在65℃下加熱3天，每天加入二碳酸二叔丁基酯(3.42g，15.70mmol)。除去溶劑后，殘余物通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5至85∶15)作為流動(dòng)相，得到所需產(chǎn)物N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯和二碳酸二叔丁基酯的混合物(10.4g)。在0℃下將氫氧化鈉(50％溶液，2.0mL)加入到存在于甲醇(30mL)的此混合物中，并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。除去溶劑后，加入水并將水層用庚烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.24g，89％)。1H NMR(CDCl3)δ1.52(s，9H)，3.85(s，3H)，6.93(d，J＝6.10Hz，1H)，7.06(s，1H)，8.01(d，J＝10.4Hz，1H)。
d)N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.24g，13.26mmol)、乙硼烷頻哪醇酯(4.04g，15.91mmol)、醋酸鉀(3.90g，39.78mmol)和[1，1′-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)二氯鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(0.32g，0.40mmol)在DMF(75mL)中在85℃加熱過夜。加入乙硼烷頻哪醇酯(2.02g，7.96mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)二氯鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(0.32g，0.40mmol)，并再繼續(xù)加熱5小時(shí)。除去溶劑后，將此黑色殘余物溶解于二氯甲烷，并通過硅藻土過濾。粗品混合物通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5至85∶15)作為流動(dòng)相，得到N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和乙硼烷頻哪醇酯的混合物(1∶1，4.23g)，其不經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。
e)反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.60g，1.36mmol)、N-[5-氟-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸酯(1.0g，2.72mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.094g，0.082mmol)和碳酸鈉(0.35g，3.27mmol)與乙二醇二甲醚(14mL)和水(7mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5 to 70∶30)作為流動(dòng)相，得到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.264g，35％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.49(s，9H)，1.97(m，6H)，2.16(s，3H)，2.33(m，5H)，2.53(m，4H)，3.84(s，3H)，4.64(m，1H)，7.60(d，J＝6.78Hz，1H)，7.83(d，J＝11.96Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.24(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝555.3，Rt＝2.00min。
實(shí)施例460反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺在0℃下將三氟乙酸/二氯甲烷的混合物(20∶80，7mL)加入到反-N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.451mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液中。15分鐘后，除去冰浴并將該反應(yīng)混合物室溫下攪拌4小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷。加入飽和碳酸氫鈉以調(diào)節(jié)pH至8。分層并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(179mg，87％)。1H NMR(CDCl3)δ1.56(m，2H)，2.15(m，7H)，2.31(s，3H)，2.51(m，4H)，2.67(m，4H)，3.88(s，3H)，4.16(bs，2H)，4.74(m，1H)，5.64(bs，2H)，6.56(d，J＝10.84Hz，1H)，6.88(d，J＝6.55Hz，1H)，8.33(s，1H)。LCMS(ThermoquestAQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝455.2，Rt＝0.63min。
實(shí)施例461反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)-反-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺在0℃下將存在于二氯甲烷(0.3mL)中的反-2-苯基-1-環(huán)丙基羰基氯(32mg，0.176mmol)加入到反-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(80mg，0.176mmol)的吡啶(1.5mL)溶液中。5分鐘后，除去冰水浴，并將此反應(yīng)混合物室溫下攪拌3小時(shí)。再加入反-2-苯基-1-環(huán)丙基羰基氯(32mg，0.176mmol)以保證反應(yīng)進(jìn)行完全。蒸發(fā)溶劑，并將此殘余物通過急驟柱色譜純化，得到反-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(93mg，88％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.35(m，1H)，1.50(m，3H)，1.98(m，6H)，2.19(s，3H)，2.37-2.68(m，11H)，3.87(s，3H)，4.64(m，1H)，7.09(m，1H)，7.21(m，3H)，7.31(m，2H)，8.21(m，2H)，9.82(m，1H)。LCMS(ThermoquestAQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A，在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝599.3，Rt＝1.97min。
實(shí)施例462N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯b)3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.5g，1.45mmol)、甲醛(30％在水中，0.16mL，1.60mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.43g，2.03mmol)在二氯乙烷(5mL)中混合。4小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉，接著加入氫氧化鈉(1.0N)，使pH至10。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.275g，53％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.85(m，2H)，2.09(m，4H)，2.22(s，3H)，2.88(m，2H)，4.75(m，1H)，8.19(s，1H)，8.32(s，1H)。
b)N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯將3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(270mg，0.754mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(290mg，0.829mmol)、四(三苯基膦)鈀(52mg，0.045mmol)和碳酸鈉(192mg，1.81mmol)與乙二醇二甲醚(8mL)和水(4mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。減壓除去有機(jī)溶劑并將水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(90∶10至70∶30)作為流動(dòng)相，得到N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(250mg，73％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.48(s，9H)，1.88(m，2H)，2.10(m，2H)，2.24(m，5H)，2.92(m，2H)，3.69(s，3H)，4.64(m，1H)，7.21(m，2H)，7.91(d，J＝8.16Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.23(s，1H)。LCMS(ThermoquestAQA single Quad MS，F(xiàn)innigan HPLC-柱Genesis，C18，3μm，33×4.6mm。洗脫劑30％B/A至95％B/A在4.5分鐘內(nèi)，(B乙腈，A50mM醋酸銨緩沖液，pH4.5)，0.8mL/min.)MH+＝454.2，Rt＝1.67min。
實(shí)施例463反-3-{4-[(2-氯芐基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A(反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的還原烷基化的總方法)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.46(d，1H)，7.30(m，3H)，7.08(s，1H)，7.01(d，1H)，6.42(d，1H)，5.96(t，1H)，4.59(m，1H)，4.45(d，2H)，3.90(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.22min。
MSMH+561。
實(shí)施例464反-3-{3-甲氧基-4-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.76(d，1H)，7.59(d，1H)，7.08(s，1H)，7.02(d，1H)，6.59(d，1H)，6.27(t，1H)，4.68(d，2H)，4.61(m，1H)，3.89(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.09min。
MSMH+534。
實(shí)施例465反-3-(3-甲氧基-4-[(3-甲基-1H-4-吡唑基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.47(s，1H)，7.06(m，3H)，6.74(d，1H)，5.08(t，1H)，4.61(m，1H)，4.13(d，2H)，3.84(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.25(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.65min。
MSMH+531。
實(shí)施例466反-3-{3-甲氧基-4-[(2-噻吩基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.36(d，1H)，7.01(m，4H)，6.71(d，1H)，5.87(t，1H)，4.61(m，3H)，3.86(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/mi n)Rt13.61min。
MSMH+533。
實(shí)施例467反-3-(3-甲氧基-4-[(5-甲基-2-噻吩基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.04(m，2H)，6.84(d，1H)，6.70(d，1H)，6.62(d，1H)，5.77(t，1H)，4.61(m，1H)，4.47(d，2H)，3.86(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.37(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.66min。
MSMH+547。
實(shí)施例468反-3-(4-[(5-氯-2-噻吩基)甲基]氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.04(m，2H)，6.95(s，1H)，6.69(d，1H)，5.99(t，1H)，4.61(m，1H)，4.50(d，2H)，3.86(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt15.04min。
MSMH+567。
實(shí)施例469
反-3-(3-甲氧基-4-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)2-甲基-1，3-噻唑-4-甲醛向4-氯甲基-2-甲基-1，3-噻唑(1.91g，0.0129mol)的甲苯(50mL)溶液中，加入N-甲基嗎啉-N-氧化物(4.55g，0.0389mol)并將該反應(yīng)混合物在90℃下加熱4小時(shí)。加入N-甲基嗎啉-N-氧化物(1.60g，0.0137mol)并繼續(xù)再加熱1.5小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫，用水(3×50mL)洗滌并濃縮得到2-甲基-1，3-噻唑-4-甲醛(1.40g，0.011mol)，為棕色液體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.87(s，1H)，8.57(s，1H)，2.72(s，3H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.26b)反-3-(3-甲氧基-4-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟A1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.21(s，1H)，7.06(m，2H)，6.66(d，1H)，5.70(t，1H)，4.60(m，1H)，4.41(d，2H)，3.87(s，3H)，2.64(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.71min。
MSMH+548。
實(shí)施例470反-3-{4-[(1H-7-吲哚基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C(反-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的還原烷基化的總方法)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.14(s，1H)，8.18(s，1H)，7.44(d，1H)，7.37(m，3H)，7.12(d，1H)，6.97(t，1H)，6.77(d，2H)，6.55(t，1H)，6.46(m，1H)，4.60(m，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.68min。
MSMH+536。
實(shí)施例471反-3-{4-[(2-氯-6-氟芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMS0-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.41(m，4H)，7.29(t，1H)，6.83(d，2H)，6.26(t，1H)，4.61(m，1H)，4.37(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.46min。
MSMH+549。
實(shí)施例472反-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-3-(4-[(5-甲基-1H-4-吡唑基)甲基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽步驟C1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.49(s，1H)，7.35(d，2H)，6.76(d，2H)，6.07(t，1H)，4.59(m，1H)，4.06(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.21(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt10.15min。
MSMH+501。
實(shí)施例473反-3-{4-[(2-氨基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)N-[2-(羥基甲基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯向二碳酸二叔丁基酯(23.04g，0.106mol)的無水二氯甲烷(150mL)溶液中，在0℃下加入2-氨基芐基醇(10.0g，0.0812mol)并將所得混合物在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢?8小時(shí)。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×250mL)洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)作為流動(dòng)相，得到N-[2-(羥基甲基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(17.2g，0.077mol)，為無色油狀物。
1H NMR(DMS0-d6，400MHz)δ8.52(s，1H)，7.57(d，1H)，7.30(d，1H)，7.22(t，1H)，7.04(t，1H)，5.42(t，1H)，4.51(d，2H)，1.46(s，9H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf0.28b)N-(2-甲?；交?氨基甲酸叔丁基酯將吡啶鎓氯鉻酸鹽在堿性氧化鋁中的20％分散液(50g)加入到N-[2-(羥基甲基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(11.0g，0.0493mol)的無水氯仿溶液中并將所得混懸液在氮?dú)夥障率覝叵聰嚢?小時(shí)。再加入16g的吡啶鎓氯鉻酸鹽的堿性氧化鋁分散液，并繼續(xù)攪拌45分鐘。此時(shí)，再加入15g的吡啶鎓氯鉻酸鹽在堿性氧化鋁中的20％分散液并繼續(xù)攪拌25分鐘。將所得混懸液通過硅膠墊過濾，將此濾液減壓濃縮并將此殘余物通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶98)作為流動(dòng)相，得到N-(2-甲?；交?氨基甲酸叔丁基酯(8.67g，0.0392mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.31(s，1H)，9.95(s，1H)，8.18(d，1H)，7.87(d，1H)，7.67(t，1H)，7.24(t，1H)，1.49(s，9H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.56c)反-N-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]苯基氨基甲酸叔丁基酯乙酸鹽步驟C1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.69(s，1H)，8.18(s，1H)，7.33(m，4H)，7.18(t，1H)，7.12(t，1H)，6.68(d，2H)，6.51(t，1H)，4.58(m，1H)，4.30(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.47(s，9H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.73min。
d)反-3-{4-[(2-氨基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽在0℃下將反-N-2-[(4-4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯氨基)甲基]苯基氨基甲酸叔丁基酯乙酸鹽(0.080g，0.000118mol)溶解于二氯甲烷(4mL)，并滴加三氟乙酸(1mL)。將此混合物在室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)，減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-{4-[(2-氨基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.067g，0.000106mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.35(d，2H)，7.09(d，1H)，6.95(t，1H)，6.73(d，2H)，6.66(d，1H)，6.53(d，1H)，6.36(t，1H)，4.97(br，1H)，4.58(m，1H)，4.13(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.87min。
MSMH+512。
實(shí)施例474反-N1-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]苯基乙酰胺二乙酸鹽向反-3-{4-[(2-氨基芐基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.050g，0.000079mol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，在0℃下依次加入N，N-二異丙基乙胺(0.041g，0.000316mol)和乙酸酐(0.011g，0.000103mol)并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。將此混合物減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-N1-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯氨基)甲基]苯基乙酰胺二乙酸鹽(0.010g，0.0000148mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.48(s，1H)，8.18(s，1H)，7.35(m，4H)，7.20(m，1H)，7.13(m，1H)，6.66(d，2H)，6.53(t，1H)，4.58(m，1H)，4.29(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.08(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.67min。
MSMH+554。
實(shí)施例475反-3-[3-氯-4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽a)N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯將4-溴-2-氯苯胺(5.00g，0.0242mol)的四氫呋喃(50mL)溶液與1.0M的雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉的四氫呋喃溶液(53.2mL，0.0532mol)反應(yīng)。將此混合物室溫下攪拌15分鐘。加入二碳酸二叔丁基酯(6.34g，0.0290mol)并將溶液攪拌2小時(shí)。真空下除去溶劑，粗品物質(zhì)在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脫。真空下除去溶劑得到N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯，為白色固體(4.214g，0.0137mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.75(s，1H)，7.71(d，1H)，7.54(d，1H)，7.50(dd，5H)，1.46(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯4∶1)Rf0.54。
b)N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.10g，0.00685mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.09g，0.00822mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.17g，0.00021mol)和醋酸鉀(2.02g，0.02055mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物用庚烷(70mL)研磨并將固體通過硅藻土板濾出。真空下除去庚烷得到N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯，為灰色固體(1.93g，0.00546mol)。
1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.65(s，1H)，7.74(d，1H)，7.61(d，1H)，7.56(dd，1H)，1.47(s，9H)，1.29(s，12H)。
c)反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯將反式3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.20g，0.00498mol)、N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸酯(1.93g，0.00548mol)、碳酸鈉(1.32g，0.01245mol)在1，2-二甲氧基乙烷(50mL)和水(100mL)中的混合物，快速攪拌并加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.345g，0.00030mol)。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌6小時(shí)，之后再加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.345g，0.00030mol)。該反應(yīng)混合物在80℃下再攪拌16小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(100mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)之間分配。進(jìn)行相分離并將水相用乙酸乙酯(3×75mL)萃取。將合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。產(chǎn)物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨(90∶10∶0.5)洗脫。真空下除去溶劑得到反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯，為白色固體(1.993g，0.00368mol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.76(s，2H)，8.23(s，1H)，7.80(d，1H)，7.68(d，1H)，7.57(dd，1H)，4.58-4.71(m，1H)，2.15(2，3H)，1.89-2.61(m，15H)，1.49(s，9H)，1.40-1.48(m，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90∶10)Rf0.13，MSMH+541。
d)反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.993g，0.00368mol)加入到20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液中。將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物溶解于二氯甲烷(50mL)，并用1.0M氫氧化鈉水溶液(2×25mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空下除去溶劑得到反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.564g，0.00355mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ8.20(s，1H)，7.45(d，1H)，7.31(dd，1H)，6.92(d，1H)，4.57-4.63(m，1H)，2.23-2.55(m，9H)，2.14(s，3H)，1.89-2.08(m，6H)，1.38-1.52(m，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90∶10)Rf0.08，MSMH+441。
e)反-3-[3-氯-4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽將水楊醛(0.033g，0.000274mol)和反-3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.115g，0.000261mol)在無水乙醇中混合并在室溫下攪拌48小時(shí)。將該反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮并將此殘余物干燥過夜，得到反-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)亞氨基]甲基苯酚，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。將氧化锍三甲基碘(0.110g，0.0005mol)溶解于無水二甲基亞砜(2mL)，并立即加入氫化鈉在石蠟中的60％分散液(0.02g，0005mol)。10分鐘后，加入反-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)亞氨基]甲基苯酚的無水二甲基亞砜(2 mL)溶液，并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將此溶液倒入到冰冷的水(50mL)中并用二氯甲烷(2×40mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-[3-氯-4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽(0.044g，0.000071mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.21(s，1H)，7.55(s，1H)，7.45(d，1H)，7.38(d，1H)，7.25(t，1H)，7.11(d，1H)，6.89(m，2H)，5.70(d，1H)，5.54(m，1H)，4.83(t，1H)，4.61(m，1H)，4.41(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.94min。
MSMH+559。
實(shí)施例476反-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將水楊醛(0.034g，0.000282mol)和反-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.117g，0.000268mol)在純乙醇中混合，并室溫下攪拌48小時(shí)。該反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮并將此殘余物干燥過夜，得到反-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)亞氨基]甲基苯酚，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。將氧化锍三甲基碘(0.145g，0.00068mol)溶解于無水二甲基亞砜(2mL)，并立即加入氫化鈉在石蠟中的60％分散液(0.027g，00068mol)。10分鐘后，加入反-2-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)亞氨基]甲基酚的無水二甲基亞砜(2mL)溶液，并將所得混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將此溶液倒入到冰冷的水(50mL)中并用二氯甲烷(2×40mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-[4-(2，3-二氫苯并[b]呋喃-3-基氨基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.096g，0.000142mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.21(s，1H)，7.38(d，1H)，7.25(t，1H)，7.11(m，2H)，6.89(m，3H)，5.42(m，1H)，5.18(d，1H)，4.77(t，1H)，4.61(m，1H)，4.37(m，1H)，3.83(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.16min。
MSMH+555。
實(shí)施例477反式-3-[4-(3-甲基-5-苯基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽a)1-(4-溴苯基)-3-甲基-5-苯基-4，5-二氫-1H-吡唑向1-苯甲?；?3.63g，0.0224mol)和N，N-二異丙基乙胺(2.88g，0.0224mol)的無水甲醇(160mL)溶液中，加入4-溴苯基肼鹽酸鹽并將所得混合物室溫下攪拌20小時(shí)。減壓除去溶劑并將所得混合物在5％枸櫞酸水溶液(200mL)和乙酸乙酯(150mL)之間分配。將有機(jī)相依次用水(2×200mL)和鹽水(150mL)洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。所得殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到1-(4-溴苯基)-3-甲基-5-苯基-4，5-二氫-1H-吡唑(4.05g，0.0129mol)，為米白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.58(d，2H)，7.36(m，3H)，7.21(d，2H)，7.17(d，2H)，6.46(s，1H)，2.72(s，3H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.41b)3-甲基-5-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-4，5-二氫-1H-吡唑?qū)?-(4-溴苯基)-3-甲基-5-苯基-4，5-二氫-1H-吡唑(2.17g，0.00693mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.11g，0.00832mol)、[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)的復(fù)合物(0.170g，0.000207mol)和醋酸鉀(2.03g，0.0207mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(70mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土板濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨并過濾收集沉淀得到3-甲基-5-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-4，5-二氫-1H-吡唑(1.00g，0.00278mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.65(d，2H)，7.36(m，3H)，7.21(m，4H)，6.46(s，1H)，2.79(s，3H)，1.29(s，12H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶5)Rf0.27c)反-3-[4-(3-甲基-5-苯基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽將3-甲基-5-苯基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-4，5-二氫-1H-吡唑(0.102g，0.000283mol)、反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.104g，0.000236mol)、四-(三苯基膦)鈀(0.016g，0.000014mol)和碳酸鈉一水合物(0.073g，0.00055mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-[4-(3-甲基-5-苯基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸鹽(0.094g，0.000141mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.64(d，2H)，7.37(m，7H)，6.49(s，1H)，4.63(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.30(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt14.10min。
MSMH+548。
實(shí)施例478反-3-[4-(5-乙氧基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽a)1-(4-溴苯基)-1H-5-吡唑基乙醚將乙?；宜嵋阴?3.49g，0.02684mol)和4-溴苯基肼鹽酸鹽(6.00g，0.02684mol)在乙酸(50mL)中回流4小時(shí)。過濾除去沉淀，將此濾液減壓濃縮并將此殘余物通過急驟色譜在硅膠上純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相，得到1-(4-溴苯基)-1H-5-吡唑基乙醚(2.63g，0.00936mol)，為米白色固體。
1H NMR(CDCl3-d6，400MHz)δ7.61(d，2H)，7.49(d，2H)，7.26(s，1H)，5.47(s，1H)，4.14(q，2H)，2.26(s，3H)，1.44(t，3H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.24b)5-乙氧基-3-甲基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1H-吡唑?qū)?-(4-溴苯基)-1H-5-吡唑基乙醚(2.22g，0.00791mol)、乙硼烷頻哪醇酯(2.41g，0.00949mol)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯鈀(II)與二氯甲烷(1∶1)復(fù)合物(0.194g，0.000237mol)和醋酸鉀(2.32g，0.0237mol)在N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中的混合物，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。讓此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將二氯甲烷(70mL)加入到此殘余物中并將所得固體通過硅藻土墊濾出。濃縮此濾液得到黃色油狀物，其在硅膠上通過急驟色譜純化，用乙酸乙酯/正庚烷(7∶93)作為流動(dòng)相。將所得餾份濃縮，殘余物在正庚烷中研磨，并過濾收集沉淀得到5-乙氧基-3-甲基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1H-吡唑(0.604g，0.00184mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.72(s，4H)，5.72(s，1H)，4.18(q，2H)，2.16(s，3H)，1.37(t，3H)，1.29(s，12H)。
TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶9)Rf0.18c)反-3-[4-(5-乙氧基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽將5-乙氧基-3-甲基-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1H-吡唑基(0.062g，0.00019mol)、反-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.070g，0.000159mol)、四(三苯基膦)鈀(0.011g，0.0000095mol)和碳酸鈉一水合物(0.049g，0.000398mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(5mL)和水(3mL)的混合物中，在80℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分鐘內(nèi)10-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21mL/min)得到反-3-[4-(5-乙氧基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽(0.037g，0.000064mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，7.85(d，2H)，7.71(d，2H)，5.75(s，1H)，4.65(m，1H)，4.21(q，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.18(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)，1.40(t，3H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt12.59min。
MSMH+516。
實(shí)施例479反-1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-3-甲基-4，5-二氫-1H-5-吡唑酮二乙酸鹽將反-3-[4-(5-乙氧基-1H-1-吡唑基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸鹽(0.100g，0.000194mol)在存在于乙酸(2.5mL)的30％氫溴酸中加熱回流1.5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮并將此殘余物濃氫氧化銨水溶液中和。將所得混懸液減壓濃縮并將此殘余物通過制備HPLC純化(Hypersil C18，8μm，25cm；5-45％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，21mL/min)得到反-1-(4{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-3-甲基-4，5-二氫-1H-5-吡唑酮二乙酸鹽(0.066g，0.00011mol)，為白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.23(s，1H)，8.02(d，2H)，7.65(d，2H)，4.64(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.53(s，2H)，2.21(s，3H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.34min。
MSMH+488。
實(shí)施例4802-(2-氨基-1H-1-咪唑基)-1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-乙酮乙酸鹽向1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00014mol)和碳酸鉀(0.039g，0.00028mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中，室溫下加入氯乙酰基氯(0.0031g，0.00028mol)。將此混合物攪拌10分鐘，之后加入2-氨基咪唑硫酸鹽(0.18g，0.0014mol)和碳酸鉀(0.19g，0.0014mol)。將此混合物室溫下攪拌2天，然后升溫至60℃，保持6小時(shí)。減壓除去溶劑。將殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到2-(2-氨基-1H-1-咪唑基)-1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-1-乙酮乙酸鹽(0.006g，0.00001mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.71(d，2H)，7.44(m，2H)，7.19(m，5H)，6.55(s，1H)，6.36(s，1H)，5.76(m，1H)，5.30(s，2H)，4.59(m，2H)，4.40(m，2H)，1.90(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.1min。
MSMH+482實(shí)施例4811-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮a)N-(3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯將1-(3-氮雜環(huán)丁烷基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(0.05g，0.00014mol)、3-[(叔丁氧基羰基)(2-羥基乙基)氨基]丙酸(0.038g，0.000175mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.034g，0.000175mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.034g，0.00026mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.019g，0.00014mol)在無水二氯甲烷(5mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N-(3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.040g，0.000070mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.3min。
MSMH+574b)1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮將2ml 6N鹽酸加入到N-(3-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.040g，0.000070mol)在丙酮(5mL)中的混合物中。將此混合物在45℃下攪拌1.5小時(shí)。減壓下除去溶劑。將水(10mL)加入到此殘余物中，將此混合物凍干。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-氮雜環(huán)丁烷基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮(0.003g，0.00001mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.69(d，2H)，7.42(m，2H)，7.19(m，5H)，5.70(m，1H)，4.67(m，1H)，4.57(m，1H)，4.40(m，1H)，4.31(m，1H)，3.40(m，2H)，2.74(m，2H)，2.51(m，2H)，2.29(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+474實(shí)施例4822-(2-氨基-1H 1-咪唑基)-1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-1-乙酮乙酸鹽向3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00013mol)和碳酸鉀(0.036g，0.00026mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中，室溫下加入氯乙酰基氯(0.028g，0.00026mol)。將此混合物攪拌10分鐘，之后加入2-氨基咪唑硫酸鹽(0.18g，0.0014mol)和碳酸鉀(0.19g，0.0014mol)。將此混合物室溫下攪拌18小時(shí)，然后升溫至60℃，保持6小時(shí)。減壓除去溶劑。將殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到2-(2-氨基-1H-1-咪唑基)-1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-1-乙酮乙酸鹽(0.015g，0.00003mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.67(d，2H)，7.44(m，2H)，7.17(m，5H)，6.52(s，1H)，6.38(s，1H)，5.49(br，2H)，4.99(m，1H)，4.76(m，2H)，4.59(m，1H)，3.99(m，1H)，3.30(m，1H)，2.80(m，1H)，2.20(m，1H)，1.99(m，3H)，1.90(s，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.4min。
MSMH+510實(shí)施例4831-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-[(2-羥基乙基)氨基]-1-乙酮向3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.05g，0.00013mol)和碳酸鉀(0.036g，0.00026mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中，室溫下加入氯乙?；?0.028g，0.00026mol)。將此混合物攪拌10分鐘，之后加入乙醇胺(0.078mL，0.0013mol)。將此混合物室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。將殘余物溶解于二氯甲烷(3mL)并用水(2mL)洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)，含0.1M醋酸銨的5％-100％，21mL/min)得到1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-2-[(2-羥基乙基)氨基]-1-乙酮(0.022g，0.00005mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s，1H)，7.67(d，2H)，7.44(m，2H)，7.17(m，5H)，5.03(br，1H)，5.00(br，1H)，4.52(m，1H)，4.05(m，1H)，3.87(m，2H)，3.64(m，2H)，2.96(m，2H)，2.92(m，2H)，2.17(m，1H)，1.90(m，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+488實(shí)施例484合成1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮
N-(3-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯將3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4胺(0.05g，0.00013mol)、3-[(叔丁氧基羰基)(2-羥基乙基)氨基]丙酸(0.038g，0.000163mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.031g，0.000163mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.031g，0.00024mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.018g，0.00013mol)在無水二氯甲烷(5mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N-(3-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.050g，0.000083mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.4min。
MSMH+602b)1-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮將2ml的6 N鹽酸加入到N-(3-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-氧代丙基)-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.050g，0.000083mol)在丙酮(5mL)中的混合物中。將此混合物在45℃下攪拌1.5小時(shí)。減壓除去溶劑。將水(10mL)加入到此殘余物，將此混合物凍干。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到1-{4-[4氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}-3-[(2-羥基乙基)氨基]-1-丙酮(0.014g，0.00003mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.67(d，2H)，7.42(m，2H)，7.19(m，5H)，4.98(m，1H)，4.52(m，2H)，4.04(m，1H)，3.31(m，2H)，2.81(m，2H)，2.78(m，1H)，2.74(m，2H)，2.58(m，2H)，1.99(m，1H)，1.90(m，3H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，ImL/min)Rt9.1min。
MSMH+502實(shí)施例485合成2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸a)2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸叔丁基酯向3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.10g，0.00026mol，1當(dāng)量)和碳酸鉀(0.072g，0.000526mol，2當(dāng)量)在無水N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，室溫下加入2-溴乙酸叔丁基酯(0.0768g，0.00039mol，1.5當(dāng)量)。將混合物室溫下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物溶解于二氯甲烷(5mL)并用水(3mL)洗滌。減壓除去溶劑。將殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用甲醇/二氯甲烷(5∶95)作為流動(dòng)相，得到2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸叔丁基酯(0.10g，0.0002mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.8min。
MSMH+5012-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸將2ml的6N鹽酸加入到2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸叔丁基酯(0.10g，0.0002mol)在丙酮(5mL)中的混合物中。此混合物在45℃攪拌2小時(shí)。減壓除去溶劑。將水(10mL)加入到殘余物中，并將此混合物凍干得到2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸(0.010g，0.0002mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.50(s，1H)，7.69(d，2H)，7.43(m，2H)，7.19(m，5H)，5.07(m，1H)，4.02(s，2H)，3.50(br，2H)，3.42(br，2H)，2.53(br，2H)，2.25(br，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+445實(shí)施例486N1-(1H-2-咪唑基)-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酰胺將2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酸(0.06g，0.00013mol)、2-氨基咪唑硫酸鹽(0.022g，0.000163mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.031g，0.000163mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.047g，0.00036mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.018g，0.00013mol)在無水二氯甲烷(8mL)中的混合物，室溫下攪拌18小時(shí)。再加入2-氨基咪唑硫酸鹽(0.022g，0.000163mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.031g，0.000163mol)、N，N-二異丙基乙胺(0.047g，0.00036mol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.018g，0.00013mol)并將此混合物室溫下攪拌18小時(shí)。此混合物升溫至50℃，保持6小時(shí)，然后室溫下攪拌2天。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N1-(1H-2-咪唑基)-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基}乙酰胺(0.005g，0.00001mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.68(d，2H)，7.43(m，2H)，7.19(m，5H)，6.80(br，1H)，6.70(br，1H)，4.80(br，1H)，3.06(s，2H)，3.05(m，2H)，2.43(m，2H)，2.33(m，2H)，1.92(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt9.2min。
MSMH+510實(shí)施例487反式N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺馬來酸鹽a)4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯向3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽(13.86g，0.0333mol)和碳酸氫鈉(8.4g，0.0999mol)在水(140mL)中的混合物中，室溫下加入存在于二噁烷(120mL)中的氯甲酸芐基酯(6.48g，0.0383mol)。將此混合物室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。濾出黃色固體并用乙醚洗滌得到4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯(12g，0.025mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.5min。
MSMH+479b)4-(4-氨基-3-{4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯將4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯(7.0g，0.0146mol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸酯(6.15g，0.0176mol)、四(三苯基膦)鈀(1.0g，0.000876mol)和碳酸鈉(3.9g，0.0365mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(170mL)和水(70mL)中，在75℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。加入N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(6.15g，0.0176mol，1.2當(dāng)量)和四(三苯基膦)鈀(1.0g，0.000876mol)，再將此混合物在85℃下攪拌16小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫并將乙二醇二甲基醚減壓除去。水層用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑得到棕色固體，其通過急驟柱色譜在硅膠上進(jìn)行純化，用20％-40％乙酸乙酯/二氯甲烷，接著2％-5％甲醇/二氯甲烷作為流動(dòng)相，得到4-(4-氨基-3-{4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯(8.0g，0.014mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt12.6min。
MSMH+574c)4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯向4-(4-氨基-3-{4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸芐基酯(7.68g，0.0134mol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中，在0℃下加入25％三氟乙酸的二氯甲烷溶液。將此混合物在氮?dú)夥障率覝叵聰嚢?8小時(shí)。減壓除去溶劑。將殘余物冷卻至0℃，并用5N氫氧化鈉水溶液堿化。水層用二氯甲烷(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑得到4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(6.02g，0.0127mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.3min。
MSMH+474d)反式4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯向4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(3.0g，0.0063mol)在吡啶(100mL)中的混合物中，在-5℃下加入外消旋的反-2-苯基-環(huán)丙烷羰基氯(1.163g，0.007mol)。將此混合物在-5℃下攪拌10分鐘，然后升溫至室溫并攪拌1.5小時(shí)。將此混合物用1N氫氧化鈉水溶液驟冷。減壓下除去有機(jī)溶劑。將殘余物在水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)之間分配。將有機(jī)層洗滌用5％枸櫞酸水溶液(3×100mL)、1N鹽酸(3×100mL)、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑得到反式4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1哌啶甲酸芐基酯(3.47g，0.006mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt11.5min。
MSMH+618e)反式N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺馬來酸鹽將反式4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(3.4g，0.0055mol)和20％氫氧化鈀-碳(0.4g)在乙醇(150mL)中的混合物，在氫氣氛下室溫下攪拌18小時(shí)。將此混合物過濾并除去溶劑。向此殘余物中，加入20％氫氧化鈀-碳(0.4g)、存在于乙醇(60mL)中的乙酸(0.25mL)和乙酸乙酯(40mL)。將此混合物在氫氣氛下室溫下再攪拌18小時(shí)。將此混合物過濾并減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用25％-50％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到反式N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(1.36g，0.0028mol)。將反式N1-{4-[4-氨基-1-(4哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(0.05g，0.000104mol)在乙酸乙酯(5mL)中加熱至40℃。將先溶解于溫乙酸乙酯中的馬來酸(0.00133g，0.000114mol)加入到此混合物中。將此混合物在40℃下攪拌10分鐘，然后冷卻至室溫。濾出白色沉淀，得到反式N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺馬來酸鹽(0.0044g，0.00001mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.65(s，1H)，8.26(m，2H)，7.25(m，7H)，6.01(d，2H)，5.09(br，1H)，3.90(s，3H)，3.48(m，2H)，3.18(m，2H)，2.61(br，1H)，2.37(m，3H)，2.13(m，2H)，1.50(br，1H)，1.34(br，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.0min。
MSMH+484實(shí)施例488N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺將N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(0.10g，0.00021mol)、2-咪唑甲醛(0.022g，0.00023mol)及乙酸(0.037g，0.0006mol)在二氯乙烷(8mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.133g，0.00063mol)加入到此混合物并在室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。再將乙酸(0.037g，0.0006mol)、2-咪唑甲醛(0.011g，0.00012mol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.133g，0.00063mol)加入到此混合物中，并將此混合物攪拌18小時(shí)。該反應(yīng)用5N氫氧化鈉水溶液驟冷。減壓除去溶劑，并將此殘余物在水和二氯甲烷之間分配。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H 2-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(0.019g，0.000034mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.8(br，1H)，9.63(s，1H)，8.22(m，2H)，7.25(m，7H)，6.99(br，1H)，6.83(br，1H)，4.68(br，1H)，3.90(s，3H)，3.56(s，2H)，2.93(m，2H)，2.58(br，1H)，2.37(br，1H)，2.22(m，3H)，1.90(m，3H)，1.50(br，1H)，1.30(br，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.4min。
MSMH+564
實(shí)施例489N1-[4-(4-氨基-1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基](1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺將N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(0.1g，0.00021mol)、1-甲基-2-咪唑甲醛(0.025g，0.00023mol)及乙酸(0.037g，0.0006mol)在二氯乙烷(8mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.133g，0.00063mol)加入到此混合物并在室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。該反應(yīng)用5N氫氧化鈉水溶液驟冷。減壓除去溶劑，并將此殘余物在水和二氯甲烷之間分配。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌。減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用5％-50％甲醇/二氯甲烷作為流動(dòng)相，得到N1-[4-(4-氨基-1-{1-[(1-甲基-1H 2-咪唑基)甲基]-4哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺(0.070g，0.00012mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.63(s，1H)，8.22(m，2H)，7.25(m，7H)，7.09(s，1H)，6.75(s，1H)，4.68(br，1H)，3.90(s，3H)，3.68(s，3H)，3.20(s，2H)，2.93(m，2H)，2.58(br，1H)，2.35(br，1H)，2.24(m，4H)，1.89(m，2H)，1.50(br，1H)，1.30(br，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.6min。
MSMH+578實(shí)施例4903-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺a)4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯將4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(3.0g，0.0063mol)、5-甲基糠醛(0.77g，0.007mol)及乙酸(1.15g，0.019mol)在二氯乙烷(100mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(4.1g，0.0195mol)加入到此混合物并將此混合物在室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。該反應(yīng)用5N氫氧化鈉水溶液驟冷。減壓除去溶劑，并將此殘余物在水和二氯甲烷之間分配。水層用二氯甲烷(3×200mL)萃取，并將合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟色譜純化，用2％-5％甲醇/二氯甲烷作為流動(dòng)相，得到4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(2.63g，0.0046mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt11.59min。
MSMH+568b)3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸芐基酯(0.18g，0.000317mol)和20％氫氧化鈀-碳(0.02g)在乙酸乙酯(10mL)中的混合物，在氫氣氛下室溫下攪拌18小時(shí)。將此混合物過濾并除去溶劑。殘余物在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用5％-10％甲醇/二氯甲烷(2％NH4OH)洗脫，得到3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.02g，0.000046mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.07(m，2H)，6.78(m，1H)，6.18(s，1H)，5.97(s，1H)，5.59(m，1H)，4.79(br，1H)，4.31(m，2H)，3.86(s，3H)，3.16(m，2H)，2.74(m，2H)，2.23(s，3H)，2.15(m，2H)，1.90(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+434實(shí)施例4913-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺將3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.045g，0.0001mol)、1-甲基-2-咪唑甲醛(0.011g，0.00011mol)及乙酸(0.018g，0.0003mol)在二氯乙烷(4mL)中的混合物，室溫氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)。將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.064g，0.0003mol)加入到此混合物并將此混合物在室溫氮?dú)夥障聰嚢?8小時(shí)。該反應(yīng)用5N氫氧化鈉水溶液驟冷。減壓除去溶劑，并將此殘余物在水和二氯甲烷之間分配。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌。減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/min)得到3-(3-甲氧基-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.03g，0.00006mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.16(s，1H)，7.06(m，2H)，6.86(s，1H)，6.77(d，1H)，6.18(s，1H)，5.98(s，1H)，5.59(m，1H)，4.67(br，1H)，4.31(m，2H)，3.85(s，3H)，3.71(s，3H)，3.66(s，2H)，2.96(m，2H)，2.27(m，2H)，2.23(s，3H)，2.18(m，2H)，1.91(m，2H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt9.5min。
MSMH+528實(shí)施例492反式N1-(4-{4-氨基-1-[(4-羥基-4-哌啶基)甲基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺a)4-[(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)甲基]-4羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯將3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.86g，0.0033mol)、1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁基酯(0.7g，0.0033mol)和碳酸銫(1.1g，0.0033mol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物，在60℃下攪拌18小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物在水和二氯甲烷(200mL)之間分配。將此有機(jī)層用水和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑。殘余物用二氯甲烷研磨，并將此固體過濾得到4-[(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)甲基]-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.66g，0.0014mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+475b)4-{[4-氨基-3-(4-{[(芐基氧基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯將4-[(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)甲基]-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.27g，0.00057mol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸芐基酯(0.26g，0.00068mol)、四(三苯基膦)鈀(0.039g，0.000034mol)和碳酸鈉(0.15g，0.0014mol)的混合物在乙二醇二甲基醚(7mL)和水(3mL)中，在85℃下在氮?dú)夥障录訜?6小時(shí)。將此混合物冷卻至室溫，并減壓下除去乙二醇二甲基醚。水層用二氯甲烷(2×100mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。有機(jī)層通過硅膠過濾兩次以除去催化劑，并減壓除去溶劑。殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸胺的5％-100％，21mL/mi n)得到4-{[4-氨基-3-(4-{[(芐基氧基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1哌啶甲酸叔丁基酯(0.1g，0.00017mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.9min。
MSMH+604
c)4-{[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯將4-{[4-氨基-3-(4-{[(芐基氧基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.1g，0.000017mol)和鈀碳(0.01g)在乙醇(2.5mL)和四氫呋喃(2.5mL)中的混合物，在氫氣氛下室溫下攪拌18小時(shí)。將此混合物過濾并再加入鈀碳(0.01g)。將此混合物在氫氣氛下室溫下攪拌18小時(shí)。將此混合物通過硅藻土過濾并減壓除去溶劑得到4-{[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.08g，0.00017mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt8.8min。
MSMH+470d)反式4-{[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯向4-{[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.08g，0.00017mol)在吡啶(4mL)中的混合物中，在-5℃下加入反-2-苯基-環(huán)丙烷羰基氯(0.035g，0.00019mol)。將此混合物在-5℃下攪拌10分鐘，然后升溫至室溫，攪拌1小時(shí)。將此混合物用1N氫氧化鈉的水溶液驟冷。減壓下除去吡啶。將此殘余物在水和二氯甲烷(50mL)之間分配。有機(jī)層用水洗滌。減壓下除去溶劑，并將此殘余物通過RP-HPLC純化(Hypersilprep HS C18，8μm，250×21.1mm；在35分鐘內(nèi)含0.1M乙酸銨的5％-100％，21mL/min)得到反式4-{[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.08g，0.00013mol)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在10分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt10.7min。
MSMH+614e)反式N1-(4-{4-氨基-1-[(4-羥基-4-哌啶基)甲基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽將反式4-{[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(2-苯基環(huán)丙基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]甲基}-4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(0.08g，0.00013mol)在丙酮(12mL)和6N鹽酸(3mL)中的混合物，在40℃下攪拌2小時(shí)。減壓下除去丙酮，并將此殘余物凍干得到反式N1-(4-{4-氨基-1-[(4-羥基-4-哌啶基)甲基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-苯基-1-環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽(0.07g，0.00012mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.65(s，1H)，8.71(br，1H)，8.43(s，1H)，8.26(m，1H)，7.25(m，7H)，4.40(s，2H)，3.90(s，3H)，3.10(m，2H)，2.98(m，2H)，2.51(m，1H)，2.34(m，1H)，1.89(m，2H)，1.71(m，2H)，1.48(m，1H)，1.31(m，1H)。
RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨在10分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt8.7min。
MSMH+514實(shí)施例493N1-4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺將4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)己酮(2.00g，0.00568mol)在吡啶(20mL)中的懸浮液冷卻至-10℃。滴加外消旋的反-2-芐基環(huán)丙烷-1-羰基氯(1.53g，0.00852mol)的二氯甲烷(5mL)溶液，保持溫度低于-5℃。在4小時(shí)內(nèi)將該反應(yīng)混合物升溫至室溫。加入氫氧化鈉水溶液(1.0M，10mL)并將此混合物攪拌1小時(shí)。真空下除去溶劑并將此殘余物在乙酸乙酯(25mL)和水(50mL)之間分配。進(jìn)行相分離并將水相用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑得到N1-4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺，為白色固體(1.603g，0.00323mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.64(s，1H)，8.27(s，1H)，8.23(d，1H)，7.14-7.35(m，7H)，5.24-5.27(m，1H)，3.90(s，3H)，2.65-2.78(m，2H)，2.56-2.63(m，1H)，2.34-2.37(m， 5H)，2.20-2.30(m，2H)，1.45-1.53(m，1H)，1.28-1.35(m，1H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，在20分鐘內(nèi)，1mL/min)Rt15.04min.；MSMH+497。
實(shí)施例494順式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(銨基甲基)-4-羥基環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺乙酸鹽a)順式N1-4-[4-氨基-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-(1S，2S)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺在加熱干燥的燒瓶中，存在于二甲基亞砜(5ml)中的氧化锍三甲基碘(0.425g，0.00193mol)與60％氫化鈉在礦物油中的分散液(0.071g，0.00193mol)反應(yīng)。將此混合物室溫下攪拌30分鐘，然后冷卻至10℃。加熱N1-4-[4-氨基-1-(4-氧代環(huán)己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺(0.800g，0.00161mol)的二甲基亞砜(5ml)溶液，并將此混合物室溫下攪拌6小時(shí)。加入水(5mL)并將此混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。有機(jī)相用水(5mL)、鹽水(5mL)洗滌并用硫酸鎂干燥。真空下除去溶劑得到順-N1-4-[4-氨基-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺，為白色固體(0.820g，0.00160mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.64(s，1H)，8.24(s，1H)，8.22(d，1H)，7.17-7.31(m，7H)，4.84-4.90(m，1H)，3.92(s，3H)，2.70(s，2H)，2.56-2.63(m，1H)，2.34-2.42(m，1H)，2.12-2.33(m，4H)，1.90-1.99(m，2H)，1.44-1.52(m，1H)，1.27-1.37(m，3H)；MSMH+413。
b)順式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(銨基甲基)-4-羥基環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺乙酸鹽將順-N1-4-[4-氨基-1-(1-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺(0.200g，0.000391mol)在2-丙醇(5mL)和氫氧化銨(5mL)中的混合物，在加壓試管中在65℃下加熱18小時(shí)。真空下除去溶劑，并將此殘余物通過制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300A，25cm；5分鐘內(nèi)30％恒溶劑成分，然后在15分鐘內(nèi)30％-60％乙腈-0.1M醋酸銨，21ml/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到順-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(銨基甲基)-4-羥基環(huán)己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(1S，2S)/(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙烷-1-甲酰胺乙酸鹽，為白色固體(0.112g，0.000212mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22-8.24(m，1H)，7.17-7.33(m，7H)，4.59-4.80(m，1H)，3.91(s，3H)，2.28-2.65(m，4H)，1.88(s，3H)，1.68-1.72(m，4H)，1.47-1.51(m，3H)，1.30-1.33(m，1H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt13.11min.；MSMH+528。
實(shí)施例495反式N1-芐基-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酰胺將反式2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酸(0.076g，0.000165mol)在二氯甲烷(2mL)中的懸浮液與三乙胺(0.050g，0.000496mol)和雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(0.063g，0.000248mol)處理。將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)，在此期間發(fā)生溶解。將此溶液用水(2×2mL)洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鎂干燥，并真空下除去溶劑。粗品溶解于二氯甲烷(5mL)并與芐基胺(0.052g，0.000489mol)在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。粗品物質(zhì)在硅膠上通過急驟柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，接著用制備RP-HPLC純化(Rainin C18，8μm，300A，25cm；5分鐘內(nèi)60％恒溶劑成分，然后在20分鐘內(nèi)60％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，21ml/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到反式N1-芐基-2-{4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-羥基環(huán)己基}乙酰胺，為白色固體(0.010g，0.000018mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.53(t，1H)，8.24(s，1H)，7.66(d，2H)，7.43(t，2H)，7.09-7.34(m，10H)，5.24(s，1H)，4.70-4.79(m，1H)，4.30(d，2H)，2.02-2.18(m，2H)，1.91(s，2H)，1.86-1.98(m，4H)，1.56-1.64(m，2H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-95％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/min)Rt16.16min；MSMH+549。
實(shí)施例4961-(氨基甲基)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇將3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁酮(0.150g，0.000404mol)的二氯甲烷(5mL)溶液與1，1，1-三甲基甲硅烷腈(0.060g，0.000606mol)和無水碘化鋅(0.004g，0.000012mol)反應(yīng)。將此混合物在回流溫度下攪拌8小時(shí)。將此混合物在水(20mL)和乙醚(10mL)之間分配。分離有機(jī)層并用乙醚(10mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。真空下除去溶劑，并將粗品溶解于無水四氫呋喃(10mL)中，并在室溫下與氫化鋰鋁(0.031g，0.000804mol)反應(yīng)18小時(shí)。將粗品物質(zhì)通過制備RP-LC/MS純化(Gilson-Micromass C18，5μm，130A，21cm，在9分鐘內(nèi)0％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25mL/min)。真空下除去乙腈并將此含水混合物凍干得到1-(氨基甲基)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-環(huán)丁醇的異構(gòu)體4∶1混合物，為白色固體(0.024g，0.000060mol)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.24(s，1H)少量，8.23(s，1H)主要，7.66-7-70(m，2H)，7.41-7.46(m，2H)，7.11-7.21(m，5H)，5.45-5.50(m，1H)少量，4.87-4.96(m，1H)主要，4.30(d，2H)，2.34-2.72(m，6H)；RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，300A，15cm；在20分鐘內(nèi)5％-85％乙腈-0.1M醋酸銨，1mL/mi n)Rt12.07min(少量)和12.36min(主要)；MSMH+403。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物，其外消旋-非對(duì)映異構(gòu)體混合物、旋光異構(gòu)體、藥用鹽、前藥或生物活性代謝物， 其中G是 其中Z100是 或者任選地被R1取代的基團(tuán)，該基團(tuán)選自環(huán)烷基、萘基、四氫萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、 噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氫苯并呋喃基、吲哚基、異噁唑基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氫吲哚基、吲唑基、苯并異噻唑基、吡啶并噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并噁唑基、嘧啶并噻唑基和苯并咪唑基；Z110是共價(jià)鍵，或是任選地被取代的(C1-C6)其任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代烷基、CN、OH、鹵素、NO2、COOH、被取代或未被取代的氨基及被取代或未被取代的苯基；Z111是共價(jià)鍵，任選地被取代的(C1-C6)或任選地被取代的-(CH2)n-環(huán)烷基-(CH2)n-；其中任選地被取代的基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代烷基、CN、OH、鹵素、NO2、COOH、被取代或未被取代的氨基被取代或未被取代的苯基；Ra和R1各表示一個(gè)或多個(gè)取代基，其每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下氫原子，鹵素，-CN，-NO2，-C(O)OH，-C(O)H，-OH，-C(O)O-烷基，被取代或未被取代的甲酰氨基，四唑基，三氟甲基羰基氨基，三氟甲基磺酰氨基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的鏈烯基，被取代或未被取代的芳基氧基，被取代的或未被取代的雜芳基氧基，被取代或未被取代的芳基烷基，被取代或未被取代的鏈炔基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的氨基烷基，被取代或未被取代的酰氨基，被取代或未被取代的雜芳硫基，被取代的或未被取代的芳硫基，-Z105-C(O)N(R)2，-Z105-N(R)-C(O)-Z200，-Z105-N(R)-S(O)2-Z200，-Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200，Rc和CH2ORc；其中Rc每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是氫原子，被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，-CH2-NRdRe，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基或-W-(CH2)t-OH；Z105每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是共價(jià)鍵或(C1-C6)；Z200每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是被取代或未被取代的(C1-C6)，被取代或未被取代的苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；Rd和Re每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H，烷基，烷?；騍O2-烷基；或Rd、Re和它們所連接的氮原子一起形成5員或6員雜環(huán)；t每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是2至6的整數(shù)；W每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是化學(xué)鍵或者O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H或烷基；或者R1是被取代或未被取代的與環(huán)2稠合的碳環(huán)或雜環(huán)；R3是氫原子，羥基，被取代或未被取代的烷基或者被取代的或未被取代的烷氧基；A是-O-；-S-；-S(O)p-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)-；-CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-；-CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-；-N(R)C(O)-；-N(R)S(O)p-；-OC(O)N(R)-；-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-，-N(R)C(O)O-；-N(R)-(CH2)n+1-C(O)-，-S(O)pN(R)-；-O-(CR2)n+1-C(O)-，-O-(CR2)n+1-O-，-N(C(O)R)S(O)p-；-N(R)S(O)pN(R)-；-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-，-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)pN(R)C(O)-；-OS(O)pN(R)-；-N(R)S(O)pO-；-N(R)S(O)pC(O)-；-SOpN(C(O)R)-；-N(R)SOpN(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(ORb)O-；-N(R)P(ORb)-；-N(R)P(O)(ORb)O-；-N(R)P(O)(ORb)-；-N(C(O)R)P(ORb)O-；-N(C(O)R)P(ORb)-；-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或-N(C(O)R)P(ORb)-；其中R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基烷基或者被取代的或未被取代的芳基；Rb每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基烷基，被取代或未被取代的環(huán)烷基或被取代或未被取代的芳基；p是1或2；或在含磷的基團(tuán)中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6員雜環(huán)；或A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成被取代或未被取代的與環(huán)1稠合的5或6員雜環(huán)；-R2是-Z101-Z102；Z101是共價(jià)鍵，-(C1-C6)-，-(C1-C6)-O-，-(C1-C6)-C(O)-，-(C1-C6)-C(O)O-，-(C1-C6)-C(O)-NH-，-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或被取代的或未被取代的苯基；Z102是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的環(huán)烷基，被取代或未被取代的，飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，或被取代或未被取代的，飽和或不飽和雜雙環(huán)基團(tuán)；所述被取代的雜環(huán)或者被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自羥基，氰基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代的或未被取代的磺酰氨基，被取代或未被取代的脲基，被取代的或未被取代的甲酰氨基；被取代或未被取代的氨基，氧代基團(tuán)，飽和的、不飽和的或芳族的被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)，其中含有一個(gè)或多個(gè)氮原子、一個(gè)或多個(gè)氧原子或其聯(lián)合；其中所述氮原子獨(dú)立地任選地被下列基團(tuán)取代被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代或未被取代的芳基烷基；或R2是式B-E，其中B是被取代或未被取代的環(huán)烷基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的氨基烷基磺?；?，被取代的或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代的或未被取代的氨基烷基羰基，羥基，被取代或未被取代的亞烷基，被取代或未被取代的氨基烷基，被取代的或未被取代的亞烷基羰基或者被取代的或未被取代的氨基烷基羰基；且E是被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基羰基，被取代或未被取代的氮雜環(huán)烷基磺?；?，被取代的或未被取代的氮雜環(huán)烷基烷基，被取代或未被取代的雜芳基，被取代或未被取代的雜芳基羰基，被取代或未被取代的雜芳基磺?；蝗〈蛭幢蝗〈碾s芳基烷基，被取代的或未被取代的氮雜環(huán)烷基羰基氨基，被取代或未被取代的雜芳基羰基氨基或者被取代的或未被取代的芳基；a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自獨(dú)立地選自如下CRa和N，其條件是至少兩個(gè)D1、G1、J1、L1和M1是CRa；或者a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一是CRa，而其余獨(dú)立地選自如下CRa和N，其中Ra定義如上；b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自獨(dú)立地選自如下CRa和N，其條件是至少兩個(gè)D2、G2、J2、L2和M2是CRa；或者b是0，而D2、G2、L2和M2之一NRa，D2、G2、L2和M2之一是CRa，而其余獨(dú)立地選自如下CRa和N，其中Ra定義如上；且n每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是0至6的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R1每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，-CH2NRdRe，叔丁基，吡啶基，被取代的或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代的或未被取代的苯磺酰基，被取代或未被取代的苯氧基，被取代或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，羧基，被取代或未被取代的四唑基，及被取代的或未被取代的苯乙烯基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；Ra每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自如下F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，被取代或未被取代的噁唑基，被取代或未被取代的芐基，被取代或未被取代的苯磺?；?，被取代或未被取代的苯氧基，被取代的或未被取代的苯基，被取代或未被取代的氨基，羧基，被取代或未被取代的四唑基，及被取代或未被取代的苯乙烯基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中n是1、2或3。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3，且Rg是H或-(CH2)pN(R4)R5，其中p是2至6的整數(shù)，而R4和R5各自獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)q，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)，-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的部分，其選自烷基、烷氧基、氨基、芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基，或R4、R5和它們連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7員被取代的或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3，a和b各自獨(dú)立地是0至6的整數(shù)；Q是-OR6或-NR4R5；各R4和R5獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)q-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烷氧基，氨基，芳基，雜芳基或雜環(huán)烷基，或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7員的被取代或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中n是1、2或3；且R4是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)q-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中m是0、1、2或3；R5是H、氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自共價(jià)鍵，-C(O)-，-(CH2)q，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-，-(CH2)qC(O)-，-C(O)(CH2)q-和-(CH2)qS(O)r-，其中-(CH2)q-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-、-(CH2)qC(O)-、-C(O)(CH2)q-和-(CH)qS(O)r的烷基部分任選地被下列基團(tuán)取代鹵素、羥基或烷基；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的氨基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或Y和Z一起是天然或非天然氨基酸，其在該胺的氮原子上可以單-或二-烷基化；且R6表示各自獨(dú)立地選自如下的一個(gè)或多個(gè)取代基氫原子，羥基，氧代基團(tuán)，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜環(huán)基，被取代或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代的或未被取代的烷基羰基，被取代或未被取代的芳基羰基，被取代或未被取代的雜環(huán)基羰基，被取代的或未被取代的氨基烷基和被取代或未被取代的芳基烷基；其條件是與氮原子相鄰的碳原子不被羥基取代。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中R4是H、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自C(O)-，-(CH2)q，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中m是1至6的整數(shù)；且R4和R5各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CHZ)q-，-S(O)，-C(O)O-，-SONH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代或未被取代的雜環(huán)烷基；或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或者被取代的或未被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中n是0至4的整數(shù)；r是0而m是1至6的整數(shù)；或r是1而m是0至6的整數(shù)；Q是-OR6或-NR4R5；各R4和R5獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)q-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烷氧基，被取代的或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R4、R5和它們所連接的氮原子一起形成3、4、5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
12.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 n是0至4的整數(shù)；m是0至6的整數(shù)；R4是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)q-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整數(shù)；且r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；且R6是氫原子或被取代或未被取代的烷基。
13.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R7、R8、R9、R11、R12、R13、R13和R14各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或者至少一對(duì)取代基R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14一起是一個(gè)氧原子；或R7和R9中至少一個(gè)是氰基，CONHR15，COOR15，CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自獨(dú)立地是H、氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R15、R16和氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或被取代的或未被取代的雜雙環(huán)基團(tuán)；X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子、被取代的或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的芳基烷基、-C(NH)NH2，-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的芳基烷基；且t是0或1。
14.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán) 其中R19和R20各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基；或R10和R20一起是一個(gè)氧原子；R21和R22各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自如下-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代的或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；m是1至6的整數(shù)；且n是0至6的整數(shù)。
15.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中m是1至6的整數(shù)；且R23是CH2OH，NRR′，C(O)NRR′或COOR，其中R和R′各自獨(dú)立地是氫原子或者被取代的或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
16.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R24是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的芳基烷基，羧基，氰基，C(O)OR25，CH2OR25，CH2NR26R27或C(O)NHR26，其中R25是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的芳基烷基，被取代或未被取代的雜環(huán)基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)芳基；且R26和R27各自獨(dú)立地是H、被取代的或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R26、R27和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
17.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是下式 其中T是C(O)、S、SO、SO2、CHOR或NR，其中R是氫原子或被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且n是0、1或2。
18.權(quán)利要求10所述的化合物，其中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各自獨(dú)立地是被取代或未被取代的羧基烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的烷基磺?；?，被取代的或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的氰基烷基；或R28和R29與氮原子一起形成5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
19.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或取代基R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14中至少一對(duì)一起是一個(gè)氧原子；或R7和R9中至少一個(gè)是氰基，CONHR15，COOR15，CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代或未被取代的雜環(huán)烷基；或R15、R16和氮原子一起形成3、4、5、6或7-員被取代或未被取代的雜環(huán)或雜雙環(huán)基團(tuán)；X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子，被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的芳基烷基，-C(NH)NH2，-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或者未被取代的芳基烷基；且t是0或1。
20.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R19和R20各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基；或R19和R20一起是一個(gè)氧原子；R21和R22各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代的或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)；m是1至6的整數(shù)；且n是0至6的整數(shù)。
21.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中m是1至6的整數(shù)；且R23是CH2OH、NRR′、C(O)NRR′或COOR，其中R是氫原子或被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
22.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4、R5和氮原子一起形成下式的雜環(huán)基團(tuán) 其中R24是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代或未被取代的芳基烷基，羧基，氰基，C(O)OR25，CH2OR25，CH2NR26R27或C(O)NHR26，其中R25是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的芳基烷基，被取代或未被取代的雜環(huán)基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)芳基；且R26和R27各自獨(dú)立地是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CHZ)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R26、R27和氮原子一起形成3、4、5或6-員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
23.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0或1；T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的芳基烷基，-C(NH)NH2，-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氫原子、被取代或未被取代的烷基、被取代的或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
24.權(quán)利要求11所述的化合物，其中R4和R5的至少一個(gè)是式Y(jié)-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各自獨(dú)立地是被取代或未被取代的羧基烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的烷基磺酰基，被取代的或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的氰基烷基；或R28和R29與氮原子一起形成5或6員被取代或未被取代的雜環(huán)基團(tuán)。
25.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是式N(R30)R31，其中R30和R31各自獨(dú)立地是氫原子，烷基，烷氧基羰基，烷氧基烷基，羥基烷基，氨基羰基，氰基，烷基羰基或芳基烷基。
26.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中各X獨(dú)立地是CH或N；且R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
27.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0或1；T是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子，被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代的或未被取代的芳基烷基，C(O)NH2，-C(NH)NH2，-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；且R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
28.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中g(shù)是0、1或2；且R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
29.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氫原子，被取代或未被取代的烷基，芳基，芳基烷基，-C(NH)NH2，-C(O)R18，或C(O)OR18，其中R18是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基或者被取代的或未被取代的芳基烷基；g是0或1；且R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代的或未被取代的芳基烷基。
30.權(quán)利要求8所述的化合物，其中R5是Y-Z，其中Z是下式 其中R32是氫原子，氰基，被取代或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的羥基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，烷基羰基，被取代或未被取代的硫代烷氧基或者被取代或未被取代的芳基烷基；且R33是氫原子，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烷氧基羰基，被取代或未被取代的烷氧基烷基，被取代或未被取代的氨基羰基，全鹵代烷基，被取代的或未被取代的鏈烯基，被取代或未被取代的烷基羰基或者被取代或未被取代的芳基烷基。
31.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中m是0或1；R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40和R41各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R34和R35；R36和R37；R38和R39；或R40和R41中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R42是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基；或R42是下式 其中u是0或1；R43、R44、R45、R46、R47、R48、R49和R50各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R43和R44；R45和R46；R47和R48；或R49和R50中至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R51是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-L，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代或未被取代的雜環(huán)烷基。
32.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是下式 其中h、i、j、k和l獨(dú)立地是0或1；R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、Rg和Rh各自獨(dú)立地是甲基或氫原子；或R52和R53；R54和R55；R56和R57；或R58和R59中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R60是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或Y-Z，其中Y選自-C(O)-，-(CH2)p，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，-(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且Z是被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或者未被取代的雜環(huán)烷基；或R60是下式 其中v是0或1；R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67和R68各自獨(dú)立地是低級(jí)烷基或氫原子；或R61和R62；R63和R64；R65和R66；及R67和R68中的至少一對(duì)取代基一起是一個(gè)氧原子；且R69是H、被取代或未被取代的氮雜雙環(huán)烷基或V-1，其中V選自-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)qO-，-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r；其中p是0至6的整數(shù)，q是0至6的整數(shù)，而r是0、1或2；且L是被取代的或未被取代的烷基，被取代或未被取代的氨基，被取代的或未被取代的芳基，被取代或未被取代的雜芳基或者被取代的或未被取代的雜環(huán)烷基。
33.抑制患者的一種或多種蛋白激酶活性的方法，該方法包括給所述患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。
34.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述蛋白激酶選自KDR、FGFR-1、PDGFRβ、PDGFRα、IGF-1R、c-Met、Flt-1、Flt-4、TIE-2、TIE-1、Lck、Src、fyn、Lyn、Blk、hck、fgr和yes。
35.影響患者的過度增殖性紊亂的方法，該方法包括給所述患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。
36.影響患者的血管生成的方法，該方法包括給所述患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。
37.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述蛋白激酶是蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。
38.治療患者的一種或多種潰瘍的方法，該方法包括給所述患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述一種或多種潰瘍是由細(xì)菌或真菌感染引起的；或所述一種或多種潰瘍是莫倫氏潰瘍；或所述一種或多種潰瘍是潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀。
40.治療患者的病癥的方法，該方法包括給所述患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物，其中所述病癥是眼部病癥，心血管病，癌癥，Crow-Fukase(POEMS)綜合征，糖尿病，鐮刀細(xì)胞貧血病，慢性炎癥，系統(tǒng)性狼瘡，腎小球性腎炎，滑膜炎，炎性腸疾病，克羅恩氏病，腎小球性腎炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，移植物排斥，萊姆病，敗血癥，von Hippel Lindau病，類天皰瘡，牛皮癬，佩吉特氏病，多囊性腎病，纖維變性疾病，肉樣瘤病，肝硬化，甲狀腺炎，粘滯性過高綜合征，Osler-Weber Rendu病，慢性梗塞性肺病，哮喘或燒傷、外傷、輻射、中風(fēng)、低氧癥、局部出血后水腫，卵巢高刺激性綜合征，子癇前期，月經(jīng)過多，子宮內(nèi)膜異位或單純性皰疹、帶狀皰疹、人類免疫缺陷病毒、副痘病毒、原生動(dòng)物或弓形體病引起的感染。
41.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述眼部病癥是眼或視網(wǎng)膜黃斑水腫，眼新血管病，鞏膜炎，光角膜切開術(shù)，眼色素層炎，玻璃體炎，近視，眼凹，慢性視網(wǎng)膜脫離，激光治療后并發(fā)癥，結(jié)膜炎，遺傳性黃斑變性，Eales病，視網(wǎng)膜病視網(wǎng)膜黃斑變性。
42.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述心血管病是動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、局部出血/再灌注損傷、血管閉塞或頸動(dòng)脈梗塞性疾病。
43.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述癌癥是實(shí)體瘤，肉瘤，纖維肉瘤，骨瘤，黑素瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，成橫紋肌細(xì)胞肉瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，畸胎樣瘤，造血系統(tǒng)惡性腫瘤，Kaposi氏肉瘤，何杰金氏病，淋巴瘤，骨髓瘤，白血病或惡性腹水。
44.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述糖尿病是胰島素依賴性糖尿病性青光眼，糖尿病性視網(wǎng)膜病或微血管病。
45.降低患者生育力的方法，該方法包括給所述患者使用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物的步驟。
46.權(quán)利要求36的方法，其中所述化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物是以促進(jìn)血管生成或血管發(fā)生的有效量給藥的。
47.權(quán)利要求34的方法，其中所述蛋白激酶是Tie-2。
48.權(quán)利要求46的方法，其中所述式I化合物或其生理可接受鹽、前藥或生物活性代謝物與原血管生成生長(zhǎng)因子聯(lián)合給藥。
49.權(quán)利要求48的方法，其中所述原血管生成生長(zhǎng)因子選自VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、HGF、FGF-1、FGF-2、其衍生物及抗獨(dú)特型抗體。
50.權(quán)利要求46的方法，其中所述患者患有貧血，局部出血，梗塞，移植排斥，創(chuàng)傷，壞疽或壞死。
51.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述蛋白激酶活性參與T細(xì)胞活化、B細(xì)胞活化、干細(xì)胞脫粒、單核細(xì)胞活化、炎性反應(yīng)的強(qiáng)化或其組合。
52.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是-Z101-Z102，其中Z101是共價(jià)鍵，-(C1-C6)-，-(C1-C6)-O-，-(C1-C6)-C(O)-，-(C1-C6)-C(O)O-，-(C1-C6)-C(O)-NH-，-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或被取代的苯基；且Z102是氫原子、被取代或未被取代的烷基、或被取代的或未被取代的飽和或不飽和的雜環(huán)基團(tuán)。
53.權(quán)利要求52所述的化合物，其中Z101選自-CH2-C(O)O-，-CH2-C(O)-，-CH2-C(O)-NH-，-CH2-C(O)-N(Me)-，-CH(Me)-C(O)O-，-(CH2)3-C(O)O-，-CH(Me)-C(O)-NH-和-(CH2)3-C(O)-NH-；Z102選自如下氫原子，甲基、乙基、N，N-二甲基氨基乙基、N，N-二乙基氨基乙基、2-苯基-2-羥基乙基、4-嗎啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基和2-羥基甲基吡咯烷基。
54.權(quán)利要求53所述的化合物，其中G是 或 其中Z100是被取代或未被取代的苯并噁唑基或者被取代的或未被取代的苯并噻唑基。
55.權(quán)利要求8、9、10或53所述的化合物，其中G是 或 其中只有一個(gè)Ra且其是H或F。
56.權(quán)利要求52所述的化合物，其中Z101是共價(jià)鍵；且Z102是任選地被取代的吡啶基。
57.權(quán)利要求56所述的化合物，其中G是
58.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是H；R2是環(huán)戊基；且G是
59.權(quán)利要求58所述的化合物，其中Z110是氫原子；A是O；且Z100是任選地被取代的苯基、呋喃基或噻吩基，其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自F、COOH、NO2、OMe、-COOMe、OCF3和CF3。
60.權(quán)利要求58所述的化合物，其中Z110是氫原子；A是-O-、-O-(CR2)n-C(O)-或-O-(CR2)n-O-；n每次出現(xiàn)時(shí)是0至3；Z100是任選地被取代的基團(tuán)，取代基選自環(huán)己基，苯基，四氫吡喃基，四氫呋喃基，異噁唑基和哌啶基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自烷基、烷氧基、鹵素、羥基和烷氧基羰基。
61.權(quán)利要求58所述的化合物，其中R2是任選地被取代的基團(tuán)，其選自環(huán)丁基和環(huán)己基。
62.權(quán)利要求61所述的化合物，其中R2任選地被選自如下的一個(gè)或多個(gè)取代基取代羥基，烷基，羥基烷基，羧基烷基和苯基烷氧基烷基。
63.權(quán)利要求62所述的化合物，其中G是4-苯氧基苯基。
64.權(quán)利要求6所述的化合物，其中m是2；a是0；R6是H；b是1或2；而R4和R5各是氫原子。
65.權(quán)利要求8所述的化合物，其中m是0、1或2；R6是氫原子；R5是H或Y-Z；其中Y是共價(jià)鍵，-C(O)-，-(CH2)qO-，-(CH2)q-，-(CHZ)qC(O)-或-C(O)(CH2)q-，其中-(CH2)qO-、-(CH2)q、-(CH2)qC(O)-和-C(O)(CH2)q-的烷基部分任選地被下列基團(tuán)取代鹵素、羥基或烷基；且Z是氫原子、烷基、任選地被取代的烷基、烷氧基烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的雜芳基、或任選地被取代的氨基。
66.權(quán)利要求65所述的化合物，其中Z是氫原子、甲基、乙基、羥基甲基、甲氧基乙基、N-甲基哌啶基、(叔丁氧基羰基)(羥基)-哌啶基、羥基哌啶基、(羥基甲基)哌啶基、(羥基)(甲基)-哌啶基、4-嗎啉基、(甲氧基乙基)哌嗪基、甲基哌嗪基、4-哌啶基哌啶基、咪唑基、甲基咪唑基、N-甲基氨基、N，N-二甲基氨基、N-異丙基氨基、N，N-二乙基氨基、2，3-二羥基丙基氨基、2-羥基乙基氨基、3-羥基丙基氨基、甲氧基乙基氨基、乙氧基羰基甲基氨基、苯基甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基氨基、 呋喃基甲基氨基、哌啶基乙基氨基、N-(2-N，N-二甲基氨基乙基)-N-甲基氨基、2-N，N-二甲基氨基乙基氨基、N-甲基-N-(N-甲基哌啶-4-基)氨基、2-(4-嗎啉基)-乙基氨基、3-(4-嗎啉基)-丙基氨基、3-咪唑基丙基氨基或3-(2-氧代吡咯烷基)丙基氨基。
67.權(quán)利要求8所述的化合物，其中m是2；R5是Y-Z；Y是-C(O)-；且Z是 其中n是0、1、2或3。
68.權(quán)利要求9所述的化合物，其中R4是氫原子或甲基；G是 A選自O(shè)，-N(R)-和-N(R)C(O)-；Z111是-(CH2)n-環(huán)烷基-(CH2)n-；R是氫原子或烷基；n是0至5；Ra是一個(gè)或多個(gè)取代基，各自獨(dú)立地選自H、OH、F、Cl、甲基和甲氧基；且R，is一個(gè)或多個(gè)取代基，各自獨(dú)立地選自H、CN、F、CF3、OCF3、甲基、甲氧基和任選地被取代的氨基；其中所述氨基任選地被一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代，取代基各自獨(dú)立地選自烷基、烷氧基烷基、苯基、被取代的苯基、及任選地被取代的雜芳基。
69.權(quán)利要求68所述的化合物，其中R1是4-甲基苯硫基或2-吡啶硫基。
70.權(quán)利要求9所述的化合物，其中G是 其中Z100選自苯并[b]噻吩基、呋喃基和噻吩基。
71.權(quán)利要求9所述的化合物，其中Ra是烷氧基；A是-NH-C(O)-；且在A和Z100之間存在一個(gè)共價(jià)鍵。
72.權(quán)利要求1、8或9所述的化合物，其中G是 其中A選自-N(R)-C(O)-N(R)-，-(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-，-N(R)-和-N(R)-SO2-；R是氫原子或烷基；Z100是 吡啶基，噻唑基，呋喃基，苯并呋喃基或噁唑基；X是S、O或NR′其中R′每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是H或Me；Ra是一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自H和F；且R1是一個(gè)或多個(gè)取代基，其各自獨(dú)立地選自H、F、Cl、Br、NO2、CF3、烷基、烷氧基和烷氧基羰基。
73.權(quán)利要求72所述的化合物，其中R4是甲基；m是1、2或3；R5是Y-Z，其中Y是-C(O)O-、-C(O)-或-C(O)-(CH2)p-；且Z是氨基烷基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基或羥基烷基氨基烷基。
74.權(quán)利要求9所述的化合物，其中R4是甲基；G是 其中n是0至3；Z100是任選地被取代的基團(tuán)，選自吲哚基、茚基、甲基茚基、甲基吲哚基、二甲基氨基苯基、苯基、環(huán)己基和苯并呋喃基。
75.權(quán)利要求9的化合物，其中G是 其中Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自如下苯基、咪唑基、吲哚基、呋喃基、苯并呋喃基和2，3-二氫苯并呋喃基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自如下F、Cl、CN、任選地被取代的烷基、-O-(任選地被取代的烷基)、-COOH、-Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200及-Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200；，Z105是共價(jià)鍵或(C1-C6)；Z200是任選地被取代的基團(tuán)，其選自(C1-C6)、苯基和-(C1-C6)-苯基；Z110和Z111各自獨(dú)立地是共價(jià)鍵或(C1-C3)基團(tuán)，其任選地被烷基、羥基、COOH、CN或苯基取代；且A是O、-N(R)-C(O)-N(R)-、-N(R)-C(O)-O-、-N(R)-或-N(R)-C(O)-，其中R是H或烷基。
76.權(quán)利要求75所述的化合物，其中R4是甲基。
77.權(quán)利要求8、9或10所述的化合物，其中G是 其中Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯并噁唑基、苯并噻唑基和苯并咪唑基。
78.權(quán)利要求77所述的化合物，其中R4是甲基；A是-NH-；只有一個(gè)Ra且其是H或F；且Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自烷基、鹵素、CF3和烷氧基。
79.權(quán)利要求9所述的化合物，其中G是 Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯基、吡咯基、吡啶基、苯并咪唑基、萘基和 其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自如下F、Cl、Br、NO2、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、CN、任選地被取代的烷基、-O-(任選地被取代的烷基)和苯基；Z110和Z111每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是(C1-C3)，其任選地被任選地被取代的苯基取代；且A是-N(R)-C(O)-N(R)-，-N(R)-S(O)2-，-N(R)-C(O)-，-N(R)-或-N(R)-C(O)-O-。
80.權(quán)利要求79所述的化合物，其中R4是甲基且只存在一個(gè)Ra且其是F。
81.權(quán)利要求9或66所述的化合物，其中G是 其中Z110是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯基、異噁唑基、四氫萘基、呋喃基、苯并呋喃基、吡啶基和吲哚基；其中Z100任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自F、CN、NO2、-C(O)H、-CONH2、-NHSO2CF3、任選地被取代的烷基、任選地被取代的雜芳基和-O-(任選地被取代的烷基)；Z110和Z111各自獨(dú)立的是任選地被取代的(C0-C3)；且A是O，-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-，-C(O)-N(R)-，-N(R)-C(O)-O-，-N(R)-C(O)-或-N(R)-。
82.權(quán)利要求81所述的化合物，其中R4是甲基；Ra是H或甲氧基；且Z110和Z111各自都未被取代。
83.權(quán)利要求9所述的化合物，其中G是 其中R是H或低級(jí)烷基，而n每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地是1至6。
84.權(quán)利要求83所述的化合物，其中G是
85.權(quán)利要求84所述的化合物，其中Z100是被取代的或未被取代的苯基。
86.權(quán)利要求8、9或10所述的化合物，其中G是 其中Z100是任選地被取代的基團(tuán)，其選自苯并噁唑基、苯并噻唑基和苯并咪唑基。
87.權(quán)利要求11所述的化合物，其中n是2；R6是H；m是1；r是1；而R4和R5各是氫原子。
88.權(quán)利要求64或87所述的化合物，其中G是4-苯氧基苯基。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的化合物,包括其藥用鹽和/或前藥,其中G、R
文檔編號(hào)A61P37/06GK1390219SQ00815759
公開日2003年1月8日 申請(qǐng)日期2000年9月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月17日
發(fā)明者G·C·希爾斯特, D·卡爾德伍德, N·維沙特, P·拉菲蒂, K·里特, L·D·阿諾, M·M·弗里德曼 申請(qǐng)人:艾博特股份有限兩合公司