專(zhuān)利名稱(chēng)：L－核苷、l－核苷酸及其類(lèi)似物的組合物和方法
本申請(qǐng)要求于12/29/1999申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/173,446、12/23/1999申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/172,097、01/06/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/175,111、3/20/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/190,758、8/22/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/226,947、8/22/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/226,875、9/19/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/233,821、9/19/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/233,823、9/19/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/233,548、9/19/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/233,822和9/26/2000申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)60/235,465的權(quán)益，所述臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
對(duì)病毒感染的最為熟知的療法的特征可能一般為或者直接抗病毒療法或者為間接抗病毒療法。在直接抗病毒療法中，用合適的直接抗病毒藥物靶向所述病毒。例如，感染HIV病毒的患者通常接受阻斷病毒繁殖的藥物混合物，本領(lǐng)域已知各種類(lèi)別的直接抗病毒療法。例如，某些直接抗病毒藥阻斷反轉(zhuǎn)錄酶。反轉(zhuǎn)錄酶(RT)抑制劑通常是核苷類(lèi)似物，例如AZT、3TC或ddI?；蛘?，可以使用非核苷RT抑制劑，包括槲皮素。在體外，RT抑制劑通常是有效的抗病毒藥。然而，在體內(nèi)，尤其是在病毒復(fù)制相對(duì)高速的時(shí)期內(nèi)，RT抑制劑抗性病毒突變體的產(chǎn)生成問(wèn)題。
其它直接抗病毒藥阻斷或干擾病毒蛋白的加工，因此通常被稱(chēng)為蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑通常對(duì)病毒的蛋白水解酶具有高度的特異性。然而，由于它們具有最強(qiáng)的疏水特性，以理想濃度給予往往有問(wèn)題。此外，交叉抗性和嚴(yán)重副作用的產(chǎn)生通常加進(jìn)了由應(yīng)用蛋白酶抑制劑而產(chǎn)生的困難。為了減少多種藥物抗性病毒毒株的產(chǎn)生，可以給予RT抑制劑和蛋白酶抑制劑的混合物。雖然目前這類(lèi)混合物的使用相對(duì)成功，但不利副作用的相對(duì)高的發(fā)生率和產(chǎn)生多種藥性抗性病毒毒株的潛力一直存在。
在間接抗病毒療法中，可以調(diào)節(jié)對(duì)病毒攻擊的免疫應(yīng)答。例如，可以使用免疫抑制藥來(lái)減輕與病毒感染相關(guān)的炎癥，各種免疫抑制藥是本領(lǐng)域已知的。在其它免疫抑制藥中，環(huán)孢菌素A已知是有效的免疫抑制藥，通常用來(lái)抑制器官移植后的組織排斥。然而，由于環(huán)孢菌素A的整體免疫抑制效應(yīng)，使得患者對(duì)新的傳染病更為易感，因此其應(yīng)用往往成問(wèn)題。此外，環(huán)孢菌素A的長(zhǎng)期給予常常與嚴(yán)重副作用相關(guān)，包括多毛癥和齦增生。而且，環(huán)孢菌素A的生物有效性至少部分依賴于膽汁，這在肝炎感染中可能造成額外的問(wèn)題。
為了克服與環(huán)孢菌素A相關(guān)問(wèn)題中的至少某些問(wèn)題，可以使用他克莫司(FK506)作為免疫抑制藥。例如，在面部特應(yīng)性皮炎的治療方面他克莫司已經(jīng)得到重視。局部給予免疫抑制藥導(dǎo)致所治療的所有患者中有95％得到顯著改善[Alaiti，S.等Tacrolimus(FK506)ointment foratopic dermatitisA phase I study in adults and children.J Am AcadDermatol 1998；38(1)69-76]。此外，他克莫司看來(lái)不會(huì)透過(guò)皮膚屏障，因此消除了系統(tǒng)給藥相關(guān)的問(wèn)題。雖然他克莫司一般被很好的耐受，但使用他克莫司而不引起總體免疫妥協(xié)的治療限于局部給藥。當(dāng)系統(tǒng)給予延長(zhǎng)的時(shí)間時(shí)，他克莫司通常引起淋巴組織增生性疾病和心肌病。
許多已知的免疫抑制藥為炎癥提供一定的緩解。然而，當(dāng)系統(tǒng)給藥時(shí)所述效應(yīng)不是器官特異性的。因此，針對(duì)外源攻擊和內(nèi)源攻擊例如細(xì)菌感染和病毒感染、腫瘤細(xì)胞或惡性腫瘤細(xì)胞等的免疫被系統(tǒng)降低了。因此，免疫抑制藥的可用濃度窗由不完全引起患者免疫系統(tǒng)妥協(xié)的最大濃度和提供至少某些所需效應(yīng)的最低濃度限定。
雖然用于治療傳染病和炎癥的各種化合物和方法是本領(lǐng)域已知的，但所有的或幾乎所有的這些化合物和方法都有一個(gè)或多個(gè)缺點(diǎn)。因此，需要提供用于治療那些病癥的改善的方法和組合物。
在本發(fā)明主題的一個(gè)方面，所考慮的化合物具有按照式I的結(jié)構(gòu)，其中R是H、PO32-、(PO3)23-或(PO3)34-基團(tuán)。 式I所考慮的化合物任選地用與羰基原子共價(jià)偶聯(lián)的修飾基團(tuán)進(jìn)一步修飾，還考慮了按照本發(fā)明主題的化合物為D-或L-構(gòu)型。
本發(fā)明主題的另一方面，用所考慮的化合物來(lái)治療病毒感染，還可以將所考慮的化合物與細(xì)胞因子、最好是IFN-α-2b、抗體或利巴韋林(1-β-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)共同給予。
在本發(fā)明主題的再一方面，所考慮的化合物在靶細(xì)胞中的藥理學(xué)效應(yīng)方面的選擇性通過(guò)用修飾基團(tuán)對(duì)所述化合物修飾而得以增強(qiáng)，其中所述修飾基團(tuán)通過(guò)氮原子與所述藥物共價(jià)連接，并且其中所述修飾基團(tuán)在靶細(xì)胞中可被酶從所述藥物上除去。具體考慮的修飾基團(tuán)包括＝NH和-N(R1)(R2)或＝NR1，其中R1和R2獨(dú)立地為氫、直鏈烷基、支鏈烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基，并且其中R1或R2可以獨(dú)立地還包含一個(gè)氮原子、氧原子、硫原子或鹵素原子。
在本發(fā)明主題的又一方面，治療患者的特征為器官炎癥的疾病的方法有這樣一個(gè)步驟，其中將所考慮的化合物以引起系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)而不引起I型和II型應(yīng)答的系統(tǒng)免疫抑制的劑量給予患者。這由于在所述患者的所述器官中所考慮的化合物選擇性累積而引起對(duì)所述器官中I型和II型應(yīng)答的免疫抑制。
本發(fā)明主題的再一方面，刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的方法有這樣一個(gè)步驟，其中確定所考慮的化合物在給定濃度范圍內(nèi)有效刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)。在再一步驟中，將給定濃度范圍內(nèi)的所述化合物提供給所述神經(jīng)元。
根據(jù)本發(fā)明各個(gè)實(shí)施方案的詳述，本發(fā)明的各個(gè)目的、特征、方面和優(yōu)點(diǎn)將是更加顯而易見(jiàn)的。
圖2是一種用于合成1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的示例性合成方案。
圖3是一種用于合成1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的示例性替代合成方案。
圖4是另一種用于合成1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的示例性合成方案。
圖5是描述按照本發(fā)明主題的示例性器官定向免疫抑制方法的流程圖。
圖6是描述按照本發(fā)明主題的示例性刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的方法的流程圖。
詳細(xì)描述所考慮的化合物一般考慮所有核苷酸、核苷及其相應(yīng)的類(lèi)似物都適合結(jié)合本發(fā)明介紹的內(nèi)容來(lái)應(yīng)用，其中所有所考慮的化合物可以是其相應(yīng)的L-構(gòu)型或D-構(gòu)型。然而，特別優(yōu)選的化合物包括磷酸化和未磷酸化的LevovirinTM(1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，結(jié)構(gòu)1)，其中R可以是氫或者含磷或含硫基團(tuán)。其中R是含磷基團(tuán)，尤其優(yōu)選R是

圖1A-1C中描繪的一磷酸酯，二磷酸酯或三磷酸酯。 結(jié)構(gòu)1根據(jù)化學(xué)環(huán)境(和尤其取決于pH)，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所述磷酸酯基團(tuán)可以是其相應(yīng)的一、二、三和四質(zhì)子化形式，也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，當(dāng)所述磷酸酯基團(tuán)被部分或完全去質(zhì)子化時(shí)，可以與一種或多種一價(jià)或多價(jià)陽(yáng)離子形成鹽。尤其考慮的陽(yáng)離子是堿金屬離子和堿土金屬離子，例如Mg2+、Cs2+、Na+等。
在本發(fā)明主題的其它方面中，R也可以是其中一個(gè)或一個(gè)以上的氧被硫原子取代的PO32-、(PO3)23-或(PO3)34-基團(tuán)。盡管磷酸酯基團(tuán)一般是R的優(yōu)選取代基，但也可以使用其它化學(xué)基團(tuán)，具體考慮的基團(tuán)包括單陰離子基團(tuán)或多陰離子基團(tuán)，優(yōu)選具有四角形幾何學(xué)的基團(tuán)。因此，所考慮的化合物尤其包括修飾和未修飾的磷酸化LevovirinTM。此外，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所考慮的化合物也可以具有D-構(gòu)型的糖部分，尤其考慮的一種具有D-構(gòu)型糖的化合物是利巴韋林(1-β-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)。
還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，至少某些所考慮的化合物表現(xiàn)出直接抗病毒效應(yīng)(即所考慮的化合物直接抑制病毒繁殖)。由于大多數(shù)生物在各種區(qū)室中具有磷酸酶，因此設(shè)想按照本發(fā)明主題的化合物可以逐步被去磷酸化，可以一次除去一個(gè)或一個(gè)以上的磷酸酯基團(tuán)。例如，三磷酸化化合物可以轉(zhuǎn)化為二磷酸化或一磷酸化化合物，或二磷酸化化合物可以在一個(gè)反應(yīng)中轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)evovirinTM。
關(guān)于磷酸化LevovirinTM的去磷酸化，特別考慮到抗病毒的作用模式從直接抗病毒效應(yīng)變?yōu)殚g接抗病毒效應(yīng)。這種從直接抗病毒反應(yīng)變?yōu)殚g接抗病毒反應(yīng)是特別有利的，因?yàn)榧词顾紤]的化合物被代謝，它們?nèi)员惠^長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)保留抗病毒作用。因此，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所考慮的化合物、特別是磷酸化LevovirinTM的作用模式實(shí)際上至少是雙模式的-包括一個(gè)直接抗病毒效應(yīng)部分和一個(gè)間接抗病毒效應(yīng)部分。
關(guān)于去磷酸化的速率，考慮了磷酸化LevovitinTM的去磷酸化速率比磷酸化利巴韋林的去磷酸化速率慢的多，認(rèn)為這是由于LevovirinTM中核糖的L-構(gòu)型引起的效應(yīng)。關(guān)于可能發(fā)生去磷酸化的區(qū)室或器官，考慮了去磷酸化最好發(fā)生在肝中，然而，也考慮了其它器官和區(qū)室，包括腎、神經(jīng)元和血流。
特別應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所有已知的前體藥物形式的所考慮的化合物都適合結(jié)合本文所述內(nèi)容來(lái)應(yīng)用，具體考慮的前體藥物形式包括可以從所考慮的化合物酶促(例如通過(guò)氨解酶、氧化還原酶或轉(zhuǎn)移酶)除去的共價(jià)修飾形式。在于2000年6月16日申請(qǐng)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/594,410號(hào)(該專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)引用結(jié)合到本文中)和Kenneth B.Sloan的“Prodrugs”(Marcel Dekker；ISBN0824786297)或Hans Bundgaard的“Design of Prodrugs”(ASIN044480675X)(該專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)引用也結(jié)合到本文中)中描述了示例性的合適前體藥物形式。
此外，尤其考慮的合適前體藥物的實(shí)例包括通過(guò)將含氮基團(tuán)加入LevovirinTM的甲酰胺部分而形成的前體藥物，在所考慮的化合物優(yōu)先靶向肝的情況下，該前體藥物可能尤其有利。例如，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)(未公布的結(jié)果)，通過(guò)用在肝細(xì)胞中被選擇性除去的含氮修飾基團(tuán)將LevovirinTM修飾，可以改善LevovirinTM在肝細(xì)胞中藥理學(xué)效應(yīng)方面的特異性。以下結(jié)構(gòu)2顯示了LevovirinTM，結(jié)構(gòu)3顯示了在甲酰胺基團(tuán)被修飾而形成甲脒基團(tuán)的LevovirinTM。 結(jié)構(gòu)2 結(jié)構(gòu)3特別考慮了用可以在靶細(xì)胞(例如肝細(xì)胞)中被選擇性除去的(優(yōu)選含氮)修飾基團(tuán)對(duì)LevovirinTM進(jìn)行修飾，將(1)提高LevovirinTM對(duì)靶細(xì)胞的選擇性，由此(2)降低達(dá)到所需有效濃度的整體劑量，和(3)降低在非靶細(xì)胞中的潛在毒性。還考慮了將所述修飾基團(tuán)與甲酰胺基團(tuán)的羰基原子共價(jià)連接。
在其它方面，所述含氮修飾基團(tuán)不一定限于＝NH基團(tuán)，但也可以包括各種伯胺和仲胺。一般考慮的是，合適的修飾基團(tuán)具有結(jié)構(gòu)-N(R1)(R2)或＝NR1，其中R1和R2獨(dú)立地為氫、直鏈烷基或支鏈烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳烯基或芳炔基、芳基，所有這些基團(tuán)都可以還包含包括氮、氧、硫或鹵素在內(nèi)的雜原子。然而，尤其優(yōu)選的是，替代修飾基團(tuán)可從LevovirinTM上經(jīng)酶除去，具體考慮的酶包括氨解酶例如肝脫氨酶(例如腺苷或胞苷脫氨酶)、肝脫酰胺酶(例如芳基脫酰胺酶)和肝轉(zhuǎn)氨酶(谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶)。
盡管不限于本文介紹的本發(fā)明的概念，但考慮了所述修飾基團(tuán)可以使LevovirinTM失活，或在將經(jīng)修飾的LevovirinTM傳遞至非靶細(xì)胞后防止后續(xù)的活化。另一方面，所述含氮修飾基團(tuán)也可以防止所述經(jīng)修飾LevovirinTM的代謝活化。關(guān)于修飾LevovirinTM的步驟，考慮了所述修飾可以包括器官合成的修飾、酶修飾或從頭合成以產(chǎn)生所述經(jīng)修飾的LevovirinTM。
關(guān)于所述修飾基團(tuán)的酶去除，考慮了根據(jù)靶細(xì)胞和修飾基團(tuán)的類(lèi)型，所述酶去除可以有很大變化。酶去除可以包括來(lái)自各種類(lèi)別的酶，包括水解酶、轉(zhuǎn)移酶、裂合酶和氧化還原酶，特別優(yōu)選的亞類(lèi)是腺苷脫氨酶和胞苷脫氨酶、精氨酸酶、轉(zhuǎn)氨酶和芳基酰胺酶。還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，考慮用于酶去除修飾基團(tuán)的酶可以僅在靶細(xì)胞中表達(dá)，然而，在本發(fā)明主題的其它方面，合適的酶也可以在非靶細(xì)胞的細(xì)胞中表達(dá)只要所述酶不在含細(xì)胞系統(tǒng)中的所有細(xì)胞內(nèi)普遍表達(dá)即可。還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所考慮的酶最好是在相應(yīng)的靶細(xì)胞中在正常和/或病理?xiàng)l件下天然表達(dá)(即非重組的)。例如，已知谷氨酰胺-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶是組成型表達(dá)的，并且在肝細(xì)胞中具有相對(duì)高的選擇性，因此可能是用于去除修飾基團(tuán)的合適的酶。另一方面，已知胞苷脫氨酶在結(jié)腸癌細(xì)胞中相對(duì)大量地表達(dá)，而在正常結(jié)腸細(xì)胞中不是相對(duì)大量或僅少量表達(dá)。所考慮化合物的合成一般考慮，合成D-核苷酸、D-核苷及其相應(yīng)類(lèi)似物的所有已知方法都可以適用于合成L-構(gòu)型的所考慮的化合物(例如通過(guò)用L-構(gòu)型的糖部分取代相應(yīng)的D-構(gòu)型糖部分)。在圖2中描述了用于合成LevovirinTM(1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)的示例性合成方案。
1，2，3，5-四-O-乙酰-β-L-呋喃核糖(1)的合成在氬氣環(huán)境中，向室溫下攪拌的L-核糖(50.0g，333.33mmol)的無(wú)水甲醇(500ml)溶液中，通過(guò)注射器在15分鐘內(nèi)加入新制備的干燥HCl甲醇溶液(40ml，通過(guò)于0℃下將干燥的HCl氣體通入甲醇中至重量增加4g而制備的)。加入HCl甲醇溶液后，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3-4小時(shí)。加入干燥的吡啶(100ml)，然后在高度真空下在40℃以下蒸發(fā)至干。用另外的干燥吡啶(100ml)將該過(guò)程重復(fù)第二次。在氬氣環(huán)境下，將殘余物溶于干燥的吡啶(250ml)中，在冰浴中冷卻至0℃。通過(guò)滴液漏斗，在15分鐘內(nèi)向這種冷的攪拌溶液中加入乙酸酐(100ml)。加入乙酸酐后，將反應(yīng)物于室溫、排除水分的條件下攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干。將殘余物在乙酸乙酯(400ml)和水(400ml)之間分配，然后在EtOAc中萃取。水層再次用EtOAc(100ml)萃取。合并的EtOAc萃取液用水(400ml)、飽和碳酸氫鈉(2×300ml)、水(300ml)和鹽水(200ml)洗滌。有機(jī)萃取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物與干燥甲苯(2×150ml)在高度真空下共蒸發(fā)。經(jīng)干燥的油狀殘余物(92g，95％)照原樣使用，不經(jīng)鑒定而用于隨后的反應(yīng)。
將得自以上反應(yīng)的糖漿(92g)溶于冰乙酸(300ml)中，用乙酸酐(75ml)于室溫下處理。在氬氣環(huán)境中，將溶液在冰浴中冷卻至0-5℃。在15分鐘內(nèi)緩慢加入濃硫酸(2lml)。加入硫酸后，將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌14小時(shí)，傾至碎冰(500g)上，攪拌直至冰融化。加入水(500ml)并用氯仿(2×300ml)萃取。氯仿萃取液用水(3×400ml)、飽和碳酸氫鈉(2×300ml)、水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌。經(jīng)洗滌的有機(jī)萃取液經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)至干，得到油狀殘余物(99g)。將殘余物與干燥甲苯(200ml)共蒸發(fā)，將其溶于乙醚(200ml)中，將后者于10℃冷卻1天，以產(chǎn)生無(wú)色晶體。將晶狀固體過(guò)濾，用己烷、乙醚(2∶1，50ml)洗滌，然后干燥，得到60.5g產(chǎn)物。甲基-1-(2，3，5-三-O-乙酰-β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-羧酸酯(3)和甲基-1-(2，3，5-三-O-乙酰-β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-5-羧酸酯(4)的合成將甲基-1，2，4-三唑-3-羧酸酯(25.4g，200mmol)、1，2，3，5-四-O-乙酰-β-L-呋喃核糖(63.66g，200mmol)和雙(對(duì)硝基苯基)磷酸酯(1g)的混合物置于RB燒瓶(500ml)中。將燒瓶置于水泵真空下預(yù)熱的165-175℃油浴中，同時(shí)將其攪拌25分鐘。將置換的乙酸收集在置于冰冷的水泵和RB燒瓶之間的收集器中。從油浴中取出燒瓶，讓其冷卻。當(dāng)燒瓶的溫度大致達(dá)到60-70℃時(shí)，加入EtOAc(300ml)和飽和碳酸氫鈉(150ml)，將其萃取到EtOAc中。水層再次用EtOAc(200ml)萃取。合并的EtOAc萃取液用飽和碳酸氫鈉(300ml)、水(300ml)和鹽水(200ml)洗滌。有機(jī)萃取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物溶于EtOH(100ml)中，并用MeOH(60ml)稀釋?zhuān)瑢⑵溆?℃冷卻12小時(shí)時(shí)產(chǎn)生無(wú)色晶體。將固體過(guò)濾，用最少的冷EtOH(20ml)洗滌，并于高度真空下在固體NaOH上干燥，得到60g(78％)。將濾液蒸發(fā)至干，并在硅膠柱上用ChCl3-＞EtOAc(9∶1)作為洗脫液純化。從濾液中分離出兩種產(chǎn)物，快移動(dòng)產(chǎn)物8.5g(11％)和慢移動(dòng)產(chǎn)物5g(6.5％)。慢移動(dòng)產(chǎn)物與結(jié)晶產(chǎn)物相匹配。發(fā)現(xiàn)快移動(dòng)產(chǎn)物為(4)，并且以泡沫狀物獲得。合并的(3)的產(chǎn)量為65g(84％)。
1-β-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺(5)的合成將甲基-1-(2，3，5-三-O-乙酰-β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-羧酸酯(62g，161mmol)置于鋼制反應(yīng)釜中，用新制備的氨的甲醇溶液(350ml，通過(guò)于0℃將干燥HCl氣體通入干燥的甲醇中直至飽和而制備的)于0℃處理。密封鋼制反應(yīng)釜，并于室溫下攪拌18小時(shí)。然后將鋼制反應(yīng)釜冷卻至0℃，打開(kāi)，將內(nèi)容物蒸發(fā)至干。殘余物用干燥乙醇(100ml)處理，并蒸發(fā)至干。所獲得的殘余物用丙酮研磨，得到固體，將固體過(guò)濾并用丙酮洗滌。將固體于室溫下過(guò)夜干燥，然后溶于熱EtOH(600ml)和水(10ml)的混合物中。通過(guò)在電熱板上加熱和攪拌，將EtOH溶液的體積減至150ml。熱EtOH溶液在冷卻時(shí)得到無(wú)色晶體，將其過(guò)濾，用丙酮洗滌，并在真空下干燥。將濾液進(jìn)一步濃縮，得到額外的物質(zhì)?？偖a(chǎn)量為35g(89％)。
在本發(fā)明主題的一個(gè)可供選擇的方面，考慮了LevovirinTM的合成也可以使用一種或多種酶轉(zhuǎn)化。例如，可以用合適的乙酰轉(zhuǎn)移酶(例如EC2.3.1.xx)進(jìn)行L-核糖的乙?；Ｔ诹硪粚?shí)施例中，用涉及一種酯酶(例如EC 3.1.1.xx)和/或氨基轉(zhuǎn)移酶(例如EC 2.6.1.xx)的單酶或雙酶系統(tǒng)，可以促進(jìn)從相應(yīng)的甲酯形成甲酰胺基團(tuán)。在再一實(shí)施例中，可以用酶法將LevovirinTM轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的一、二或三磷酸酯(例如EC 3.1.3.xx或EC3.1.4.xx)。
又考慮了可以利用非1g量的除雙(對(duì)硝基苯基)磷酸酯以外的各種催化劑。改變催化劑的量(即摩爾份數(shù))可能有益地提高與N2異構(gòu)體相比朝向較高產(chǎn)量的所需N1異構(gòu)體(與三唑環(huán)的N1原子偶聯(lián)的L-核糖)的反應(yīng)的選擇性。例如，雙(對(duì)硝基苯基)磷酸酯的合適量包括3-30mmol之間的量以及更大的量。或者，合適時(shí)，可以包括低于3mmol(0.3mmol-2.99mmol)的量。在本發(fā)明主題的再一可供選擇的方面，所述催化劑不必限于雙(對(duì)硝基苯基)磷酸酯，其它催化劑包括對(duì)甲苯磺酸、三氯乙酸和對(duì)硝基苯甲酸。
關(guān)于反應(yīng)溫度，特別考慮了較低的溫度可以進(jìn)一步提高與N2異構(gòu)體相比朝向較高產(chǎn)量的所需N1異構(gòu)體的反應(yīng)的選擇性。因此，考慮了三唑部分和核糖部分之間的偶聯(lián)反應(yīng)的合適溫度包括約155-165℃之間的溫度，更優(yōu)選145-165℃之間的溫度，最優(yōu)選130-165℃之間的溫度。
在本發(fā)明主題的再一可供選擇的方面，考慮了通過(guò)對(duì)甲基-1，2，4-三唑-3-羧酸酯進(jìn)行化學(xué)修飾，也可以有利地影響與N2異構(gòu)體相比朝向較高產(chǎn)量的所需N1異構(gòu)體的反應(yīng)的選擇性?；瘜W(xué)修飾包括形成涉及N2原子的絡(luò)合結(jié)構(gòu)、位阻和對(duì)N2原子的直接化學(xué)修飾。例如，三唑部分的N2原子中的游離電子對(duì)和經(jīng)修飾的羧酸酯基團(tuán)中電子供體可以用來(lái)將金屬離子絡(luò)合，由此降低N2原子對(duì)于與核糖部分偶聯(lián)的有效性。在另一實(shí)施例中，甲基-1，2，4-三唑-3-羧酸酯的羧酸酯基團(tuán)可以用相對(duì)大的優(yōu)先和在空間上阻止或減少N2原子上發(fā)生反應(yīng)的基團(tuán)來(lái)修飾。或者，可以用保護(hù)基直接修飾N2原子，合適的保護(hù)基包括t-Boc和芐基。
再者，考慮了用酶合成也可以達(dá)到使所需N1異構(gòu)體的產(chǎn)量高于N2異構(gòu)體，其中所述核糖部分(或L-核糖核苷酸)和經(jīng)修飾的或未經(jīng)修飾的甲基-1，2，4-三唑-3-羧酸酯用作核糖基轉(zhuǎn)移酶(例如EC2.4.2.5或EC2.4.2.6)的底物。
或者，如圖3所示，可以通過(guò)將受保護(hù)的L-核糖與1，2，4-三唑-3-腈偶聯(lián)，隨后將腈基團(tuán)轉(zhuǎn)化為甲酰胺，合成LevovirinTM。在又一可供選擇的合成中，三唑部分與核糖部分的偶聯(lián)可以在一個(gè)反應(yīng)中完成，其中(例如芐基保護(hù)的)核糖具有與C1原子偶聯(lián)的-NHNH2基團(tuán)，將其與三唑羧酸酯的N1原子反應(yīng)，其中三唑羧酸酯隨后被轉(zhuǎn)化為甲脒，如圖4所示。
關(guān)于所考慮的L-核苷酸、L-核苷及其相應(yīng)類(lèi)似物的前體藥物形式的合成，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，具體的合成方案一般取決于具體化合物的結(jié)構(gòu)。然而，所有合成方式都被認(rèn)為是合適的，所考慮的合成方案包括體外合成、酶合成、體內(nèi)轉(zhuǎn)化和其任何化學(xué)上合理的組合。用于形成所考慮前體藥物的示例性合成方案描述于美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/594,410號(hào)(參見(jiàn)上文)。
在所考慮的L-核苷酸、L-核苷及其相應(yīng)類(lèi)似物被磷酸化的情況下，考慮了將磷酸酯基團(tuán)加入核苷酸、核苷或其相應(yīng)類(lèi)似物的所有方式都是合適的。所考慮的核苷轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的磷酸化形式，可以經(jīng)合成完成(Hughes，B.G.等，(1983)；2’，5’-寡聚腺苷酸化類(lèi)似物和相關(guān)的2’，5’-寡核苷酸類(lèi)似物。1.干擾素誘導(dǎo)的鼠2’，5’-寡聚腺苷酸合成酶的底物專(zhuān)一性和寡聚物的酶促合成(2’，5’-oligoadenylated and related 2’，5’-oligonucleotide analogues.l.Substrate specificity of the interferon-inducedmurine 2’，5’-oilgoadenylate synthetase and enzymatic synthesis ofoligomers).Biochemistry，222116-2126)。然而，也考慮了各種可供選擇的方法，包括酶促磷酸化(參見(jiàn)例如Van Rompay，A.R.等(2000)；用哺乳動(dòng)物一磷酸核苷激酶將核苷和核苷類(lèi)似物磷酸化(Phosphorylationof nucleosides and nucleoside analogs by mammalian nucleosidemonophosphate kinases)；Pharmacol.Ther.87(2-3)189-198)和水性介質(zhì)中的有機(jī)化學(xué)磷酸化(Schwartz，A.和Ponnampernuma，C.(1968)；在水溶液中用線性磷酸鹽將腺苷磷酸化(Phosphorylation of adenosine withlinear polyphosphate salts in aqueous solution)(Nature 218，443)。
所考慮的化合物的應(yīng)用一般應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所考慮的化合物可以用于對(duì)給予所考慮的化合物正反應(yīng)的系統(tǒng)的任何治療或療法中。然而，特別優(yōu)選所考慮的化合物可以用于抗病毒治療(作為直接抗病毒化合物和/或作為間接抗病毒化合物)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的治療和刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的治療中。此外，特別考慮的應(yīng)用包括在抗腫瘤治療中給予所考慮的化合物。
抗病毒治療一般考慮按照本發(fā)明主題的化合物可以用作病毒感染中的直接和/或間接抗病毒藥。特別考慮了治療患者病毒感染的方法包括一個(gè)步驟，其中將有效抑制病毒繁殖的劑量的組合物給予所述患者(即一種涉及宿主細(xì)胞的方法，其中一種或一種以上的病毒引起宿主細(xì)胞產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)所述病毒的拷貝，其中術(shù)語(yǔ)“產(chǎn)生”是指核苷酸合成、蛋白質(zhì)加工和蛋白質(zhì)裝配)，其中所述組合物包括至少一種所述所考慮的化合物，最好包括至少一種按照結(jié)構(gòu)1和結(jié)構(gòu)3的化合物。優(yōu)選的劑量范圍為5-2500mg/天，更優(yōu)選為50-500mg/天。然而，也考慮了其它劑量、途徑、時(shí)間表和制劑，合適的其它給藥法如下所述。雖然所考慮的化合物的應(yīng)用不限于特定病毒感染中的特定病毒，但特別考慮的病毒感染是HIV感染、HCV感染、HBV感染、RSV感染、流感病毒感染和副流感病毒感染。
目前用外周血單核細(xì)胞(PBMC)來(lái)研究幾種不同的感染，例如丙型肝炎、HIV、乙型肝炎和多種皰疹病毒。(Antivir.Chem.Chemother.2000年7月；11(4)291-301；J.Infect.Dis.1998年10月；178(4)1189-92；Virology 2000年3月；268(1)12-60)。用所需病毒感染PMBC，然后研究細(xì)胞系關(guān)于特定藥物如何與PBMC相互作用以及受感染PBMC在一定時(shí)間內(nèi)或在不同環(huán)境條件下如何作用的相關(guān)信息。根據(jù)用受感染PBMC進(jìn)行的研究，可以產(chǎn)生顯示特定藥物、環(huán)境和/或條件對(duì)PBMC-病毒感染細(xì)胞的效應(yīng)的模型。
本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)(未公布的結(jié)果)，利巴韋林顯示出對(duì)PBMC-HIV感染細(xì)胞的正反應(yīng)。意外的是，LevovirinTM也顯示出針對(duì)PBMC-HIV感染細(xì)胞的相似的免疫調(diào)節(jié)分布型，盡管機(jī)體缺乏將患者體內(nèi)存在的LevovirinTM磷酸化所必需的酶。根據(jù)上述觀測(cè)與其它相關(guān)信息和試驗(yàn)，考慮到LevovirinTM、磷酸化LevovirinTM和按照結(jié)構(gòu)3的經(jīng)修飾的LevovirinTM可以用于治療HIV病毒和相關(guān)病毒。
免疫調(diào)節(jié)在圖5中，器官定向免疫抑制的方法500的第一個(gè)步驟是510，其中提供一種藥物，所述藥物當(dāng)以高于免疫抑制濃度給予時(shí)，既減弱1型應(yīng)答，又減弱2型應(yīng)答，而當(dāng)以低于免疫抑制濃度給予時(shí)，相對(duì)于2型應(yīng)答而言增強(qiáng)1型應(yīng)答，其中所述藥物優(yōu)先在靶器官中積累。在隨后的步驟520中，將所述藥物以有效地在靶器官中積累至免疫抑制濃度的劑量給予患者。因此，考慮了治療患者的特征為肝臟炎癥的疾病的方法可以包括一個(gè)提供一種化合物的步驟，其中所述化合物包括Levovirin、磷酸化LevovirinTM、經(jīng)修飾的磷酸化LevovirinTM或經(jīng)修飾的利巴韋林(參見(jiàn)上文)。在再一個(gè)步驟中，將所述化合物以(a)引起系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)而不引起I型應(yīng)答和II型應(yīng)答的系統(tǒng)免疫抑制、和(b)引起患者肝臟中I型應(yīng)答和II型應(yīng)答免疫抑制的劑量給予所述患者。
術(shù)語(yǔ)“免疫抑制”是指淋巴細(xì)胞的T和/或B細(xì)胞克隆在數(shù)量上耗竭或其反應(yīng)性、擴(kuò)增或分化受抑制的事件。因此，免疫抑制可以是由于或者T克隆或者B克隆的特異性或非特異性T抑制性淋巴細(xì)胞的激活所致，或由對(duì)大多數(shù)或所有T淋巴細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞具有普遍效應(yīng)的藥物引起。例如，環(huán)孢菌素A和FK506相對(duì)特異性地作用于T細(xì)胞，而烷化劑例如環(huán)磷酰胺的作用特異性較低。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”是指一組可溶性蛋白質(zhì)和肽，它們作為體液調(diào)節(jié)劑以毫微摩爾濃度至皮摩爾濃度起作用，并且在正常條件或病理?xiàng)l件下調(diào)節(jié)個(gè)別細(xì)胞和組織的功能活性。細(xì)胞因子也直接介導(dǎo)細(xì)胞間的相互作用和調(diào)節(jié)發(fā)生在胞外環(huán)境中的過(guò)程。
本文還使用的術(shù)語(yǔ)“淋巴因子”是指由輔助T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子亞型，一般被認(rèn)為分為兩個(gè)亞類(lèi)1型和2型。1型細(xì)胞產(chǎn)生白介素2(IL-2)、腫瘤壞死因子(TNFα)和干擾素γ(IFNγ)，主要負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)免疫，例如遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)和抗病毒免疫。相反，2型細(xì)胞產(chǎn)生白介素IL4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13，主要參與輔助體液免疫應(yīng)答，例如在對(duì)變應(yīng)原應(yīng)答中見(jiàn)到的免疫應(yīng)答(例如IgE和IgG4抗體同種型轉(zhuǎn)換)。
因此，術(shù)語(yǔ)1型和2型“應(yīng)答”是指包括分別由1型和2型淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)而產(chǎn)生的所有效應(yīng)。其中，這些應(yīng)答包括相應(yīng)細(xì)胞因子的產(chǎn)生增加、相應(yīng)淋巴細(xì)胞的增殖增加和與細(xì)胞因子產(chǎn)生增加相關(guān)的其它效應(yīng)，包括遷移效應(yīng)。1型應(yīng)答的特征一般為IL-2、TNF-α和IFN-γ增加，而2型應(yīng)答的特征通常為IL4、IL-5、IL-6和IL-10增加。
本文還使用的術(shù)語(yǔ)藥劑“優(yōu)先積累”在靶器官中是指靶器官的選擇機(jī)制導(dǎo)致相對(duì)于其它組織或器官而言所述藥物在靶器官中的凈攝取或保留增加。所述機(jī)制因此可以包括通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、受體、囊泡等主動(dòng)輸入，但也可以基于物理化學(xué)原理，包括所述藥物的pH依賴性電荷、所述藥物在環(huán)境中的不同溶解性以及在靶器官或靶細(xì)胞中離子強(qiáng)度改變、化學(xué)修飾或酶修飾等。
在一個(gè)優(yōu)選方面，所述藥物是利巴韋林，將其提供患有HCV(丙型肝炎病毒)感染的患者，利巴韋林通?？诜o予所述患者，每天一劑600mg，給予180天。600mg/天的一劑一般低于系統(tǒng)免疫抑制濃度，然而對(duì)于優(yōu)先在肝中積累是有效的。因此，利巴韋林在靶器官(在此為肝)中的濃度將顯著增加，并且在肝中達(dá)到免疫抑制濃度。已知利巴韋林相對(duì)于2型應(yīng)答增強(qiáng)1型應(yīng)答，并且在相對(duì)高濃度下減弱1型應(yīng)答和2型應(yīng)答。在1998年1月13日申請(qǐng)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朠CT/US98/00634中敘述了實(shí)例，該專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
在本發(fā)明主題的其它方面，所述藥物不必限于利巴韋林，替代藥物包括所考慮的化合物(參見(jiàn)上文)，特別是經(jīng)修飾和未經(jīng)修飾的LevovirinTM以及磷酸化LevovirinTM。其它替代藥物包括所考慮的化合物，只要替代化合物在免疫抑制濃度下減弱1型應(yīng)答和2型應(yīng)答，并且在低于免疫抑制濃度下相對(duì)于2型應(yīng)答增強(qiáng)1型應(yīng)答即可。
關(guān)于患者，也考慮了除HCV感染以外的各種病毒感染，包括蟲(chóng)媒病毒感染。因此，靶器官不限于肝，但也可以包括其它器官，例如腦、肺、脾、胸腺、腎等。一般而言，考慮了可以用按照本文所述主題的方法治療的疾病將取決于藥物的特異性積累模式(即在哪些器官中所述藥物優(yōu)先積累)。例如，利巴韋林和LevovirinTM都優(yōu)先在肝中積累，并且在高于免疫抑制濃度的濃度下既減弱1型應(yīng)答，也減弱2型應(yīng)答。因此，尤其考慮了需要抑制肝中免疫應(yīng)答的疾病，包括丙型肝炎、自身免疫/狼瘡樣肝炎、肝移植受體等。
尤其應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，不將按照本發(fā)明主題的方法設(shè)計(jì)用來(lái)提供直接抗病毒治療，而是將其設(shè)計(jì)為至少部分抑制病毒感染器官中的免疫應(yīng)答?？紤]了器官定向免疫抑制在丙型肝炎中尤為有益，在丙型肝炎中器官損害不是由HCV病毒直接引起的，而是由于感染誘導(dǎo)的1型應(yīng)答和2型應(yīng)答之間不平衡所致。因此，設(shè)計(jì)了一種用特異性地在感染HCV的患者肝中減弱1型應(yīng)答和2型應(yīng)答的藥物治療的方法，以預(yù)防性地以及作為治療途徑預(yù)防肝損害。由于利巴韋林和LevovirinTM在人體內(nèi)都具有出色的耐受性，因此長(zhǎng)期預(yù)防和長(zhǎng)期治療是特別有利的。
關(guān)于利巴韋林或替代的所考慮的化合物的給予(途徑、劑量、時(shí)間表、期限等)，適用與下述相同的考慮。還考慮了利巴韋林或替代的所考慮的化合物可以用于一般健康背景下，與臨床治療背景相反。因此，考慮了利巴韋林或替代的所考慮的化合物也可以用來(lái)改善消化。例如，患有消化不良的個(gè)體-無(wú)論消化不良是由于肝病例如乙型肝炎或丙型肝炎感染所致，還是實(shí)際上是由于特征為肝臟炎癥的任何其它病癥所致，都可以攝取一種或多種所述化合物。在這種情況下，所述個(gè)人以低于正常產(chǎn)生系統(tǒng)免疫抑制的量、但在肝中積累至在所述個(gè)人肝中產(chǎn)生免疫抑制濃度的量攝取利巴韋林或利巴韋林樣化合物，則可以改善消化。
非臨床、非治療性應(yīng)用的另一個(gè)實(shí)例是個(gè)人攝取利巴韋林或替代的所考慮化合物作為改善膚色的手段。特別考慮了，所述個(gè)人以低于正常產(chǎn)生系統(tǒng)免疫抑制的量、但在肝中積累至在所述個(gè)人肝中產(chǎn)生免疫抑制濃度的量攝取利巴韋林或替代的所考慮化合物，則可以改善膚色。
在所有這些方法中，特別考慮了利用利巴韋林(1-(5-脫氧-β-D-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)或LevovirinTM(1-(5-脫氧-β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)或其任何一、二或三磷酸化形式。攝取量或給藥量最好足以產(chǎn)生對(duì)I型應(yīng)答和II型應(yīng)答的系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)以及對(duì)肝中I型應(yīng)答和II型應(yīng)答兩者的抑制。尤其優(yōu)選的量為約300mg/天和約800mg/天之間，雖然在某些個(gè)體中所述范圍可以低至約50-100mg/天至高至2000-2400mg/天。也考慮了對(duì)其它器官的效應(yīng)，包括腦或已知利巴韋林在其中顯著積累的其它器官。
神經(jīng)元生長(zhǎng)的刺激本文所用的術(shù)語(yǔ)“刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)”是指細(xì)胞生長(zhǎng)和/或分裂或者從靜息細(xì)胞起始、或者在生長(zhǎng)中和/或分裂中的細(xì)胞中加速的任何過(guò)程，其中“神經(jīng)元”是指直接或間接參與認(rèn)知、感覺(jué)或運(yùn)動(dòng)信號(hào)傳播的所有細(xì)胞。例如，神經(jīng)元被認(rèn)為直接參與信號(hào)傳播，而髓鞘細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞由于其絕緣功能或?qū)ι窠?jīng)元的結(jié)構(gòu)/代謝支持是間接參與的。同樣，受體也被認(rèn)為是在該定義范圍內(nèi)的神經(jīng)元。相反，認(rèn)為構(gòu)成硬膜內(nèi)層和外層的細(xì)胞不是神經(jīng)元，因?yàn)樗鼈儾⒉恢苯踊蜷g接涉及認(rèn)知、感覺(jué)或運(yùn)動(dòng)信號(hào)的傳播。
本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，利巴韋林有效刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)，本發(fā)明人還考慮了，利巴韋林的各種磷酸化類(lèi)似物也可能有效地刺激這種生長(zhǎng)。另外考慮到，LevovirinTM及其磷酸化類(lèi)似物以相似的方式可能是有效的。在一個(gè)特定實(shí)驗(yàn)中，已經(jīng)認(rèn)識(shí)到LevovirinTM在體外在0.5μM-500μM濃度范圍內(nèi)有效刺激單極神經(jīng)元的生長(zhǎng)。因此，將LevovirinTM以約5.0μM的濃度加入培養(yǎng)基中，可以用來(lái)刺激單極神經(jīng)元的生長(zhǎng)。
還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的方法不必限于單極神經(jīng)元，而是可以包括各種其它細(xì)胞，包括雙極神經(jīng)元和多極神經(jīng)元。此外，考慮到，在刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的方法的其它方面，可以在多樣化的神經(jīng)元群體中靶向個(gè)別的細(xì)胞類(lèi)型。例如，可以在復(fù)雜的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)例如腦、脊髓或眼中靶向單極、雙極和多極神經(jīng)元。因此，神經(jīng)元可以是神經(jīng)元組織的部分，包括以下細(xì)胞類(lèi)型中的至少四種星形膠質(zhì)細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、髓鞘細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、單極神經(jīng)元、雙極神經(jīng)元、多極神經(jīng)元和受體細(xì)胞。
因此，所考慮的方法不必限于刺激細(xì)胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)元生長(zhǎng)。在本發(fā)明主題的其它方面，考慮了可以刺激組織培養(yǎng)物中的細(xì)胞，特別考慮了可以體內(nèi)刺激神經(jīng)元。體內(nèi)刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)，可以有益地用作預(yù)防性治療或治療性治療。例如，按照本發(fā)明主題的所考慮的方法可以用來(lái)預(yù)防脫髓鞘性疾病或神經(jīng)變性性疾病，例如早老性癡呆或帕金森病，或在患者手術(shù)之前用作預(yù)防性治療。所考慮的治療性治療包括窒息性損害、創(chuàng)傷性損害、毒性損害、感染性損害、變性性損害、代謝性損害、局部缺血損害或低氧損害的逆轉(zhuǎn)或減弱。
因此，如圖6所示，改善患者協(xié)調(diào)的方法600有一個(gè)第一步驟610，其中確定磷酸化或未磷酸化的利巴韋林或LevovirinTM在體內(nèi)在給定濃度范圍內(nèi)有效刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)。在隨后的步驟620中，讓患者攝取有效刺激所述患者的至少某些神經(jīng)元生長(zhǎng)的量的磷酸化或未磷酸化利巴韋林或LevovirinTM。尤其考慮了對(duì)眼手協(xié)調(diào)的改善。
在改善個(gè)人協(xié)調(diào)的一個(gè)優(yōu)選方法中，確定利巴韋林在體內(nèi)在0.5μM-500μM的濃度范圍內(nèi)有效刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)，并且將利巴韋林以1200mg/天的劑量口服給予患有坐骨神經(jīng)創(chuàng)傷性損害的患者。
關(guān)于所述患者，也考慮了坐骨神經(jīng)創(chuàng)傷性損害以外的各種病癥，包括對(duì)多種神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)械和化學(xué)損傷、神經(jīng)元的細(xì)菌和/或病毒感染和變性性疾病。無(wú)論患者病癥的性質(zhì)如何，考慮了按照本發(fā)明主題的方法可以刺激各種各樣的神經(jīng)元，尤其考慮了受刺激的神經(jīng)元在所述個(gè)人的腦和隨意肌之間或所述個(gè)人的腦和皮膚感受器(sensor)之間通訊。
另一類(lèi)所考慮的方法包括改善患者的觸覺(jué)或其它感覺(jué)感受性。再一類(lèi)所考慮的方法包括改善一般(gross)運(yùn)動(dòng)控制和精細(xì)運(yùn)動(dòng)控制。
雖然不希望受限于特定理論，但認(rèn)為給予利巴韋林、LevovirinTM、或者LevovirinTM或利巴韋林的一、二和三磷酸化形式可能實(shí)現(xiàn)患者體內(nèi)1型應(yīng)答或2型應(yīng)答的改變，這可能伴隨達(dá)到神經(jīng)保護(hù)狀態(tài)或刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)。因此，認(rèn)為按照本發(fā)明主題的化合物可以作為患者疾病治療的一部分、以有效增強(qiáng)所述患者1型應(yīng)答和減弱2型應(yīng)答的劑量范圍給予。關(guān)于利巴韋林或替代的所考慮化合物的體內(nèi)給藥(途徑、劑量、時(shí)間表、期限等)，使用與下述相同的考慮。
抗腫瘤治療還考慮了，按照本發(fā)明主題的化合物可以作為抗腫瘤藥用于治療實(shí)體瘤或淋巴瘤，所考慮的腫瘤包括各種癌、肉瘤和淋巴瘤，特別包括急性髓細(xì)胞白血病和慢性髓細(xì)胞白血病急性發(fā)作。還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在抗病毒治療中給予所考慮的化合物，一般將依照已知D-核苷酸、D-核苷及其相應(yīng)類(lèi)似物在抗腫瘤療法中所用的途徑、劑量、時(shí)間表和期限。
所考慮化合物的給予關(guān)于所考慮化合物的給予，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所述化合物可以按照任何合適的方案、以任何合適的藥用制劑給予。一般最好是口服所考慮的化合物。在本發(fā)明主題的其它方面，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，各種替代的給藥也是合適的，還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，具體的給藥一般將取決于所考慮化合物的化學(xué)穩(wěn)定性、生物有效性、劑量、制劑和/或所需的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)特性。因此，合適的給藥將包括局部傳遞(例如軟膏、噴霧劑、乳油等)、胃腸外系統(tǒng)傳遞(例如吸入)以及直接或間接傳遞至血流(例如靜脈注射或肌內(nèi)注射等)。
因此，所考慮化合物的制劑可以有很大不同。例如，在所述藥物或藥物組合物表現(xiàn)出足夠的穩(wěn)定性以通過(guò)胃腸系統(tǒng)而無(wú)不希望有的化學(xué)修飾或酶修飾的情況下，口服制劑可以包括糖漿、片劑、凝膠膠囊、粉劑等。另一方面，在所考慮化合物通過(guò)胃腸道吸收或傳遞到血流中成問(wèn)題的情況下，合適的制劑尤其包括注射液或懸浮夜(例如緩沖至約pH7.2-7.5的生理鹽水溶液)。
關(guān)于所考慮化合物的劑量，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，各種劑量是合適的，所考慮的劑量的范圍通常為1毫克至數(shù)百毫克和甚至更大。例如，在所考慮化合物以相對(duì)低的速率被排泄或代謝的情況下，或者在需要長(zhǎng)期治療的情況下，劑量的范圍通常為5mg-200mg/天。另一方面，在所考慮藥物的生物有效性相對(duì)低的情況下，或者在代謝轉(zhuǎn)化(例如去磷酸化)相對(duì)快的情況下，劑量范圍通常為100mg-2500mg/天。
關(guān)于L-核苷、尤其是LevovirinTM的劑量，還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，LevovirinTM看來(lái)在體內(nèi)不被磷酸化，至少在肝細(xì)胞和紅細(xì)胞中不被磷酸化，并且由于利巴韋林的抗病毒效應(yīng)看來(lái)依賴于磷酸化，故本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)期LevovirinTM不具有直接抗病毒效應(yīng)。實(shí)際上，實(shí)驗(yàn)(未報(bào)道)表明沒(méi)有直接抗病毒效應(yīng)。令人驚訝的是，LevovirinTM抗病毒效應(yīng)的劑量看來(lái)是不高于200mg/天，優(yōu)選在10-200mg范圍內(nèi)，更優(yōu)選在50-200mg范圍內(nèi)，甚至更優(yōu)選在50-100mg范圍內(nèi)。這一點(diǎn)得到實(shí)驗(yàn)證據(jù)的支持，所述實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明，給定劑量的LevovirinTM導(dǎo)致血清水平5倍于等劑量的利巴韋林。
實(shí)驗(yàn)表明，利巴韋林通過(guò)在紅細(xì)胞中磷酸化，從血清中除去(參見(jiàn)例如Homma，M.等；高效液相色譜測(cè)定全血中的利巴韋林以評(píng)價(jià)在紅細(xì)胞中的處置(High-performance liquid chromatographic determination ofribavirin in whole blood to assess disposition in erythrocytes)；Antimicrob.Agents Chemother.(1999)，43(11)2716-9)。利巴韋林磷酸化后，就不能離開(kāi)細(xì)胞。因此紅細(xì)胞作為利巴韋林庫(kù)起作用，因而需要較高劑量的利巴韋林來(lái)達(dá)到給定的血清水平。LevovirinTM不被磷酸化，因此往往不在紅細(xì)胞中積累。因而，紅細(xì)胞不作為L(zhǎng)evovirinTM庫(kù)，較低劑量的LevovirinTM則足以達(dá)到所需的血清水平。
給藥時(shí)間表可以有很大的不同，所考慮的時(shí)間表包括在整個(gè)治療期間一劑、在整個(gè)治療期間每日一劑給予多劑、每日多劑和在治療期間的至少部分時(shí)期內(nèi)持續(xù)給藥(例如持續(xù)輸注、移植滲透泵等)。雖然一般最好是合適的時(shí)間表持續(xù)恒定傳遞所考慮的化合物，但突發(fā)性傳遞(即以第一劑量給予至少一次，然后以低于第一劑量的劑量至少再給予一次)也是合適的。關(guān)于治療期限(即持續(xù)時(shí)間)，設(shè)想合適的持續(xù)時(shí)間可以在一次給藥和數(shù)天、數(shù)周、數(shù)年以及甚至更長(zhǎng)時(shí)間之間變動(dòng)。例如，在所考慮的化合物用于細(xì)胞培養(yǎng)物中的情況下，一次給藥或相對(duì)短時(shí)間的給藥可能是足夠的。另一方面，在給予所考慮的化合物以治療急性肝病的情況下，合適的治療持續(xù)時(shí)間的范圍可以在數(shù)天和數(shù)周之間。同樣，在通過(guò)給予所考慮的化合物治療慢性肝病的情況下，在一年或多年內(nèi)延伸給藥可能是合適的。
在本發(fā)明主題的另外的方面，所考慮的化合物可以與另外的藥用活性物質(zhì)聯(lián)合，以有助于治療各種疾病，特別是病毒感染。另外的藥用活性物質(zhì)可以分開(kāi)給予或一起給予，當(dāng)分開(kāi)給藥時(shí)，給藥可以同時(shí)進(jìn)行或以任何順序分開(kāi)進(jìn)行。特別考慮的另外的藥用活性物質(zhì)包括抗病毒藥和免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)。例如抗病毒藥包括蛋白酶抑制劑、核苷酸和/或核苷類(lèi)似物(尤其是利巴韋林)，免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)可以包括細(xì)胞因子(例如干擾素α和γ、IL2、IL4、IL6、IL8、IL10和IL12)。
另外考慮的藥理學(xué)活性藥包括抗真菌藥，例如托萘酯、FungizoneTM、LotriminTM、MycelexTM、制霉菌素和兩性霉素；抗寄生蟲(chóng)藥，例如MintezolTM、NiclocideTM、VermoxTM和FlagylTM；腸用藥物，例如ImmodiumTM、LomotilTM和PhazymeTM；抗腫瘤藥，例如干擾素α和γ、AdriamycinTM、CytoxanTM、ImuranTM、甲氨蝶呤、MithracinTM、TiazofurinTM、TaxolTM；皮膚科藥物，例如AclovateTM、CyclocortTM、DenorexTM、FloroneTM、OxsoralenTM、煤焦油和水楊酸；偏頭痛制劑，例如麥角胺化合物；以上未列出的類(lèi)固醇和免疫抑制藥，包括環(huán)孢菌素、DiprosoneTM、氫化可的松；FloronTM、LidexTM、TopicortTM和ValisoneTM；和代謝藥，例如胰島素和可能不示于以上類(lèi)別的其它藥物。
所考慮化合物與干擾素的優(yōu)選組合在本發(fā)明主題的一個(gè)特別優(yōu)選的方面，考慮了LevovirinTM和至少一種干擾素、最好是IFN-α-2b的協(xié)同組合。LevovirinTM在紅細(xì)胞中通常不被磷酸化，或僅以顯著低于利巴韋林的程度磷酸化，雖然它仍表現(xiàn)出抗病毒活性和免疫調(diào)節(jié)活性。因此，設(shè)想干擾素的藥理學(xué)作用、尤其是在肝病的治療中的作用可以通過(guò)共同給予與利巴韋林相比顯著較低劑量的LevovirinTM來(lái)增強(qiáng)。例如，設(shè)想了治療HCV感染所需的LevovirinTM與干擾素結(jié)合的有效協(xié)同劑量在1-600mg范圍內(nèi)，更優(yōu)選在10-400mg范圍內(nèi)，再更優(yōu)選在50-300mg范圍內(nèi)，最優(yōu)選在100-300mg范圍內(nèi)。認(rèn)為利巴韋林的等同協(xié)同劑量為600-800mg。
在本發(fā)明主題的另一方面，考慮了LevovirinTM和干擾素的協(xié)同組合將導(dǎo)致相對(duì)于等同有效劑量的利巴韋林和干擾素組合而言毒性降低，主要是由于在紅細(xì)胞中缺乏顯著的磷酸化所致。從另一角度來(lái)看，考慮了LevovirinTM和干擾素的協(xié)同組合特別允許靶向肝臟，因?yàn)長(zhǎng)evovirinTM在肝臟以外的區(qū)室內(nèi)尤其在紅細(xì)胞內(nèi)缺乏磷酸化。
關(guān)于LevovirinTM和干擾素的共同給予，考慮了所有合適的途徑和方案都是合適的，尤其優(yōu)選LevovirinTM和干擾素以與利巴韋林和干擾素的已知給藥方案類(lèi)似的方案給予。例如，可以口服LevovirinTM，而皮下注射干擾素。一般而言，設(shè)想LevovirinTM和干擾素的共同給予可以利用相互無(wú)關(guān)的時(shí)間表和途徑，只要這兩種藥物在血流中同時(shí)達(dá)到可測(cè)量濃度即可。還考慮了LevovirinTM的有效劑量計(jì)劃為給予利巴韋林時(shí)利巴韋林在肝臟中的有效濃度。
雖然具體考慮了LevovirinTM，但包括前體藥物形式在內(nèi)的化學(xué)修飾例如修飾的LevovirinTM(1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲脒)、一、二和三磷酸化LevovirinTM和立體化學(xué)變體(例如對(duì)映體、異構(gòu)體等)也是合適的。合適的化學(xué)修飾和前體藥物形式的實(shí)例描述于美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/594410號(hào)(參見(jiàn)上文)。還考慮了，合適的藥物也可以包括LevovirinTM及其變體以外的藥物，特別考慮了替代的藥物包括具有可以在肝中被酶促脫氨/脫酰胺的氨基或酰胺基的肝特異性前體藥物。
關(guān)于干擾素，考慮了LevovirinTM的共同給予不必限于IFN-α-2b，共同給予也可以包括干擾素-α的天然和合成片段、同種型和共有形式。此外，干擾素-α以外的干擾素也是合適的，包括干擾素-β及其天然和合成的片段、同種型和共有形式。雖然具體考慮了干擾素，但干擾素以外的細(xì)胞因子和趨化因子也是合適的，包括IL-2、IL-12和TNF。尤其考慮了所考慮的干擾素的PEG化形式(即所考慮的干擾素與聚乙二醇連接)也適合與本文所述內(nèi)容結(jié)合使用。
所考慮化合物與結(jié)合病毒蛋白或細(xì)胞因子的第二化合物的組合在所考慮化合物與其它藥理學(xué)活性劑的組合用于抗病毒療法中的情況下，特別考慮了這類(lèi)組合可以包含具有直接和間接抗病毒效應(yīng)的所考慮的化合物和增強(qiáng)總抗病毒效應(yīng)的第二化合物(總抗病毒效應(yīng)包括直接抗病毒效應(yīng)和間接抗病毒效應(yīng))，其中所述第二化合物特異性地結(jié)合病毒蛋白或細(xì)胞因子。
關(guān)于所述組合中的所考慮的化合物，優(yōu)選核苷類(lèi)似物，甚至更優(yōu)選所述核苷類(lèi)似物是利巴韋林(1-(5-脫氧-β-D-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)。已知利巴韋林由于抑制RNA和DNA病毒的復(fù)制而具有直接抗病毒效應(yīng)[Huffman等，Antimicrob.Agents Chemother(1973)，3235；Sidwell等，Science(1972)，177705]，以及由于抑制2型介導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答和促進(jìn)1型介導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答而具有間接抗病毒效應(yīng)，如美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/156,646號(hào)中所述，所述專(zhuān)利通過(guò)引用結(jié)合到本文中。然而，也考慮了利巴韋林以外的各種化合物，具體包括L-核苷類(lèi)似物，只要這類(lèi)替代的化合物具有直接和間接抗病毒效應(yīng)即可。例如，在需要特別高濃度的L-核苷類(lèi)似物的情況下，可以使用LevovirinTM。
還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，根據(jù)所述第一化合物的化學(xué)性質(zhì)，所述第一化合物可以具有更顯著的直接抗病毒效應(yīng)或更顯著的間接抗病毒效應(yīng)。所考慮的直接抗病毒效應(yīng)包括抑制病毒復(fù)制，例如抑制反轉(zhuǎn)錄酶，而所考慮的間接抗病毒效應(yīng)包括1型/2型平衡轉(zhuǎn)變?yōu)?型或2型應(yīng)答，如美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/156,646號(hào)中所述。也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，間接抗病毒效應(yīng)可以包括抑制1型應(yīng)答和2型應(yīng)答，所述間接抗病毒效應(yīng)更詳細(xì)地描述于美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)第60/172,097號(hào)(參見(jiàn)上文)。1型/2型平衡向1型或2型應(yīng)答的轉(zhuǎn)變或1型/2型應(yīng)答的抑制可以有利地由相同的第一化合物來(lái)控制，其中所述第一化合物的劑量決定1型應(yīng)答或2型應(yīng)答中的轉(zhuǎn)變或抑制。
關(guān)于所述第二化合物，最好是所述第二化合物包括抗體(例如單克隆抗體或多克隆抗體)。然而應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在本發(fā)明主題的其它方面，所述抗體不必限于天然存在的抗體形式，而是也可以包括合成形式的抗體(例如通過(guò)噬菌體淘選或其它分子進(jìn)化技術(shù)獲得的小抗體)或抗體片段。在由重組細(xì)胞生產(chǎn)抗體片段或所述第二化合物的分子量應(yīng)該相對(duì)低(即低于75kDa)的情況下，抗體片段是特別理想的。所設(shè)想的抗體片段包括Fab、F(ab)2和scFab。此外，設(shè)想了可以對(duì)合適的抗體進(jìn)行修飾，以引入各種額外的特性，包括報(bào)道基團(tuán)、第二親和部分(例如雙特異性抗體)或藥理學(xué)活性分子。例如，報(bào)道基團(tuán)可以包括放射性同位素或可用體內(nèi)掃描裝置(例如磁共振成象)檢測(cè)的金屬。所設(shè)想的藥理學(xué)活性分子可以包括反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑或細(xì)胞毒性劑。重組抗體和非重組抗體的產(chǎn)生是本領(lǐng)域眾所周知的(例如參見(jiàn)Current Protocols in Immunology；John Wiley & Sons(1999)；編著JohnE.Coligan，Ada M.Kruisbeek，David H.Margulies，Ethan M.Shevach，Warren Strober)，考慮了所有已知的其制備方法適合結(jié)合本文所述內(nèi)容使用。抗體通常通過(guò)注射(例如靜脈注射)給予，實(shí)際的劑量通常為0.01mg和數(shù)十毫克之間，然而，合適時(shí)也考慮較低的劑量。
還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所述第二化合物與病毒蛋白或細(xì)胞因子的結(jié)合在導(dǎo)致病毒蛋白和/或細(xì)胞因子失活的情況下，所述結(jié)合特別有利，設(shè)想了失活可以通過(guò)各種機(jī)制發(fā)生。例如，通過(guò)抗體介導(dǎo)的沉淀(即在抗體和病毒之間形成分子網(wǎng)絡(luò))可以達(dá)到使病毒失活。或者，所述第二化合物的結(jié)合可以通過(guò)封閉或者阻礙病毒感染性或繁殖所必需的蛋白或其它病毒表面結(jié)構(gòu)，而使所述病毒失活。再者，可以發(fā)生所述第二化合物與非結(jié)構(gòu)病毒蛋白的結(jié)合，包括與病毒聚合酶和蛋白酶的結(jié)合。例如，所設(shè)想的結(jié)合靶(即半抗原)包括例如HIV病毒gp120/41的蛋白質(zhì)，但也包括例如HIV病毒反轉(zhuǎn)錄酶的蛋白質(zhì)。還考慮了病毒蛋白包括來(lái)自HIV病毒、肝炎病毒、流感病毒和RSV病毒的蛋白質(zhì)。關(guān)于細(xì)胞因子，考慮了通過(guò)將所述細(xì)胞因子與細(xì)胞因子庫(kù)隔離，可以達(dá)到所述失活。例如在所考慮的第二化合物的半抗原是1型細(xì)胞因子的情況下，特別考慮的細(xì)胞因子包括白介素-2、干擾素-γ和腫瘤壞死因子-β，而在所述第二化合物的半抗原是2型細(xì)胞因子的情況下，特別考慮的細(xì)胞因子包括白介素-4、白介素-5和白介素-10。
一般考慮到，所述第二化合物引起的病毒或細(xì)胞因子的失活可能具有多種所需效應(yīng)，所述效應(yīng)可能表現(xiàn)出或不表現(xiàn)出與所述第一化合物結(jié)合的相加效應(yīng)或協(xié)同效應(yīng)。例如，考慮了在所述第一化合物具有直接抗病毒效應(yīng)(導(dǎo)致病毒滴度的顯著降低)的情況下，第二化合物甚至可以通過(guò)沉淀剩余的病毒而進(jìn)一步降低病毒滴度。另一方面，所述第二化合物可以通過(guò)與感染性必需的病毒組分結(jié)合而減少感染性病毒粒子數(shù)。還考慮了，在所述第二化合物結(jié)合細(xì)胞因子的情況下，所述第二化合物可以通過(guò)將一種或多種2型細(xì)胞因子與細(xì)胞因子庫(kù)隔離，將1型/2型平衡向1型應(yīng)答轉(zhuǎn)變，因此有助于恢復(fù)細(xì)胞免疫，雖然病毒荷載已經(jīng)顯著降低。在另一實(shí)施例中，考慮了在所述第一化合物具有間接抗病毒效應(yīng)(也導(dǎo)致病毒滴度的顯著降低)的情況下，第二化合物可以通過(guò)沉淀剩余的病毒而進(jìn)一步降低病毒效價(jià)?；蛘?，一種或多種1型和/或2型細(xì)胞因子可以被一種第二化合物或第二化合物的混合物隔離，由此“細(xì)調(diào)”(即調(diào)節(jié))由所述第一化合物誘導(dǎo)的1型和/或2型應(yīng)答。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，具有直接和間接抗病毒效應(yīng)的第一化合物與特異性地結(jié)合病毒和/或細(xì)胞因子的第二化合物的組合，將不僅通過(guò)一種機(jī)制(即酶抑制)來(lái)降低病毒滴度，而且通過(guò)系統(tǒng)(即免疫的刺激/調(diào)節(jié))作用來(lái)降低病毒滴度。尤其考慮到，優(yōu)選的抗病毒藥組合物包括具有協(xié)同效應(yīng)的第一化合物和第二化合物，這有益地幫助降低所述第一化合物和所述第二化合物的有效劑量。還考慮了，合適的抗病毒藥組合物也可以用于預(yù)防性治療。
所考慮化合物與利巴韋林的組合特別考慮了，LevovirinTM和利巴韋林的共同給予將降低利巴韋林和/或LevovirinTM的不利副作用并改善其耐受性。關(guān)于共同給予的利巴韋林與LevovirinTM之比，最好是LevovirinTM以至少利巴韋林的等摩爾量存在。然而，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，各種其它比率也是合適的，具體的比率將主要取決于所需效應(yīng)和給藥劑量/途徑。例如，在特別關(guān)注溶血性貧血的情況下，LevovirinTM的共同給藥量范圍可以為約51％(摩爾)至約80％(摩爾)或更高。另一方面，在LevovirinTM的耐受性有限的情況下，LevovirinTM的共同給藥量范圍可以為約49％(摩爾)至約20％(摩爾)或更低。
還應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，利巴韋林和LevovirinTM的共同給予不必應(yīng)用相同的給藥途徑。本文所用的術(shù)語(yǔ)“共同給予”是指給予利巴韋林和LevovirinTM的任何形式，使得利巴韋林和LevovirinTM同時(shí)在系統(tǒng)中以可測(cè)量濃度存在。因此，所考慮的共同給予包括其中以一種途徑給予利巴韋林，而以另一種途徑給予LevovirinTM的方案，其中所述共同給予可以同時(shí)進(jìn)行或在兩個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。例如，可以口服利巴韋林，而可以靜脈注射LevovirinTM。在另一實(shí)施例中，可以BID口服利巴韋林，而QID口服LevovirinTM。
特別考慮了，通過(guò)改變共同給予方案中的利巴韋林和LevovirinTM的摩爾份數(shù)，可以根據(jù)患者的具體需要制定特別理想的生物學(xué)效應(yīng)，包括對(duì)1型/2型細(xì)胞因子平衡的調(diào)節(jié)、直接抗病毒效應(yīng)、減弱血中毒特性等。
在本發(fā)明主題的另一方面，考慮了給予或共同給予利巴韋林和LevovirinTM將包括連續(xù)釋放和/或以較為頻繁的間隔給予降低的劑量。特別考慮了，連續(xù)釋放和/或以頻繁的間隔給予降低的劑量，將減小不希望有的副作用，并且可以增強(qiáng)所述直接和/或間接抗病毒效應(yīng)。雖然一般考慮了可以將按照本發(fā)明主題的化合物給予任何系統(tǒng)，但最好是將所考慮的化合物給予哺乳動(dòng)物，最好是人類(lèi)，或給予細(xì)胞或組織培養(yǎng)物。
所考慮化合物的代謝物一般考慮了，LevovirinTM當(dāng)給予系統(tǒng)時(shí)是代謝惰性的，然而，本發(fā)明人也設(shè)想了LevovirinTM可能具有代謝物，所述代謝物如結(jié)構(gòu)4-8中所示。 結(jié)構(gòu)4 結(jié)構(gòu)5 結(jié)構(gòu)6 結(jié)構(gòu)7 結(jié)構(gòu)8結(jié)構(gòu)4是一種三唑甲酰胺，結(jié)構(gòu)5是一種三唑羧酸，結(jié)構(gòu)6是一種L-呋喃核糖基三唑甲酰胺，結(jié)構(gòu)7是一種5’-乙酰L-呋喃核糖基三唑甲酰胺，而結(jié)構(gòu)8是一種5’-乙酰-α-L-呋喃核糖基三唑甲酰胺。
雖然一般考慮了LevovirinTM的代謝產(chǎn)物作為酶反應(yīng)產(chǎn)物形成，但也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在合適的細(xì)胞系統(tǒng)的胞內(nèi)或胞外條件下，代謝物可以不經(jīng)酶反應(yīng)而形成。因此，由LevovirinTM形成代謝物可以包括氧化還原反應(yīng)(特別是氧化)、酶催化反應(yīng)(例如水解)和光化學(xué)反應(yīng)。
所設(shè)想的反應(yīng)產(chǎn)物通常是LevovirinTM的降解產(chǎn)物，然而應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，代謝物也可以包括通過(guò)加入化學(xué)基團(tuán)(例如糖基化或乙?；?形成的產(chǎn)物，并且這類(lèi)經(jīng)修飾的化合物可能在相同或不同的區(qū)室內(nèi)經(jīng)受后續(xù)的降解。雖然一般考慮了與LevovirinTM相比所述代謝物具有顯著降低的藥理學(xué)效應(yīng)，但應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，所述代謝物可能具有與LevovirinTM相似的藥理學(xué)效應(yīng)。例如，所述三唑或核糖部分可以用作效應(yīng)物(例如變構(gòu)抑制劑)。
還考慮了以未經(jīng)代謝的形式排泄出給予系統(tǒng)的LevovirinTM具體劑量的20％-50％、優(yōu)選51-75％、更優(yōu)選76％-99％、最優(yōu)選100％。
實(shí)施例利用利巴韋林的定向肝免疫抑制進(jìn)行了三項(xiàng)利巴韋林在慢性丙型肝炎治療中的安慰劑對(duì)照研究。這些研究包括134位用利巴韋林治療的患者和97位接受安慰劑的患者。也有兩項(xiàng)無(wú)對(duì)照的II期研究，包括總共23位用利巴韋林治療的患者。第一個(gè)反應(yīng)參數(shù)是血清ALT水平正?；蚪档?。也在血清HCVRNA水平的消除或降低、以及根據(jù)Knodell分值的改變?cè)u(píng)價(jià)的肝組織學(xué)的改善方面，評(píng)價(jià)反應(yīng)。
在所有有對(duì)照和無(wú)對(duì)照的研究中，用所述方案和分析計(jì)劃中具體規(guī)定的反應(yīng)的定義，在治療期間ALT水平的正?；徒档头矫?，利巴韋林在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著優(yōu)于安慰劑。在基于有對(duì)照研究中所有患者的綜合分析中，采用一致的反應(yīng)定義，包括治療結(jié)束時(shí)ALT的正?；蚺R床意義水平的部分反應(yīng)，46％的利巴韋林患者是有效者，相比之下有4％的安慰劑患者是有效者(p＜0.001)?；颊咭话阍谥委?個(gè)月或3個(gè)月后有反應(yīng)，并且只要治療繼續(xù)進(jìn)行則保持所述反應(yīng)。沒(méi)有隨治療持續(xù)時(shí)間的增加ALT反應(yīng)喪失的證據(jù)。在直接治療期結(jié)束時(shí)停止利巴韋林后，11.5％的反應(yīng)者在整個(gè)隨訪期都具有持續(xù)的反應(yīng)。
關(guān)于肝組織學(xué)的改善，在每項(xiàng)有對(duì)照研究中，在總Knodell分值和許多分量分值的改變方面沒(méi)有有利于利巴韋林的顯著傾向。用基線Knodell分值作為協(xié)變量(covariate)通過(guò)協(xié)方差分析來(lái)分析綜合數(shù)據(jù)，導(dǎo)致在總分值和每種分量分值方面有利于利巴韋林的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。因此，在有對(duì)照研究中，將所有利巴韋林治療的患者與安慰劑受者相比，利巴韋林在肝組織學(xué)改善方面具有中等但卻是真實(shí)的效應(yīng)。在利巴韋林組中，ALT有效者和無(wú)效者的比較揭示，與ALT無(wú)效者相比，ALT有效者經(jīng)歷了肝組織學(xué)上顯著更大的改善?？侹nodell分值的平均降低對(duì)于ALT有效者而言大約為2個(gè)點(diǎn)，相比之下，對(duì)于所有利巴韋林治療的患者而言是1個(gè)點(diǎn)。2個(gè)點(diǎn)的總Knodell分值下降一般被肝臟病學(xué)家認(rèn)為具有臨床顯著性。因此，在ALT反應(yīng)和肝臟組織學(xué)改善的臨床顯著性程度之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的正相關(guān)。
在所有研究中，基本終點(diǎn)(primary endpoint)定義為ALT水平的降低。在所有研究中，完全ALT反應(yīng)被定義為在治療結(jié)束時(shí)ALT水平正?；?。部分ALT反應(yīng)被定義為在治療結(jié)束時(shí)，比所述患者的基線值降低或者50％或者更多，或者相對(duì)于不高于正常上限1.5倍的水平而言降低50％或更多。
在研究92-001和91-DK-178中，比較治療組的所述研究藥物對(duì)肝炎相關(guān)癥狀方面的效應(yīng)。這在研究CT00/002中沒(méi)有進(jìn)行，因?yàn)樵摬±龍?bào)告形式不允許系統(tǒng)收集癥狀數(shù)據(jù)。
在研究92-001中，在疲勞減輕方面有有利于利巴韋林的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。在治療結(jié)束時(shí)和隨訪期結(jié)束時(shí)，與安慰劑患者相比，較高比例的利巴韋林患者顯示出相對(duì)于疲勞基線的某些改善(治療結(jié)束時(shí)p＝0.04，隨訪結(jié)束時(shí)p＝0.006)。在該項(xiàng)研究中，在各治療組之間在任何其它癥狀方面沒(méi)有顯著性差異。
在研究91-DK-I78中，在各治療組之間在個(gè)別就診時(shí)的個(gè)別癥狀方面有孤立的顯著性差異，某些有利于安慰劑組，而某些有利于利巴韋林組，但沒(méi)有有利于任何治療組的總體傾向。
表1顯示了肝臟組織學(xué)改善的反應(yīng)率。在各治療組之間在任何研究的Knodell分值改變方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，雖然有有利于利巴韋林的數(shù)字傾向。在研究CT00/002中，在第二組參數(shù)之一有有利于利巴韋林的差異(淋巴樣聚集物，p＝0.05)。
方案 方案的反應(yīng)定義 分析計(jì)劃的反應(yīng)定義結(jié)果92-001 比較各治療組每位患相同 在各治療組之間無(wú)者Knodell分值在治療顯著性差異前后的改變91-DK-178長(zhǎng)期反應(yīng)比較各治療組在每位 在各治療組之間無(wú)“用Wilcoxon秩和檢 患者Knodell分值在治 顯著性差異驗(yàn)對(duì)目前肝損害程度療前后的變化的所有肝臟活組織檢查的盲法等級(jí)評(píng)定”測(cè)定的肝臟組織病理學(xué)改善。CT00/002 根據(jù)Knodell分值評(píng)價(jià) 比較各治療組在每位 在各治療組之間無(wú)的治療前后炎性活性患者Knodell分值在治 顯著性差異程度的改善療前后的變化------------ -----------在治療前后被認(rèn)為與 在利巴韋林組中淋丙型肝炎相關(guān)的其它 巴樣聚集物減少組織學(xué)參數(shù)的改變表1-有對(duì)照研究結(jié)果的比較-肝臟組織學(xué)就所述不同研究而論進(jìn)行了進(jìn)一步的分析。然而，為了使這些分析的結(jié)果更具意義，綜合所述對(duì)照研究的數(shù)據(jù)，以使得樣本容量更大。綜合分析的結(jié)果依照相關(guān)效力標(biāo)準(zhǔn)(relevant effectiveness criteria)對(duì)利巴韋林反應(yīng)-利巴韋林治療期間的ALT反應(yīng)的分析為了進(jìn)行綜合效力分析，使用以下ALT反應(yīng)的定義完全有效在治療結(jié)束時(shí)返回至正常范圍內(nèi)。
部分有效在治療結(jié)束時(shí)，由患者基線水平降低50％或更多，至正常上限1.5倍之內(nèi)。
有效者符合上述完全有效或部分有效的定義。通過(guò)將符合每項(xiàng)研究中所用的各種反應(yīng)定義的各組患者的ALT值對(duì)時(shí)間作圖，確定“有效者”的定義。(所述數(shù)據(jù)與三次修勻樣條函數(shù)Reinsch 1967相符)。使用三種反應(yīng)定義a.完全有效＝在治療結(jié)束時(shí)ALT在正常的范圍內(nèi)。
b.部分有效(A)＝在治療結(jié)束時(shí)由所述患者的基線水平下降50％或更多至正常上限1.5倍之內(nèi)。
c.部分有效(B)＝在治療結(jié)束時(shí)由所述患者的基線水平下降50％或更多。所有其它患者均被認(rèn)為是無(wú)效者。也繪制了每項(xiàng)研究中利巴韋林治療的無(wú)效者以及每項(xiàng)研究中所有安慰劑患者(有效者和無(wú)效者)的曲線圖。
所述三條“完全有效”的曲線表明，在約1/3的治療期之后達(dá)到這種反應(yīng)，并且在此后保持。三條“部分有效(A)”曲線表明了相似的反應(yīng)模式。三條“部分有效(B)”曲線明顯地顯示出治療期間ALT水平更大的變異性。正如所預(yù)期的，利巴韋林治療的無(wú)效者的曲線和安慰劑患者的曲線顯示出在整個(gè)治療期和隨訪期期間沒(méi)有任何可識(shí)別模式變化的數(shù)據(jù)點(diǎn)的分散。確定“部分有效(B)”的定義不適于綜合效力分析。根據(jù)“完全有效”和“部分有效(A)”的定義表現(xiàn)出的反應(yīng)模式一致，并且由于這些定義在臨床上是有意義的事實(shí)，確定對(duì)于綜合效力分析而言，“反應(yīng)”的定義或者是“完全有效”或者是“部分有效(A)”。
表2顯示了采用上述ALT反應(yīng)定義的每項(xiàng)研究和綜合數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果。用x2檢驗(yàn)或費(fèi)歇耳恰當(dāng)檢驗(yàn)，比較在所述兩個(gè)治療組中有效者的比率。研究利巴韋林n/N(％) 安慰劑n/N(％)P值92-001 15/28(53.6) 1/30(3.3)＜0.00191-DK-178 11/29(37.9) 1/29(3.4)＜0.001CT00/00232/70(45.7) 2/36(5.6)＜0.001綜合數(shù)據(jù)庫(kù) 58/127(45.7) 4/95(4.2)＜0.001n＝具有ALT反應(yīng)(綜合定義)的患者數(shù)N＝所治療的所有患者(計(jì)劃的治療人群)減去沒(méi)有有效的無(wú)漏失觀測(cè)的患者。表2ALT有效率的百分比為了鑒定相應(yīng)于治療結(jié)束時(shí)的ALT值，追溯最多兩次就診(going back amaximun of two visits)，對(duì)于漏失這種真值的那些患者，進(jìn)行最后的有效無(wú)漏失觀測(cè)。這同一種策略用于所述三項(xiàng)有對(duì)照研究中的兩項(xiàng)(91-DK-178和CT00/002)。利巴韋林組中的9位患者和2位安慰劑患者沒(méi)有得到這種有效的無(wú)漏失觀測(cè)結(jié)果。所述ALT有效率在所有三個(gè)有對(duì)照研究中是一致的，范圍為37.9-53.6％。當(dāng)綜合所述數(shù)據(jù)時(shí)，ALT有效率為45.7％。在所有情況下，用利巴韋林治療的患者的ALT有效率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上均顯著優(yōu)于用安慰劑治療的患者的有效率。在安慰劑組中，ALT有效率一致地低，范圍為3.3-5.6％，綜合數(shù)據(jù)時(shí)為4.2％。隨訪期的ALT反應(yīng)表3總結(jié)了研究92-001和91-DK-178的持續(xù)有效率以及這兩項(xiàng)研究綜合的持續(xù)有效率。采用持續(xù)反應(yīng)的個(gè)體研究、分析計(jì)劃定義。持續(xù)有效者基本上是治療結(jié)束時(shí)或者ALT正常化或者部分有效的患者，它們?cè)谡麄€(gè)隨訪期仍符合這些標(biāo)準(zhǔn)中的任一個(gè)。對(duì)于研究CT00/002沒(méi)有可能提供這種相同的分析，因?yàn)樘俚幕颊哂姓麄€(gè)隨訪期完全的ALT資料。研究 利巴韋林n/N(％) 安慰劑n/N(％)92-0011/15(6.7)0/1(0.091-DK-178 2/11(18.2) 0/1(0.0)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)3/’26(11.5) 0/2(0.0)n＝ALT持續(xù)有效的患者數(shù)N＝在治療結(jié)束時(shí)完全有效或部分有效的患者數(shù)(研究分析計(jì)劃定義)。表3ALT持續(xù)有效率的百分比-方案定義在所分析的兩項(xiàng)研究中，ALT的持續(xù)有效率對(duì)于利巴韋林治療的患者而言為6.7％和18.2％，相比之下接受安慰劑的患者為0％。由于樣本容量小以及安慰劑有效者數(shù)非常少，因此沒(méi)有進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Knodell分值的改善在所述三項(xiàng)有對(duì)照研究的每項(xiàng)中，在總分值變化和許多所述分量分值變化方面有一致的有利于利巴韋林的數(shù)學(xué)傾向。因此，將來(lái)自這三項(xiàng)研究的資料綜合時(shí)這種相同的傾向顯而易見(jiàn)。所述傾向不僅適用于分值的改善，而且適用于惡化，表明即使在任一治療組中的患者無(wú)改善，則利巴韋林組惡化的患者也較少?？紤]到治療的一個(gè)治療目的是防止慢性進(jìn)行性疾病的惡化，因此這是一個(gè)重要的觀測(cè)結(jié)果。通過(guò)CMHx2檢驗(yàn)分析綜合數(shù)據(jù)，沒(méi)有顯示任何統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。通過(guò)方差分析來(lái)分析綜合數(shù)據(jù)(用于研究92-001和91-DK-178)揭示了在總Knodell分值而不是在任何所述分量分值方面有利于利巴韋林的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
用基線Knodell分值作為協(xié)變量，通過(guò)協(xié)方差分析進(jìn)一步檢查了肝臟組織學(xué)數(shù)據(jù)。綜合的所有利巴韋林治療的患者和安慰劑患者的基線Knodell分值對(duì)治療結(jié)束時(shí)分值的回歸分析，產(chǎn)生的斜率低于1.0，但大于零。這表明，基線Knodell分值影響治療結(jié)果的預(yù)期，與利巴韋林和安慰劑之間是否有差異無(wú)關(guān)。在回歸斜率與1.0明顯相差時(shí)，協(xié)方差分析是比方差分析更為合適的檢驗(yàn)(Fisher 1951)。協(xié)方差分析的結(jié)果示于表4。利巴韋林治療的患者的平均分值變化僅僅很小，但由于小的方差，與安慰劑的差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。有意義的注意到，沒(méi)有改善的唯一Knodell子分值(subscore)是纖維變性，并且在利巴韋林組中惡化比安慰劑組要少。
從基線至治療結(jié)束分值的平均變化Knodell分量 利巴韋林N＝107安慰劑N＝78 P值門(mén)脈周活性 -0.40 -0.01 0.0004和壞死肝門(mén)炎癥-0.30 -0.10 0.0206小葉壞死-0.33 -0.13 0.0019纖維變性+0.07 +0.25 0.0071總分值 -1.11 -0.05 0.0091表4利巴韋林和安慰劑在從基線至治療結(jié)束的Knodell分值變化方面的比較-用基線Knodell分值作為協(xié)變量進(jìn)行協(xié)方差分析，綜合的所有III期研究ALT反應(yīng)和Knodell分值改善之間相關(guān)性的檢查在所述三種有對(duì)照研究的每項(xiàng)研究中，利巴韋林在使ALT水平正?；徒档头矫?血清ALT水平升高是一項(xiàng)肝部炎癥的生化指標(biāo))比安慰劑顯著更為有效。在根據(jù)各個(gè)患者體內(nèi)ALT水平正?；蚪档偷膶?duì)利巴韋林治療反應(yīng)和根據(jù)Knodell分值確定的肝臟組織學(xué)改善之間也有相關(guān)性。我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將ALT反應(yīng)和Knodell分值改善以分類(lèi)方式處理時(shí)，在這兩種參數(shù)之間確實(shí)有一致的正相關(guān)傾向。在綜合數(shù)據(jù)庫(kù)中，采用Cochran-Mantel-Haenszel(CMH)x2檢驗(yàn)，這種傾向?qū)τ诳侹nodell分值(p＝0.008)、纖維變性(＝0.014)和肝門(mén)炎癥(p＝0.022)方面是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(表5-7)。
有效者 無(wú)效者方案 反應(yīng) n ％ n ％ P值192-001改善 7 46.7 4 33.30.099無(wú)變化7 46.7 3 25.0惡化 1 6.75 41.791-DK-改善 10 90.9 7 38.90.021*178 無(wú)變化1 9.15 27.8惡化 0 0.00 6 33.3CT00/002 改善 11 42.3 12 48.00.171無(wú)變化11 42.3 5 20.0惡化 4 15.4 8 32.0綜合 改善 28 53.8 23 41.80.008*無(wú)變化19 36.5 13 23.6惡化 5 9.619 34.5N＝研究中的患者數(shù)n＝反應(yīng)類(lèi)別中的患者數(shù)％＝(n/N)*1001CMH統(tǒng)計(jì)學(xué)*P＜0.05表5有對(duì)照研究的Knodell反應(yīng)狀況-按ALT反應(yīng)計(jì)的總計(jì)有效者 無(wú)效者方案 反應(yīng) n ％ n ％ P值192-001改善 2 13.3 1 0.000.434無(wú)變化 12 80.0 11 91.7惡化 1 6.7 1 8.391-DK-178 改善 5 45.5 2 11.10.119無(wú)變化 4 36.4 11 61.1惡化 2 18.2 5 27.8CT00/002 改善 6 23.1 1 4.0 0.120無(wú)變化 18 69.2 20 80.0惡化 2 7.7 4 16.0綜合 改善 13 25.0 3 5.5 0.014*無(wú)變化 34 65.4 42 76.4惡化 5 9.6 10 18.2N＝研究中的患者數(shù)n＝反應(yīng)類(lèi)別中的患者數(shù)％＝(n/N)*1001CMH統(tǒng)計(jì)學(xué)*P＜0.05表6有對(duì)照研究的Knodell反應(yīng)-按ALT反應(yīng)計(jì)的纖維變性有效者無(wú)效者方案 反應(yīng) n ％ n ％ P值192-001 改善 5 33.3 3 25.0 0.220無(wú)變化 9 60.0 5 41.7惡化 1 6.74 33.091-DK-178 改善 5 45.5 4 22.2 0.227無(wú)變化 6 54.5 11 61.1惡化 0 0.00 3 16.7CT00/002 改善 5 19.2 6 24.0 0.159無(wú)變化 21 80.8 16 64.0惡化 0 0.00 3 12.0綜合 改善 15 28.8 13 23.6 0.022*無(wú)變化 36 69.2 32 58.2惡化 1 1.910 18.2N＝研究中的患者數(shù)n＝反應(yīng)類(lèi)別中的患者數(shù)％＝(n/N)*1001CMH統(tǒng)計(jì)學(xué)*P＜0.05表7有對(duì)照研究的Knodell反應(yīng)狀況-按ALT反應(yīng)計(jì)的肝門(mén)炎癥進(jìn)一步研究了ALT反應(yīng)和肝臟組織學(xué)改善之間的關(guān)系，以定量測(cè)定患者體內(nèi)對(duì)利巴韋林反應(yīng)的肝臟組織學(xué)改善，并且確定是否有一個(gè)亞組的患者從利巴韋林治療中更為顯著地在臨床上獲益。在三項(xiàng)有對(duì)照研究的每項(xiàng)中，比較利巴韋林治療的ALT有效者和無(wú)效者在治療過(guò)程中總Knodell分值的平均變化。示于表8中的該分析因此定量了表5所示的定向變化。
可以看出，在每項(xiàng)研究中在ALT反應(yīng)和肝臟組織學(xué)改善之間有相關(guān)性，因?yàn)锳LT反應(yīng)與在肝臟組織學(xué)方面有比ALT無(wú)效者更大的改善相關(guān)。這種效應(yīng)在研究91-DK-178中特別突出，在該研究中，與ALT無(wú)效者的平均Knodell分值降低0.17相比，ALT有效者的平均Knodell分值降低4.09。用回歸模型檢查ALT反應(yīng)和Knodell分值變化之間的關(guān)系。這揭示出，在所有三項(xiàng)研究中，ALT反應(yīng)都是肝臟組織學(xué)改善的顯著性預(yù)測(cè)變量。因此，ALT正常化或降低與用利巴韋林治療的丙型肝炎患者體內(nèi)肝臟組織學(xué)改善相關(guān)，達(dá)到ALT反應(yīng)的患者有可能獲得顯著的臨床益處。在用利巴韋林治療的未達(dá)到ALT反應(yīng)的患者中，與接受安慰劑的患者相比，看來(lái)沒(méi)有任何臨床益處。研究 CT00/002 92-001 91-DK-178 綜合數(shù)據(jù)庫(kù)治療持續(xù)時(shí)間(周) 2436 48ALT有效者中的平均 -1.23 -1.47 -4.09-1.90Knodell變化(范圍)*(-7.4) (-8.2)(-9.0) (-9.4)n＝26 n＝15 n＝1 1 n＝52無(wú)效者中的平均 -0.96 +0.58 -0.17 -0.36Knodell變化(范圍) (-9.4) (-3.6)(-6.7) (-9.7)n＝25 n＝12 n＝18 n＝55P值**0.004 0.00010.002 0.0001所有利巴韋林患者中的 -1.10 -0.56 -1.65 -1.11平均Knodell變化(范圍) (-9.4) (-8.6)(-9.7) (-9.7)n＝51 n＝27 n＝29 n＝107所有安慰劑患者中的平 -0.09 -+0.44-0.52 -0.51均Knodell變化(范圍) (-4.4) (-3.5)(-8.4) (-8.5)n＝23 n＝27 n＝27 n＝77P值 NS NSNS 0.01*ALT反應(yīng)定義為在治療結(jié)束時(shí)正常化或在治療結(jié)束時(shí)從基線降至50％或更多至正常上限的1.5倍以內(nèi)。**回歸分析表8因此，總而言之，在慢性丙型肝炎方面利巴韋林的III期程序由三項(xiàng)隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的平行組研究組成。將總共134位患者隨機(jī)分為接受利巴韋林，將97位患者隨機(jī)分為接受安慰劑。對(duì)治療的反應(yīng)用三個(gè)參數(shù)評(píng)價(jià)1.ALT水平的降低或正?；?ALT升高是肝臟炎癥的一個(gè)生物化學(xué)標(biāo)記)。
2.Knodell分值降低證明的肝臟組織學(xué)改善(Knodell分值系統(tǒng)通過(guò)將分值指定為各種相關(guān)的微觀特征并總結(jié)這些子分值以得出總分值，定量了肝臟損害的程度)。
3.從血液消除丙型肝炎病毒或病毒存在量降低。
在所述III期研究的134位患者中，有101位具有完整的ALT水平、Knodell分值和病毒水平資料。在這101位患者中，24位患者符合對(duì)利巴韋林治療最佳臨床反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)。所述標(biāo)準(zhǔn)是ALT水平正常化或有臨床顯著性降低、以及兩個(gè)或更多個(gè)點(diǎn)的總Knodell分值降低。這24位患者獲得了所述臨床反應(yīng)，而無(wú)伴隨的血液中病毒水平降低。以下表9匯總了有關(guān)這24位有效患者與顯示出反應(yīng)程度較低的其余77位患者相比的ALT水平和Knodell分值的資料。
有效者N＝24 無(wú)效者N＝77ALT平均基線(范圍)U/L 142.5(52-269) 176.9(35-629)治療結(jié)束時(shí)的平均ALT(范圍)*36.8(21-62) 91.7(13-286)U/L平均Knodell分值降低(范圍) 4.1(2-9) 0.15(-7至+9)*上限或正常為40U/L表9因此，已經(jīng)公開(kāi)了核苷、核苷酸及其類(lèi)似物的具體實(shí)施方案和應(yīng)用。然而，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言應(yīng)該顯而易見(jiàn)的是，在不偏離本文的本發(fā)明概念的情況下，除已描述的以外的許多修改是可能的。因此，本發(fā)明主題僅受所附權(quán)利要求書(shū)精神的限制。此外，在解釋說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)時(shí)，所有術(shù)語(yǔ)應(yīng)該以最寬的可能方式與正文一致。特別是，術(shù)語(yǔ)“包含(comprises)”和“包含(comprising)”應(yīng)該解釋為是以非竭盡方式指元素、組分或步驟，表明可以存在或利用所引述的多種元素、組分或步驟，或可以與其它未表述的元素、組分或步驟結(jié)合。
權(quán)利要求
1.一種具有下式結(jié)構(gòu)的化合物 其中R是PO32-、(PO3)23-或(PO3)34-。
2.一種具有下式結(jié)構(gòu)的化合物
3.一種具有下式結(jié)構(gòu)的化合物 其中W是-N(R1)(R2)或＝NR1，其中R1和R2獨(dú)立地為氫、直鏈烷基、支鏈烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1或R2還獨(dú)立地包含一個(gè)氮原子、氧原子、硫原子或鹵素原子。
5.一種治療患者病毒感染的方法，所述方法包括給予一種組合物，所述組合物包含有效抑制病毒繁殖的劑量的一種權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的化合物。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述劑量為50-500mg/天。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述劑量為500-2500mg/天。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述病毒感染選自HIV感染、HCV感染、HBV感染、RSV感染、流感病毒感染和副流感病毒感染。
9.權(quán)利要求5的方法，所述方法還包括共同給予所述患者一種細(xì)胞因子。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述細(xì)胞因子是干擾素。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述干擾素是干擾素α-2b。
12.權(quán)利要求5的方法，所述方法還包括給予利巴韋林。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中R是PO32-。
14.一種治療患者病毒感染的方法，所述方法包括共同給予一種組合物，所述組合物包含有效抑制病毒繁殖的劑量的一種權(quán)利要求13的化合物。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中R是(PO3)23-。
16.一種治療患者病毒感染的方法，所述方法包括共同給予一種組合物，所述組合物包含有效抑制病毒繁殖的劑量的一種權(quán)利要求15的化合物。
17.權(quán)利要求1的化合物，其中R是(PO3)34-。
18.一種治療患者病毒感染的方法，所述方法包括共同給予一種組合物，所述組合物包含有效抑制病毒繁殖的劑量的一種權(quán)利要求17的化合物。
19.一種在靶細(xì)胞中的藥理學(xué)效應(yīng)方面增強(qiáng)藥理學(xué)活性分子的選擇性的方法，所述方法包括提供一種藥物，其中所述藥物是1-β-L-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺；用修飾基團(tuán)修飾所述藥物，其中所述修飾基團(tuán)通過(guò)一個(gè)氮原子與所述藥物共價(jià)連接；和其中所述修飾基團(tuán)在所述靶細(xì)胞內(nèi)通過(guò)酶從所述藥物上除去。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述修飾基團(tuán)是＝NH，并且其中所述修飾基團(tuán)與所述藥物中的一個(gè)羰基原子共價(jià)連接。
21.權(quán)利要求19的方法，其中所述修飾基團(tuán)是-N(R1)(R2)或＝NR1，其中R1和R2獨(dú)立地為氫、直鏈烷基、支鏈烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基。
22.權(quán)利要求21的化合物，其中R1或R2還獨(dú)立地包含一個(gè)氮原子、氧原子、硫原子或鹵素原子。
23.一種治療患者的特征為器官炎癥的疾病的方法，所述方法包括提供一種權(quán)利要求1、權(quán)利要求2或權(quán)利要求3的化合物；和將所述化合物以(a)引起系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)而不引起I型和II型應(yīng)答的系統(tǒng)免疫抑制和(b)引起患者所述器官中I型應(yīng)答和II型應(yīng)答的免疫抑制的劑量給予所述患者。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求1的化合物。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求2的化合物。
26.權(quán)利要求23的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求3的化合物。
27.權(quán)利要求23的方法，其中所述器官是肝臟，并且其中所述肝臟感染了病毒。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述病毒是HCV病毒。
29.一種刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的方法，所述方法包括確定具有結(jié)構(gòu)I的化合物在給定濃度范圍內(nèi)有效刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)； 結(jié)構(gòu)I其中Y是1-β-L-呋喃核糖基、1-β-L-呋喃核糖基-5-磷酸、1-β-L-呋喃核糖基-5-二磷酸、1-β-L-呋喃核糖基-5-三磷酸、1-β-D-呋喃核糖基、1-β-D-呋喃核糖基-5-磷酸、1-β-D-呋喃核糖基-5-二磷酸或1-β-D-呋喃核糖基-5-三磷酸；和將所述給定濃度范圍內(nèi)的所述化合物提供給所述神經(jīng)元。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述化合物是利巴韋林。
31.權(quán)利要求29的方法，其中所述化合物是磷酸化利巴韋林。
32.權(quán)利要求29的方法，其中所述化合物是LevovirinTM。
33.權(quán)利要求29的方法，其中所述化合物是磷酸化LevovirinTM。
34.權(quán)利要求29的方法，其中作為患者疾病治療的一個(gè)部分，給予有效增強(qiáng)所述患者1型應(yīng)答和減弱2型應(yīng)答的劑量范圍內(nèi)的所述化合物。
35.權(quán)利要求29的方法，所述方法還包括靶向所述神經(jīng)元中的單極神經(jīng)元細(xì)胞。
36.權(quán)利要求29的方法，所述方法還包括靶向所述神經(jīng)元中的雙極神經(jīng)元細(xì)胞。
37.權(quán)利要求29的方法，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)元組織的部分，包括以下細(xì)胞類(lèi)型中的至少四種星形膠質(zhì)細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、髓鞘細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、單極神經(jīng)元細(xì)胞、雙極神經(jīng)元細(xì)胞、多極神經(jīng)元細(xì)胞和受體細(xì)胞。
38.一種抗病毒藥組合物，所述組合物包含一種第一化合物，所述第一化合物具有直接抗病毒效應(yīng)和間接抗病毒效應(yīng)；和一種第二化合物，所述第二化合物增強(qiáng)總體抗病毒效應(yīng)，其中所述總體抗病毒效應(yīng)包括所述直接抗病毒效應(yīng)和所述間接抗病毒效應(yīng)，并且其中所述第二化合物特異性地結(jié)合選自病毒蛋白和細(xì)胞因子的半抗原。
39.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述第一化合物包括核苷類(lèi)似物。
40.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述核苷類(lèi)似物是利巴韋林。
41.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述核苷類(lèi)似物是LevovirinTM。
42.權(quán)利要求38或權(quán)利要求39的抗病毒藥組合物，其中所述核苷類(lèi)似物是前體藥物形式。
43.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述直接抗病毒效應(yīng)包括抑制病毒復(fù)制。
44.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述間接抗病毒效應(yīng)包括1型/2型平衡向1型應(yīng)答方向轉(zhuǎn)變。
45.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述間接抗病毒效應(yīng)包括抑制1型和2型應(yīng)答。
46.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述第二化合物包括抗體。
47.權(quán)利要求46的抗病毒藥組合物，其中所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體、合成抗體和抗體片段。
48.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述病毒蛋白是選自HIV病毒、肝炎病毒、流感病毒、副流感病毒和RSV病毒的一種病毒的一種蛋白。
49.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述病毒蛋白是反轉(zhuǎn)錄酶。
50.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述細(xì)胞因子是1型細(xì)胞因子。
51.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述第一化合物和所述第二化合物具有協(xié)同效應(yīng)。
52.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述第一化合物和所述第二化合物中的至少一種在一種器官中選擇性地積累。
53.權(quán)利要求52的抗病毒藥組合物，其中所述器官選自肝臟和腦。
54.權(quán)利要求38的抗病毒藥組合物，其中所述第一化合物是利巴韋林，而所述第二化合物是特異性結(jié)合2型細(xì)胞因子的抗體。
全文摘要
提供核苷化合物和核苷酸化合物及其類(lèi)似物/前體藥物。特別考慮的化合物包括1－β－L－呋喃核糖基－1，2，4－三唑－3－甲酰胺，可以將該化合物進(jìn)行修飾和/或磷酸化。所考慮的化合物還可以與其它藥理學(xué)化合物尤其包括利巴韋林、抗體和細(xì)胞因子聯(lián)合?？紤]的化合物的優(yōu)選應(yīng)用包括用作抗病毒化合物、抗炎化合物、抗腫瘤化合物和刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1420723SQ00817416
公開(kāi)日2003年5月28日 申請(qǐng)日期2000年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月23日
發(fā)明者J·勞, 洪志, R·譚, K·拉馬薩米, 林欽宗, F·蔡廷, L·拉基克 申請(qǐng)人:Icn藥品公司