專利名稱：焦慮方法
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背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及減輕焦慮的改進方法，該方法通過給藥抗焦慮有效量的6-羥基-8[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-丁基]-8-氮雜螺環(huán)[4.5]-7，9-二酮進行。該化合物首次被Jajoo等在Druq Metab.andDisposition，17/6，pp.634-640，1989中公開，其屬于臨床上有用的抗焦慮藥物丁螺旋酮的若干代謝物中的一種代謝物。通過與合成制備得到的可信化合物樣品比較確定了該代謝物的結(jié)構(gòu)。該代謝物化合物被指定為BMY 28674，也被稱為BMY 28674。
母體藥物，丁螺旋酮，具有下列化學結(jié)構(gòu) 丁螺旋酮丁螺旋酮的化學名為8-[4-[4-(2-嘧啶基)1-哌嗪基]丁基-8-氮雜螺環(huán)(4，5)-癸烷-7，9-二酮，它是一種藥物活性化合物，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其能夠有效地治療焦慮癥和抑郁癥。已經(jīng)被認可的理論認為丁螺旋酮通過血清素1A(5-HT1A)受體發(fā)揮作用。然而，丁螺旋酮具有非常高的首過效應(yīng)，通常來說，經(jīng)口服后，僅僅有4％治療劑量的丁螺旋酮以非代謝形式到達全身循環(huán)(Mayol等，Clin.Pharmacol.Ther.，37，p.210，1985)。還觀察到丁螺旋酮的吸收存在巨大的個體差異。業(yè)已證明該藥物的最大血漿濃度的個體差異高達10倍(Gammans等，American J.Med.，80，增刊3B，pp.41-51，1986)。
Wu等在US 3,717,634中公開了丁螺旋酮和相關(guān)類似物的合成，并公開了它們的治療精神病特性。Casten等在US 4,182,763中公開了用丁螺旋酮鹽酸鹽作為新的抗焦慮試劑用于治療神經(jīng)官能癥患者。
以前通過實驗室方法測試了BMY 28674的抗焦慮活性，所述實驗室方法是專門針對于測定氮雜螺旋酮(azaspirone)例如丁螺旋酮、吉吡隆及其結(jié)構(gòu)類似物的抗焦慮活性而開發(fā)的。在這種測試中，測試出BMY 28674沒有顯著的抗焦慮活性，并且沒有任何文獻公開該化合物具有任何類型的顯著生物學活性。誠然，除1-嘧啶基哌嗪(1-PP)外，尚沒有文獻公開了任何已知的丁螺旋酮代謝物具有任何的顯著抗焦慮活性。參見Gammans等，JAMA，(1986年3月)，第80卷，增刊3B，pp.43-44。因此，當以代謝物的形式通過最大化不變藥物的濃度的方式應(yīng)用時，口服丁螺旋酮用于治療焦慮癥被認為是最佳的。
U.S.5,431,922記載了丁螺旋酮的延期釋放劑型，從而對該藥物的口服進行了改進，因為未發(fā)生變化的丁螺旋酮血漿含量增加，而代謝物含量降低，這是通過測定丁螺旋酮與1-PP代謝物的血漿濃度比例而得出的結(jié)論。然而并沒有公開這些制劑的效果數(shù)據(jù)，并且它們沒有被商業(yè)化。
U.S.5,633,009公開并要求保護一種釋放丁螺旋酮的經(jīng)皮貼劑。正如所料，該經(jīng)皮釋放劑型可靠地得到較高的丁螺旋酮血漿含量(AUC)，并且通過測定1-PP得知代謝物含量大大降低。通常把貼劑設(shè)計成每24小時釋放60mg丁螺旋酮。令人驚奇地，用該貼劑進行臨床研究顯示其抗焦慮作用與安慰劑沒有明顯差異。
最近，U.S.6,008,222要求保護口服給藥丁螺旋酮的改進方法，其中，未變化的丁螺旋酮的生物利用度增加，并且降低了代謝物的生成。所公開的方法涉及丁螺旋酮與藥物奈法唑酮(細胞色素P4503A4(CYP3A4)的抑制劑)聯(lián)合給藥。根據(jù)測定的初步臨床數(shù)據(jù)，不再打算開發(fā)該藥物的聯(lián)合給藥制劑。
總之，業(yè)已發(fā)現(xiàn)人口服抗焦慮藥丁螺旋酮得到若干代謝物，BMY28674是這幾種代謝物中的一種，在本發(fā)明之前，該化合物本身并沒有被發(fā)現(xiàn)有用的生物學活性。具體地說，在以前的測試中沒有檢測出其抗焦慮活性。據(jù)預(yù)測丁螺旋酮的代謝抑制將引起更強的抗焦慮反應(yīng)，基于此預(yù)測推薦了丁螺旋酮的劑量。臨床觀察認為某些比例的焦慮癥患者口服丁螺旋酮后沒有減輕癥狀，該臨床觀察被認為是在這些未反應(yīng)者中未達到足夠含量的母體藥物所引起的。另一種臨床觀察的結(jié)果是抗焦慮效果觀察前有7-10天的滯后期，這一點被歸因于慢性給藥丁螺旋酮引起受體部位動力學的變化。BMY28674具有抗焦慮活性的這種出人意外的的發(fā)現(xiàn)揭示出這些觀察的其它解釋。
附圖的簡要說明

圖1.在幼大鼠中，BMY28674對于分離誘導(dǎo)的超聲發(fā)音和運動活性的作用。
圖2.在幼大鼠中，丁螺旋酮對于分離誘導(dǎo)的超聲發(fā)音和運動活性的作用。
圖3.在人體中，口服丁螺旋酮后丁螺旋酮的人血漿濃度。
圖4.在人體中，口服丁螺旋酮后1-PP的人血漿濃度。
圖5.在人體中，口服丁螺旋酮后BMY28674的人血漿濃度。
圖6.在體外代謝研究中，丁螺旋酮產(chǎn)生BMY28674的人肝臟微粒體(HLM)代謝。
發(fā)明概述和詳述我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)6-羥基-8-[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-丁基]-8-氮雜螺環(huán)[4.5]-7，9-二酮(I)能夠用作治療焦慮癥的試劑，該化合物在此被稱為BMY 28674，其結(jié)構(gòu)式如下 BMY28674I該化合物被認為是丁螺旋酮的活性代謝物。
關(guān)于臨床用抗焦慮試劑丁螺旋酮及其推定或?qū)嶋H代謝物的室內(nèi)(in-house)測試結(jié)果表明抗焦慮活性主要由丁螺旋酮本身決定的，丁螺旋酮的代謝物幾乎不具有抗焦慮活性。例如，將某些推定的代謝物全身給藥(靜脈注射和胃內(nèi)給藥)于大鼠幾乎不或者完全不抑制背縫神經(jīng)元興奮(dorsal raphe neuronal firing)。相反，丁螺旋酮本身對背縫神經(jīng)元興奮產(chǎn)生高度抑制。參見VanderMaelen等，Eur.J.Pharmacol.，129，pp.123-30，1986。然而一種代謝物，結(jié)構(gòu)片段1-(2-嘧啶基)哌嗪，也被稱為1-PP， 1-PP對于背縫興奮顯示弱的抑制作用，并且在某些其它臨床前試驗中顯示某些抗焦慮活性(參見U.S.4,409,223)，在某些行為測試范例中，其還顯示焦慮活性。參見Cervo等，Life Sciences，43，pp.2095-2102，1988；Martin，Psychopharmacology，104，pp.275-278，1991。還可能的情況是1-PP的生物學活性是通過α2腎上腺素機理介導(dǎo)的，因為1-PP不顯示結(jié)合5-HT1A受體。目前，1-PP的臨床效果仍然不清楚。
通常認為抗焦慮活性是由于丁螺旋酮本身的原因，劑量指導(dǎo)說明目前是根據(jù)焦慮患者中未變丁螺旋酮的最大血漿濃度來提供的。在丁螺旋酮代謝被抑制的患者中，或者是由于患者肝酶活性的原因，或者是由于攝取了對肝代謝有抑制作用的物質(zhì)，特別CYP 3A4，對于這些患者，必須勸告其降低丁螺旋酮的用藥量。有趣的現(xiàn)象是丁螺旋酮的高血漿含量與副作用之間并沒有具體相關(guān)性。通過發(fā)現(xiàn)目前的活性代謝物，這些劑量指導(dǎo)說明的方向應(yīng)該改變成有利于生成BMY 28674的酶生成條件。結(jié)果，對于丁螺旋酮代謝被抑制的患者，應(yīng)該增加丁螺旋酮的劑量，而不是降低其劑量。
另一個被廣泛接收的假設(shè)認為對于某些比例的患者，給藥丁螺旋酮并不能減輕焦慮癥狀。這種無效因素被歸因于沒有變化的丁螺旋酮在非反應(yīng)者中的血漿含量不足，盡管丁螺旋酮在所有患者中的血漿含量非常低。治療失敗的這種解釋尚缺乏科學證實。另一種解釋是基于發(fā)現(xiàn)活性代謝物BMY28674及其抗焦慮作用。對某些患者治療失敗的更可能解釋是關(guān)于抗焦慮活性與BMY28674血漿含量的關(guān)系。未反應(yīng)者被看作是這樣的患者從丁螺旋酮至BMY28674的代謝轉(zhuǎn)變不足以達到BMY28674的生效含量。這種解釋在于在同一患者或者口服后的患者之間，丁螺旋酮血漿含量變化非常大。這種變化可能是已知在每日生活中人肝代謝的活性水平發(fā)生變化的結(jié)果。然而，由于丁螺旋酮本身的血漿含量非常低，與更高含量的代謝物的血漿含量變化相比，丁螺旋酮血漿含量的變化通常較小些。
類似地，丁螺旋酮治療開始后，抗焦慮作用發(fā)生滯后效應(yīng)，這是因為代謝積累需要時間，并且受體部位動力學再調(diào)節(jié)需要時間。通常來說，抗焦慮活性對于代謝物BMY28674表觀的依賴性非常良好地與臨床觀察相關(guān)，其中所述臨床觀察是關(guān)于將丁螺旋酮口服給藥于焦慮患者的臨床觀察。
基于已經(jīng)接收的基本理論未發(fā)生變化的丁螺旋酮在臨床上提供有用的抗焦慮活性，并開發(fā)出丁螺旋酮的透皮貼劑給藥系統(tǒng)(參見U.S.5,633,009)。并且認為丁螺旋酮透皮貼劑能夠非常有效地治療焦慮癥的原因在于透皮藥物劑型使丁螺旋酮代謝降低，從而得到非常大量的母體藥物，并且大大地降低了代謝物的含量。令人驚奇的事實是應(yīng)用丁螺旋酮透皮貼劑在臨床上沒有觀察到或者基本上沒有觀察到抗焦慮活性。這種出人意外的結(jié)果導(dǎo)致需要對丁螺旋酮代謝物進行重新評價，并導(dǎo)致了BMY28674高效抗焦慮活性的發(fā)現(xiàn)。
丁螺旋酮的下列代謝方案(方案1)摘自Jajoo等，Xenobiotica，1990，Vol.20，No.8，pp.779-786，″抗焦慮藥丁螺旋酮的體外代謝作為體內(nèi)代謝的預(yù)測″。
方案1大鼠肝微粒體和肝細胞對丁螺旋酮的代謝方案 通過評價丁螺旋酮代謝物相關(guān)受體的結(jié)合開始該新工作。因此，對丁螺旋酮(Bu；MJ 9022)及其代謝物1-PP(BMY13653)、3′-OH-丁螺旋酮(BMY14295)、5-OH-丁螺旋酮(BMY14131)和6′-OH-丁螺旋酮(BMY28674)的體外人5-HT 1A受體活性進行評價。這些實驗的結(jié)果如表1所示。
表1化合物 IC50[nM]STDEVKi值 N8-OH-DPAT(參照物)2.5 0.9 1 8丁螺旋酮(MJ9022) 30 18 15 86-OH-丁螺旋酮(BMY28674) 114 85 57 75-OH-丁螺旋酮(BMY14131) 928 176 46473-OH-丁螺旋酮(BMY14295) 652 402 32671-PP(BMY13653) ＞1000 -- 3可以看出，表1中列出了MJ9022(丁螺旋酮)及其代謝物BMY13653(1-PP)、BMY14131(5-OH丁螺旋酮)、BMY14295(3-OH-丁螺旋酮)和BMY28674(6-OH丁螺旋酮)對人血清素1A(5-HT1A)受體的新體外活性。丁螺旋酮顯示對人5-HT1A受體有高的親和力(Ki＝15nM)。BMY28674具有與丁螺旋酮接近的結(jié)合親和力(Ki＝57nM)。與丁螺旋酮相比，其它代謝物測試時顯示對人5-HT1A受體具有相對弱的親和力。
BMY28674顯示為丁螺旋酮的活性代謝物。不僅僅是因為在人尿研究中該代謝物為含量第二高的代謝物(5-羥基-1PP 5-羥基-1-PP為含量最高的代謝物)；但更重要的是，BMY28674在人血中的含量比丁螺旋酮的含量高出約40倍，并且比1-PP的含量高出數(shù)倍。同時還有一種重要的事實在BMY28674中，丁螺旋酮的骨架保持完整無缺。另外，在5-HT1A受體的結(jié)合數(shù)據(jù)表明BMY28674的結(jié)合親和力與丁螺旋酮接近，但其它代謝物在5-HT1A位點僅僅顯示弱的相互作用。目前，該5-HT1A受體被認為是密切參與調(diào)節(jié)焦慮的血清素受體。目前的研究焦點已經(jīng)聚集至保持丁螺旋酮骨架并且分子中引入不超過一個親水性羥基的丁螺旋酮代謝物。如果存在多于一個的親水性羥基，則其可能使那些多羥基化代謝物產(chǎn)物進入到體內(nèi)CNS區(qū)域的分布和轉(zhuǎn)運降低，因此使必需的受體相互作用不太可能在靶區(qū)域發(fā)生。
以前，BMY28674的室內(nèi)功能測試應(yīng)用了基于改良的VogelConflict測試的體內(nèi)測試方法，即用于測試抗焦慮試劑的簡單可靠的沖突方法(參見Vogel等，Psychopharmacologia，(Berl.)21，pp.1-7，1971)。然而，BMY28674在Vogel測試中沒有顯示抗焦慮反應(yīng)。以前，沒有任何有用的抗焦慮活性歸因于BMY28674。
把大鼠幼鼠與其母親和其同窩幼鼠分離，并接受環(huán)境刺激(例如冷溫)，其發(fā)出的超聲波聲音被證明是評價可能的抗焦慮和致焦慮化合物的靈敏方法(Winslow和Insel，1991，Psychopharmacology，105513-520)。以抗焦慮為目的的心理活性化合物抑制超聲波呼叫的頻率，而具有致焦慮活性的藥物增加了呼叫的頻率。更重要的是，分離誘導(dǎo)的超聲發(fā)聲范例顯示對于檢測廣譜藥物的抗焦慮活性最敏感，所述的廣譜藥物的例子為苯并二氮雜革類、5-HT重攝取抑制劑、5-HT1A激動劑以及NMDA拮抗劑。在本發(fā)明的研究中，把9-11天齡的大鼠幼鼠與其母親和同窩幼鼠分離，并將其置于冷環(huán)境(18-20℃)盤中，使其發(fā)出因哀傷而引起的超聲波發(fā)聲，測定丁螺旋酮的6-羥基化代謝物--BMY28674[其對人5-HT1A受體具有親和力(Ki＝57nM)]的抗焦慮活性。參見圖1。圖2顯示在該測試方法中獲得的丁螺旋酮結(jié)果。
在測試前30分鐘給藥BMY28674(0.03-1mg/kg，sc；圖1)，大鼠幼鼠在冷盤中發(fā)出的超聲波發(fā)聲顯示劑量-依賴性抑制[F(4，45)＝19.27，p＝0.0001]。預(yù)計BMY28674降低呼叫數(shù)目50％時的劑量(ID50)為0.13mg/kg。在給藥BMY28674后，運動活性也顯著降低[F(4，45)＝5.85，p＝0.007]。然而，BMY28674降低運動活性的ID50劑量(0.41mg/kg)約為其抑制超聲波呼叫的D50劑量(0.13mg/kg)的3倍，從而表明與丁螺旋酮類似，BMY28674的抗焦慮活性劑量更低。
在測試前30分鐘給藥丁螺旋酮(0.03-1mg/kg，sc；圖2)，大鼠幼鼠在冷盤中的發(fā)出的超聲波發(fā)聲顯示劑量-依賴性抑制[F(4，42)＝15.44，p＝0.0001]。預(yù)計丁螺旋酮的劑量降低呼叫數(shù)目50％時的劑量(ID50)為0.10mg/kg。運動活性也發(fā)生降低[F(4，42)＝4.343，p＝0.005]，比那些抑制超聲波呼叫的劑量大約高5倍。
這些結(jié)果表明在大鼠幼鼠分離誘導(dǎo)的超聲波發(fā)聲焦慮模型中，與丁螺旋酮類似，代謝物BMY28674顯示抗焦慮活性。與抑制運動活性相比，BMY28674(和丁螺旋酮)在低得多的劑量下發(fā)生抗焦慮活性?？傊鲜鲶w外和體內(nèi)測試表明丁螺旋酮和BMY28674均顯示陽性的抗焦慮測試結(jié)果；然而，把丁螺旋酮口服給藥至人體后，其血漿含量非常低。在本發(fā)明工作之前，沒有關(guān)于BMY28674臨床血漿濃度的信息。
已經(jīng)進行了人藥代動力學研究，并且得到了出人意外的結(jié)果，從而支持了BMY28674作為活性抗焦慮代謝物的結(jié)論。
將丁螺旋酮口服給藥至人(n＝13)25天，總每日劑量為10-60mg。將給藥方案分5個5-天給藥間隔，在每個間隔增加BID劑量。在每個給藥間隔的第5天進行藥代動力學測定，將這些數(shù)據(jù)用于評價丁螺旋酮、1-PP和BMY28674的藥代動力學。下面顯示人的給藥方案。給藥間隔丁螺旋酮BID劑量(mg) PK測定(研究天數(shù))15 527.5 10315 15420 20530 25對于參加25天研究的健康成人來說，在這5個給藥水平中，發(fā)現(xiàn)口服這些多劑量的丁螺旋酮是安全的，并且通常能夠良好地耐受。
圖3、4和5顯示各個給藥間隔最后1天以12小時的給藥期間分別口服丁螺旋酮、1-PP和BMY 28674的平均血漿含量。丁螺旋酮含量(圖3)通常非常低(在較高的劑量下約1-2ng/mL)，給藥兩小時后含量低于1ng/mL。相反，1-PP含量(圖4)和BMY28674含量(圖5)要高得多。但時間比丁螺旋酮要遲一些。BMY28674的濃度比1-PP的含量要高數(shù)倍，但比丁螺旋酮的含量要高30-40倍。
迄今為止，研究表明口服給藥丁螺旋酮后，與丁螺旋酮的可忽略血漿含量相比，代謝物BMY28674的血漿含量顯然要有意義得多。盡管丁螺旋酮本身在測試模型例如大鼠pub USV模型中已經(jīng)顯示出具有抗焦慮活性，但人體中看到的低血漿含量導(dǎo)致的結(jié)論是正是豐富的代謝物BMY28674介導(dǎo)了臨床上的抗焦慮效果。在本發(fā)明評價丁螺旋酮代謝物之前，本領(lǐng)域技術(shù)人員并不知道在人口服丁螺旋酮后出現(xiàn)相對豐富的BMY28674。
有證據(jù)表明給藥BMY28674本身能夠達到抗焦慮效果，與把BMY28674全身引入到焦慮患者相比，口服其前體丁螺旋酮在合適條件下也能夠獲得改進的方法。為了更好地定義這些條件，進行體外代謝實驗以研究丁螺旋酮的人肝微粒體(HLM)代謝物?；贑YP3A4酶活性選擇HLM多供體制劑。HLM制劑購自Gentest Corporation(Woburn，MACatalog#′s，H023、H056、H070、H093和H112)，其特征為應(yīng)用標準方法的HLM制劑。除了測定孵化中母體化合物的減少外，還測定了代謝物BMY28674的含量。
從圖6可以看出第一套實驗中HLM制劑的CYP3A4的特效活性和丁螺旋酮代謝物以及代謝物的生成之間有相關(guān)性。應(yīng)用從5個供體肝的5個HLM制劑培育單一濃度的14C-丁螺旋酮(10μM)。通過NADPH生成系統(tǒng)應(yīng)用0.5mg/ml微粒體蛋白培育15分鐘，通過反相HPLC、應(yīng)用聯(lián)機放射活性檢測測定培育樣品中14C-丁螺旋酮和BMY28674的含量，并將其與標準樣品進行比較。得到14C的定量回收。圖6中顯示從5個供體肝HLM制劑中，BMY28674與丁螺旋酮的濃度比與測定的CYP3A4特異活性之間的關(guān)系(兩次單獨測定的平均)。所得結(jié)果顯示隨著HLM中CYP3A4特異活性的增加，BMY28674與丁螺旋酮的比也增加。因為CYP3A4活性增加，BMY28674含量增加以及丁螺旋酮濃度降低從而使比例變化顯著(結(jié)果未顯示)。
進行另一套培育以確定在HLM培育中CYP3A4抑制劑改變BMY28674與丁螺旋酮的比例的能力。在合并的HLM(通過把上述5個供體肝中得到的等量物質(zhì)混合)中培育單一濃度的14C-丁螺旋酮(10μM)。把公知的CYP3A4抑制劑酮康唑以各種濃度加入到上述培育液中。所有其它培育條件以及樣品分析如上所述。當不含有酮康唑時，用合并的HLM培育丁螺旋酮15分鐘后，BMY28674與丁螺旋酮的比為0.42(表2)。當酮康唑的濃度升至0.125μM時，丁螺旋酮的代謝并不受影響。當酮康唑的濃度為0.25μM時，6′-羥基-丁螺旋酮與丁螺旋酮的比降低至0.32。在1.25μM和2.5μM的高酮康唑濃度下，BMY28674與丁螺旋酮的濃度比分別進一步降低至0.06和0.01。這些結(jié)果表明當在合并的HLM中同時培育酮康唑與丁螺旋酮時，隨CYP3A4抑制劑酮康唑的濃度升高，BMY28674與丁螺旋酮的比例降低。由酮康唑濃度升高引起的比例變化由BMY28674濃度降低和未變化的丁螺旋酮濃度升高兩者顯示。
表2酮康唑?qū)Χ÷菪x的抑制[酮康唑] [丁螺旋酮] [BMY28674][BMY28674/丁螺旋酮](uM) (相對CPM) (比例)020054 8400 0.420.02518645 7884 0.420.12519648 8201 0.420.25 21957 7052 0.321.25 36117 2111 0.062.5 43712 576 0.01總之，這些體外試驗表明在人肝中，丁螺旋酮的代謝以及代謝物BMY28674的表現(xiàn)均依賴于CYP3A4活性。
本發(fā)明的目的是提供一種引起焦慮癥患者抗焦慮反應(yīng)的方法。通過對焦慮癥患者提供抗焦慮有效血含量的BMY28674可以達到該目的。達到該目的最明顯的方式就是把BMY28674本身對患者全身給藥。因此，本發(fā)明一方面涉及對需要進行減輕焦慮的哺乳動物減輕焦慮狀態(tài)的方法，該方法通過全身給藥抗焦慮有效量BMY28674來進行。
通常來說，有效量應(yīng)該提供至少1-2ng/mL BMY28674的最低血漿含量。通常來說，測定CMIN含量的時間點是給藥12小時后，即剛好在下一BID給藥之前測定。BMY28674可以通過許多給藥途徑，這些途徑包括但不限于口服、舌下、、鼻內(nèi)或胃腸外例如肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮下等。
在治療上，可以通過上述給藥途徑之一把BMY28674以制劑形式給藥，所述制劑含有存在于可藥用載體中的抗焦慮有效量的BMY28674或其可藥用酸加成鹽之一或其水合物。優(yōu)選提供約5-50mg活性成分/單位劑量、并且能夠制備成水溶液和水或油懸浮液的藥物組合物。當制備成口服制劑例如片劑、錠劑、膠囊、糖漿劑、酏劑、水溶液或混懸液劑型時，還可以把BMY28674口服給藥。
也可以考慮把BMY28674的可藥用酸加成鹽用作抗焦慮試劑。按照定義，它們是這樣的一些鹽其中的陰離子對BMY28674堿形式的毒性或藥理學活性沒有顯著影響。
獲得酸加成鹽有兩種方式一種方式是將BMY28674與有機酸或無機酸反應(yīng)，優(yōu)選在溶液中進行反應(yīng)；另一種方式是通過現(xiàn)有技術(shù)記載以及本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的任何方法?？捎玫挠袡C酸例子為羧酸例如馬來酸、乙酸、酒石酸、丙酸、富馬酸、羥乙磺酸、琥珀酸和撲酸等；可用的無機酸例子為氫鹵酸例如HCl、HBr或HI以及硫酸和磷酸等。
優(yōu)選的口服組合物為片劑或膠囊，其除了含有BMY28674外，還可含有常規(guī)賦形劑例如粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、白明膠、山梨醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮)、填充劑(例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解劑(例如淀粉)和濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉)。含有常規(guī)藥用載體的BMY28674溶液或混懸液被用來制備胃腸外組合物例如靜脈注射用水溶液或肌肉內(nèi)注射用油混懸液。這樣的具有所需澄清度、穩(wěn)定性和適應(yīng)性的胃腸外給藥組合物制備如下把0.1-10重量％的活性成分(BMY28674或其可藥用酸加成鹽或其水合物)溶解于水或由多羥基脂肪醇(例如甘油、乙二醇和聚乙二醇或其混合物)組成的載體中。其中聚乙二醇由下列混合物組成能溶于水和有機液體、分子量約200-1500的通常為液體的非揮發(fā)性聚乙二醇。
可以按照化學文獻中記載的方法容易地合成得到BMY28674，這些方法對有機合成化學技術(shù)人員來說是已知的。有一種制備方法是應(yīng)用丁螺旋酮作為起始原料，該方法如方案2所示。
方案2BMY28674的制備 該制備方法是一個有用的實施例，其舉例說明了BMY28674的合成。
應(yīng)該理解BMY28674可以通過體外丁螺旋酮的酶(人或大鼠肝微粒體)轉(zhuǎn)變得到。(參見Jajoo等，Xenobiotica，1990，Vol.20，No.8，pp.779-786.)還可以通過另一種方法全身給藥從而達到抗焦慮有效血含量的BMY28674，這種方法是口服給藥BMY28674的前體形式。這種前體藥物形式的給藥量產(chǎn)生有效的抗焦慮作用但沒有毒副作用。也就是說可以通過對哺乳動物給藥BMY28674的前體或前體藥物形式例如丁螺旋酮來完成BMY28674的全身給藥。
然而，這種全身給藥BMY28674的方法不同于已知的口服給藥丁螺旋酮的方法，而是對后者作了進一步的改進。在本發(fā)明改進的抗焦慮作用方法中應(yīng)用了前體藥物丁螺旋酮。因此，本發(fā)明另一方面涉及減輕哺乳動物焦慮的方法，該方法通過一種改進的方法口服丁螺旋酮。所述改進之處在于丁螺旋酮的口服方式更有助于BMY28674的代謝生成，從而在患者中提供抗焦慮有效量的BMY28674。這與目前的給藥方法是不同的，因為目前的方法的目的在于使未變化的丁螺旋酮血含量最大化。例如，以前的用藥指導(dǎo)已經(jīng)教導(dǎo)如果在有利于抑制代謝的條件下給藥，也就是說產(chǎn)生高濃度的未變化的丁螺旋酮和低濃度的代謝物，則應(yīng)該降低丁螺旋酮的劑量。本發(fā)明改進的方法與過去的口服給藥丁螺旋酮方法相反，當抑制丁螺旋酮的代謝時，不是降低丁螺旋酮的劑量，而是應(yīng)該增加丁螺旋酮的劑量，其目的是達到合適含量的BMY28674。在嚴重的毒副作用與增加的丁螺旋酮消化量之間并沒有特別的相關(guān)性。
總之，本發(fā)明另一方面涉及減輕哺乳動物不希望的焦慮狀態(tài)的改進方法，通過有利于哺乳動物代謝生成BMY28674的方式對哺乳動物口服給藥丁螺旋酮或其可藥用酸加成鹽。通常來說，丁螺旋酮的給藥量是導(dǎo)致BMY 28674最少血濃度(CMIN)為1-2ng/mL的給藥量。通常在給藥12小時后并剛好在下一次給藥前測定患者中的CMIN。
影響B(tài)MY28674代謝生成的因素之一的例子為口服丁螺旋酮的食物效應(yīng)。根據(jù)BUSPAR(鹽酸丁螺旋酮口服片)的包裝說明附件，已經(jīng)含蓄地表明丁螺旋酮應(yīng)該與食物同時服用以增加未變化的丁螺旋酮血漿含量。
在BUSPAR包裝說明附件中教導(dǎo)的另一個給藥改進例子為當與CYP3A4抑制劑同時給藥時，建議降低丁螺旋酮的劑量。
為了通過口服給藥丁螺旋酮減輕不希望的焦慮癥狀的改進方法，前面的例子的教導(dǎo)精神與本發(fā)明的改進方法相背離。在本發(fā)明的改進方法中，不是在進餐的同時給藥丁螺旋酮，相反，應(yīng)該在進餐前或后兩小時或更長時間給藥。類似地，如果細胞色素P4503A4(CYP3A4)的功能被消弱，應(yīng)該增加丁螺旋酮的劑量，而不是如BUSPAR包裝說明附件所述降低丁螺旋酮的劑量。
關(guān)于改進經(jīng)口服丁螺旋酮全身引入BMY28674的改進抗焦慮方法所想象的其它給藥方案包括下列·在哺乳動物CYP3A4活性最高的白天期間口服給藥丁螺旋酮。
·中斷同時服用抑制CYP3A4活性的藥物或食物。
·當中斷同時服用抑制細胞色素活性的藥物在醫(yī)學上不可行時，增加丁螺旋酮的劑量以調(diào)節(jié)降低的CYP3A4活性。
總之，按照良好的藥物實踐，從方式和程度上改進了焦慮癥患者口服丁螺旋酮的方法，因此有利于BMY28674的代謝生成。為了保持良好的臨床實踐，優(yōu)選給藥BMY28674或其前體形式，給藥的濃度將產(chǎn)生有效的抗焦慮作用而不引起毒副作用。
具體實施方案描述對于應(yīng)用構(gòu)成本發(fā)明的化合物及其制備方法將通過下列實施例變得更明顯，這些實施例僅僅用于舉例說明本發(fā)明，但在范圍和領(lǐng)域方面不對本發(fā)明構(gòu)成限制。
過氧化二碳酸雙-4-硝基芐基酯被發(fā)現(xiàn)為相對穩(wěn)定的物質(zhì)，其在熔點下分解，緩緩放出氣體。相反，過氧化二碳酸二芐基酯(2參見M.P.Gore，J.C.Vederas，J.Org.Chem.，1986，51，3700)的分解是從熔點毛細管中突然劇烈地排出物質(zhì)。B.6-(過氧化二碳酸4-硝基芐酯基)-8-[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-丁基]-8-氮雜螺環(huán)[4.5]-79-二酮(II)在-78℃下，把LiN(Me3Si)2(28.5mL 1M THF溶液)加入到8-[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-8-氮雜螺環(huán)[4.5]-7，9-二酮(丁螺旋酮10g，26mmol)的干燥THF(250mL)溶液中，攪拌3小時，然后以1小時的時間滴加過氧化二碳酸雙-4-硝基芐酯(11.2g)的干燥THF(150mL)溶液。在-78℃下持續(xù)攪拌1小時。
移開冷卻浴，將反應(yīng)溶液傾入到水和乙酸乙酯的混合物中。分離有機相，用水洗滌，然后用鹽水洗滌。干燥有機相，再蒸發(fā)成粘性油狀物。將該油狀物進行閃極色譜，用MeCN-EtOAc(1∶2)洗滌硅膠柱，得到粗產(chǎn)物，用丙酮洗滌除去未反應(yīng)的丁螺旋酮，得到6.23g白色固體(46％)產(chǎn)物(II)。C.6-羥基-8-[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-丁基]-8-氯雜螺環(huán)[4.5]7，9-二酮(I；BMY28674)在Parr搖動器中，在40-45磅壓力下，將II(4.0g；6.9mmol)和10％Pd/C(約1g)在甲醇(100mL)中的混合物進行氫化反應(yīng)1小時。經(jīng)Celite墊過濾該氫化混合物，然后用乙酸乙酯洗滌。將濾液進行蒸發(fā)得到膠狀物，將其用閃極色譜純化在硅膠柱上用EtOAc洗脫得到0.41g淡白色固體(I)。
C21H31N5O3的分析計算C，62.82；H，7.78；N，17.44。
測定C，62.84；H，7.81；N，17.33。
在每個孔中應(yīng)用總量為30μg的蛋白。在96深孔培養(yǎng)皿中進行測定。測定緩沖液為含有2.5mM MgCl2和2mM EGTA的50mM HEPES。應(yīng)用0.1nM-1000nM的測試化合物和1nM的3H-8-OH-DPAT在25℃下培育膜制劑60分鐘。用10mM血清素作為阻斷劑用于測定非特異性結(jié)合。加入1ml冰冷的50mM HEPES緩沖液中止反應(yīng)，應(yīng)用Whatman GF/B過濾器通過Brandel細胞收集器快速過濾。在LKB Trilux液體閃爍計數(shù)器中對濾餅進行計數(shù)。通過Excel-fit非線性回歸測定IC50值。
以跨過數(shù)個幼鼠的不規(guī)則順序給藥各種藥物。將BMY28674和丁螺旋酮溶解于生理鹽水(0.9％NaCl；賦形劑)中。以10ml/kg的體積皮下注射所有藥物。其中藥物劑量是指鹽的重量。
·應(yīng)用從5個供體肝中得到的5個HLM制劑培育14C-丁螺旋酮(10μM)(應(yīng)用0.5mg/ml微粒體蛋白進行15分鐘)。
·應(yīng)用聯(lián)機放射性檢測和與標準樣品進行比較通過反相HLPC測定培育樣品中的14C-丁螺旋酮和BMY28674含量。
·進行第二組培育以測定酮康唑(一種CYP3A4抑制劑)改變HLM培養(yǎng)液中BMY28674與BUSPAR的比的能力。
·用合并的HLM培育14C-丁螺旋酮(10uM)(用0.5mg/ml微粒蛋白培育15分鐘)。
權(quán)利要求
1.減輕哺乳動物不希望的焦慮癥的方法，包括對所述哺乳動物全身給藥有效量但非毒性量的6-羥基-8-[4-[4-(2-嘧啶基)-哌嗪基]-丁基]-8-氮雜螺環(huán)[4.5]-7，9-二酮或其可藥用酸加成鹽或其水合物。
全文摘要
6－羥基－8－[4－[4－(2－嘧啶基)－哌嗪基]－丁基]－8－氮雜螺環(huán)[4.5]－7，9－二酮及其可藥用鹽和水合物能夠用于減輕焦慮癥。
文檔編號A61P25/22GK1424911SQ00818472
公開日2003年6月18日 申請日期2000年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月18日
發(fā)明者R·F·梅奧 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司