專利名稱：具有保肝作用的蛇葡萄總黃酮組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于治療肝炎、護肝保健，抗菌消炎，降血脂，鎮(zhèn)痛，祛痰和提高人體免疫力的天然藥物領(lǐng)域鎮(zhèn)痛，祛痰，降血脂。
本發(fā)明涉及一種總黃酮組合物及其制備方法，以及在制備治療肝炎、護肝保健，抗菌消炎，降血脂，鎮(zhèn)痛，祛痰和提高人體免疫力的藥物和保健品的用途。
葡萄科植物常用于草藥，其莖、葉、皮和根皆可藥用。具有清熱解毒、利濕等功效，用于治療癤瘡膿腫、外傷感染、咽喉腫痛、肺結(jié)核、肺熱咳嗽、熱淋、水腫、跌打損傷和腎炎等。某些地區(qū)也將其莖葉制成荼，用于消暑、止渴。
近年來，我國研究者對其成分進行了提取與分離，從中分離了一些化合物，如二氫楊梅素等。也有一些學(xué)者對其藥理作用進行了研究。其水煎劑能明顯緩解酒醉反應(yīng)，對腸平緩肌有明顯的興奮作用；蛇葡萄根內(nèi)皮水煎劑治療帶狀皰疹取得較好療效；還可以治療化膿性皮膚病，也取得較好療效。
本申請人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)一種含有蛇葡萄素(10-70wt％)，楊梅甙(0.5-3wt％)，沒食子酸(0.2-3wt％)的總黃酮組合物，并且進一步發(fā)現(xiàn)這種總黃酮組合物具有治療肝炎，護肝保健，抗菌消炎，降血脂，鎮(zhèn)痛，祛痰和增強免疫系統(tǒng)免疫力作用。這種總黃酮組合物可以直接作為藥物或者可以與藥學(xué)可接受載體或賦形劑混合制成藥物組合物。這種總黃酮組合物可以從葡萄科植物中得到。也可以通過化學(xué)領(lǐng)域常規(guī)方法得到。
本發(fā)明的一個目的是提供一種總黃酮組合物，其中含有蛇葡萄素(10-70wt％)，楊梅甙(0.5-3wt％)，沒食子酸(0.2-3wt％)。
本發(fā)明的一個目的是提供一種從葡萄科植物中提取上述總黃酮組合物的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供含有上述總黃酮組合物的藥物組合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供含有上述總黃酮組合物的保健品或飲料。
本發(fā)明的另一個目的是上述總黃酮組合物在制備治療肝炎和保肝作用和消炎，降血脂，鎮(zhèn)痛，祛痰或者提高免疫力的藥物組合物中的用途。
本發(fā)明組合物是這樣獲得的通過各種溶劑(水和/或有機溶劑)煎煮和/或超聲提取和/或滲濾提取萄萄科植物，提取一次或多次，過濾，蒸除溶劑得浸膏，向浸膏中加入熱水，冷卻，靜置，檢測沉淀與上清的藥效成分，沉淀部分具有活性，取沉淀。
提取所用的溶劑優(yōu)選醇類，酯類，酮類，醚類和強極性有機溶劑和/或水，更優(yōu)選低級鏈烷醇，低級脂肪酸酯，具有3-12個碳原子的酮和醚和/或水，最優(yōu)選甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇，正丁醇，異丁醇，仲丁醇，叔丁醇，乙酸乙酯，乙酸甲酯，甲酸乙酯，丙酮，甲基乙基酮，乙醚，甲基乙基醚，甲基叔丁基醚，二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺和/或水等等。
本發(fā)明可以使用所有葡萄科植物，優(yōu)選使用蛇葡萄屬，更優(yōu)選粵蛇葡萄，棟葉玉葡萄，顯齒蛇葡萄，大葉蛇葡萄，白蘞，東北蛇葡萄和山葡萄等。
本發(fā)明的原理是通過建立藥理篩選模型追蹤蛇葡萄的藥效活性部位，找到其藥用活性物質(zhì)。并進一步發(fā)現(xiàn)本發(fā)明總黃酮組合物的藥物用途。對四氯化碳引起的小鼠實驗性肝損傷的影響的試驗以及對D-氨基半乳糖引起的小鼠實驗性肝損傷的影響的動物模型試驗表明本發(fā)明總黃酮組合物具有明顯的保肝作用；體外抑菌試驗和和抗病毒試驗表明本發(fā)明總黃酮組合物具有抗菌消炎作用；血清凝集素試驗表明本發(fā)明提取物具有增強免疫系統(tǒng)免疫力的作用。
本發(fā)明總黃酮組合物可以用于制藥領(lǐng)域，保健品領(lǐng)域和食品領(lǐng)域。
本發(fā)明總黃酮組合物與藥學(xué)上可接受載體或賦形劑混合可以配制成藥物組合物，本發(fā)明總黃酮組合物還可以作為保健品的有效成分，本發(fā)明總黃酮組合物還可以配制成飲料等。
本發(fā)明藥物組合物可以通過藥物領(lǐng)域常規(guī)配制技術(shù)和載體，配制成藥物組合物。本發(fā)明總黃酮組合物可以制備成片劑，顆粒劑，膠囊，外用藥，還可以加入到荼或飲料中，制成保健茶或飲料。
通過下面的實施例詳細說明本發(fā)明。但是應(yīng)該理解這些實施例只是說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的范圍。實施例1從白蘞植物制備總黃酮組合物的方法室溫下，將收集來的白蘞根1500克洗去塵土，采取滲濾法提取，乙酸乙酯總用量為10000ml，收集溶液，蒸除溶劑，浸膏內(nèi)加入1800毫升90℃熱水，冷卻到60℃，靜置，過濾，然后將濾液冷卻到室溫，靜置，使沉淀，過濾，得到淺黃色沉淀，烘干，得到總黃酮15.01g。產(chǎn)率10.00％。薄層色譜分析用聚酰胺薄層層析，規(guī)格8×8cm，展開劑甲醇，顯色劑4％三氯化鐵-乙醇溶液，Rf沒食子酸＝0.73，Rf楊梅甙＝0.55，Rf蛇葡萄素＝0.51，Rf楊梅素＝0.20，Rf5＝0.42。實施例2從顯齒蛇葡萄植物制備總黃酮組合物的方法室溫下，將收集來的顯齒蛇葡萄1200克洗去塵土，加入6000毫升乙醇，煎煮1小時，過濾，殘渣再加入3000毫升乙醇，再煎煮1小時，再過濾，濾液合并，濃縮至2毫升，加入1200毫升80℃熱水，冷卻到60℃，靜置，過濾，然后將濾液冷卻到室溫，靜置，使沉淀，過濾，得到淺黃色沉淀，烘干，得到總黃酮組合物。產(chǎn)率10.57％。薄層色譜分析用聚酰胺薄層層析，規(guī)格8×8cm，展開劑甲醇，顯色劑4％三氯化鐵-乙醇溶液，Rf沒食子酸＝0.72，Rf楊梅甙＝0.54， Rf蛇葡萄素＝0.50，Rf楊梅素＝0.21，Rf5＝0.41。實施例3從東北蛇葡萄植物制備總黃酮組合物的方法室溫下，將收集來的東北蛇葡萄800克洗去塵土，加入3000毫升水，超聲提取0.5小時，過濾，殘渣再加入1000毫升丙醇，再超聲提取0.5小時，再過濾，濾液合并，濃縮至2毫升，加入500毫升100℃熱水，冷卻到60℃，靜置，過濾，然后將濾液冷卻到室溫，靜置，使沉淀，過濾，得到淺黃色沉淀，烘干，得到總黃酮組合物。產(chǎn)率8.34％。薄層色譜分析用聚酰胺薄層層析，規(guī)格8×8cm，展開劑甲醇，顯色劑4％三氯化鐵-乙醇溶液，Rf沒食子酸＝0.74，Rf楊梅甙＝0.56，Rf蛇葡萄素＝0.51，Rf楊梅素＝0.20，Rf5＝0.42。實施例4本發(fā)明總黃酮組合物對四氯化碳引起的小鼠試驗性肝損傷的影響將動物隨機分為六組正常對照組、陽性對照組、模型對照組、本發(fā)明總黃酮組合物組三組100mg/kg，200mg/kg，400mg/kg。正常對照組是動物不給任何藥，只給溶劑；陽性對照組為聯(lián)苯雙酯200mg/kg，qdx6，po，聯(lián)苯雙酯為常用的肝炎治療藥，以聯(lián)苯雙酯治療模型動物，觀察療效，作為對照；模型對照組為檢驗藥效，動物必須先制成肝炎模型，使動物患肝炎；本發(fā)明總黃酮組合物組是在上述模型基礎(chǔ)上，再給本發(fā)明總黃酮組合物，以觀察療效，三組都為Bidx6 po。各組動物分組給藥，每組10只小鼠，一日兩次，服用體積0.5ml/20g小鼠，連續(xù)服用六天，末次給藥后1小時腹腔注射1％四氯化碳油溶液0.2ml/只小鼠，空腹16小時后由眼眶靜脈采血，分離血清，測定血清的SGPT(ALT)、SGOT(AST)含量，和血清總膽紅素(T-BIL苯甲酸鈉咖啡因比色法)含量，并與陽性對照組、正常對照組、模型對照組比較，模型對照組服用等量相應(yīng)溶劑，陽性對照組采用聯(lián)苯雙酯200mg/kg，pox6，每日一次。結(jié)果見表1。表1.二氫楊梅素對四氯化碳引起小鼠肝損傷的血清SGOT的變化
*P＜0.05 **P＜0.01與模型組比較從表1的數(shù)據(jù)可以看出總黃酮組合物具有極好的治療肝炎的作用。以及降低T-BIL含量，顯示用總黃酮組合物明顯的降酶退黃的保肝作用實施例5本發(fā)明總黃酮組合物對D-半乳糖胺致小鼠肝損傷的保護作用將動物隨機分為六組，陽性對照組、模型對照組、正常對照組、本發(fā)明總黃酮組合物組，分為三組100mg/kg，200mg/kg，400mg/kg，各組的意義同上述實施例4。正常對照組、模型對照組服用相應(yīng)的溶劑，陽性對照組腹腔注射200mg/kg，pox6，qd，末次給藥后1小時D-半乳糖胺100mg/kg，16小時后由眼眶取血，分離血清，測定血清SGPT，血清SGOT的變化，結(jié)果見表2表2本發(fā)明總黃酮組合物對D-半乳糖胺致小鼠肝損傷的血清SGPT，SGOT的變化
*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較從表2的數(shù)據(jù)可以看出本發(fā)明總黃酮組合物具有極好的保肝作用。實施例6本發(fā)明總黃酮組合物在體外的抑菌、抗病毒實驗流感病毒的分離和鑒(滴)定目前常用雞胚進行分離進行流感病毒，接種途徑為雞胚的尿囊腔，3天后出現(xiàn)后雞胚死亡的病變特征和出現(xiàn)血凝素，對此，我們采用此方法進行對本發(fā)明總黃酮組合物的鑒定。我們采用一定濃度的提取液和4個血凝單位的流感病毒1∶1混合，讓二者于室溫作用20分鐘后再注射雞胚，注射量為每胚0.2ml。實驗采用9至11日齡的雞胚，進行尿囊腔接種，培養(yǎng)48小時后，于4℃放置過液，然后無菌取其尿液，經(jīng)1000rpm離心10分鐘后取上清，分裝，-20℃存放，備檢測之用，尿液的檢測分血凝和血抑兩種，使用的紅細胞是來亨公雞，方法為常規(guī)法。
抗病毒實驗用不同濃度的本發(fā)明總黃酮組合物在雞胚中進行抗病毒實驗流感病毒血凝抑制試驗
備注1、原液指初始濃度的本發(fā)明總黃酮組合物4mg/ml2、10-5與10-6指從本發(fā)明總黃酮組合物原液進行藥的稀釋度3、判定結(jié)果時按血凝強度分別以++++、+++、++、-表示。
紅細胞呈細沙粒樣無效主孔(管)底者為+++，即100％凝集；紅細胞均勻鋪于孔(管)底，但邊緣不整而稍向孔(管)底集中者為+++，即75％凝集；紅細胞于孔(管)底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為++，即50％凝集；紅細胞于孔(管)底形成圓團，但邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊者為+，即25％凝集；紅細胞于孔(管)底形成圓團，邊緣光滑整齊者為一，即無凝集。實施例7.體外抑菌作用試驗本發(fā)明總黃酮組合物體外抑菌效應(yīng)試驗采用平板打孔法測定提取物的抗菌效應(yīng)。試管法和平板打孔法進行嘗試后，確定了平板打孔法這一簡便易行且耗時較短的方法。采用五種實驗菌株金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎球菌、溶血鏈菌、卡他球菌進行效應(yīng)試驗。
原液指初始濃度的本發(fā)明總黃酮組合物4mg/ml備注mm指抑菌圈的直徑實施例9總黃酮組合物鎮(zhèn)痛實驗1、動物對象昆明小白鼠18～22g雌雄各半2、分組與溶液配制將小白鼠每組10只，分為5組①生理鹽水組；②水提取組(0.26g/ml)；③醇提取物(0.21g/ml)；④總黃酮組(0.15g/ml)；⑤二氫楊梅素(0.04g/ml)。3、給藥方式給各組小白鼠稱重，按每只0.1ml/10g給藥，連續(xù)三天灌胃給藥，并開每3天給藥后60min，腹腔給入醋酸(0.5％)溶液0.2ml/只，觀察5～30min內(nèi)動物掃體數(shù)。4、結(jié)果與統(tǒng)計藥品名給藥量止痛率 P值生理鹽水0.2ml/只0水提組 2.6g/kg88.1％P＜0.05醇提組 2.1g/kg93.5％P＜0.05總黃酮組1.5g/kg88.0％P＜0.05二氫楊梅素 0.4g/kg54.1％P＜0.05組結(jié)果證明總黃酮組合物具有明顯的止痛作用。
表下方從試驗結(jié)果表示，二氫楊梅素樣品，口服3天后增加小志呼吸道酚紅分泌量，提示樣品有祛痰作用。
表1、總黃酮組合物對小鼠酚紅祛痰試驗的影響
二氫楊梅素 20ml/kg 0.68±0.22 -二氫楊梅素 100 0.70 ± -0.17**P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01同生理鹽水組比較。實施例12本發(fā)明總黃酮組合物的各種制劑的配方片劑本發(fā)明總黃酮組合物25g，乳糖53g，羧甲基纖維素鈉1.5g，硬脂酸鎂0.5g，50％乙醇適量。(普通配方本發(fā)明總黃酮組合物10％-90％重量比，乳糖90％-10％重量比，羧甲基纖維素鈉1.5g，硬脂酸鎂0.5g，50％乙醇適量)沖劑一本發(fā)明總黃酮組合物1份重量比，蔗糖2.5份重量比，糊精1.25份重量比，適量乙醇。制粒、干燥即可(普通配方本發(fā)明總黃酮組合物5-100％重量比，(蔗糖+糊精)95-0％重量比，蔗糖∶糊精＝2∶1)沖劑二本發(fā)明總黃酮組合物115g，糖粉345g，糊精145g，適量乙醇，制粒、干燥即可。膠囊本發(fā)明總黃酮組合物100g，加入2％淀粉，混勻后，裝膠囊。(普通配方本發(fā)明總黃酮組合物10-100％重量比，淀粉90-0％重量比。)
權(quán)利要求
1.一種總黃酮組合物，其含有10-70wt％的蛇葡萄素，0.5-3wt％的楊梅甙，0.2-3wt％的沒食子酸。
2.權(quán)利要求1的總黃酮組合物的制備方法，特征在于通過水和/或有機溶劑煎煮和/或超聲提取和/或滲濾提取葡萄科植物，提取一次或多次，過濾，蒸除溶劑得浸膏，向浸膏中加入熱水，冷卻，靜置，得沉淀。
3.具有治療肝炎，保肝護肝，抗菌消炎，降血脂，鎮(zhèn)痛，祛痰和增強免疫系統(tǒng)免疫力作用的含有權(quán)利要求1的總黃酮組合物和藥學(xué)可接受載體或賦形劑的藥物組合物。
4.含有權(quán)利要求1的總黃酮組合物的飲料或茶。
5.權(quán)利要求2的方法，其中所述葡萄科植物是蛇葡萄屬植物。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述蛇葡萄屬植物是粵蛇葡萄，棟葉玉葡萄，顯齒蛇葡萄，大葉蛇葡萄，白蘞，東北蛇葡萄和山葡萄。
7.權(quán)利要求2的方法，其中所述溶劑是乙醇，乙酸乙酯，丙酮和/或水。
8.權(quán)利要求1的總黃酮組合物在制備治療肝炎的藥物中的用途。
9.權(quán)利要求1的總黃酮組合物在制備保肝護肝的藥物或保健品中的用途。
10.權(quán)利要求1的總黃酮組合物在制備抗菌消炎藥物中的用途。
11.權(quán)利要求1的總黃酮組合物在制備增強免疫系統(tǒng)免疫力的藥物和保健品的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有治療肝炎,保肝護肝,抗菌消炎和增強免疫系統(tǒng)免疫力作用的總黃酮組合物,其含有10－70wt%的蛇葡萄素,0.5－3wt%的楊梅甙,0.2－3wt%的沒食子酸;公開了其制備方法,以及其在制備治療肝炎,保肝護肝,抗菌消炎和增強免疫系統(tǒng)免疫力的藥物或保健品或飲料中的用途。
文檔編號A61K31/352GK1375289SQ0110964
公開日2002年10月23日 申請日期2001年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月15日
發(fā)明者黃迎春, 武普定 申請人:北京美林亞科技發(fā)展有限公司