專利名稱：用作抗腫瘤劑的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮及其相應(yīng)的一氧化物和二氧化物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮(dithiolopyrrolone)衍生物、其相應(yīng)的一氧化物(xenomins)和二氧化物(xenorxides)。本發(fā)明還提供了含有這些化合物、它們的鹽的抗腫瘤組合物，以及本發(fā)明化合物用作抗腫瘤劑的方法。
癌癥是人和動物的主要死因之一。每年世界上有數(shù)百萬人被診斷為患有癌癥，這些人中的大部分隨后死于癌癥。盡管已經(jīng)做了很大努力，但癌癥仍然屬于難以治療的疾病。對有效抗癌藥物的急需是不會停止的。
土壤有機(jī)體是用于藥學(xué)和土壤化學(xué)工業(yè)的生物活性物質(zhì)的傳統(tǒng)來源。最近的一個發(fā)現(xiàn)是土壤生存的線蟲-細(xì)菌的組合體用作有害昆蟲的生物控制劑的商業(yè)化。這種生物控制劑的一個重要特征在于線蟲的細(xì)菌共生生物(致病桿菌種或光桿狀菌種)可產(chǎn)生范圍很廣的生物活性代謝物，并且已分離、定義了這些特殊化合物中的一些化合物，闡明了其結(jié)構(gòu)(Fors和Nealson，1996)。在這些被定義的化合物中，有幾個是二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物。二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮最初是在40年代的鏈霉菌屬分離的，而且從那以后，從其它有機(jī)體也已分離出來。這些化合物包括金絲菌素、硫藤黃菌素、全霉素和xenorhabdins(Hamao等，1948；Eisenman等，1953；Celmer和Solomons，1995；von Daehne等，1969；Mclnerney等，1991)。這些化合物對大范圍微生物具有抗微生物活性。近來，還從致病桿菌種的細(xì)菌培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)了叫做xenorxides的新的抗微生物物質(zhì)(Webster等，1996)。對這些致病桿菌的代謝物的潛在作用的不斷開發(fā)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)xenorxides、xenomins和二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮對動物和人的癌細(xì)胞具有很高的活性，這也是本發(fā)明的主題。
當(dāng)動物細(xì)胞受到不同化學(xué)因素影響時，通常會經(jīng)受各種酶促變化和生物化學(xué)改變。例如，當(dāng)動物細(xì)胞受到致癌劑的攻擊時，可以啟動許多酶促的和生物化學(xué)的活性，其中一些被啟動的活性可通過實驗檢測。在二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮及其衍生物中，硫藤黃菌素是已得到廣泛研究者之一。硫藤黃菌素可抑制酵母中的RNA聚合酶合成(Jimenez等，1973；Tipper，1973)、具有膜穩(wěn)定活性并且可抑制大鼠的血小板聚集(Yasuyuki等，1980)。有報道(Menta和Moon，1991；Sharma等，1994；Arnold等，1995)硫藤黃菌素抑制一些這類活性的啟動可能與接觸致癌劑的哺乳動物細(xì)胞的致癌有關(guān)。這提示硫藤黃菌素可能參與了細(xì)胞轉(zhuǎn)移的起始或癌癥前期細(xì)胞向惡性癌癥細(xì)胞的發(fā)展。然而這種活性沒有通過實驗確定。雖然對二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮的研究已不斷進(jìn)行了約50年，但至今從未對有關(guān)硫藤黃菌素和其它二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮對哺乳動物細(xì)胞的抗癌活性進(jìn)行評價和報道。新近發(fā)現(xiàn)了Xenorxides和xenomins，而在現(xiàn)有技術(shù)中沒有有關(guān)它們的抗癌活性的報道。
雖然本發(fā)明的化合物可以通過化學(xué)合成，但從微生物中可得到初始化合物。用于本發(fā)明的生物體包括伯氏致病桿菌，它是一種與昆蟲病原性線蟲有關(guān)的共生細(xì)菌。已從英國、哥倫比亞、加拿大的土壤中收集到用于本發(fā)明的伯氏致病桿菌及其線蟲共生生物steinernema feltiae。簡而言之，用帶有伯氏致病桿菌A21株的被感染保幼(IJ)線蟲以25IJs/幼蟲的速度感染大蠟蛀蟲的最后齡幼蟲Galleria mellonella。24-48小時后，將死亡的昆蟲幼蟲浸在95％乙醇中進(jìn)行表面消毒，并灼燒。對尸體進(jìn)行無菌解剖，將血淋巴在瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行劃線培養(yǎng)，并在室溫避光培養(yǎng)。在1升蒸餾水中，該瓊脂培養(yǎng)基具有下列組成牛肉提取物 3g胨 5g溴百里酚藍(lán) 0.025g2，3，5-三苯基四唑 0.04g瓊脂15g在121℃滅菌15分鐘。
保持所得到的伯氏致病桿菌的初級形式，并每隔14天對其進(jìn)行傳代培養(yǎng)。為了前后一致，常常將貯存于-20℃的細(xì)菌的14％蔗糖凍干粉末用作培養(yǎng)的起始物質(zhì)。伯氏致病桿菌A21株的培養(yǎng)物具有下列表1和表2的特性，由此培養(yǎng)物可得到本發(fā)明的化合物表1.伯氏致病桿菌A21株的生化特性
*+陽性；-陰性。
表2.酸性產(chǎn)物和由伯氏致病桿菌A21株得到的碳源的利用
*+陽性；+/-弱陽性；-陰性。
這些特性與Akhurst，R.J.和N.E.Boemare(1988)對伯氏致病桿菌的描述是一致的，由此，確定了生物體伯氏致病桿菌的同一性。按照布達(dá)佩斯條約將可從中分離出的本發(fā)明化合物的這種菌株存放在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，Rochville，MD，保藏號為ATCC55743。
微生物伯氏致病桿菌的培養(yǎng)可得到生物活性物質(zhì)xenomins、xenorxides和二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮。例如，可以將伯氏致病桿菌在約25℃、深層有氧條件下，在含水營養(yǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)(發(fā)酵)，這種培養(yǎng)基含有可同化的碳(碳水化合物)源和氮源，從而得到xenomins、xenorxides和二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮。這種發(fā)酵可進(jìn)行長達(dá)約48-96小時，最終形成這些化合物，而且可從發(fā)酵培養(yǎng)基中分離這些化合物，然后純化。
發(fā)酵完成后，可以將被發(fā)酵的肉湯進(jìn)行過濾或離心，通過加入鹽酸將濾液的pH調(diào)至7.0，或者保持原狀。然后用不與水混合的有機(jī)溶劑提取這種濾液，例如用乙酸乙酯或氯仿提取這種濾液。在真空(如約30℃)下，可將被結(jié)合的有機(jī)層(如混合乙酸乙酯或氯仿提取物)濃縮成一種油狀殘余物。可將這種油狀殘余物與少量有機(jī)溶劑混合，并在硅膠柱上進(jìn)行層析。采樣后，可將氯仿或其它有機(jī)溶劑用于洗脫該生物活性部分。通過高效液相層析(HPLC)、用有機(jī)和/或含水溶液可進(jìn)一步純化這種生物活性部分。
常規(guī)的培養(yǎng)中，由伯氏致病桿菌所產(chǎn)生的主要化合物是二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮，而xenorxides和xenomins的形成量相對較少?；蛘?，可通過化學(xué)方法和/或兩種方法的結(jié)合從其它微生物中制備二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮。
通過生物或化學(xué)方法可分別將相應(yīng)二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮的一氧化物和二氧化物即xenorxides和xenomins從其相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物中轉(zhuǎn)化，而相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮是從伯氏致病桿菌分離的。采用生物方法，可以將伯氏致病桿菌的培養(yǎng)肉湯進(jìn)行過濾或離心，這種肉湯存在有相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物?？梢詫o細(xì)胞濾液與空氣長時間接觸一周至一個月，同時在室溫或其它溫度下攪拌或不攪拌。這種方法可使所有或部分相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物氧化成xenomins和xenorxides。用化學(xué)方法氧化相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物可獲得xenorxides和xenomins?？稍诒退幕旌衔镏袑⒓兌螂s環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物或其混合物溶解，然后可在混合物中加入氧化劑如過一硫酸鉀和碳酸氫鉀。令該混合物反應(yīng)幾分鐘至1小時以上。使反應(yīng)混合物與水混合，并用有機(jī)溶劑提取。將提取物合并、干燥，并通過柱層析或高效液相層析純化，從而得到相應(yīng)的xenorxides和xenomins。從不同的微生物中可得到二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮的另外的一氧化物和二氧化物，并可通過化學(xué)合成和/或通過生物方法和化學(xué)方法的結(jié)合而制備，并且有幾個實例已經(jīng)公開了(Takahashi，等，1995；Fujimoto，等，1996)。
本發(fā)明的化合物包括二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮、其相應(yīng)的一氧化物如xenomins、其相應(yīng)的二氧化物如xenorxides及其鹽。本文所用的術(shù)語“鹽”是指酸性和/或堿性鹽，其是由無機(jī)和/或有機(jī)酸和堿形成的，適合的酸包括如鹽酸、硫酸、硝酸、苯磺酸、乙酸、馬來酸、酒石酸等，這些酸都是藥物上可接受的。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，眾所周知是根據(jù)物理和化學(xué)穩(wěn)定性、可流動性、吸濕性和溶解性來選擇適合的鹽。優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽，尤其是當(dāng)本發(fā)明化合物用作藥物時，可用于加工這些化合物、或者非藥物型用途的其它鹽也可考慮?？鼓[瘤劑及其用途。
本發(fā)明涉及含有這些化合物的活性成分或其藥物上可接受的鹽的藥物制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇劑型、給藥方式和劑量。成人的典型日劑量為約2.5mg-約2,000mg/天。對哺乳動物人可以例如口服、非腸道或局部給藥。
當(dāng)這些化合物或其鹽用來治療時，可以將它們單獨(dú)給藥，或者以藥物上適合的制劑形式給藥，該制劑除含有活性成分外，還含有一種或多種常見載體。根據(jù)疾病的性質(zhì)和/或給藥途徑，本發(fā)明組合物可通過已知方法配制。
藥物組合物的實例包括任何適合于口服、局部或非腸道給藥的固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑、粉劑等)或液體(溶液、懸浮液或乳劑)組合物，它們可含有純化合物、或其鹽、或與任何載體或其它藥物活性化合物相結(jié)合。這些組合物經(jīng)非腸道給藥時應(yīng)是無菌的。
使用本技術(shù)領(lǐng)域能夠獲得的藥物物質(zhì)可以很容易將用作治療動物和人的疾病的抗腫瘤劑的本發(fā)明治療組合物制備成這種單位劑型，也可通過常規(guī)方法制備?？梢赃x擇適合的固體或液體賦形劑或稀釋劑，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備本組合物。使用國家癌癥研究會(NCI)的公認(rèn)方案，給予任何本發(fā)明化合物和/或其具有藥理活性的和生理學(xué)上相容的衍生物，都可用于對患有腫瘤疾病的動物或人進(jìn)行治療，這些疾病例如結(jié)腸癌、宮頸(cevercal)癌、乳腺癌、白血病、肺癌、卵巢癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、腎癌、前列腺癌等。給藥劑量是根據(jù)腫瘤疾病的特性、所涉及的患者的類型，包括年齡、健康和體重、同時進(jìn)行的治療類型以及治療次數(shù)和治療率來確定。舉例來說，所給予的活性成分的劑量為按患者每kg體重計，靜脈內(nèi)0.1-約200mg/kg；肌肉內(nèi)1-約500mg/kg；和口服5-約1000mg/kg。以濃度表示，本發(fā)明組合物中活性成分的濃度含量為局部使用時，活性成分占組合物的約0.01-約50％w/w，優(yōu)選約1-約20％w/w；非腸道給藥時，活性成分占組合物的約0.05-約50％w/v，優(yōu)選約5-約20％w/v。使用本技術(shù)領(lǐng)域能夠獲得的藥物物質(zhì)可以很容易將用作抗腫瘤劑的本發(fā)明活性成分制備成這種單位劑型，也可通過常規(guī)方法制備。
實施例1.xenorxides、xenomins和二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮的制備A.選擇性二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮的制備。
迄今為止，已報道了幾種二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮，包括金絲菌素、硫藤黃菌素、全霉素xenorhabdins和thiomarinol。金絲菌素最初是由Umezawa等(1948)報道的，由Celmer和Solomons(1955)將其結(jié)構(gòu)完全公開。硫藤黃菌素是由幾個菌種制成的，這些菌種包括灰肉色鏈輪絲菌，它可從美國曲型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，Rockville，MD獲得，保藏號為ATCC33049。通過化學(xué)合成的硫藤黃菌素和全霉素已由Schmidt和Geiger(1962)，Hagio，K.和Yoneda，N.(1974)和Stachel，H.D.等(1992)公布。xenorhabdins的制備已經(jīng)有報道，并且Mclnerney等(1991)和Li等(1995)已做了全面報道。其它帶有二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮環(huán)的另外不同化合物的制備最近由Baggaley等(1994a，b)和Takahashi等(1994)公開?？赏ㄟ^引用的參考文獻(xiàn)中所述的方法來制備用于本發(fā)明的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮，并根據(jù)NMR光譜確定每種二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的結(jié)構(gòu)。熟練的藥劑師能應(yīng)用本文所述的方法，另外，能從可得到的現(xiàn)有物質(zhì)獲得這些二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮。在實現(xiàn)這些操作時，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以采用任何適合的過濾、層析和其它純化技術(shù)。對于本領(lǐng)域這些技術(shù)人員來說，顯然實現(xiàn)這些操作的物質(zhì)和試劑能從化學(xué)公司買到，因此不對有關(guān)細(xì)節(jié)進(jìn)行描述。B.通過微生物發(fā)酵由二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮制備相應(yīng)的二氧化物。
Xenorxides在25℃將伯氏致病桿菌的培養(yǎng)物在Eberbach轉(zhuǎn)動搖床上以180rpm搖動24小時。在2,000ml燒瓶中，將100ml這種細(xì)菌培養(yǎng)物加入900ml胰蛋白酶大豆肉湯中，開始細(xì)菌發(fā)酵。在25℃將此燒瓶置于轉(zhuǎn)動搖床上進(jìn)行避光培養(yǎng)。96小時后，立即將培養(yǎng)物離心(12,000g，20分鐘，4℃)以制備細(xì)菌細(xì)胞。然后用乙酸乙酯提取該無細(xì)胞肉湯4次。用無水硫酸鈉干燥這些混合提取物，再通過濾紙過濾。在30℃以下、真空中將濾液在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器上進(jìn)行濃縮，得到棕色油狀物。重復(fù)上述實驗10次后，得到大約3g油狀物。然后將粗提取物加裝在硅膠(200g硅膠60,40cm×5cm，EM Sinence，Darmstadt，德國)色譜柱上。用乙醚或乙酸乙酯洗脫出黃色的生物活性部分。然后將這種生物活性部分在C18制備柱(Spherisorb 10(ODS(1))，250×10mm，10 micro，Phenomenex，Torrance，CA)上以2.5ml/分、按程序(在水中的10％乙腈中等度5分鐘，然后在35分鐘內(nèi)逐漸增加至85％乙腈，等度5分鐘，再在2分鐘內(nèi)減回到10％)進(jìn)行HPLC。在254nm監(jiān)測洗脫物。33.6分鐘時洗脫出XENORXIDE 1(約0.3mg/l培養(yǎng)肉湯)，此后在35.2分鐘時洗脫出XENORXIDE 2(約0.2mg/l)。C.通過微生物發(fā)酵由二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮制備相應(yīng)的一氧化物。
Xenomins；為了純化xenomins，培養(yǎng)和提取的條件與xenorxides相同。提取后，用乙酸乙酯作為洗脫液，通過硅膠層析柱處理被濃縮的粗提取物。洗脫出極性較小的生物活性物質(zhì)后，用甲醇洗脫可得到極性較大的生物活性部分。在真空下濃縮該極性較大的生物活性部分，再通過C18層析柱分離，首先用水作為洗脫液，然后用含水的25％甲醇、50％甲醇、75％甲醇，最后用純甲醇。大多數(shù)生物活性部分是用含水的75％甲醇洗脫。然后將此生物活性部分濃縮，并在C18制備柱(Spherisorb 10(ODS(1))，250×10mm，10 micro，Phenomenex，Torrance，CA)上以2.0ml/分、按程序(在水中的30％MeCN中等度1分鐘，然后在24分鐘內(nèi)逐漸增加至70％MeCN，等度5分鐘)進(jìn)行HPLC。在254nm監(jiān)測洗脫物。收集活性峰1(25.4分鐘)和峰2(25.8分鐘)。濃縮活性峰1，并用二氯甲烷中的60％乙酸乙酯作為洗脫液、通過制備硅膠TLC進(jìn)一步分離，從而得到xenomin 1(Rf＝0.32)。濃縮活性峰2，并用二氯甲烷中的60％乙酸乙酯作為洗脫液、通過制備硅膠TLC進(jìn)一步分離，從而得到xenomin 2(Rf＝0.31)。D.通過生物轉(zhuǎn)化由其相應(yīng)的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物制備xenorxides。
用上述同樣的方法得到無細(xì)胞肉湯，然后在4℃至室溫下貯存3-6周。再用乙酸乙酯提取該含水肉湯，用上述同樣的方法分離混合提取物。在33.6分鐘時洗脫出XENORXIDE 1(2mg/l)，在35.2分鐘時洗脫出XENORXIDE 2(1.5mg/l)。E.通過化學(xué)氧化由二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮制備相應(yīng)的二氧化物。
將152mg 6-(己酰氨基)-4-甲基-4，5-二氫-1，2-二硫雜環(huán)戊烯并(dithiolo)[4，3-b]吡咯-5-酮(XN1)溶解在20ml丙酮和15ml水的混合物中，然后用冰將其冷卻至0℃。在0℃時將過一硫酸鉀(510mg)加入該溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時。然后在0℃下將5ml碳酸氫鉀的飽和溶液加入反應(yīng)混合物中，同時連續(xù)攪拌半小時。加入水后，用乙酸乙酯提取該反應(yīng)混合物3次。合并這些提取物，在Na2SO4上干燥，蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，然后用己烷∶乙酸乙酯(2∶1)、經(jīng)硅膠柱層析進(jìn)一步純化，從而得到純xenorxide 1(78mg，51％產(chǎn)率)。與此類似，由6-(5’-甲基己酰氨基)-4，5-二氫-1，2-二硫雜環(huán)戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮可制備xenorxide 3，產(chǎn)率為50％。實施例2.活性成分的鑒定在Bruker WM400分光計上于CDCl3中記錄NMR光譜，用殘余的CDCl3(～7.25)作為內(nèi)標(biāo)。在以70eV操作的Hewlett-Packrad 5985B GC/MS系統(tǒng)上，使用同向探針得到低分辨質(zhì)譜。在Kratos MS80儀器上記錄高分辨質(zhì)譜。用Perkin-Elmer 599B分光計將紅外光譜記錄為在Nacl上的凈膜。(所使用的縮寫如下EI＝電子碰撞，M＝分子離子，t＝三重峰，J＝偶聯(lián)常數(shù)，Hz＝赫茲，d＝雙峰，m＝多重峰，bs＝寬峰)。
6-(乙酰氨基)-4-甲基-4，5-二氫-1，2-二硫雜環(huán)戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(硫藤黃菌素)(XN0)1HNMR(DMSO-d6)δ2.05(3H，s)，3.92(3H，s)，7.19(1H，s)和9.85(1H，寬峰)；EIMS m/e228(M+)，186.
6-(己酰氨基)-4-甲基-4，5-二氫-1，2-二硫雜環(huán)戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(XN1)1HNMR(CDCl3)δ0.90(3H，t，J＝6.9Hz)，1.35(4H，m)，1.70(2H，m)，2.35(2H，t，J＝7.4Hz)，3.35(3H，s)，6.63(1H，s)和7.43(1H，寬峰)；EIMS m/e 284(M+)，186.
6-(5’-甲基己酰氨基)-4，5-二氫-1，2-二硫雜環(huán)戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(XN3)1HNMR(CDCl3)δ0.89(6H，d，J＝6.6Hz)，1.24(3H，m)，1.70(2H，m)，2.32(2H，t，J＝7.6Hz)，6.74(1H，s)，7.44(1H，寬峰)和7.94(1H，寬峰)；EIMS m/e 284(M+)，172.
XENORXIDE 1(XO1)EIMS317(2)，316(M+，13)，220(9)，219(9)，218(100)，186(23)，154(16)，99(40)，71(39)；HRMS316.0555(C12H16N2O4S2的計算值316.0551，20)，217.9824(C6H6N2O3S2的計算值217.9820，100)，154.0197(C6H6N2OS的計算值154.0201，16)；IR(KBr)3448，3298，3275，1720，1686，1654，1637，1560，1522，1310，1139，551 cm-1；1HNMR(CDCl3)δ7.56(1H，bs，CO-NH)，6.35(1H，s，H-3)，3.20(3H，s，N-Me)，2.38(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.67(2H，m，CH2)，1.32(4H，m，CH2CH2)，0.89(3H，t，J＝7.0Hz)；13CNMR(CDCl3)δ171.6(s，CON)，164.7(s，CO)，145.4(s，C7)，121.3(s，C6)，116.2(s，C8)，109.2(d，C3)，36.4，31.2，27.8，24.6，22.3，13.8.
XENORXIDE 2(XO2)EIMS330(M+，10)，218(100)；HRMS330.0707(C13H18N2O4S2的計算值330.0708，18)，217.9829(C6H6N2O3S2的計算值217.9820，100)，154.0213(C6H6N2OS的計算值154.0201，16)；IR(KBr)3438，3298，1719，1686，1654，1637，1560，1522，1400，1310，1142，551 cm-1；1HNMR(CDCl3)δ7.56(1H，bs，CO-NH)，6.35(1H，s，H-3)，3.20(3H，s，N-Me)，2.36(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.67(2H，m，CH2)，1.2-1.6(1H，m，CH)，1.22(2H，m，CH2)，0.89(6H，d，J＝6.6Hz)；不同的NOE實驗顯示了6.35ppm與3.20ppm的峰值之間的NOE作用；13CNMR(CDCl3)δ171.6(s，CON)，164.7(s，CO)，145.4(s，C7)，121.3(s，C6)，116.2(s，C8)，109.2(d，C3)，38.2(t，CH2)，36.7(t，CH2)，28.0(q，CH3)，27.8(d，CH)，22.8(t，CH2)，22.4(q，CH3).
XENORXIDE 3(XO3)EIMS316(M+，7.5)，218(9)，204(65)185(7)，172(15)，105(25)，95(95)，69(100)，43(70)；1HNMR(CDCl3)δ10.10(1H，bs)，9.32(1H，bs)，6.85(1H，s，H-3)，2.53(2H，t，CO-CH2，J＝7.5Hz)，1.66(2H，m，CH2)，1.58(1H，m)，1.21(2H，m，)，0.87(6H，d，J＝6.6Hz).
Xenomin 1(XM1)EIMS300(M+，13)，202(36)，186(44)，185(41)，85(62)，69(100)；HRMS300.0605(C12H16N2O3S2的計算值300.0602，12)，201.9871(C6H6N2O2S2的計算值201.9871，30)；1HNMR(CDCl3)d7.52(1H，bs.CO-NH)，6 46(1H，s，H-3).3.30(3H，s.N-Me)，2.49(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.79(2H，m.CH2)，1.41(4H.m，CH2-CH2)，0.90(3H，t，J＝6.9).
Xenomin 2(XM2)EIMS314(M+，21)，218(15)，202(59)，187(18)，186(98)，185(73)，69(100)；HRMS314.0759(C13H18N2O3S2的計算值314.0759，12)，201.9871(C6H6N2O2S2的計算值201.9871，45)；1HNMR(CDCl3)d7.43(1H，bs，CO-NH)，6.46(1H，s，H-3)，3.30(3H，s，N-Me)，2.48(2H，t，CO-CH2，J＝7.6Hz)，1.71(2H，m，CH2)，1.29(3H，m，CH和CH2)，0.88(6H，d，J＝7.0).實施例3.用作抗腫瘤劑的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮、相應(yīng)的一氧化物和二氧化物。
可以通過標(biāo)準(zhǔn)測定法來證實一種特殊化合物的抗癌活性。美國國家癌癥研究會(NCI)通常使用的、用于證明一種化合物的功效的方法是依據(jù)LC50。LC50是指該化合物殺死半數(shù)癌細(xì)胞種群的濃度。本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用這種測定法，并且可表示在哺乳動物中的抗癌活性。試驗動物的癌細(xì)胞可從ATCC、NCI和其它組織得到。使用稍做修改的標(biāo)準(zhǔn)NCI方法、在各種人的癌細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物中已測定了本發(fā)明化合物的抗癌活性(見下表)。Skehan等(1990)對該方法進(jìn)行了說明。簡言之，使癌細(xì)胞在含谷氨酰胺和10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中生長，并從指數(shù)期維持培養(yǎng)基中收獲癌細(xì)胞。對被收獲的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，并將其分散在體積為180μl的復(fù)制式96孔培養(yǎng)盤中，其中每一孔的細(xì)胞密度多達(dá)2,500細(xì)胞/孔。在37℃將這些細(xì)胞沉降約4小時。然后將20μl含有這種試驗化合物的培養(yǎng)基加入每一孔中，得到適合的最終試驗化合物的濃度。然后將此試驗盤在37℃培養(yǎng)。在每一孔中加入到50μl 50％冷三氯乙酸中培養(yǎng)后，終止該試驗。將細(xì)胞在4℃固定1小時，然后用自來水沖洗5次。風(fēng)干被沖洗的盤，并用溶解在1％乙酸中的0.4％(wt/體積)sulforhodamine B(SRB)染色30分鐘。染色結(jié)束時，去除SRB，用1％乙酸將盤快速漂洗5次。漂洗后，將盤風(fēng)干，在每一孔中加入100μl 10 mM三堿(tris base)(pH 10.5)以溶解與細(xì)胞結(jié)合的染料。將盤置于轉(zhuǎn)動搖床上并搖動(100 rpm)10分鐘。最后，將盤在570nm用微量滴定板讀數(shù)器進(jìn)行讀數(shù)。所有試驗的化合物對這些癌細(xì)胞都具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性(見下表)。
抗腫瘤活性

*未試驗。
從前面的實施方案和實施例顯然可以看出本文已經(jīng)對發(fā)明進(jìn)行了描述和舉例說明。雖然上面的說明包含許多特殊性，但不應(yīng)將這些看作是對本發(fā)明范圍的限定，而應(yīng)視為優(yōu)選的實施方案。因此，我們不應(yīng)該根據(jù)所例舉的實施方案來確定本發(fā)明的保護(hù)范圍，而應(yīng)根據(jù)所附的權(quán)利要求書及其合法的等同要求來決定。
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權(quán)利要求
1.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，酰基；R3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
2.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 或 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，?；?；R3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
3.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 或 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，?；?；R3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
4.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求1所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝酰基；R3＝氫、甲基。
5.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求2所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝酰基；R3＝氫、甲基。
6.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求3所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝?；?；R3＝氫、甲基。
7.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求1所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的?；?；R3＝氫或甲基。
8.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求2所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的?；籖3＝氫或甲基。
9.一種用于治療腫瘤疾病的藥物組合物，它包括權(quán)利要求3所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的酰基；R3＝氫或甲基。
10.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的下面所示結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，?；籖3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
11.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的下面所示結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 或 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，?；籖3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
12.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的下面所示結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑， 或 其中R1＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基；R2＝氫、取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或雜環(huán)基，酰基；R3＝氫、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜環(huán)基。
13.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求10所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝酰基；R3＝氫、甲基。
14.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求11所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝?；籖3＝氫、甲基。
15.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求12所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝?；?；R3＝氫、甲基。
16.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求10所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的?；籖3＝氫或甲基。
17.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求11所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的?；籖3＝氫或甲基。
18.一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括對需要這種治療的患者施用有效抗腫瘤量的權(quán)利要求12所述的化合物或其藥物上可接受的鹽，以及藥物載體或稀釋劑，其中R1＝氫；R2＝具有直鏈或支鏈的1-10個碳鏈的?；?；R3＝氫或甲基。
全文摘要
從伯氏致病桿菌分離出的、具有式(1)或(2)或(3)的化合物或其鹽具有抗腫瘤活性,式(1):其中R
文檔編號A61K31/407GK1360891SQ0113140
公開日2002年7月31日 申請日期2001年9月6日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月5日
發(fā)明者約翰·麥爾康姆·韋伯斯特, 李建雄 申請人:約翰·麥爾康姆·韋伯斯特, 李建雄