專利名稱：一種治愈潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物制品技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品。
本發(fā)明提供了一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品(消潰素)。該生物制品是由從動物細(xì)胞膜中萃取的天然膜脂與藥用輔料組成的，其中天然膜脂主要為磷酸甘油脂類，藥用輔料為維生素E和甘油，按重量組份為天然膜脂10-30份、維生素E2-5份、甘油30-60份，以任意比例構(gòu)成100％的組成。
本發(fā)明的生物制品(消潰素)的藥效試驗(yàn)(試驗(yàn)單位浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院計(jì)劃生育研究所生殖毒理室)1.摘要實(shí)驗(yàn)用7％醋酸溶液制作大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，于24小時(shí)后分別給10％、15％消潰素2ml灌腸，每天1次，連續(xù)7天，結(jié)果表明15％消潰素組有明顯的治療作用。
2.目的觀察消潰素對醋酸所致大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
3.受試藥物10％、15％消潰素由浙江省嘉興市第一醫(yī)院供給，批號990526。
陽性對照藥物結(jié)腸寧系湖南長沙九芝堂藥廠生產(chǎn)，批號990166。
7％醋酸溶液、生理鹽水由本實(shí)驗(yàn)室自配。
4.實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，體重♀200-220g，♂300-350g由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心供給，合格證(96)001。
5.實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠80只，雌、雄各半，禁食24小時(shí)，不禁水。用7cm灌胃針頭吸取7％醋酸溶液1.5ml，灌腸20秒鐘后用生理鹽水5ml沖洗1次，制作潰瘍性結(jié)腸炎模型。24小時(shí)后將動物分成4組，每組20只，分別給10％、15％消潰素、結(jié)腸寧和生理鹽水，各組每次給藥量為2ml，給藥后動物倒提2分鐘以免藥液溢出，每天1次，連續(xù)7天。給藥期間自由攝食、飲水，末次給藥后24小時(shí)處死大鼠，剖腹用血管鉗鉗住肛門上段結(jié)腸7-8cm處，取10％甲醛溶液2ml注入固定，3分鐘后取結(jié)腸7cm，測量、記錄潰瘍面積及程度，將每只鼠潰瘍面積的總和分為5個(gè)等級，作為潰瘍指數(shù)，并將結(jié)腸浸入10％甲醛溶液作病理切片檢查，所得數(shù)據(jù)均進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組試驗(yàn)結(jié)果與生理鹽水組比較作出評價(jià)。
潰瘍面積(mm2)10-120 130-250 260-370 380-500 ＞500或穿孔潰瘍指數(shù) 1234 5根據(jù)潰瘍指數(shù)計(jì)算潰瘍百分率 6.試驗(yàn)結(jié)果消潰素對醋酸燒灼型潰瘍的治療作用及治療后的病理形態(tài)變化(見表1、表2)。
表1消潰素對醋酸燒灼型潰瘍的治療作用潰瘍面積(mm2) 潰瘍指數(shù) 潰瘍組別 動物只數(shù)(X±SD) (X±SD) 抑制率7％醋酸20 265.15±230.862.40±1.96 0％(生理鹽水)10％消潰素20 208.25±236.971.80±1.82 25％**15％消潰素19 31.58±106.99**0.32±1.00***87.5％**結(jié)腸寧14 241.71±218.602.29±1.86 33.3％**與生理鹽水對照組比較***P＜001，**P＜0.001
表2消潰素對醋酸燒灼型潰瘍治療的病理形態(tài)變化動物 ++++++ -組別有效率只數(shù) (無效) (略有好轉(zhuǎn)) (好轉(zhuǎn)) 基本恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)7％醋酸20 66.6％25.0％ 0 8.4％ 33.4％(生理鹽水)10％消潰素20 42.8％28.5％ 14.2％ 14.5％57.2％15％消潰素19 11.1％11.1％ 22.3％ 55.5％**88.9％**結(jié)腸寧14 37.5％50.0％ 0 12.5％62.5％與生理鹽水對照組比較**P＜0.01從表1可見，15％消潰素在潰瘍面積和潰瘍指數(shù)兩個(gè)方面與生理鹽水對照組相比，經(jīng)t檢驗(yàn)，兩者差異非常顯著(P＜0.001)，表明15％潰瘍素有明顯的治療作用。而10％消潰素和結(jié)腸寧與對照組比較差異無顯著性(P＜0.05)，表明其效果較差。但潰瘍抑制率給藥各組與對照組相比，經(jīng)u檢驗(yàn)，差異非常顯著(P＜0.01)，表明給藥各組對潰瘍均有抑制作用。從表2病理切片檢查表明，15％消潰素在基本恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)和有效率兩方面與生理鹽水對照組比較，經(jīng)u檢驗(yàn)，差異非常顯著(P＜0.01)，表明15％消潰素對潰瘍有很強(qiáng)的修復(fù)作用，而10％消潰素和結(jié)腸寧與對照組相比，差異無顯著性(P＜0.05)，表明其修復(fù)作用較弱。
7.結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明15％消潰素2ml，連續(xù)灌腸7天對醋酸所致的潰瘍性結(jié)腸炎有非常明顯的治療作用，10％消潰素與結(jié)腸寧療效不顯著。
本發(fā)明的生物制品(消潰素)的急性毒性試驗(yàn)(試驗(yàn)單位浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院省級實(shí)驗(yàn)動物與安全性研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)1.摘要小鼠于24小時(shí)內(nèi)灌服15％消潰素3次，每次40ml/kg，共計(jì)120mi/kg，未引起動物死亡和嚴(yán)重不良反應(yīng)。
2.試驗(yàn)?zāi)康挠^察給予小鼠15％消潰素最大劑量時(shí)引起小鼠死亡和毒性反應(yīng)情況。
3.受試藥物15％消潰素由加興市第一人民醫(yī)院提供，批號980908。
4.動物ICR小鼠40只，體重18-20g，雌雄各半，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心供應(yīng)。合格證96(001)。
5.劑量預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，給小鼠一次灌服15％消潰素40ml/kg(0.8ml/20g)，未見動物死亡和明顯毒性反應(yīng)。因此確定在24小時(shí)內(nèi)，給15％消潰素3次，一次劑量為40ml/kg。
6.試驗(yàn)方法ICR小鼠40只，雌雄各半，分為兩組，每組10只。1組給15％消潰素，2組給生理鹽水。給藥前禁食不禁水16小時(shí)，每鼠灌胃0.8ml/20g，8小時(shí)后給藥1次，次日上午再給藥1次，24小時(shí)共給藥3次，總量2.4ml/20g。給藥后即觀察動物一般情況，以后每隔1-2小時(shí)觀察1次，次日起每天觀察一次，連續(xù)觀察2周，記錄動物的一般情況及死亡數(shù)，死亡動物及時(shí)尸檢，觀察臟器病變情況。以小鼠無死亡的最大劑量為15％消潰素的最大耐受量，以最大耐交量及人臨床用量推算出相當(dāng)臨床用藥的倍數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果小鼠灌服15％消潰素后，給藥組動物無一只死亡，也未見明顯毒性反應(yīng)，和對照組相似。
表3 15％消潰素對小鼠的急性毒性試驗(yàn)劑量 動物數(shù) 死亡數(shù)死亡率組別(ml/kg×天) (只) (只) (％)15％消潰素 40×3 20 0 0對照生理鹽水 20 0 040×3結(jié)論根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果，15％消潰素對小鼠的最大耐受量為120ml/kg/24小時(shí)，相當(dāng)人臨床劑量1ml/kg(按60kg體重計(jì)算)的120倍。
本發(fā)明的生物制品(消潰素)對大鼠直腸的刺激試驗(yàn)(試驗(yàn)單位浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院省級實(shí)驗(yàn)動物與安全性研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)1.摘要大鼠30只，雌雄各半，分為3組，每組10只，1組和2組給15％和10％消潰素，3組對照給生理鹽水。經(jīng)肛門給藥，每次1ml，隔2小時(shí)再給藥1次，4小時(shí)內(nèi)給藥2次。24小時(shí)后解剖大鼠，取直腸觀察，結(jié)果表明，各組腸管粘膜均無充血和腫脹等癥狀。
2.試驗(yàn)?zāi)康挠^察消潰素對動物直腸的刺激反應(yīng)情況。
3.受試藥物15％消潰素，批號980908，10％消潰素，批號980907，由嘉興市第一人民醫(yī)院提供。
4.動物SD大鼠，體重230-250g，雌雄各半，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。合格證96(001)。
5.試驗(yàn)方法將30只大鼠按雌雄各半分為3組，每組10只。第1組給15％消潰素，第2組給10％消潰素，第3組對照，給生理鹽水。給藥前大鼠禁食不禁水24小時(shí)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠仰縛于固定板上，然后各組分別用裝有大鼠灌胃針頭的2ml注射器，分別吸取藥液和生理鹽水，由大鼠肛門緩緩進(jìn)，深度約5cm，注入1ml藥液或生理鹽水，使藥液與腸道粘膜充分接觸，2小時(shí)后再給藥1次，持續(xù)4小時(shí)，共給藥2次，共2ml，觀察給藥期間和給藥后大鼠一般情況，于給藥24小時(shí)后處死大鼠，取出腸段仔細(xì)觀察腸道粘膜有無充血、腫脹等現(xiàn)象，并和對照組動物比較。
6.試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，給15％和10％消潰素大鼠腸道粘膜無充血和腫脹等癥狀，和對照組無明顯差別。
7.結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)表明，15％和10％消潰素對直腸粘膜無刺激性。
本發(fā)明的生物制品病理組織學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告1.實(shí)驗(yàn)動物品種SD大鼠2.劑量組別10％消潰素、15％消潰素、結(jié)腸寧、10％冰醋酸3.組織名稱結(jié)腸4.檢查時(shí)間給藥7天和8天5.鏡下檢查取肉眼觀察有病灶的腸叉做常規(guī)石蠟切片，H.E染色，在光鏡下檢查，比較各組經(jīng)治療后仍存在病灶的程度，參考表4和附注。
表4各組治療后病理形態(tài)情況組別 +++ ++ + 治療后基本恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)10％消潰素7天 42.8 28.5 14.2 14.215％消潰素7天 11.1 11.1 22.2 55.5結(jié)腸寧7天 37.5 50.0 12.57％冰醋酸8天 66.6 25.0 8.3附注評價(jià)參考+ 腸粘膜上皮脫落，炎癥細(xì)胞浸潤++ 腸粘膜上皮脫落，炎癥細(xì)胞浸潤，固有層及粘膜下層體結(jié)締組織增生，并有多重淋巴細(xì)胞浸潤，偶爾見腸腺存在。+++腸粘膜上皮脫落，炎癥細(xì)胞浸潤，固有層及粘膜下層體結(jié)締組織增生，并有多重淋巴和中性白細(xì)胞浸潤，腸腺萎縮或消失，腸上皮、固有層、粘膜下層的正常結(jié)構(gòu)消失，有時(shí)上皮伴有壞死。
(一)粘膜正常①上皮單層柱狀上皮，上皮從粘膜表面向固有膜深陷，形成許多單管狀的腸腺，腸腺排列很密，上皮杯狀細(xì)胞很多；②固有膜有結(jié)締組，散置于腸腺之間，有時(shí)亦含有淋巴小結(jié)；③粘膜肌層大致分為內(nèi)環(huán)行和外縱行兩層平滑肌。
(二)粘膜下層為常規(guī)結(jié)締組織，內(nèi)含血管淋巴管，神經(jīng)和脂肪細(xì)胞。
(三)肌層內(nèi)環(huán)行，外縱行肌層。
(四)外膜結(jié)論病理形態(tài)基本恢復(fù)率為55.5％。
本發(fā)明的生物制品臨床療效如下對確診為潰瘍性結(jié)腸炎的33例自愿者進(jìn)行消潰素治療，結(jié)果對輕、中、重三組33例uc病人平均治療次數(shù)分別為5、9、21次，其即期治愈率分別為100％、91.7％及50％，平均84.84％；遠(yuǎn)期治愈率(隨訪2年以上)分別為100％、83.3％、37.5％，平均78.8％。
結(jié)論實(shí)踐證明，消潰素具有抗炎、修復(fù)腸粘膜組織損傷，促進(jìn)潰瘍愈合，恢復(fù)細(xì)胞生理功能作用，是一種安全、無毒、有效的新型生物制劑，有廣泛的應(yīng)用前景。
鑒別取本品2ml，置10ml具玻塞試管中，加乙醚1ml，密塞，充分振搖，靜止分層，取上層作供試品溶液(約含磷脂0.3克/ml)。另取卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品約0.3g溶于1.0ml乙醚中為對照液，按(《中國藥典》1995年版二部附錄VB)，薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上層兩種溶液器各20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-乙醚-水(60∶30∶8∶3)展開劑。展開取出，涼干，用碘蒸汽熏蒸，溶液顯示多個(gè)斑點(diǎn)，其中一個(gè)斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)與對照品的主斑點(diǎn)相同。
衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)按《中國藥典》1995年版二部附錄10，微生物限度應(yīng)符合一般滴眼劑標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，其它符合乳劑項(xiàng)下有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。
穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品3批，置冷藏4-8℃條件下避光放置，0、1、2、3、6、12個(gè)月，分別按時(shí)觀測，結(jié)果不變色，不分層，不酸敗，質(zhì)量穩(wěn)定，符合規(guī)定。
于內(nèi)鏡下在結(jié)腸近端注入消潰素20-30ml，每周一次，共二次。之后，大便每日解一次黃色成形便，無粘液血便，其余癥狀消失，距今4年余(50個(gè)月)，癥狀無復(fù)發(fā)。腸鏡復(fù)查正常腸粘膜。見

圖1治療前后腸鏡檢查情況。療效評價(jià)遠(yuǎn)期痊愈。
權(quán)利要求
1.一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品，其特征在于該生物制品是由從動物細(xì)胞膜中萃取的天然膜脂與藥用輔料組成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品，其特征在于其中所述的天然膜脂為磷酸甘油脂，藥用輔料為維生素E和甘油，并且按重量組份天然膜脂為10-30份、維生素E2-5份、甘油30-60份以任意比例構(gòu)成100％的組成。
3.一種用從動物細(xì)胞膜中萃取的天然膜脂與藥用輔料組成的生物制品在治療潰瘍性結(jié)腸炎中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬生物制品技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的生物制品。該生物制品是由從動物細(xì)胞膜中萃取的天然膜脂與藥用輔料組成的。具有抗炎、修復(fù)粘膜組織損傷，促進(jìn)潰瘍愈合及恢復(fù)細(xì)胞生理功能作用。
文檔編號A61K31/662GK1413734SQ0113198
公開日2003年4月30日 申請日期2001年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月24日
發(fā)明者于滋洲 申請人:于滋洲