專(zhuān)利名稱(chēng)：非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物的制作方法
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及連接到載體上的非粘蛋白型合成化合物，即非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物。本發(fā)明還涉及非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物用于制備單克隆抗體、人免疫缺陷病毒(HIV)劑、抗腫瘤劑和免疫刺激劑的用途。
背景技術(shù)：
2.現(xiàn)有技術(shù)粘蛋白型抗原，例如，如下圖所示的Tn(GalNAcα1→O-Ser/Thr)，TF(Galβ1→3GalNAcα1→O-Ser/Thr)、STn(NeuAcα2→6GalNAcl→O-Ser/Thr)在腫瘤組織中高表達(dá)，但在正常組織中的表現(xiàn)(appearance)受到限制(G.F.Springer，J.Natl，Cancer Inst.，1975，54，335.，S.Hakomori，Advanced inCancer Research，1989，52，257)。 近來(lái)，在作為人免疫缺陷病毒(HIV)特異性糖蛋白的gp120上發(fā)現(xiàn)了Tn和STn表位(Hanse，J.E.，J.Viol.；1990，64，2833.，J.Viol.，1991，65，6416.；Arch.Viol.，1992，126，11.)。且據(jù)報(bào)導(dǎo)O連接的寡糖的單克隆抗體阻斷HIV感染(Hanse，J.E，J.Viol.；1990，64，2833；KumarA，Virology，2000，274，149)。
預(yù)計(jì)施用粘蛋白型腫瘤抗原和/或連接到可藥用載體上的粘蛋白型腫瘤抗原可作為癌和HIV的特異性免疫療法。其中這些載體是可藥用的蛋白質(zhì)，如白蛋白(ALB)、鑰孔血藍(lán)素(KLH)、BCG，或是合成化合物，如棕櫚酰衍生物、芳族化合物、脂族化合物、烷基、氨基烷基、肽和類(lèi)肽，其可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答(S.J.Danishefsky，J.Am.Chem.Soc.1998，120，12474.；G.Ragupathi，Glycoconjugate J.，1998，15，217.；B.M.Sandmeier，J.Immunotherapy，1999，22(1)，54.；A.Singhal，CancerRes.，1991，51，1406.；T.Shimizu，1987，55，2287-2289)。
但是，上述粘蛋白型抗原—載體在糖和載體部分之間具有O-配糖鍵。因此，考慮到它們的代謝穩(wěn)定性和免疫原性，這些O-配糖鍵易于被糖苷酶如N-乙?；被肴樘擒彰杆?EC 3.2.1.49)(Eq A)，或如下式所示(Eq B)被肽酶水解肽鍵，且預(yù)測(cè)其活性降低或減弱。 另一方面，Beau等已經(jīng)合成了作為代謝穩(wěn)定Tn抗原的C-糖苷(GalNAc α1—CH2-Ser)，其中碳原子代替了連接絲氨酸和N-乙酰基半乳糖胺的氧原子，如下式(A)所示。該Tn抗原對(duì)于糖苷酶，如N-乙?；被肴樘擒彰甘欠€(wěn)定的(Beau等，J.C.S.Chem.Commun.，1998，955.)。但是，當(dāng)這些C-糖苷連接到肽上時(shí)，這些化合物可被肽酶水解，其在活體內(nèi)的穩(wěn)定性是不令人滿意的。 并且，Roy等已經(jīng)合成了作為代謝穩(wěn)定的糖類(lèi)抗原仿制品的糖類(lèi)肽(glycopeptoid)，其連接到對(duì)于肽酶水解代謝穩(wěn)定的類(lèi)肽上，如下式所示(Tetrahedron Lett.，1997，38，3487)。但是，其報(bào)導(dǎo)的化合物被認(rèn)為是不穩(wěn)定的，因?yàn)轭A(yù)測(cè)其也被糖苷酶如N-Z?；被肴樘擒彰杆?。
Beau和Roy沒(méi)有報(bào)導(dǎo)連接到載體蛋白質(zhì)上的Tn抗原的藥理學(xué)活性。 如上所述，由前述天然存在的粘蛋白型抗原和載體偶聯(lián)制得的化合物其糖苷鍵被廣泛存在于活體內(nèi)的糖苷酶水解，且其肽鍵被肽酶水解。因此，預(yù)計(jì)會(huì)得到不充分的效果。
3.發(fā)明主題在這樣的情況下，本發(fā)明旨在解決這些問(wèn)題。本發(fā)明的目的是制備非粘蛋白型合成化合物-載體結(jié)合的化合物，其對(duì)于糖苷酶和肽酶兩種酶都是水解穩(wěn)定的。
以及制備非粘蛋白型合成化合物-載體結(jié)合的化合物，其具有特異反應(yīng)性以誘導(dǎo)對(duì)癌和HIV的免疫應(yīng)答，并具有優(yōu)異的主動(dòng)免疫活性。
以及制備非粘蛋白型合成化合物—載體結(jié)合的化合物，其能夠得到對(duì)于癌和HIV選擇性的單克隆抗體。
以及制備含有這種非粘蛋白型合成化合物—載體結(jié)合的化合物作為活性成分的抗腫瘤劑、抗HIV劑和免疫刺激劑。
并且，以有效成本制備N(xiāo)-乙?；肴樘前返姆椒ㄊ潜景l(fā)明的另一目的，所述N-乙?；肴樘前肥欠钦车鞍仔秃铣苫衔铩d體結(jié)合的化合物的原料。4.解決問(wèn)題的方法在這些背景下，我們努力地制備了具有C-糖苷和類(lèi)肽，抗糖苷酶和肽酶的代謝穩(wěn)定的化合物，并如下圖所示，首次合成了非粘蛋白化合物。可以這么說(shuō)，這些化合物是C-糖類(lèi)肽(glycopeptoid)，且是新的化合物。 較之現(xiàn)有疫苗，這些C-糖類(lèi)肽對(duì)于糖苷酶和肽酶更為代謝穩(wěn)定。此外，它們能長(zhǎng)期生效并能在室溫下長(zhǎng)期貯存。當(dāng)這些新的C-糖類(lèi)肽連接到可藥用的載體蛋白質(zhì)上時(shí)，這些化合物較之現(xiàn)有的疫苗在活體內(nèi)對(duì)于糖苷酶和肽酶更為代謝穩(wěn)定，并且也顯示了優(yōu)異的主動(dòng)免疫活性。預(yù)計(jì)這些新的C-糖類(lèi)肽對(duì)于癌和HIV具有有效的被動(dòng)免疫原性。預(yù)期用這些化合物制備的單克隆抗體作為被動(dòng)免疫應(yīng)答對(duì)癌治療具有活性。且這些化合物具有抗腫瘤、抗HIV活性和免疫刺激作用。
作為新化合物用作抗HIV劑和免疫刺激劑的調(diào)查結(jié)果，用如通式(1)所示的新化合物制備的抗體具有優(yōu)異的抗腫瘤、抗HIV活性和免疫刺激作用。發(fā)明詳述通式(1)化合物， 其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物，B代表OH或半乳糖和/或其衍生物；T代表H或胺保護(hù)基；M代表H或OH；X代表氧原子、-NH-或S(O)z(其中z為0、1或2)；Q為H或氧原子；V代表低級(jí)烷基或H；W為0～5的直鏈或支鏈亞烷基；Z為1～5的直鏈或支鏈亞烷基；i、m和t為0或1；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為抗原核心結(jié)構(gòu)。
在T的說(shuō)明中，胺保護(hù)基為烷基、乙?；⑹宥⊙趸驶?、芐氧基羰基和其它。W為0～5的直鏈或支鏈亞烷基。在本發(fā)明中，通式(1)被為非粘蛋白化合物。
化合物(1)具有免疫刺激，且能誘異免疫應(yīng)答的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物可從化合物(1)制備或由與諸如棕櫚酰衍生物的合成化合物連接的2-5簇化合物(1)制備。
通式(2)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m和t具有上述意義；E代表可藥用的載體化合物，1為0或1；F如下所示 其中J為-CH2CH2X-或-N(L)-CH2CO-(其中X具有上述意義；L為H或低級(jí)烷基)；G為H或低級(jí)烷基；p為0～3；y為0或1；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為抗原的核心結(jié)構(gòu)。 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、E和1具有上述意義；r為1～4；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為抗原的核心結(jié)構(gòu)。
通式(4)化合物 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、J、i、m、t、p和r具有上述意義；U代表H或低級(jí)烷基；w為0～50；y為1或50。
在E的說(shuō)明中，可藥用的蛋白質(zhì)是，如白蛋白(ALB)、鑰孔血藍(lán)素(KLH)、BCG或合成化合物，如棕櫚酰衍生物、芳族化合物、脂族化合物、烷基、氨基烷基、肽和類(lèi)肽，其可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物含有通式(1)作為核心結(jié)構(gòu)。這些化合物能夠應(yīng)用于哺乳動(dòng)物，如人類(lèi)，且用作具有免疫刺激活性的抗腫瘤劑和/或抗-HIV劑。這些化合物還用于制備單克隆抗體。這些新化合物能夠延長(zhǎng)有效期，降低劑量，并減少副作用，此外，預(yù)計(jì)本發(fā)明化合物較之現(xiàn)有疫苗對(duì)于癌和HIV具有有效的免疫原性。預(yù)計(jì)由本發(fā)明制備的單克隆抗體具有優(yōu)異的抗腫瘤和抗HIV活性。此外，當(dāng)神經(jīng)氨酸苷酶抑制劑，如Zanamivir或Oseltamivir與含有唾液酸的本發(fā)明化合物一起施用時(shí)，預(yù)計(jì)這些含有唾液酸的化合物在活體內(nèi)更穩(wěn)定。
粘蛋白型(O-Tn、O-STn、O-TF)或非粘蛋白型(C-Tn、C-STn、C-TF)抗原中的N-乙?；拎肴樘遣糠质菑姆浅０嘿F的原料N-乙?；肴樘前泛铣傻摹Ａ硪环矫?，N-乙?；咸前?、N-乙?；肴樘前吩贑-4羥基位的異構(gòu)體較便宜且易于得到。因此希望采用較便宜的N-乙?；咸前纷鳛樵稀?br> 根據(jù)本發(fā)明，N-乙?；肴樘前费苌锟蓮腘-乙?；咸前方?jīng)C-4羥基的轉(zhuǎn)化而合成。
也就是說(shuō)，制備N(xiāo)-乙?；肴樘前费苌锏姆椒?，通式(6)可從通式(5)的N-乙?；咸前费苌镌贑-4位上將OR2基團(tuán)轉(zhuǎn)化為OR1基團(tuán)而制備。 |←-其中R1為H或羥基保護(hù)基，如乙?；?；R2為離去基團(tuán)，如甲苯磺酸基、三氟甲磺酸基或甲磺酸基；G為烯丙基或保護(hù)的羥基。
此處我們描述了制備關(guān)鍵中間體半乳糖衍生物(1a-11)以及通式(1)化合物的方法。
1)合成中間體1a-11(i)路線1-a 如路線1-a所示，中間體1a-11由易于得到的N-乙?；咸前窞樵?，通過(guò)C-4羥基的轉(zhuǎn)化來(lái)合成。
N-乙酰基葡糖胺被三苯甲基醚在C-6位選擇性保護(hù)(B.Helferich等，Ann.，1920，450，219.)，然后在C-3，4位乙?；?，并用甲酸處理提供化合物1a-3(MBessodes，Tetrahedron Lett，1986，27，579.)。
通過(guò)在甲苯中將化合物1a-3與乙酸一起加熱，使化合物1a-3的乙?；w移，得到4-羥基中間體1a-4(D.Chaplin等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，1992，235.)。
僅以一個(gè)步驟將4-羥基衍生物的制備在C-3和6位選擇性地保護(hù)為苯甲?；セ蛐挛祯；?。
4-羥基被轉(zhuǎn)化為三氟甲磺酸酯(triflate)1a-5，且該轉(zhuǎn)化步驟采用乙酸銫進(jìn)行以得到N-乙?；?1，3，4，6-四-O-乙?；?D-半乳糖胺1a-6。
甲磺酰氯或?qū)妆交酋Ｂ瓤捎糜诖嫒谆酋Ｂ?。然后將化合?a-6脫乙?；蒒-乙酰基-D-半乳糖胺。
且在C-4位的差向異構(gòu)作用按Cipolla等人的方法(Tetrahedron Asymmetry，2000，295-303)進(jìn)行。按Horton的方法(Carbohydr.Res.，1996，309，319-330)將烯丙基引入到化合物1a-7中。
化合物1a-7與乙酰氯反應(yīng)，然后用烯丙基三丁基錫和2，2’-偶氮二異丁腈(AIBN)進(jìn)行烯丙基化，得到化合物1a-8。但是，烯丙基化的方法不限于該烯丙基化方法。
在催化量的酸存在下，用乙酸異丙烯酯將2-乙酰胺基團(tuán)保護(hù)N，N-二乙?；玫交衔?a-9(J.Oui.Horton等，Carbohydr.Res，1996，309，319-330)。化合物1a-9與氧化鋨和NaIO4反應(yīng)得到醛化合物1a-10?；衔?a-10用硼氫化鈉進(jìn)行還原得到化合物1a-11。
(ii)路線1-b
中間體1a-11也可以由N-乙?；?D-葡糖胺為原料，如路線1-b所示制備?；衔?a-1在引入烯丙基后將C-4羥基轉(zhuǎn)化(B.A.Roe等，J.Org.Chem，1996，61，6442-6445.)。用乙酰氯處理N-乙?；?D-葡糖胺，然后用烯丙基三丁基錫進(jìn)行C-烯丙基化得到化合物1b-2?；衔?b-2用NaOMe脫乙?；玫交衔?b-3。然后化合物1b-3在C-6位被選擇性保護(hù)為叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)醚，然后在堿性條件下用乙酸酐進(jìn)行乙酰化以得到化合物1b-5。化合物1b-5用酸脫甲硅烷基，并在甲苯中在催化量乙酸存在下進(jìn)行加熱重排，得到化合物1b-7。
按路線1-a所述的類(lèi)似方法，從4-羥基化合物1b-7合成得到化合物1a-11。
2)合成化合物2-5路線2 通過(guò)Mitsunobu反應(yīng)(O.Mitsunobu，Synthesis，1，1981.)將化合物1a-11轉(zhuǎn)化為2-1。然后將化合物2-1的疊氮基還原為伯胺；例如用Pd-C氫化。
化合物2-2用鹵代酯，例如，溴代乙酸丁酯烷基化得到化合物2-3。用乙酸酐或乙酰氯將化合物2-3保護(hù)成乙酰胺?；衔?-5通過(guò)化合物2-4的脫保護(hù)得到。
3)合成化合物2-3路線3 將化合物1a-11中的羥基轉(zhuǎn)化為諸如鹵素的離去基團(tuán)，然后在堿存在下與化合物3-2偶聯(lián)，得到化合物2-3。但是，離去基團(tuán)不限于鹵素。 將化合物3-2中的乙酰氨基保護(hù)成合適的保護(hù)基，例如芐酰胺，然后通過(guò)烯烴的氧化裂解得到醛3-4。與化合物3-5進(jìn)行還原胺化，然后脫保護(hù)得到化合物2-3。
4)合成化合物4-5路線4 化合物1a-11與二苯基二硫化物反應(yīng)得到化合物4-1，然后用間氯過(guò)苯甲酸氧化得到化合物4-2。然后，在胺存在下加熱得到烯烴化合物4-3。按路線1所述，氧化化合物4-3，然后還原得到化合物5-8。
5)合成化合物5-8路線5 通過(guò)Curibe等人的方法(Tetrahedron Lett，1981，22，3591-94)將烯丙基引入到化合物1a-11中。用OsO4將化合物5-2臭氧分解或氧化裂解得到化合物5-3。用胺，例如，芐胺將化合物5-3還原胺化得到化合物5-4?；衔?-4與鹵代酯(例如溴代乙酸丁酯)偶聯(lián)得到化合物5-5。然后化合物5-5的氨基通過(guò)氫化脫保護(hù)，然后乙?；兔摱』玫交衔?-8。
6)合成唾液酸衍生物路線6i)路線6-a 保護(hù)氨基，然后通過(guò)脫乙?；玫交衔?-2。通過(guò)Danishefsky的方法(J.Am.Chem.Soc.，1999，121，2662-2673.)，用唾液酸衍生物糖基化化合物6-2。且該反應(yīng)中的離去基團(tuán)不限于鹵素。得到的化合物6-3可轉(zhuǎn)化為簇形中間體化合物6-4。
(ii)路線6-b 通過(guò)化合物6-5的C-烯丙基化作用得到α-C-糖苷6-6。類(lèi)似于所述路線1-5用化合物6-6合成化合物6-3。且該反應(yīng)也可采用唾液酸轉(zhuǎn)移酶和唾液酸衍生物進(jìn)行(C.Pauison等，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
7)合成半乳糖衍生物路線7(i)路線7-a 化合物7-1通過(guò)化合物6-2的羥基保護(hù)而得到。將化合物7-1用乙酰溴半乳糖糖基化得到化合物7-3。且在該反應(yīng)中離去基團(tuán)不限于鹵素。化合物7-3可轉(zhuǎn)變?yōu)榇匦沃虚g體化合物7-4。
(ii)路線7-b α-C-糖苷7-6通過(guò)化合物7-5的烯丙基化得到。類(lèi)似于所述路線1-5用化合物7-6合成化合物7-3。且該反應(yīng)也可采用唾液酸轉(zhuǎn)移酶和唾液酸衍生物進(jìn)行(C.Pauison等J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
8)合成簇形衍生物路線8 通過(guò)P.Roy的方法(Tetrahedron Lett.，1997，38，13478-13490.)，將化合物8-1a與化合物8-2偶聯(lián)得到化合物8-3?；衔?-1b通過(guò)化合物8-3脫保護(hù)而合成，然后與化合物8-2偶聯(lián)得到化合物8-3b?；衔?-1b，4通過(guò)化合物8-3a，b中酯的脫保護(hù)而得到。
9)偶聯(lián)連接體與半抗原路線9 化合物9-4和9-5分別通過(guò)偶聯(lián)連接體9-2或9-3與化合物9-1而制得(P.Roy等，Tetrahedron Lett.，1997，38，3478-3490)。且該偶聯(lián)可用其它試劑，如N，N-雙環(huán)碳化二亞胺，Danishefsky方法(J.Am.Chem.Soc.，1998，120，12474-12485)或用2-異丁基1-異丁氧基羰基-1，2-二氫喹啉進(jìn)行?；衔?-7通過(guò)羥基的脫保護(hù)而得到。
10)偶聯(lián)載體與半抗原路線10 將化合物9-4氧化成醛10-2，然后按Livingston方法在磷酸鹽緩沖液(pH7.2)中用氰硼氫化鈉與蛋白質(zhì)進(jìn)行還原胺化得到化合物10-9(Glycoconjugate Journal，1998，115，217-221)?；衔?-4也可按Slovin方法(Proc.Nat.Acad.Sci.USA，1999，96，5710.)與蛋白質(zhì)偶聯(lián)。將化合物9-4轉(zhuǎn)化為順丁烯二酰亞胺化合物10-4，然后與蛋白質(zhì)中的硫羥基偶聯(lián)，或?qū)⒒衔?-4轉(zhuǎn)化為硫代乙酸酯化合物9-5。化合物9-5通過(guò)Khono法(J.Clin.Lab.Anal.，1999，10，91.)與順丁烯二酰亞胺化的蛋白質(zhì)偶聯(lián)得到化合物10-12。通過(guò)化合物10-1中的羧基與氨基偶聯(lián)而得到化合物10-7。通過(guò)化合物10-8中的氨基與蛋白質(zhì)中的羧基偶聯(lián)而得到化合物10-13。并通過(guò)Danishefsky法(J.Am.Chem.Soc.，1999，121，2662-2673)將化合物10-1與棕櫚酰衍生物偶聯(lián)得到化合物10-6。
11)合成聚合物衍生物路線11-a 將連接體12-2與羧酸化合物12-1偶聯(lián)得到化合物12-3。將化合物12-3還原為化合物12-4，然后與丙烯酰氯縮合得到化合物12-5。將化合物12-5通過(guò)K.Eklind等人(J.Carbohydrate Chem.，1996，15，1161)或J.Domb等人(J.MedChem.，2000，43，2591.)的方法轉(zhuǎn)化為化合物12-6。聚合方法并不限于該方法。(ii)路線11-b 采用CMP-Neu-5Ac和唾液酸轉(zhuǎn)移酶，從化合物12-6合成得到具有聚合物的唾液酸衍生物13-1(C.Pauison，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。(iii)路線11-c 聚合后，采用半乳糖苷酶和半乳糖衍生物PNG-Gal用化合物12-6合成得到半乳糖衍生物14-1(C.Pauison，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
對(duì)糖苷酶，如N-乙?；被肴樘擒彰傅纳锓€(wěn)定性用烯丙基衍生物(11-1，11-2)通過(guò)Markvon ltzstein法測(cè)試(Org.Leyy.，1999，443-446)。 酶α-N-乙?；被肴樘擒彰?.32單位(1.69單位/ml含0.1％BSA的0.5M檸檬酸鈉緩沖液)溶劑檸檬酸緩沖液(pD＝3)0.6ml溫度35℃步驟將基質(zhì)(2mg)溶解在檸檬酸緩沖液(0.6ml)中，并加入α-N-乙?；被肴樘擒彰?0.32單位)。每隔一定時(shí)間測(cè)定NMR譜。該測(cè)試結(jié)果—基質(zhì)存留時(shí)間如表29所示。
表29 從上述結(jié)果顯然可知，78％的O-苷連烯丙基醚(11-2)24h后水解。正如所預(yù)測(cè)的，化合物11-1，將醚鍵以C-C鍵代替，不受酶的影響，24h后沒(méi)有觀察到降解。
該結(jié)果顯示，較之O-糖苷，C-糖苷的代謝和分解代謝更穩(wěn)定。
本發(fā)明通式(1)所述的化合物可含有作為活性成分的一種或多于兩種藥用化合物。且通式(I)化合物可用于人類(lèi)。通式(I)的單克隆抗體可用于人類(lèi)。本發(fā)明所涉及的化合物可按任何符合其藥物動(dòng)學(xué)性質(zhì)的路線實(shí)施給藥。且化合物本身和/或可將其制成注射劑、粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、錠劑、干糖漿劑、脂質(zhì)體(lipozome)制劑等。本發(fā)明化合物的合適劑量和給藥時(shí)間必須由病人的病情、年齡、體重等決定。
列舉化合物如下，但本發(fā)明不限于這些化合物 (其中T、E、F、Q、t、1和r具有上述意義，q代表0-5；u為0或1)。上式中的A(III)、A(II)、A(III)、B(I)、B(II)、B(III)、C(I)、C(II)和C(III)和表1-28如下所示
R-HN—KLH
表15
表16
表17
表18
表19
表20
表21
表22
表23
表24
表25
酯甲基氯化物)的工藝及單獨(dú)使用上述商購(gòu)絮凝劑B的工藝。結(jié)果示于表3。
表3
從表3中可以了解到實(shí)施例13樣品水溶液具有作為聚合物絮凝劑的基本特性，在這方面優(yōu)于比較例7樣品水溶液和商購(gòu)絮凝劑。發(fā)現(xiàn)另一事實(shí)，即同時(shí)使用實(shí)施例13樣品水溶液和商購(gòu)絮凝劑就得到令人滿意的效果。
結(jié)果，發(fā)現(xiàn)一個(gè)事實(shí)，即以合適數(shù)量把離子基引入具有共軛二烯烴單元的聚苯乙烯及使樹(shù)脂中的共軛二烯烴單元交聯(lián)和/或聚合的聚電解質(zhì)作為處理廢水用絮凝劑具有顯著優(yōu)良特性。借助于固一液分離法進(jìn)行磺化反應(yīng)將結(jié)合

圖1描述說(shuō)明由固一液分離法磺化芳族聚合物的工藝流程。
由泵2連續(xù)從溶劑罐供給溶劑使芳族聚合物磺化，然后把芳族聚合物加入并溶解在溶劑中(見(jiàn)圖1中(a)部)?？梢源孢@一步，加入已溶解在溶劑中的芳族聚合物。
此時(shí)，可以加熱溶液或者可以省去加熱步驟。為了改進(jìn)加工性能，優(yōu)選進(jìn)行加熱。
使芳族聚合物溶解在芳族聚合物中所需時(shí)間周期稍微受溶液溫度和濃度，芳族聚合物的分子量和類(lèi)型的影響。然而，時(shí)間周期一般為10分鐘至2小時(shí)。
當(dāng)使用含氯類(lèi)溶劑時(shí)，芳族聚合物溶液濃度為1wt％至30wt％，優(yōu)選5wt％至20wt％。當(dāng)使用非含氯類(lèi)溶劑時(shí)，該濃度為0.5wt％至20wt％，優(yōu)選1wt％至15wt％。
如果需要，加入路易斯堿(見(jiàn)圖1(b)部分)。
抗體滴度的測(cè)定將96孔微滴板涂布Tn抗原。通過(guò)酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法，分另用馬-抗小鼠IgG抗體和抗-小鼠IgM抗體作為第二抗體來(lái)測(cè)定IgG和IgM抗體滴度。在96孔微滴板中培養(yǎng)人類(lèi)克隆癌細(xì)胞系LS-174T細(xì)胞，并用甲醇固化。如上所述，用酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法測(cè)定IgG和IgM抗體滴度。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)下述各種化合物對(duì)抗體滴度的影響。 接種疫苗后，小鼠血清中的IgG和IgM抗體滴度(抗Tn抗原)分別如表30和31所示。接種疫苗后，IgG和IgM抗體滴度(抗LS-174T細(xì)胞)如表32所示。表30
表31
表32
抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性應(yīng)答(ADCC)用作靶細(xì)胞的LS-174T細(xì)胞和人體外周血單核細(xì)胞用作效應(yīng)細(xì)胞。將靶細(xì)胞植入到96孔微滴板中(1×103細(xì)胞/孔/50μl)，并加入0.5μCi/孔的51CrCl2。收集細(xì)胞上清液并在P計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。以扣除自發(fā)釋放之后的可釋放數(shù)的百分?jǐn)?shù)來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性。結(jié)果如表33所示。表33
純化的載體蛋白質(zhì)鑰孔血藍(lán)素(KLH，CHEMICONINTERNATIONAL INC.)按已經(jīng)公開(kāi)的方法純化。將KLH(500mg)懸浮在50ml磷酸鹽緩沖鹽水(PBS(-))中并以1.200×g離心20min。得到的上清液以43.000×g離心15min。得到的沉淀物懸浮在(PBS(-))中并再以43.000×g離心15min，得到的沉淀用作載體蛋白質(zhì)。
免疫接種每隔兩周，將C-聯(lián)Tn-KLH綴合物或C-聯(lián)sTn-KLH綴合物(1～10μg)與BCG(50μg)一起皮下接種到雌性BALB/c小鼠中，共接種3次。在最后一次接種一周后，麻醉小鼠，并從腹靜脈中收集血液。離心分離抗血清，用酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法測(cè)定抗gp120的IgG或IgM抗體滴度。該滴度定義為產(chǎn)生比正常血清吸收大的吸收的最大稀釋度。結(jié)果如表34所示。
表34
我們的結(jié)果還顯示了具有或甚至沒(méi)有載體蛋白質(zhì)的代謝和分解代謝穩(wěn)定的“C-糖類(lèi)肽”的有效免疫原性。另一方面，Danishefsky小組報(bào)導(dǎo)O-Tn、O-STn、O-TF抗原本身具有較小的有效免疫原性，但連接至載體蛋白質(zhì)諸如KLH上(S.J.Danishefsky等，1998，120，1427-14285)。
我們首先闡述了采用“C-糖類(lèi)肽”作為癌和HIV有希望的免疫治療的概念和效果。
實(shí)施例下列實(shí)施例僅用于制備化合物的目的，并不限制本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容。參考實(shí)施例12-乙?；被?1，3，4-三-O-乙?；?6-O-三苯基甲基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-2)的制備
將在吡啶(363ml)中的N-乙?；咸前?200g，0.9mol)和三苯甲基氯(250g，0.9mol)的懸浮液加熱到85℃。懸浮液溶解后，加入乙酸酐(280ml，2.97mol)，并在室溫下攪拌23h。將反應(yīng)混合物慢慢倒入到冰水-乙酸中。攪拌混合物3h，并收集得到的沉淀，用水洗滌，得到400g(75％)目標(biāo)化合物。MS(m/z)590，531，452，243，165.IR(cm-1)neat3364，1749，1656，1218.1H-NMR(CDCl3)δ3.02(1H，dd，J＝10.8，3.9Hz)，3.27(1H，dd，J＝10.3，2.0Hz)，3.87(1H，ddd，J＝9.3，2.0，2.0Hz)，4.54(1H，ddd，J＝11.2，9.3，3.9Hz)，5.17(1H，dd，J＝11.2，9.8Hz)，5.35(1H，dd，J＝9.8，9.8Hz)，5.53(1H，d，J＝8.8Hz)，6.29((1H，d，J＝3.4Hz)，7.31-7.17(9H，m)，7.41-7.43(6H，m).參考實(shí)施例22-乙?；被?1，3，4-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-3)的制備 將上述參考實(shí)施例1得到的三苯甲基化合物(168g)溶解在乙醚(420ml)中，然后在室溫下加入甲酸(420ml)，攪拌該混合物7h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入到冰冷的水中并用NaHCO3中和，然后除去乙醚，濾出得到的沉淀。濾液用氯仿萃取。干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑，得到46g(46％)目標(biāo)醇。MS(m/z)347，304，228，114.IR(cm-1)neat3280、3076、1749、1665、1221.1H-NMR(CDCl3)δ1.91(3H，s)，2.04(3H，s)，2.16(3H，s)，3.55(1H，dd，J＝12.8，4.4Hz)，3.66(1H，dd，J＝12.8，2.2Hz)，3.78(1H，ddd，J＝10.1，4.3，2.2Hz)，4.43(1H，ddd，J＝10.9，9.0，3.6Hz)，5.14(1H，t，J＝9.7Hz)，5.25(1H，dd，J＝10.8，9.6Hz)，5.76(1H，d，J＝9.0Hz)，6.15(1H，d，J＝3.6Hz).參考實(shí)施例32-乙?；被?1，3，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-4)的制備 向上述參考實(shí)施例2得到的伯醇化合物(81g，0.23mol)的甲苯(1600ml)溶液中加入乙酸(16ml)，在80℃攪拌該混合物15h。完成反應(yīng)后，在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt)純化。得到99g(58％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/z)347、304、262、228、114.IR(cm-1)neat3370、3010、1737、1659、1230.1H-NMR(CDCl3)δ1.93(3H，s)、2.13(3H，s)、2.17(3H，s)、3.70(1H，dd，J＝9.8，3.5Hz)、3.84(2H，d，J＝3.5Hz)、3.90(1H，dd，J＝9.8，9.2Hz)、4.30(1H，ddd，J＝11.1，9.0，3.7Hz)、5.12(1H，dd，J＝11.1，9.2Hz)、5.71(1H，d，J＝9.0Hz)、6.11(1H，d，J＝3.6Hz).參考實(shí)施例42-乙酰基氨基-1，3，6-三-O-乙酰基-4-三氟甲磺?；?2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-5)的制備 將上述參考實(shí)施例3得到的醇化合物(5.0g，14.3ml)溶解在二氯甲烷(50ml)中，并加入吡啶(5ml)。將該溶液冷卻到-40℃，然后向混合物中滴加triflicanhydride(3.1ml，18.7mmol)。攪拌2h后，將反應(yīng)混合物倒入到冰冷的水中并用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用10％HCl洗滌并干燥(Na2SO4)。在減壓下除去溶劑，得到7.83g無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。參考實(shí)施例53-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-6)的制備 在0℃，向2.0g(9.0mmol)的N-乙?；肴樘前分新尤胍阴Ｂ?4.0ml)。在室溫下攪拌混合物14h。反應(yīng)后，將混合物倒入到冰冷的水中并用氯仿萃取。有機(jī)層用飽和的NaHCO3中和，并用水和鹽水洗滌。干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑。得到3.3g無(wú)色油狀N-乙酰基氨基-1-氯-三-O-乙?；?2-脫氧-半乳糖胺。在氬氣氛下，向得到的化合物(3.3g，9.0mmol)的甲苯溶液中加入烯丙基三丁基錫(8.5ml)和2，2’-偶氮二異丁腈(AIBN)(0.25g)。將該反應(yīng)混合物加熱到80℃并攪拌6h。反應(yīng)完成后，將混合物冷卻到室溫，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)純化，得到0.85g(25.4％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)371，330，210，150，101，59.IR(cm-1)KBr3290，3071，1746，1658，1020.1H-NMR(C6D6)δ1.47(3H，s)，1.63(3H，s)，1.66(3H，s)，1.67(3H，s)，1.99(1H，m)，2.19(1H，m)，3.94(1H，m)，4.26(1H，d，d，J＝3，5Hz)，4.37(2H，m)，4.83(1H，m)，5.00(2H，m)，5.17(1H，d，J＝7Hz)，5.43(1H，t，J＝3Hz)，5.68(1H，m)，6.19(1H，S).參考實(shí)施例63-(2-二乙?；被?3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-9)的制備 向上述參考實(shí)施例5得到的化合物(1.5g，4.0mmol)在乙酸異丙烯酯(15ml)的溶液中加入對(duì)甲苯磺酸(20mg)。在55℃攪拌反應(yīng)混合物42h?；旌衔锢鋮s到室溫后，加入三乙胺并攪拌15min。濃縮該混合物。殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶正己烷＝1∶1)純化，得到1.0g(66％)無(wú)色油狀目標(biāo)二乙酸酯化合物。Mss(m/e)413，372，330，270，210，179，150，126，101，59.IR(cm-1)KBr3050，1749，1668，1233，7801H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)，2.03(3H，S)，2.16(3H，s)，2.17(1H，m)，2.39(3H，s)，2.75(1H，m)，4.05(2H，m)，4.15(2H，m)，4.61(1H，d，d，J＝4，8Hz)，5.11(2H，m)，5.50(1H，d，J＝3Hz)，5.75(1H，m)，5.95(1H，dd，J＝3，11Hz).參考實(shí)施例73-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙醛(化合物1a-10)的制備 在氬氣氣氛下，向上述參考實(shí)施例6得到的化合物(0.74g，1.78mmol)的四氫呋喃(10ml)溶液中加入水(10ml)、NaIO4(1.9g，8.91mmol)和4％OsO4溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物4h。反應(yīng)完成后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取并用水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑，得到0.77g(98％)無(wú)色油狀目標(biāo)醛化合物。IR(cm-1)KBr1746，1371，1230，1054，665.1H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)，2.04(3H，s)，2.16(3H，s)，2.37(6H，s)，2.85(1H，m)，3.17(1H，dd，J＝2，8Hz)，4.11(3H，m)，4.75(2H，m)，5.54(1H，m)，5.81(1H，d，d，J＝3.5，11Hz)，9.67(1H，s).參考實(shí)施例83-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙醇(化合物1a-11)的制備 在0℃，向上述參考實(shí)施例7得到的化合物(0.77g，1.85mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入硼氫化鈉(0.1g，2.78mmol)，且攪拌混合物10min。將反應(yīng)混合物倒入到飽和的NH4Cl中并用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶MeOHe＝10∶1)純化，得到0.25g(36％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)357(M+)，316，238，183，141，101，59.IR(cm-1)KBr1743，1680，1398，1236.1H-NMR(CDCl3)δ1.60(1H，m)，1.95(1H，m)，2.00(3H，s)，2.09(3H，m)，2.10(3H，s)，2.12(3H，s)，3.17(1H，dd，J＝3，8Hz)3.76(2H，m)，4.05-4.18(3H，m)，4.42(3H，m)，5.32(1H，t，J＝3Hz)，5.73(1H，d，J＝8Hz).參考實(shí)施例93-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1b-2)的制備 在0℃，向N-乙?；咸前?00g(0.45mol)中加入乙酰氯(200ml)，并攪拌23h。反應(yīng)后，用氯仿萃取混合物并將混合物倒入到冰冷的水中，并攪拌10min。有機(jī)層用飽和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在減壓下除去溶劑。向殘余物中加入乙醚，并收集得到的沉淀，得到117g(71％)無(wú)色固體2-乙?；被?1-氯-3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-半乳糖。向得到的化合物(78g，0.21mol)的四氫呋喃(400ml)溶液中加入烯丙基三丁基錫(198ml，0.64mol)和2，2’-偶氮二異丁腈(AIBN)(3.4g 0.02mol)。在氬氣氛下將該反應(yīng)混合物加熱到80℃并攪拌16h。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶正己烷＝4∶1)純化，得到烯丙基化合物的混合物(1.62g)。向得到的混合物的丙酮(10ml)溶液中加入1％HCl(6m1)，并攪拌2h。在減壓下濃縮混合物，殘余物用氯仿(30ml)萃取。有機(jī)層用飽和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在減壓下除去溶劑，得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶正己烷＝4∶1)純化，得到73g(92％)無(wú)色固體目標(biāo)化合物。MS(m/z)371、330、312、210、126.1R(cm-1)neat3290、3071、1746、1658、1020.1H-NMR(CDCl3)δ1.47(3H，s)、1.63(3H，s)、1.66(3H，s)、1.67(3H，s)、1.99(1H，m)、2.19(1H，m)、3.94(1H，m)、4.26(1H，dd，J＝3，5Hz)、4.37(2H，m)、4.38(1H，m)、5.01(2H，m)、5.17(1H，d，J＝7Hz)、5.43(1H，t，J＝3Hz)、5.68(1H，m)、6.19(1H，s).參考實(shí)施例103-(2-乙?；被?3，4-二-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-4)的制備 在0℃，向上述參考實(shí)施例9得到的乙酸酯化合物(73g，0.2mol)的甲醇(400ml)溶液中加入甲醇鈉(5g，0.95mmol)，并攪拌90min。反應(yīng)完成后，反應(yīng)混合物用IR-120樹(shù)脂中和，過(guò)濾并濃縮，得到54.8g無(wú)色固體三醇化合物。向得到的三醇化合物(54.8g，224mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(224ml)溶液中加入咪唑(30.8g，448mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(40.5g，268mmol)和二甲基氨基吡啶(2.7g，22.4mmol)，在35℃攪拌混合物70h。將反應(yīng)混合物倒入到水中并用氯仿萃取。有機(jī)層用飽和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在減壓下除去溶劑，得到120g甲硅烷基化合物。向得到的甲硅烷基化合物中加入吡啶(108ml，1.34mol)、乙酸酐(84.7ml，0.89mol)和二甲基氨基吡啶(13.7g，0.11mol)。攪拌反應(yīng)混合物1h。反應(yīng)完成后，將混合物倒入到水中并用乙酸乙酯萃取。干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶正己烷＝2∶1)純化，得到33.4g(35％)無(wú)色油狀目標(biāo)醇化合物。MS(m/z)428、386、326、117.1H-NMR(CDCl3)δ0.84(9H，s)、1.92(3H，s)、2.00(3H，s)、2.02(3H，s)、2.03(3H，s)、2.18-2.25(1H，m)、2.33-2.39(1H，m)、3.69(2H，s)、4.04-4.20(3H，m)、4.93-5.11(4H，m)、5.71-5.86(2H，m).參考實(shí)施例113-(2-乙酰基氨基-3，4-二-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-6)的制備 在30℃，攪拌上述參考實(shí)施例10得到的甲硅烷基化合物(10g，23.1mmol)在四氫呋喃(10ml)、乙酸(30ml)和水(10ml)的混合物中的溶液62h。將反應(yīng)混合物倒入到水中并用氯仿萃取，有機(jī)萃取液用飽和的NaHCO3中和并用Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt)純化。得到7.5g(100％)無(wú)色固體目標(biāo)醇化合物。MS(m/z)330、288、268、228、126、101.IR(cm-1)KBr3352、2926、1734、1656、1233.1H-NMR(CDCl3)δ1.96(3H，s)、2.05(3H，s)、2.08(3H，s)、2.28-2.35(1H，m)、2.43-2.49(1H，m)、3.57-3.69(3H，m)、4.26-4.32(2H，m)、4.97(1H，dd，J＝8.3，8.3Hz)、5.10-5.19(3H，m)、5.78-5.86(2H，m).參考實(shí)施例123-(2-乙酰基氨基-3，6-二-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-7)的制備 在80℃，攪拌上述參考實(shí)施例11得到的伯醇化合物(7.5g，23.1mmol)和乙酸(0.75ml)在甲苯(75ml)中的混合物18h?；旌衔镌跍p壓下濃縮，得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt)純化，得到5.24g(70％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/z)330、228、209、168、126、101、83.IR(cm-1)KBr3352、1734、1656、1233.1H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)、2.13(3H，s)、2.14(3H，s)、2.30-2.36(1H，m)、2.40-2.49(1H，m)、3.55-3.59(1H，m)、3.66-3.70(1H，m)、4.18(1H，dd，J＝12.2，2.9Hz)、4.22-4.29(2H，m)、4.51(1H，dd，J＝12.2，4.9Hz)、4.99(1H，dd，J＝8.3，9.7Hz)、5.10-5.16(2H，m)、5.72-5.82(1H，m)、5.90(1H，d，J＝8.3Hz).實(shí)施例12-乙酰基氨基-1，3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖(化合物1a-7)的制備 向乙酸銫(13.7g，71.5mmol)的二甲基亞砜(15ml)溶液中加入上述參考實(shí)施例4得到的trifrate化合物(7.83g)的二甲基亞砜(15ml)溶液。攪拌混合物3h后，將混合物在減壓下濃縮。殘余物倒入到水中并用二氯甲烷萃取，然后用Na2SO4干燥。減壓下除去溶劑，得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt)純化，得到3.4g(61％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/z)389、330、287、241、114.IR(cm-1)neat1746、1656、1218、1128.1H-NMR(CDCl3)δ1.88(3H，s)、1.96(3H，s)、1.97(3H，s)、2.10(3H，s)、3.99(1H，dd，J＝11.2，6.6Hz)、4.04(1H，dd，J＝11.2，6.8Hz)、4.20(1H，ddd，J＝6.8，6.6，0.9Hz)、4.63(1H，ddd，J＝11.6，9.0，3.6Hz)、5.14(1H，dd，J＝11.7，3.2Hz)、5.36(1H，dd，J＝3.1，0.7Hz)、5.82(1H，d，J＝9.0Hz)、6.15(1H，d，J＝3.6Hz).實(shí)施例23-(2-乙?；被?3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-8)的制備 將上述參考實(shí)施例12得到的醇化合物(13.2g，40.1mmol)溶解在二氯甲烷(130ml)和吡啶(13ml)的混合物中。然后在40℃滴加triflic anhydride(8.1ml，48.1mmol)，并攪拌4h。將混合物倒入冰冷的水中并用二氯甲烷萃取，有機(jī)萃取液用10％HCl洗滌，Na2SO4干燥。在減壓下除去溶劑，得到16.1g trifrate化合物(16.1g)。將得到的trifrate化合物(16.1g)的二甲基亞砜(60ml)溶液加入到乙酸銫(20.0g，104mmol)的二甲基亞砜(100ml)溶液中。攪拌混合物3h后，將混合物在減壓下濃縮。殘余物倒入到水中并用二氯甲烷萃取，然后用Na2SO4干燥。減壓下除去溶劑，得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt)純化。得到10.9g(84％)無(wú)色固體目標(biāo)化合物。實(shí)施例32-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙基疊氮化物(化合物2-1a)的制備 向上述參考實(shí)施例8得到的醇化合物(2.33g，6.22mmol)的四氫呋喃(62ml)溶液中加入二苯基磷?；B氮化物(2.68ml，12.4mmol)和三苯基膦(3.25g，12.4mmol)。將溶液冷卻到0℃，向該溶液中慢慢加入偶氮二羧酸二異丙酯(2.44ml，12.4mmol)，攪拌混合物1h。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并用硅膠柱色譜(AcOEt∶苯＝1∶1)純化得到的殘余物，得到1.92g(77％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/e)401、357、313、277、166、101.IR(cm-1)neat3244、3046、2092、1737、1656.1H-NMR(CDCl3)δ1.66-1.72(1H，m)、1.83-1.89(1H，m)、2.00(3H，s)、2.07(3H，s)、2.08(3H，s)、2.12(3H，s)、3.35-3.39(2H，m)、4.02-4.12(2H，m)、4.31-4.35(2H，m)、4.45(1H，ddd，J＝8.3，8.3，4.9Hz)、5.14(1H，dd，.J＝8.8，3.4Hz)、5.33(1H，dd，J＝3.4，3.4Hz)、6.23(1H，d，J＝8.3Hz).實(shí)施例42-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙胺(化合物2-2a)的制備 將上述實(shí)施例3得到的疊氮化物(982mg，2.46mmol)溶解在甲醇(10ml)中，并向該溶液中加入乙酸(0.1ml)和10％Pd-C(98mg)。在H2氣氛下攪拌反應(yīng)混合物88h。過(guò)濾懸浮液并將濾液在減壓下濃縮。得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH∶H2O＝8∶2∶0.2)純化，得到662mg(72％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/e)374、317、256、166、115.IR(cm-1)neat3280、2932、1740、1656.1H-NMR(CD3OD)δ1.75-1.79(1H，m)、1.97-2.01(1H，m)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.05(3H，s)、2.09(3H，s)、3.02-3.04(2H，m)、4.07(1H，dd，J＝11.7，4.4Hz)、4.18-4.19(1H，m)、4.31-4.45(3H，m)、5.12(1H，dd，J＝9.3，3.4Hz)、5.42(1H，dd，J＝3.4，3.4Hz).實(shí)施例52-({2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}氨基)乙酸叔丁酯(化合物2-3a)的制備 向上述實(shí)施例4得到的胺化合物(590mg，1.58mmol)的二氯甲烷(15.8ml)溶液中加入三乙胺(0.33ml，2.73mmol)和溴代乙酸叔丁酯(0.35ml，2.37mmol)。在60℃攪拌混合物2h后，混合物在減壓下濃縮。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝10∶1)純化，得到225mg(27％)無(wú)色油狀目標(biāo)酰胺化合物。MS(m/e)489、414、387、224、164、88.IR(cm-1)neat3328、1740、1656、1233.1H-NMR(CD3OD)δ1.54(9H，s)、1.61-1.65(1H，m)、1.96-1.98(1H，m)、1.96(3H，s)、2.02(3H，s)、2.03(3H，s)、2.10(3H，s)、2.62-2.77(2H，m)、3.28-3.37(2H，m)、4.10(1H，dd，J＝10.7，4.9Hz)、4.16(1H，ddd，J＝8.3，8.3，2.4Hz)、4.22(1H，ddd，J＝8.3，8.3，3.4Hz)、4.24-4.32(1H，m)、4.40(1H，dd，J＝9.8，4.9Hz)、5.12(1H，dd，J＝9.8，2.9Hz)、5.40(1H，dd，J＝2.9，2.9Hz).實(shí)施例62-(N-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰氨基)乙酸叔丁酯(化合物2-4a)的制備 將上述實(shí)施例5得到的胺化合物(100mg，0.205mmol)溶解在吡啶(1ml)中，并向該溶液中加入乙酸酐(0.039ml，0.41mmol)和二甲基氨基吡啶(12mg，0.103mmol)。攪拌溶液1h后，將混合物倒入到水中并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和CuSO4和鹽水洗滌，Na2SO4干燥。在減壓下除去溶劑，然后得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝20∶1)純化，得到100mg(92％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/e)530、487、429、387、222、57.IR(cm-1)neat2968、1740、1650、1230.1H-NMR(CD3OD)δ1.45(9H，s)、1.73-1.77(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.97(3H，s)、2.00(3H，s)、2.03(3H，s)、2.10(3H，s)、2.16(3H，s)、3.40-3.60(2H，m)、3.89-4.30(6H，m)、4.40-4.44(1H，m)、5.07-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m).實(shí)施例72-(N-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰氨基)乙酸(化合物2-5a)的制備 攪拌上述實(shí)施例6得到的酯化合物(90mg，0.17mmol)和三氟乙酸(0.2ml)在二氯甲烷(1ml)中的混合物3h。在減壓下濃縮混合物，得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)純化，得到70mg(87％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(m/e)474、429、314、222、69.IR(cm-1)neat1740、1370、1230.1H-NMR(CD3OD)δ1.76-1.82(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.11(3H，s)、2.14(3H，s)、2.17(3H，s)、3.70-3.52(2H，m)、4.00-4.30(6H，m)、4.43-4.46(1H，m)、5.08-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m)4.43-4.46(1H，m)、5.08-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m).實(shí)施例83-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-苯基硫基乙烷(化合物4-1)的制備 將上述實(shí)施例7得到的化合物(0.25g，0.67mmol)溶解在吡啶(3ml)中，并向該溶液中加入三丁基膦(0.42ml)和二苯基二硫化物(0.32g)。在氬氣氛下、60℃，攪拌混合物3h。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶正己烷＝10∶1)純化，得到0.18g(56％)無(wú)色油狀目標(biāo)苯硫基化合物。Mass(m/e)467(M+).1H-NMR(CDCl3)δ1.63(1H，m)，1.94(3H，s)，1.96(1H，m)，2.03(3H，s)，2.06(3H，s)，2.56(3H，s)，2.91(1H，m)，3.24(1H，m)，3.98(1H，m)，4.51(2H，m)，4.32(1H，m)，4.42(2H，m)，5.07(1H，dd，J＝4，9Hz)，5.29(1H，t，J＝3Hz)，5.55(1H，d J＝7Hz)，7.21-7.38(5H，m).實(shí)施例93-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-苯基亞磺?；?Sulufenyl)乙烷(化合物4-2)的制備 在-78℃，向上述實(shí)施例8得到的化合物(0.14g，0.29mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中慢慢加入3-氯過(guò)苯甲酸的二氯甲烷(1.0ml)溶液。攪拌30min后，向反應(yīng)混合物中加入乙醚(10ml)和10％NaOH(1ml)，攪拌混合物15min。分離有機(jī)層并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到0.15g(99％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)483(M+).1H-NMR(CDCl3)δ1.89(1H，m)，1.91(3H，s)，1.95(3H，s)，2.05(3H，s)，2.09(1H，m)，1.96(1H，m)，2.58(1H，m)，2.80(1H，t，J＝8Hz)，3.01(1H，m)，3.80(1H，m)，3.95-4.10(2H，m)，4.20(1H，m)，4.35(1H，m)，4.56(2H，m)，5.10(1H，dd，J＝4，9Hz)，5.27(1H，t，J＝3Hz)，6.50(1H，d，J＝8Hz)，7.4-7.60(5H，m).實(shí)施例103-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙烯(vinylene)(化合物4-3)的制備 將上述實(shí)施例9得到的化合物(0.14g，0.29mmol)和二異丙基乙胺(0.09ml)混合物甲苯(2ml)混合物回流18h。反應(yīng)混合物冷卻到室溫后，用乙酸乙酯萃取混合物，并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt)純化，得到0.07g(70％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)357(M+)，298，255，165，101(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.96(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06 3H，s)，2.16(3H，s)，4.14(3H，m)，4.62(1H，m)，4.76(1H，m)，5.03(1H，dd，J＝4，10Hz)，5.35(1H，d，J＝2Hz)，5.45(3H，m)，5.95(1H，m).實(shí)施例113-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-甲醛(化合物4-4)的制備 向上述實(shí)施例10得到的化合物(0.07g，0.20mmol)在四氫呋喃(2ml)和水的混合物中加入NaIO4(0.16g，0.78mmol)和4％OsO4溶液(0.01ml)。攪拌混合物4h后，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到0.705g(69.6％)無(wú)色油狀目標(biāo)醛化合物。Mass(m/e)360(M+1)，330，300，199，139，97(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.98(3H，s)，2.06(3H，s)，2.02(3H，S)，2.17(3H，s)，3.92(1H，t，J＝7Hz)，4.20(2H，m)，4.59(1H，d，J＝Hz)，4.80(1H，m)，5.09(1H，dd，J＝3，9Hz)，5.38(1H，d，J＝3Hz)，6.22(1H，d，J＝9Hz)，9.83(1H，S).實(shí)施例123-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-甲醇(化合物4-5)的制備 在0℃下攪拌上述實(shí)施例11得到的化合物(0.77g，1.85mmol)和硼氫化鈉(0.1g，2.78mmol)的甲醇(10ml)混合物10min。將反應(yīng)混合物倒入到飽和的NH4Cl中，用二氯甲烷萃取混合物，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt)純化，得到0.25g(36％)無(wú)色油狀目標(biāo)醇化合物。Mass(m/e)362(M+1)，330，300，199，139，97(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.98(3H，s)，2.06(3H，s)，2.02(3H，s)，2.17(3H，s)，3.92(1H，t，J＝7Hz)，4.20(2H，m)，4.59(1H，d，J＝3Hz)，4.80(1H，m)，5.09(1H，dd，J＝3，9Hz)，5.38(1H，d，J＝3Hz)，6.22(1H，d，J＝9Hz)，9.83(1H，s).實(shí)施例133-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙基乙烯氧基甲酸酯(化合物5-1a)的混合物 將上述實(shí)施例8得到的化合物(0.09g，2.27mmol)溶解在四氫呋喃(5ml)中，在吡啶(1ml)存在下，將氯甲酸烯丙酯(0.026ml，2.5mmol)加入到該溶液中。攪拌溶液30min后，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)純化，得到0.08g(70％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。IR(cm-1)KBr1743，1392，1245，1020.1H-NMR(CDCl3)δ1.58(1H，m)，1.99，(3H，s)，2.07(3H，s)，2.08(3H，s)，2.12(3H，s)，4.12(2H，m)，4.19-4.35(4H，m)，4.38(1H，m)，4.48(1H，m)，4.62(2H，d，J＝6Hz)，5.13(1H，dd，J＝3，8Hz)，5.27-5.39(3H，m)，5.64(1H，d，J＝8Hz).實(shí)施例143-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙氧基丙-2-烯(化合物5-2a)的制備 將上述實(shí)施例13得到的化合物(0.07g，0.15mmol)溶解在苯(2ml)中，在氬氣氛下將Pd(OAc)2(0.7mg)和三苯基膦(4mg)加入到該溶液中。在70℃攪拌混合物2h后，濃縮混合物。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)純化，得到0.045g(72.3％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)415(M+)，358，314，277，181，152，101，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.82(1H，m)，1.91(1H，m)，1.97(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06(3H，s)，2.12(3H，s)，3.50(2H，m)，3.97(2H，d，J＝3Hz)，4.06(2H，m)，4.22(1H，m)，4.28(1H，m)，4.50(1H，m)，5.12(1H，dd，J＝3，5Hz)，5.15(1H，dd，J＝2，7Hz)，5.30(1H，m)，5.76(1H，d，J＝8Hz)，5.90(1H，m).實(shí)施例152-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-[2-(芐基氨基)乙氧基]乙烷(化合物5-3a)的制備 將上述實(shí)施例14得到的化合物(0.69g，1.65mmol)在甲醇(5ml)和二氯甲烷(5ml)中的溶液在-78℃臭氧化。反應(yīng)完成后，向混合物中加入二甲硫醚，且在室溫下攪拌溶液。濃縮混合物并得到0.69g(99％)醛。向得到的醛的二氯甲烷(5ml)溶液中加入芐胺(0.22ml)。攪拌15min后，向混合物中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.5g)，攪拌混合物12h。反應(yīng)混合物用氯仿萃取，且有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，得到0.51g(64.4％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)449(M-NHAc)，383，192，120，91.IR(cm-1)KBr3290，2950，1740，1660，1378，1230，1000.1H-NMR(CDCl3)δ1.87(1H，m)，1.95(3H，s)，1.97(1H，m)，2.05(6H，m)，2.19(3H，s)，2.81(2H，t，J＝5.0Hz)，3.51(2H，m)，3.57(2H，t，J＝5.0Hz)，3.84(1H，s)，4.03(1H，m)，4.08(1H，m)，4.38(1H，m)，4.50(1H，m)，5.13(1H，dd，J＝8.3，2.1Hz)，5.31(1H，t，J＝3Hz)，5.85(1H，d，J＝8.0Hz)，7.32(5H，m).實(shí)施例162-[(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)芐基氨基]乙酸叔丁基酯(化合物5-4a)的制備 將上述實(shí)施例15得到的化合物(0.51g，1.03mmol)和溴代乙酸叔丁酯(0.3ml)在二氯甲烷(5ml)中的混合物在60℃攪拌16h。反應(yīng)完成后，向混合物中加入三乙胺并攪拌15min。用乙酸乙酯萃取混合物，并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(ABW-200，CHCl3∶MeOH＝10∶1)純化，得到0.23g(36.9％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。1H-NMR(CDCl3)δ1.45(9H，s)，1.75(1H，m)，1.84(1H，m)，1.97(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06(3H，s)，2.12(3H，s)，2.86(2H，t，J＝6.0Hz)，3.29(2H，s)，3.40-3.60(4H，m)，3.83(2H，s)，4.02(1H，m)，4.11(1H，m)，4.20(1H，m)，4.32(1H，m)，4.50(1H，m)，5.11(1H，dd，J＝6.0，2.0Hz)，5.31(1H，t，J＝3Hz)，5.70(1H，d，J＝6.0Hz)，7.33(5H，m).實(shí)施例172-[(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)氨基]乙酸叔丁酯(化合物5-5a)的制備 將上述實(shí)施例16得到的化合物(0.21g，0.34mmol)溶解在甲醇(10ml)中，向溶液中加入乙酸(0.5ml)和10％Pd-C(20mg)。在H2氣氛下攪拌反應(yīng)混合物3h，然后經(jīng)硅藻土過(guò)濾懸浮液，濃縮濾液，得到0.18g(99％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)431，373，314，91，78.1H-NMR(CDCl3)δ1.45(9H，s)，1.91(1H，m)，1.95(1H，m)，2.01(3H，s)，2.05(6H，s)，2.05(3H，s)，2.50(1H，s)，2.87(2H，t，J＝6.0Hz)，3.40-3.70(4H，m)，4.10(2H，m)，4.20-4.41(3H，m)，4.50(2H，m)，5.20(1H，dd，J＝6.0，2.0Hz)，5.33(1H，t，J＝3Hz)，6.05(1H，d，J＝6.0Hz).實(shí)施例182-[(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙?；被鵠乙酸叔丁酯(化合物5-6a)的制備 在二異丙基乙胺(0.1ml)存在下，向上述實(shí)施例17得到的化合物(0.18g，0.34mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中慢慢加入乙酰氯(0.36ml)。攪拌溶液2h后，在減壓下濃縮混合物，得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt)純化，得到0.13g(66.5％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)517(M-Bu)，501，431，358，314，199，144，99，72.1H-NMR(CDCl3)δ1.47 9H，s)，1.83(1H，m)，1.93(1H，m)，1.86(3H，s)，1.91-2.20(15H，m)，3.40-3.60(10H，m)，3.96-4.40(9H，m)，4.50(1H，m)，5.18(1H，dd，J＝6.0，3.0)，5.30(1H，t，J＝3.0Hz)，5.75(1H，m).實(shí)施例192-[N-(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙?；被鵠乙酸(化合物5-7a)的制備 向上述實(shí)施例18得到的化合物(0.15g，0.26mmol)中加入三氟乙酸(0.4ml)的二氯甲烷(2ml)溶液，并攪拌3h。濃縮反應(yīng)混合物，得到0.13g(66.8％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。Mass(m/e)517(M-Bu)，501，431，358，314，199，144，99，72.1H-NMR(CDCl3)δ0.89(1H，m)，0.97(1H，m)，2.00(3H，s)，2.03(3H，s)，2.04(3H，s)，2.15(3H，s)，2.19(3H，s)，3.40-3.65(6H，m)，3.95-4.18(3H，m)，4.30(2H，m)，4.46(1H，m)，5.10(1H，d，J＝4.0Hz)，5.18(1H，m).實(shí)施例20O-(甲基5-乙酰基氨基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-(2-乙?；被?3，4-二-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(丙-2-烯基氧基)乙烷(化合物6-2a)的制備 向上述實(shí)施例14得到的醇化合物(173mg，0.66mmol)和MS4A(380g)的四氫呋喃(10ml)混合物中加入二叔丁基吡啶(0.29ml)和AgOTf(337mg)，攪拌混合物30min。冷卻到-78℃后，向混合物中滴加sialyl氯(670mg，0.66mmol)的四氫呋喃(8ml)溶液，攪拌混合物28h。經(jīng)硅藻土過(guò)濾懸浮液并在減壓下除去濾液。得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH＝10∶1)純化，得到81mg(18％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)785(M+).IR(cm-1)3340、2944、1744、1656.1H-NMR(CDCl3)δ1.88(3H，s)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.04(3H，s)、2.13(3H，s)、2.14(3H，s)、2.58(1H，dd，J＝17.4，4.4Hz)、2.97(1H，d，J＝3.9Hz)、3.99-4.10(4H，m)、4.14-4.27(2H，m)、4.34(1H，dd，J＝12.2，2.5Hz)、4.40-4.43(1H，m)、4.84-4.91(1H，m)、5.21-5.39(4H，m)、5.87-5.96(1H，m)、6.74(1H，d，J＝5.9Hz).實(shí)施例21O-(甲基5-乙?；被?3，5-二脫氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-(2-乙?；被?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(丙-2-烯基氧基)乙烷(化合物6-3a)的制備 攪拌上述實(shí)施例20得到的化合物(21mg，0.027mmol)和2％K2CO3(3ml)的甲醇(9ml)混合物20h。用1％HCl中和反應(yīng)混合物，然后在減壓下濃縮。得到的殘余物用硅膠柱色譜(PR-18，H2O∶AcOH＝100∶1)純化，得到13mg(81％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)579(M-H)+IR(cm-1)neat3268、1638、1566.1H-NMR(CD3OD)δ1.60-1.80(2H，m)、2.01-2.05(1H，m)、2.01(3H，s)、2.05(3H，s)、2.85-2.88(1H，m)、3.50-3.60(3H，m)、3.65-3.76(5H，m)、3.81-3.95(5H，m)、4.02(2H，d，J＝5.4Hz)、4.21-4.33(2H，m)、5.18-5.21(1H，m)、5.29-5.34(1H，m)、5.91-6.00(1H，m).實(shí)施例22O-(甲基5-乙?；被?3，5-二脫氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰氨基]-N-(2-{2-[2-(2-丙烯基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)乙酰胺(化合物6-3b)的制備 使用按下述實(shí)施例32得到的化合物，根據(jù)實(shí)施例20-21所述的方法得到目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)877(M+Na)+IR(cm-1)KBr3400，2950，1650，1400，1125.1H-NMR(CD3OD)δ1.62(2H，m)、2.01(3H，s)、2.04(3H，s)、2.20(3H，s)、2.81(1H，dd，J＝2.8Hz)、3.40-3.98(30H，m)、4.18(4H，m)、4.21(4H，m)、5.20(1H，d，J＝12Hz)、5.19(1H，d，J＝12Hz)、6.98(1H，m).實(shí)施例23制備下列化合物 向上述實(shí)施例14得到的化合物(0.12g，0.41mmol)的乙腈(10ml)溶液中加入苯甲醛二甲基縮醛(0.12ml)和對(duì)甲苯磺酸鹽(3.8mg)，在60℃、氬氣氛下攪拌混合物6h。冷卻到室溫后，用乙酸乙酯萃取混合物，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt)純化，得到0.10g(644％)無(wú)色油狀目標(biāo)縮醛化合物。MS(ESI，m/e)377(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.96(2H，m)、1.99(3H，s)、3.43-3.60(3H，m)、3.75(1H，d，J＝3Hz)、4.01(3H，m)、4.11(2H，m)、4.42(2H，m)、5.20(2H，，dd，J＝3.8Hz)、5.60(1H，s)、5.90(1H，m)、6.20(1H，d，J＝3Hz)、7.30-7.56(5H，m)實(shí)施例24制備下列化合物 向上述實(shí)施例23得到的化合物(100mg，0.41mmol)和MS4A(380g)的二氯甲烷(10ml)混合物中加入二叔丁基吡啶(0.12ml)和AgOTf(0.14g)，攪拌混合物30min。冷卻到-78℃后，向混合物中滴加半乳糖衍生物(0.22g，0.41mmol)的二氯甲烷溶液。反應(yīng)完成后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(BW-200，AcOEt)純化，得到0.10g(644％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)707(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.96(2H，m)、1.99(3H，s)、3.43-3.60(3H，m)、3.75(1H，d，J＝3Hz)、4.01(3H，m)、4.11(2H，m)、4.42(2H，m)、5.20(2H，，dd，J＝3，8Hz)、5.60(1H，s)、5.90(1H，m)、6.20(1H，d，J＝3Hz)、7.30-7.56(5H，m)實(shí)施例25制備下列化合物 將上述實(shí)施例24得到的化合物(0.11g 0.16mmol)的80％乙酸溶液加熱到70℃，并攪拌2h。在減壓下除去溶劑，得到的二醇化合物溶解在甲醇(5ml)中。將甲醇鈉(2mg)加入到該溶液中，在室溫下攪拌混合物2h。反應(yīng)混合物用Amberlite IR-120中和并過(guò)濾，濾液在減壓下濃縮，得到0.1g(64.4％)目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)451(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.75(1H，m)、2.00(1H，m)、2.13(3H，s)、3.16(1H，m)、3.55(2H，m)、3.60(1H，m)、3.69-3.82(3H，m)、3.98(2H，m)、4.01-4.10(5H，m)、4.30(1H，m)、4.80(3H，m)、5.11(1H，m)、5.18(2H，m)、5.23(1H，m)、5.40(1H，m)、5.90(1H，m)實(shí)施例262-[N-(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}-2-[N-(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙?；被鵠乙酸叔丁酯(化合物8-3a)的制備 將上述實(shí)施例7和5得到的羧酸(67mg，0.14mmol)和胺(69mg，0.14mmol)的混合物溶解在乙腈(1.4ml)中，向混合物中加入二異丙基乙胺(0.027ml)和O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氫四氟硼酸鹽(TBTU)(50mg)。反應(yīng)混合物攪拌24h后，將混合物倒入到鹽水中并用氯仿萃取，有機(jī)層用Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝10∶1)純化，得到72mg(54％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)944(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.46(9H，s)、1.77-1.83(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.90(3H，s)、1.91(3H，s)、1.94(3H，s)、1.95(3H，s)、2.00(3H，s)、2.01(3H，s)、2.04(3H，s)、2.05(3H，s)、2.11(3H，s)、3.41-3.68(4H，m)、3.90-4.59(14H，m)、5.09-5.16(2H，m)、5.40-5.42(2H，m).實(shí)施例272-[N-(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基)-2-[N-(2-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙?；被鵠乙酸(化合物8-1b)的制備 攪拌上述實(shí)施例26得到的酯化合物(62mg，65.7μmol)和三氟乙酸(0.2ml)的二氯甲烷(1ml)溶液4h。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)純化，得到50mg(86％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)888(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.77-1.82(2H，m)、1.94(3H，s)、1.95(3H，s)、1.97(3H，s)、1.99(3H，s)、2.00(3H，s)、2.02(3H，s)、2.04(3H，s)、2.07(3H，s)、2.11(3H，s)、3.34-3.77(4H，m)、4.06-4.87((14H，m)、5.10-5.15(2H，m)、5.33-5.41(2H，m).實(shí)施例28N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基]-2-(N-{2-乙酰基氨基3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙?；被?-N-({N-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}-N-[(N-氨基甲酰基)甲基]氨基甲?；鶀甲基)乙酸叔丁酯(化合物8-3b)的制備 向上述實(shí)施例27和17得到的羧酸(48mg，54.1μmol)和胺(26.3mg，54.1μmol)的乙腈(1ml)溶液中加入二異丙基乙胺(10μl，59.5μmol)和O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氫四氟硼酸鹽(TBTU)(19mg，59.5μmol)。攪拌38h后，將混合物倒入到鹽水中并用氯仿萃取，有機(jī)層用Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝5∶1)純化，得到40mg(54％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)1382(M+Na)+.1H-NMR(CD3OD)δ1.46(9H，s)、1.73-1.83(3H，m)、1.94-2.18(42H，m)、3.41-3.78(8H，m)、4.03-4.55(21H，m)、5.10-5.15(3H，m)、5.40-5.42(3H，m).實(shí)施例29N-{2-[2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基]-2-(N-{2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙?；被?-N-({N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}N-[(N-氨基甲?；?甲基]氨基甲?；鶀甲基)乙酸(化合物8-1c)的制備 攪拌上述實(shí)施例28得到的酯化合物(40mg，29.5μmol)和三氟乙酸(0.2ml)的二氯甲烷(1ml)溶液16h。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)純化，得到18mg(47％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)1302(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.65-1.75(3H，m)、2.00-2.14(42H，m)、3.31-3.60(6H，m)、4.05-4.50(21H，m)、5.05-5.10(3H，m)、5.30-5.39(3H，m).實(shí)施例30制備下列化合物 使用上述實(shí)施例20得到的化合物，按實(shí)施例26-28所述的方法得到目標(biāo)化合物。1H-NMR(CD3OD)δ1.80-2.25(69H，m)，3.01-3.68(50H，m)，3.90-4.58(6H，m).實(shí)施例312-(2-乙?；被?3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(2-{N-[(N-{2-[2-(2-丙烯基氧基)乙氧基]乙基}氨基甲?；?甲基]乙酰氨基}乙氧基)乙烷(化合物8-4)的制備 向上述實(shí)施例19得到的羧酸(23mg，44.4μmol)和胺(17mg，88.8μmol)的乙腈(1ml)溶液中加入二異丙基乙胺(9μl，48.8μmol)、O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氫四氟硼酸鹽(TBTU)(16mg，48.8μmol)。攪拌混合物4h后，將混合物倒入到鹽水中并用氯仿萃取，有機(jī)層用10％HCl和飽和NaHCO3洗滌。干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝8∶1)純化，得到20mg(65％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)688(M+).IR(cm-1)neat3286、2860、1743、1650.1H-NMR(CDCl3)δ1.80-1.86(1H，m)、2.00(3H，s)、2.06(3H，s)、2.12(3H，s)、2.13(3H，s)、2.18(3H，s)、3.42-3.67(18H，m)、4.40-4.11(6H，m)、4.20-4.30(1H，m)、4.34-4.41(1H，m)、4.42-4.47(1H，m)、5.10-5.14(1H，m)、5.17-5.20(1H，m)、5.25-5.30(1H，m)、5.31-5.32(1H，m)、5.86-5.98(1H，m).實(shí)施例322-[N-(2-{2-[2-乙?；被?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)乙氧基}乙基)乙?；被鵠-N-}2-[2-(2-丙烯基氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺(化合物8-6)的制備 在0℃下攪拌上述實(shí)施例31得到的乙酸酯化合物(19.5mg，29.0μmol)和甲醇鈉(3mg，58.0μmol)的甲醇(1ml)混合物1.5h。用IR-120中和反應(yīng)混合物，過(guò)濾，在減壓下除去濾液，得到15.7mg(99％)無(wú)色油狀目標(biāo)三醇化合物。MS(ESI，m/e)562(M+).IR(cm-1)neat3272、2932、1636.1H-NMR(CD3OD)δ1.68-1.78(1H，m)、1.92-2.00(1H，m)、1.92(3H，s)、2.21(3H，s)、3.64-3.78(24H，m)、3.83-3.88(1H，m)、4.05-4.10(2H，m)、4.21-4.29(2H，m)、5.19-5.22(1H，m)、5.30-5.53(1H，m)、5.91-6.01(1H，m).實(shí)施例33制備下列化合物 向上述實(shí)施例7得到的羧酸(20mg，57.5μmol)和胺(136mg，115μmol)的二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入二異丙基乙胺(42μl，230μmol)、HATU(87mg，230μmol)和HOAt(16mg，115μmol)。攪拌混合物24h后，將混合物倒入到鹽水中并用氯仿萃取，有機(jī)層用10％HCl和飽和NaHCO3洗滌。干燥(Na2SO4)后，在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)純化，得到5mg(6％)無(wú)色油狀目標(biāo)化合物。MS(ESI，m/e)11501H-NMR(CDCl3，ppm)δ1.70-2.12(45H，m)、3.41-3.79(15H，m)、4.09-4.58(26H，m)、5.08-5.36(1H，m)、5.40-5.48(3H，m)、5.90-6.05(1H，m)實(shí)施例34制備下列化合物 在-78℃，將上述實(shí)施例32得到的化合物的甲醇和二氯甲烷溶液臭氧化。反應(yīng)混合物用二甲硫醚處理并濃縮得到醛，向該醛和KLH的磷酸鹽緩沖液的混合物中加入氰硼氫化鈉，并攪拌30h。用PBS(-)滲析純化后，得到目標(biāo)糖蛋白抗原。實(shí)施例35制備下列化合物 將上述實(shí)施例34得到的醛與4-(4-N-順丁烯二酰亞氨基甲基)環(huán)己基1-羰基肼反應(yīng)得到順丁烯二酰亞胺衍生物。向該化合物和KLH的磷酸鹽緩沖液混合物中加入氰硼氫化鈉。用PBS(-)滲析純化后，得到目標(biāo)糖蛋白抗原。實(shí)施例362-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙?；?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(2-{N-[(N-{2-[2-(3-乙?；蚧趸?乙氧基]乙基}氨基甲酰基)甲基]乙?；被鶀乙氧基)乙烷的制備 向上述實(shí)施例3 1得到的烯烴(22mg，0.032mmol)的二噁烷(2ml)溶液中加入硫代乙酸(0.02ml)，在80℃加熱混合物6h。在減壓下除去溶劑。得到的殘余物用硅膠柱色譜(AcOEt∶MeOH＝9∶1)純化，得到0.02g(82％)目標(biāo)化合物。實(shí)施例372-[N-(2-{2-[2-乙?；被?2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙?；被鵠-N-}-2-[2-(2-亞氧硫基丙氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺的制備 向上述實(shí)施例36得到的化合物(20mg，0.029mmol)的甲醇(1ml)溶液中加入甲醇鈉(2mg，0.058mmol)，并攪拌12h。反應(yīng)混合物用IR-120中和，用硅藻土過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。得到8mg(51％)目標(biāo)化合物。實(shí)施例38制備下列化合物
攪拌下將上述實(shí)施例37得到的化合物加入到順丁烯二酰亞胺化的KLH中，并在4℃放置2h。反應(yīng)混合物用磷酸鹽緩沖的鹽水(pH7.4)滲析48h，并用蒸餾水滲析48h，然后byophilization，得到目標(biāo)化合物。
權(quán)利要求
1.通式(1)化合物， 其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物，B代表OH或半乳糖和/或其衍生物；T代表H或胺保護(hù)基；M代表H或OH；X代表氧原子、-NH-或S(O)z(其中z為0、1或2)；Q為H或氧原子；V代表低級(jí)烷基或H；W為0～5的直鏈或支鏈亞烷基；Z為1～5的直鏈或支鏈亞烷基；i、m和t為0或1；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為核心抗原結(jié)構(gòu)。
2.通式(2)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m和t具有上述意義；E代表可藥用的載體化合物，1為0或1；F如下所示 其中J為-CH2CH2X-或-N(L)-CH2CO-(其中X具有上述意義；L為H或低級(jí)烷基)；G為H或低級(jí)烷基；p為0～3；y為0或1；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為抗原的核心結(jié)構(gòu)。
3.通式(3)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、E和1具有上述意義；r為1～4；非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其具有上述化合物作為抗原的核心結(jié)構(gòu)。
4.通式(4)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、p和r具有上述意義；U代表H或低級(jí)烷基；w為0～50；y為1或50。
5.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其中A為唾液酸和/或其衍生物，B為OH。
6.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其中A為OH，B為半乳糖和/或其衍生物。
7.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物，其中A和B均為OH。
8.一種制備吡喃半乳糖的方法，該方法是將上述吡喃葡萄糖衍生物中的OR2轉(zhuǎn)化為OR1，以得到通式(6)化合物， 其中OR1為H或羥基保護(hù)基，如乙?；?；R2為離去基團(tuán)，如甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基或甲磺酸酯基；G為烯丙基或保護(hù)的羥基，
9.采用權(quán)利要求1～7的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物的免疫療法。
10.單克隆抗體，它用權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物制備。
11.抗腫瘤劑，其中含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分。
12用于腫瘤的免疫刺激劑，其中含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分。
13.抗人免疫缺陷病毒(HIV)劑，其中含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分。
14.用于HIV的免疫刺激劑，其中含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分。
15.采用含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分的腫瘤治療方法。
16.采用含有權(quán)利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物作為活性組分的HIV治療方法。
全文摘要
本發(fā)明目的在于制備對(duì)酶穩(wěn)定的非粘蛋白型合成化合物-載體結(jié)合化合物,其具有誘導(dǎo)癌和HIV免疫應(yīng)答的特異反應(yīng)性的能力。本發(fā)明公開(kāi)了通式(1)化合物,其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物,B代表OH或半乳糖和/或其衍生物;T代表H或胺保護(hù)基;M代表H或OH;X代表氧原子、－NH－或S(O)z(其中z為0、1或2);Q為H或氧原子;V代表低級(jí)烷基或H;W為0～5的直鏈或支鏈亞烷基;Z為1～5的直鏈或支鏈亞烷基;i、m和t為0或1;非粘蛋白型合成化合物或其載體結(jié)合的化合物,其具有上述化合物作為核心抗原結(jié)構(gòu)。
文檔編號(hào)A61P31/18GK1341595SQ0113283
公開(kāi)日2002年3月27日 申請(qǐng)日期2001年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月11日
發(fā)明者富山泰, 上山直人, 柳谷昌宏, 大倉(cāng)靖史 申請(qǐng)人:壽制藥株式會(huì)社