專利名稱：血紅蛋白微膠囊血液代用品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種血紅蛋白微膠囊血液代用品及其制備方法。
背景技術(shù)：
如今，臨床血源日益緊缺和血液交叉感染已成為一個(gè)世界性問題。尋求安全有效的血液代用品已成為國際醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域研究開發(fā)的熱點(diǎn)。
血紅蛋白分子是由2個(gè)α亞基及2個(gè)β亞基構(gòu)成的四聚體，直徑5.5nm，分子量64,500dal。血紅蛋白與O2結(jié)合是可逆的，血紅蛋白的氧親合力指血紅蛋白對(duì)氧結(jié)合的牢固程度，用血紅蛋白中氧達(dá)到半飽和程度所需的氧分壓表示，記作P50。血紅蛋白結(jié)合和釋放氧是一個(gè)高度協(xié)同的變構(gòu)過程，主要由別構(gòu)因子調(diào)節(jié)(這種協(xié)同變構(gòu)程度以Hill系數(shù)表示，正常為2.8)。人血紅蛋白的別構(gòu)因子為2，3-DPG，大量存在于紅細(xì)胞內(nèi)，它通過與兩個(gè)β亞基形成鹽橋，從而降低血紅蛋白對(duì)氧的親和力。人血紅蛋白在紅細(xì)胞中的P50為26mmHg。
如果把高純度的去基質(zhì)血紅蛋白(除去紅細(xì)胞膜等雜質(zhì)的血紅蛋白)直接輸入體內(nèi)，游離的血紅蛋白分子迅速離解為兩個(gè)二聚體，被腎濾出，或堵塞腎小球產(chǎn)生腎毒性。另外，游離的血紅蛋白能夠結(jié)合血液中的血管緊張素NO，透過血管內(nèi)壁，造成血壓升高，產(chǎn)生一系列副效應(yīng)。
通過對(duì)血紅蛋白的包埋，形成人造紅細(xì)胞有希望解決上述相關(guān)問題。隨包埋所用膜材種類不同，人造紅細(xì)胞可分為血紅蛋白脂質(zhì)體和血紅蛋白微膠囊。
脂質(zhì)體包埋血紅蛋白(LEH)作為血液代用品提出于六十年代末。一般構(gòu)成脂質(zhì)體膜的成分為天然磷脂和膽固醇。1980年，Djordjevich和Miller制備了粒徑為0.2μm的脂質(zhì)體人造紅細(xì)胞。隨后的許多研究小組也開展了這項(xiàng)研究工作，比如，F(xiàn)armer，Hunt，Rudolph，Tsuchida等等。
目前，國外已有實(shí)驗(yàn)制備出適于動(dòng)物的脂質(zhì)體包埋血紅蛋白(LEH)，且已進(jìn)行批量生產(chǎn)。許多研究小組已開展了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。大量實(shí)驗(yàn)表明，脂質(zhì)體血紅蛋白對(duì)動(dòng)物的腦、心臟、腎以及肺都沒有毒副作用。在動(dòng)物的交換輸血和對(duì)大出血休克治療方面已取得成功，近期極有可能進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)。但血紅蛋白脂質(zhì)體仍存在以下不足貯存期間及輸入體內(nèi)后的穩(wěn)定性較差；磷脂對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)具潛在影響；磷脂易發(fā)生過氧化；包埋血紅蛋白濃度偏低。
可降解聚合物微膠囊包埋血紅蛋白是最新一代血液代用品，具有許多優(yōu)點(diǎn)用于包埋的聚乳酸(PLA)對(duì)人體無毒無害，是經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用作醫(yī)用手術(shù)縫合線和注射用微囊、微球、埋植劑等制劑的材料。它具有良好的血液相容性，在完成輸氧任務(wù)后，可降解為對(duì)人體無害的乳酸、水和CO2排出體外；聚合物膜多孔且機(jī)械強(qiáng)度優(yōu)于脂質(zhì)體磷脂膜；這種膜還可以透過高鐵血紅蛋白(血紅蛋白中的Fe2+被氧化為Fe3+，沒有載氧能力)還原所需要的葡萄糖和其它親水性小分子，反應(yīng)的產(chǎn)物也可由膠囊擴(kuò)散出去，不會(huì)引起廢物在膠囊內(nèi)的濃集而抑制反應(yīng)的正常進(jìn)行?？山到饩酆衔镂⒛z囊包埋血紅蛋白是最具完全意義的人造紅細(xì)胞。
關(guān)于微膠囊包埋血紅蛋白形成人造紅細(xì)胞的最早研究是由TMS Chang(1957)開展的。他用苯甲酸丁酯合成膜代替紅細(xì)胞膜的生物膜。通過調(diào)節(jié)膜的滲透性，可使2，3-DPG包埋于膜內(nèi)不致滲出，從而調(diào)節(jié)血紅蛋白釋氧能力，使這種人造紅細(xì)胞的氧分解曲線與紅細(xì)胞的非常相似，此外，在膜中包埋的紅細(xì)胞酶、碳酸酐酶、過氧化氫酶也都能夠保持活性。但這種人造紅細(xì)胞的最大缺點(diǎn)在于膜材苯甲酸丁酯對(duì)人體有毒副作用，而且制備得血紅蛋白微膠囊粒徑較大，不易通過肺部的毛細(xì)血管，且易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬。
1997年9月23日，加拿大華裔科學(xué)家張明瑞(TMS Chang)教授申請(qǐng)專利US5,670,170，分別用乳液聚合法、聚合物沉聚法、乳化擴(kuò)散法，以聚異丁基丙烯氰酯或聚乳酸或聚乳酸聚乙醇酸共聚物為膜材包埋血紅蛋白制備了粒徑為0.05μm-1μm的血紅蛋白納米膠囊。下面詳細(xì)說明這三種方法①乳液聚合法50-100mg異丁基丙烯氰酯、35-50mg卵磷脂以及5mg維生素E溶于5-10ml乙醇。然后，在攪拌條件下將該溶液緩慢注射入10-25ml含有0.1-0.5％Tween20，血紅蛋白濃度為0.5-10％的水溶液中。包埋有血紅蛋白的高分子膜(聚異丁基丙烯氰酯)隨即形成。透析除乙醇，高速離心洗滌，收集血紅蛋白膠囊。
②聚合物沉聚法150mg的聚乳酸，50mg的磷脂酰膽堿溶入10ml含有表面活性劑的氯仿中，0.5ml去基質(zhì)血紅蛋白溶液在上述混合液中乳化，再加入25ml乙醚充分?jǐn)嚢瑁链丝尚纬砂裱t蛋白的聚合物膜。再往溶液中加入環(huán)己烷使膜固化，離心分離，最后加入含表面活性劑的鹽水4℃下在磷酸鹽緩沖液(pH＝7.4)中透析，高速離心洗滌，收集血紅蛋白膠囊。
③乳化擴(kuò)散法100mgPLA和50mg磷脂溶入5ml乙醇和10ml丙酮混合液中，在攪拌的情況下把該混合液緩慢注射入25ml含5-15％血紅蛋白、0.4％Tween20溶液中。此時(shí)，乙醇和丙酮會(huì)溶入水相最后形成微膠囊，水溶液中的乙醇和丙酮可通過在4℃鹽水或磷酸緩沖鹽液中透析去除，未包埋的血紅蛋白通過離心(30000g)或超濾去除。
方法①和③用大量乙醇作為膜材溶劑，易使變性，失去載氧功能。另外，方法①中，異丁基丙烯氰酯聚合成膜時(shí)，血紅蛋白分子表面的氨基也易于作為引發(fā)劑參與反應(yīng)，由而使血紅蛋白變性。雖然方法③形成的膠囊粒徑較小，0.1μm左右，但它卻不能對(duì)血紅蛋白形成有效包埋(包埋率太低，未見報(bào)道)。
方法②用了大量的有機(jī)溶劑，顯而易見，在該過程中，血紅蛋白易于發(fā)生變性。在該方法中，包埋0.5ml血紅蛋白需用10ml氯仿、25ml乙醚以及100ml環(huán)己烷，前兩種有機(jī)溶劑有毒，而最后一種更是易燃易爆危險(xiǎn)品，顯然不適宜作為血紅蛋白微膠囊制備工藝。
總體來說，TMS Chang的這三種方法存在血紅蛋白易變性，包埋率較低，且制備工藝需用到大量有機(jī)溶劑，不易工藝放大等缺點(diǎn)。
1994年，法國人N.Cedrati以聚乳酸(PLA)為膜材，用復(fù)乳法包埋血紅蛋白，最后制得粒徑為10μm-500μm的血紅蛋白微膠囊。(N.Cedrati(1994)Art.Cells，Blood Subs.and Immob.Biotech.22(3)，867-873)1997年，N.Cedrati又用類似方法，以聚乳酸和乙基纖維素(146000-166000)為膜材制得粒徑小于200μm的血紅蛋白微膠囊。(N.Cedrati(1997)Art.Cells，BloodSubs.and Immob.Biotech.25(5)，457-462)具體制備過程如下，首先將0.5g聚乳酸(PLA)或聚乳酸與乙基纖維素的混合物溶于20g二氯甲烷中，磁力攪拌條件下加入8-30％的血紅蛋白溶液5ml，然后在磁力攪拌(1500rpm)下倒入1.5L聚乙烯醇(PVA)濃度為1％的水溶液中。室溫下攪拌2小時(shí)，最后離心洗滌，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。
N.Cedrati報(bào)道的制備方法相對(duì)簡(jiǎn)單，血紅蛋白活性得以保存。他包埋的是市售人血紅蛋白，由于2，3-DPG的流失，該血紅蛋白包埋前的P50為13.8mmHg，包埋后幾乎保持不變，為13.9mmHg。但他制備的粒徑有些偏大，200μm，而人體最細(xì)毛細(xì)管直徑僅為4μm。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述血紅蛋白微膠囊血液代用品的諸多不足，而提供一種用生物可降解高分子包埋的血紅蛋白微膠囊血液代用品；本發(fā)明的另一目的在于提供該血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法。
本發(fā)明的實(shí)施方案如下本發(fā)明提供的血紅蛋白微膠囊血液代用品，其特征在于，該血紅蛋白微膠囊血液代用品含有一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物和血紅蛋白，所述聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物與血紅蛋白的重量份配比為1∶2-5；所述的聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物分子量為20000-120000，其中單甲氧基聚乙二醇的分子量為1000-10000；所述的血紅蛋白為牛血紅蛋白、羊血紅蛋白或人血紅蛋白。
本發(fā)明提供的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，其步驟如下①將一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物溶于至少一種有機(jī)溶劑中制成有機(jī)溶液O；②將血紅蛋白溶液W1加入步驟①形成的有機(jī)溶液O中，經(jīng)高速均化或超聲分散，制成W1/O初乳液；③將步驟②所得W1/O初乳液倒入復(fù)乳劑W2中，經(jīng)高速均化或超聲分散制成W1/O/W2復(fù)乳液；④將步驟③所得W1/O/W2復(fù)乳液倒入固化液中，經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、常溫常壓攪拌揮發(fā)或錯(cuò)流擴(kuò)散透析除去其中的有機(jī)溶劑；⑤離心洗滌步驟④所得到的除去了有機(jī)溶劑并含有W1/O/W2復(fù)乳液的固化液，即得到本發(fā)明的血紅蛋白微膠囊，冷凍干燥，并進(jìn)行收集；所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯或乙酸丙酯所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯和丙酮中的任意兩種或多種混合的混合有機(jī)溶劑；所述的一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物的分子量為20000-120000，其中單甲氧基聚乙二醇的分子量為1000-10000；所述的血紅蛋白溶液為牛血紅蛋白、羊血紅蛋白或人血紅蛋白；所述的血紅蛋白溶液也可為牛、羊或人紅細(xì)胞破碎離心上清液；述的復(fù)乳劑W2為聚乙烯醇水溶液與食鹽水溶液的混合液，它們?cè)诨旌弦旱暮繛槊?00ml混合液中含聚乙烯醇0.1-6g，含食鹽0.4-3.0g；所述的固化液為濃度為0.4-3.0g/100ml的食鹽水溶液、濃度為0.4-3.0g/100ml的葡萄糖水溶液、濃度為0.4-3.0g/100ml的甘油水溶液或濃度為0.4-3.0g/100ml的乙二醇水溶液。
本發(fā)明制備的血紅蛋白微膠囊中，血紅蛋白含量高，聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物與血紅蛋白的重量份配比高達(dá)1∶2-5，產(chǎn)品的載氧活性很接近天然紅細(xì)胞(P50＝26mmHg，Hill系數(shù)＝2.4)；本發(fā)明提供的血紅蛋白微膠囊血液代用品制備方法，工藝簡(jiǎn)單，容易放大，而且耗時(shí)短。
本發(fā)明中所用PLA/MPEG共聚物分子量為20000-120000，其中MPEG(單甲氧基聚乙二醇)分子量為1000-10000?？墒拱衤蚀蟠筇岣?，達(dá)到90％以上。這是由于這種聚合物中MPEG嵌段親水性較強(qiáng)，在形成W1/O乳液后，共聚物中MPEG鏈段伸展在水滴中，而PLA鏈段只溶于有機(jī)相O，由而在油水界面形成一高分子膜，在下一步的復(fù)乳化時(shí)不易使血紅蛋白滲漏至第二水相W2，由而獲得較高包埋率。
本發(fā)明所用有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酸乙酯、丙酮或它們的混合溶劑，具體種類或體積需視所用膜材而定。
本發(fā)明中所用血紅蛋白溶液(W1)為牛紅細(xì)胞破碎液，具體制備過程如下。取新鮮牛血100ml，4000g離心40min得牛紅細(xì)胞45ml，加入1.6％鹽水50ml洗滌，4000g離心30min，然后加生理鹽水50ml洗滌且4000g離心30min，重復(fù)上述操作兩次，得牛紅細(xì)胞35ml，倒入35ml重蒸餾水中，磁力攪拌20min，最后30000g離心，取其上清液進(jìn)行包埋操作(血紅蛋白濃度約為17％)。以上所有洗滌破碎操作均在無菌4℃下操作。上述操作對(duì)象為牛血，也可同法洗滌破碎羊血、過期人血，獲得羊、人血紅蛋白溶液。
本發(fā)明中第二水相所用穩(wěn)定劑為分子量20000-100000水解度85-95％的聚乙烯醇，或分子量為4000-20000的聚乙二醇。另外，該第二水相中還需加入一定量的食鹽、葡萄糖或甘油等小分子，配成一定濃度的水溶液，以提高第二水相的滲透壓，保證獲得較高的包埋率。
本發(fā)明中復(fù)乳化步驟使用30-80w超聲或均化速率在8000rpm以上的均化乳化法，最后制得血紅蛋白微膠囊粒徑在3μm以下，小于人體最細(xì)毛細(xì)管內(nèi)徑4μm。
本發(fā)明用復(fù)乳法包埋血紅蛋白形成血紅蛋白微膠囊，使得血紅蛋白活性得以保持，擁有天然紅細(xì)胞相似載氧活性(P50為28mmHg，Hill系數(shù)為2.4)。選用PLA/MPEG為膜材，在第二水相加入一定濃度的食鹽，提高了包埋率，且減小了粒徑。
實(shí)施方式實(shí)施例1將50mg3萬(5000)(PLA/MPEG分子量為3萬，其中MPEG分子量為5000，以下同)溶于3ml二氯甲烷中，加入600ul牛血紅蛋白，10000rpm初乳化30s，倒入100mlNaCl0.9％，PVA6％的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml生理鹽水中，常溫常壓下1000rpm磁力攪拌1.5小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶2，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例2將40mg6萬(5000)溶于2ml二氯甲烷與1ml乙酸乙酯的混合溶劑中，加入800ul血紅蛋白，10000rpm初乳化30s，倒入100ml1％甘油，PVA6％的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml生理鹽水中，常溫常壓下1000rpm磁力攪拌1.5小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例3將20mg2萬(1000)與30mg6萬(10000)溶于3ml二氯甲烷中，加入600ul血紅蛋白，12000rpm初乳化30s，倒入100ml2％葡萄糖，PVA4％的復(fù)乳劑中，以10000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml2％葡萄糖水溶液中，常溫常壓下1000rpm磁力攪拌1.5小時(shí)。最后以生理鹽水12000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶2，粒徑小于3μm)。
實(shí)施例4將40mg6萬(5000)溶于2ml二氯甲烷與1ml丙酸乙酯的混合溶劑中，加入800ul羊血紅蛋白，10000rpm初乳化30s，倒入100ml1％甘油，PVA6％的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml生理鹽水中，常溫常壓下1000rpm磁力攪拌1.5小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例5將50mg6萬(5000)和30mg2萬(2000)的混合膜材溶于2ml二氯甲烷和2ml乙酸乙酯中，加入1500ul血紅蛋白水溶液，10000rpm初乳化30s，倒入100mlNaCl0.9％，PVA4％的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml生理鹽水中。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例6將40mg9萬(5000)和20mg3萬(2000)的混合膜材溶于4ml乙酸乙酯中，加入1500ul人血紅蛋白，10000rpm初乳化30s，倒入100ml1％甘油，PVA6％的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化lmin，再倒入200ml1％甘油水溶液中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶4.2，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例7將50mg3萬(2000)溶于3ml丙酸乙酯中，加入1000ul血紅蛋白，冰水浴下80w超聲30s，倒入100mlNaCl0.9％，PVA4％的復(fù)乳劑中，以10000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml，PVA0.4％的生理鹽水中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3.2，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例8將30mg12萬(5000)、20mg3萬(1000)和10mg2萬(2000)溶于3ml二氯甲烷中，加入1200ul血紅蛋白，10000rpm初乳化30s，倒入100mlNaCl0.9％，4％PEG6000的復(fù)乳劑中，以8000rpm復(fù)乳化1min，再倒入200ml0.4％PEG6000的生理鹽水中，常溫常壓下1000rpm磁力攪拌1.5小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3.2，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例9將20mg3萬(2000)溶于3ml乙酸乙酯中，加入600ul羊血紅蛋白，冰水浴下80w超聲30s，倒入100mlNaCl0.9％，PVA4％的復(fù)乳劑中，冰水浴下50w超聲1min，再倒入200mlPVA0.4％的生理鹽水中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶4.8，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例10將20mg12萬(10000)、20mg3萬(1500)和10mg2萬(1000)溶于4ml二氯甲烷中，加入1500ul牛血紅蛋白，冰水浴下80w超聲30s，倒入100mlNaCl0.9％，PVA4％的復(fù)乳劑中，冰水浴下50w超聲1min，再倒入200mlPVA0.4％的生理鹽水中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶4.5，粒徑小于4μm)。
實(shí)施例11將30mg6萬(5000)溶于2ml乙酸乙酯中，加入800ul人血紅蛋白，冰水浴下80w超聲30s，倒入100mlNaCl1.2％，PVA2％的復(fù)乳劑中，冰水浴下50w超聲1min，再倒入200ml0.4％PEG12000的生理鹽水中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水10000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶4.2，粒徑小于3μm)。
實(shí)施例12將60mg6萬(5000)溶于1ml乙酸乙酯和3ml氯仿中，加入1200ul血紅蛋白，冰水浴下80w超聲40s，倒入100mlNaCl2％，PVA2％的復(fù)乳劑中，冰水浴下50w超聲2min，再倒入200ml0.4％PEG10000，NaCl1.5％的水溶液中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1小時(shí)。最后以生理鹽水12000g離心洗滌四次，收集血紅蛋白微膠囊沉淀。(微膠囊中共聚物與血紅蛋白重量配比為1∶3.2，粒徑小于3μm)。
權(quán)利要求
1.一種血紅蛋白微膠囊血液代用品，其特征在于，該血紅蛋白微膠囊血液代用品含有一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物和血紅蛋白，所述聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物與血紅蛋白的重量份配比為1∶2-5。
2.按權(quán)利要求1所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品，其特征在于，所述的聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物分子量為20000-120000，其中單甲氧基聚乙二醇的分子量為1000-10000。
3.按權(quán)利要求1所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品，其特征在于，所述的血紅蛋白為牛血紅蛋白、羊血紅蛋白或人血紅蛋白。
4.一種權(quán)利要求1的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，其步驟如下①將一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物溶于至少一種有機(jī)溶劑中制成有機(jī)溶液O；②將血紅蛋白溶液W1加入步驟①形成的有機(jī)溶液O中，經(jīng)高速均化或超聲分散，制成W1/O初乳液；③將步驟②所得W1/O初乳液倒入復(fù)乳劑W2中，經(jīng)高速均化或超聲分散制成W1/O/W2復(fù)乳液；④將步驟③所得W1/O/W2復(fù)乳液倒入固化液中，經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、常溫常壓攪拌揮發(fā)或錯(cuò)流擴(kuò)散透析除去其中的有機(jī)溶劑；⑤離心洗滌步驟④所得到的除去了有機(jī)溶劑并含有W1/O/W2復(fù)乳液的固化液，即得到本發(fā)明的血紅蛋白微膠囊，冷凍干燥，并進(jìn)行收集。
5.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯或乙酸丙酯。
6.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯和丙酮中的任意兩種或多種混合的混合有機(jī)溶劑。
7.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物的分子量為20000-120000，其中單甲氧基聚乙二醇的分子量為1000-10000。
8.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的血紅蛋白溶液為牛血紅蛋白、羊血紅蛋白或人血紅蛋白。
9.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的復(fù)乳劑W2為聚乙烯醇水溶液與食鹽水溶液的混合液，它們?cè)诨旌弦旱暮繛槊?00ml混合液中含聚乙烯醇0.1-6g，含食鹽0.4-3.0g。
10.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的固化液為濃度為0.4-3.0g/100ml的食鹽水溶液、濃度為0.4-3.0g/100ml的葡萄糖水溶液、濃度為0.4-3.0g/100ml的甘油水溶液或濃度為0.4-3.0g/100ml的乙二醇水溶液。
11.按權(quán)利要求4所述的血紅蛋白微膠囊血液代用品的制備方法，其特征在于，所述的血紅蛋白溶液為牛、羊或人紅細(xì)胞破碎離心上清液。
全文摘要
本發(fā)明涉及血紅蛋白微膠囊血液代用品及制備方法，該微膠囊含有一種或多種聚乳酸單甲氧基聚乙二醇共聚物和血紅蛋白，其血紅蛋白含量高且載氧活性很接近天然紅細(xì)胞；所述方法通過下列步驟進(jìn)行①將共聚物溶于至少一種有機(jī)溶劑中；②將血紅蛋白溶液加入步驟①所得到的有機(jī)溶液中，高速均化或超聲分散形成W
文檔編號(hào)A61P7/08GK1419936SQ01134939
公開日2003年5月28日 申請(qǐng)日期2001年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月16日
發(fā)明者蘇志國, 孟凡濤, 趙東旭 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院過程工程研究所