專利名稱：N－葡萄糖基－n－二硫代羧酸－l－氨基酸鈉鹽在鉑驅(qū)排中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-葡萄糖基-N-二硫代羧酸-L-氨基酸鈉鹽在鉑驅(qū)排中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的提供下式的N-葡萄糖基-N-二硫代羧基-L-氨基酸鈉鹽作為含鉑化療藥物，尤其順鉑的解毒劑的應(yīng)用。 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
該類化合物的制備方法公開在彭師奇、王超、趙明等的中國(guó)專利ZL951063413(驅(qū)鎘藥物及它們的合成方法和應(yīng)用)以及Wang Chao，Peng ShiQi等，synthesis of Novel Chelating Agents and Their effect of CadmiumDecorproation，Chem，Res Toxicol，1999，12(4)，331-334中，在該專利中同時(shí)公開了該類化合物作為驅(qū)鎘藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明針對(duì)順鉑的嚴(yán)重腎毒性以及通式所示的化合物對(duì)重金屬中毒的緩解作用，采用協(xié)同用藥方案，探索通式所示的化合物在腫瘤化療中的應(yīng)用。
本發(fā)明對(duì)腫瘤接種24小時(shí)后的小鼠進(jìn)行順鉑治療，給藥后第二天即可引起血尿素、血肌酐、肌酐清除率、尿鈉排泄，以及尿滲透壓明顯改變，其中尿鈉排泄、肌酐清除率和血尿素氮的改變與對(duì)照組呈非常顯著差異(P＜0.001)。順鉑治療四天后，腎損害最明顯，可觀察到血尿素氮、血肌酐和尿蛋白排泄大幅度上升并達(dá)到峰值；尿鈉排泄、尿滲透壓和肌酐清除率大幅度降低。這些指標(biāo)與對(duì)照組呈非常顯著性差異(P＜0.01至0.001)。順鉑治療6天后，腎損害癥狀減輕，血尿素氮、血肌酐和尿蛋白排泄回落，肌酐清除率稍稍恢復(fù)，尿鈉排泄和尿滲透壓仍保持低水平。順鉑治療8天后腎功能開始恢復(fù)，尿蛋白排泄、尿鈉排泄和肌酐清除率恢復(fù)至正常水平，血尿素氮和肌酐清除率與正常值相比仍有顯著性差異(P＜0.01至0.001)，尿滲透壓仍保持非常低的水平。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在順鉑治療腫瘤接種小鼠的同時(shí)給予本發(fā)明所述的通式化合物，四天后不出現(xiàn)腎損傷。若在順鉑治療腫瘤接種小鼠24小時(shí)后再用本發(fā)明所述的通式化合物處理，四天后可見一定程度的腎損害。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，同時(shí)用順鉑和本發(fā)明所述的通式化合物治療腫瘤接種小鼠，以及用順鉑治療腫瘤接種小鼠24小時(shí)后再用本發(fā)明所述的通式化合物處理，都有明顯的治療作用，本發(fā)明所述通式化合物不影響順鉑的療效。
為了闡明本發(fā)明，下面用實(shí)施例詳細(xì)解釋本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵，應(yīng)當(dāng)指出的是，這些實(shí)施例完全是例證性的，它們對(duì)本發(fā)明沒有任何意義的限制。
(4)往試管底部的乳白色膠狀物中加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細(xì)胞均勻浮起。取100ul該懸浮液加至9.9ml滅菌生理鹽水中，混勻，得100倍稀釋液，混勻，加蓋，放入冰中待用。
(5)取100ul上面的瘤細(xì)胞稀釋液置入Eppendoff小管中，加100ul臺(tái)盼蘭染液，混勻。取少許該混勻液加至計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池內(nèi)，于顯微鏡下計(jì)算4個(gè)大格中被染上藍(lán)色的存活瘤細(xì)胞的個(gè)數(shù)。按下式計(jì)算原液中的存活瘤細(xì)胞數(shù) (6)將原液中的存活瘤細(xì)胞稀釋成2.0×107個(gè)/ml，用于接種。
(7)在無(wú)菌條件下用1ml腹水瘤細(xì)胞接種液，用2％碘酒棉球和75％酒精棉球在昆明種小鼠右側(cè)腹下消毒。并注入0.2ml瘤細(xì)胞液，緩緩抽出針頭。按此方法給每批40只昆明種小鼠接種，隨機(jī)分為4組，放入動(dòng)物室飼養(yǎng)。
二、治療劑配制(1)順鉑注射液的配制臨用前在適宜的容器中將20mg順鉑粉劑與20ml滅菌生理鹽水混合，使充分溶解，用注射器吸取10ml順鉑溶液，棄去。往容器中用注射器加入10ml滅菌生理鹽水，將剩余的溶液稀釋成濃度為0.5mg/ml的順鉑注射液。
(2)通式化合物注射液的配制臨用前準(zhǔn)確稱取其中R為CH2SH的通式化合物的滅菌生理鹽水，使溶解成濃度為8.44mg/ml的注射液。
三、腫瘤的治療腫瘤接種24小時(shí)后，各組小鼠分別進(jìn)行處理。
(1)空白對(duì)照組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔和左側(cè)腹腔各注射滅菌生理鹽水10ml/kg.bw。
(2)順鉑治療組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，左側(cè)腹腔注射滅菌生理鹽水10ml/kg.bw。
(3)順鉑治療同時(shí)通式化合物解毒組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液10ml/kg.bw。
(4)順鉑治療24小時(shí)后通式化合物解毒組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，24小時(shí)后左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液10ml/kg.bw。
各組小鼠正常飼養(yǎng)，15天后各組荷瘤小鼠處死，取瘤稱重，按下式計(jì)算抑瘤率。 獲得的數(shù)據(jù)以(x±sx)表示，組間用樣本均數(shù)比較，t檢驗(yàn)。所述腫瘤治療實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。
結(jié)果見表1。
表1 通式化合物對(duì)順鉑治療作用的影響*
*n均為10；所有組與空白對(duì)照組相比均有非常顯著差異，P＜0.001，順鉑治療并用通式化合物保護(hù)組與單純順鉑治療組相比沒有顯著差異，P＞0.05表1的數(shù)據(jù)說(shuō)明，順鉑可用有效地抑制接種S180腹水瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，與空白對(duì)照組相比，小鼠瘤重顯示非常顯著的差異(P＜0.001)。順鉑治療的同時(shí)或24小時(shí)之后使用通式化合物輔助治療，不會(huì)影響順鉑的療效，小鼠瘤重不顯示顯著差異(P＞0.05)。
用本發(fā)明通式化合物的其它化合物進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)，取得了類似的結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)二 順鉑對(duì)健康大鼠腎功能的損傷(1)順鉑注射液的配制臨用前20mg順鉑數(shù)值劑用20ml滅菌生理鹽水溶解，配制成濃度為1mg/ml的注射液待用。
(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置80只體重250g左右的Wistar大鼠飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分為8組，其中2-1，4-1，6-1和8-1組大鼠腹腔注射順鉑注射液6ml/kg.bw；2-2，4-2，6-2和8-2組大鼠腹腔注射滅菌生理鹽水6ml/kg.bw。2-1和2-2組腹腔注射2天后處死，4-1和4-2組腹腔注射4天后處死，6-1和6-2組腹腔注射6天后處死，8-1和8-2組腹腔注射8天后處死。各組大鼠處死前均取6小時(shí)尿液。
各組大鼠取尿之后腹腔注射2％戊巴比妥納(40ml/kg.bw)麻醉，開胸，用注射器直接刺入右心室內(nèi)取約5ml血裝入試管于4℃冰箱中放置待用。摘取肝和腎，剝除包膜及周圍結(jié)締組織，用去離子水沖洗4次后用濾紙吸干，稱重，置-25℃冰箱待用。
(3)尿樣處置收集到的尿樣用ERMA Clnal折射儀測(cè)定尿滲透壓，用Na+/K+/Cl-分析儀測(cè)定尿鈉，用考馬斯亮蘭(朱忠勇主編，實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)，人民軍醫(yī)出版社，北京，1992，940)測(cè)定尿蛋白，用飽和苦味酸法(湖南醫(yī)學(xué)院第二附屬檢驗(yàn)科編，臨床生經(jīng)檢驗(yàn)，湖南科學(xué)技術(shù)出版社，長(zhǎng)沙，1983，417)。結(jié)果見表2。
表2 順鉑對(duì)健康大鼠尿液生化指標(biāo)的影響
(4)血樣處置收集到的血樣于4℃冰箱放置4小時(shí)后2000轉(zhuǎn)/分離心制備血清。得到的血清用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素氮和血清肌酐，結(jié)果見表3。
表3 順鉑對(duì)健康大鼠血液生化指標(biāo)的影響
實(shí)驗(yàn)三 通式化合物對(duì)鉑的健康大鼠腎操作傷的保護(hù)作用(1)順鉑注射液按試驗(yàn)二的方法配制。
(2)通式化合物注射液的配制臨用前準(zhǔn)確稱取R為CH2SH通式化合物適量，用滅菌生理鹽水配成濃度為16.875mg/ml的溶液。
(3)10％甲醛溶液的配制10ml甲醛用蒸餾水稀釋至100ml，待用。
(4)動(dòng)物處置110只體重250g左右的Wister大鼠飼養(yǎng)1周，適度環(huán)境后隨機(jī)分為11組，其中4-1和6-1組為空白對(duì)照組，左側(cè)腹腔注射來(lái)滅菌生理鹽水6m/Kg.bw；4-2組和6-2組左側(cè)腹腔注射順鉑溶液6ml/Kg.bw；4-3組和6-3組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw后右側(cè)腹腔立即注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-4組和6-4組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw 24小時(shí)后，右側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-5組和6-5組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw72小時(shí)后，右側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-6組左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw。4-1至4-6組4天后處死取樣，6-1至6-5組6天后處死。
(5)樣本采集抽血后立即摘取右側(cè)腎臟，沖洗干凈后用不銹鋼刀片切成1.0×0.2×0.5cm3的小塊，置10％甲醛溶液中固定。
(6)病理切片按文獻(xiàn)(鄒萬(wàn)忠主編，腎臟病理與臨床，湖南科學(xué)技術(shù)出版社，長(zhǎng)沙，1993，4-13)制作。
(7)采集的樣品按實(shí)施例4的操作檢測(cè)，4天后處死取樣的結(jié)果見表4-7。
表4、通式化合物對(duì)單次順鉑治療治療鉑在組織蓄積(ug/g組織)的影響
*與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；**與空白對(duì)照組比較，P＜0.01；***與空白對(duì)照組比較，P＜0.001；#與順鉑治療組比較，P＜0.05表5 順鉑治療4天后通式化合物對(duì)鉑致大鼠腎髓質(zhì)區(qū)組織變化的影響
-代表未觀察到；+代表稍許；++代表中度；+++代表嚴(yán)重；++++代表很嚴(yán)重表6、順鉑治療4天后通式化合物對(duì)鉑致血液中微量元素的影響
*與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；**與空白對(duì)照組比較，P＜0.01；#與順鉑組比較，P＜0.05；##與順鉑組比較，P＜0.01表7 順鉑治療4天后通式化合物對(duì)鉑致肝微量元素(ug/g濕組織)的影響
*與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；**與空白對(duì)照組比較，P＜0.01。
表7 順鉑治療4天通式化合物對(duì)鉑致腎微量元素(ug/g濕組織)的影向
*與空白對(duì)照比較，P＜0.05；**與空白對(duì)照組比較P＜0.01；***與空白對(duì)照組比較P＜0.001。
從本實(shí)驗(yàn)的上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明通式化合物可以減少鉑在組織中的蓄積，促進(jìn)鉑從腎臟排出，降低鉑對(duì)腎組織的毒性作用，從而驗(yàn)證了本發(fā)明通式化合物作為鉑解毒劑的效果。
權(quán)利要求
1.下面通式的化合物作為鉑解毒劑的應(yīng)用 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
2.下面通式的化合物在含鉑化療藥物治療腫瘤時(shí)作為緩解含鉑化療藥物毒性的解毒劑的應(yīng)用 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述含鉑化療藥物是順鉑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述通式的化合物與含鉑化療藥物同時(shí)或在含鉑化療藥物之后應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述腫瘤為頭頸部腫瘤。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述腫瘤是生殖系統(tǒng)腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及下面通式的化合物在含鉑化療藥物治療腫瘤時(shí)作為緩解鉑毒性的解毒劑的應(yīng)用:其中R選自H、CH
文檔編號(hào)A61P39/00GK1343493SQ01141628
公開日2002年4月10日 申請(qǐng)日期2001年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月29日
發(fā)明者彭師奇, 王超, 趙明 申請(qǐng)人:北京艾葉醫(yī)藥技術(shù)有限公司