專利名稱:熱敏的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物,共制備方法以及含有該共軛物的抗癌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種可以全身或局部施用且具有極好的抗癌活性的熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物,其制備方法以及含有該共軛物作為活性組分的抗癌劑。更特別地,本發(fā)明的該化合物為一種在包括體溫的溫度范圍內(nèi)顯示熱敏性的可生物降解的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物。
在本發(fā)明中熱敏聚合物指的是可在低溫下溶于水,但在高于某一臨界溫度時(shí)由于它們的水溶性快速降低而沉淀的那些聚合物。當(dāng)這種相變可逆時(shí),稱相轉(zhuǎn)變溫度為下限臨界溶解溫度(LCST)或濁點(diǎn)。低于LCST時(shí),聚合物-水分子之間的氫鍵作用強(qiáng)于聚合物-聚合物分子之間的疏水性相互作用。然而,當(dāng)溫度增加時(shí),聚合物-水分子之間的氫鍵作用變?nèi)?,而聚合?聚合物分子之間的疏水性相互作用提高,導(dǎo)致聚合物在水溶液中沉淀下來。
這些熱敏聚合物在許多領(lǐng)域中已被廣泛研究,其中所述領(lǐng)域主要包括藥物遞送系統(tǒng)、醫(yī)學(xué)生物材料、薄膜、生物化學(xué)反應(yīng)分離過程、化妝品和光學(xué)系統(tǒng)。然而,大多數(shù)常規(guī)的熱敏有機(jī)聚合物公知為水解不可降解的。近年來,已報(bào)道了一些可生物降解的聚合物(Jeong,B.等人,自然(Nature),388,860(1997);Song,S.-C.等人,大分子(Macromolecules),32,2188(1999);Lee,S.B.等人,大分子,32,7820(1999))。然而直至今日,沒有任何熱敏的抗癌藥物被報(bào)道。順鉑為一種鉑復(fù)合物,其于1979年通過美國(guó)FDA批準(zhǔn)作為抗癌劑,已被用作最有效的化療劑之一,用來治療多種癌癥,例如睪丸癌、卵巢癌、膀胱癌和頭頸癌。然而由于其高毒性(LD50=13mg/Kg,M.J.Cleare,生物化學(xué)(Biochimie)60,835(1978)),使其使用受到限制。盡管第二代抗癌劑卡鉑顯示比順鉑低得多的毒性(LD50=180mg/Kg,M.J.Cleare,生物化學(xué)60,835(1978)),但由于它的抗癌活性低于順鉑,且價(jià)格比順鉑昂貴而未被廣泛使用。因此,迫切需要開發(fā)與順鉑相比具有較高和較廣泛抗癌活性和較低毒性的第三代抗癌劑。
為實(shí)現(xiàn)此目的,本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了一類新的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛抗癌劑,通過向可生物降解的環(huán)三磷腈中引入增溶劑和鉑復(fù)合物,根據(jù)所需目的,可對(duì)其LCST進(jìn)行可變地設(shè)計(jì),并可精確地控制LCST。本發(fā)明的這些新的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛抗癌劑可以利用藥物的熱敏性質(zhì)全身或局部施用。
更特別地,本發(fā)明的目的是提供低聚的熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物,以及它們的制備方法。其中所述熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物具有立體專一的化學(xué)結(jié)構(gòu)和LCST(可為了所需目的而設(shè)計(jì)),是通過六氯環(huán)三磷腈中的氯原子與聚(烷氧基乙二醇)和氨基酸酯親核取代,而后水解被取代的氨基酸酯,接下來與(二胺)鉑鹽反應(yīng)而制備的。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供以熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物作為活性組分的抗癌劑。發(fā)明詳述為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明人進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。首先將六氯環(huán)三磷腈與具有不同分子量的親水性聚(烷氧基乙二醇)反應(yīng),而后與各種疏水性氨基酸酯反應(yīng),得到一類具有熱敏性質(zhì)的新的環(huán)三磷腈衍生物。用堿水解三聚物中被取代的氨基酸酯,而后與(二胺)鉑(II)鹽反應(yīng),得到由氨基酸的羧基和鉑(II)陽離子之間通過共價(jià)鍵形成的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物。我們意外地發(fā)現(xiàn)這些三聚鉑共軛物在寬的溫度范圍內(nèi)顯示出熱敏性。此外,我們發(fā)現(xiàn)由于這些環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合物的LCST易于通過對(duì)不同的聚(烷氧基乙二醇),氨基酸和鉑衍生物的適當(dāng)選擇而改變,因此為了所需的應(yīng)用目的,可以設(shè)計(jì)并控制環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物的LCST。
本發(fā)明之式1所代表的新的立體專一的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物的制備方法詳述如下。
式1 其中,m選自整數(shù)2,7和12;n選自整數(shù)0,1,2和3;x選自整數(shù)0,1和2;且A2為二配位螯合二胺,其選自2,2-二甲基-1,3-丙二胺(dmpda),反式(±)-1,2-二氨基環(huán)己烷(dach)和1,1-二氨基甲基環(huán)己烷(dmach)。
在上述中,選自整數(shù)2,7,或12的m為聚(烷氧基乙二醇)重復(fù)單元,選自0至3的整數(shù)的n表示烷基鏈的長(zhǎng)度,選自0至2的整數(shù)的x表示陰離子氨基酸殘基的長(zhǎng)度。
式2代表的三聚氨基酸酯衍生物是通過首先將六氯環(huán)三磷腈與親水的聚(烷氧基乙二醇)反應(yīng),而后與一系列疏水性氨基酸酯反應(yīng)而制備的。將式2的三聚衍生物與3摩爾式3的堿土金屬氫氧化物或6摩爾的式4的堿金屬氫氧化物在甲醇或乙醇中反應(yīng)3~5小時(shí),分別得到式5的環(huán)三磷腈-堿土金屬鹽或式6的環(huán)三磷腈-堿金屬鹽中間體。將3摩爾式7的(二胺)硫酸鉑或硝酸鉑與此中間體在蒸餾水中于1~5℃下反應(yīng)3~7小時(shí),而后冷凍干燥反應(yīng)混合物。
式2 式3M(OH)2式4M’OH式5 式6
式7A2PtL2在式2-7中,m,n,x和A的定義同式1中的定義;R選自甲基,乙基或芐基;M為堿土金屬離子(例如鋇或鈣);M’為堿金屬離子(例如鋰離子、鈉離子或鉀離子);且L2選自硫酸根離子或硝酸根離子。
式7的(二胺)鉑鹽的水溶液是按照文獻(xiàn)中的方法(R.C.Harrison,無機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào)(Inorg.Chimica Acta)46,L15(1980))通過(二胺)碘化鉑與銀的酸式鹽反應(yīng)制備的。
在攪拌下向上述冷凍干燥產(chǎn)物中加入醇,而后將溶液混合物離心。分離出上清液并通過減壓蒸發(fā)濃縮后,向其中加入過量的醚或己烷以沉淀最終產(chǎn)物。使用醇/醚或己烷的溶劑對(duì)重復(fù)該沉淀過程2~3次,并將最終沉淀真空干燥。為了去除最終產(chǎn)品中的少量其它異構(gòu)體,可根據(jù)三聚衍生物之異構(gòu)體的LCST,向產(chǎn)物的水溶液中加入適當(dāng)?shù)慕档蚅CST的化合物(NaCl,KCl,CF3CH2OH或CH3(CH2)3OH)以誘導(dǎo)較純產(chǎn)物的沉淀。通過離心去除上層水相,得到純化的沉淀。重復(fù)該純化過程2~3次,而后冷凍干燥最終溶液,以得到式1的熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物。
本發(fā)明的制備方法可由以下的反應(yīng)路線1進(jìn)行圖解表示反應(yīng)路線1 以下實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)地說明,但是本發(fā)明不局限于所給出的實(shí)施例。
本發(fā)明化合物中的碳,氫,氮的元素分析是在KIST的專門分析中心使用碳,氫和氮分析儀(Perkin Elmer)進(jìn)行的,并且使用Polyscan 61E ICP進(jìn)行磷和鉑的分析。氫和磷核磁共振波譜是用Varian Gemini-300得到的,且LCST是通過使用Perkin-Elmer Lamda 18 UV/VIS分光光度計(jì)測(cè)定的。
分子式C42H87N12O21P3Pt3元素分析(%)C,27.59;H,4.80;N,9.55;P,5.15;Pt,31.56
理論值C,28.43;H,4.94;N,9.47;P,5.24;Pt,32.98質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ0.9-1.2(b,6H,H2NCH2C(CH3)2CH2NH2),δ2.3-2.7(b,6H,H2NCH2C(CH3)2CH2NH2,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.4(s,3H,-O(CH2CH2O)2CH3),δ3.6-3.9(b,6H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3),δ4.1-4.4(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜 (D2O,ppm)δ32-48下限臨界溶解溫度98.0℃。
分子式C45H87N12O21P3Pt3元素分析(%)C,29.01;H,4.79;N,9.39;P,5.01;Pt,30.95理論值C,29.85;H,4.84;N,9.28;P,5.13;Pt,32.33質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)
δ1.1-1.4(b,4H, δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.5(b,2H, 磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ34-44下限臨界溶解溫度92.0℃。
實(shí)施例3{NP[(OCH2CH2)2OCH3][L-Asp·Pt(dmach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OCH3][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.82g,0.78mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.87g,2.76mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.74g,0.65mmol),和(dmach)PtSO4(0.72g,1.96mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OCH3][L-Asp·Pt(dmach)]}3(0.97g,產(chǎn)率78.2%)。
分子式C51H99N12O21P3Pt3元素分析(%)C,30.22;H,5.15;N,8.80;P,4.82;Pt,29.05理論值C,32.33;H,5.27;N,8.87;P,4.90;Pt,30.89質(zhì)子核磁共振波譜 (D2O,ppm)δ1.3-1.6(b,10H,H2NCH2C(C5H10)CH2NH2),δ2.4-2.8(b,6H,H2NCH2C(C5H10)CH2NH2,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.4(s,3H,-O(CH2CH2O)2CH3),δ3.6-3.8(b,6H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3),δ4.1-4.4(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,
-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜 (D2O,ppm)δ34-44下限臨界溶解溫度74.5℃。
實(shí)施例4{NP[(OCH2CH2)2OCH3][L-Glu·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OCH3][NHCH((CH2)2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.73g,0.69mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.87g,2.76mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.69g,0.61mmol),和(dach)PtSO4(0.63g,1.83mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OCH3][L-Glu.Pt(dach)]}3(1.05g,產(chǎn)率95.5%)。
分子式C48H93N12O21P3Pt3元素分析(%)C,29.01;H,4.79;N,9.39;P,5.01;Pt,30.95理論值C,29.85;H.4.84;N,9.28;P,5.13;Pt,32.33質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ1.1-1.4(b,4H, δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,4H, -NHCH(CH2CH2COO)COO),δ2.3-2.5(b,4H, -NHCH(CH2CH2COO)COO),δ3.4(s,3H,-O(CH2CH2O)2CH3),δ3.6-3.8(b,6H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3),δ4.1-4.4(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,-NHCH(CH2CH2COO)COO),
磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ34-44下限臨界溶解溫度82.0℃.
實(shí)施例5{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Mal·Pt(dach)]}3的制備{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][NHCH(COOC2H5)COOC2H5]}3(0.50g,0.46mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.58g,1.84mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.41g,0.35mmol),和(dach)PtSO4(0.36g,1.56mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Mal·Pt(dach)]}3(0.46g,產(chǎn)率73.0%)。
分子式C45H87N12O21P3Pt3元素分析(%)C,27.91;H,4.70;N,9.17;P,5.05;Pt,30.01理論值C,29.86;H,4.84;N,9.28;P,5.13;Pt,32.33質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ1.1-1.4(b,7H, -O(CH2CH2O)2CH2CH3),δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.5(b,2H, δ3.6-3.8(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH3),δ4.1-4.4(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,-NHCH(COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ36-46下限臨界溶解溫度39.0℃.
實(shí)施例6
{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dmpda)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.80g,0.73mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.69g,2.91mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.64g,0.54mmol),和(dmpda)PtSO4(0.54g,1.63mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dmpda)]}3(0.61g,產(chǎn)率64.0%)。分子式C45H93N12O21P3Pt3元素分析(%)C,31.59;H,5.01;N,9.20;P,5.20;Pt,29.98理論值C,29.76;H,5.16;N,9.25;P,5.11;Pt,32.22質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ0.9-1.1(b,6H,H2NCH2C(CH3)2CH2NH2),δ1.1-1.4(b,3H,-O(CH2CH2O)2CH3),δ2.2-2.6(b,6H,H2NCH2C(CH3)2CH2NH2,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.5-3.9(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH3),δ4.0-4.3(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ34-46下限臨界溶解溫度46.5℃.
實(shí)施例7{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(1.00g,0.91mmol),Ba(OH)2·8H2O(1.15g,3.64mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.97g,0.82mmol),和(dach)PtSO4(0.85g,2.47mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dach)]}3(1.25g,產(chǎn)率82.2%)。
分子式C48H93N12O21P3Pt3元素分析(%)C,33.25;H,4.95;N,9.15;P,4.93;Pt,29.09理論值C,31.12;H,5.06;N,9.07;P,5.02;Pt,31.59質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ1.1-1.4(b,7H, -O(CH2CH2O)2CH2CH3),δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.5(b,2H, δ2.6-2.9(b,2H,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.6-3.9(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH3),δ4.0-4.2(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O)δ36-44下限臨界溶解溫度42.0℃.
實(shí)施例8{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dmach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.65)g,0.59mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.75g,2.37mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.59g,0.50mmol),和(dmach)PtSO4(0.55g,1.50mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OC2H5][L-Asp·Pt(dmach)]}3(0.60g,產(chǎn)率62.5%。
分子式C54H105N12O21P3Pt3元素分析(%)C,30.01;H,5.22;N,8.58;P,4.69;Pt,28.99
理論值C,33.49;H,5.47;N,8.68;P,4.79;Pt,30.22質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)δ1.2-1.3(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2O6CH2CH3),δ1.3-1.6(b,10H,H2NCH2C(C5H10)CH2NH2),δ2.5-2.9(b,6H,H2NCH2C(C5H10)CH2NH2,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.6-3.9(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2O6CH2CH3),δ4.0-4.2(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ36-46下限臨界溶解溫度35.0℃.
實(shí)施例9{NP[(OCH2CH2)2OC3H7][L-Asp·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OC3H7][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.55g,0.50mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.63g,2.00mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.45g,0.37mmol),和(dach)PtSO4(0.38g,1.12mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物{NP[(OCH2CH2)2OC3H7][L-Asp·Pt(dach)]}3(0.36g,產(chǎn)率50.0%)。
分子式C51H99N12O21P3Pt3元素分析(%)C,31.01;H,5.30;N,8.89;P,4.85;Pt,28.91理論值C,33.49;H,5.47;N,8.68;P,4.79;Pt,30.22質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)
δ0.9-1.1(b,3H,-O(CH2CH2O)2CH2CH2CH3),δ1.1-1.5(b,6H, -O(CH2CH2O)2CH2CH2CH3)δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.7(b,4H, -NHCH(CH2COO)COO),δ3.3-3.9(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2CH3),δ4.0-4.3(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2CH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ33-46下限臨界溶解溫度22.0℃.
實(shí)施例10{NP[(OCH2CH2)2OC4H9][L-Asp·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)2OC4H9][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.55g,0.50),Ba(OH)2·8H2O(0.63g,2.00mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.45g,0.37mmol),和(dach)PtSO4(0.38g,1.12mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)2OC4H9][L-Asp·Pt(dach)]}3(0.36g,產(chǎn)率50.0%)。
分子式C54H105N12O21P3Pt3元素分析(%)C,31.01;H,5.30;N,8.89;P,4.85;Pt,28.91理論值C,33.49;H,5.47;N,8.68;P,4.79;Pt,30.22質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)
δ0.9-1.1(b,3H,-O(CH2CH2O)2CH2(CH2)2CH3),δ1.1-1.5(b,8H, -O(CH2CH2O)2CH2(CH2)2CH3)δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.7(b,4H, -NHCH(CH2COO)COO),δ3.3-3.9(b,8H,-OCH2CH2OCH2CH2OCH2(CH2)2CH3),δ4.0-4.3(b,3H,-OCH2CH2OCH2CH2O(CH2)3CH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ33-46下限臨界溶解溫度12.0℃.
實(shí)施例11{NP[(OCH2CH2)7OCH3][L-Asp·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)7OCH3][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.72g,0.42mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.52g,1.66mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.55g,0.28mmol),和(dach)PtSO4(0.28g,0.83mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)7OCH3][L-Asp·Pt(dach)]}3(0.60g,產(chǎn)率85.7%)。
分子式C75H147N12O36P3Pt3元素分析(%)C,33.45;H,5.75;N,6.68;P,3.65;Pt,21.25理論值C,36.03;H,5.93;N,6.72;P,3.72;Pt,23.41質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)
δ1.1-1.5(b,4H, δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.5(b,2H, δ2.6-2.9(b,2H,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.3-3.4(s,3H,-O(CH2CH2O)7CH3),δ3.6-3.9(b,26H,-OCH2CH2O(CH2CH2O)6CH3),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ38-42下限臨界溶解溫度84.0℃.
實(shí)施例12{NP[(OCH2CH2)12OCH3][L-Asp·Pt(dach)]}3的制備使用{NP[(OCH2CH2)12OCH3][NHCH(CH2COOC2H5)COOC2H5]}3(0.67g,0.29mmol),Ba(OH)2·8H2O(0.36g,1.14mmol),環(huán)三磷腈-鋇鹽(0.68g,0.26mmol),和(dach)PtSO4(0.27g,0.79mmol),按照與實(shí)施例1相同的方法得到最終的共軛產(chǎn)物,{NP[(OCH2CH2)12OCH3][L-Asp·Pt(dach)]}3(0.66g,產(chǎn)率81.5%)。
分子式C105H207N12O51P3Pt3元素分析(%)C,38.75;H,6.85;N,5.35;P,2.89;Pt,19.05理論值C,40.68;H,6.73;N,5.42;P,2.99;Pt,18.88質(zhì)子核磁共振波譜(D2O,ppm)
δ1.1-1.5(b,4H, δ1.5-1.7(b,2H, δ2.0-2.2(b,2H, δ2.3-2.5(b,2H, δ2.6-2.9(b,2H,-NHCH(CH2COO)COO),δ3.3-3.4(s,3H,-O(CH2CH2O)12CH3),δ3.6-3.9(b,26H,-OCH2CH2O(CH2CH2O)11CH3),δ4.0-4.2(b,3H,-OCH2CH2O(CH2CH2O)11CH3,-NHCH(CH2COO)COO),磷核磁共振波譜(D2O,ppm)δ34-46下限臨界溶解溫度沒有觀測(cè)到(高于100℃.)對(duì)本發(fā)明之環(huán)三磷腈-Pt共軛物的生物測(cè)定按照本發(fā)明實(shí)施例所制備的復(fù)合物之抗癌活性是如下測(cè)定的。
1.體外活性的測(cè)定(1)樣品實(shí)施例2,實(shí)施例6,實(shí)施例7和實(shí)施例11(2)癌細(xì)胞系小鼠白血病L1210細(xì)胞系(3)實(shí)驗(yàn)方法將L1210細(xì)胞于含10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng),將細(xì)胞濃度控制在1×105個(gè)細(xì)胞/毫升。向細(xì)胞中加入以對(duì)數(shù)劑量系列稀釋的樣品后,將細(xì)胞置于37℃、含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
在24,48和72小時(shí)后用臺(tái)盼藍(lán)染料排斥試驗(yàn)測(cè)定活細(xì)胞數(shù)量。通過與對(duì)照組(其中沒有進(jìn)行化學(xué)處理)的細(xì)胞數(shù)量比較,計(jì)算每種化合物顯示50%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制(ED50)的濃度。結(jié)果見表1。
2.體內(nèi)(i.p.)活性的測(cè)定(1)樣品實(shí)施例2,實(shí)施例6,實(shí)施例7和實(shí)施例11
(2)癌細(xì)胞系小鼠白血病L1210細(xì)胞系(3)實(shí)驗(yàn)方法向BDF1小鼠(6-8周齡,每組8只小鼠)腹膜內(nèi)注射來自DBA/2供體小鼠的白血病L1210細(xì)胞(1×105個(gè)細(xì)胞/0.1毫升)。根據(jù)樣品的溶解性可將其溶于PBS溶液或懸浮在0.5%吐溫80中。將這些樣品溶液通過腹膜內(nèi)注射,每天一次,連續(xù)施用5天,或在癌細(xì)胞植入后第1-5和9天時(shí),以不同的劑量給藥。每天觀測(cè)小鼠,測(cè)定存活率。通過與對(duì)照組(其中沒有進(jìn)行化學(xué)處理)的平均存活時(shí)間比較,計(jì)算存活時(shí)間增加的平均百分率(T/C,%)以測(cè)定抗癌活性。結(jié)果見表1。
表1環(huán)三磷腈-Pt共軛物的生物測(cè)定結(jié)果
本發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明,提供了一類新的環(huán)三磷腈鉑共軛物抗癌劑,其具有立體專一的化學(xué)結(jié)構(gòu)和熱敏性。本發(fā)明的環(huán)三磷腈-共軛物顯示出熱敏性,可根據(jù)所需目的而可變地設(shè)計(jì)并精確地控制其轉(zhuǎn)變溫度。根據(jù)本發(fā)明的熱敏環(huán)三磷腈-鉑共軛物抗癌劑可通過全身或局部施用治療癌癥。
權(quán)利要求
1.由式1所代表的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物式1 其中,m選自整數(shù)2,7和12;n選自整數(shù)0,1,2和3;x選自整數(shù)0,1和2;且A2為二配位螯合二胺,其選自2,2-二甲基-1,3-丙二胺,反式(±)-1,2-二氨基環(huán)己烷和1,1-二氨基甲基環(huán)己烷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物,其具有熱敏性。
3.制備根據(jù)權(quán)利要求1的、由式1代表的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物的方法,其包含以下步驟(1)通過式2的三聚氨基酸酯衍生物與式3的堿土金屬氫氧化物或式4的堿金屬氫氧化物的水解反應(yīng),分別得到式5的環(huán)三磷腈-堿土金屬鹽或式6的環(huán)三磷腈-堿金屬鹽中間體;(2)將式5或6的環(huán)三磷腈金屬鹽中間體與式7的(二胺)鉑(II)鹽以摩爾比1∶3反應(yīng),得到權(quán)利要求1所述的式1的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物,式2 式3M(OH)2式4M’OH式5 式6 式7A2PtL2其中,m選自整數(shù)2,7和12;n選自整數(shù)0,1,2和3;x選自整數(shù)0,1和2;且A2為二配位螯合二胺,其選自2,2-二甲基-1,3-丙二胺,反式(±)-1,2-二氨基環(huán)己烷和1,1-二氨基甲基環(huán)己烷;R選自甲基,乙基和芐基;M為堿土金屬離子;M’為堿金屬離子;且L2為硫酸根或硝酸根陰離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法,其中式3的堿土金屬為鋇或鈣,式4的堿金屬為鋰、鈉或鉀,且式7的鉑鹽為(二胺)鉑(II)硫酸鹽或(二胺)鉑(II)硝酸鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4的方法,其中不可溶副產(chǎn)物硫酸鋇可通過離心或過濾除去,該副產(chǎn)物是由式5的環(huán)三磷腈-鋇鹽與式7的(二胺)鉑(II)硫酸鹽在水溶液中反應(yīng)而產(chǎn)生的。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4的方法,其中副產(chǎn)物硫酸鈉可通過透析除去,該副產(chǎn)物是由式6的環(huán)三磷腈-鈉鹽與式7的(二胺)鉑(II)硫酸鹽在水溶液中反應(yīng)而產(chǎn)生。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或4的方法,其中式5或6的環(huán)三磷腈-金屬鹽中間體是通過加入過量的乙醚或己烷而沉淀的,所述環(huán)三磷腈-金屬鹽中間體是通過將式2的環(huán)三磷腈衍生物與式3的堿土金屬氫氧化物或式4的堿金屬氫氧化物分別于甲醇中水解而產(chǎn)生的。
8.根據(jù)權(quán)利要求3或4的方法,其中在式5或6的環(huán)三磷腈-金屬鹽與式7的(二胺)鉑(II)硫酸鹽在水溶液中于1~5℃反應(yīng)5~10小時(shí)并冷凍干燥后,以甲醇或乙醇作溶劑提取式1的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物。
9.獲得式1之純的最終產(chǎn)物的方法,其為通過向權(quán)利要求8中得到的產(chǎn)物之甲醇或乙醇溶液中加入過量的乙醚或己烷進(jìn)行的沉淀過程。
10.抗癌組合物,其包含權(quán)利要求1或2的環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物作為活性組分。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種由式(1)代表的、新的熱敏環(huán)三磷腈-鉑復(fù)合共軛物,其中m(選自整數(shù)2,7,或12)為聚(烷氧基乙二醇)重復(fù)單元;n(選自0至3的整數(shù))表示烷基鏈的長(zhǎng)度;x表示陰離子氨基酸殘基的長(zhǎng)度,其選自整數(shù)0(氨基丙二酸衍生物)、1(天冬氨酸衍生物)和2(谷氨酸衍生物);A
文檔編號(hào)A61K31/282GK1388808SQ01802468
公開日2003年1月1日 申請(qǐng)日期2001年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月21日
發(fā)明者孫蓮秀, 宋秀昶, 李祥汜 申請(qǐng)人:韓國(guó)科學(xué)技術(shù)研究院