專利名稱：作為細(xì)胞毒劑的多胺類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域中作為細(xì)胞毒劑的具有藥物或農(nóng)業(yè)用途的新型多胺類似物化合物的合成與應(yīng)用。這些化合物作為藥物可單獨使用或與其它的細(xì)胞毒劑或抗增殖劑結(jié)合使用，以治療不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞增殖性疾病，主要是癌癥。
背景技術(shù)：
對腐胺、亞精胺和精胺等多胺類在細(xì)胞形成過程中的極其復(fù)雜的生物活動所進(jìn)行的幾十年的研究顯示，它們在生命活動中扮演了極其重要的角色(Cohen，S.S.，“A Guide to the Polyamines”1998，牛津大學(xué)出版社，紐約)。當(dāng)聚陽離子在生理pH下時，它們與所有的陰離子細(xì)胞成分緊密結(jié)合并強(qiáng)烈調(diào)整它們的生物活動。特殊且強(qiáng)烈的相互作用與DNA和RNA以及與它們相關(guān)的染色質(zhì)蛋白質(zhì)有關(guān)(Tabor，H.等，1，4-丁二胺(腐胺)、亞精胺、和精胺.Ann Rev.Biochem.1976，45，285-306；Matthews，H.R.多胺，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄.BioEssays，1993，15，561-566)。多陽離子多胺類與微管間的特殊反應(yīng)最近也被揭示出來(Wolff，J.Promotion ofMicrotubule Assembly by OligocationsCooperativity between ChargedGroups.Biochemistry，1998，37，10722-10729；Webb，H.K.等，1-(N-Alkylamino)-1l-(N-ethylamino)-4，8-diazaundecanesSimple syntheticpolyamine analogues that differentially alter tubulinpolymerization.J.Med.Chem.1999 42(8)1415-21)。包括乙酰膽堿酯酶在內(nèi)的膜結(jié)合酶類的變構(gòu)調(diào)節(jié)已經(jīng)查明(Kossorotow，A.等，Regulatory effects ofpolyamines on membrane-bound acetylcholinesterase.Biochem.J.1974，144，21-27)。
關(guān)于多胺類參與細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)作用也已有報道。Stefanelli和他的合作者報道稱，使用HL60人白血病細(xì)胞(Stefanelli，C.等，Spermine causes caspaseactivation in 1eukaemia cells.FEBS Letters，1998，437，233-236)或無細(xì)胞模型(Stefanelli，C.等，Spermine triggers the activation of caspase-3 in acell-free model of apoptosis.FEBS Letters，1999，451，95-98)添加精胺導(dǎo)致了細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)。這一過程以線粒體中細(xì)胞色素c的釋放、dATP依賴的pro-caspase-3的加工以及caspase活化的開始為標(biāo)志。caspase的活化不會被抗氧化劑或MDL 72527對多胺氧化酶的抑制所阻止。因而這些研究人員假設(shè)，多胺類在死亡信息轉(zhuǎn)導(dǎo)方面是一種生理作用。
由于精胺在生理pH下有四個正電荷，可與細(xì)胞組分緊密結(jié)合，且盡管這種多胺在細(xì)胞內(nèi)的含量很高，的它在細(xì)胞中的游離濃度卻很低(Marton，L.J.等Polyamines as targets for therapeutic intervention.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.1995，35，55-91)。因此，精胺可能有損傷探知分子的特征，因為在核酸、膜或其它存儲部位損傷之后，它的游離濃度就會迅速升高。這種增加與損傷程度成比例且能向線粒體轉(zhuǎn)導(dǎo)死亡信號。
其它的研究人員探討了多胺類和多胺類似物的中毒機(jī)制。Poulin和他的合作者指出，在過度表達(dá)鳥氨酸脫羧酶(ODC)的L1210細(xì)胞中，多胺運輸?shù)氖Э貙?dǎo)致亞精胺的致命性積累(Poulin，R.等，Induction of apoptosis by excessivepolyamine accumulation in ornithine decarboxylase-overproducing L1210cells.Biochem.J.1995，311，723-727)。它們揭示這種致命的損傷是由于細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)所致。所觀察到的細(xì)胞程序死亡過程不是由多胺氧化造成的。Wallace和其合作者發(fā)現(xiàn)了在BHK-21/C13細(xì)胞中有類似的精胺的非氧化性的致命作用(Brunton，V.G等，Mechanisms of spermine toxicity in baby-hamster kidney(BHK)cells.Biochem.J.1991，280，193-198)。他們同時還指出，MDL 72527可以加劇精胺的毒效。
Packham和Cleveland指出32D.3鼠骨髓細(xì)胞中ODC的被動表達(dá)可在清除IL-3后導(dǎo)致程序性的細(xì)胞死亡(Packham，G.等，Ornithine decarboxylase is amediator of c-myc-included apoptosis.Mol.Cell.Biol.1994，14，5741-5747)。ODC誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡是劑量依賴模式的，ODC的不可逆抑制劑α-二氟甲基鳥氨酸(DFMO)可有效阻止ODC誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。Gerner和他的合作者用ODC過度表達(dá)或多胺運輸調(diào)節(jié)機(jī)制缺乏的細(xì)胞系做了一系列的實驗，結(jié)果證明，多胺運輸系統(tǒng)反饋機(jī)制的缺乏將足以誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡(Xie，X等，Loss of intracellularputrescine pool-size regulation induces apoptosis.Exp.CellRes.1997，230，386-392)。腐胺水平上嚴(yán)格反饋控制調(diào)節(jié)機(jī)制的缺乏可導(dǎo)致細(xì)胞以腐胺劑量依賴的方式經(jīng)歷細(xì)胞程序死亡。
Yanagawa和它的合作者發(fā)現(xiàn)了肝細(xì)胞生長因子(HGF)的抗增殖作用，包括通過提高ODC活性而使細(xì)胞內(nèi)多胺水平提高的細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)(Yanagawa，K等，Theantiproliferative effect of HGF on hepatoma cells involves induction ofapoptosis with increase in intracellular polyamine concentrationlevels.Oncol.Rep.1998，5，185-190)。添加ODC抑制劑DFMO能降低多胺類水平并抑制HGF的程序死亡效應(yīng)。向細(xì)胞添加外源多胺類可使細(xì)胞程序死亡效應(yīng)的抑制重新逆轉(zhuǎn)。上述報道證明，當(dāng)多胺庫濃度的調(diào)節(jié)機(jī)制缺乏時有明顯的細(xì)胞程序死亡效應(yīng)。同時還證明這些效應(yīng)是通過非氧化機(jī)制發(fā)生的。
以N1，N11-二乙基去甲精胺(BE-3，3，3，也叫做DENSPM)為代表的一系列經(jīng)修飾的精胺類似物被證實可強(qiáng)力誘導(dǎo)多胺代謝酶亞精胺/精胺N1-乙酰轉(zhuǎn)移酶(SSAT)，并能部分通過氧化機(jī)制發(fā)揮作用(Casero，R.A.等，Spermidine/spermine N1-acetyltransferase-the turning point in polyamine metabolism.FASEBJ.1993，7，653-661)。Porter和他的合作者研究了對這一系列類似物的細(xì)胞應(yīng)答并比較了它們的細(xì)胞毒性、SSAT的誘導(dǎo)作用和對細(xì)胞周期的影響(Kramer，D.L.等，Effects of novel spermine analogues on cell cycle progression and apoptosisin MALME-3M human melanoma cells.Cancer Res.1997，57，5521-5527)。他們的結(jié)論是，細(xì)胞毒性不可能與這些類似物誘導(dǎo)的SSAT的水平有關(guān)，其中可能還有其它的機(jī)制。當(dāng)類似物的結(jié)構(gòu)有微小變化時，就會使細(xì)胞周期的作用產(chǎn)生很大的變化。
Hu和Pegg用相關(guān)的類似物證實，多胺運輸裝置對多胺類似物吸收的失控可快速誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡(Hu，R-H.等，Rapid induction of apoptosis by deregulateduptake of polyamine analogues.Biochem.J.1997，328，307-316)。
據(jù)查，某些二芐基腐胺類似物對人類和嚙齒動物的癌細(xì)胞系有抗增殖功效。Frydman等描述了1，3-二丙胺、腐胺和尸胺的N1，Nx-二芐基類似物抗三種鱗狀細(xì)胞癌系(SCC-38、SCC-4Y和SCC-13Y)和一種小鼠肝癌細(xì)胞系(H-4-II-E)的細(xì)胞毒性(Aizencang，G.等，Antiproliferative effects of N1，N4-dibenzylputrescine inhuman and rodent tumor cells.Cellular and MolecularBiology，1998，44(4)，615-625和美國專利第5,677,350號)。據(jù)查，當(dāng)腐胺和尸胺的N1，Nx-二芐基類似物的IC50值在100至300μM之間時可以抗這些細(xì)胞系。這些研究者描述了細(xì)胞經(jīng)歷程序性細(xì)胞死亡時的典型特征形成液泡、尺寸減小、臺盼藍(lán)染色變化以及粘附性改變。
Frydman等人也證明，當(dāng)用特別的多胺氧化酶抑制劑共培養(yǎng)時，N1，N4-二(丁-2，3-間二烯基)丁二胺(MDL 72527)可使類似物的活性增加五倍。盡管發(fā)現(xiàn)[1，4-14C]-腐胺的攝取可適度抑制(對N1，N4-二芐基腐胺Kiapp＝6.5+/-1.7μM，對比腐胺Kiapp＝5.2+/-O.6μM)，但即便是超過N1，N4-二芐基腐胺10倍量的腐胺也不會消除它抑制細(xì)胞生長的作用。在藥物治療72小時后測得細(xì)胞內(nèi)多胺類水平有適度減少。與目的在于排除多胺的治療手段所得到的降低相比，多胺水平的這種降低是微不足道的(參見美國專利第6,172,261 B1號)。
用N1，N4-二芐基腐胺進(jìn)行的體內(nèi)抗增殖研究(美國專利第5,677,350號)，結(jié)果顯示這些類似物有很大的前途。這些研究顯示治療腫瘤的重量相對對照腫瘤有明顯的降低。用大鼠肝細(xì)胞瘤H-4-II-E細(xì)胞(10×106細(xì)胞)或人黑色素瘤II-B-Mel-J(5×106細(xì)胞)對四周齡的裸鼠進(jìn)行皮下接種并讓其發(fā)育15至24天。在飲用水中施用O.15％的N1，N4-二芐基腐胺超過10周，結(jié)果顯示動物沒有中毒現(xiàn)象。結(jié)合這些實驗進(jìn)行了一些關(guān)鍵性觀察。如前所述，在用N1，N4-二芐基腐胺治療后沒有出現(xiàn)肝臟或腎臟的損傷。在對照動物中觀察到的肺癌的轉(zhuǎn)移在治療的動物中沒有出現(xiàn)。更重要的是，受治療動物中腫瘤的生長以6或7倍的系數(shù)受到強(qiáng)烈抑制。進(jìn)一步的研究顯示，與對照動物相比，受治療動物腫瘤中的多胺水平?jīng)]有明顯的改變。
最近的報道為在MDL 72527存在時觀察到的細(xì)胞毒性的增加做了解釋(Dai，H.等，The polyamine oxidase inhibitor MDL-72，527 selectively induces apoptosisof transformed hematopoietic cells through lysosometropic effects.CancerResearch，1999，59，4944-4954)。據(jù)以前的報道，這種化合物是相對無毒性的有選擇性的多胺氧化酶(PA0)抑制劑，可在轉(zhuǎn)化的造血細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡。值得注意的是，這種化合物對初級骨髓祖細(xì)胞是無毒的。這種化合物的細(xì)胞特征所顯示的特點與上面提到的的二芐基腐胺類似物極為類似。盡管這種化合物可降低腐胺和亞精胺的水平(它同時也可增加N1-乙酰亞精胺的水平)，預(yù)期這些效應(yīng)是以這種化合物作為PAO抑制劑的作用為基礎(chǔ)的。這種化合物的細(xì)胞毒效應(yīng)不會因和外源腐胺或亞精胺共培養(yǎng)而被阻止。這些效應(yīng)也不會因鳥氨酸脫羧酶(ODC)--限制速度的多胺生物合成酶--的過度表達(dá)或抑制而受到影響。作為有明顯特征的ODC的專一性抑制劑，DFMO會造成MDL 72527吸收的增加并導(dǎo)致更大的細(xì)胞毒性，但是用腐胺/DFMO/MDL 72527處理與單獨用MDL 72527處理的效果是相同的。
總之，這些報道顯示，通過消耗細(xì)胞內(nèi)的腐胺水平，N1，N4-二芐基腐胺和其它相似的類似物都是沒有細(xì)胞毒性的。專一且有效的PAO抑制劑能提高它們的活性這一事實說明，多胺氧化酶介導(dǎo)的機(jī)制是不起作用的。除了關(guān)于這一機(jī)制的有限的知識外，這些化合物還顯示出對一些不同的癌細(xì)胞系的適度的IC50值。他們同時證明了在細(xì)胞程序死亡機(jī)制中各種化合物的特征。N1，N4-二芐基腐胺在小鼠異種移植抗癌模型中大有前途。這種化合物是口服有效的，甚至在40天的治療后也沒有顯示出中毒現(xiàn)象。此外，這些化合物的優(yōu)點在于它們很容易合成，且并不昂貴。
在細(xì)胞程序死亡途徑中，線粒體顯然扮演了重要的角色。目前被普遍接受的是線粒體膜電位的降低是細(xì)胞程序死亡早期的普遍現(xiàn)象(Mignotte，B.等，Mitochondria and apoptosis.Eur.J.Biochem.1998，252，1-15)。線粒體對許多刺激發(fā)生反應(yīng)而向細(xì)胞質(zhì)釋放細(xì)胞色素c從而參與細(xì)胞程序死亡的早期步驟。最近的文獻(xiàn)報道表明，包括一些有臨床前景的藥劑在內(nèi)的許多分子都可通過從線粒體中釋放細(xì)胞色素c而誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡。關(guān)于這種釋放的機(jī)制的一個明確機(jī)制是，線粒體內(nèi)膜膨脹后外膜/基質(zhì)破裂。帶有正電荷的細(xì)胞色素c蛋白質(zhì)從線粒體中釋放與細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)是緊密關(guān)聯(lián)的(Green，D.R.等，Mitochondria andApoptosis.Science，1998，281，1309-1312)。被釋放的細(xì)胞色素c啟動了一個復(fù)雜的途徑，并最終導(dǎo)致了caspase-3的激活。
Tamanoi和他的合作者證實，一組有四種不同結(jié)構(gòu)的法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑誘導(dǎo)了v-K-ras-轉(zhuǎn)化的普通大鼠腎細(xì)胞中細(xì)胞色素c從線粒體中的釋放(Suzuki，N.等，F(xiàn)arnesyltransferase inhibitors induce cytochrome c release and caspase 3activation preferentially in transformed cells.Proc.Natl.Acad，Sci.USA，1998，95，15356-115361)。他們指出，這種釋放可導(dǎo)致caspase-3的激活，且與普通細(xì)胞相比最好是在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中觀察。
Debatin和他的合作者證實樺木酸(一種黑色素瘤特異的細(xì)胞毒性劑)可通過從線粒體向胞質(zhì)溶膠中釋放細(xì)胞色素c和細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)因子(AIF)而啟動CD95(APO-1/Fas)非依賴性的和p53非依賴性的細(xì)胞程序死亡(Fulda，S.等，Activation of mitochondria and release of mitochondrial apoptogenic factorsby betulinic acid.J.Biol.Chem.1998，273，33942-33948)。這種藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡(通過線粒體的直接作用)并不涉及兩種普通的對抗性機(jī)制這一事實說明，樺木酸可能避開某些形式的藥物抵抗力(Fulda，S.等，Betulinic acid triggersCD95(APO-1/Fas)-and p53-independent apoptosis via activation of caspases inneuroectodermal tumors.Cancer Res.1997，57，4956-4963)。
目前正處在轉(zhuǎn)移性乳腺癌和卵巢癌第三階段實驗的另一種輔助性藥劑-lonidamine(1-[(2，4-二氯芐基)甲基]-1H-吲唑-3-羧酸)也可不依賴于p53的狀況而直接作用于線粒體的透性轉(zhuǎn)移孔洞(Ravagnan，L.等，Lonidamine triggersapoptosis via a direct，Bcl-2-inhibited effect on the mitochondrialpermeability transition pore.Oncogene 1999，18，2537-2546)。
早期普遍的細(xì)胞程序死亡事件中，線粒體膜電位的降低可能是通過在線粒體內(nèi)膜上打開孔洞而發(fā)生的。這些孔洞允許分子量小于1500Da的化合物通過膜，其中有一些與細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)是直接關(guān)聯(lián)的。
引用上面這些論文并無意于承認(rèn)上述任何一點是相關(guān)先有技術(shù)。對這些論文日期的敘述或內(nèi)容的表示都是以申請人可獲得的信息為基礎(chǔ)的，并且沒有獲得任何修改這些論文的日期或內(nèi)容的許可。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及多胺類似物的合成與生長抑制性質(zhì)，以及將它們用作藥物、農(nóng)業(yè)或環(huán)境方面有效的藥劑。類似物最好是精胺、亞精胺和腐胺的衍生物，比如二芐基腐胺衍生物。
本發(fā)明的類似物包括精胺、亞精胺和腐胺的衍生物，以及在它們的一個或兩個末端氮原子位點(α和ω)發(fā)生取代的類似物。優(yōu)選的是兩個位點都被取代的類似物。可以由相同或不同的化學(xué)部分取代。另外，類似物可以沿著多胺主鏈，在一個或多個內(nèi)部氮和/或碳位點被低分子量的化學(xué)部分取代。
一個優(yōu)選的實施方案是，可用作抗癌化學(xué)治療的有藥用功效的高細(xì)胞毒性類似物。這種類似物抵抗癌細(xì)胞的IC50在微摩爾或亞微摩爾的范圍內(nèi)。優(yōu)選的有這種活性的化合物包括這里所描述的化合物1313和1327。另一類優(yōu)選的化合物還包括兩個末端氮原子被同樣的取代基取代的精胺類似物。
優(yōu)選的取代基是能提高細(xì)胞毒性或能增強(qiáng)對細(xì)胞生長、增殖、轉(zhuǎn)移或腫瘤的抑制作用的結(jié)構(gòu)。這類另外的取代基包括氮丙啶基團(tuán)和其它各種脂肪族、芳香族、混合的脂肪族-芳香族、或雜環(huán)性多環(huán)結(jié)構(gòu)。
具體的說，本發(fā)明的多胺類似物或衍生物包括一種細(xì)胞毒的并有如下結(jié)構(gòu)式R1-X-R2其中，R1和R2是獨立的H或是選自直鏈或支鏈C1-10的脂肪族、脂環(huán)族、單環(huán)或多環(huán)的芳香族、單環(huán)或多環(huán)的芳基取代脂肪族、脂肪族取代的單環(huán)或多環(huán)芳香族、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)取代的脂肪族和脂肪族取代的芳香族，以及它們的鹵化形式；X是有兩個末端氨基的多胺、-(CH2)3-NH-、或-CH2-Ph-CH2-。
較好的是，多胺是線性的或選自精胺、亞精胺、或腐胺。R1和R2可以是相同或不同的且最好不要同時是未被取代的芐基部分，鹵化部分包括那些被氟、氯、溴、碘取代的物質(zhì)。
此外，X是-(CH2)3-NH-或-CH2-Ph-CH2-，其中“Ph”代表苯基部分，R1和R2如上所述。
雙取代的多胺類似物，較好的是含有報告子基團(tuán)，也可以被用作鑒定或生化探針。
一旦細(xì)胞毒的多胺類似物被確定，通過與其它多胺類似物進(jìn)行結(jié)構(gòu)與功能的比較就可以很容易地將其進(jìn)一步優(yōu)化以提高效用。這種提高的實施例包括(但不限于)提高細(xì)胞毒性、增強(qiáng)代謝穩(wěn)定性、提高專一性、容易操作與施用、不會混入細(xì)胞多胺庫以及降低副作用。
本發(fā)明也涉及含有一種多胺類似物的組合物。較好的是，這種組合物是能有效治療需要抑制細(xì)胞生長或增殖的疾病或癥狀的藥物制劑，其中含有上述組合物以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。這種藥物組合物還可含有另外的細(xì)胞毒的化合物或多胺合成抑制劑，比如DFMO。其它的化合物包括上述藥物組合物和一種或多種額外的對治療所述疾病或癥狀有效的藥劑。
本發(fā)明還提供了一種抑制細(xì)胞生長或增殖的方法，包括使細(xì)胞與本發(fā)明的類似物接觸。這種方法包括向個體施用有效劑量的上述藥物組合物，以對所述個體進(jìn)行與不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞增殖相關(guān)的疾病或癥狀的治療。這種不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞的增殖可能與免疫系統(tǒng)細(xì)胞、vascular neontima細(xì)胞、癌細(xì)胞的增殖有關(guān)，或與不應(yīng)發(fā)生的的血管生成有關(guān)。上述被治療的優(yōu)選疾病包括癌癥或血管成形術(shù)后的損傷。
因此本發(fā)明的類似物(單獨使用或與其它藥劑結(jié)合)可以被用來治療癌癥或有不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞增殖的其它疾病，包括血管生成和損傷后的細(xì)胞生長。最好是通過抑制細(xì)胞生長或通過誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡來進(jìn)行此類治療行為。這樣，它們就可以通過細(xì)胞生長抑制或細(xì)胞毒的機(jī)制進(jìn)行。本發(fā)明的類似物(單獨使用或與其它藥劑結(jié)合)也可以被用來治療高血壓、骨質(zhì)疏松、阿爾茨海默病、局部缺血、自身免疫病、精神病、抑郁癥、中風(fēng)、心血管疾病、過敏癥、哮喘、移植過程中的組織排異反應(yīng)、微生物或寄生蟲以及包括真菌類在內(nèi)的植物性病原體的傳染。本發(fā)明的類似物也可作為有效的抗腹瀉劑、抗蠕動劑、抗痙攣劑、抗病毒劑、抗銀屑癬劑和殺蟲劑。
本發(fā)明也涉及一系列用在診斷組合物中的多胺類似物。同時描述了合成這種化合物的方法。
附圖簡述

圖1A顯示了制造本發(fā)明范圍內(nèi)的多胺類似物的反應(yīng)流程。
圖1B顯示了單個非對稱的雙取代類似物的合成。
圖2顯示了多胺類似物Ori 1313和Ori 1327的結(jié)構(gòu)。
圖3是含有本發(fā)明優(yōu)選的多胺類似物的表格，其中類似物的通用結(jié)構(gòu)顯示在表的頂端。包括類似物(或“Ori”)1313和1327。除有特別說明外，所有的結(jié)構(gòu)都是從腐胺(1，4-丁二胺)中衍生得到的。
圖4是含有本發(fā)明額外的多胺類似物的表格。
圖5A和5B顯示了ORI 1313(-■-)和ORI 1327(-◆-)抗腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性(參見本文實施例1)。
圖6A和6B顯示了ORI 1313和ORI 1327細(xì)胞毒性的時序(參見這里的實施例II)。
圖7A-7C顯示了使用多胺類似物ORI 1313和ORI 1327的細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)。
圖8A和8B顯示了使用多胺類似物ORI 1313和ORI 1327對表達(dá)MDR-1的癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
圖9顯示了多胺類似物ORI 1313和ORI 1327不會改變細(xì)胞的多胺水平。
圖10顯示了含有caspase-3的多胺類似物ORI 1313的細(xì)胞毒性(參見本文實施例VI)。
圖11是含有本發(fā)明多胺類似物(包括鹵化的類似物)的表格。
圖12顯示了本發(fā)明額外的對稱的多胺類似物，包括鹵化的類似物。
圖13的圖例證明了小鼠中用ORI 1313處理的異種移植的A375人黑色素瘤的腫瘤生長的抑制。
發(fā)明詳述本發(fā)明人設(shè)計了可同時在體內(nèi)和體外顯示細(xì)胞毒性的各種新型多胺類似物化合物。這類組合物對許多疾病都是有效的藥物，尤其是癌癥。它們也可以作為新型藥物的一種組分和(例如)多胺合成抑制劑如DFMO(可抑制鳥氨酸脫羧酶)或其它各種細(xì)胞毒劑一起使用。本發(fā)明的化合物基于它的細(xì)胞毒性可用在通常需要抑制細(xì)胞生長的疾病或癥狀中，也可用于農(nóng)業(yè)和環(huán)境方面。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)許多化學(xué)基團(tuán)都可以附著在多胺上以使其具有細(xì)胞生長和/或增殖抑制劑的優(yōu)越性狀。
本發(fā)明優(yōu)選的一個方面是，這些類似物在治療人黑色素瘤上是具有優(yōu)越性的。在美國和世界上許多國家人黑色素瘤都是一個正在擴(kuò)大的健康問題。因臭氧層破壞而造成的太陽輻射加劇使這一疾病成為老齡化人口和將來各代的一個嚴(yán)重的健康問題。惡性黑色素瘤被認(rèn)為是一種化學(xué)療法難以控制的腫瘤，且通常使用的抗癌藥物不能改變轉(zhuǎn)移性疾病的預(yù)后情況(Serrone，L.等，The chemoresistance of humanmalignant melanomaan update.Melanoma Res.1999，9，51-58)。據(jù)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的多胺類似物的一些優(yōu)選的實施方案顯示了對黑色素瘤細(xì)胞系有顯著的選擇性。定義這里使用的“多胺”包括自然產(chǎn)生的多胺類，比如腐胺、精胺或亞精胺、以及其它自然產(chǎn)生的多胺類，比如caldopentamine、homocaldopentamine、N4-二氨丙基去甲亞精胺、熱五胺(thermopentamine)、N4-二氨丙基亞精胺、caldohexamine、人熱六胺(homothermohexamine)、以及homocaldohexamine、尸胺、氨丙基尸胺、高亞精胺、caldine(去甲亞精胺)、7-羥基亞精胺、thermine(去甲精胺)、熱精胺、canavalmine、氨丙基高亞精胺、和氨戊基去甲亞精胺。
這一術(shù)語也包括較長的線性多胺類、支鏈多胺類以及類似的含有2-10個氮原子的多胺類。氮原子通常沿著線性鏈被2-6個碳原子分隔開。這一定義還包括多胺衍生物或類似物，其堿性多胺鏈的碳原子或末端或內(nèi)部氮原子上共價結(jié)合了一定數(shù)量的任何功能基團(tuán)。這包括N1-單取代的多胺類似物以及α碳原子取代次級氮和氮的?；越档投喟费趸傅慕到?。多胺類的選擇性主要單取代是已知的(Krapcho，A.P.等，Mono-protected diamines.N-tert-butoxylcarbonyl-α，ω-alkanediamines from α，ω-alkanediamines.Syn.Comm.1990，20，2559-2564；Blagbrough，I.S.等，Practical Synthesis of unsymmeterical polyamineamides.Tetrahedron Lett.1998，39，439-442)?；蛘撸谆鶊F(tuán)可以被α引入精胺的末端氨基基團(tuán)(Lakanen，J.R.等，J.Med.Chem.35724-734，1992)。
內(nèi)部碳被烷基化的各種多胺類似物也很容易合成。根據(jù)Hunber，H.等，J.Biol.Chem.27127556-27563，1994可以合成5-羧基精胺、四叔丁氧羰基-5-羧基精胺和它的酸性氯化物。除去叔丁氧羰基后可以用各種親核試劑與所得酸性氯化物反應(yīng)以制備羧基-取代的多胺類似物?；蛘撸然虚g體可以被還原成可用來合成許多其它類似物的中間體。
“報告子部分”是構(gòu)成探針一個部分的化學(xué)部分，它使探針可被探測出(或是直接，或是(例如)通過酶的放大)并使探針得以定位。報告子可被探測出，或是因為它自身能發(fā)射出可探測的信號，或是通過它與可探測的報告子特別伴侶的親和特性，或與報告子結(jié)合、或是與報告子反應(yīng)。
這里公開的各種多胺類似物化合物是通過可區(qū)分的數(shù)字組合而確定的(使用單獨的四個阿拉伯?dāng)?shù)字的組合或與“ORI”或“Ori”結(jié)合使用)。無論使用何種標(biāo)識方案，標(biāo)號僅代表所含化合物的實際分子結(jié)構(gòu)，且不會在所述化合物上強(qiáng)加任何限制。多胺類似物的結(jié)構(gòu)與合成本發(fā)明的多胺類似物通常是現(xiàn)有多胺類或新型多胺類的取代無或衍生物形式。較好的類似物是精胺、亞精胺和腐胺的衍生物。更好的是，類似物在下述多胺的至少一個或兩個末端(α和ω)氮原子位點發(fā)生了取代，最好是在兩個位點都有取代。最優(yōu)選的是，類似物抗腫瘤細(xì)胞的IC50在微摩爾范圍(包括從1至約600、1至約300、1至約200、1至約100、1至約50、1至約20、1至約15、1至約10、1至約9、1至約8、1至約7、1至約6、1至約5、1至約4、1至約3和1至約2μM)和亞微摩爾范圍(包括從約0.01約至1、約0.1至1、約0.2至1、約0.3至1、約0.4至1、約0.5至1、約0.6至1、約0.7至1、約0.8至1、約0.9至1μM)。
圖1A所示是制備線性鏈上兩個末端氨基被3、4或5個碳原子隔開的被取代的多胺的典型反應(yīng)流程1。這一反應(yīng)是典型的直接合成方法，并且能在一個反應(yīng)器中完成。示范的有四個碳原子的多胺反應(yīng)物是腐胺。使用腐胺得到的反應(yīng)產(chǎn)物是N1，N4-二芐基腐胺。這一反應(yīng)以后，多胺類似物很容易通過柱層析法或結(jié)晶法純化。
類似的反應(yīng)可以用精胺、亞精胺和其它多胺類來進(jìn)行，以獲得本發(fā)明的多胺類似物。這種額外的反應(yīng)在本技術(shù)領(lǐng)域已為人熟知，并包括一些合適的步驟以保護(hù)像精胺和亞精胺之類的大型多胺類結(jié)構(gòu)內(nèi)的功能基團(tuán)。
除了所提到的示范性的芳香性乙醛外，通過使用醛類可以很方便地修飾圖1A中的反應(yīng)流程以制得細(xì)胞毒的多胺類似物。因而用這種含有環(huán)狀或脂肪族部分、以及它們的取代形式在內(nèi)的醛類進(jìn)行反應(yīng)可以用來制備本發(fā)明的額外的類似物。環(huán)狀部分顯然可以是同環(huán)類或雜環(huán)類，還可以是芳香性或芳基，可用在制造本發(fā)明的類似物。脂肪族部分顯然可含有一個或多個非碳的雜原子。
環(huán)狀部分的例子包括多環(huán)和多單環(huán)基團(tuán)以及與多環(huán)主要基團(tuán)中不同環(huán)狀結(jié)構(gòu)結(jié)合的鍵或直鏈基團(tuán)。共價結(jié)合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的這類基團(tuán)的例子包括酰胺、磺胺、醚、硫醚、酯、-C-C-和-C-N-和-N-N-等鍵。環(huán)狀結(jié)構(gòu)也可以被個別地取代。
雜環(huán)部分的實例包括(但不限于)吡咯烷基、哌啶基、吡嗪基、嗎啉基、聯(lián)苯、呋喃基、吡咯基、1，2-吡唑基、咪唑基、1H，1，2，3-三唑基、1H-1，2，3，4-四唑基、噻唑基、噁唑基、1，3，4-噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、1，2-二嗪基、1，4-二嗪基、1，3，5-三嗪基、二苯并呋喃基、吖啶基、2，1，3-苯并二噻唑、異喹啉基、喹啉基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、1，3-苯并二嗪基、吩嗪基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、吡喃、色烯基、氧雜蒽基、中氮茚基、異吲哚基、吲哚基、嘌呤基、酞嗪基、1，5-二氮雜萘基、奎噁啉基、奎唑啉基、肉啉基、蝶啉基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌間二氮雜苯基、菲咯啉基、異噻唑基、furazanyl、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基和生物素基。
芳香性部分的實例包括(但不限于)苯基萘基、1，2-或1，3-聯(lián)苯、茚基、苊烯基、蒽基、菲基、苯撐基(phenylenyl)、三苯撐基芘基、和二苯甲撐基。
脂肪族部分的實例包括(但不限于)直鏈、支鏈和環(huán)狀烴類，C2-10烷烴類，含1-3不飽和基的C3-10烯烴類，含1-3不飽和基的C3-10炔烴類，支鏈的C3-10烷烴類、烯烴類和炔烴類，多環(huán)脂肪烴類以及類固醇樣環(huán)狀系，包括C3-8環(huán)烷基、金剛烷基、樟腦烯基和膽甾烯基。
另外，反應(yīng)中使用的與圖1A中所列舉類似的多胺反應(yīng)物可以沿著線性主鏈在一個或多個內(nèi)部氮和/碳位點被低分子量的化學(xué)部分衍生。這類部分的實例可在下表中找到
鹵素 環(huán)己基 乙氧基 丙基酯甲基 環(huán)庚烷 丙氧基 異丙基酯乙基 環(huán)辛基 硫代基 氰基丙基 環(huán)壬烷 甲硫基 異氰酸根合異丙基環(huán)癸烷 乙硫基 三氟甲基丁基 己基 丙硫基 三氯甲基異丁基2-己基 丁硫基 三溴甲基叔丁基3-己基 異丙硫基 疊氮基戊基 烯丙基 硝基 乙酰氧基2-戊基乙烯基 氨基 羧酰胺3-戊基乙炔 乙酰胺 N-甲羧酰胺新戊基丙炔基 甲酰胺 N，N-二甲羧酰胺環(huán)戊基高丙炔基 羧基 N-乙羧酰胺環(huán)丙基羥基 甲基酯 N，N-二乙羧酰胺環(huán)丁基甲氧基 乙基酯這些部分的單取代或多取代形式也包括在本發(fā)明中。優(yōu)選的多胺類似物和衍生物一個優(yōu)選的實施方案是，在抗癌化學(xué)治療中有藥物功效的高細(xì)胞毒的類似物。優(yōu)選的有這種活性的類似物包括化合物1313和1327，圖2中顯示了它們的結(jié)構(gòu)。這些類似物比N1，N4-二芐基腐胺更有效，在低克分子濃度時對癌細(xì)胞就是細(xì)胞毒的，可誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡，且被證明在少至一小時的治療時也是有效的。而且，這些類似物看來可在癌細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡，且出乎意料地能抑制有多種藥物耐受性的癌細(xì)胞系的生長。而且，這些類似物在黑色素瘤細(xì)胞中抑制細(xì)胞生長和增殖方面有特殊的特異性和功效。
本發(fā)明另一優(yōu)選的化合物是具有如圖3所述R基團(tuán)的腐胺類似物(除了“1191”和“1192”類似物)。圖3中按字編號列出的類似物都是腐胺的類似物，其中每個指出的R基團(tuán)都出現(xiàn)在兩末端的氮原子位點。所指IC50值是人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231(“MDA”)和人PC-3前列腺癌細(xì)胞系。
本發(fā)明的類似物還包括1，3-二氨基丙烷、精胺、亞精胺和其它含有如圖3所示R基團(tuán)的多胺衍生物的類似物。本發(fā)明所有的線性多胺類似物(包括腐胺類似物)都含有這類R基團(tuán)，衍生不必發(fā)生在多胺主鏈的兩末端，但要在一端發(fā)生。
本發(fā)明的其它類似物顯示在圖4中，可清楚地看出類似物都有如上所述的R1-X-R2結(jié)構(gòu)式。圖4的每一個“R1”和“R2”基團(tuán)都可單獨認(rèn)為是任何多胺(包括，但不限于，1，3-二氨基丙烷、腐胺、精胺和亞精胺)衍生物的部分。
本發(fā)明另一類優(yōu)選的化合物顯示在圖11和12中。其中，需要相應(yīng)說明的是化合物1441和1436不含有作為核心的線性多胺。同時，化合物1429在多胺的末端碳原子上含有另一些取代基?；衔?368、1367、1366、1365、1364、1363含有-(CH2)3-NH-作為核心。它們可被看做是不對稱的多胺類似物。特別地，化合物1368和1367也可以被用作細(xì)胞毒的多胺類似物化合物活動機(jī)制的探針。其它不對稱多胺類似物包括化合物1318、1317、1316、1310、1303、1302和1301。
本發(fā)明優(yōu)選的類似物化合物包括如圖3、4、11和12所示化合物的衍生物，以及那些基于它們的細(xì)胞毒特性可作為抗癌、抗病毒、抗微生物、抗細(xì)菌、抗寄生蟲或抗真菌化學(xué)療法有藥物功效的化合物。
含所需活性的化合物的進(jìn)一步衍生或優(yōu)化可通過與本發(fā)明的其它多胺類似物和衍生物進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能的比較，以在需優(yōu)化的化合物中引入其它類似物的特殊結(jié)構(gòu)成分而獲得。結(jié)構(gòu)成分的選擇應(yīng)基于預(yù)期功能的改進(jìn)，比如(但不限于)細(xì)胞毒性、代謝穩(wěn)定性、特異性、操作與施用、親和結(jié)合、不混入細(xì)胞多胺庫以及減少副作用等。
通過引入此類結(jié)構(gòu)成分進(jìn)行修飾所得的化合物可以是任何結(jié)構(gòu)，包括這里所定義的多胺類似物和衍生結(jié)構(gòu)。不同的是，所得化合物在優(yōu)化后可以有一個或多個額外的原子或功能基團(tuán)和/或剔除一個或多個原子或功能基團(tuán)，所得的化合物可以是在這里所定義的多胺類似物和衍生結(jié)構(gòu)范圍內(nèi)或超過這一限制。分析與診斷用途本發(fā)明的多胺類似物和衍生物可被用作報告子分子以及測定它們與可作為其它藥物靶點的細(xì)胞因子定位情況的探針。這些因子包括膜、可溶性與不溶性蛋白質(zhì)類、以及核酸類。藥用和治療用組合物以及應(yīng)用本發(fā)明的多胺組合物和衍生物，以及它們的藥學(xué)上可接受的鹽類，可以制成藥物組合物。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的酸性鹽類含有堿性基團(tuán)，可用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法，在存在堿性胺時，用強(qiáng)或中等強(qiáng)度的無毒的無機(jī)或有機(jī)酸類在適當(dāng)?shù)臈l件下合成的。本發(fā)明所包括的酸性鹽類的例證有馬來酸鹽、延胡索酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽和硝酸鹽。另外的可形成合適的鹽類的酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸；醋酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、α-酮戊二酸、α-己酮酸、α-酮異己酸、α-酮異戊酸、延胡索酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、安息香酸、羥基安息香酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸和2-苯氧基苯甲酸；以及磺酸類如甲磺酸和2-羥乙基磺酸。還包括像正磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀之類的酸性金屬鹽。如上所述，本發(fā)明的化合物都有細(xì)胞毒特性，可用來治療各種疾病或癥狀，特別是癌癥。這一發(fā)明的組合物或是其本身就有活性，或是須在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性形式的“前體藥物(pro-drug)”。
本發(fā)明的化合物，以及它們的藥學(xué)上可接受的鹽類，可以制成便于控制給藥量的形式，比如膠囊、浸漬的糯米紙囊劑(impregnated wafers)、片劑或注射劑?？梢允褂霉虘B(tài)或液態(tài)的藥學(xué)上可接受的載體。也可將藥物組合物制成緩釋劑。
這類組合物可以任選的含有抗氧化劑類、表面活性劑類和/或甘油酯類?？寡趸瘎╊惖膶嵗?但不限于)丁基化羥基甲苯(BHT)、維他命E和/或C。甘油酯類的實例包括(但不限于)選自乙?；驔]有取代的甘油一酸酯類；中鏈甘油三酯類，比如在油類中發(fā)現(xiàn)的那些；以及辛己基聚乙二醇-8甘油酯較好地，本發(fā)明的化合物是全身給藥的，例如，通過注射或口服給藥。使用時，注射可以用任何已知途徑進(jìn)行，較好的是靜脈注射、皮下注射、肌肉注射、顱內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。注射劑可以準(zhǔn)備成常用的形式，如溶液或者是懸浮液，可溶解的固體形式或液態(tài)懸浮液，或者是乳化液。
固體載體包括淀粉、乳糖、二水硫酸鈣、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、金合歡樹膠、硬脂酸鎂和硬脂酸。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水、水、葡萄糖、甘油等。同樣，載體或稀釋劑可包括延時釋放材料(比如硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯)，單獨使用或和蠟一起使用。當(dāng)使用液體載體時，制劑可以是糖漿、酏劑、乳劑、軟質(zhì)明膠膠囊、含有液體的膠囊、無菌注射液(例如，溶液)，比如針?biāo)?、或是含水或非水的液態(tài)懸浮劑。關(guān)于這種藥物組合物的概述可以在(例如)Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack出版公司，EastonPennsylvania(Gennaro第18版編于1990年)中找到。
藥物制劑都是按藥物化學(xué)的常規(guī)技術(shù)制備的，其步驟包括，當(dāng)需要片劑形式時采用混合、軋碎和壓片等方法，或是用合適的方法將成分混合、填充以及溶解以制得口服或非腸道給藥所需的產(chǎn)品。也可以制備其它用于局部、皮下、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、顱內(nèi)、眼內(nèi)、耳內(nèi)和直腸給藥的制品。藥物組合物還可以含有少量無毒性的輔助性物質(zhì)，比如潤濕劑濕劑或乳化劑、pH緩沖劑等等。
盡管優(yōu)選的給藥途徑是全身給藥，藥物組合物也可以局部或透皮給藥，例如，作為軟膏、霜劑或凝膠劑；口服；直腸給藥，例如，作為栓劑；非腸道給藥，通過注射或持續(xù)灌注給藥；陰道內(nèi)給藥；鼻內(nèi)給藥；支氣管內(nèi)給藥；顱內(nèi)給藥；耳內(nèi)給藥；或是眼內(nèi)給藥。
局部使用時，化合物可裝進(jìn)局部使用的賦形劑中，比如油膏或軟膏?；钚猿煞值妮d體可以是可噴射形式或不可噴射的形式。不可噴射的形式(可以是半固體或固體形式)含有本身可局部使用且動力學(xué)粘性最好比水大的載體。合適的制劑包括(但不限于)溶液、懸浮液、乳劑、霜劑、軟膏、粉劑、擦劑、油膏之類。如果需要的話，這些材料可以滅菌或與輔助劑混合，例如，防腐劑、穩(wěn)定劑、保濕劑、緩沖劑、或能影響滲透壓的鹽類等。優(yōu)選的不可噴射的局部使用的賦形劑包括軟膏，比如聚乙二醇-1000(PEG-1000)；常用霜劑；凝膠劑；以及礦脂等。
同樣適合局部使用的還有可噴射氣溶膠制劑，其中的化合物，最好與固態(tài)或液態(tài)的惰性載體物質(zhì)相結(jié)合，被裝進(jìn)壓縮瓶中或與加壓的揮發(fā)物、通常是氣態(tài)揮發(fā)劑相混合。除了本發(fā)明的化合物氣溶膠制劑外還可含有溶劑、緩沖劑、表面活性劑、香料、和/或抗氧化劑。
對于優(yōu)選的局部施用的制劑，尤其是對人類，最好在靶區(qū)域(例如，皮膚表面、粘膜、眼睛等)施用有效量的化合物。每次的用量通常是從約0.001mg到約1g，這取決于待治療的面積、癥狀的嚴(yán)重程度、以及所采用的局部賦形載體的性質(zhì)。
本發(fā)明的組合物可與用來治療疾病或癥狀的一種或多種額外化合物結(jié)合使用。治療癌癥時，多胺類似物和衍生物可以和抗腫瘤劑，比如有絲分裂抑制劑，例如長春花堿；烷化劑，例如環(huán)磷酰胺；葉酸抑制劑，例如氨甲蝶呤、pritrexim或trimetrexate；抗代謝物，例如5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷；插入性抗生素，例如阿霉素和博來霉素；酶或酶抑制劑，例如天冬酰胺酶；局部異構(gòu)酶抑制劑，例如鬼臼亞乙苷；或生物反應(yīng)修飾劑，例如干擾素。實際上，這里所披露的與多胺類似物和衍生物結(jié)合的藥物組合物，包括任何已知的用于癌癥治療的藥物組合物，都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。這類化合物也可以和諸如DFMO一樣的多胺合成抑制劑結(jié)合施用。
本發(fā)明的藥物組合物也可以含有一種或多種其它藥物，比如象包括抗細(xì)菌、抗真菌、抗寄生蟲、抗病毒、和抗雙孢子球蟲等藥劑在內(nèi)的抗感染藥物。
本發(fā)明化合物的標(biāo)準(zhǔn)單劑量為約1ng至約1g/kg體重。較好的是劑量在約0.01mg至約500mg/kg體重，更好是在約0.1mg至約100mg/kg體重。局部給藥時，建議每劑化合物的濃度范圍約為0.01-20％的，較好的是1-5％?？诜r每天的總藥量優(yōu)選約1-200mg。上述的范圍，當(dāng)然是僅供參考，根據(jù)個體的治療情況其可變范圍很大，通常宜由本領(lǐng)域的技術(shù)人員對這些推薦值作合理的改變。
使用公認(rèn)的特殊疾病或癥狀的體外體系或體內(nèi)動物模型可以確定治療疾病或癥狀的化合物的有效量或劑量。對于癌癥，已知有許多技術(shù)認(rèn)可的模型，且可代表廣譜的人類腫瘤。對任何人源或非人動物源的大量的癌細(xì)胞系進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)分析可以測定這類化合物對培養(yǎng)物中腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用。包括動物模型在內(nèi)的許多進(jìn)展，在Geran，R.I.等，“Protocols for Screening Chemical Agents and NaturalProducts Against Animal Tumors and Other Biological Systems(第三版)”，Canc.Chemother.Reports，第三部分，31-112.中有詳細(xì)的描述。
現(xiàn)已對本發(fā)明作了一般的描述，根據(jù)以下的實施例將更容易理解這類內(nèi)容，除非特別說明，提供這些實施例只是為了闡明而不能理解為是對發(fā)明的限制。
實施例I腐胺類似物的細(xì)胞毒件ORI 1313和ORI 1327顯示了抗SK-MEL-5和MDA細(xì)胞系的顯著的細(xì)胞毒作用(參見圖5A和5B，ORI 1327-◆-；ORI 1313-■-)。簡而言之，將細(xì)胞接種在96孔板中，每孔1500個細(xì)胞(SK-MEL-5)或5000個細(xì)胞(MDA)，并使其附著一天。添加所述類似物并將細(xì)胞培養(yǎng)三天，然后用MTS檢驗法(Promega)評估細(xì)胞的生長。縱軸軸以百分?jǐn)?shù)表示未經(jīng)藥物處理的對照組的細(xì)胞數(shù)。此外，可以看到有抗PC-3細(xì)胞的顯著活性(參見圖4和11)。
這兩種藥劑在功效方面較N1，N4-二芐基腐胺有顯著的提高。所得的抗SK-MEL-5細(xì)胞的IC50值對ORI 1313和ORI 1327分別是4.1μM和0.71μM。數(shù)據(jù)顯示，ORI 1313和ORI 1327抗MDA乳腺癌細(xì)胞的IC50值分別是12μM和0.65μM。N1，N4-二芐基腐胺抗MDA細(xì)胞的IC50值是192μM。這說明ORI 1313和ORI 1327在抗MDA細(xì)胞的細(xì)胞毒活性功效上分別超過N1，N4-二芐基腐胺16倍和295倍。
1.3-二氨基丙烷的N1，N3-聯(lián)苯類似物也被測試，并測得其抗MDA細(xì)胞的IC50值為28.8μM。
實施例II腫瘤細(xì)胞中多胺類似物細(xì)胞毒性的時間過程即便在治療僅一小時后多胺類似物在MDA細(xì)胞中便顯示出明顯的細(xì)胞毒性(參見圖6A和6B)。簡而言之，以每孔5000個細(xì)胞將MDA-MB-231細(xì)胞接種在96孔板中并使其附著一天，添加所述類似物并將細(xì)胞按所示的不同時間進(jìn)行培養(yǎng)。然后洗滌細(xì)胞并加入新鮮的無類似物的培養(yǎng)基。三天后，用MTS檢驗法(Promega)評估細(xì)胞生長?？v軸以百分?jǐn)?shù)表示未經(jīng)藥物處理的對照組的細(xì)胞數(shù)。
這些發(fā)現(xiàn)說明，不需要長期消耗多胺類似物就可誘導(dǎo)細(xì)胞毒性，并且從培養(yǎng)基中移去藥劑也不會使細(xì)胞復(fù)原或重新生長。這一發(fā)現(xiàn)在臨床使用這些藥劑方面可能有重要的意義。假設(shè)相對于普通細(xì)胞來說，類似物對腫瘤細(xì)胞有足夠高的選擇性，則與臨界濃度的類似物接觸相對較短的時間就可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡而不需要再保持類似物的濃度。因此，對使用這些化合物的有效的抗腫瘤療法而言，不需要高含量維持水平的類似物或是延長治療時間。
實施例III細(xì)胞毒多胺類似物誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)在用多胺類似物處理的MDA細(xì)胞(參見圖7A-7C)上進(jìn)行細(xì)胞周期分析。簡而言之，在ORI 1313或ORI 1327存在時使MDA-MB-231細(xì)胞生長不同的時間，然后用酒精固定并用碘化丙啶染色。用FACS分析細(xì)胞，各柱形圖的面積說明了DNA的含量和細(xì)胞周期的各個階段M1，G1；M2，S；M3，G2/M；M4，＜2N(程序死亡的細(xì)胞)。圖7A是未經(jīng)處理的細(xì)胞的結(jié)果；7B是用32μM ORI 1313處理48小時的結(jié)果；7C用3μM ORI 1327處理11小時的結(jié)果。
這一分析顯示了用ORI 1313處理后的高細(xì)胞程序死亡部分(32μM，處理11小時有21％，處理24小時有49％，處理48小時有30％＜2N DNA含量)并顯示了用ORI 1327處理后的適度的程序死亡細(xì)胞(3μM，處理11小時有15％＜2N DNA含量)。這些數(shù)據(jù)顯示該類似物有效地誘導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡。
實施例IV細(xì)胞毒多胺類似物對MDR腫瘤細(xì)胞是細(xì)胞毒的ORI 1313和ORI 1327的一個意想不到的細(xì)胞特征是它們對多藥物耐受性(MDR)子宮肉瘤細(xì)胞系，MES-SA/Dx5(參見圖8A和8B)的生長抑制活性。簡而言之，以每孔1000個細(xì)胞將細(xì)胞接種在96孔板中并使其附著一天。添加所述類似物并將細(xì)胞培養(yǎng)三天，然后用MTS檢驗法(Promega)評估細(xì)胞的生長?？v軸軸以百分?jǐn)?shù)表示未經(jīng)藥物處理的對照組的細(xì)胞數(shù)。
MES-SA/Dx5細(xì)胞系是通過阿霉素和多藥物耐受基因(MDR-1)mRNA的過度表達(dá)的篩選而建立的。因而這種細(xì)胞對經(jīng)P-糖蛋白(P-gp)排出的各種藥物的敏感性要低得多。參看Harker，W.G.等，Multidrug(pleiotropic)resistance indoxorubicin-selected variants of the human sarcoma cell line MES-SA CancerResearch，1985，45，4091-4096。類似的對親本細(xì)胞系和耐藥性細(xì)胞系的生長抑制曲線(圖8A和8B)明確提示ORI 1313和ORI 1327不是P-gp多藥物排出載體的底物。這對包含表達(dá)MDR-1的靶細(xì)胞的情況特別有利。
實施例V細(xì)胞毒多胺類似物不會改變細(xì)胞內(nèi)的多胺水平為確定多胺類似物治療對細(xì)胞內(nèi)多胺水平的影響，在用ORI 1313(32μM)或ORI 1327(3μM)處理11小時后用高效液相色譜儀(HPLC)測量細(xì)胞內(nèi)的多胺水平。結(jié)果顯示，在藥物治療后對多胺水平?jīng)]有明顯的影響(參見圖9)。這一結(jié)果與本技術(shù)領(lǐng)域以前的觀測結(jié)果是一致的。另外，在治療的細(xì)胞中對SSAT活性的測量顯示這種酶沒有被誘導(dǎo)(沒有顯示數(shù)據(jù))。
后繼的實驗顯示，與50倍以上濃度的腐胺共同治療不會妨礙ORI 1313或ORI1327治療的細(xì)胞毒效應(yīng)。和1mM的DFMO共同治療不會改變使用ORI 1313或ORI 1327所得的結(jié)果。與有效的多胺運輸抑制劑----ORI 1202共同治療(MDA細(xì)胞中與所吸收的3H-亞精胺和3H-腐胺相比的Ki值分別為32±15nM和29±9nM，且當(dāng)與諸如DFMO之類的多胺生物合成抑制劑共用時它可有效消耗細(xì)胞內(nèi)的腐胺和亞精胺)，同樣不會改變所觀測到的ORI 1313或ORI 1327對細(xì)胞生長的抑制作用。
有關(guān)這些多胺類似物的細(xì)胞吸收機(jī)制通過它們對3H-腐胺吸收的抑制作用進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。以前已證實，MDA細(xì)胞吸收腐胺的Km值為12.4μM。相對于腐胺，MDA細(xì)胞吸收ORI 1313的Kiapp為28.3μM，PC-3細(xì)胞的吸收值為24.1μM。相對于腐胺，PC-3細(xì)胞吸收ORI 1327的Kiapp為14.3μM。這些結(jié)果說明，多胺運輸載體是細(xì)胞吸收這些類似物的可能模式。不過，由于與50倍以上的腐胺共同治療、與多胺生物合成抑制劑DFMO共同治療(以前認(rèn)為可刺激經(jīng)多胺運輸載體進(jìn)行的多胺類似物的吸收)以及與多胺運輸載體的有效抑制劑ORI 1202共同治療都不能改變類似物的效力，從而顯示類似物能通過其它的吸收機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞。
由于已知腫瘤細(xì)胞對多胺類有較大的需求，且這種較高的需求量可以通過提高多胺類的吸收與生物合成來滿足(參見Heston，W.D.W.等，Differential effectof alpha-difluoromethylornithine on the in vivo uptake of C-14 labeledpolyamines and methylglyoxal bis(guanylhydrazone)by a rat prostate-derivedtumor.Cancer Res.1984，44，1034-1040；Minchin，R.F.等，Paraquat is notaccumulated in B16 tumor cells by the polyamine transport-system.LifeSci.，1989，45，63-69；McCormack，S.A.等，Putrescine uptake and release bv coloncancer cells.Am.J.Physiol.1989，256，G868-G877)；和Dave，C.等，Studies in themechanism of cytotoxicity of methylglyoxal bis(guanylhydrazone)in culturedleukemia L1210 cells.Adv.Polyamine Res.1978，1，153-171)，ORI 1313和ORI 1327的多胺類似物性質(zhì)可能會導(dǎo)致它們在腫瘤細(xì)胞中選擇性積累。Byers和他的合作者顯示，具有抗瘧疾特性的芐化的精胺類似物的吸收與多胺運輸系統(tǒng)是不同的(參見Byers，T.L.等，Bis(benzyl)polyamine analogues are substrates for a mammaliancell transport system which is distinct from the polyamine-transportsystem.Biochem.J.1990，269，35-40)。
實施例VIcaspase-3參與多胺類似物細(xì)胞毒性如圖10所示的實驗顯示了前細(xì)胞程序死亡(pro-apoptotic)caspase-3酶參與ORI 1313作用的情況。簡而言之，以每孔1000個細(xì)胞將PC-3細(xì)胞接種在96孔板中并使其附著一天。加入10μM ORI 1313和0、5、或15μM的Z-DEVD-fmk(一種caspase抑制劑)并培養(yǎng)3天。用MTS檢驗法(Promega)評估細(xì)胞的生長?？v軸以百分?jǐn)?shù)表示未經(jīng)藥物處理的對照組的細(xì)胞數(shù)。
用10μM的ORI 1313單獨處理可導(dǎo)致PC-3前列腺癌細(xì)胞的生長被抑制46％。當(dāng)用10μM的ORI 1313和5或15μM的caspase抑制劑Z-DEVD-fmk共同處理時，其生長抑制作用分別減少了19％和10％。這表明caspase酶的抑制作用可降低ORI1313的細(xì)胞毒性，提示這種酶在ORI 1313的細(xì)胞毒機(jī)制中扮演角色。
在另一個實施方案中，在用ORI 1313(30μM)和ORI 1327(2μM)處理了14個小時的PC-3細(xì)胞中測量了caspae-3蛋白酶的活性。用阿霉素(5μM)作為陽性對照。用來自Clontech實驗室的ApoAlert Caspase-3分析試劑盒監(jiān)控其蛋白水解活性。未處理的對照細(xì)胞被測得每2×106個細(xì)胞中有10.2±0.3個單位的caspase-3活性。經(jīng)阿霉素處理的細(xì)胞每2×106個細(xì)胞中有13.5±0.2個單位的活性。ORI 1313和ORI 1327顯示，每2×106個細(xì)胞中有12.7±1.2和11.6±0.8個單位的活性。這些結(jié)果肯定了在用ORI 1313或ORI 1327處理后PC-3細(xì)胞中caspase-3的活性。多胺類似物濃度以及治療時間的改變可使caspase的活性進(jìn)一步增加并超過用阿霉素所觀測到的結(jié)果。
不必受任何理論的約束，由于本發(fā)明的多胺類似物可影響線粒體通透性的轉(zhuǎn)換以及會影響線粒體內(nèi)膜(可在此誘導(dǎo)細(xì)胞色素c的釋放)，因而參與了細(xì)胞程序死亡機(jī)制。這是根據(jù)最近有關(guān)多胺類對線粒體通透性轉(zhuǎn)換的各種作用的一些報道進(jìn)行比較而得的。如果本發(fā)明的多胺類似物通過這一機(jī)制而發(fā)揮作用，與其它的多胺細(xì)胞毒劑相比，這是一種獨特的機(jī)制。這一機(jī)制的實驗驗證來自1)用HPLC分析法測量這些藥劑的細(xì)胞吸收和定位；2)用光散射(light-scattering)法對分離的線粒體測量線粒體的通透性轉(zhuǎn)換作用；3)用Western印跡法分析從分離的線粒體以及整個細(xì)胞中釋放的細(xì)胞色素c；以及4)研究使用這些藥劑時細(xì)胞程序死亡步驟的誘導(dǎo)時序，并與標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)劑相比。這些實驗是以已完全明確的文獻(xiàn)程序為基礎(chǔ)的，并不需要過分的實驗方法。
實施例VII多胺類似物1313和1327對黑色素瘤細(xì)胞的選擇性國際癌癥協(xié)會(NCI)用60-細(xì)胞系網(wǎng)(60-cell line screen)評估了ORI 1313和ORI 1327。觀察到了意外的結(jié)果ORI 1313可抗8種所測黑色素瘤細(xì)胞系中的6種，這與以前在黑色素瘤異種移植的動物模型中使用N1，N4-二芐基腐胺所觀測到的結(jié)果是一致的(參見Frydman等)，并提示至少對各種黑色素瘤細(xì)胞系具有明確的選擇性。將本發(fā)明小組和NCI確定的IC50值相比較，驗證了這些數(shù)據(jù)ORI 1313，在MDA細(xì)胞中為12對2.3μM，在PC-3細(xì)胞中為20對11.2μM；ORI 1327，在MDA細(xì)胞中為0.65對0.005μM，在PC-3細(xì)胞中為0.65對0.81μM。
實施例VIII多胺類似物的溶解性及體內(nèi)毒性
ORI 1313的二鹽酸鹽在5％的DMSO(二甲基亞砜)中的溶解度至少為40mM。ORI1327的水溶性就有限的多。ORI 1327乳酸鹽的最大溶解度為5mM。二鹽酸鹽更加難溶。用羥丙基-β-環(huán)糊精(45％重量/體積，HβC在水中)可使溶解度有明顯的提高。用這種方法可以制得40mM的ORI 1327溶液。
評價了關(guān)于ORI 1313和ORI 1327的小鼠對藥物治療的耐受性。在BALB/c小鼠中估算了一次腹膜內(nèi)(i.p.)注射ORI 1313或ORI 1327后的急性毒性。對ORI 1313的耐受量為93mg/kg。186mg/kg的劑量會導(dǎo)致動物死亡(小鼠出現(xiàn)昏睡和皮毛起皺而死亡)。對ORI 1327的耐受量為37mg/kg，75mg/kg的劑量會導(dǎo)致動物死亡。通過連續(xù)5天每天進(jìn)行一次i.p.注射的方法評價慢性毒性。對ORI 1313和ORI 1327的耐受量分別為40mg/kg和7.5mg/kg。80mg/kg和30mg/kg的劑量分別會導(dǎo)致死亡。與前面的體外實驗的數(shù)據(jù)相比，這些數(shù)據(jù)證明小鼠可以耐受潛伏的有效劑量的這些化合物。連續(xù)5天每天進(jìn)行一次i.p.注射的最大耐受劑量大約是40mg/kg(ORI 1313)和7.5mg/kg(ORI 1327)。
實施例IX類似物對裸小鼠中異種移植人類腫瘤的細(xì)胞毒性在BALB/c裸小鼠中異種移植的黑色素瘤腫瘤模型中測試了ORI。選擇A375人黑色素瘤細(xì)胞系是因為在NCI’s 60-細(xì)胞系測試中類似物對這種細(xì)胞系有良好的活性，且對這種細(xì)胞系測定的IC50值較低(ORI 1313，4.1μM)。用兩種藥物濃度研究異種移植的功效。共設(shè)四組小鼠，每組10只。兩個治療組分別接受類似物的最大耐受劑量(MTD)或MTD。陰性對照組用5％的葡萄糖處理。ORI 1313抑制了A375黑色素瘤的生長在25天時有36％的生長抑制和6.2天的腫瘤生長延遲(參見圖13)。對藥物的良好耐受最多有7周。治療7周后可以看到暫時的皮膚潰瘍和體重減輕。陽性對照組是用dacarbazine DTIC(用量為連續(xù)5天每天一次180mg/kg的i.p.注射)來驗證這一腫瘤模型系統(tǒng)。
人異種移植的受體是重20克的雌性BALB/c nu/nu無胸腺鼠。給藥方法為i.p.注射，研究期間每天9mM或4mM ORI 1313(當(dāng)對照腫瘤達(dá)到2000mg時停止注射)。給藥方式和用藥方案可按常規(guī)方法進(jìn)一步優(yōu)化。連續(xù)5天每天進(jìn)行一次DITC的i.p.注射。當(dāng)腫瘤尺寸達(dá)到5mm×5mm(50mg)時開始治療。每周測量兩次小鼠的重量和腫瘤的尺寸。用卡尺測量腫瘤然后用公式L2×W/2將其換算為mg腫瘤體積。一旦對照組腫瘤達(dá)到了2000mg就將對照組與治療組的小鼠稱重、處死并取出腫瘤。再用腫瘤的實際重量按以下公式來計算每種類似物的生長抑制百分值％生長抑制＝(治療腫瘤的平均重量/對照腫瘤的平均重量×100)-100。
在此全文并入這里引證的所有的參考資料以供參考，無論前面是否已特別并入。這里使用的“一個”和“任何”術(shù)語都是包括單數(shù)和復(fù)數(shù)形式。
現(xiàn)在已經(jīng)全面的描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該意識到，在當(dāng)量參數(shù)、濃度和條件的很寬的范圍內(nèi)可以實施同樣的操作，這不會違背本發(fā)明的精神和范圍，且沒有不合適的實驗。
在描述本發(fā)明時結(jié)合了一些特別的實施方案，這應(yīng)理解為能進(jìn)一步修改。本申請書的意圖是，通常以本發(fā)明的原理以及這里公開的內(nèi)容為出發(fā)點，包括本發(fā)明的任何變化、用途、或修改，歸入本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)已知的或通常的實踐，也可將其用于上文中提出的一些關(guān)鍵性要點。
權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)1.一種含有以下結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒多胺類似物R1-X-R2其中，R1和R2是獨立的H或是選自直鏈或支鏈C1-10脂肪族、脂環(huán)族、單環(huán)或多環(huán)的芳香族、單環(huán)或多環(huán)的芳基取代的脂肪族、脂肪族取代的單環(huán)或多環(huán)芳香族、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)取代的脂肪族和脂肪族取代的芳香族、和它們的鹵化形式；X選自有兩個末端氨基的多胺、-(CH2)3-NH-或-CH2-Ph-CH2-，其中R1和R2不會同時是未被取代的芐基部分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類似物，其中X選自腐胺、亞精胺、或精胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的類似物，其中X是腐胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是選自類似物1327、1357、1361、1356、1313、1341、1307、1312、1344、1353、1308、1358、1343、1342、1332、1311、1326、1325、1314、1099、1132、1133、1168、1242、1250、1258、1266、1270、1276、1278、1280、1282、1293、1300、1306、1321、1322、1323、1328、1329、1331、1333、1335、1336、1337、1338、1339、1349、1445、1446、1447、1448、1451、1452、1473、1474、1492、1493、1495、1496、和1497的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是Ori 1313。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是Ori 1327。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類似物，其中，X是在碳原子或氮原子上衍生的。
8.一種治療需抑制細(xì)胞生長或增殖的疾病或癥狀的藥物組合物，含有如權(quán)利要求1的多胺類似物，和藥學(xué)上可接受的賦形劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，還可含有一種或多種對治療所述疾病或癥狀有效的另外藥劑。
10.有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的多胺類似物在制備治療與不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞生長或增殖有關(guān)的疾病或癥狀的藥物中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中所述的不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞生長或增殖是與免疫系統(tǒng)細(xì)胞、新內(nèi)膜血管的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的增殖或與不應(yīng)發(fā)生的血管生成有關(guān)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其中所述的疾病或癥狀是癌癥或血管成形術(shù)后的損傷。
13.如權(quán)利要求8所述的組合物或如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中所述的疾病或癥狀是骨質(zhì)疏松癥或傳染性和寄生性的疾病。
14.如權(quán)利要求8所述的組合物，它被進(jìn)一步制成供靜脈、皮下、肌內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部、口腔、透皮、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、眼內(nèi)、耳內(nèi)或直腸內(nèi)用藥的形式。
15.如權(quán)利要求8所述的組合物，它被制成軟膏、霜劑、凝膠、溶液、懸浮液、乳劑、粉劑、擦劑或油膏。
權(quán)利要求
1.一種含有以下結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒多胺類似物R1-X-R2其中，R1和R2是獨立的H或是選自直鏈或支鏈C1-10脂肪族、脂環(huán)族、單環(huán)或多環(huán)的芳香族、單環(huán)或多環(huán)的芳基取代的脂肪族、脂肪族取代的單環(huán)或多環(huán)芳香族、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)、單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)取代的脂肪族和脂肪族取代的芳香族、和它們的鹵化形式；X選自有兩個末端氨基的多胺、-(CH2)3-NH-或-CH2-Ph-CH2-，其中R1和R2不會同時是未被取代的芐基部分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類似物，其中X選自腐胺、亞精胺、或精胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的類似物，其中X是腐胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是選自類似物1327、1357、1361、1356、1313、1341、1307、1312、1344、1353、1308、1358、1343、1342、1332、1311、1326、1325、1314、1099、1132、1133、1168、1242、1250、1258、1266、1270、1276、1278、1280、1282、1293、1300、1306、1321、1322、1323、1328、1329、1331、1333、1335、1336、1337、1338、1339、1349、1445、1446、1447、1448、1451、1452、1473、1474、1492、1493、1495、1496、和1497的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是Ori 1313。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的類似物，其中所述的結(jié)構(gòu)是Ori 1327。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的類似物，其中所述腐胺、亞精胺、或精胺可在內(nèi)部碳原子或氮原子上進(jìn)一步衍生化。
8.一種治療需抑制細(xì)胞生長或增殖的疾病或癥狀的藥物組合物，含有如權(quán)利要求1的多胺類似物，和藥學(xué)上可接受的賦形劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，還可含有一種或多種對治療所述疾病或癥狀有效的另外藥劑。
10.一種在個體中對與不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞生長或增殖相關(guān)的疾病或癥狀進(jìn)行治療的方法，包括向所述個體施用有效量的如權(quán)利要求1的多胺類似物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的不應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞生長或增殖是與免疫系統(tǒng)細(xì)胞、vascular neontima細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的增殖或與不應(yīng)發(fā)生的血管生成有關(guān)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的疾病或癥狀是癌癥或血管成形術(shù)后的損傷。
全文摘要
揭示了新型的細(xì)胞毒多胺類似物。這些類似物是治療需抑制細(xì)胞生長和/或增殖的疾病的有效的藥物制劑，例如癌癥和血管成形術(shù)后的損傷。
文檔編號A61K45/06GK1426391SQ01807059
公開日2003年6月25日 申請日期2001年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月24日
發(fā)明者M·R·伯恩斯 申請人:奧里迪姆股份有限公司