專利名稱：4－氨基－5－氰基－2－苯胺基－嘧啶衍生物和它們作為細(xì)胞周期激酶的抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及嘧啶衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，它們具有細(xì)胞周期抑制活性，因此可使用其抗細(xì)胞增殖(如抗癌)活性，因而可用于治療人或動物體的方法中。本發(fā)明還涉及制備所述嘧啶衍生物的方法，含有所述嘧啶衍生物的藥物組合物以及所述嘧啶衍生物在制備用于在溫血動物(如人)中產(chǎn)生抗細(xì)胞增殖作用的藥物中的用途。
一族稱作細(xì)胞周期蛋白的胞內(nèi)蛋白在細(xì)胞周期中起著重要的作用。細(xì)胞周期蛋白的合成和降解受到嚴(yán)格控制而使它們的表達(dá)水平在細(xì)胞周期中波動。細(xì)胞周期蛋白結(jié)合到依賴細(xì)胞周期蛋白的絲氨酸/蘇氨酸激酶(CDKs)上，并且這種結(jié)合對于在細(xì)胞中的CDK(例如CDK1、CDK2、CDK4和/或CDK6)活性是必需的。盡管還不十分了解這些因子的每一個是如何結(jié)合以調(diào)節(jié)CDK活性的確切細(xì)節(jié)，然而這兩者之間的平衡決定是否細(xì)胞將通過細(xì)胞周期進(jìn)化。
最新的癌基因和腫瘤抑制基因研究已確定對進(jìn)入細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)是腫瘤有絲分裂發(fā)生的關(guān)鍵控制點。此外，CDKs似乎是在多種癌基因傳遞信號途徑的下游。因細(xì)胞周期蛋白的上調(diào)和/或內(nèi)源性抑制劑的缺失而失去對CDK活性的調(diào)節(jié)似乎是有絲分裂發(fā)生的信號傳遞途徑和腫瘤細(xì)胞增殖之間的重要的軸心。
因此，已經(jīng)認(rèn)識到細(xì)胞周期激酶的抑制劑，特別是CDK2、CDK4和/或CDK6(分別在S-階段、G1-S和G1-S階段運作)的抑制劑，作為細(xì)胞增殖，例如哺乳動物癌細(xì)胞生長的選擇性抑制劑，應(yīng)該是有價值的。
本發(fā)明基于如下發(fā)現(xiàn)某些嘧啶化合物意想不到地抑制顯示出對CDK2、CDK4和CDK6呈現(xiàn)選擇性的細(xì)胞周期激酶的作用，因此具有抗細(xì)胞增殖的特性。期望這些特性在治療與異常細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖相關(guān)的疾病上是有價值的，所述疾病如癌癥(實體腫瘤和白血病)、成纖維細(xì)胞增殖和分化紊亂、牛皮癬，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Kaposi肉瘤、血管瘤，急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化，動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和視網(wǎng)膜血管增殖的眼疾病。
因此，本發(fā)明提供了式(I)的化合物 式中R1為鹵基、硝基、氰基、羥基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；p為0-4；其中R1可相同或不同；R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)；其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基、雜環(huán)基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基；其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基、雜環(huán)基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代；并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-C(O)-、-N(Ra)C(O)-、-C(O)N(Ra)-、-S(O)r-、-SO2N(Ra)-或-N(Ra)SO2-；其中Ra為氫或任選被一個或多個D取代的C1-6烷基，r為1-2；
D獨立選自鹵基、硝基、氰基、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、羧基、氨基甲?；?、巰基、氨磺?；?、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷?；被?、N-(C1-6烷基)氨基甲?；，N-(C1-6烷基)2氨基甲?；1-6烷基S(O)a，其中a為0-2，C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺?；蚇，N-(C1-6烷基)2氨磺?；?；G選自C1-4烷基、C1-4烷?；?、C1-4烷基磺?；1-4烷氧基羰基、氨基甲?；?、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-4烷基)氨基甲?；⑵S基、芐氧基羰基、苯甲?；捅交酋；?；和q為0-2；其中R2可相同或不同；并且其中p+q＝1-5；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，條件是所述化合物不是2-(2，4-二甲基苯胺基)-4-氨基-5-氰基嘧啶。
在本說明書中，術(shù)語“烷基”包括直鏈和支鏈烷基，但當(dāng)提到單個烷基，如“丙基”時則僅是專指其直鏈構(gòu)型。例如，“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C1-3烷基、丙基、異丙基和叔丁基。但是，當(dāng)提到單個烷基，如‘丙基’時則僅是專指其直鏈構(gòu)型，而當(dāng)提到單個支鏈烷基，如‘異丙基’時則僅是專指其支鏈構(gòu)型。同樣的規(guī)定適用于其它基團(tuán)，例如“苯基C1-6烷基”包括苯基C1-4烷基、芐基、1-苯基乙基和2-苯基乙基。術(shù)語“鹵基”包括氟基、氯基、溴基和碘基。
當(dāng)任選的取代基選自“一個或多個”基團(tuán)時，應(yīng)理解該定義包括所有選自指定基團(tuán)中的一種的取代基或所有選自所指定基團(tuán)中的兩種或多種的取代基。
“雜環(huán)基”是飽和、部分飽和或不飽和的、含有4-12個原子的單或雙環(huán)，其中至少一個原子選自氮、硫或氧，所述雜環(huán)可為(除非另有聲明)碳或氮連接，其中-CH2-基團(tuán)可任選被-C(O)-置換，并且環(huán)上的氮原子可任選帶有C1-6烷基和形成季銨化合物，或環(huán)上的氮和/或硫原子可任選被氧化形成N-氧化物或S-氧化物。術(shù)語“雜環(huán)基”合適的例子有4-嗎啉基、哌啶基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、異噻唑基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、1，3-苯并二氧戊環(huán)基、噻二唑基、哌嗪基、噻唑烷基、吡咯烷基、4-硫代嗎啉基、吡咯啉基、高哌嗪基、3，5-二氧雜哌啶基、四氫吡喃基、咪唑基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、異噁唑基、N-甲基吡咯基、4-吡啶酮、1-異喹諾酮、2-吡咯烷酮、4-噻唑烷酮、吡啶-N-氧化物和喹啉-N-氧化物。優(yōu)選“雜環(huán)基”為飽和、部分飽和或不飽和的、含有5或6個原子的單或雙環(huán)，其中至少一個原子選自氮、硫或氧，所述雜環(huán)可為(除非另有聲明)碳或氮連接，其中-CH2-基團(tuán)可任選被-C(O)-置換，并且環(huán)上的硫原子可任選被氧化形成S-氧化物。更優(yōu)選“雜環(huán)基”為四氫呋喃基、吡啶基、吡咯烷酮基、4-嗎啉基、咪唑基、哌啶基或吡咯烷基。
“C1-6烷酰氧基”的例子為乙酰氧基?！癈1-6烷氧基羰基”的例子包括C1-4烷氧基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丁氧基羰基和叔丁氧基羰基?！癈1-6烷氧基”的例子包括甲氧基、乙氧基和丙氧基?！癈1-6烷酰氨基”的例子包括甲酰胺基、乙酰胺基和丙酰胺基?！癈1- 6烷基S(O)a，其中a為0-2”的例子包括C1-4烷基磺?；?、甲硫基、乙硫基、甲基亞硫?；?、乙基亞硫酰基、甲磺?；鸵一酋；！癈1-6烷基S(O)r，其中r為1-2”的例子包括甲基亞硫?；?、乙基亞硫酰基、甲磺酰基和乙磺?；?。“C1-6烷?；钡睦影–1-4烷?；?、丙?；鸵阴；！癗-C1-6烷氨基”的例子包括甲氨基和乙氨基?！癗，N-(C1-6烷基)2氨基”的例子包括二-N-甲氨基、二-(N-乙基)氨基和N-乙基-N-甲氨基?！癈2-6鏈烯基”的例子有乙烯基、烯丙基和1-丙稀基。“C2- 6炔基”的例子有乙炔基、1-丙炔基和2-丙炔基?！癗-(C1-6烷基)氨磺?；钡睦佑蠳-(甲基)氨磺?；蚇-(乙基)氨磺?；??！癗-(C1-6烷基)2氨磺?；钡睦佑蠳，N-(二甲基)氨磺?；蚇-(甲基)-N-(乙基)氨磺酰基。“N-(C1-6烷基)氨基甲?；钡睦佑蠳-(C1-4烷基)氨基甲酰基、甲氨基羰基和乙氨基羰基?！癗，N-(C1-6烷基)2氨基甲?；钡睦佑蠳，N-(C1-4烷基)2氨基甲?；⒍装被驶图谆一被驶??！癈3-8環(huán)烷基”的例子有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基和環(huán)己基?！?雜環(huán)基)C1-6烷基”的例子包括吡啶基甲基、3-嗎啉代丙基和2-嘧啶-2-基乙基?！癈3-8環(huán)烷基C1-6烷基”的例子有環(huán)丙基乙基、環(huán)丁基甲基、2-環(huán)丙基丙基和環(huán)己基乙基。
本發(fā)明化合物的適合的藥學(xué)上可接受鹽為如具有足夠堿性的本發(fā)明化合物的酸加成鹽，例如與如無機或有機酸的酸加成鹽，其中酸的例子如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、檸檬酸或馬來酸。另外，本發(fā)明的足夠酸性的化合物的適合的藥學(xué)上可接受鹽是堿金屬鹽(例如鈉或鉀鹽)，堿土金屬鹽(例如鈣或鎂鹽)，銨鹽或與能提供生理上可接受的陽離子的有機堿的鹽，例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥乙基)胺形成的鹽。
式(I)的化合物可以以在人或動物體內(nèi)分解得到式(I)化合物的前體藥物的形式給藥。前體藥物的例子包括式(I)化合物的體內(nèi)可水解的酯。
含有羧基或羥基的式(I)化合物的體內(nèi)可水解的酯是例如藥學(xué)上可接受的酯，該酯在人或動物體內(nèi)水解生成母體酸或醇。適合于羧基的藥學(xué)上可接受的酯包括C1-6烷氧基甲酯，例如甲氧基甲基；C1-6烷酰氧基甲酯，例如新戊酰氧基甲酯，2-苯并[c]呋喃酮基酯；C3-8環(huán)烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯，例如1-環(huán)己基羰基氧基乙酯；1，3-dioxolen-2-onyl甲酯，例如5-甲基-1，3-dioxolen-2-onyl甲酯；和C1-6烷氧基羰基氧基乙酯，例如1-甲氧基羰基氧基乙酯；這些酯可以在本發(fā)明化合物中的任何羧基上形成。
含有羥基的式(I)化合物的體內(nèi)可水解的酯包括無機酯例如磷酸酯、α-酰氧基烷基醚和有關(guān)的化合物，該化合物為體內(nèi)酯水解得到母體羥基的產(chǎn)物。α-酰氧基烷基醚的例子包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基-甲氧基。對于體內(nèi)可水解的酯的羥基形成基團(tuán)的選擇包括烷?；⒈郊柞；?、苯乙酰基和取代的苯甲?；捅揭阴！⑼檠趸驶?提供碳酸烷基酯)、二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(提供氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙?；Ｔ诒郊柞；系娜〈睦影?-嗎啉基和哌嗪基(piperazino)，它們通過亞甲基從環(huán)上的氮原子連接到苯甲?；h(huán)的3-或4-位上。
一些式(I)的化合物可具有手性中心和/或幾何異構(gòu)體中心(E-和Z-異構(gòu)體)，應(yīng)理解本發(fā)明包括所有這些具有CDK抑制活性的旋光的、非對映異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體。
本發(fā)明涉及具有CDK抑制活性的式(I)的化合物的任何和所有的互變異構(gòu)體形式。
應(yīng)理解一些式(I)的化合物可以以溶劑化以及非溶劑化形式存在，例如以水合形式存在。應(yīng)理解本發(fā)明包括所有這些具有CDK抑制活性的溶劑化形式。
優(yōu)選的R1、R2、p和q如下。可在前述或以下描述的任何定義、權(quán)利要求書或?qū)嵤┓桨傅倪m當(dāng)?shù)胤绞褂眠@些值。
優(yōu)選R1為鹵基或C1-2烷基；更優(yōu)選R1為氟基、氯基或甲基，特別是R1為氟基或氯基，更特別是R1為氯基。
優(yōu)選R1是式(I)的苯胺的氨基的間位或?qū)ξ换鶊F(tuán)，更優(yōu)選R1與式(I)的苯胺的氨基相間；優(yōu)選P為0-2，其中R1可相同或不同，更優(yōu)選P為0或1，在本發(fā)明的一個方面優(yōu)選P為0，在本發(fā)明的另一個方面優(yōu)選P為1，在本發(fā)明的還有一個方面優(yōu)選P為2，其中R1可以相同或不同；優(yōu)選R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3- 8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代，并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-N(Ra)SO2-；其中Ra為氫；D獨立選自鹵基、羥基、C1-6烷氧基或N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1- 6烷基)2氨基；和G為C1-4烷基。
更優(yōu)選R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B任選被D取代，并選自乙基、丙基、戊基、烯丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、芐基、苯乙基、四氫呋喃基甲基、吡啶基乙基、吡咯烷酮基丙基、嗎啉代丙基、咪唑基丙基、哌啶基乙基、吡咯烷基乙基(任選環(huán)上的氮原子被甲基取代)，E為-NHSO2-；D獨立選自氟基、羥基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、異丙基氨基和二甲氨基。
特別是R2選自氨磺酰基、N-(環(huán)丙基甲基)氨磺?；?、N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺?；?、N-(2-甲氧基乙基)氨磺酰基、N-(2-吡啶-2-基乙基)氨磺酰基、N-(2-哌啶-1-基乙基)氨磺酰基、N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]氨磺酰基、N-(2-異丙基氨基乙基)氨磺?；-(2，2，2-三氟乙基)氨磺?；-(3-甲氧基丙基)氨磺?；-(3-乙氧基丙基)氨磺?；?、N-(3-異丙氧基丙基)氨磺?；?、N-(3-二甲氨基丙基)氨磺?；-[3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基]氨磺?；-(3-嗎啉代丙基)氨磺?；-(3-咪唑-1-基丙基)氨磺?；?、N-(3-異丙基氨基丙基)氨磺酰基、N-(丙基)氨磺?；?、N-(戊基)氨磺?；-(烯丙基)氨磺?；?、N-(環(huán)丙基)氨磺酰基、N-(環(huán)丁基)氨磺?；-(3-甲氧基芐基)氨磺?；-(4-氟芐基)氨磺?；-(苯乙基)氨磺?；-(4-羥基苯乙基)氨磺?；蚇-(4-甲氧基苯乙基)氨磺酰基。
在本發(fā)明的另一方面，優(yōu)選R2為氨磺酰基或B-E-基團(tuán)；其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3- 8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代；并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-N(Ra)SO2-或-N(Ra)C(O)-；其中Ra為氫；D獨立選自鹵基、羥基、C1-6烷氧基或N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1- 6烷基)2氨基；和G為C1-4烷基。
在本發(fā)明的另一方面，更優(yōu)選R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B任選被D取代，并選自乙基、丙基、戊基、2，2-二甲基丙基、烯丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、芐基、苯乙基、四氫呋喃基甲基、吡啶基乙基、吡咯烷酮基丙基、嗎啉代丙基、咪唑基丙基、哌啶基乙基、吡咯烷基乙基(任選環(huán)上的氮原子被甲基取代)，E為-NHSO2-或-N(Ra)C(O)-；D獨立選自氟基、羥基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、異丙基氨基和二甲氨基。
在本發(fā)明的另一方面，R2特別選自氨磺?；-(環(huán)丙基甲基)氨磺?；?、N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺?；?、N-(2-甲氧基乙基)氨磺酰基、N-(2-吡啶-2-基乙基)氨磺?；?、N-(2-哌啶-1-基乙基)氨磺?；-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]氨磺?；-(2-異丙基氨基乙基)氨磺?；?、N-(2，2，2-三氟乙基)氨磺?；-(2-二甲氨基乙基)氨磺?；?、N-(3-甲氧基丙基)氨磺?；-(3-乙氧基丙基)氨磺?；-(3-異丙氧基丙基)氨磺?；-(3-二甲氨基丙基)氨磺?；?、N-[3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基]氨磺?；-(3-嗎啉代丙基)氨磺?；-(3-咪唑-1-基丙基)氨磺?；?、N-(3-異丙基氨基丙基)氨磺?；-(丙基)氨磺?；-(3-羥基-2，2-二甲基丙基)氨磺?；-(戊基)氨磺?；?、N-(烯丙基)氨磺?；?、N-(環(huán)丙基)氨磺酰基、N-(環(huán)丁基)氨磺?；?、N-(3-甲氧基芐基)氨磺酰基、N-(4-氟芐基)氨磺酰基、N-(苯乙基)氨磺?；?、N-(4-羥基苯乙基)氨磺酰基、N-(4-甲氧基苯乙基)氨磺?；蚇-(3-咪唑-1-基丙基)氨基甲?；?br> 優(yōu)選R2是式(I)的苯胺的氨基間位或?qū)ξ换鶊F(tuán)，更優(yōu)選R2與式(I)的苯胺的氨基相對；優(yōu)選E為-NHSO2-。
在本發(fā)明的另一方面，優(yōu)選E為-NHSO2-或-N(Ra)C(O)-；優(yōu)選q為0或1。
在本發(fā)明的一方面，優(yōu)選q為0；在本發(fā)明的另一方面，優(yōu)選q為1。
在本發(fā)明的還有一方面，優(yōu)選q為2；其中R2可相同或不同。
優(yōu)選p+q＝1或2；更優(yōu)選p+q＝1。
因此本發(fā)明的一個方面提供了如上所述的式(I)的化合物，其中R1為鹵基或C1-2烷基；P為0-2，其中R1可相同或不同；R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3- 8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代，并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-N(Ra)SO2-；其中Ra為氫；D獨立選自鹵基、羥基、C1-6烷氧基或N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1- 6烷基)2氨基；和G為C1-4烷基；和q為0或1；并且p+q＝1或2；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
因此本發(fā)明還有一方面提供了如上所述的式(I)的化合物，其中R1為氟基、氯基或甲基；P為0或1；R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B任選被D取代，并選自乙基、丙基、戊基、烯丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、芐基、苯乙基、四氫呋喃基甲基、吡啶基乙基、吡咯烷酮基丙基、嗎啉代丙基、咪唑基丙基、哌啶基乙基、吡咯烷基乙基(任選環(huán)上的氮原子被甲基取代)，E為-NHSO2-；D獨立選自氟基、羥基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、異丙基氨基和二甲氨基；和q為0或1；并且p+q＝1或2；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
因此本發(fā)明再一方面提供了如上所述的式(I)的化合物，其中P為0；R2選自氨磺?；?、N-(環(huán)丙基甲基)氨磺?；?、N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺?；?、N-(2-甲氧基乙基)氨磺?；?、N-(2-吡啶-2-基乙基)氨磺酰基、N-(2-哌啶-1-基乙基)氨磺?；-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]氨磺?；-(2-異丙基氨基乙基)氨磺酰基、N-(2，2，2-三氟乙基)氨磺?；?、N-(3-甲氧基丙基)氨磺?；-(3-乙氧基丙基)氨磺?；?、N-(3-異丙氧基丙基)氨磺酰基、N-(3-二甲氨基丙基)氨磺?；?、N-[3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基]氨磺?；?、N-(3-嗎啉代丙基)氨磺?；-(3-咪唑-1-基丙基)氨磺?；?、N-(3-異丙基氨基丙基)氨磺酰基、N-(丙基)氨磺?；-(戊基)氨磺?；-(烯丙基)氨磺?；?、N-(環(huán)丙基)氨磺?；?、N-(環(huán)丁基)氨磺?；-(3-甲氧基芐基)氨磺?；-(4-氟芐基)氨磺?；-(苯乙基)氨磺?；-(4-羥基苯乙基)氨磺?；蚇-(4-甲氧基苯乙基)氨磺酰基；和
q為1；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物為實施例1-27中的任一種產(chǎn)物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物為實施例1-31中的任一種產(chǎn)物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
在本發(fā)明其它方面，優(yōu)選的式(I)的化合物有4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-甲氧基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(4-氟芐基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(3-甲氧基丙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(環(huán)丙基)氨磺酰基]苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-[4-(N-烯丙基氨磺酰基)苯胺基]嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-[4-[N-丙基氨磺?；?苯胺基]嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-異丙基氨基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(3-異丙基氨基丙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、和4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-哌啶子基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
本發(fā)明的優(yōu)先方面涉及式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽。
本發(fā)明的另一方面提供了一種制備式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯的方法，所述方法包括(其中R1、R2、p和q如在式(I)中的定義，另有聲明除外)
a)使式(II)的嘧啶 式中L為可置換的基團(tuán)，與式(III)的苯胺反應(yīng) b)使式(IV)的嘧啶 式中L為可置換的基團(tuán)，與氨反應(yīng)；或c)使式(V)的化合物 與式(VI)的化合物反應(yīng) 式中X為O或S；R3為C1-6烷基；d)使式(V)的化合物與式(VID的化合物反應(yīng) e)其中R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，并且E為-NHSO2-；使式(VIII)的嘧啶 式中X為可置換的基團(tuán)，與式(IX)的胺反應(yīng)B-NH2(IX)并且隨后如果需要i)將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)的化合物；
ii)除去任何保護(hù)基團(tuán)；iii)形成藥學(xué)上可接受的鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
L是可置換的基團(tuán)，對于L適合的例子有鹵素或磺酰氧基，例如氯基、溴基、甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。
X是可置換的基團(tuán)，對于L適合的例子有鹵素，例如氟基、氯基或溴基。優(yōu)選X為氟基。
上述反應(yīng)的具體反應(yīng)條件如下。
a)和b)可將式(II)的嘧啶、式(III)的苯胺、式(IV)的嘧啶和氨一起在以下條件下反應(yīng)i)在適合的溶劑，如酮(如丙酮)或醇(如乙醇或丁醇)或芳烴(如甲苯或N-甲基吡咯烷)存在下，任選在適合的酸，如無機酸(如鹽酸或硫酸)或者有機酸(如乙酸或甲酸，或適合的路易斯酸)存在下，在0℃至回流的溫度，優(yōu)選回流的溫度下；或ii)在標(biāo)準(zhǔn)Buchwald條件下(例如參見J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Org.Chem.，62，1568和6066)，例如在乙酸鈀存在下，在合適的溶劑例如芳族溶劑例如甲苯、苯或二甲苯中，采用合適的堿例如無機堿例如碳酸銫或有機堿例如叔-丁醇鉀，在合適的配體例如2，2’-雙(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘存在下，并在25-80℃的溫度范圍內(nèi)。
式(II)和(IV)的嘧啶和式(III)的苯胺是商業(yè)可得的化合物，或它們在文獻(xiàn)中是已知的，或它們可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
c)和d)在適合的溶劑如N-甲基吡咯烷酮或丁醇中，在100-200℃、優(yōu)選150-170℃的溫度下，使式(V)的化合物和式(VI)或式(VII)的化合物一起反應(yīng)。該反應(yīng)優(yōu)選在適合的堿，例如甲醇鈉或碳酸鉀存在下實施。
式(V)和(VI)的化合物是商業(yè)可得的化合物，或它們在文獻(xiàn)中是已知的，或它們可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
e)可在堿，如無機堿如碳酸銫存在下，在惰性溶劑如甲苯或四氫呋喃的存在下，或在有機堿如過量的(IX)存在下，在25-80℃的溫度下使式(VIII)的化合物和式(IX)的化合物反應(yīng)。
式(VIII)的化合物(其中X為氟基)可根據(jù)以下方案制備 式(VIIIa)和(IX)的化合物是商業(yè)可得的化合物，或它們在文獻(xiàn)中是已知的，或它們可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
應(yīng)理解在本發(fā)明化合物中，一些不同的環(huán)取代基可通過標(biāo)準(zhǔn)芳族取代反應(yīng)導(dǎo)入，或在以上所提到的方法之前或緊跟其后通過常規(guī)官能基團(tuán)改性產(chǎn)生，這些方法包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。這些反應(yīng)和改性包括，例如通過芳族取代反應(yīng)的取代基的導(dǎo)入、取代基的還原、取代基的烷基化和取代基的氧化。這些方法的試劑和反應(yīng)條件是化學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的。芳族取代反應(yīng)的具體例子包括使用濃硝酸導(dǎo)入硝基；使用例如酰鹵和路易斯酸(例如三氯化鋁)在Friedel Crafts條件下的?；膶?dǎo)入；用烷基鹵和路易斯酸(例如三氯化鋁)在FriedelCrafts條件下的烷基的導(dǎo)入；和鹵素基團(tuán)的導(dǎo)入。改性的具體例子包括通過例如用鎳催化劑的催化氫化反應(yīng)或在鹽酸存在下并同時在加熱下用鐵處理，將硝基還原為氨基；將烷硫基氧化為烷基亞硫?；蛲榛酋；?。
還應(yīng)理解，在本文所提到的一些反應(yīng)中，保護(hù)化合物中任何敏感的基團(tuán)是必需/所要求的。必需或所要求保護(hù)的情況和適合的保護(hù)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的?？筛鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程使用常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)(為了說明，可參見T.W.Green，Protective Groups in OrganicSynthesis(有機合成中的基團(tuán)保護(hù))，John Wiley and Sons，1991)。因此，如果反應(yīng)物包括基團(tuán)例如氨基、羧基或羥基，在本文所提到的一些反應(yīng)中就需要保護(hù)這些基團(tuán)。
對于氨基或烷基氨基的適合的保護(hù)基是例如?；?例如烷酰基，如乙酰基)，烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔-丁氧基羰基)、芳基甲氧基羰基(例如芐氧基羰基)，或芳酰基(例如苯甲?；?。對于以上保護(hù)基團(tuán)的脫保護(hù)條件必須根據(jù)所選擇的保護(hù)基團(tuán)而定。因此，例如，?；?如烷?；蛲檠趸驶蚍减；?可以例如通過用與適合的堿如堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鋰或鈉)水解除去。另外，酰基(例如叔-丁氧基羰基)可以例如通過用適合的酸如鹽酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸處理除去，芳基甲氧基羰基(例如芐基氧基羰基)可以例如通過經(jīng)催化劑如載于碳上的鈀氫化除去，或通過用路易斯酸例如三(三氟乙酸)硼處理除去。對于伯氨基適合的作為選擇的保護(hù)基團(tuán)是例如鄰苯二甲?；摶鶊F(tuán)可以用烷基胺例如二甲氨基丙胺或用肼處理除去。
對于羥基適合的保護(hù)基團(tuán)是例如?；缤轷；?如乙?；?，芳?；绫郊柞；蚍蓟谆?例如芐基)。對于以上保護(hù)基團(tuán)的脫保護(hù)條件必需根據(jù)所選擇的保護(hù)基而改變。因此，例如?；缤轷；蚍减；梢岳缤ㄟ^用適合的堿例如堿金屬氫氧化物(如氫氧化鋰或鈉)水解除去。或者，芳基甲基例如芐基可通過經(jīng)催化劑例如載于碳上的鈀的氫化除去。
對于羧基適合的保護(hù)基團(tuán)是例如酯化基團(tuán)，例如甲基或乙基，這些基團(tuán)可以通過用堿例如氫氧化鈉水解除去；或例如叔-丁基，該基團(tuán)可以通過用酸例如有機酸如三氟乙酸處理除去；或例如芐基，該基團(tuán)可以例如通過催化劑例如載于碳上的鈀的氫化除去。
所述保護(hù)基團(tuán)可以在合成的任何方便的階段，用化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)技術(shù)除去。
如上文所述，本發(fā)明中定義的化合物具有抗細(xì)胞增殖活性，例如抗癌活性，確信該活性是由于該化合物的CDK抑制活性導(dǎo)致的。這些特性可以例如用以下所示方法評估測定使用以下簡稱HEPES是N-[(2-羥乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)]DTT是二硫蘇糖醇PMSF是苯基甲基磺酰氟在96孔板中，采用用于測定[γ-33-P]-腺苷三磷酸結(jié)合進(jìn)入試驗底物(GST-成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白；GST-Rb)的閃爍親近測定法(SPA-由Amersham獲得)，在體外激酶測試中檢驗所述化合物。在每一孔中放置待測試的化合物(在DMSO和水中稀釋到適合的濃度)，并在對照孔中放置作為抑制劑對照的roscovitine或放置作為陽性對照的DMSO。
將在25μl溫育緩沖液中稀釋的大約0.2μl的CDK2/細(xì)胞周期蛋白E部分純化的酶(其量根據(jù)酶的活性而定)加入到每個孔中，然后加入20μl的GST-Rb/ATP/ATP33的混合物(含有0.5μg GST-Rb和0.2μMATP和0.14μCi[γ-33-P]-腺苷三磷酸的溫育緩沖液)，將得到的混合物輕輕振蕩，然后在室溫下溫育60分鐘。
然后向每一孔中加入150μl含有20pM/孔抗-谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶，兔IgG(從Molecular Probes獲得)、61mM EDTA和含有0.05％疊氮化鈉的50mM HEPES pH7.5的終止溶液(0.8mg/孔蛋白A-PVT SPA珠粒(Amersham))。
用Topseal-S平板密封物將所述板密封，放置2小時，然后以2500rpm、1124xg的速度旋轉(zhuǎn)5分鐘。在Topcount上對該平板的每孔讀數(shù)30秒。
用于稀釋酶和底物混合物的溫育緩沖液含有50mM HEPES pH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100μM釩酸鈉、100μM NaF、10mM甘油磷酸鈉、BSA(終濃度為1mg/ml)。測試底物在所述測定中，只使用與GST標(biāo)記物融合的部分成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(Science 1987年3月13日；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)。進(jìn)行成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤基因編碼的氨基酸379-928(由成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤質(zhì)粒ATCCpLRbRNL獲得)的PCR，并將該序列克隆進(jìn)入pGEX 2T融合載體中(Smith D.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；其含有用于誘導(dǎo)型表達(dá)的tac啟動子，用于任何大腸桿菌宿主中使用的內(nèi)lac Iq基因和用于擴增氨基酸792-928的凝血酶裂解的編碼區(qū)(由Pharmacia Biotech得到)。將該序列再克隆進(jìn)入pGEX 2T中。
用標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)型表達(dá)技術(shù)將如此得到的成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤792-928序列表達(dá)到大腸桿菌(BL 21(DE3)pLysS細(xì)胞)中，并進(jìn)行如下的純化。
將大腸桿菌糊狀物再懸浮在10ml/g的NETN緩沖液(50mM TrispH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑酶肽和1μl/ml抑胃酶肽)中，并對每100ml勻漿超聲處理2×45秒。離心后，將上層清液上樣到10ml谷胱甘肽瓊脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)中，并用NETN緩沖液洗滌。用激酶緩沖液(50mM HEPES pH7.5，10mM MgCl2，1mM DTT，1mMPMSF，1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑酶肽和1μl/ml抑胃酶肽)洗滌后，將該蛋白用50mM溶于激酶緩沖液中的還原谷胱甘肽洗脫。收集含有GST-Rb(792-927)的流分，并向激酶緩沖液中透析過夜。通過十二烷基硫酸鈉(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠)，用8-16％Tris-甘氨酸凝膠(Novex，San Diego，USA)分析最終產(chǎn)物。CDK2和細(xì)胞周期蛋白E通過使用海拉細(xì)胞和活化的T細(xì)胞mRNA作為模板逆轉(zhuǎn)錄PCR離析CDK2和細(xì)胞周期蛋白E的可讀框，并克隆到昆蟲表達(dá)載體pVL1393(由Invitrogen 1995目錄號V1392-20得到)中。然后將CDK2和細(xì)胞周期蛋白E二重表達(dá)[用標(biāo)準(zhǔn)病毒Baculogold共感染技術(shù)]進(jìn)入昆蟲SF21細(xì)胞體系(從Fall Army Worm卵巢組織中衍生的秋粘蟲細(xì)胞，可購買得到)。產(chǎn)生細(xì)胞周期蛋白E/CDK2的實例以下實例提供在對于細(xì)胞周期蛋白E和CDK2的每一種病毒已二重感染MOI3的SF21細(xì)胞(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic中)中產(chǎn)生細(xì)胞周期蛋白E/CDK2的細(xì)節(jié)。
使用在滾瓶培養(yǎng)中生長至2.33×106細(xì)胞/ml的SF21細(xì)胞，以0.2×10E6細(xì)胞/ml接種到10×500ml滾瓶中。將該滾瓶在28℃下的滾動設(shè)備上溫育。
3天(72小時)后，將細(xì)胞計數(shù)，并得測得兩瓶的平均數(shù)是1.86×10E6細(xì)胞/ml(99％成活率)。然后以每種病毒一個MOI3的量，將培養(yǎng)物用二重病毒感染。
將病毒混合在一起，然后加入到培養(yǎng)物中，并將培養(yǎng)物放回到28℃的滾動設(shè)備上。
兩天(48小時)后，收獲5升感染后的培養(yǎng)物。收獲的總細(xì)胞計數(shù)是1.58×10E6細(xì)胞/ml(99％成活率)。將細(xì)胞以每批250ml的HeraeusOmifuge 2.0RS，在4℃下，以2500rpm旋轉(zhuǎn)30分鐘。將上清液棄去。Cdk2和細(xì)胞周期蛋白E的部分共純化通過將Sf21細(xì)胞重新懸浮于溶胞緩沖液(50mM Tris pH8.2、10mM氯化鎂、1mM DTT、10mM磷酸甘油酯、0.1mM原釩酸鈉、0.1mM氟化鈉、0.1mM PMSF、1μg/ml亮抑酶肽和1μg/ml抑蛋白酶肽)中，并在10ml Dounce勻化器中勻化2分鐘。離心后，將上層清液上樣到Poros HQ/M 1.4/100陰離子交換柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。以0-1M NaCl梯度(在溶胞緩沖液負(fù)型蛋白酶抑制劑中進(jìn)行)開始，用20倍柱體積量，將CDK2和細(xì)胞周期蛋白E共同洗脫。使用同時抗CDK2和抗細(xì)胞周期蛋白E的抗體(Santa Cruz Biotechnology，California，US)，通過蛋白質(zhì)印跡來檢測共同洗脫情況。
通過上述類似方法，可設(shè)計用于評價CDK4和CDK6抑制作用的測定方法。CDK2(EMBL登記號X62071)可與細(xì)胞周期蛋白A或細(xì)胞周期蛋白E(參見EMBL登記號M73812)一起使用，并且在PCT國際公布號WO 99/21845有關(guān)生物化學(xué)和生物學(xué)評價部分中進(jìn)一步詳細(xì)描述了這些測定方法，該文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中來。
雖然式(I)化合物的藥理特性隨結(jié)構(gòu)改變而變化，但通常在IC50濃度或在250μM至1nM劑量范圍內(nèi)可證明式(I)化合物所具有的活性。
當(dāng)在以上體外測定中檢測時，測定實施例21的CDK2抑制活性為IC50＝0.033μM，實施例23的活性為IC50＝0.017μM。
可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如通過測量細(xì)胞生長抑制作用和評估細(xì)胞毒性，評估本發(fā)明的化合物的體內(nèi)活性。
細(xì)胞生長的抑制作用可通過用Sulforhodamine B(SRB)染色細(xì)胞測量，該熒光染料可使蛋白染色，因此得到孔中蛋白(即細(xì)胞)的估計量(參見Boyd，M.R.(1989)NCI臨床前抗腫瘤藥發(fā)明篩選的狀況，Prin.Prac Oncol 101-12)。因此，以下提供細(xì)胞生長抑制作用測量方法的細(xì)節(jié)將細(xì)胞涂覆在96孔板中100ml容量的適合的培養(yǎng)基中；所述培養(yǎng)基是用于MCF-7、SK-UT-1B和SK-UT-1的Dulbecco’s ModifiedEagle培養(yǎng)基。將細(xì)胞附著過夜，然后加入以不同濃度溶于最大濃度為1％DMSO(v/v(體積比))中的抑制劑化合物。測定對照板得到給藥前細(xì)胞的數(shù)值。將細(xì)胞在37℃溫度下、(5％CO2)溫育三天。
三天以后，將TCA加入到所述板中，使最后濃度為16％(v/v)。然后將所述板在4℃下溫育1小時，棄去上清液并在自來水中洗滌所述板。干燥后，用30分鐘在37℃下加入100ml SRB染料(0.4％SRB在1％乙酸中的溶液)。除去過量的SRB并用1％乙酸洗滌所述板。將結(jié)合蛋白的SRB溶解到10mM Tris pH7.5中，并在室溫下振蕩30分鐘。在540nm處讀OD，并從抑制劑濃度與吸光度的半對數(shù)曲線中測定引起50％生長抑制作用的抑制劑濃度。降低所述光密度到低于實驗開始涂覆細(xì)胞時得到的光密度的化合物濃度給出毒性值。
當(dāng)試驗進(jìn)行SRB測定時，本發(fā)明化合物的典型IC50值在1mM至1nM范圍內(nèi)。
本發(fā)明另一方面提供含有如上文所定義的式(I)的嘧啶衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，并結(jié)合藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。
所述組合物可以是適合用于口服給藥的形式，例如片劑或膠囊，用于胃腸外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)的無菌溶液、懸浮液或乳液，用于局部給藥的軟膏或乳膏，或用于直腸給藥的栓劑。
一般來說，以上組合物可以通過常規(guī)方法用常規(guī)賦形劑制備。
通常將式(I)的化合物以每平方米動物體表面積5-5000mg，即大約0.1-100mg/kg范圍內(nèi)的單位劑量形式給予溫血動物，此為通常提供的治療有效劑量。單位劑量形式例如片劑或膠囊通常含有例如1-250mg活性成分。優(yōu)選日劑量在1-50mg/kg范圍內(nèi)。然而日劑量必需根據(jù)所治療宿主的情況、特定的給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。因此可由治療任何具體病人的醫(yī)師來決定最佳劑量。
本發(fā)明的又一方面提供如上所定義的式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，通過療法在人或動物治療方法中的用途。
我們已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所定義的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯是有效的細(xì)胞周期抑制劑(抗細(xì)胞增殖劑)，確信其特性是由它們的CDK抑制特性所致。因此，期望本發(fā)明的化合物可用于治療通過CDK酶單獨或部分介導(dǎo)的疾病或癥狀，即可用所述化合物在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK抑制效果。因此，本發(fā)明的化合物提供以CDK酶的抑制作用為特征的治療惡性細(xì)胞增殖的方法，即該化合物可用于產(chǎn)生通過CDK抑制作用單獨或部分介導(dǎo)的抗增殖效果。期望這些本發(fā)明的化合物具有廣泛的抗癌特性，這是因為CDK與許多常見人類癌癥例如白血病和乳腺、肺、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢癌有關(guān)。因此期望本發(fā)明的化合物對這些癌癥具有抗癌活性。另外期望本發(fā)明的化合物將具有抗各種白血病、淋巴的惡性腫瘤和實體瘤(例如癌)和在組織例如肝、腎、前列腺和胰腺中的肉瘤的活性。特別期望本發(fā)明的這些化合物有助于減緩原發(fā)和復(fù)發(fā)實體瘤例如結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺和皮膚癌的生長。更特別期望本發(fā)明的這類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或體內(nèi)其可水解的酯可抑制這些原發(fā)和復(fù)發(fā)的、與CDK有關(guān)的實體瘤，尤其是那些主要依賴于CDK而生長和擴散的腫瘤，包括例如一些結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺、外陰和皮膚腫瘤。
另外期望本發(fā)明的化合物在更大范圍的其它疾病中具有對抗其它細(xì)胞增殖疾病的活性，所述其它疾病包括白血病、纖維增生和分化紊亂、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Kaposi肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和伴有視網(wǎng)膜血管增生的眼疾病。
因此，根據(jù)本發(fā)明的這個方面，提供一種如上文中所定義的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯作為藥物的用途；如上文中所定義的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，在用于在溫血動物如人體中產(chǎn)生細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)效應(yīng)的藥物制備中的用途。尤其是，通過CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2的抑制作用，阻止進(jìn)入或通過S階段而產(chǎn)生細(xì)胞周期抑制作用。
根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，提供一種如上文中所定義的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，在制備用于治療以下疾病的藥物中的用途，所述疾病包括癌癥(實體腫瘤和白血病)、成纖維細(xì)胞增殖和分化紊亂、牛皮癬，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Kaposi肉瘤、血管瘤，急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化，動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和視網(wǎng)膜血管增生的眼疾病，特別是癌癥。
根據(jù)本發(fā)明的這個方面的另一特征，提供一種在需要此治療的溫血動物例如人體中產(chǎn)生細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)效應(yīng)的方法，該方法包括給予所述動物有效量的如以上所定義的化合物。特別是，通過CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2抑制作用，阻止進(jìn)入或通過S階段而產(chǎn)生抑制作用。
根據(jù)本發(fā)明的這個方面的另一特征，提供一種在需要此治療的溫血動物例如人體中產(chǎn)生細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)效應(yīng)的方法，該方法包括給予所述動物有效量的如以上所定義的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。特別是，通過CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2抑制作用，阻止進(jìn)入或通過S階段而產(chǎn)生抑制作用。
根據(jù)本發(fā)明的這個方面的另一特征，提供一種在需要此治療的溫血動物例如人體中治療癌癥的方法，該方法包括給予所述動物有效量的如以上所定義的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
如以上所述，用于治療或預(yù)防性治療特定的細(xì)胞增殖疾病所需的劑量大小必須根據(jù)所治療的宿主、給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而改變。考慮單位劑量范圍是例如1-100mg/kg，優(yōu)選1-50mg/kg。
可將以上定義的CDK抑制活性作為單一療法使用或可包括在除本發(fā)明的化合物外的一種或多種其它物質(zhì)和/或療法中。這種聯(lián)合療法可通過將各治療組分以同時、連續(xù)或分別給藥的方式完成。在腫瘤治療學(xué)領(lǐng)域，通常使用不同形式的聯(lián)合療法治療每個癌癥病人。在腫瘤治療學(xué)中，除以上定義的細(xì)胞周期抑制療法外，所述聯(lián)合療法的其它組成部分可以是外科手術(shù)、放射療法或化學(xué)療法。所述化學(xué)療法可包括三種主要治療劑類型(i)通過與以上所定義的機制相同或不同的機制發(fā)揮作用的其它細(xì)胞周期抑制劑；(ii)細(xì)胞生長抑制劑，例如抗雌激素(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如anastrozole、來曲唑、伏氯唑(vorazole)、依西美坦)、抗孕激素類、抗雄激素物質(zhì)(例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如乙酸戈舍瑞林、luprolide)、睪酮5α-二氫還原酶抑制劑(例如非那雄胺)、抗-侵襲劑(例如金屬蛋白酶抑制劑如marimastat和尿激酶纖溶酶激活物受體功能抑制劑)和生長因子功能抑制劑(這些生長因子包括例如血小板衍化的生長因子和肝細(xì)胞生長因子，這些抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和(iii)如在腫瘤治療學(xué)中使用的抗增殖/抗腫瘤藥物和其組合物，例如抗代謝產(chǎn)物(例如抗葉酸劑如甲氨蝶呤、氟嘧啶如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、胞嘌呤阿糖胞苷)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類抗生素如多柔比星、柔紅霉素、表柔比星和伊達(dá)比星、絲裂霉素-C、放線菌素D、普卡霉素)；鉑衍生物(例如順鉑、卡鉑)；烷基化劑(例如氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、塞替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿如長春新堿和taxoid如紫杉醇、taxotere)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、topotecan)。根據(jù)本發(fā)明這一方面，提供包含如上文定義的式(I)的化合物和如上文定義用于癌癥聯(lián)合療法的其它抗腫瘤物質(zhì)的藥用產(chǎn)物。
除了用作治療藥物外，式(I)的化合物和它們藥學(xué)上可接受的鹽也可以作為新的藥理研究工具，作為尋找新治療劑部分用于評估實驗動物例如貓、狗、免、猴、大鼠和小鼠體內(nèi)細(xì)胞周期活性抑制劑的效應(yīng)的體外和體內(nèi)試驗系統(tǒng)的開發(fā)和標(biāo)準(zhǔn)化中。
在此所述的本發(fā)明化合物的可替換的和優(yōu)選的實施方案也適用于以上其它的藥物組合物、步驟、方法、用途和藥物制備特征中。
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物 式中R1為鹵基、硝基、氰基、羥基、氨基、羧基、氨基甲?；?、巰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；p為0-4；其中R1可相同或不同；R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)；其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基、雜環(huán)基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基；其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基、雜環(huán)基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代；并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-C(O)-、-N(Ra)C(O)-、-C(O)N(Ra)-、-S(O)r-、-SO2N(Ra)-或-N(Ra)SO2-；其中Ra為氫或任選被一個或多個D取代的C1-6烷基，r為1-2；D獨立選自鹵基、硝基、氰基、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、羧基、氨基甲?；?、巰基、氨磺?；1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷酰基氨基、N-(C1-6烷基)氨基甲?；?、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基、C1-6烷基S(O)a，其中a為0-2，C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基和N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基；G選自C1-4烷基、C1-4烷酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基羰基、氨基甲?；?、N-(C1-4烷基)氨基甲?；，N-(C1-4烷基)氨基甲?；?、芐基、芐氧基羰基、苯甲?；捅交酋；?；和q為0-2；其中R2可相同或不同；并且其中p+q＝1-5；條件是所述化合物不是2-(2，4-二甲基苯胺基)-4-氨基-5-氰基嘧啶；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
2.權(quán)利要求1所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述R1為氯基；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
3.權(quán)利要求1或2所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述p為0或1；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
4.權(quán)利要求1-3中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述R2為氨磺?；駼-E-基團(tuán)，其中B選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或(雜環(huán)基)C1-6烷基任選在碳上被一個或多個D取代，并且其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則氮可任選被選自G的基團(tuán)取代；E為-N(Ra)SO2-或-N(Ra)C(O)-；其中Ra為氫；D獨立選自鹵基、羥基、C1-6烷氧基或N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1- 6烷基)2氨基；和G為C1-4烷基；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
5.權(quán)利要求1-4中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述R2選自氨磺酰基、N-(環(huán)丙基甲基)氨磺?；?、N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺?；?、N-(2-甲氧基乙基)氨磺?；?、N-(2-吡啶-2-基乙基)氨磺酰基、N-(2-哌啶-1-基乙基)氨磺?；?、N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]氨磺酰基、N-(2-異丙基氨基乙基)氨磺酰基、N-(2，2，2-三氟乙基)氨磺?；?、N-(2-二甲氨基乙基)氨磺?；?、N-(3-甲氧基丙基)氨磺?；?、N-(3-乙氧基丙基)氨磺酰基、N-(3-異丙氧基丙基)氨磺酰基、N-(3-二甲氨基丙基)氨磺?；-[3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基]氨磺?；?、N-(3-嗎啉代丙基)氨磺?；?、N-(3-咪唑-1-基丙基)氨磺?；-(3-異丙基氨基丙基)氨磺?；-(丙基)氨磺?；-(3-羥基-2，2-二甲基丙基)氨磺?；?、N-(戊基)氨磺?；?、N-(烯丙基)氨磺?；?、N-(環(huán)丙基)氨磺?；-(環(huán)丁基)氨磺?；-(3-甲氧基芐基)氨磺?；-(4-氟芐基)氨磺?；-(苯乙基)氨磺?；?、N-(4-羥基苯乙基)氨磺?；?、N-(4-甲氧基苯乙基)氨磺酰基和N-(3-咪唑-1-基丙基)氨基甲?；?；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
6.權(quán)利要求1-5中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述q為0或1；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
7.權(quán)利要求1-6中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，其中所述p+q為1；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
8.權(quán)利要求1-7中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，所述化合物選自4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-甲氧基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(四氫呋喃-2-基甲基)氨磺酰基]苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(4-氟芐基)氨磺酰基]苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(3-甲氧基丙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(環(huán)丙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-[4-(N-烯丙基氨磺?；?苯胺基]嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-[4-[N-丙基氨磺?；?苯胺基]嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-異丙基氨基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(3-異丙基氨基丙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶、和4-氨基-5-氰基-2-{4-[N-(2-哌啶子基乙基)氨磺?；鵠苯胺基}嘧啶；或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
9.一種制備式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯的方法，所述方法包括(其中R1、R2、p和q如在權(quán)利要求1中的定義，另有聲明除外)a)使式(II)的嘧啶 式中L為可置換的基團(tuán)，與式(III)的苯胺反應(yīng) b)使式(IV)的嘧啶 式中L為可置換的基團(tuán)，與氨反應(yīng)；或c)使式(V)的化合物 與式(VI)的化合物反應(yīng) 式中X為O或S；R3為C1-6烷基；d)使式(V)的化合物與式(VII)的化合物反應(yīng) e)式中R2為氨磺酰基或B-E-基團(tuán)，并且E為-NHSO2-；使式(VIII)的嘧啶 式中X為可置換的基團(tuán)，與式(IX)的胺反應(yīng)B-NH2(IX)并且隨后如果需要i)將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)的化合物；ii)除去任何保護(hù)基團(tuán)；iii)形成藥學(xué)上可接受的鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
10.一種藥物組合物，所述藥物組合物包括權(quán)利要求1-8中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯，結(jié)合藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
11.用于通過療法治療人或動物的方法中的權(quán)利要求1-8中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
12.權(quán)利要求1-8中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯作為藥物的用途。
13.權(quán)利要求1-8中任一項所要求保護(hù)的式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
14.一種在需要此治療的溫血動物例如人體中治療癌癥的方法，該方法包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-8中任一項所要求保護(hù)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
全文摘要
本發(fā)明公開式(I)的化合物，其中R
文檔編號A61P21/00GK1419548SQ0180715
公開日2003年5月21日 申請日期2001年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月28日
發(fā)明者A·P·托馬斯 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司