專利名稱：鄰取代的鄰氨基苯甲酸酰胺及其作為藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及鄰取代的鄰氨基苯甲酸酰胺及其作為治療由持續(xù)性血管生成引發(fā)的疾病的藥物的應用。
直接或者間接抑制VEGF受體可用于治療此等疾病以及其他由VEGF誘發(fā)的病理性血管生成和血管滲透性病癥如腫瘤血管生成。例如，已知腫瘤的生長可用可溶性受體以及抗VEGF的抗體來抑制。
持續(xù)性血管生成是由因子VEGF通過其受體誘發(fā)的。為使VEGF可發(fā)揮該作用，VEGF必須結合至受體上，并誘發(fā)酪氨酸磷酸化。
已知苯基-鄰氨基苯甲酰胺衍生物可用作血管緊張素II拮抗劑(EP564356)以及用作抗炎劑和抗?jié)兓衔?US3,409,668)。
R6代表-CH3或氯，R2代表吡啶基或者以下基團 R3代表氫或氟。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的特征在于，其具有類似的選擇性質(zhì)，并因此是有價值的化合物，可防止腫瘤的生長和繁殖。
根據(jù)本發(fā)明的通式I化合物還可包括可能的互變異構體并包含E-或Z-異構體，或者如果存在手性中心，也可包括消旋體和對映體。
式I的化合物及其生理相容鹽，由于相對于VEGF受體的磷酸化具有抑制活性，可用作藥物?；谄渥饔媚Ｊ?，根據(jù)本發(fā)明的化合物適合于治療由持續(xù)性血管生成導致的疾病。
因為已確定式I的化合物是酪氨酸激酶KDR和FLT的抑制劑，所以它們特別適合治療那些經(jīng)由VEGF受體引發(fā)的持續(xù)性血管生成或者血管滲透性增加所導致的疾病。
本發(fā)明還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物作為酪氨酸激酶KDR和FLT之抑制劑的用途。
因此，本發(fā)明還提供用于治療腫瘤的藥物或其用途。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可單獨使用或者用于制劑中，作為治療以下疾病的藥劑牛皮癬，關節(jié)炎如類風濕關節(jié)炎，血管瘤、血管纖維瘤，眼疾病如糖尿病視網(wǎng)膜病、新血管性青光眼，腎病如腎小球性腎炎、糖尿病性腎病、惡性腎壞死、栓塞性微血管病綜合癥、移植物排異反應和腎小球病，纖維變性疾病如肝硬化、腎小球膜細胞增殖性疾病和動脈硬化，以及神經(jīng)組織損傷。
根據(jù)本發(fā)明的化合物還可用于抑制充氣導管治療后、血管修復時或者插入使血管保持打開的機械裝置如stent后的血管再閉合。
在治療神經(jīng)組織損傷時，用本發(fā)明的化合物可防止損傷部位上的快速疤痕形成，也就是說，在軸突重新連接之前防止疤痕形成的發(fā)生。因此有利于神經(jīng)成分的重建。
用根據(jù)本發(fā)明的化合物還可抑制患者中腹水的形成。也可抑制VEGF誘發(fā)的浮腫。
此等藥物、其制劑和用途也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
因此，本發(fā)明還涉及通式I的化合物在制備用于治療以下疾病的藥物中的應用腫瘤，牛皮癬，關節(jié)炎如類風濕關節(jié)炎，血管瘤、血管纖維瘤，眼疾病如糖尿病視網(wǎng)膜病、新血管性青光眼，腎病如腎小球性腎炎、糖尿病性腎病、惡性腎壞死、栓塞性微血管病綜合癥、移植物排異反應和腎小球病，纖維變性疾病如肝硬化、腎小球膜細胞增殖性疾病和動脈硬化，以及神經(jīng)組織的損傷，以及在制備用于抑制充氣導管治療后、血管修復時或者插入使血管保持打開的機械裝置如stent后的血管再閉合的藥物中的應用。
在使用通式I的化合物作為藥物時，可將其制成藥物制劑，除活性成分外，該制劑在用于腸道或非胃腸道給藥時還可包含合適的藥用有機或者無機惰性材料，如水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇等。藥物制劑可為固體劑型，例如片劑、包衣片劑、栓劑、膠囊劑，或者為液體劑型，例如溶液劑、混懸劑或者乳劑。它們可任選包含佐劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑或者乳化劑、改變滲透壓的鹽或者緩沖劑。
在非胃腸道給藥時，活性化合物在聚羥基乙氧基化蓖麻油中的注射液或者混懸液、尤其是水溶液是合適的。
作為載體系統(tǒng)，還可使用表面活性佐劑如膽酸的鹽或者動物或植物磷脂，也包括它們的混合物以及脂質(zhì)體或組分。
在口服給藥時，含有滑石和/或烴載體或粘合劑如乳糖、玉米淀粉或者馬鈴薯淀粉的片劑、包衣片劑或者膠囊劑是合適的。給藥也可用液體劑型進行，如任選添加有甜味劑的汁液。
活性成分的劑量可根據(jù)給藥方法、患者的年齡和體重、待治療疾病的類型和嚴重程度等類似因素來確定。每日劑量為0.5-2000mg，優(yōu)選為50-1000mg，該劑量可以單個劑量一次性給藥或者分成2個或者更多個日劑量給藥。
上述制劑和給藥劑型也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
制備本發(fā)明的化合物可根據(jù)本領域技術人員已知的方法進行。例如，式I的化合物可如下制得(a)通式II的化合物 其中R4-R7與以上定義相同，T代表H或者保護基，A是鹵素或者OR13，而R13代表氫原子、C1-4烷基或C1-4?；蛘吲cT閉合成環(huán)，首先進行N-烷基化，將COA轉化為酰胺，然后任選地脫除保護基，或者首先轉化為酰胺，然后進行N-烷基化，或者(b)通式III的化合物 其中R4-R7與以上定義相同，T代表H或者保護基，使其鄰位金屬化，然后通過親電試劑的捕捉轉化為酰胺，接著脫除保護基，并對氨基進行烷基化，或者(c)將通式IV的化合物轉化為酰胺，然后脫除保護基，接著使氨基進行烷基化， 其中R4-R7與以上定義相同，T代表H或者保護基，而B代表鹵素或者O-三氟甲磺酸基(triflate)、O-甲苯磺酸基或者O-甲磺酸基。
反應步驟的順序可相互交換。
酰胺的形成可根據(jù)文獻中已知的方法進行。
對于酰胺的形成，可由相應的酯起始。根據(jù)J.Org.Chem.1995，8414的方法，使所述酯與三甲基鋁和相應的胺在0℃-溶劑沸點的溫度下在溶劑如甲苯中反應。該方法也可用于未經(jīng)保護的鄰氨基苯甲酸酯。如果分子包含兩個酯基，則可將它們都轉化為相同的酰胺。
在使用腈替代酯時，在類似的條件下得到脒。
但是，對于酰胺的形成，也可使用肽化學中所有已知的方法。例如，相應的酸優(yōu)選在室溫下與HATU中的胺在非質(zhì)子極性溶劑如二甲基甲酰胺中反應，其中經(jīng)過活化酸衍生物，該衍生物可例如用羥基苯并三唑和碳化二亞胺如二異丙基碳化二亞胺得到，或者用預先形成的試劑如HATU(Chem.Comm.1994，201)或者BTU得到，反應溫度為0℃-溶劑的沸點溫度，優(yōu)選為80℃。該方法也可用于未經(jīng)保護的鄰氨基苯甲酸。對于酰胺的形成，方法中也可使用混合酸酐、咪唑烷(imidazolide)或者疊氮化物。例如以酰胺的形式預先保護氨基并不是在所有情況下都是必須的，但反應可受到有益的影響。具體的起始物是靛紅酸酐，通過該試劑可同時進行氨基的保護和酸官能團的活化。
如果預先將胺轉化為BOC保護的化合物，則可通過與金屬有機化合物如正丁基鋰的反應對鄰位進行金屬化，然后與異氰酸酯或者異硫氰酸酯反應以形成鄰氨基苯甲酸酰胺或者鄰氨基苯甲酸硫代酰胺。該鄰位上的溴或碘取代基可通過鹵素-金屬交換促進鄰位的金屬化反應。作為溶劑合適的是醚如二乙醚或者四氫呋喃，或者烴如己烷，或者它們的混合物。添加絡合劑如四甲基乙二胺(TMEDA)是有利的。溫度范圍是在-78℃至室溫之間。BOC-酰胺的裂開通過用酸如三氟乙酸處理來進行的，其中可不使用溶劑或者在溶劑如二氯甲烷中，溫度為0℃-溶劑的沸點，或者在溶劑如乙醇或者二惡烷中用鹽酸水溶液、優(yōu)選1N鹽酸處理，其溫度為室溫-溶劑的沸點溫度。
酰胺基也可通過羰基化反應來引入。為此目的，可由相應的式IV化合物(o-碘、o-溴或者o-triflyloxyaniline)起始，在常壓或者升高的壓力下與一氧化碳反應，然后在過渡金屬催化劑如氯化鈀(II)或者乙酸鈀(II)或者四(三苯基膦)鈀存在下于溶劑如二甲基甲酰胺中與胺反應。配位體如三苯基膦的添加以及堿如三丁基胺的添加是有利的(例如參見J.Org.Chem.1974，3327；J.Org.Chem.1996，7482；Synth.Comm.1997，367；Tetr.Lett 1998，2835)。
如果要在分子中引入不同的酰胺基，例如，必須在制備第一個酰胺基后向分子中引入第二個酯基然后酰胺化，或者分子中一個基團為酯而另一個基團為酸，然后根據(jù)各種方法順序地使這兩個基團酰胺化。
根據(jù)Bull Soc.Chim.Belg.87，229，1978，與diphosphadithianes反應，或者在諸如吡啶的溶劑中或者甚至沒有溶劑的情況下，于0-200℃下與五硫化磷反應，由此可由鄰氨基苯甲酸酰胺制得硫代酰胺。
產(chǎn)物也可作為富電子芳香化合物進行親電芳香取代。該取代反應發(fā)生在氨基或者氨基之一的鄰或對位中。然后，可在Friedel-Crafts催化劑如三氯化鋁存在下，在溶劑如硝基甲烷、二硫化碳、二氯甲烷或者硝基苯中，在0℃-溶劑的沸點溫度、優(yōu)選室溫下，用酰氯進行Friedel-Crafts?；?br> 根據(jù)文獻中已知的方法，在不用溶劑的情況下，例如通過硝基化酸、各種濃度的硝酸，或者通過金屬硝酸鹽如硝酸銅(II)或者硝酸鐵(III)，在極性溶劑如乙醇或者冰乙酸或者乙酸酐中，可引入一個或者多個硝基。
可根據(jù)文獻中已知的方法引入鹵素，例如在極性溶劑如四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷、冰乙酸、或者二甲基甲酰胺中與溴、N-溴代或者N-碘代琥珀酰亞胺或者三溴化氫烏洛托品(urotropin hydrotribromide)反應。
硝基的還原可在極性溶劑中于室溫或者高溫下進行。作為還原反應的催化劑，合適的有金屬如Raney鎳或者貴金屬催化劑如任選在載體上的鈀或鉑或氫氧化鈀。替代氫氣，例如也可按照已知的方式使用甲酸銨、環(huán)己烯或肼。也可使用還原劑如氯化亞錫(II)或者氯化鈦(III)，如復合金屬氫化物，任選存在重金屬鹽。也可使用鐵作為還原劑。在酸如乙酸或者氯化銨存在下，任選添加溶劑如水、甲醇、鐵/氨水等，進行反應。在反應時間延長時，可按該變化方式進行氨基的酰基化。
如果希望對氨基進行烷基化，則可根據(jù)通常使用的方法例如用烷基鹵化物，或者根據(jù)Mitsonubo的方法通過在例如三苯基膦和偶氮二羧酸酯存在下與醇反應，進行烷基化。胺也可用醛或酮進行還原性烷基化，其中在還原劑如氰基硼氫化鈉存在下，在合適的惰性溶劑如乙醇中，于0℃-溶劑的沸點溫度下，進行所述反應。如果由伯氨基起始，則任選順序地用兩種不同的羰基化合物進行反應，由此得到混合衍生物(參考文獻Verardo等人，Synthesis(1993)，121；Synthesis(1991)，447；Kawaguchi，Synthesis(1985)，701；Mocovic等人，Synthesis(1991)，1043)。有利的是首先在溶劑中通過醛與胺的反應形成Schiff堿，其中溶劑例如是乙醇或甲醇，并任選添加輔劑如冰乙酸，然后僅添加還原劑如氰基硼氫化鈉。
分子中烯基或炔基的氫化可按照通常的方法例如通過催化活化氫化來進行。對于催化劑，可使用重金屬如任選在載體上的鈀或鉑，或者Raney鎳。溶劑可為醇如乙醇。反應的溫度為0℃-溶劑的沸點，壓力最高至20bar，但優(yōu)選在室溫和常壓下。通過使用催化劑例如Lindlar催化劑，可將叁鍵部分地氫化為雙鍵，由此優(yōu)選地制備Z-形式。
氨基的?；筛鶕?jù)Schotten-Baumann法在弱堿性pH的水溶液中，按照通常的方式用例如酰鹵或者酸酐進行，其中任選存在堿如二甲基氨基吡啶，溶劑例如為二氯甲烷、四氫呋喃或吡啶，或者在冰乙酸中通過與酸酐的反應進行。
通過氨基引入鹵素例如氯、溴、碘或疊氮基也可例如根據(jù)Sandmeyer法用重氮鹽進行，該重氮鹽是通過腈與氯化亞銅(I)或者溴化亞銅(I)的反應中間形成的，其中存在相應的酸，如鹽酸或者氫溴酸，或者用碘化鉀。
如果使用有機亞硝酸鹽，通過例如添加二碘甲烷或者四硼甲烷，在溶劑如二甲基甲酰胺中可引入鹵素。氨基的脫除可通過以下方法實現(xiàn)在四氫呋喃中與有機亞硝酸鹽反應，或者用例如磷酸進行重氮化并還原性蒸煮重氮鹽，任選添加氧化亞銅(I)。
氟的引入可例如如下實現(xiàn)通過四氟硼酸重氮鹽的Balz-Schiemann反應，或者根據(jù)J.Fluor.Chem.76，1996，59-62，在HF-吡啶存在下進行重氮化，隨后在任選存在氟離子源如四丁基氟化銨時進行蒸煮。
疊氮基的引入可在重氮化后通過室溫下與疊氮化鈉的反應來實現(xiàn)。
醚裂開可根據(jù)文獻中已知的方法來進行。在此情況下，也可在分子中存在的幾個基團中實現(xiàn)選擇性的裂開。此時，例如在溶劑如二氯甲烷中，于-100℃至溶劑沸點、優(yōu)選-78℃的溫度下，用三溴化硼處理醚。但是，也可在溶劑如二甲基甲酰胺中用硫代甲醇鈉進行醚裂開。反應溫度可在室溫-溶劑沸點的溫度之間，優(yōu)選在150℃。
諸如吡啶-2-酮或者2-羥基吡啶等的酰胺的N-烷基化或者O-烷基化可用文獻中已知的方法實現(xiàn)。因此，N-烷基化可如下實現(xiàn)在溶劑如二甲基甲酰胺中用堿如氫化鈉或者碳酸鉀，然后用烷基鹵如碘甲烷進行烷基化。O-烷基化可如下實現(xiàn)在溶劑如四氫呋喃或者甲苯或者優(yōu)選它們的混合物中，用堿如碳酸銀以及烷基鹵如碘甲烷進行烷基化。O-烷基化也可在惰性溶劑如二氯甲烷中用三烷基四氟硼酸氧進行轉化期間得到。在溶劑如甲醇或甲苯、優(yōu)選它們的混合物中，于室溫-溶劑沸點的溫度、優(yōu)選室溫下，通過與疊氮甲烷或者三甲基甲硅烷基疊氮甲烷的反應得到由N-和O-烷基衍生物組成的混合物。該方法使得可以相對于苯甲酸酰胺選擇性地對吡啶酮進行烷基化。
可根據(jù)常規(guī)使用的方法如結晶法、色譜法或者鹽形成法，將異構體混合物分離為對映體或者E/Z異構體。
鹽的制備可按照常規(guī)方法進行，使式I化合物的溶液與等量或者過量的堿或酸混合，這些堿或酸可任選在溶液中，然后分離沉淀物或者按照常規(guī)方法處理溶液。
以下實施例是對制備本發(fā)明化合物的解釋，但本發(fā)明的范圍絕不僅限于這些實施例。
2、在氮氣下將880mg的N-[2-氧-2H-1-苯并吡喃-3-基]-2-硝基-苯甲酸酰胺引入至30ml的乙醇中，然后與11ml的環(huán)己烯和176mg在炭上的氫氧化鈀混合，并在110℃下攪拌2小時。過濾掉催化劑，然后蒸發(fā)濃縮濾液至幾乎干燥狀態(tài)。抽濾產(chǎn)物，得到593mg的N-[2-氧-2H-1-苯并吡喃-3-基]-2-氨基-苯甲酸酰胺。
3、在室溫下將645mg的N-[2-氧-2H-1-苯并吡喃-3-基]-2-氨基-苯甲酸酰胺引入至50ml甲醇和170ml冰乙酸中，然后與0.38ml的4-吡啶甲醛混合。該混合物攪拌15小時，然后與206mg的氰基硼氫化鈉混合。攪拌24小時，并抽濾結晶。將結晶與70ml的甲醇、40ml的冰乙酸和95μl的4-吡啶甲醛混合，接著攪拌48小時。添加57mg的氰基硼氫化鈉，并攪拌15小時。抽濾產(chǎn)物，用甲醇洗滌，然后干燥。得到521mg的N-[2-氧-2H-1-苯并吡喃-3-基]-2-[(4-吡啶基)甲基]氨基-苯甲酸酰胺，其熔點為195-197℃。
按照類似的方法制備以下化合物
以下的應用例用于說明根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理作用和用途，但本發(fā)明的范圍不限于這些實施例中。測試用溶液原料溶液原料溶液A3mM ATP，在水中，pH7.0(-70℃)原料溶液Bg-33P-ATP 1mCi/100μl原料溶液Cpoly-(Glu4Tyr)10mg/ml，在水中稀釋用溶液底物溶劑100mM的DTT，10mM氯化錳，100mM氯化鎂酶溶液120mM Tris/HCl，pH7.5，10μM氧化釩鈉應用例1在根據(jù)本發(fā)明的化合物存在時對KDR-和FLT-1激酶活性的抑制作用在向下變尖的微滴定板(沒有蛋白結合)中，添加10μl的底物混合物(10μl體積的ATP原料溶液A+25μCi的g-33P-ATP(約2.5μl的原料溶液B)+30μl的poly-(Glu4Tyr)原料溶液C+1.21ml的底物溶劑)、10μl的抑制劑溶液(相應于稀釋液的物質(zhì)，3％DMSO在底物溶劑中，作為對照)、和10μl的酶溶液(11.25μg的酶原料溶液(KDR或者FLT-1激酶)于4℃下稀釋在1.25ml酶溶液中)。充分混合，然后在室溫下溫育10分鐘。接著添加終止溶液(250mM的EDTA，pH7.0)，混合，然后將10μl的溶液轉移至P81磷酸纖維素過濾器上。用0.1M的磷酸洗滌多次。干燥濾紙，用Meltilex涂敷，然后在microbeta計數(shù)器中測量。
由抑制劑濃度確定IC50值，其是在除去空白讀數(shù)(EDTA終止的反應)后將磷酸摻入抑制為未摻入的50％所需要的抑制劑濃度。
激酶抑制作用IC50的結果(μM)示于以下表中。應用例2C試劑盒分離的激酶抑制作用實驗原料溶液10倍溶劑400mmol的TrisHCl，pH7.5；10mM的DTT；10mM的氯化錳；100mM的氯化鎂；0.25％聚乙二醇20000抑制劑2mM二甲基亞砜溶液底物原料液3mg/ml的poly(Glu4Tyr)n水溶液，Sigma P275，冷凍部分ATP原料液37.5μM的ATP水溶液，設定在pH為7.5，冷凍部分10倍釩酸鹽溶液1mM釩酸鈉水溶液停止溶液250mM的亞乙基四胺乙酸(EDTA)，pH7.0過濾-洗滌溶液0.5％磷酸測試溶液用于125分析的底物溶液10μl的ATP(37.5μM)、25μCi的γ33P-ATP(約+2.5μl的Amersham redivue溶液)和10μl的poly-(glu，tyr)與1.23ml的溶劑(1×)混合。抑制劑溶液在溶劑(1×)中使化合物達到所希望的濃度。酶溶液用溶劑(1×)使相應的酶制劑達到所希望的濃度，得到1.24ml。然后添加12.5μl的釩酸鈉溶液。實驗按照以下順序將各組分添加至圓底或者尖底微滴定板中10μl的抑制劑，3×最終濃度，10μl的底物混合物，混合上述組分，然后添加以下組分開始反應10μl的酶制劑。
反應液保溫10分鐘，然后通過添加10μl的停止溶液使反應停止。將10μl經(jīng)過以上處理的反應液添加至磷酸纖維素過濾器中，在磷酸中重新洗滌，然后干燥，接著在meltilex閃爍器中熔融并測量。

KH＝?jīng)]有抑制
權利要求
1.通式I的化合物及其異構體和鹽 其中R1代表以下基團， 其中R5代表氯、溴或OCH3， 其中R7代表CH3或氯， 其中R8代表CH3、氟、氯或CF3，R4代表氟、氯、溴、-CF3、-N＝C、CH3-、-OCF3或-CH2OH，R6代表-CH3或氯，R2代表吡啶基或者以下基團 R3代表氫或氟。
2.如權利要求1所述的通式I化合物在制備用于治療腫瘤，牛皮癬，關節(jié)炎如類風濕關節(jié)炎，血管瘤、血管纖維瘤，眼疾病如糖尿病視網(wǎng)膜病、新血管性青光眼，腎病如腎小球性腎炎、糖尿病性腎病、惡性腎壞死、栓塞性微血管病綜合癥、移植物排異反應和腎小球病，纖維變性疾病如肝硬化、腎小球膜細胞增殖性疾病和動脈硬化，和神經(jīng)組織的損傷的藥物，以及用于抑制充氣導管治療后、血管修復時或者插入使血管保持打開的機械裝置如stent后的血管再閉合的藥物中的應用。
3.一種藥物，其包含至少一種如權利要求1所述的化合物。
4.如權利要求3所述的藥物，其是用于治療腫瘤，牛皮癬，關節(jié)炎如類風濕關節(jié)炎，血管瘤、血管纖維瘤，眼疾病如糖尿病視網(wǎng)膜病、新血管性青光眼，腎病如腎小球性腎炎、糖尿病性腎病、惡性腎壞死、栓塞性微血管病綜合癥、移植物排異反應和腎小球病，纖維變性疾病如肝硬化、腎小球膜細胞增殖性疾病和動脈硬化，和神經(jīng)組織的損傷；以及用于抑制充氣導管治療后、血管修復時或者插入使血管保持打開的機械裝置如stent后的血管再閉合。
5.一種藥物制劑，其包含如權利要求1所述的化合物、如權利要求3或4所述的藥物以及合適的制劑輔劑和載體。
6.如權利要求1所述的通式I化合物作為酪氨酸激酶KDR和FLT之抑制劑的應用。
7.如權利要求1所述的通式I化合物在用于腸道、非胃腸道及口服給藥的藥物制劑中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及鄰位取代的鄰氨基苯甲酸酰胺及其作為治療持續(xù)性血管生成所導致的疾病的藥物的應用。
文檔編號A61K31/4409GK1427837SQ01809136
公開日2003年7月2日 申請日期2001年5月8日 優(yōu)先權日2000年5月9日
發(fā)明者馬丁·克呂格爾, 安德烈亞斯·胡特, 奧林·彼得羅夫, 迪特爾·塞德曼, 卡爾－海因茨·蒂爾奧赫, 馬丁·哈貝賴, 安德烈亞斯·門拉德, 亞歷山大·恩斯特 申請人:舍林股份公司