專利名稱：結(jié)合整聯(lián)蛋白的肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新肽基化合物及其在治療性有效治療和診斷成象技術(shù)中的用途。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及所述肽基化合物用作結(jié)合血管發(fā)生相關(guān)性受體(特別是整聯(lián)蛋白受體，例如αvβ3整聯(lián)蛋白受體)的導(dǎo)向載體的用途。這些造影劑因此可用于診斷例如惡性腫瘤、心臟病、炎性相關(guān)疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和卡波濟(jì)氏肉瘤。而且，這些造影劑還可用于這些疾病的治療性治療。
新血管可通過(guò)兩種不同機(jī)制形成血管生成(vasculogenesis)或血管發(fā)生(angiogenesis)。血管發(fā)生是通過(guò)現(xiàn)有血管分支形成新血管。該過(guò)程的主要刺激因素可能是提供給組織細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)物和氧(低氧)不足。細(xì)胞通過(guò)分泌血管生成因子作出反應(yīng)，細(xì)胞中存在許多血管生成因子，經(jīng)常提起的一個(gè)實(shí)例是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)。這些血管生成因子啟動(dòng)降解基底膜蛋白的蛋白水解酶以及限制這些潛在有害酶作用的抑制劑分泌。血管生成因子的其它顯著作用是引起內(nèi)皮細(xì)胞遷移和分裂。附著于基底膜的內(nèi)皮細(xì)胞不進(jìn)行有絲分裂，其中基底膜在血管腔外側(cè)周圍形成連續(xù)層。血管內(nèi)皮細(xì)胞不能附著和血管生成因子受體的信號(hào)的綜合作用引起內(nèi)皮細(xì)胞自身移動(dòng)、增殖和重排，并最終在新血管周圍合成基底膜。
血管發(fā)生對(duì)組織生長(zhǎng)和重建(包括傷口愈合和炎性過(guò)程)很重要。腫瘤在達(dá)到毫米大小時(shí)必須開始血管發(fā)生，以便保持其生長(zhǎng)速率。血管發(fā)生通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞及其環(huán)境的特征變化實(shí)現(xiàn)。這些細(xì)胞的表面為準(zhǔn)備遷移而重建，隱蔽結(jié)構(gòu)暴露出來(lái)，這時(shí)除了參與影響和控制蛋白水解的各種蛋白之外，基底膜也發(fā)生降解。在腫瘤情況下，產(chǎn)生的血管網(wǎng)絡(luò)經(jīng)常紊亂，形成尖結(jié)以及動(dòng)靜脈吻合。抑制血管發(fā)生也被認(rèn)為是有前景的抗癌癥治療策略。血管發(fā)生伴發(fā)的轉(zhuǎn)化對(duì)診斷也很有前景，一個(gè)明顯實(shí)例是惡性腫瘤，但理論表明對(duì)炎性疾病和包括動(dòng)脈硬化在內(nèi)的各種炎性相關(guān)疾病也有巨大前景，早期動(dòng)脈硬化病灶中的巨噬細(xì)胞是血管生成因子的潛在來(lái)源。這些血管生成因子還涉及心肌梗塞部分的血管重新形成，一旦在短時(shí)間內(nèi)消除狹窄，血管就重新形成。
下文闡明與新血管形成或血管發(fā)生(新血管發(fā)生或增殖)相關(guān)的有害疾病的其它實(shí)例。在這方面還參見WO 98/47541。
與血管發(fā)生相關(guān)的疾病和病癥例如為不同形式的癌癥和轉(zhuǎn)移，例如乳癌、皮膚癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌或卵巢癌。
其它疾病和病癥為炎癥(例如慢性炎癥)、動(dòng)脈硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和齒齦炎。
其它與血管生成相關(guān)的疾病和病癥是動(dòng)靜脈鄰近形成(alformation)、星形細(xì)胞瘤、絨膜癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、血管瘤(兒童，毛細(xì)血管瘤)、肝細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜增生、心肌局部缺血、卡波濟(jì)氏肉瘤、黃斑變性、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、阻塞性外周動(dòng)脈疾病、骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、視網(wǎng)膜病(糖尿病性、增殖性視網(wǎng)膜病)、硬皮病、精原細(xì)胞瘤和潰瘍性結(jié)腸炎。
血管發(fā)生涉及內(nèi)皮細(xì)胞及周圍組織特有的受體。這些標(biāo)記包括VEGF之類的生長(zhǎng)因子受體和整聯(lián)蛋白受體家族。免疫組織化學(xué)研究表明，各種整聯(lián)蛋白(最重要的可能是αv類)在血管頂表面表達(dá)[Conforti，G，等(1992)Blood 8037-446]，并可用于通過(guò)循環(huán)配體導(dǎo)向[Pasqualini，R.，等(1997)Nature Biotechnology 15542-546]。α5β1也是一種重要的整聯(lián)蛋白，促進(jìn)纖連蛋白基質(zhì)組裝和促使細(xì)胞粘附纖連蛋白。α5β1還在細(xì)胞遷移[Bauer，J.S.，(1992)J.Cell Biol.116477-487]以及腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[Gehlsen，K.R.，(1988)J. Cell Biol.106925-930]中起關(guān)鍵作用。
整聯(lián)蛋白αvβ3是已知與血管發(fā)生有關(guān)的受體之一。受刺激的內(nèi)皮細(xì)胞在血管發(fā)生過(guò)程的關(guān)鍵時(shí)期內(nèi)似乎依賴該受體存活，因?yàn)棣羦β3整聯(lián)蛋白受體/配體相互作用的拮抗劑誘導(dǎo)凋亡并抑制血管生長(zhǎng)。
整聯(lián)蛋白是異二聚體分子，其中α和β亞單位穿過(guò)細(xì)胞膜脂雙層。α亞單位在其胞外鏈上具有4個(gè)Ca+結(jié)合域，而β亞單位具有無(wú)數(shù)胞外半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域。
許多涉及細(xì)胞粘附的配體(例如纖連蛋白)都含有三肽序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。RGD序列似乎在存在該序列的配體和細(xì)胞表面受體之間起主要識(shí)別位點(diǎn)的作用。一般認(rèn)為，配體和受體之間的次級(jí)相互作用增強(qiáng)所述相互作用的特異性。這些次級(jí)相互作用可能發(fā)生在配體部分和受體之間，這種作用緊鄰RGD序列或處于離RGD序列較遠(yuǎn)的部位。
已知RGD肽結(jié)合一系列整聯(lián)蛋白受體，并具有調(diào)節(jié)眾多在臨床中具有應(yīng)用意義的細(xì)胞事件的潛能。(Ruoslahti，J Clin.Invest.，871-5(1991))。最廣泛研究的RGD肽及其類似物作用可能涉及其作為抗血栓形成劑的用途，其中它們靶向血小板整聯(lián)蛋白GpIIbIIIa。
例如WO 97/06791和WO 95/25543描述了使用抗體或含RGD肽通過(guò)給予αvβ3或αvβ5拮抗劑抑制組織血管發(fā)生。EP 578083描述了一系列單環(huán)含RGD的肽，而WO 90/14103要求保護(hù)RGD抗體。Haubner等在J Nucl.Med.(1999)；401061-1071中描述了基于單環(huán)含RGD肽的用于腫瘤導(dǎo)向的新型追蹤物。但是，使用全身放射自顯影成象進(jìn)行的生物分布研究揭示，125I標(biāo)記肽的血液清除速率非?？欤⑶抑饕獮楫a(chǎn)生高背景的肝膽分泌途徑。
WO 98/54347和WO 95/14714還描述了含多個(gè)橋的環(huán)形RGD肽。體內(nèi)生物淘選(WO 97/10507)獲得的肽已用于各種靶向用途。具有未鑒定橋位的序列CDCRGDCFC(RGD-4C)已用作細(xì)胞靶向藥物，例如阿霉素(WO 98/10795)、核酸和腺病毒靶向細(xì)胞(參見WO99/40214、WO 99/39734、WO 98/54347、WO 98/54346、US 5846782)。但是，含多個(gè)半胱氨酸殘基的肽可能有多個(gè)二硫鍵異構(gòu)體存在的不利情況。RGD-4C之類的具有4個(gè)半胱氨酸殘基的肽可能形成3個(gè)不同的二硫鍵折疊形式。這些異構(gòu)體對(duì)整聯(lián)蛋白受體的親和性不同，因?yàn)镽GD藥效基團(tuán)被迫有三種不同構(gòu)象。
因此，與體內(nèi)血管發(fā)生有關(guān)的整聯(lián)蛋白受體的有效靶向和成象需要一種基于選擇性高親和RGD的載體，該載體是化學(xué)穩(wěn)固和穩(wěn)定的。而且，為了減少背景問(wèn)題，在設(shè)計(jì)顯象劑時(shí)分泌途徑是重要因素。本發(fā)明描述的雙環(huán)結(jié)構(gòu)滿足了這些嚴(yán)格條件。
從一方面看，本發(fā)明提供式I定義的新肽基化合物。這些化合物用作具有整聯(lián)蛋白受體親和性(例如親和整聯(lián)蛋白αvβ3)的載體。
式I化合物包含至少兩個(gè)橋，其中一個(gè)橋形成二硫鍵，而第二個(gè)橋包含硫醚(硫化物)鍵，其中所述橋?qū)⑤d體部分折疊成‘嵌套’構(gòu)型。
因此，本發(fā)明化合物每個(gè)載體部分最多具有一個(gè)二硫鍵。本發(fā)明定義的化合物在體內(nèi)和標(biāo)記(例如用锝標(biāo)記)過(guò)程使用的條件下令人驚奇地穩(wěn)定。
這些新化合物可用于治療性有效治療以及成象目的。
根據(jù)R1和X1-8的定義，式I包括含(V)k部分以及可選的L和/或R部分的化合物，其中V是雙環(huán)載體，L是連接部分，R是可檢測(cè)部分(信息基團(tuán))，例如用成象方法可檢測(cè)的部分，例如以(V)kLR結(jié)構(gòu)用作例如人和血管化非人動(dòng)物體(例如哺乳動(dòng)物、鳥類或爬蟲類動(dòng)物體)體內(nèi)成象的造影劑或用作治療劑。
本發(fā)明提供的新肽基化合物及其藥學(xué)上可接受的任何鹽由式I定義
其中，G代表甘氨酸，D代表精氨酸，R1代表-(CH2)n-或-(CH2)n-C6H4-，優(yōu)選R1代表-(CH2)-，n代表正整數(shù)1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，h代表正整數(shù)1或2，X1代表一個(gè)鍵或1、2、3、4或5個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選為1或2個(gè)氨基酸殘基，其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述造影劑的藥代動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈(例如糖部分)衍化，所述側(cè)鏈優(yōu)選含有C1-22烷基或C1-22全氟烴基鏈、聚乙二醇聚合物和/或具有血清白蛋白親和性的疏水部分，并且每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地通過(guò)i)接頭(L)部分或ii)螯合劑或iii)附著于螯合劑的接頭(L)部分結(jié)合適于體內(nèi)成象的信息基團(tuán)(R)部分，X1優(yōu)選代表天冬氨酸、酪氨酸、酪氨酸-天冬氨酸、賴氨酸、谷氨酸、乙酰賴氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、蘇氨酸或谷氨酰胺或其衍生物，X2和X4獨(dú)立代表能夠形成二硫鍵的氨基酸殘基，優(yōu)選為半胱氨酸或高半胱氨酸殘基，X3代表精氨酸、N-甲基精氨酸或精氨酸類似物，優(yōu)選為精氨酸或N-甲基精氨酸殘基，X5代表疏水氨基酸或其衍生物，優(yōu)選為酪氨酸、苯丙氨酸、3-碘代-酪氨酸或萘丙氨酸殘基，更優(yōu)選為苯丙氨酸或3-碘代-酪氨酸殘基，X6代表含巰基的氨基酸殘基，優(yōu)選為半胱氨酸或高半胱氨酸殘基，k代表正整數(shù)1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，優(yōu)選為正整數(shù)1、2、3或4，更優(yōu)選k代表正整數(shù)1，X7代表接頭(L)部分或1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基(可選地為接頭(L)部分的一部分)，優(yōu)選X7代表一個(gè)氨基酸殘基，每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述造影劑的藥物動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈(例如糖部分)衍化，所述側(cè)鏈優(yōu)選含有C1-22烷基或C1-22全氟烴基鏈、聚乙二醇聚合物和/或具有血清白蛋白親和性的疏水部分，并且其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地通過(guò)i)接頭(L)部分或ii)螯合劑或iii)附著于螯合劑的接頭(L)部分結(jié)合適于體內(nèi)成象的信息基團(tuán)(R)部分，或者X7不存在，而且優(yōu)選至少一個(gè)單獨(dú)接頭(L)部分包含一個(gè)或多個(gè)乙二醇單元和/或優(yōu)選X7包含甘氨酸殘基或優(yōu)選替代形式是X7不存在，以及X8代表信息基團(tuán)(R)部分，或者為-NH2，或者不存在。
特別優(yōu)選的螯合劑定義為式a、b、c和d，參見下文。但是，式I所定義的化合物還可以包含表I所定義的螯合劑。
優(yōu)選的螯合劑和連接單元實(shí)例示于式e和f。 在本發(fā)明的某些方面，所述螯合物為結(jié)合或能夠結(jié)合放射性核素的功能部分。下表I列出了用于絡(luò)合核苷酸的螯合劑的優(yōu)選定義，優(yōu)選99m锝。
表I
在本發(fā)明的某些方面，螯合物是通過(guò)親核取代、親電加成反應(yīng)或使用螯合劑結(jié)合或能夠結(jié)合18F同位素或Cu同位素的功能部分。獲得的化合物因此可用于正電子發(fā)射斷層照相法(PET)成象。
本文描述的載體綴合物的載體組分優(yōu)選沒(méi)有游離的氨基或羧基末端。這使得這些化合物對(duì)酶降解的抗性顯著增加，結(jié)果它們的體內(nèi)穩(wěn)定性強(qiáng)于許多已知游離肽。
信息基團(tuán)R可通過(guò)X1和/或X7連接至V(經(jīng)L)。最好對(duì)連接點(diǎn)進(jìn)行選擇，使得V的生物活性或V對(duì)其靶的結(jié)合親和性基本不下降或沒(méi)有顯著下降(與沒(méi)有R時(shí)V的生物活性或結(jié)合親和性相比)。最優(yōu)選R連接至V。
本文使用的術(shù)語(yǔ)‘氨基酸’廣義上是指形成蛋白質(zhì)的L氨基酸、D氨基酸、化學(xué)修飾的氨基酸、N-甲基、Cα-甲基和氨基酸側(cè)鏈模擬物以及非天然氨基酸，例如萘丙氨酸，優(yōu)選為任何天然存在的氨基酸或其模擬物。
通過(guò)以下的化合物II-IX闡述式I化合物的一些優(yōu)選實(shí)施方案化合物II 化合物III 化合物IV 化合物V 化合物VI 化合物VII 化合物VIII 化合物IX 其中化合物V和化合物VI適于锝標(biāo)記，化合物II可用碘放射性同位素標(biāo)記，而化合物III具有適于用碘放射性同位素標(biāo)記的酪氨酸殘基。化合物VII包含載體-螯合物綴合物，其中精氨酸和苯丙氨酸殘基分別被增加載體組分的酶穩(wěn)定性的N-甲基精氨酸和萘丙氨酸取代?；衔颕V包含用碘放射標(biāo)記的酪氨酸取代苯丙氨酸，C末端甘氨酸去除，酸官能團(tuán)被酰胺鍵取代，以減少羧肽酶對(duì)載體的降解。
所定義的式I包含一個(gè)或多個(gè)載體(V)，其中X1代表一個(gè)鍵或1、2、3、4或5個(gè)氨基酸殘基，其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述造影劑的藥代動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈衍化，并且X2-6如式I所定義，X7代表1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基或不存在，而X8不存在。
在大多數(shù)情況下，優(yōu)選載體V中的氨基酸為L(zhǎng)型。然而，在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，載體V的1、2、3或更多個(gè)氨基酸為D型。包含所述D型氨基酸可對(duì)載體的血清穩(wěn)定性產(chǎn)生顯著作用。在這方面特別要提到在位置X1具有D-酪氨酸的載體。
按照本發(fā)明，如式I所定義的任一氨基酸殘基都優(yōu)選可為天然存在的氨基酸，并且獨(dú)立地為D或L構(gòu)型中的任一種。
化合物II-VII優(yōu)選具有示于以下的立體有擇構(gòu)象化合物IIa 化合物IIIa 化合物IVa 化合物Va 化合物VIa 化合物VIIa 本發(fā)明的一些化合物是高親和性RGD型載體。本文使用的術(shù)語(yǔ)‘高親和性RGD型載體’是指在對(duì)αvβ3整聯(lián)蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定中Ki＜100nM、優(yōu)選＜10nM、最優(yōu)選＜5nM的化合物，其中Ki值通過(guò)與已知高親和性配體鋸鱗血抑肽(echistatin)競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)行所述競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定的方法本領(lǐng)域眾所周知。
本發(fā)明還提供一種含有效量(例如在體內(nèi)成象中有效增強(qiáng)圖象對(duì)比度的量)通式I化合物或其鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的佐劑、賦形劑或稀釋劑的藥用組合物。
本發(fā)明還提供一種用于治療疾病的藥用組合物，該組合物含有效量的通式I化合物或其酸加成鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的佐劑、賦形劑或稀釋劑。
如上所述，式I化合物可包含載體、連接體和信息基團(tuán)部分。接頭部分可用于連接一個(gè)載體和一個(gè)信息基團(tuán)；或者其可以將一個(gè)以上的載體和/或一個(gè)以上的信息基團(tuán)連接在一起。同樣，信息基團(tuán)或載體可連接至一個(gè)以上的連接體。以此方式使用多個(gè)信息基團(tuán)(例如幾個(gè)連接體-信息基團(tuán)部分連接至一個(gè)載體，或者幾個(gè)信息基團(tuán)連接至一個(gè)連接體，而連接體本身連接至一個(gè)載體)能夠使造影劑的檢測(cè)能力增強(qiáng)(例如通過(guò)增加其輻射不透明性、回波發(fā)生能力或松弛能力)，或者能使其在一種以上的顯象方式中被檢測(cè)出來(lái)。以此方式使用多個(gè)載體例如可增加造影劑的導(dǎo)向功效或者可以使造影劑/治療劑能夠靶向一個(gè)以上的位點(diǎn)，例如具有受體異質(zhì)性的物質(zhì)的不同受體。
可以使用各種各樣的連接體，包括生物可降解連接體和生物聚合物。
造影劑接頭部分的最簡(jiǎn)單形式為載體和信息基團(tuán)部分之間的一個(gè)鍵。但是，更一般來(lái)說(shuō)，所述連接體提供共價(jià)或非共價(jià)連接一個(gè)或多個(gè)載體和一個(gè)或多個(gè)信息基團(tuán)的單分子或多分子骨架，例如線性、環(huán)狀、支鏈或網(wǎng)狀分子骨架或分子聚合體，它們具有共價(jià)或非共價(jià)(例如配位)結(jié)合載體或信息基團(tuán)部分或者包裹、捕獲或錨定所述部分的內(nèi)部基團(tuán)或側(cè)基。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案提供式I化合物，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸為任一單獨(dú)連接體組分的一部分。
因此，可通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)方法連接信息基團(tuán)單元和目的載體，通常包括與位于信息基團(tuán)和載體上的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)相互作用?？捎糜诖四康牡幕瘜W(xué)反應(yīng)性官能團(tuán)實(shí)例包括氨基、羥基、巰基、羧基和羰基，以及糖基、鄰二醇基、硫醚基、2-氨基乙醇基、2-氨基巰基、胍基、咪唑基和苯酚基。
因此，可使用含能夠與所述官能團(tuán)反應(yīng)的反應(yīng)部分的連接劑共價(jià)偶聯(lián)信息基團(tuán)和載體。
應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，所述信息基團(tuán)和/或載體中的官能團(tuán)可根據(jù)需要在反應(yīng)前轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌倌軋F(tuán)，例如賦予另外的反應(yīng)性或選擇性。
還可以使用偶聯(lián)合能夠介導(dǎo)膜插入的元件的肽、脂-寡糖或脂肽連接體的載體。
如果需要，可按照本發(fā)明使用所謂的零長(zhǎng)度連接劑，它們誘導(dǎo)兩個(gè)反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)直接共價(jià)連接，而不引入其它的連接物質(zhì)(例如使用碳二亞胺或酶誘導(dǎo)形成酰胺鍵)，也可以使用例如誘導(dǎo)信息基團(tuán)-載體非共價(jià)連接的物質(zhì)如生物素/抗生物素系統(tǒng)以及誘導(dǎo)靜電作用的物質(zhì)。
但是，最通常來(lái)說(shuō)，所述連接劑含有通過(guò)間隔元件連接的兩個(gè)或多個(gè)反應(yīng)部分，例如上述反應(yīng)部分。所述間隔元件的存在允許雙功能接頭與分子內(nèi)或兩個(gè)不同分子間的特異性官能團(tuán)反應(yīng)，在這兩個(gè)組分之間產(chǎn)生鍵，并將產(chǎn)生外來(lái)接頭的物質(zhì)引入信息基團(tuán)-載體綴合物中。連接劑中的反應(yīng)部分可以相同(同型雙功能連接劑)或者不同(異型雙功能連接劑或者存在幾種不同反應(yīng)部分的異型多功能連接劑)，條件是各種可能的試劑可在任何化學(xué)部分之間(或分子內(nèi)或分子間)產(chǎn)生共價(jià)鍵合多樣性。
連接劑引入的外來(lái)物質(zhì)的性質(zhì)對(duì)最終產(chǎn)物的靶向能力和總的穩(wěn)定性可能具有關(guān)鍵意義。因此，理想的是引入不穩(wěn)定鍵，例如包含可生物降解或化學(xué)敏感或加入酶切位點(diǎn)的間隔臂?；蛘?，所述間隔物可包括聚合組分，例如起表面活性劑作用和增強(qiáng)試劑穩(wěn)定性的聚合組分。所述間隔物還可以含有反應(yīng)部分，例如上述增強(qiáng)表面交聯(lián)的反應(yīng)部分。間隔元件還可以包含大分子結(jié)構(gòu)如葡聚糖，優(yōu)選聚乙二醇，通常稱為PEG。除了間隔元件以外，PEG還可以用于改進(jìn)所述載體的體內(nèi)特征。
其它代表性間隔元件包括可包含或不包含酶切位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)型多糖、儲(chǔ)存型多糖、聚氨基酸及其甲酯和乙酯、多肽、寡糖和寡核苷酸。
優(yōu)選的連接基得自載體反應(yīng)基團(tuán)，這些反應(yīng)基團(tuán)選自但不限于載體上直接與羧基、醛基、胺基(NHR)、醇基、巰基、活化亞甲基等反應(yīng)的基團(tuán)，例如含活性鹵素的基團(tuán)；可容易地與含載體反應(yīng)基的修飾載體分子(即例如通過(guò)將載體氧化為醛或羧酸將含一個(gè)反應(yīng)基的載體修飾為含多個(gè)反應(yīng)基)反應(yīng)的基團(tuán)；以及通過(guò)使用交聯(lián)劑可與含反應(yīng)基的載體或上述修飾載體連接的基團(tuán)。
優(yōu)選的有用連接基得自各種異型雙功能交聯(lián)劑，例如列于PierceChemical Company Immunotechnology Catalog-Protein ModificationSection(1995和1996)中的那些異型雙功能交聯(lián)劑。
除了前述內(nèi)容之外，所述連接基還可以整體或部分地包含和得自天然存在和修飾的核苷酸和核苷酸殘基的互補(bǔ)序列，優(yōu)選非自連接寡核苷酸序列。
按照本發(fā)明使用的連接劑一般使載體和信息基團(tuán)或者信息基團(tuán)和信息基團(tuán)具有一定程度特異性地連接在一起，還可以用于連接一個(gè)或多個(gè)治療活性劑。
WO 98/47541的32-54頁(yè)給出了其它可用于本申請(qǐng)的連接物實(shí)例，這些頁(yè)提供的公開內(nèi)容通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中。
據(jù)此認(rèn)為，前述參考文獻(xiàn)頁(yè)中公開的每個(gè)和所有連接物或其部分都被認(rèn)為是本申請(qǐng)所包括的本發(fā)明說(shuō)明書的一部分。
本發(fā)明造影劑中的信息基團(tuán)部分可以為能夠以體內(nèi)診斷成象方法直接或間接檢測(cè)的任何部分。所述造影劑優(yōu)選包含一個(gè)信息基團(tuán)。優(yōu)選部分為發(fā)射或可引起發(fā)射可檢測(cè)輻射(例如通過(guò)放射衰變、激發(fā)熒光、激發(fā)自旋共振等)的部分、實(shí)現(xiàn)局部電磁場(chǎng)(例如順磁、超順磁、鐵磁或亞鐵磁形式的磁場(chǎng))的部分、吸收或散射輻射能的部分(例如發(fā)色團(tuán)和熒光團(tuán))、粒子(包括含囊泡的液體)、重元素及其化合物以及產(chǎn)生可檢測(cè)物質(zhì)的部分等。
由本領(lǐng)域可知非常廣泛的可通過(guò)診斷顯象方式檢測(cè)的物質(zhì)，并可按照要使用的顯象方式選擇信息基團(tuán)。因此，例如對(duì)于超聲波成象，一般選擇產(chǎn)回波物質(zhì)或能夠產(chǎn)生產(chǎn)回波物質(zhì)的物質(zhì)。所述載體可通過(guò)連接物偶聯(lián)至適于加入到充氣微泡中的脂質(zhì)信息基團(tuán)/載體。這樣的微泡可用于靶向超聲波成象。對(duì)于X-射線成象，信息基團(tuán)通常為或含有重原子(例如原子量為38或以上的原子)；對(duì)于MR成象，信息基團(tuán)為非零核自旋同位素(例如19F)或具有不成對(duì)電子自旋并因此具有順磁、超順磁、鐵磁或亞鐵磁特性的物質(zhì)；對(duì)于光成象，信息基團(tuán)為光散射體(例如有色或無(wú)色粒子)、光吸收體或光發(fā)射體；對(duì)于磁性成象，信息基團(tuán)具有可檢測(cè)的磁性特性；對(duì)于阻抗成象，信息基團(tuán)將影響阻抗；而對(duì)于閃爍掃描法、SPECT、PET等，信息基團(tuán)為放射性核素。
由診斷成象文獻(xiàn)可廣泛了解合適信息基團(tuán)的實(shí)例，例如磁性氧化鐵粒子、含囊泡的X射線造影劑、螯合順磁金屬(如Gd、Dy、Mn、Fe等)。
一般來(lái)說(shuō)，信息基團(tuán)可為(1)可螯合金屬或含多原子金屬的離子(即TcO等)，其中所述金屬為高原子序數(shù)金屬(例如原子序數(shù)超過(guò)37)、順磁物質(zhì)(例如過(guò)渡金屬或鑭系元素)或放射性同位素；(2)為不成對(duì)電子位點(diǎn)的共價(jià)結(jié)合的非金屬物質(zhì)(例如持久性自由基的氧或碳)、高原子序數(shù)的非金屬或放射性同位素；(3)含高原子序數(shù)原子、顯示協(xié)同磁性特性(例如超順磁性、鐵磁性或亞鐵磁性)或包含放射性核素的多原子簇或晶體；(4)發(fā)色團(tuán)(該術(shù)語(yǔ)包括熒光或磷光物質(zhì))，例如無(wú)機(jī)或有機(jī)結(jié)構(gòu)，特別是配位金屬離子或具有大離域電子系統(tǒng)的有機(jī)基團(tuán)；或(5)具有阻抗改變特性的結(jié)構(gòu)或基團(tuán)，例如利用大離域電子系統(tǒng)。
下文將更詳細(xì)地描述特別優(yōu)選的信息基團(tuán)的實(shí)例。
螯合金屬信息基團(tuán)最好選自金屬放射性核素、順磁金屬離子、熒光金屬離子、重金屬離子和簇離子。
優(yōu)選的金屬放射性核素包括90Y、99mTc、111In、47Sc、67Ga、51Cr、177mSn、67Cu、167Tm、97Ru、188Re、177Lu、199Au、203Pb和141Ce。
優(yōu)選的順磁金屬離子包括過(guò)渡金屬和鑭系元素金屬(例如原子序數(shù)為6-9、21-29、42、43、44或57-71的金屬)離子，特別是Cr、V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb和Lu離子，尤其是Mn、Cr、Fe、Gd和Dy離子，更特別是Gd離子。
最好通過(guò)連接部分上或粒子(例如囊泡或有孔或無(wú)孔無(wú)機(jī)或有機(jī)固體)之中或之上的螯合基團(tuán)螯合金屬離子，所述螯合基團(tuán)特別是線性、大環(huán)、三嘧啶和N2S2螯合劑，例如DTPA、DTPA-BMA、EDTA、D03A和TMT。合適的螯合基團(tuán)的其它實(shí)例公開于US-A-4647447、WO 89/00557、US-A-5367080、US-A-5364613等。
連接部分或粒子可包含一個(gè)或多個(gè)此類螯合基團(tuán)，如果需要可用一種以上的金屬物質(zhì)進(jìn)行金屬取代(例如以便提供可以不同顯象方式檢測(cè)的信息基團(tuán))。
用于金屬取代現(xiàn)有的任何螯合劑的方法在本領(lǐng)域技術(shù)水平范圍內(nèi)。可通過(guò)三種一般性方法中的任一種將金屬加入到螯合部分中直接加入、模板合成和/或金屬轉(zhuǎn)移。優(yōu)選直接加入。
因此，理想的是所述金屬離子易于和螯合劑絡(luò)合，例如僅通過(guò)使含螯合劑部分的水溶液與優(yōu)選pH約4-約11的金屬鹽水溶液接觸或混合。所述鹽可以為任何鹽，但優(yōu)選金屬的水溶性鹽，例如鹵素鹽，更優(yōu)選選擇使金屬離子與螯合劑的結(jié)合不受干擾的金屬鹽。含螯合劑部分的水溶液的pH優(yōu)選為約5-約9，更優(yōu)選約6-約8。含螯合劑部分可與緩沖鹽(例如檸檬酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽和硼酸鹽)混合，以獲得最佳pH。選擇的緩沖鹽最好使隨后的金屬離子與螯合劑的結(jié)合不受干擾。
在診斷成象中，載體-連接體-信息基團(tuán)(V)kLR結(jié)構(gòu)包含的金屬放射性核素離子與螯合劑的比率最好對(duì)這種診斷成象應(yīng)用有效。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，金屬離子/螯合劑的摩爾比率為約1∶1,000至約1∶1。
在放療應(yīng)用中，(V)kLR包含的金屬放射性核素離子與螯合劑的比率最好對(duì)這種放療應(yīng)用有效。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，金屬離子/螯合劑的摩爾比率為約1∶100至約1∶1。放射性核素可選自例如放射性同位素Sc、Fe、Pb、Ga、Y、Bi、Mn、Cu、Cr、Zn、Ge、Mo、Ru、Sn、Sr、Sm、Lu、Sb、W、Re、Po、Ta和Tl。優(yōu)選的放射性核素包括44Sc、64Cu、67Cu、212Pb、68Ga、90Y、153Sm、212Bi、186Re和188Re。其中特別優(yōu)選90Y。這些放射性同位素可以為原子，或者優(yōu)選為離子。
以下的同位素或同位素對(duì)可用于成象和治療而不改變放射標(biāo)記方法或螯合劑47Sc21、141Ce58、188Re75、177Lu71、199Au79、47Sc21、131I53、67Cu29、131I53和123I53、188Re75和99mTc43、90Y39和87Y39、47Sc21和44Sc21、90Y39和123I53、146Sm62和153Sm62以及90Y39和111In49。
可通過(guò)螯合劑骨架功能化或利用一個(gè)或多個(gè)螯合劑金屬配價(jià)基團(tuán)或通過(guò)在酸性螯合劑和具有胺或羥基的線性連接骨架之間形成酰胺或醚鍵(例如以PCT/EP96/00565中的聚賴氨酸-聚DTPA、聚賴氨酸-聚DOTA和所謂的放大聚合螯合劑(magnifier polychelant)的形式)連接螯合劑部分。這樣的部分可直接(例如使用聚合螯合劑連接體中的胺、酸或羥基基團(tuán))或通過(guò)上述用于單螯合劑連接體的雙功能接頭化合物連接至一個(gè)或多個(gè)載體基團(tuán)。
當(dāng)用粒子(或分子聚合物，例如囊泡)連接體攜帶螯合物時(shí)，所述連接體例如可為封閉在粒子中的未連接單螯合物或多螯合物(例如GdDTPA-BMA或Gd HP-DO3A)，或者可以為通過(guò)共價(jià)鍵合或通過(guò)單/多螯合物上的結(jié)合團(tuán)(例如親脂基)與囊泡膜(參見例如PCT/GB95/02378)相互作用連接至粒子的單螯合物或多螯合物。
優(yōu)選的非金屬原子信息基團(tuán)包括放射性同位素(例如123I、131I和18F以及非零核自旋原子19F)和重原子如I。
可直接使用常規(guī)化學(xué)合成技術(shù)或通過(guò)支持基(例如三碘苯基)使所述信息基團(tuán)(優(yōu)選為多個(gè)，例如2-200)共價(jià)鍵合至連接體骨架。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，特別考慮使用碘或氟的放射性同位素。例如，如果所述載體或連接體包含可通過(guò)用碘或氟以共價(jià)鍵形成反應(yīng)化學(xué)取代的取代基(例如含羥苯基或?qū)ο趸郊柞；倌軋F(tuán)的取代基)時(shí)，那么所述取代基可利用本領(lǐng)域眾所周知的方法分別用碘或氟的放射性同位素標(biāo)記。這些物質(zhì)可用于治療和診斷成象應(yīng)用。而與此同時(shí)，連接在同一載體-連接體上的螯合劑的金屬也可用于治療或診斷成象應(yīng)用。
至于以上論述的金屬螯合劑，這種金屬原子信息基團(tuán)可連接至連接體或位于粒子連接體之中或之上，例如在囊泡中(參見WO95/26205和GB 9624918.0)。
有關(guān)金屬信息基團(tuán)上述類型的連接體可用于非金屬原子信息基團(tuán)和非金屬原子信息基團(tuán)或攜帶所述信息基團(tuán)的基團(tuán)，代替部分或全部螯合基團(tuán)。
本發(fā)明的(V)kLR物質(zhì)優(yōu)選具有受體靶向載體，該載體直接或間接(例如共價(jià)結(jié)合的碘放射性同位素、直接或通過(guò)有機(jī)連接基團(tuán)連接的金屬螯合劑)偶聯(lián)至信息基團(tuán)，或者偶聯(lián)至粒子信息基團(tuán)或連接體-信息基團(tuán)，例如超順磁晶體(可選地為包被形式，例如見PCT/GB97/00067)或囊泡(例如含膠束或脂質(zhì)體的碘化造影劑)。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案涉及通式(I)的放射性標(biāo)記物質(zhì)，特別用于腫瘤成象。
本發(fā)明的診斷劑可以用特定的成象技術(shù)足以產(chǎn)生需要的對(duì)比度的量給予要進(jìn)行顯象的患者。當(dāng)信息基團(tuán)為金屬時(shí)，0.001-5.0mmol螯合成象金屬離子/kg患者體重的一般劑量可有效獲得足夠的對(duì)比增強(qiáng)。當(dāng)信息基團(tuán)為放射性核素時(shí)，0.01-100mCi(優(yōu)選0.1-50mCi)/70kg體重的劑量一般來(lái)說(shuō)就夠了。
本發(fā)明用于治療用途的化合物劑量取決于要治療的病癥，但一般在約1pmol/kg體重-1mmol/kg體重的范圍內(nèi)。
因此，可使用生理學(xué)上可接受的載體或賦形劑以完全屬于本領(lǐng)域技術(shù)范圍的方式配制用于給予患者的本發(fā)明化合物。例如，可將所述化合物(可選地加入藥學(xué)上可接受的賦形劑)懸浮或溶解在水性介質(zhì)中，然后對(duì)獲得的溶液或懸浮液滅菌。
式I化合物可治療性有效治療病癥，以及在體內(nèi)成象時(shí)可檢測(cè)。因此，例如，信息基團(tuán)部分上的載體可具有治療功效，例如通過(guò)放射性核素信息基團(tuán)的放療作用，發(fā)光團(tuán)(或熒光團(tuán))信息基團(tuán)在光動(dòng)力學(xué)治療中的功效或載體部分的化療功效。
因此，在治療性組合物(藥物)生產(chǎn)和治療性或預(yù)防性治療人或非人動(dòng)物體(優(yōu)選治療癌癥)的方法中使用式I化合物被認(rèn)為代表本發(fā)明的另一方面。
WO 98/47541的63-66頁(yè)和70-86頁(yè)給出了可用于本申請(qǐng)的信息基團(tuán)的其它實(shí)例，這些頁(yè)上發(fā)表的公開內(nèi)容通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中。據(jù)此認(rèn)為，前述頁(yè)中公開的每個(gè)和所有信息基團(tuán)或其部分都被認(rèn)為是本申請(qǐng)所包括的本發(fā)明說(shuō)明書的一部分。
從本發(fā)明的再一方面看，提供式I化合物生產(chǎn)用于診斷方法的造影劑的用途，所述診斷方法包括將所述造影劑給予活體個(gè)體，并在所述個(gè)體中的至少一部分產(chǎn)生影象。
從本發(fā)明的再另一方面看，提供一種在活體人或非人(優(yōu)選哺乳動(dòng)物或鳥類)動(dòng)物個(gè)體中產(chǎn)生影象的方法，該方法包括將造影劑給予所述個(gè)體，例如進(jìn)入到血管系統(tǒng)，并在所述造影劑分布的所述個(gè)體的至少一部分中產(chǎn)生影象，例如通過(guò)X射線、MR、超聲波、閃爍掃描、PET、SPECT、阻抗、光或磁力成象方式，其中所述造影劑使用式I的物質(zhì)。
從本發(fā)明的再另一方面看，提供一種在預(yù)先給予造影劑組合物(包含式I定義的化合物)的人或非人動(dòng)物個(gè)體中產(chǎn)生增強(qiáng)影象的方法，該方法包括在所述個(gè)體的至少一部分中產(chǎn)生影象。
從本發(fā)明的再另一方面看，提供一種監(jiān)測(cè)抗癌性病癥(優(yōu)選血管生成)藥物(例如細(xì)胞毒性劑)對(duì)人或非人動(dòng)物個(gè)體的治療作用的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體式I物質(zhì)，并檢測(cè)細(xì)胞受體(優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞受體，特別是αvβ3受體)對(duì)所述物質(zhì)的吸收，所述給予和檢測(cè)可選但優(yōu)選在所述藥物治療之前、之中和之后重復(fù)進(jìn)行。
從本發(fā)明的再另一方面看，提供一種制備式I物質(zhì)的方法，所述方法包括將載體V連接至以診斷成象方法可檢測(cè)的化合物或螯合化合物，如果必要可用以診斷成象方法可檢測(cè)的金屬離子金屬取代所獲得的綴合物中的螯合基團(tuán)。
可使用所有已知的化學(xué)合成方法合成本發(fā)明化合物，但特別有用的方法是使用自動(dòng)化肽合成儀的Merrifield固相方法(J.Am.Chem.Soc.，852149(1964))。使用不同半胱氨酸保護(hù)基合成含多個(gè)橋的載體，以便在所述載體的最終折疊形式中沒(méi)有多義性?？墒褂酶咝б合鄬游?HPLC)純化肽和肽螯合劑，在體外篩選時(shí)在測(cè)試之前通過(guò)質(zhì)譜和分析型HPLC進(jìn)行特征鑒定。
現(xiàn)在將通過(guò)以下的非限制性實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例1合成化合物V1a1a)合成ClCH2CONH-Asp-Cys(MBzl)-Arg-Gly-Asp-Cys(MBzl)-Phe-Cys-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2 準(zhǔn)確分子量＝1388 分子式＝C60H85ClN14O16S3以O(shè)-雙-(氨基乙基)乙二醇三苯甲基樹脂為原料，使用1mmol氨基酸和氯乙酸柱(cartridge)以0.25mmol規(guī)模在ABI 433A自動(dòng)化肽合成儀上合成所述肽。在偶聯(lián)前使用HBTU預(yù)活化所述氨基酸和氯乙酸。將樹脂置于含TIS(5％)、H2O(5％)和苯酚(2.5％)的TFA中2小時(shí)20分鐘，同時(shí)去除肽和側(cè)鏈保護(hù)基(MBzl除外)。處理(work-up)后獲得250mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，20分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱VYDAC C18218TP54；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間20.55分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1389，實(shí)測(cè)值為1392。1b)合成環(huán)[-CH2CONH-Asp-Cys(MBzl)-Arg-Gly-Asp-Cys(MBzl)-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2 準(zhǔn)確分子量＝1352 分子式＝C60H84N14O16S3將250mg ClCH2CONH-Asp-Cys(MBzl)-Arg-Gly-Asp-Cys(MBzl)-Phe-Cys-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2溶解在水/乙腈中。用氨溶液將混合物pH調(diào)節(jié)至8，攪拌20小時(shí)。凍干后獲得240mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，20分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱VYDAC C18 218TP54；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間19.45分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1353，實(shí)測(cè)值為1358。1c)合成[Cys2-6]環(huán)[-CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2 分子量＝1143.29精確分子量＝1142分子式＝C44H66N14O16S3將100mg環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys(MBzl)-Arg-Gly-Asp-Cys(MBzl)-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2溶解在TFA(10ml)中，然后將其加入到預(yù)加熱的苯甲醚(200μl)、DMSO(5ml)和TFA(90ml)溶液中。于60℃攪拌混合物60分鐘，然后真空去除TFA，加入乙醚沉淀所述肽。通過(guò)制備型HPLC(Vydac C18 218TP1022柱，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速9ml/分鐘)純化粗品。凍干后獲得26mg純品物質(zhì)(分析型HPLC梯度0-35％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱VYDAC C18 218TP54；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間14.33分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1143，實(shí)測(cè)值為1148。1d)[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2和N3S-己二酸酯螯合物的綴合物-化合物V1a 分子量＝1546.75精確分子量＝1545分子式＝C50H91N17O23S4將6.5mg N3S-己二酸酯螯合物活性酯溶解在乙腈(5ml)中，將其加入到溶解于DPBS(5ml，pH7.4)中的5.1mg[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2中?；旌衔飻嚢?天。
通過(guò)制備型HPLC(Vydac C18 218TP1022柱，使用5-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速9ml/分鐘)純化反應(yīng)混合物。凍干后獲得4.3mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間6.55分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1150，實(shí)測(cè)值為1546。1e)锝標(biāo)記化合物V1a將溶解在水(50μl)中的化合物V1a(50μg)、150μl葡糖酸鈉溶液(25mg，溶于6ml水中)、100μl乙酸銨(pH4.0，50mM)、1ml TcO4溶液(500 MBq)合50μl SnCl2溶液(20mg，溶于100ml水中)加入到充氮小瓶中。將混合物加熱至75℃達(dá)20分鐘，然后進(jìn)行ITLC和HPLC分析。
實(shí)施例2[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2和Pn216螯合物的綴合物(化合物Va)2a)合成Pn216螯合物氯-亞硝基中間體(3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷)攪拌2-甲基丁-2-烯(18.5ml)和硝酸異戊酯(19.5ml)混合物，冷卻至-10℃并小心加入高濃度鹽酸(17.5ml)，將溫度保持在0℃以下。于該溫度攪拌反應(yīng)物30分鐘。過(guò)濾收集所形成的沉淀，用4×5ml乙醇(-20℃)清洗并真空干燥，獲得為白色固體的3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷。2b)Pn216-(3，3，11，11-四甲基-7-氨基乙基-4，7，10，三氮雜十三烷-2，12-二酮二肟)向三-(2-氨基乙基)胺的乙腈(20ml)溶液中加入碳酸氫鈉(2.2g，26mmol)。于0℃緩慢加入3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(1.8g，13mmol)的無(wú)水乙腈溶液。讓反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后過(guò)濾。用乙腈清洗濾過(guò)液，蒸發(fā)濾過(guò)液。將粗產(chǎn)物溶解在乙腈中，經(jīng)HPLC純化，獲得Pn216。產(chǎn)量0.88g，收率19％。2c)合成Pn216-琥珀酸中間體 琥珀酸酐(100)
Pn216(358)四氟苯硫酚(182)DCCI(206)將Pn216(0.5g，1.4mmol)溶解在DMF(5ml)中，并隨著攪拌分量加入琥珀酸苷(0.015g，1.5mmol)的DMF(10ml)溶液。攪拌反應(yīng)物16小時(shí)，使之完全轉(zhuǎn)變?yōu)槟康漠a(chǎn)物。在HPLC色譜后獲得良好收率的純酸。2d)合成Pn216-琥珀酸的四氟苯硫酚酯衍生物 向Pn216酸(10mg，0.022mmol)的DMF(1.0ml)溶液中加入HATU(8.3mg，0.022mmol)和NMM(0.007ml，0.066mmol)。攪拌混合物5分鐘，然后加入TFTP(0.022mmol，4mg)。攪拌溶液30分鐘，然后用20％乙腈/H2O(3ml)稀釋反應(yīng)混合物，通過(guò)反向?qū)游黾兓a(chǎn)物，凍干后獲得6mg目的產(chǎn)物。2e)關(guān)于肽合成，參閱實(shí)施例1a)至c)2f)肽和Pn216螯合物的綴合物 分子量＝1569.856
精確分子量＝1568.690分子式＝C64H104N20O20S3將5mg Pn216螯合物活性酯、2μlN-甲基嗎啉和6mg[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2溶解在N，N-二甲基甲酰胺(0.5ml)中。攪拌混合物24小時(shí)。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化反應(yīng)混合物。凍干后獲得3.5mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間4.47分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1569.7，實(shí)測(cè)值為1569.7。2g)可用锝(99mTc)以同以上實(shí)施例1e)所述類似的方式標(biāo)記所述化合物實(shí)施例3脂肪酸修飾的具Pn216螯合物的載體3a)組裝Dde-Lys-Cys(tBu)-Arg(Pmc)-Gly-Asp(OtBu)-Cys(tBu)-Phe-Cys(Trt)-Gly-(O-Bis-(氨基乙基)乙二醇三苯甲基)樹脂(i)以O(shè)-Bis-(氨基乙基)乙二醇三苯甲基樹脂為原料，使用1mmol氨基酸柱以0.3mmol規(guī)模在ABI 433A自動(dòng)肽合成儀上組裝受保護(hù)的肽。所述氨基酸在偶聯(lián)前預(yù)先用HBTU活化。3b)合成ClCH2CO-Lys(己?；?-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(ii)用己酸酐的DMF溶液處理0.1mmol樹脂(i)17小時(shí)。使用2％肼一水合物的DMF溶液以4×3分鐘去除所述樹脂的Dde保護(hù)基。然后用氯乙酸酐的DMF溶液處理所述樹脂60分鐘。
用含TIS(5％)、H2O(5％)和苯酚(2.5％)的TFA處理2小時(shí)同時(shí)去除所述樹脂的肽和側(cè)鏈保護(hù)基(除了tBu)。
處理完成后獲得100mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間7.81分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1404.7，實(shí)測(cè)值為1404.6。3c)合成環(huán)[CH2CO-Lys(己?；?-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(iii) 分子量＝1368.757精確分子量＝1367.676分子式＝C60H101N15O15S3將100mg化合物(ii)溶解在水/乙腈中。用氨水將混合物的pH調(diào)節(jié)至8，攪拌20小時(shí)。處理完成后獲得104mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間7.67分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1368.7，實(shí)測(cè)值為1368.7。3d)合成[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys(己?；?-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(iv) 分子量＝1254.525精確分子量＝1253.536分子式＝C52H83N15O15S3用苯甲醚(100μl)、DMSO(1ml)和TFA(50ml)溶液于室溫處理50mg化合物(iii)30分鐘，然后真空去除TFA，加入二乙醚沉淀所述肽。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化粗品。凍干后獲得9mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間5.38分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1254.5，實(shí)測(cè)值為1254.6。3e)合成[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys(己?；?-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH(CH2CH2CH2)CH2CH2NH2-Pn216(v) 分子量＝1681.088精確分子量＝1679.831分子式＝C72H121N21O19S3將9mg化合物(iv)、11mg Pn216螯合物活性酯和8μlN-甲基嗎啉溶解在DMF(1ml)中。攪拌混合物3.5小時(shí)。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化反應(yīng)混合物。凍干后獲得5.2mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間5.83分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1680.8，實(shí)測(cè)值為1680.7。實(shí)施例4PEG修飾的具Pn216螯合物的載體4a)合成ClCH2CO-Lys(PEG2000)-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(vi) 用CH3O-PEG-NHCOCH2CH2COOH(用HATU預(yù)活化)處理0.1mmol樹脂(i)16小時(shí)。使用2％肼一水合物的DMF溶液以4×3分鐘去除所述樹脂的Dde保護(hù)基。然后用氯乙酸酐的DMF溶液處理所述樹脂60分鐘。
用含TIS(5％)、H2O(5％)和苯酚(2.5％)的TFA處理2小時(shí)同時(shí)從所述樹脂去除肽和側(cè)鏈保護(hù)基(除了tBu)。
處理完成后獲得110mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間多個(gè)峰，5至9分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為3313，實(shí)測(cè)值為2785。4b)合成環(huán)[CH2CO-Lys(PEG2000)-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(vii) 分子量＝3278.032精確分子量＝3275.778分子式＝C145H270N16O59S3將110mg化合物(vi)溶解在水/乙腈中。用氨溶液將混合物的pH調(diào)節(jié)至8，攪拌20小時(shí)。處理完成后獲得90mg粗品肽(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間多個(gè)峰，5至9分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為3277，實(shí)測(cè)值為2627。4c)合成[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys(PEG2000)-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Qys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2(viii)用苯甲醚(200μl)、DMSO(2ml)和TFA(100ml)溶液于室溫處理60mg化合物(vii)30分鐘，然后真空去除TFA，加入二乙醚沉淀所述肽。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化粗品。凍干后獲得30mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間寬峰，5分鐘時(shí))。4d)[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys(PEG2000)-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH2和Pn216螯合物的綴合物(ix) 分子量＝3590.363精確分子量＝3587.933分子式＝C157H290N22O63S3將20mg化合物(viii)、11mg Pn216螯合物活性酯和8μl NMM溶解在DMF(1ml)中。攪拌混合物24小時(shí)。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化反應(yīng)混合物。凍干后獲得10.7mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間寬峰，5-8分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為3589，實(shí)測(cè)值為3270。實(shí)施例5具有Pn44螯合物的載體5a)制備1，1，1，-三(苯磺酰氧甲基)乙烷將1，1，1，-Tris三羥甲基(120g，1.0mol)溶解于二氯甲烷(1000ml)和嘧啶(237g，1mol)中，并用-5℃的苯磺酰氯(528g，3mol)在冰/甲醇浴中以溫度不升至10℃以上的速度分部處理。然后使反應(yīng)混合物溫至室溫過(guò)夜。然后將反應(yīng)物與5N鹽酸振搖，分離有機(jī)相，用二氯甲烷再提取水相，合并有機(jī)相。二氯甲烷溶液經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮，獲得膠質(zhì)物1，1，1，-三(苯磺酰氧甲基)乙烷(540g，1mol)。5b)制備1，1，1，-三(疊氮甲基)乙烷在500ml RB搖瓶中用疊氮化鈉(41g，630mmol，9當(dāng)量)處理1，1，1，-三(苯磺酰氧甲基)乙烷(25g，70mmol)的二甲基甲酰胺(300ml)溶液，將混合物于120℃加熱并攪拌7小時(shí)。然后讓反應(yīng)物冷卻至室溫，加入50％的飽和鹽水溶液(250ml)和二乙醚(250ml)。分離有機(jī)相，用50％飽和鹽水溶液(250ml)清洗，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮獲得為黃色粘性液體的1，1，1，-三(疊氮甲基)乙烷(5.51g，28.2mmol，40％收率)。
NMR H1(CDCl3)，1.0(3H，s，CH3)，3.3(6H，s，CH3)。5c)制備1，1，1，-三(氨基甲基)乙烷用10％披鈀碳(2g)處理1，1，1，-三(疊氮甲基)乙烷(5.51g，28.2mmol)的乙醇(140ml)溶液，并在大氣壓力的氫氣流下氫化15小時(shí)，以去除釋放的氮。反應(yīng)物通過(guò)C鹽墊過(guò)濾去除催化劑，真空濃縮獲得為黃色液體的1，1，1，-三(氨基甲基)乙烷(2.53g，21.6mmol，76％得率)。
NMR H1(CDCl3)，0.8(3H，s，CH3)，1.18(6H，s，3xNH2)，2.6(6H，s，3xCH2)。
NMR C13(CDCl3)，20.1CH3，31.7C，48.8CH2。5d)制備Pn44在0℃、氮?dú)庀?，?-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(23.14g，1706mmol，2當(dāng)量)的無(wú)水甲醇(50ml)溶液中緩慢加入1，1，1，-三(氨基甲基)乙烷(10g，85.3mmol)的無(wú)水甲醇(10ml)溶液。于0℃攪拌混合物40分鐘，溫至室溫，然后加熱至60℃達(dá)3小時(shí)。然后讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫，攪拌5天。最后將混合物加熱至回流溫度達(dá)3小時(shí)，然后真空去除溶劑。殘余物溶解在2M HCl(150ml)中，用乙醚(3×100ml)提取。然后使用6M NaOH將水層堿化至pH10，用二氯甲烷(3×100ml)提取。于室溫下靜置合并的有機(jī)層，析出白色固體。濾出固體，經(jīng)NMR證實(shí)為三加合物。將濾過(guò)液濃縮至約1/3，在冰箱中靜置。由溶液中析出另一種白色固體。過(guò)濾分離，經(jīng)1H-NMR證實(shí)為Pn44。濾過(guò)液再濃縮，由溶液中結(jié)晶出其它部分的Pn44。(總產(chǎn)量6.981g，收率26％)。
NMR(H1CDCl3)，0.9(3H，s，CH3)，1.25(6H，d，4xCH3)，1.8(6H，s，2xCH3)，2.4(2H，d，2xCH)，2.54(2H，d，2xCH)，2.95(2H，s，CH2)，4.95(6H，s，OH)。
MS C15H33N5O2M+H＝316實(shí)測(cè)值316。5e)合成PN44-琥珀酸中間體如實(shí)施例2c所述。5f)合成PN44-琥珀酸的四氟硫苯酚酯衍生物如實(shí)施例2d所述。5g)合成[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH2見實(shí)施例1a-1c。5h)合成[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH-Pn44 分子量＝1540.815精確分子量＝1539.663分子式＝C63H101N19O20S3將7mg Pn44螯合物活性酯、5μl NMM和10mg[Cys2-6]環(huán)[CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH2溶解在NMP(1ml)中。攪拌混合物3小時(shí)。
通過(guò)制備型HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，40分鐘，流速10ml/分鐘)純化反應(yīng)混合物。凍干后獲得9.8mg純品(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間4.38分鐘)。使用質(zhì)譜測(cè)定法進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1540.7，實(shí)測(cè)值為1540.6。實(shí)施例6合成雙-[Cys2-6]，環(huán)[-CH2CONH-Asp-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-Ahx-Lys(環(huán)[-CH2CONH-Asp-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]Ahx)-NH(CH2CH2O)2CH2CH2NH-Pn216 以O(shè)-雙(氨基乙基)乙二醇三苯甲基樹脂為原料，使用1mmol氨基酸柱以0.1mmol規(guī)模在ABI 433A自動(dòng)肽合成儀上組裝二聚肽。所述氨基酸預(yù)先用HBTU活化，然后按Fmoc-Lys(Fmoc)-OH、Fmoc-Ahx-OH(Ahx＝氨基己酸)、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Cys(tBu)-OH、Fmoc-Asp(O-tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pmc)-OH、Fmoc-Cys(tBu)-OH、Fmoc-Asp(O-tBu)-OH、氯乙酸酐的順序偶聯(lián)。然后用含5％TIS、5％苯酚和5％水的TFA切下固體支持物上的半保護(hù)肽。然后在20％乙腈/水(pH8)中環(huán)化粗品氯-肽，經(jīng)Vydac C18柱HPLC純化后獲得單環(huán)叔丁基保護(hù)的中間體(見下圖)。 向純中間體中加入含0.1ml苯甲醚的10％DMSO/TFA溶液。攪拌肽混合物1小時(shí)，蒸發(fā)過(guò)量的TFA，然后加入二乙醚沉淀產(chǎn)物(示于以下)。 然后將該產(chǎn)物(5mg)溶解在含2％NMM的1ml DMF中，并加入5mg實(shí)施例1的Pn216活性酯。在連接反應(yīng)之后進(jìn)行HPLC，發(fā)現(xiàn)16小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束。然后用水將肽溶液稀釋至總共8ml，上Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱，使用5-50％B梯度，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA，30分鐘，流速5ml/分鐘。凍干后獲得2mg目的終產(chǎn)物(分析型HPLC梯度5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA，而B＝CH3CN/0.1％TFA；柱Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速2ml/分鐘；檢測(cè)UV 214nm；產(chǎn)物保留時(shí)間9.8分鐘)。使用ES-MS進(jìn)行產(chǎn)物特征鑒定理論值M+H為1805，實(shí)測(cè)值為1805。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)整聯(lián)蛋白受體具有親和力的通式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中G代表甘氨酸，D代表精氨酸，R1代表-(CH2)n-或-(CH2)n-C6H4-，其中n代表正整數(shù)1-10，h代表正整數(shù)1或2，X1代表一個(gè)鍵或1-5個(gè)氨基酸殘基，其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述藥物的藥代動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈衍化，并且其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地通過(guò)i)接頭(L)部分或ii)螯合劑或iii)與螯合劑連接的接頭(L)部分結(jié)合適于體內(nèi)成象的信息基團(tuán)(R)部分，X2和X4獨(dú)立代表能夠形成二硫鍵的氨基酸殘基，X3代表精氨酸、N-甲基精氨酸或精氨酸模擬物，X5代表疏水氨基酸或其衍生物，X6代表含巰基的氨基酸殘基，k代表正整數(shù)1-10，X7代表接頭(L)部分或1-10個(gè)氨基酸殘基，可選地為接頭(L)部分的一部分，其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述藥物的藥物動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈衍化，并且其中每個(gè)氨基酸殘基都可選地通過(guò)i)接頭(L)部分或ii)螯合劑或iii)與螯合劑連接的接頭(L)部分結(jié)合適于體內(nèi)成象的信息基團(tuán)(R)部分，或者X7不存在，X8代表信息基團(tuán)(R)部分，或者為-NH2，或者不存在。
2.權(quán)利要求1要求保護(hù)的化合物，其中R1代表-(CH2)-。
3.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X1代表1或2個(gè)氨基酸殘基。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物，其中X1代表天冬氨酸、酪氨酸、酪氨酸-天冬氨酸、賴氨酸、谷氨酸、乙酰賴氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、蘇氨酸或谷氨酰胺或其衍生物。
5.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X2和X4獨(dú)立代表半胱氨酸或高半胱氨酸殘基。
6.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X3代表精氨酸或N-甲基精氨酸殘基。
7.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X5代表酪氨酸、苯丙氨酸、3-碘代-酪氨酸或萘丙氨酸殘基。
8.權(quán)利要求7要求保護(hù)的化合物，其中X5代表苯丙氨酸或3-碘代-酪氨酸殘基。
9.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X6代表半胱氨酸或高半胱氨酸殘基。
10.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X7代表一個(gè)氨基酸殘基。
11.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X7代表甘氨酸殘基或不存在。
12.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中X7包括接頭(L)部分，該接頭部分可選地包含一個(gè)或多個(gè)乙二醇單元。
13.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中k代表正整數(shù)1-4。
14.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中k代表正整數(shù)1。
15.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，該化合物包含以下任何一種螯合劑
16.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中所述螯合劑能夠結(jié)合放射性核素。
17.權(quán)利要求16要求保護(hù)的化合物，該化合物能夠結(jié)合锝、碘或銅的放射性同位素或18F同位素。
18.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中任何一種氨基酸殘基都獨(dú)立地為天然存在的氨基酸。
19.權(quán)利要求18要求保護(hù)的化合物，其中任何一種氨基酸殘基都獨(dú)立地為D或L構(gòu)型。
20.權(quán)利要求1和權(quán)利要求15要求保護(hù)的化合物，它為下式定義的化合物化合物V 化合物VIII 化合物IX
21.一種代表載體(V)的權(quán)利要求1定義的式I化合物，其中X1代表一個(gè)鍵或1-5個(gè)氨基酸殘基，其中每個(gè)氨基酸殘基都獨(dú)立可選地用適于改進(jìn)所述藥物的藥物動(dòng)力學(xué)或血液清除速率的功能側(cè)鏈衍化，X2-6同權(quán)利要求1定義，X7代表1-10個(gè)氨基酸殘基或不存在，而X8不存在。
22.一種含有效量的通式I化合物或其鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的佐劑、賦形劑或稀釋劑的藥用組合物，它用于在體內(nèi)成象中增強(qiáng)圖象對(duì)比度或用于治療疾病。
23.一種制備包含載體(V)部分、接頭(L)部分和信息基團(tuán)(R)部分的造影劑的方法，該方法包括將載體V可選地通過(guò)連接體(L)連接至用診斷成象方法可檢測(cè)的化合物或螯合劑，如果必要可用以診斷成象方法可檢測(cè)的金屬離子金屬取代所獲得的綴合物中的螯合基團(tuán)。
24.權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物用于生產(chǎn)診斷方法中使用的造影劑的用途，所述診斷方法包括將所述造影劑給予活體個(gè)體，并在所述個(gè)體的至少一部分產(chǎn)生影象。
25.一種在人或非人動(dòng)物個(gè)體中產(chǎn)生影象的方法，該方法包括將造影劑給予所述個(gè)體，在所述個(gè)體中至少在所述造影劑分布部分中產(chǎn)生影象，其特征在于所述造影劑包含權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物。
26.一種在預(yù)先給予造影劑組合物的人或非人動(dòng)物個(gè)體中產(chǎn)生增強(qiáng)影象的方法，其中所述組合物包含權(quán)利要求1要求保護(hù)的化合物，該方法包括至少在所述個(gè)體的某一部分中產(chǎn)生影象。
27.一種監(jiān)測(cè)用抗癌性病癥藥物治療人或非人動(dòng)物個(gè)體的治療作用的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體權(quán)利要求1-27任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物，并檢測(cè)細(xì)胞受體對(duì)所述物質(zhì)的吸收，所述給予和檢測(cè)任選但優(yōu)選例如在所述藥物治療之前、之中和之后重復(fù)進(jìn)行。
28.一種治療人體或非人體癌癥或相關(guān)疾病的方法，該方法包括給予有效量的權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物。
29.權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，其中所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療人體或非人體癌癥或相關(guān)疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作診斷成象劑或治療劑的新肽基化合物，其中所述所述藥物包含結(jié)合整聯(lián)蛋白受體相關(guān)性受體的靶向載體。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1436195SQ01810941
公開日2003年8月13日 申請(qǐng)日期2001年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月12日
發(fā)明者A·庫(kù)斯伯特森, B·因德雷沃爾 申請(qǐng)人:安盛藥業(yè)有限公司