專利名稱：對(duì)2型糖尿病、葡萄糖耐量低減、空腹血糖異常的易感性測(cè)定的腸抑胃肽判斷試驗(yàn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一個(gè)體是否易于演變成2型糖尿病、葡萄糖耐量低減(IGT)、或空腹血糖異常(IFG)的判斷方法及試劑盒。這些方法和試劑盒用于測(cè)定個(gè)體對(duì)施加腸抑胃肽(GIP)或腸抑胃肽變異型的應(yīng)答，從而判斷該個(gè)體是否有演變成2型糖尿病、IGT、或IFG的危險(xiǎn)。
背景技術(shù)：
美國(guó)大約有一千三十萬(wàn)人被診斷出糖尿病，估計(jì)有糖尿病但未診斷出的人就更多了。一般認(rèn)為大約90-95％的糖尿病都是2型糖尿病。目前還沒(méi)有一種可靠的判斷試驗(yàn)可以確定一個(gè)體是否易于演變成2型糖尿病。
IGT在美國(guó)人中很常見(jiàn)，估計(jì)一千三百四十萬(wàn)美國(guó)人有IGT。IGT說(shuō)明個(gè)體對(duì)葡萄糖攝取的耐受能力下降，但低減量低于確定糖尿病的水平。IGT患者為演變成2型糖尿病和其他疾病的高危人群。IFG的情況與IGT相似。IFG在美國(guó)和其他地方也很普遍。目前也沒(méi)有一種可靠的診斷方法可以確定一個(gè)體是否易于演變成IGT或IFG。
盡管沒(méi)有可靠的診斷性試驗(yàn)，但人們基于資料顯示GIP對(duì)2型糖尿病患者的促胰島素作用顯著降低(7)而認(rèn)識(shí)到GIP在2型糖尿病病理學(xué)中的作用卻已有一段時(shí)間。然而，GIP在2型糖尿病病理學(xué)中所起的明確作用還很不清楚，在本發(fā)明之前，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)GIP與個(gè)體演變成2型糖尿病、IGT或IFG的易感性之間的聯(lián)系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及，例如，一個(gè)體是否易于演變成葡萄糖耐量低減(IGT)、或空腹血糖異常(IFG)或2型糖尿病的判斷方法及試劑盒。這些方法包括給個(gè)體施加腸抑胃肽(GIP)或腸抑胃肽變異型，測(cè)定個(gè)體的應(yīng)答及判斷個(gè)體是否易于演變成IGT、2型糖尿病或IFG。


圖1A和1B所示為參與高血糖注入(hyperglycemic clamp)實(shí)驗(yàn)的21名2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(實(shí)心棱形)、10名2型糖尿病患者(空心圓)及10名健康對(duì)照受試者(實(shí)心圓)在靜脈輸注GIP(2pmol·kg-1·min-1)時(shí)葡萄糖(微血管測(cè)量，A)和免疫反應(yīng)性GIP(B)的血漿濃度。以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SEM)表示。p值重復(fù)測(cè)量變異數(shù)分析(ANOVA)(A在健康對(duì)照組與患者組之間；B隨時(shí)間；AB組和時(shí)間的相互作用)。*表示與2型糖尿病患者之間顯著性差異(p＜0.05)；表示與正常受試者之間顯著性差異(p＜0.05)(Student’s t-檢驗(yàn))。
圖2A、2B、2C、2D、2E和2F所示為參與高血糖注入實(shí)驗(yàn)的21名2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(實(shí)心棱形)、10名2型糖尿病患者(空心圓)及10名健康對(duì)照受試者(實(shí)心圓)在靜脈輸注GIP(2pmol·kg-1·min-1)時(shí)胰島素(A)和C肽(B)的血漿濃度及胰島素分泌率(C)。以Mean±SEM表示。p值重復(fù)測(cè)量ANOVA(A在健康對(duì)照組與患者組之間；B隨時(shí)間；AB組和時(shí)間的相互作用)。*表示與2型糖尿病患者之間顯著性差異(p＜0.05)；表示與正常受試者之間顯著性差異(p＜0.05)(Student’s t檢驗(yàn))。圖的右側(cè)顯示21名第一級(jí)親屬的胰島素(D)和C肽(E)的個(gè)體血漿濃度及胰島素分泌率(F)與正常受試者置信區(qū)間的95％上下相關(guān)(如虛線所示)。
圖3A、3B和3C所示為21名2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(實(shí)心棱形)、10名2型糖尿病患者(空心圓)及10名健康對(duì)照受試者(實(shí)心圓)的胰島素(A)和C肽(B)濃度及胰島素分泌率(C)在時(shí)間點(diǎn)15和30分鐘(“高血糖”)與75和90分鐘(“高血糖加外源性GIP”)時(shí)平均值的差異。p值A(chǔ)NOVA(整體比較)及Student’s t-檢驗(yàn)(各組之間的比較)。
圖4所示為參與高血糖注入實(shí)驗(yàn)的21名2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(實(shí)心棱形)、10名2型糖尿病患者(空心圓)及10名健康對(duì)照受試者(實(shí)心圓)在靜脈輸注GIP(2pmol·kg-1·min-1)時(shí)胰高血糖素的血漿濃度。以Mean±SEM表示。p值重復(fù)測(cè)量ANOVA(A在健康對(duì)照組與患者組之間；B隨時(shí)間；AB組和時(shí)間的相互作用)。*表示與2型糖尿病患者之間顯著性差異(p＜0.05)；表示與正常受試者之間顯著性差異(p＜0.05)(Student’s t-檢驗(yàn))。
圖5所示為參與高血糖注入實(shí)驗(yàn)的21名2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(實(shí)心棱形)、10名2型糖尿病患者(空心圓)及10名健康對(duì)照受試者(實(shí)心圓)在靜脈輸注GIP(2pmol·kg-1·min-1)時(shí)胰島素原的血漿濃度。以Mean±SEM表示。p值重復(fù)測(cè)量ANOVA(A在健康對(duì)照組與患者之間；B隨時(shí)間；AB組和時(shí)間的相互作用)。*表示與2型糖尿病患者之間顯著性差異(p＜0.05)；表示與正常受試者之間顯著性差異(p＜0.05)(Student’s t-檢驗(yàn))。
具體實(shí)施例方式
定義“葡萄糖耐量低減”，本文縮寫(xiě)為“IGT”，指在正常情況(個(gè)體沒(méi)有葡萄糖代謝低減)與確定性或”明顯的”糖尿病之間的中間狀態(tài)。作為一例子，但不作限制的標(biāo)準(zhǔn)，采用口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)，葡萄糖耐量低減定義為兩小時(shí)數(shù)值在140mg/dL(7.8mmol/L)和199mg/dL(11.0mmol/L)之間。
“空腹血糖異常”所指的情況與IGT相似。作為一例子，但不作限制的標(biāo)準(zhǔn)，將“空腹血糖異?！倍x為空腹血糖濃度在110mg/dL(6.1mmol/L)和125mg/dL(6.9mmol/L)之間。
“2型糖尿病”(也稱非胰島素依賴型糖尿病或成年發(fā)病型糖尿病)是描述一類其顯示胰島素阻抗性及通常具有相對(duì)的而非絕對(duì)的胰島素缺乏的個(gè)體。目前還不能識(shí)別2型糖尿病的準(zhǔn)確病因。作為一例子，但不作限制的標(biāo)準(zhǔn)，判斷一個(gè)體是否有2型糖尿病包括以下一步或多步步驟(1)確定空腹血糖值大于或等于126毫克/分升(mg/dL)，(2)在出現(xiàn)糖尿病癥狀時(shí)，確定非空腹血糖值大于或等于200mg/dL，(3)利用口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)(根據(jù)世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)，施加75克溶于水中的無(wú)水葡萄糖，2小時(shí)后再測(cè)定血糖濃度)，確定血糖值大于或等于200mg/dL。
上述所列舉的IGT、IFG和2型糖尿病的判斷標(biāo)準(zhǔn)是”糖尿病診斷及分類專家委員會(huì)”(Expert Committee on the Diagnosis and Classificaiton of Diabetes Mellitus)于1997年提出的。參見(jiàn)糖尿病診斷及分類專家委員會(huì)，”Diabetes Care”，201183，(1997)。然而，據(jù)說(shuō)，IGT、IFG和2型糖尿病的判斷標(biāo)準(zhǔn)由公共機(jī)構(gòu)制定，可能會(huì)經(jīng)常改變，而且不同機(jī)構(gòu)制定的標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。盡管存在這些差異，本文所用的術(shù)語(yǔ)IGT、IFG和2型糖尿病都已作充分解釋，并且包括本技術(shù)領(lǐng)域所用的不同分類標(biāo)準(zhǔn)。
“易于演變成IGT、IFG和2型糖尿病”是指有演變成一種或多種這樣一些病況的危險(xiǎn)。當(dāng)然，即使通過(guò)本發(fā)明的方法或試劑盒判斷某一個(gè)體易于演變成這些疾病，但事實(shí)上該個(gè)體可能永遠(yuǎn)也不會(huì)演變成其中一種病況。還要注意的是，本發(fā)明可用于評(píng)估一些個(gè)體，其已顯示一種或多種演變這些疾病的危險(xiǎn)因素。例如，在一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的方法用于2型糖尿病第一級(jí)親屬的個(gè)體。在此實(shí)施例中，該個(gè)體從流行病的觀點(diǎn)上看已屬于高風(fēng)險(xiǎn)一類。但在本發(fā)明之前，沒(méi)有任何方法可肯定地預(yù)測(cè)某個(gè)屬于高風(fēng)險(xiǎn)一類的特定個(gè)體是否會(huì)演變成IGT、IFG和2型糖尿病。本發(fā)明提供這樣一種預(yù)測(cè)判斷工具。
“腸抑胃肽”(也稱葡萄糖依賴性促胰島素)，本文縮寫(xiě)為”GIP”，是從上腸細(xì)胞，特別是十二指腸和近端空腸合成和分泌的一種促胰島素。GIP被認(rèn)為是一種腸促胰島素，這是因?yàn)樗糠重?fù)責(zé)所謂的”腸促胰島素效應(yīng)”，即用口服代替靜脈輸注葡萄糖后，胰島素分泌增加。在一優(yōu)選實(shí)施例中，GIP是合成人GIP，具有以下人GIP的氨基酸序列Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-Gly-Lys-Lys-Asn-Asp-Trp-Lys-His-Asn-Ile-Thr-Gln(SEQ ID NO1)。但本發(fā)明包括重組人GIP以及自其他物種衍生的GIP的應(yīng)用，不管是重組還是合成。本發(fā)明還包括”GIP”的生物活性變異型。在本文中，”生物活性”指具有GIP生物活性，但應(yīng)注意變異型的活性可低于或高于天然GIP的效力。GIP的生物活性可由體內(nèi)外動(dòng)物模型及人類研究確定，這己為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。GIP變異型包括任何分子，不管是肽、肽類似物，或其他與GIP受體結(jié)合或激活GIP受體的分子，及其第二信使級(jí)聯(lián)。在現(xiàn)有技術(shù)中已對(duì)GIP受體進(jìn)行了說(shuō)明。例如，參見(jiàn)Gremlich等人，”Diabetes”，441202頁(yè)，(1995)。GIP受體不管是化合物或肽結(jié)合還是活化物，其測(cè)定方法也已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，測(cè)定方法最好借助組合化學(xué)庫(kù)和高處理量篩選技術(shù)。本發(fā)明還包括表達(dá)本文所限定的GIP或GIP變異型的聚核苷酸。
另外，本發(fā)明包括一些GIP肽，其含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失。在一實(shí)施例中，取代、缺失或插入的數(shù)目等于或少于30個(gè)氨基酸、等于或少于25個(gè)氨基酸、等于或少于20個(gè)氨基酸、等于或少于15個(gè)氨基酸、等于或少于10個(gè)氨基酸、等于或少于5個(gè)氨基酸或這些數(shù)字之間的任何一個(gè)整數(shù)。此外，本發(fā)明中的取代包括一個(gè)或多個(gè)保守性取代。
”保守性”取代表示以另一個(gè)生物活性相似的殘基代替一氨基酸殘基。保守性取代的例子包括以一個(gè)疏水殘基，如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或蛋氨酸，取代另一個(gè)疏水殘基，或以一個(gè)極性殘基取代另一個(gè)極性殘基，如精氨酸取代賴氨酸，谷氨酸取代天冬氨酸，或谷酰胺取代天冬酰胺等。下表列出一些保守性氨基酸取代，但不僅限于這些保守性氨基酸取代。


GIP變異型的一個(gè)例子是一含有SEQ ID NO1的19-30氨基酸的多肽[參見(jiàn)Morrow等人，”Canada J.Physiol Pharmacol”，7465頁(yè)，(1996)]，其中在該19-30氨基酸序列內(nèi)進(jìn)行1-5個(gè)或以上氨基酸取代、缺失或插入。另外要注意，GIP變異型還包括上述通過(guò)化學(xué)衍生或替換的肽，例如，這些肽，其具有非天然氨基酸殘基(如?；撬釟埢?、β-和γ-氨基酸殘基以及D-氨基酸殘基)、C末端功能團(tuán)修飾，如酰胺、酯，C-末端酮修飾及N末端功能團(tuán)修飾，如酰基化胺、席夫堿類，或環(huán)化，例如在氨基酸和焦谷氨酸中建立的環(huán)化。
本發(fā)明還包括一些肽序列，其大于50％，最好大于90％的序列與以下相同，(1)與SEQ ID NO1，(2)與它們的平截序列；以及(3)與SEQ ID NO1的氨基酸19-30的序列一樣。如本發(fā)明中所用，序列同一性指用本技術(shù)領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法在兩個(gè)分子之間所作的比較。計(jì)算本發(fā)明序列同一性的優(yōu)選方法是Smith-Waterman法，其中SEQ ID NO1用作參考序列，以確定聚核苷酸同系物相對(duì)其長(zhǎng)度的同一性百分比。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有些參數(shù)值比其他參數(shù)值在生物上得出更真確的結(jié)果，但選擇用于匹配、失配以及插入或缺失的參數(shù)值時(shí)是隨意的。Smith-Waterman法用的一組優(yōu)選參數(shù)值是在”最相似片段”方法中提出，其中數(shù)值1用于一匹配殘基，-1/3用于一失配殘基(殘基可以是單核苷酸或單氨基酸)[Waterman，”Bulltin of Mathematical Biololgy”，46473-500頁(yè)，(1984)]。插入和缺失(indels)x加權(quán)為xk＝1+k/3式中k是預(yù)定插入和缺失(Id.)的殘基數(shù)。
例如，有一個(gè)序列，除了18個(gè)氨基酸取代和3個(gè)氨基酸插入外，其余與SEQID NO1的42個(gè)氨基酸殘基序列相同，它的同一性百分比可由下式算出[(1×42匹配)-(1/3×18失配)-(1+3/3插入和缺失)]/42＝81％同一性“具有至少一種演變成2型糖尿病、IFG和IGT的易感性癥狀”是指演變成一種或兩種這些疾病的流行病危險(xiǎn)因素。這樣一些危險(xiǎn)因素包括，但不限于，年紀(jì)大，特別是45歲或以上、肥胖、糖尿病家族史，特別是有一種或多種2型糖尿病患者的第一級(jí)親屬個(gè)體、基因型、妊娠期糖尿病前史、身體活動(dòng)不足以及種族/民族(尤其非洲裔美國(guó)人、西班牙/拉丁美洲裔美國(guó)人、美國(guó)印第安人及一些亞裔美國(guó)人和太平洋島民演變成這些疾病的可能性非常高)。此外，IGT和IFG本身也是演變成2型糖尿病的危險(xiǎn)因素。
“多肽”在本文指通過(guò)一個(gè)或多個(gè)肽鍵連在一起的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸。
“藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑”包括，例如，生理鹽水、緩沖鹽水、右旋糖、水、甘油丙三醇、乙醇、乳糖、磷酸鹽、甘露糖醇、精氨酸、海藻糖及其組合物，還包括延長(zhǎng)GIP或其生物活性變異型在體內(nèi)的半衰期，以增強(qiáng)或延長(zhǎng)肽或變異型的生物活性的試劑。例如，一分子或化學(xué)部分可以以共價(jià)鍵與GIP或其生物活性變異型連接；或可使該增強(qiáng)劑與GIP或其生物活性變異型同時(shí)施用。
優(yōu)選實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明涉及使用GIP或GIP變異型來(lái)判斷一個(gè)體是否易于演變成2型糖尿病、IFG或IGT的方法和試劑盒。
本發(fā)明包括一個(gè)體是否易于演變成葡萄糖耐量低減(IGT)、空腹血糖異常(IFG)或2型糖尿病的判斷方法，該方法包括(i)給至少一個(gè)體施加至少一多肽，其選自由腸抑胃肽(GIP)和生物活性GIP變異型或其任意組合組成的組，其中該多肽可選擇性地與一藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑配合使用；(ii)評(píng)估個(gè)體對(duì)施加的應(yīng)答；(iii)將應(yīng)答與一恒量比較；及(iv)從比較來(lái)判斷該個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。
當(dāng)然，上述方法可用于測(cè)試任何個(gè)體，即使認(rèn)為該個(gè)體不可能演變成2型糖尿病、IGT或IFG。上述方法也可更多選擇性地用于那些有可能演變成這些疾病的人，即顯示至少一種演變成2型糖尿病、IGT和IFG的易感性癥狀的個(gè)體。故本發(fā)明包括將上述方法用于，例如，至少一患有2型糖尿病、IGT或IFG的個(gè)體的血緣親屬；一年紀(jì)大于45歲或以上的個(gè)體；一肥胖的個(gè)體；或一已經(jīng)有IGT或IFG的個(gè)體(從演變成2型糖尿病的判斷因素來(lái)看)。
有沒(méi)有施加營(yíng)養(yǎng)素步驟都可使用上述方法。作為商業(yè)上一種簡(jiǎn)單方便的方式，上述方法只包括施加單劑量GIP或GIP變異型，然后采集血樣，并評(píng)估對(duì)GIP或GIP變異型的應(yīng)答。本實(shí)施例無(wú)需施加營(yíng)養(yǎng)素。
在另一施加營(yíng)養(yǎng)素的實(shí)施例中，作為商業(yè)上一種簡(jiǎn)單方便的方式，營(yíng)養(yǎng)素可以通過(guò)進(jìn)食形式施加，與葡萄糖耐受性試驗(yàn)相似或以靜脈輸注或其他形式施加。如果要施加營(yíng)養(yǎng)素，最好在評(píng)估步驟之前進(jìn)行。當(dāng)施加營(yíng)養(yǎng)素時(shí)，優(yōu)選營(yíng)養(yǎng)素是葡萄糖。但也可用其他營(yíng)養(yǎng)素，包括碳水化合物、氨基酸、脂質(zhì)、甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯、脂肪酸或其任意組合。本發(fā)明方法所用的碳水化合物包括己糖或戊糖，上述提到的葡萄糖的具體例子包括右旋糖、左旋糖、半乳糖、木糖醇、甘露糖醇及山梨糖醇或其任意組合。營(yíng)養(yǎng)素也包括營(yíng)養(yǎng)素衍生物，如丙酮醇鹽和乳酸鹽，它們都是碳水化合物衍生物。營(yíng)養(yǎng)素還包括營(yíng)養(yǎng)素代謝途徑的中間物。例如，丙酮酸是碳水化合物代謝的中間物。
在上述方法中，GIP或GIP變異型及營(yíng)養(yǎng)素施加的優(yōu)選途徑是靜脈輸注，可同時(shí)或分開(kāi)進(jìn)行。不用說(shuō)，GIP或GIP變異型及營(yíng)養(yǎng)素可經(jīng)口服、腸道、腸胃外施加，或用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他途徑施加。
在上述方法中，個(gè)體對(duì)單獨(dú)的GIP或GIP變異型或施加營(yíng)養(yǎng)素的應(yīng)答的優(yōu)選評(píng)估方法是評(píng)估胰島素、C肽、葡萄糖的血漿水平或胰島素分泌水平、胰島素分泌率或其任意組合。本文中所用的”胰島素應(yīng)答”表示個(gè)體在施加GIP或GIP變異型后其體內(nèi)的胰島素水平。本文中所用的”C肽應(yīng)答”表示個(gè)體在施加GIP或GIP變異型后其體內(nèi)的C肽水平。本文中所用的”葡萄糖應(yīng)答”表示個(gè)體在施加GIP或GIP變異型后其體內(nèi)的葡萄糖水平。這種評(píng)估可選擇性地在施加步驟之前、之后或期間進(jìn)行。在一實(shí)施例中，在施加前后分別對(duì)上述水平的其中一種或多種進(jìn)行評(píng)估，以便比較這些水平的差異，這種差異即表示對(duì)施加的應(yīng)答。這些水平在血漿或其他部位的評(píng)估方法已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。例如，參見(jiàn)，胰島素Anderson等人，”Enzyme immunoassay of intact insulin in serum and plasma”，Clinical Chemistry 39578-582頁(yè)，(1993)(胰島素水平)；Heding，L.G.，”Specificand direct radioimmunoassay for human C-peptide in serum”，Diabetologia 11547-548頁(yè)，(1975)(C肽水平)；Kjems等人，”Validation of methods for measurement ofinsulin secretion in humans in vivo”，Diabetes 49580-588頁(yè)，(2000)(胰島素分泌率)。在一商業(yè)操作方便的優(yōu)選實(shí)施例中，評(píng)估胰島素水平。由于用放射免疫試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)來(lái)評(píng)估外周血胰島素水平非常普遍，而且比較便宜，所以適合商業(yè)操作。
評(píng)估施加GIP或GIP變異型后的血漿水平，優(yōu)選在施加后5-60分鐘內(nèi)進(jìn)行，最好是在施加后約15分鐘內(nèi)。在一優(yōu)選實(shí)施例中，把一導(dǎo)管置于個(gè)體上，GIP或GIP變異型通過(guò)導(dǎo)管施加給個(gè)體，然后從同一根導(dǎo)管采集血液，在二者之間，可選擇性地對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行適當(dāng)沖洗。
在上述方法中，將對(duì)施加的應(yīng)答與一”恒量”進(jìn)行比較。該恒量是一數(shù)值，其用于判斷對(duì)上述施加的應(yīng)答與正常個(gè)體的應(yīng)答是否有顯著差異，正常個(gè)體即是其GIP應(yīng)答是正常的，沒(méi)有下降的個(gè)體。這個(gè)恒量可簡(jiǎn)單表示為一群在施加GIP或GIP變異型和葡萄糖后，其C肽或胰島素水平無(wú)下降、葡萄糖水平無(wú)上升的個(gè)體應(yīng)答的算術(shù)平均值。當(dāng)然，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所懂得那樣，該恒量在數(shù)學(xué)上可為較復(fù)雜。該恒量還可基于特定分組個(gè)體的數(shù)據(jù)而表示得更復(fù)雜，其中選擇的分組要為測(cè)試個(gè)體或個(gè)體群提供更準(zhǔn)確的對(duì)照。在一優(yōu)選實(shí)施例中，預(yù)先確定恒量，即在上述方法進(jìn)行施加之前已經(jīng)算出該恒量。
在上述方法中，”判斷步驟”包括將測(cè)試個(gè)體或個(gè)體群的應(yīng)答與恒量進(jìn)行比較，并基于比較結(jié)果判斷測(cè)試個(gè)體或個(gè)體群是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。簡(jiǎn)單地說(shuō)，計(jì)算測(cè)試個(gè)體或個(gè)體群的應(yīng)答與恒量的數(shù)學(xué)差值，并將該差值與第二恒量比較。第二恒量表示若干個(gè)或某個(gè)范圍的數(shù)字，其中，如果上述數(shù)學(xué)差值對(duì)應(yīng)第二恒量的數(shù)字或處于這些數(shù)字的范圍內(nèi)，就判斷該測(cè)試個(gè)體或個(gè)體群易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。在一優(yōu)選實(shí)施例中，預(yù)先確定第二恒量，即在上述方法進(jìn)行施加之前已經(jīng)算出第二恒量。
在一優(yōu)選實(shí)施例中，使用一判斷裝置來(lái)完成判斷步驟。判斷裝置的例子包括已編程以便進(jìn)行上述計(jì)算、列表或作曲線的計(jì)算機(jī)或其他可用來(lái)快速選擇合適的第一和第二恒量或進(jìn)行上述計(jì)算的類似裝置。計(jì)算機(jī)計(jì)算也可在互聯(lián)網(wǎng)站或類似地點(diǎn)進(jìn)行，這些網(wǎng)站或地點(diǎn)含有用于進(jìn)行上述計(jì)算的合適數(shù)據(jù)庫(kù)。在一優(yōu)選實(shí)施例中，使用的數(shù)據(jù)庫(kù)按年齡、性別、種族、體重、基因型以及其他因素分組，其中每組各有一個(gè)恒量，包括一適當(dāng)范圍，取決于待測(cè)試個(gè)體的特征選擇一數(shù)據(jù)庫(kù)。
本發(fā)明還包括判斷個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病的試劑盒，該試劑盒包括至少一多肽，其選自由腸抑胃肽(GIP)和生物活性GIP變異型或其任意組合組成的組，其中多肽選擇性地與一藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑配合使用，以及至少一用于判斷該個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病的判斷裝置。
術(shù)語(yǔ)”試劑盒”是指用于裝試劑的一個(gè)或多個(gè)容器或一種或多種包裝材料。這些容器或包裝材料最好要無(wú)菌無(wú)污染環(huán)境的污染物，而且試劑盒最好有一份或多份使用說(shuō)明，指示使用者如何使用試劑盒的試劑以實(shí)施上述方法。
在另一實(shí)施例中，試劑盒包括至少一支注射器，其含有GIP或GIP變異型或其組合，其形式(1)粉末狀，例如與如生理鹽水混合使用的凍干粉末，或(2)液狀。試劑盒可包括或不包括營(yíng)養(yǎng)素。在一試劑盒包括營(yíng)養(yǎng)素的實(shí)施例中，該試劑盒包括至少一支注射器，其含有一種或多種營(yíng)養(yǎng)素，最好為葡萄糖，其形式(1)粉末狀，例如與如生理鹽水混合使用的凍干粉末，或(2)適當(dāng)穩(wěn)定液狀。
在另一實(shí)施例中，在個(gè)體的手或其他部位放置一靜脈管路，如果要施加營(yíng)養(yǎng)素，使注射器中的葡萄糖或其他營(yíng)養(yǎng)素注入靜脈管路，然后再使GIP或GIP變異型注入。隔一段適當(dāng)時(shí)間后，從靜脈管路采集血液以獲取C肽、胰島素或葡萄糖水平。按上述方法評(píng)估C肽、胰島素或葡萄糖水平，以判斷該個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。
試劑盒還包括至少一種判斷裝置以判斷個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。該裝置如上所述可包括一曲線或表格，或其他可用于快速選擇合適的上述第一和第二恒量或進(jìn)行上述計(jì)算的類似裝置。該裝置還可包括用于計(jì)算的軟件或數(shù)據(jù)庫(kù)或其他類似的電子裝置。試劑盒也可包含一密碼或其他類似編碼，其可使使用者登入以上所述的互聯(lián)網(wǎng)站或其他適合地點(diǎn)進(jìn)行上述計(jì)算。
實(shí)施例當(dāng)然，以下實(shí)施例是用于闡述而不意味著對(duì)本發(fā)明的限制。
研究議定書(shū)在研究前，本研究議定書(shū)在1998年4月經(jīng)波鴻魯爾大學(xué)(Ruhr-University，Bochum)醫(yī)學(xué)院倫理委員批準(zhǔn)(注冊(cè)號(hào)為1114)。所有參與者都簽署了書(shū)面授權(quán)同意書(shū)。
受試者本研究共有10名健康對(duì)照受試者、10名2型糖尿病患者及21名2型糖尿病患者的第一級(jí)親屬。表1列出了受試者/患者的特征。按性別、肥胖和年齡分組。無(wú)糖尿病的參與者均接受口服葡萄糖耐受性測(cè)試(75gBoebringer O.G.T.，RocheDiagnostics，Mannheim，Germany)，以測(cè)量空腹及服食葡萄糖120分鐘后的微血管葡萄糖。從親屬組中排除1名糖尿病受試者。在健康對(duì)照組的受試者中，以取得的病史排除任何有2型糖尿的第一或第二級(jí)親屬。
所有參與者在空腹?fàn)顟B(tài)時(shí)采集血樣，以測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)血液和臨床化學(xué)參數(shù)。采集尿樣，用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定清蛋白、蛋白質(zhì)及肌酸酐。排除貧血(血紅蛋白＜12g/dl)、肝酶(ALAT、ASAT、AP、γ-GT)的活性上升至其各自正常值的2倍、或肌酸酐濃度增加(＞1.5mg/dl)的參與者。一位女性第一級(jí)親屬的γ-GT活性升高(90U/l，正常值小于28U/l)，很可能是由膽石病引起的。測(cè)量身高和體重及腰圍和臀圍，以分別計(jì)算體質(zhì)指數(shù)及腰臀圍比(見(jiàn)表1)。按照Riva-Rocci方法測(cè)量血壓。
有五名2型糖尿病患者已經(jīng)接受單獨(dú)飲食治療，另外五名患者接受口服抗糖尿病治療(一名服用格列本(glibenclaimde)，每天3.5毫克，三名服用拜糖平(acarbose)，每天150毫克，一名服用滅糖敏(metformin)，每天1700毫克)?；颊咧袥](méi)有一個(gè)用胰島素治療。在本研究前，這些患者均停止服用普通抗糖尿病藥劑。
研究設(shè)計(jì)在兩種或三種情況下對(duì)所有參與者進(jìn)行研究(a)在一次篩選試驗(yàn)上，在空腹?fàn)顟B(tài)下，給所有受試者口服未知的葡萄糖耐量，然后進(jìn)行口服葡萄糖耐量測(cè)驗(yàn)，篩選實(shí)驗(yàn)參數(shù)。如果受試者滿足選擇的標(biāo)準(zhǔn)，他們將進(jìn)行第二次測(cè)驗(yàn)。
(b)高血糖注入試驗(yàn)，目的在于穩(wěn)定微血管血糖濃度在7.8mmol/l(140mg/dl)。試驗(yàn)以一次推注注射40％葡萄糖開(kāi)始，根據(jù)每5分鐘所測(cè)定的葡萄糖，輸注適當(dāng)葡萄糖(20％水溶液，重量/體積)以維持該濃度。從30至90分鐘開(kāi)始，以2.0pmol·kg-1·min-1的輸注速率通過(guò)靜脈施加腸抑胃肽(葡萄糖依賴性胰島素肽，GIP)。
(c)有六名受試者(五名健康對(duì)照組及一名第一級(jí)親屬)參與了第三次實(shí)驗(yàn)(在高血糖注入試驗(yàn)中用安慰劑代替GIP)，以測(cè)定對(duì)單獨(dú)延長(zhǎng)高血糖的胰島素分泌應(yīng)答。
肽合成GIP向德國(guó)Wolfenbüttel市的多肽實(shí)驗(yàn)室有限公司購(gòu)買(mǎi)。產(chǎn)品批號(hào)(藥品等級(jí))是C-0229，凈肽含量為80.3％。將肽溶解在0.9％氯化鈉/1％人血清血蛋白中(HAS Behring，salt poor，Marburg，Germany)，經(jīng)0.2μm硝酸纖維濾膜(Sartorius，Gttingen，Germany)過(guò)濾，并用現(xiàn)有技術(shù)凍存于-28℃。高效液相色譜曲線(由制造商提供)顯示制劑純度大于99％(用適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)試劑洗脫的單峰)。分析試樣的細(xì)菌生長(zhǎng)(標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)技術(shù))及致熱原(Laboratory Dr.Balfanz，Münster，Germany)。檢測(cè)到試樣沒(méi)有受細(xì)菌感染。來(lái)自GIP母液的試樣的內(nèi)毒素濃度為1.61EU/ml。
實(shí)驗(yàn)步驟試驗(yàn)在通宵禁食后的第二天早上進(jìn)行，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程受試者取仰臥位置，上身上升約30°。用聚四氟乙烯插管(Moskito 123，18 gauge，Vygon，Aachen，Germany)刺入兩前臂靜脈，使用0.9％氯化鈉保持其不閉(分別用于取血樣和施加葡萄糖和GIP)。用Finalgon(Nonivamid 4mg/g，Nicoboxil 25mg/g)使兩耳垂充血。
在-15分鐘和0分鐘時(shí)采集基礎(chǔ)血樣后，在0分鐘時(shí)，一次推注注射40％葡萄糖(水溶液，重量/體積)，以使微血管葡萄糖濃度上升至7.8mmol/l。該劑量基于空腹血糖濃度和體重。然后，開(kāi)始靜脈輸注20％葡萄糖(水溶液，重量/體積)，維持一輸入速率，該速率調(diào)節(jié)微血管葡萄糖濃度至約7.8mmol/l(圖1A)。30分鐘后，開(kāi)始輸注人合成GIP(2.0pmol·kg-1·min-1)，持續(xù)60分鐘(速率20ml/h，Perfusorsecura，Braun Melsungen，Germany；用1％人血清血蛋白稀釋在0.9％氯化鈉中)。每隔五分鐘，在100μl取自耳垂的微血管試樣中測(cè)定血糖。為了計(jì)算輸入葡萄糖的量，記錄葡萄糖輸注速率及改變輸注速率的時(shí)間點(diǎn)。
血樣將血液放入含有EDTA和抑酶肽(aprotinin)(抑肽酵素(Trasylol)20.000KIU/ml，每10ml血液配200μl抑肽酵素；Bayer AG，Leverkusen，Germany)的冷凍管中，并放在冰上。將血樣(約100μl)儲(chǔ)存在氟化鈉中(Microvette CB 300；Sarstedt，Nümbrecht，Germany)用于即時(shí)測(cè)量葡萄糖。將用于激素分析的血漿在4℃離心后，凍存在-28℃。
實(shí)驗(yàn)室測(cè)定用葡萄糖氧化酶法以葡萄糖分析儀2(Beckman Instruments，Munich，Germany)測(cè)定葡萄糖。用胰島素微粒酶免疫試驗(yàn)法(Microparticle Enzyme Immunoassay，MEIA)(Imx Insulin，Abbott Laboratories，Wiesbaden，Germany)測(cè)定胰島素。內(nèi)定變異系數(shù)(intra-assay coefficients of variation)約為4％。用德國(guó)Marburg的DRGInstruments有限公司制造，并涂上C肽抗體的微滴定孔板(C肽MTPL EIA)測(cè)定C肽。內(nèi)定變異系數(shù)約為6％。用人胰島素及C肽作為標(biāo)準(zhǔn)。
用市售ELISA(DAKO Diagnostics Ltd.，Cambrigeshire，UK)測(cè)定胰島素原。該試驗(yàn)還與斷裂(65，66)胰島素原(100％)及斷裂(31，32)胰島素原(100％)起交叉反應(yīng)。檢測(cè)極限小于0.2pmol/l。內(nèi)定變異系數(shù)為3.2-5.7％，間定變異系數(shù)(inter-assaycoefficients of variation)為3.6-6.0％。
如現(xiàn)有技術(shù)(26)所述，測(cè)定IR-GIP，用抗血清R65(最終稀釋度為1∶150,000)和合成人GIP作為示蹤劑制備及標(biāo)準(zhǔn)試劑。實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)極限小于1pmol/l?？寡錜65與GIP分子的中間部分結(jié)合。
內(nèi)定變異系數(shù)約為8％，間定變異系數(shù)小于6％。
如現(xiàn)有技術(shù)(27)所述，用在以乙醇提取的血漿中的豬抗體4305測(cè)定IR胰高血糖素。檢測(cè)極限小于1pmol/l。內(nèi)定變異系數(shù)為6.7％，間定變異系數(shù)為16％。
計(jì)算根據(jù)HOMA模型(28)計(jì)算胰島素阻抗性及B細(xì)胞功能。
用軟件”ISEC”通過(guò)解卷分析(29，30)計(jì)算胰島素分泌率，該軟件的版本為2.0a，由英國(guó)倫敦北安普頓廣場(chǎng)城市大學(xué)系統(tǒng)科學(xué)系的醫(yī)學(xué)測(cè)量及信息中心的Roman Hovorka博士(31)提供。
統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SEM)表示。所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果均用5.01版本的NCSS(Jerry Hintze，Kaysville，Utah，USA)由重復(fù)測(cè)定變異數(shù)分析(ANOVA)而算出。若記錄顯示治療和時(shí)間有顯著的相互作用(P＜0.05)，就用單向ANOVA及Student’s t-檢驗(yàn)(配對(duì)分析)比較單時(shí)間點(diǎn)的數(shù)值。雙側(cè)p值小于0.05就認(rèn)為差異顯著。
結(jié)果將參與兩個(gè)高血糖注入實(shí)驗(yàn)，即有外源性GIP或無(wú)外源性GIP，的六名受試者的結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)胰島素、C肽和胰島素分泌在GIP存在下上升的濃度比安慰劑高(所有p＜0.001)。有或無(wú)外源性GIP實(shí)驗(yàn)之間整體增加的應(yīng)答差值與外源性GIP實(shí)驗(yàn)期間在15和30分鐘(只有高血糖)與75和90分鐘(高血糖加GIP)之間所測(cè)定的增加量有關(guān)(胰島素r2＝0.532，p＝0.099；C肽r2＝0.94，p＝0.0014；胰島素分泌r2＝0.898，p＝0.004)。因而基于單個(gè)實(shí)驗(yàn)可判斷GIP的促胰島素分泌作用(細(xì)節(jié)未示)。
與健康對(duì)照組及第一級(jí)親屬相比，2型糖尿病患者的空腹血糖和糖化血紅蛋白(HbA1C)的濃度較高，而高密度脂蛋白膽固醇和肌酸酐的濃度較低(見(jiàn)表1)。健康對(duì)照組及第一級(jí)親屬的所有參數(shù)都相差不大(見(jiàn)表1)。
2型糖尿病患者在基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)是高血糖的(見(jiàn)圖1A)。各組之間的穩(wěn)態(tài)葡萄糖濃度相等(見(jiàn)圖1A)。輸注GIP期間，分別測(cè)定健康對(duì)照組、第一級(jí)親屬和2型糖尿病患者的近穩(wěn)態(tài)血漿水平(見(jiàn)圖1B)。
具有正常血糖的第一級(jí)親屬的基礎(chǔ)血漿胰島素濃度比高血糖2型糖尿病患者低很多(見(jiàn)圖2A)。將血漿葡萄糖濃度升到7.8mmol/l(30分鐘)，使健康對(duì)照組、第一級(jí)親屬和2型糖尿病患者的血漿胰島素的數(shù)值上升至相近(見(jiàn)圖2A；p＝0.29)。根據(jù)外源性GIP，健康對(duì)照組、第一級(jí)親屬和2型糖尿病患者的血漿胰島素還會(huì)繼續(xù)上升，分別為39.5±7.0、近于26.8±2.6及21.2±4.3Mu/I(見(jiàn)圖2A；p＝0.031)。按Δ(將GIP輸入后的數(shù)值減GIP輸入前的數(shù)值)判斷，對(duì)GIP的促胰島素應(yīng)答為一種由單獨(dú)對(duì)高血糖的應(yīng)答校正的分泌應(yīng)答的量度。不論是基于胰島素(見(jiàn)圖3A)、C肽(見(jiàn)圖3B)、還是胰島素分泌率(見(jiàn)圖3C)，與健康對(duì)照組相比，2型糖尿病患者的這種對(duì)GIP的促胰島素應(yīng)答都明顯下降。第一級(jí)親屬的Δ值比2型糖尿病患者的Δ值低很多。但是，在健康對(duì)照組和第一級(jí)親屬之間，胰島素分泌率相差很大(p＝0.022)，但胰島素的Δ值(p＝0.19)和C肽的Δ值(p＝0.061)的差異卻不大。不過(guò)，基于健康對(duì)照組的結(jié)果，相對(duì)于95％置信區(qū)間判斷個(gè)體應(yīng)答，21名第一級(jí)親屬中有7人的胰島素值全部低于正常下限(見(jiàn)圖3D)。11名第一級(jí)親屬的C肽濃度值全部低于正常受試者的95％置信區(qū)間(見(jiàn)圖3E)，而21名第一級(jí)親屬中有12人的胰島素分泌率低于95％置信區(qū)間的下限(見(jiàn)圖3F)。
當(dāng)B細(xì)胞分泌應(yīng)答用對(duì)照組的平均濃度的百分比值來(lái)表示時(shí)，第一級(jí)親屬的活性在空腹?fàn)顟B(tài)(胰島素75±8％，C肽60±8％，胰島素分泌率63±8％)、高血糖條件(15/30分鐘)(胰島素79±7％，C肽55±8％，胰島素分泌率53±7％)，以及在外源性GIP存在下(75/30分鐘)(胰島素77±7％，C肽62±6％，胰島素分泌率65±6％)均下降。輸入GIP后，這些數(shù)字是61±13％(胰島素)、61±11％(C肽)、50±10％(胰島素分泌率；未詳細(xì)圖示)。
與正常受試者(圖4；p＝0.049)及2型糖尿病患者第一級(jí)親屬(p＝0.012)相比，2型糖尿病患者的基礎(chǔ)胰島素原濃度高很多。正常受試者和第一級(jí)親屬之間的差異卻不明顯(p＝0.16)。當(dāng)胰島素原以類胰島素免疫反應(yīng)性的相對(duì)比例來(lái)表示時(shí)，發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者(26±12％)的數(shù)值比第一級(jí)親屬(12±5％，p＝0.0067)或健康對(duì)照組(16±8％)高很多。
各組之間空腹?fàn)顟B(tài)的胰高血糖素濃度相差不大(見(jiàn)圖5；p＝0.26)。高血糖誘導(dǎo)健康對(duì)照組和第一級(jí)親屬的胰高血糖素濃度下降，而2型糖尿病患者的胰高血糖素濃度無(wú)顯著變化。輸入外源性GIP，健康對(duì)照組和第一級(jí)親屬的胰高血糖素濃度繼續(xù)下降，但2型糖尿病患者卻保持不變(圖5)。
HOMA分析(見(jiàn)表2)顯示各組之間的B細(xì)胞分泌功能無(wú)顯著差異(p＝0.27)。2型糖尿病患者的胰島素阻抗性比健康對(duì)照組(p＝0.034)和第一級(jí)親屬(p＝0.022)都大。健康對(duì)照組和第一級(jí)親屬之間在這方面的差異不顯著(p＝0.25)。
討論至少有一小組2型糖尿病患者第一級(jí)親屬中的GIP喪失其部分促胰島素分泌作用(見(jiàn)圖2和圖3)。這與在2型糖尿病患者中公知的表型異常相似(7，24，25)。根據(jù)本研究，這種GIP促胰島素分泌作用的下降先于任何與臨床有關(guān)的葡萄糖耐受性失調(diào)，這是因?yàn)樗械谝患?jí)親屬都有正?；?在一受試者中)口服葡萄糖耐量低減。
對(duì)外源性GIP施加的胰島素分泌應(yīng)答的分布表明約50％第一級(jí)親屬的應(yīng)答正常，其中至少一半與2型糖尿病患者的應(yīng)答非常相似，即對(duì)GIP的胰島素分泌應(yīng)答顯著下降(見(jiàn)圖3，右側(cè))。這個(gè)比例與最終本身轉(zhuǎn)為糖尿病的2型糖尿病患者第一級(jí)親屬的百分比相近(22)。因此，本發(fā)明理解成輸入GIP后促胰島素應(yīng)答的下降是轉(zhuǎn)為2型糖尿病的誘因的早期標(biāo)志。本發(fā)明還理解成輸入GIP后促胰島素應(yīng)答的下降也先于2型糖尿病的其他代謝紊亂特征，如胰島素阻抗性(32，33)、高胰島素(34，35)以及B細(xì)胞分泌能力下降(15，18)，本研究的第一級(jí)親屬都沒(méi)有出現(xiàn)以上這些因素。綜上所述，本發(fā)明認(rèn)為GIP促胰島素作用下降是B細(xì)胞功能反常的早期標(biāo)志，有可能會(huì)轉(zhuǎn)為2型糖尿病。
現(xiàn)在還不知道在2型糖尿病患者和測(cè)試的第一級(jí)親屬中GIP促胰島素作用下降的原因。它可能是一種特定缺損，例如，有關(guān)2型糖尿病患者體內(nèi)在胰B細(xì)胞上GIP受體表達(dá)的水平(14)。一種可能性是GIP受體發(fā)生突變，導(dǎo)致與其配體、GIP的相互作用減弱，或由于mRNA轉(zhuǎn)錄、翻譯或影響其生物活性的翻譯后修飾而使GIP受體表達(dá)下降。然而，還未發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)的GIP受體編碼(36)或啟動(dòng)區(qū)的多樣性與2型糖尿病有關(guān)。GIP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的其他組分不可能有缺損，這是因?yàn)榧词故?型糖尿病患者，GLP-1仍然能很有效地增大胰島素分泌應(yīng)答(3，7，37，38)。盡管GIP和GLP-1的受體分子不同，而且各自不會(huì)與其他配體起交叉反應(yīng)，但他們共享大部分細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分(39-45)。這也表明GIP特異性而不是2型糖尿病患者(多數(shù)也指其第一級(jí)親屬)的B細(xì)胞功能的一般低減。
本發(fā)明還理解成本研究發(fā)現(xiàn)的GIP功能低減是B細(xì)胞功能下降的其中一個(gè)方面，一般來(lái)說(shuō)，包括對(duì)葡萄糖、精氨酸，也可能對(duì)其他促分泌素的應(yīng)答下降(34，46，47)。還發(fā)現(xiàn)不同的刺激使2型糖尿病患者第一級(jí)親屬的B細(xì)胞功能出現(xiàn)這種下降(18，20，48，49)。本研究發(fā)現(xiàn)，空腹?fàn)顟B(tài)和高血糖條件下測(cè)定B細(xì)胞分泌參數(shù)相對(duì)于健康對(duì)照組是下降的，這就支持了這種假設(shè)。本發(fā)明考慮的另一機(jī)理是GIP和葡萄糖在空腹?fàn)顟B(tài)和高血糖條件下可能會(huì)協(xié)同作用來(lái)刺激B細(xì)胞。Holz等人最近表明要使B細(xì)胞對(duì)葡萄糖作出應(yīng)答，需要100pmol/l另一種腸促胰島激素GLP-1(50)。他們把這種現(xiàn)象稱為誘導(dǎo)”葡萄糖感受”(“glucose competence”)。不過(guò)，比較普遍的是用30-100pmol/l空腹?jié)舛鹊腉IP代替GLP-1，其中在空腹的人中測(cè)定的典型濃度約為2-10pmol/l(3，52-54)。但是，在基礎(chǔ)態(tài)中用exendin[9-36酰胺]拮抗GLP-1效應(yīng)會(huì)增加胰高血糖素，這表明在這些低空腹?jié)舛认聦?duì)胰島的影響(55)。考慮到在灌注胰中兩種腸促胰島激素的劑量-應(yīng)答關(guān)系幾乎相同(56)，可假設(shè)也需要基礎(chǔ)GIP來(lái)誘導(dǎo)”葡萄糖感受”。因此，高血糖作用下降(在注入條件下，見(jiàn)圖2)對(duì)第一級(jí)親屬的胰島素分泌的影響可看作是這些受試者的GIP活性降低的結(jié)果。
胰島素阻抗性是2型糖尿病患者的另一種表型特性，在第一級(jí)親屬中也發(fā)現(xiàn)有這種阻抗性(16-21，49)。因?yàn)槠毡檎J(rèn)為必須同時(shí)具備分泌缺損和胰島素敏感性下降才能解釋2型糖尿病的所有方面，有趣的是，我們的第一級(jí)親屬不管怎樣都會(huì)顯示胰島素阻抗性和胰島素分泌低減的特征。用HOMA分析可能會(huì)有限制(60)，但就其而言，胰島素阻抗性(由HOMA模型測(cè)定)并不是同一些顯示外源性GIP促胰島素作用下降的受試者的特征。故我們得出B細(xì)胞分泌功能下降以及B細(xì)胞功能異常與胰島素阻抗性并不一定同時(shí)出現(xiàn)。
結(jié)論是，我們已經(jīng)證明具有正常葡萄糖耐受性的2型糖尿病第一級(jí)親屬與健康對(duì)照組相比，GIP促胰島素作用下降。在這些受體中這是新基因型異常，可通過(guò)基因測(cè)定。
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表1 參與輸注GIP的高血糖注入實(shí)驗(yàn)的受試者和病人的特征

表2 參與輸注GIP的高血糖注入實(shí)驗(yàn)的受試者和病人的胰島素敏感性和B細(xì)胞功能(根據(jù)(28)評(píng)估體內(nèi)穩(wěn)態(tài)模型)

權(quán)利要求
1.一種一個(gè)體是否易于演變成葡萄糖耐量低減(IGT)、空腹血糖異常(IFG)或2型糖尿病的判斷方法，其特征在于所述方法包括(i)給至少一個(gè)體施加至少一多肽，其選自由腸抑胃肽(GIP)和生物活性GIP變異型或其任意組合組成的組；其中所述多肽可選擇性地與一藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑配合使用；(ii)評(píng)估所述個(gè)體對(duì)所述給藥的應(yīng)答；(iii)將應(yīng)答與一恒量比較；及(iv)從比較來(lái)判斷該個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述個(gè)體顯示至少一種演變2型糖尿病的易感性癥狀，但該個(gè)體沒(méi)有患上2型糖尿病。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述評(píng)估應(yīng)答是胰島素應(yīng)答。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述評(píng)估應(yīng)答是C肽應(yīng)答。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述評(píng)估應(yīng)答是葡萄糖應(yīng)答。
6.一種一個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病的判斷試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括至少一多肽，其選自由腸抑胃肽(GIP)和生物活性GIP變異型或其任意組合組成的組，其中所述多肽可選擇性地與一藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑配合使用，以及至少一判斷裝置，其用于判斷該個(gè)體是否易于演變成IGT、IFG或2型糖尿病。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述多肽是液體溶液或凍干的。
8.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述多肽是GIP。
9.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述易感性癥狀是所述個(gè)體是至少一個(gè)有2型糖尿病的個(gè)體的第一級(jí)親屬。
10.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述易感性癥狀是所述個(gè)體的年齡為45歲或以上。
11.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述易感性癥狀是所述個(gè)體是肥胖的。
12.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述易感性癥狀是所述個(gè)體有IGT。
13.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述易感性癥狀是所述個(gè)體有IFG。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述個(gè)體顯示至少一種演變成IGT的易感性癥狀，但該個(gè)體沒(méi)有IGT。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述多肽是GIP。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法還包括在所述評(píng)估步驟前給所述個(gè)體施加至少一種營(yíng)養(yǎng)素。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于所述營(yíng)養(yǎng)素是葡萄糖。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述個(gè)體顯示至少一種演變成IFG的易感性癥狀，但該個(gè)體沒(méi)有IFG。
全文摘要
本發(fā)明揭示了一個(gè)體是否易于演變成葡萄糖耐量低減(IGT)、空腹血糖異常(IFG)或2型糖尿病的判斷方法及試劑盒。這些方法包括給個(gè)體施加腸抑胃肽(GIP)或GIP變異型和營(yíng)養(yǎng)素，測(cè)定個(gè)體的應(yīng)答以及判斷個(gè)體是否易于演變成IGT、2型糖尿病或IFG。
文檔編號(hào)A61K38/00GK1942767SQ01811771
公開(kāi)日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2001年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月1日
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