專利名稱：嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的目標化合物是有用的金屬蛋白酶，如鋅蛋白酶特別是鋅水解酶的抑制劑，這類化合物可有效地預(yù)防和治療一些與越來越多出現(xiàn)的血管收縮相關(guān)聯(lián)的疾病狀態(tài)。這種疾病的例子有高血壓、冠狀動脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。此外這類化合物是用于抑制移植物排斥、器官保護和治療眼科疾病的有用的抑制細胞生長劑和大腦保護劑。
內(nèi)皮素是存在三種異構(gòu)體的肽，這三種異構(gòu)體是ET-1，ET-2和ET-3，它們各自被截然不同的基因編碼。它們最初是1988年由Yanagisawa在豬內(nèi)皮細胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的(Yanagisawa M；Kurihara H；KimuraS；Tomobe Y；Kobayashi M；Mitsui Y；Yazaki Y；Goto K；MasakiT血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的一種新的強烈的血管收縮肽[參閱注解]，NARURE(1988年3月31日)，332(6163)卷，411～5頁)。這些活性的ET是帶有兩個分子內(nèi)二硫橋鍵的21個氨基酸的肽。它們是由203～212氨基酸的前原蛋白質(zhì)產(chǎn)生的，此前原蛋白質(zhì)被具有弗林蛋白酶特征的肽鏈內(nèi)切酶處理成生物惰性的大-內(nèi)皮素(大-ET)。這些大-ET在氨基酸21和22之間水解斷裂而被特殊地處理為成熟的各種ET，氨基酸21和22分別是色氨酸21-纈氨酸22(大-ET-1、大ET-2)和在大-ET-3為色氨酸21-異亮氨酸22。早在1988年就假定是一種特殊的金屬蛋白酶造成這種特殊的斷裂。在1994年從牛腎上腺純化并克隆了ECE-1(內(nèi)皮素轉(zhuǎn)變酶-1)(Xu D、Emoto N、Giaid A、Slaughter C、Kaw S、de Witt D、Yanagisawa M“ECE-1一種促進大-內(nèi)皮素-1的蛋白水解活性的膜-結(jié)合金屬蛋白酶”，Cell(1994年)78期473～485頁)。
ECE-1是膜結(jié)合的II型鋅-肽鏈內(nèi)切酶，具有最佳中性pH值及鋅結(jié)合的不固定HExxHx(＞20)E。它屬于亞族M13，具有包括活性部位的大的681氨基酸胞外結(jié)構(gòu)域。M13族的其它成員有NEP24.11(中性肽鏈內(nèi)切酶)、PEX、一種磷酸鹽調(diào)節(jié)的中性肽鏈內(nèi)切酶、及凱爾血型蛋白，此蛋白最近被描述為大-ET3加工酶。人類血統(tǒng)的M13族成員的特征是高的分子量(＞80kDa)、保存許多二硫橋鍵和復(fù)雜的糖基化模式。最近解決了NEP的結(jié)構(gòu)。(Oefner等J.Mol.Biol.2000年，296卷，341-349頁)。ECE的催化區(qū)域結(jié)構(gòu)和有關(guān)人類M13蛋白酶明顯地比基體金屬蛋白酶(MMP)的成員大(＞650個氨基酸)。MMP族屬于metzincins，顯示典型的HExxHxxGxxH模式，與MMP族不同，M13族成員是包括HExxHx(＞20)E模式的gluzincins。這兩個族在催化區(qū)域結(jié)構(gòu)的大小、結(jié)構(gòu)和配體的鋅配位模式方面無疑是不同的。兩個族的活性部位顯示了明顯的差異，這種差異對抑制劑的類型和潛在的選擇性有明顯的影響。
本發(fā)明的一個方面涉及化學(xué)式(I)的化合物及其二聚體形式，和/或其藥用酯和/或藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳氨基羰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基，或基團YR2是雜環(huán)基；R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲?；Ⅳ然?、羧烷基、氰基、氨基、單-及二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳氨基、芳烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個基團是N；Y是-O-或-NR5-。
術(shù)語“烷基”，可為單獨或結(jié)合形式的，表示含有最多7個、優(yōu)選最多4個碳原子的直-鏈或支-鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(異-丁基)、1-甲基乙基(異-丙基)、正-丁基、和1，1-二甲基乙基(叔-丁基)。
術(shù)語“羧基”是指基團-C(O)OH。
術(shù)語“氨基甲?；笔侵富鶊F-C(O)NH2。
術(shù)語“羰基”是指基團-C(O)-。
術(shù)語“鹵素”是指氟、溴、氯和碘基團。
術(shù)語“磺?；笔侵富鶊F-S(O2)-。
術(shù)語“鏈烯基”是指定義如烷基的碳氫鏈含有至少一個烯屬雙鍵的基團(包括例如乙烯基、烯丙基和丁烯基)。
術(shù)語“鏈炔基”是指定義如烷基的碳氫鏈含有至少一個烯屬三鍵的基團(包括例如丙炔基、丁炔(1)-基等。
術(shù)語“烷氧基”，可為單獨或結(jié)合形式的，表示一種烷基醚基，其中術(shù)語“烷基”具有上述給出的含義，如甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、異丙氧基、正-丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
術(shù)語“烷氧羰基”是指化學(xué)式為-C(O)RC的一種基團，其中RC是上文定義的烷氧基。
術(shù)語“羥基”指基團-OH，術(shù)語“氰基”是指基團-CN。
術(shù)語“羥烷基”表示上文定義的烷基被羥基取代的基團。
術(shù)語“硫代烷基”和“氰基烷基”是指上文定義的烷基分別被一個-SH基團或一個-CN基團取代的基團。
“羧烷基”表示上文定義的低級烷基被HOOC-基團取代的基團。
術(shù)語“烷基羰基”，可為單獨或結(jié)合形式的，表示由鏈烷羧酸衍生的酰基，即烷基-C(O)-，如乙?；?、丙?；?、丁酰基、戊?；?-甲基戊?；?。
術(shù)語“環(huán)烷基”表示有3～8個、優(yōu)選3～6個碳原子的飽和的環(huán)狀烴基，即環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。
術(shù)語“氨基”指基團-NH2。
術(shù)語R2的“芳基”，可為單獨或結(jié)合形式的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選被一個或多個基團取代，這些取代基團可獨立地選自鹵素且優(yōu)選氟、烷氧羰基如甲基羰基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、苯基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基或1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基，更優(yōu)選氟、烷氧羰基、烷基、三氟甲基和三氟甲氧基，及最優(yōu)選氟。最優(yōu)選的芳香族基團是2，5-二氟芐基和2，4，5-三氟芐基。
術(shù)語R3和R4的“芳基”，可為單獨或結(jié)合形式的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選被一個或多個基團取代，這些取代基團可獨立地選自鹵素、烷氧羰基如甲基羰基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、苯基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基或1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基、環(huán)己基、羥基、烷基酰氨基如乙酰氨基、硝基、烷基磺?；缂谆酋；?，更優(yōu)選氟、氯、溴、烷氧基、羧基、1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基、烷氧羰基。對于R2和R4最優(yōu)選的芳香族基團是苯基和苯氧基。
術(shù)語R5的“芳基”指任選由烷基、烷氧基或鹵素取代的苯基。
術(shù)語“芳氧基”指上文定義的芳基通過氧連接到母體結(jié)構(gòu)上，即芳基-O-。
術(shù)語R2的“雜芳基”，可為單獨或結(jié)合形式的，是指一種芳香族單-或二環(huán)基團，它具有5～10個、優(yōu)選5～6個環(huán)原子并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選含有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。此雜芳基的實例是噻吩基、異噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡咯基、咪唑基、四唑基，優(yōu)選吡啶基、異噁唑基和噻唑基。任選地，雜芳基基團可獨立地被苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基、優(yōu)選烷基單-、二-或三-取代。
術(shù)語R3和R4的“雜芳基”，可為單獨或結(jié)合形式的，是指一種芳香族單-或二環(huán)基團，它具有5～10個、優(yōu)選5～6個環(huán)原子，并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選含有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。此雜芳基的實例是吡啶基、噻吩基、異噁唑基、異喹啉基、喹啉基、和1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮及吲哚基、嘧啶、噠嗪和吡嗪，優(yōu)選吡啶基和噻吩基。任選地，這些雜芳基基團可獨立地被烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基單-、二-或三-取代。
術(shù)語“雜環(huán)基”，可為單獨或結(jié)合形式的，指一種非-芳香族單-或二環(huán)基團，它具有5～10個、優(yōu)選5～6個環(huán)原子并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選具有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。此雜環(huán)的環(huán)可任選地被一種基團取代，這種基團獨立地選自鹵素、烷基、烷氧基、氧基羧基、烷氧羰基等；和/或此雜環(huán)在二級氮原子(即-NH-)上由烷基、芳基烷氧羰基、烷基羰基取代；或在三級氮原子(即＝N-)上被氧化。此雜環(huán)基團的實例是嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基等。
術(shù)語“二聚體形式”表示一種化合物，其中兩個同樣化學(xué)式I的化合物的兩個R1基團被普通單鍵替代；或其中R1是谷胱甘肽-S-或半胱氨酸-S-或酯，和/或它們的烷基羰基或芳基羰基衍生物，如乙酰基半胱氨酸-S-或苯甲酰半胱氨酸-S-，優(yōu)選谷胱甘肽-S-、半胱氨酸-S-、乙?；腚装彼?S-或苯甲酰半胱氨酸-S-。
術(shù)語“藥用鹽”是指保留游離堿或游離酸的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，這些游離堿或游離酸不是生物或其他方面不合需要的。這些鹽由無機酸和有機酸形成，無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、N-乙酰基半胱氨酸等。此外這些鹽可通過在游離酸中加入無機堿或有機堿來制備。無機堿衍生的鹽包括，但不限于，鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽等。有機堿衍生的鹽包括，但不限于，伯、仲、和叔胺、取代胺包括自然存在的取代胺、環(huán)狀胺和堿性離子交換樹脂的鹽，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、賴氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚乙烯亞胺樹脂等的鹽。
“藥用酯”表示通式(I)的化合物可在官能團處衍生，所提供的衍生物能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化回到母體化合物。這種化合物的實例包括生理上可接受的及代謝中易變的酯類衍生物，如甲氧基甲基酯，甲硫基甲基酯和新戊酰氧基甲基酯。此外，與代謝中易變的酯類似，能夠在體內(nèi)產(chǎn)生通式(I)母體化合物的任何生理上可接受的通式(I)化合物的等價物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
化學(xué)式(I)的化合物可用于抑制哺乳動物的金屬蛋白酶活性，特別是鋅水解酶的活性。更明確地，化學(xué)式(I)的化合物是有用的治療和預(yù)防一些失調(diào)的藥物，這些失調(diào)與內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的疾病相關(guān)聯(lián)。對這種酶的抑制將有用于治療心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼。此外該化合物是有用的抑制細胞生長劑和大腦保護劑，用于抑制移植物排斥、器官保護及治療眼科疾病。
更詳細地，本發(fā)明涉及下列化學(xué)式(I)的化合物，及其二聚體形式，和/或它們的藥用酯和/或藥用鹽，優(yōu)選它們的藥用酯和/或藥用鹽，及最優(yōu)選它們的藥用鹽 其中
R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；⒎蓟?、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基羰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基或基團YR2是雜環(huán)基；R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲?；Ⅳ然?、羧烷基、氰基、氨基、單-和二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳基烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個基團是N；Y是-O-或-NR5-。
本發(fā)明尤其是指通式(II)的化合物 其中R1，R2，R3，R4，X1，X2，X3，X4和Y與權(quán)利要求1中的定義相同。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R1選自氫或烷基羰基，更優(yōu)選氫或乙?；?，及最優(yōu)選地R1是氫。
在上述化合物中，R2優(yōu)選烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基甲?；⒍蓟榛?、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基或雜環(huán)基烷基，更優(yōu)選R2是芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基或雜芳基烷基，還要更優(yōu)選R2是芳基、芳烷基、芳基氨基甲?；?、芳基羰基、芳基磺?；螂s芳基烷基，及最優(yōu)選R2是芳烷基。在一個本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案中R2是任選被2～3個鹵素原子、優(yōu)選被氟原子取代的苯基烷基。
在上述定義的化合物中，優(yōu)選R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷硫基、鏈烯基、烷氧基、烷氧羰基、氨基、芳基、芳烷基、芳基鏈烯基、芳烷基氨基、芳氧基、單-和二烷基氨基、氨基甲?；Ⅳ然?、氰基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、三甲基硅烷基乙炔基和三氟甲基，更優(yōu)選R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基基團可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代。在本發(fā)明最優(yōu)選的實施方案中，R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、 鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基基團可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代，及R4是氫。
在本發(fā)明進一步的優(yōu)選實施方案中，Y是-NR5-，R5是氫或烷基，及更優(yōu)選氫。
在本發(fā)明另一個優(yōu)選實施方案中Y是-O-。
本發(fā)明還涉及上述定義的化合物中X1是N及X2、X3和X4是CH，或其中X2是N及X1、X3和X4是CH，或其中X3是N及X1、X2和X4是CH，或其中X1、X2、X3和X4是CH的化合物。
在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明包括的化合物定義如上，其中R1是氫或烷基羰基；R2是被2～3個鹵素取代的苯基烷基；R3選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基或苯氧基，及其中芳基和雜芳基基團可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；R4是氫；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個基團是N；及Y是-NH-或-O-。在一個優(yōu)選的實施方案的上述定義的化合物中，R1是氫或乙?；癛2是二氟代芐基或三氟代芐基。
在實施例中舉例說明了本發(fā)明優(yōu)選實施方案中的化合物。本發(fā)明包括的化合物尤其選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(4，6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-(4-氨基-5-氟代-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；d)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙腈；e)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；f)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酸；g)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸甲酯；h)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-羧酸甲酯；i)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟乙酸的化合物；j)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酰胺；k)(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇；l)(3R，5S)-1-(2-氯代-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟乙酸的化合物；m)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；n)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；o)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；p)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；q)(3R，5S)-1-吡啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；r)(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸；s)(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；t)(3R，5S)-1-(2-苯基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；u)(3R，5S)-1-(2-芐基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；v)(3R，5S)-1-(2-甲氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；w)(3R，5S)-1-(2-丁氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；x)-(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；y)(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；z)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；aa)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟-乙酸的化合物；bb)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；cc)(3R，5S)-1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；dd)(3R，5S)-1-[5-(4-甲氧基-苯基)-嘧啶-2-基]-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；ee)(2S，4R)-4-{2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-嘧啶-5-基}-苯甲酸；ff)(3R，5S)-1-(5-烯丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；gg)(3R，5S)-1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及hh)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷基乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇。
這些化合物在放射免疫測定(對ECE-抑制的E，參閱下文)中顯示IC50值為大約0.5nM～100nM。
尤其優(yōu)選的化學(xué)式(I)定義的化合物選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟乙酸的化合物；d)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；e)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；
f)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；g)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；h)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯；i)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟乙酸的化合物；j)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；k)1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；l)1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；m)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟-芐氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇；及n)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，這些組合物含有上文定義的化合物和藥用賦形劑。
本發(fā)明一個更進一步的實施方案涉及上文定義的化合物作為藥劑制造中活性成分的用途，該藥劑包含上文定義的化合物，用于預(yù)防和治療內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)化酶(ECE)的活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應(yīng)癥和器官保護。
本發(fā)明進一步涉及上述化合物治療或預(yù)防一些疾病的用途，這些疾病與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病有關(guān)，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應(yīng)癥和器官保護。
此外本發(fā)明包括的上述化合物可用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性有關(guān)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應(yīng)癥和器官保護。
本發(fā)明還包括一種方法，用于治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應(yīng)癥和器官保護，此方法包括將上文定義的化合物引入到人類或動物肌體中。
本發(fā)明還涉及上文定義的化合物用于抑制鋅水解酶活性的用途。
本發(fā)明還涉及無論何時通過下述方法制造的上述化合物。
化學(xué)式(I)化合物可通過本領(lǐng)域已知的方法或下述的方法來制備。除非另外指明，下述取代基R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2、X3、X4和Y的定義同上。
上文定義的化合物的制備方法可包括化學(xué)式III的化合物的反應(yīng)
其中A是HS-保護基團及P是NH-保護基團并將在下文部分中敘述。
a)與R2-鹵化物反應(yīng)以引入-OR2基團，接著脫去P-保護基并引入雜芳族化合物；或b)首先脫去化學(xué)式(III)的P-保護基，引入上文定義的雜芳族化合物，接著進行-OH/-NH2置換及還原胺化以引入R2；可任選地接著將上述R1、R2、R3、R4基團轉(zhuǎn)化為不同的基團和/或脫保護基和/或釋放出硫醇。
制備化學(xué)式(I)的化合物可遵循流程1的反應(yīng)路線起始原料是可利用的商品或通過本領(lǐng)域已知的方法由羥基脯氨酸合成，該方法在例如M.Bodanszky和A.Bodanszky的“The Practice of Peptide Synthesis”中有述，該書1984年在柏林由Springer Verlag出版。
合成從通過制備相應(yīng)的甲磺酸鹽(如在室溫～80℃用MeSO3H/Ph3P/DIAD在甲苯中反應(yīng))、通過氯化物(如在3℃到室溫用Ph3P/CCl4在CH2Cl2中反應(yīng))或通過溴化物(如在4℃～室溫用LiBr/DEAD/Ph3P在THF中反應(yīng))引起構(gòu)型反轉(zhuǎn)開始的。為了保持構(gòu)型，此相應(yīng)的反應(yīng)可在0℃～室溫用MeSO2Cl/吡啶/DMAP來完成。
流程1的步驟b表示通過如與三苯基甲硫醇或4-甲氧基芐硫醇的反應(yīng)(用K-Ot.-Bu在DMF中反應(yīng)，對于Cl0℃；對于Br0℃～室溫；對于Mes室溫～100℃)，引入帶保護的含硫部分。
流程1的步驟c的反應(yīng)通過方法A(在-20℃與LAH在THF中反應(yīng))或方法B(在-50℃與Red-Al在甲苯/THF中反應(yīng))來完成。
步驟d的反應(yīng)(對于Y＝-O-)可以下列條件來完成1.與NaH/R2Br在DMF中在0℃～室溫反應(yīng)，(O-烷基化)2.與TFA在CH2Cl2中在-20℃～室溫反應(yīng)，(脫BOC保護基)3.方法A與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺在80℃反應(yīng)3小時；方法B(平行-合成)與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺在二噁烷或DMF中于80-130℃反應(yīng)16小時～2天；方法C(對于反應(yīng)性較低的化合物)2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺/CuI在80℃反應(yīng)10小時。
制備酚醚化合物相應(yīng)的反應(yīng)可在Mitsunobu條件(DEAD/Ph3P/PhOH或PhSH在THF中)下進行。
對于Y是NR2或N-雜環(huán)的情況，可如下進行甲磺?；磻?yīng)，例如1.用1.1當量MeSO2Cl/1.5當量吡啶/1當量DMAP反應(yīng)，(甲磺酰化)；2.如YR2是吡咯或咪唑，用1當量NaI、NaH在DMF中于0℃～室溫反應(yīng)；3.用iPr3SiH在TFA/CH2Cl2中或CH3CN中(為三苯甲基-硫醇脫保護基)進行反應(yīng)。
可在室溫與TFA/iPr3SiH在CH2Cl2中或CH3CN中完成釋放硫醇的反應(yīng)。
制備Y是N的化合物時一種可供選擇的路線是首先脫去P-保護基(P＝BOC時，用TFA在CH2Cl2中在-20℃～室溫反應(yīng))，繼而與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺/CuI在80℃反應(yīng)10小時(步驟f)，然后進行下列反應(yīng)1.與鄰苯二甲酰亞胺、DEAD/PH3P在THF中于0～80℃反應(yīng)(在Mitsunobu條件下引入鄰苯二甲酰亞胺)；2.與水合肼、EtOH在室溫反應(yīng)(鄰苯二甲酰亞胺脫保護基)，接著與下列相應(yīng)的化合物反應(yīng)3.醛、SnCl2、NaBH3CN、MeOH(還原胺化)(步驟g)；如果需要，通過下列反應(yīng)引入R54.與R5Br/K2CO3在乙腈中于室溫進行反應(yīng)，接著與下列化合物反應(yīng)5.iPr3SiH在TFA/CH2Cl2中或CH3CN中(脫三苯甲基-硫醇保護基)。
流程2概述了制備化學(xué)式(I)化合物具體的反應(yīng)路線流程2中A是指以Cl-衍生物作起始原料，此Cl-衍生物是以流程1(步驟e)所述方法用2，4-二氯代嘧啶合成的。
1.如果XR3是OMe，可與3當量MeOH/NaH在DMF中于室溫完成反應(yīng)(當YR2＝2，4，5-三氟-芐氧基醚衍生物時會發(fā)生4-氟代-置換)；2.如果XR3是OPh，可與10當量PhOH/NaH在DMF中于70℃反應(yīng)8小時；3.如果XR3是OMe，可與2.2當量MeONa在MeOH中于室溫～75℃完成反應(yīng)(10小時)(當YR2＝2，4，5-三氟-芐氧基醚衍生物時不發(fā)生4-氟代-置換)；4.如果XR3是SMe，可與2.2當量MeSNa/NaI在THF中室溫～70℃用28小時完成反應(yīng)；5.如果XR3是NHR3，可與7.5～30當量H2NR3/iPr2EtN在二噁烷中于90～105℃用48小時完成反應(yīng)。
可用TFA/iPr3SiH在CH2Cl2或CH3CN中在室溫完成釋放硫醇的反應(yīng)(步驟b)。
流程2B的反應(yīng)路線表示化學(xué)式(1)的化合物另外的合成路線步驟c)的反應(yīng)可用下列方法完成1.與芳基B(OH)2/Pd(PhP)4在二甲氧基乙烷/EtOH和2M的Na2CO3中于90℃進行Suzuki-偶聯(lián)反應(yīng)2小時；或2.與芳基B(QH)2/PdCl2(dppf)在二噁烷中和2M Na2CO3在80℃反應(yīng)24～48小時；或3.i.通過與雙(頻哪醇)二硼/KOAc/PdCl2(dppf)在DMF中于80℃反應(yīng)合成硼酯(如4，4，5，5-四甲基-2-苯基-[1，3，2]二噁硼烷衍生物)，及ii.與芳香溴代物/PdCl2(dppf)/2M Na2CO3在80℃反應(yīng)16小時；或4.Sonogashira-Hagihara偶聯(lián)反應(yīng)與乙炔基三甲基硅烷/Et3N/PdCl2(Ph3P)2/CuI在DMF中80℃反應(yīng)。流程2 流程3 R＝烷基、芳基、O-芳烷基流程3描述了化學(xué)式(I)的化合物更進一步的衍生化。
在Y是氮的情況，步驟a可用RCOCl、iPr2NEt、聚合物負載的4-(N-芐基-N-甲氨基)吡啶、CH2Cl2的反應(yīng)(N-酰基化)，接著用iPr3SiH、TFA、CH2Cl2的反應(yīng)(釋放硫醇)來完成。在Y是被保護的氮或氧的情況，可根據(jù)步驟c用RCOCl在吡啶中在0℃～室溫或用BOC-Cys(Npys)-OH(＝2-(BOC-Cys)二硫代-3-硝基-吡啶)在DMF/0.1M磷酸鹽緩沖液(pH6.2)中來完成游離硫醇的反應(yīng)。在是芐氧基保護的氮情況時，有可能在乙酸中用33％HBr在0℃～室溫選擇性地脫保護基。
在它們能夠抑制金屬蛋白酶活性、尤其是鋅水解酶活性的基礎(chǔ)上，可將化學(xué)式I的化合物作為藥物使用，來治療和預(yù)防日益增加的與血管收縮關(guān)聯(lián)的疾病。這種疾病的實例有高血壓、冠狀動脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。它們還可被用于動脈硬化癥、防止氣囊-引起脈管擴張后的再狹窄、炎癥、胃和十二指腸潰瘍、潰瘍cruris、革蘭氏陰性膿血癥、休克、血管球性腎炎、腎絞痛、青光眼、哮喘，治療和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥和服用環(huán)孢子菌素期間的并發(fā)癥，以及其他與內(nèi)皮素活性關(guān)聯(lián)的疾病。
可通過各種本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解的體外和體內(nèi)試驗，來證明化學(xué)式(I)的化合物抑制金屬蛋白酶活性特別是鋅水解酶活性的能力。
A)細胞培養(yǎng)如說明(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)直到融合前在“細胞工廠”培養(yǎng)穩(wěn)定的人類臍靜脈內(nèi)皮細胞系(ECV304)。在融合時用胰島素/EDTA溶液洗脫細胞并用低速離心收集細胞。此細胞粒用磷酸鹽緩沖的pH7.0的鹽水洗滌一次并在-80℃儲存?zhèn)溆谩?br> B)增溶ECV304細胞中的ECE如果沒有另外說明，全部程序在0～4℃下進行。有1×109細胞的細胞粒懸浮在50毫升緩沖液A(20mM Tris/HCl，pH 7.5，含有5mM MgCl2、100μM PMSF、20μM E64、20μM亮肽素)中并被超聲破碎。所生成的細胞均漿在100,000gav下離心60分鐘。按照說明丟棄上層清液，及所生成的膜小球在50毫升緩沖液A中勻化并離心。重復(fù)兩次在緩沖液A中洗滌膜的碎片，最終制備的膜在4℃在50毫升緩沖液B(緩沖液A+0.5％吐溫20(v/v)、0.5％CHAPS(w/v)、0.5％毛地黃皂苷(w/v))中勻化并攪拌2小時。然后如說明沉積剩余的膜碎片。所生成的透明上層清液含有溶解的ECE，并以1.0毫升的等分試樣在-120℃儲存直到使用。
C)ECE試驗本試驗測量人類大ET-1產(chǎn)生的ET-1。為測量高數(shù)量的樣品使用96孔板來完成試驗。并使用特別先進的和最佳的涂布技術(shù)，在相同的孔中進行酶反應(yīng)和所產(chǎn)生ET-1的放射免疫測定。
D)涂板Fluoronunc Maxisorp white(編碼437796)96孔板在UV Stratalinker2400(Stratagene)中以1焦耳能量照射30分鐘。然后此96孔板每孔注入300μl蛋白質(zhì)A溶液(2μg/毫升，在0.1M Na2CO3中，pH9.5)，并在4℃培養(yǎng)48小時。涂過的板在使用前可在4℃最多儲存3星期。
使用前棄去蛋白質(zhì)A溶液，且此板在4℃用在0.1M Na2CO3中pH9.5的0.5％牛血清白蛋白(BSA)封閉2小時。
板用雙蒸水洗滌，并已準備好進行ECE試驗。
E)篩選試驗在DMSO中溶解并稀釋試驗化合物。在孔中放入10μl DMSO，接著放入含有200ng大ET-1的125μl試驗緩沖液(50mM Tris/HCl，pH7.0，1μMThiorphan、0.1％NaN3、0.1％BSA)。通過加入50μl溶解的ECE(在試驗緩沖液中稀釋1∶30～1∶60倍(v/v))開始酶反應(yīng)。酶反應(yīng)在37℃進行30分鐘。加入10μl pH7.0的150mM ETDA使酶反應(yīng)停止。
放射免疫測定ET-1的放射免疫測定(RIA)基本按照以前的說明(Lffler，B.-M.和Maire，J.-P.，1994年，Endothelium 1273-286頁)來完成。在含有EDTA停止酶反應(yīng)的混合物的板中加入25μl試驗緩沖液，該試驗緩沖液含有20000cpm的(3-(125I)酪氨酸)-內(nèi)皮素-1和25μl ET特效的抗血清AS-3(在試驗緩沖液中1∶1000的稀釋液)。這些板在混合下在4℃保溫過夜。然后，用洗板器吸去液相，用雙蒸水將板洗滌一次。在此洗過的板中加入200μl閃爍液(Microscint 40 LSC-Cocktail，Packard，編碼6013641)，在Topcount計數(shù)器上對板上每孔計數(shù)2分鐘。
在板上用合成的ET-1以最終濃度為每孔0～3000pg的ET-1制出標準曲線。全部板都測試了最大ECE活性(在10μl DMSO存在下)的對照樣品和產(chǎn)生ET-1免疫反應(yīng)活性本底(在10mM EDTA或100μM磷酰二肽存在下)的對照樣品。測定重復(fù)進行三次。
F)動力學(xué)測試通過改變測試中使用的底物濃度，可使用所述試驗格式來測定所使用ECE制劑及不同ECE抑制劑的動力學(xué)特征(即Km，Ki)。
G)以細胞為基礎(chǔ)的ECE試驗如已說明的(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)，MDCK細胞穩(wěn)定地表達人類ECE-1c。在24孔板上培養(yǎng)的細胞在濕潤空氣/CO2(19∶1)氣氛中融合在Dulbecco改進的Eagles介質(zhì)(DMEM)中，此介質(zhì)中補充了10％(v/v)牛胎兒血清(FBS)、0.8毫克/毫升geneticin、100i.u./毫升青霉素和100μg/毫升鏈霉素。在ECE試驗前，用0.5毫升DMEM-HBSS(1∶1)和pH7.0的補充了0.1％(w/v)BSA的10mMHEPES代替上述介質(zhì)。加入溶在DMSO中的抑制劑，使其最終濃度為1％。加入0.42μM人的大ET-1使酶反應(yīng)開始，并在培養(yǎng)器中于37℃使酶反應(yīng)進行1.5小時。在培養(yǎng)結(jié)束時迅速移出培養(yǎng)介質(zhì)，如上述用放射免疫測定法分析等分試樣中產(chǎn)生的ET-1。
通過測量磷酰二肽(IC500.8±0.2μM)和CGS 314447(IC5020±4nM)特有的抑制劑常數(shù)，來驗證ECE篩選試驗[De Lombaert，Stephane、Stamford，Lisa B.、Blanchard，Louis、Tan，Jenny、Hoyer，Denton、Diefenbacher，CliveG.、Wei，Dongchu、Wallace，Eli M.、Moskal，Michael A.等“內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)化酶和中性肽鏈內(nèi)切酶24.11的有效非-肽雙重抑制劑”，Bioorg.Med.Chem.Lett.，(1997年)，7卷(8期)，1059～1064頁]。用與文獻所述沒有明顯不同的方法由IC50值測量兩種抑制劑，但所用的測量試驗規(guī)程不同。在此以細胞為基礎(chǔ)的試驗中磷酰二肽顯示的IC50為4μM。因為如ECE被包埋在正常血漿膜環(huán)境中，此試驗還給出了另外有關(guān)在更加生理的條件下抑制劑抑制效力的信息。重要的是要說明此篩選試驗是在1μM N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸(Thiorphan)存在的情況下完成的，用以阻止由于NEP24.11的作用造成的任何潛在的大ET-1的降解。在存在或不存在N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸的情況下測量ET-1產(chǎn)生的初步試驗中，在MDCK-ECE-1c轉(zhuǎn)染的細胞中都不存在NEP活性。在后來的試驗中不再在培養(yǎng)介質(zhì)中加N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸。
根據(jù)上述方法，本發(fā)明的化合物在放射免疫測定(對ECE-抑制的E)中顯示的IC50值為大約0.5nM～大約100μM。優(yōu)選的化合物顯示的值為0.5nM～100nM。
如上所述，含有化學(xué)式I的化合物的藥物，如同制造這種藥物的方法都是本發(fā)明的目標，該方法包括將一個或多個化學(xué)式I的化合物、及如果需要一個或多個其它有治療價值的物質(zhì)帶到蓋倫氏制劑的給藥形式中。
藥物組合物可以口服給藥，例如以藥片、帶涂層的藥片、糖衣丸、硬的或軟的凝膠膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式。還可實行直腸給藥例如使用栓劑；局部或經(jīng)由皮膚給藥，例如使用藥膏、乳劑、凝膠或溶液；或非腸道給藥例如使用可注射的溶液。
為了制備藥片、帶涂層藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊，本發(fā)明化合物可與藥物惰性的無機或有機賦形劑混合。藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊適宜的賦形劑的實例包括乳糖、玉米淀粉或它們的衍生物；滑石粉或硬脂酸或它們的鹽。
用于軟凝膠膠囊適宜的賦形劑包括例如植物油、蠟、脂肪、半-固態(tài)或液態(tài)多元醇等； 然而根據(jù)活性成分的本性，可能有軟凝膠膠囊根本不需要賦形劑的情況。
制備溶液和糖漿可使用的賦形劑包括例如水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。
注射液可使用的賦形劑包括例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。
栓劑和局部或經(jīng)由皮膚的用藥可使用的賦形劑包括例如天然或硬化油、蠟、脂肪和半-固態(tài)或液態(tài)多元醇。
藥物組合物還可包含防腐劑、抗氧劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、增味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖液、涂層劑或抗氧劑。它們還可包含其他治療上有價值的試劑。
其中以化學(xué)式I的化合物的有效量給藥的劑量依賴于具體活性成分的本性、患者的年齡和需求及用藥的方式。一般考慮劑量為每天0.1～100毫克/千克體重，雖然表明如果需要所引用的上限可被超越。
下面提供具體的實施例作為幫助實踐本發(fā)明的指南，而無意限制本發(fā)明的范圍。
類似物a)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和2，4-二氯代嘧啶給出(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS632(MH+)；
b)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和2，5-二溴代-嘧啶[Brown，Desmond J.；Arantz，B.W.“嘧啶反應(yīng)XXII相應(yīng)的氯代-、溴代-和碘代嘧啶在氨解中的相對反應(yīng)性”，J.Chem.Soc.C(1971年)，第10期，1889-91頁]給出(2S，4R)-5-溴代-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS676(MH+，1個Br)。
c)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和甲基-2-氯代-6-甲基嘧啶給出(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸甲酯，MS670(MH+)。
d)(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸甲酯按照酯類一般水解方法(EtOH/二噁烷)水解給出(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸，MS656(MH+)。2.2脫S-保護基的方法D1.7克(2.84毫摩爾)(2S，4R)-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶的30毫升CH2Cl2溶液在0℃用8毫升TFA及5.82毫升(28毫摩爾)三異丙基硅烷處理。室溫30分鐘后將溶液完全蒸干，并將化合物從Et2O/戊烷中沉淀兩次給出1.06克(80％)無色油狀(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸酯(1∶1)，MS356(MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶給出(3R，5S)-1-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物，MS390(MH+)；b)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶給出(2S，4R)-1-(5-溴-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS434(MH+，1個Br)。(在前面沒有列出)c)(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸給出(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸，MS414(MH+)。2.3方法B(平行合成)將0.45毫摩爾(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷在1毫升二噁烷或0.1毫升DMF中的溶液、2.25毫摩爾2-氯代-雜芳族化合物和2.25毫摩爾N-乙基二異丙基胺在80～130℃加熱16小時～2天(參閱表1)。反應(yīng)物用制備型HPLC純化(RP-18，MeCN/H2O，UV 230nm)。
如說明(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)TFA/三異丙基硅烷脫保護基給出游離硫醇。2.4方法C將2克(3.85毫摩爾)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷、1.2克(7.7毫摩爾)2-氯代-5-正丙基嘧啶、1.98毫升(11.55毫摩爾)N-乙基二異丙基胺和催化量碘化銅(I)的混合物在80℃加熱10小時。反應(yīng)物冷卻并在H2O/Et2O(3×300)之間分配。有機相用飽和NaHCO3水溶液、10％NaCl水溶液洗滌，干燥(NaSO4)及蒸發(fā)?？焖俟枘z色譜(甲苯/Et2O99∶1)給出2克(81％)(2S，4R)-5-丙基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS640(MH+)。
如說明(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)TFA/三異丙基硅烷脫保護基給出(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸酯(1∶1)，MS398(MH+)。
根據(jù)類似方法通過(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和下列表1指出的2.離析物的反應(yīng)制備下列化合物。
實施例32-氯代嘧啶上的取代3.1在DMF中的反應(yīng)0.24(0.4毫摩爾)(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在8毫升DMF中的溶液，在0℃用0.05毫升(1.2毫摩爾)MeOH和0.054克(1.24毫摩爾)55％的NaH處理。在此溫度下保持反應(yīng)(6小時)并升到室溫過夜。用飽和NH4Cl/Et2O(3×)水溶液萃取后，有機相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)?？焖偕V(CH2Cl2/EtOAc 9.5∶5)給出0.14克(54％)(2S，4R)-4-[2-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-嘧啶，MS640(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS398(MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和10當量苯酚/NaH在在70℃ 8小時后給出2-苯氧基-4-[(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS690(MH+)，該化合物脫保護(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS448(MH+)。3.2在其它溶劑中反應(yīng)0.24(0.4毫摩爾)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在1毫升MeOH中的溶液在0℃用0.16毫升(0.88毫摩爾)甲醇鈉(5.5 M在MeOH中)處理，在此溫度保持(2小時)，升溫并在75℃加熱10小時。在蒸發(fā)和用飽和NH4Cl水溶液/Et2O(3x)萃取后，有機相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)給出0.19克(77％)2-甲氧基-4-[(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS628(MH+)；此化合物脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS386 (MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和2.2當量甲硫醇鈉/2當量碘化鈉在THF中(70℃，28小時)并脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS402(MH+)；b)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和10當量苯胺/3.5當量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(105℃，48小時)并脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-苯氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS447(MH+)；c)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和7.5當量芐胺/3.5當量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時)并脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-芐氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS461(MH+)；d)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和7.5當量丁胺/3.5當量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時)并脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-丁氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS427(MH+)；e)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和30當量甲胺溶液(8.03M在EtOH中)/3.5當量N乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時)并脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-甲氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS385(MH+)。實施例4Suzuki-型反應(yīng)一般這類反應(yīng)根據(jù)Stanforth，Stephen P.“聯(lián)芳基合成中的催化交叉-偶聯(lián)反應(yīng)”，Tetrahedron(1998年)，54卷(3/4期)，263-303頁來完成。4.1方法A(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)將1.35克(2毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在12毫升二甲氧基乙烷中的溶液加入到0.116克(0.1毫摩爾)四(三苯基膦)鈀在1.4毫升二甲氧基乙烷的懸浮液中并攪拌15分鐘。然后加入在3.4毫升EtOH中的0.29克(2.4毫摩爾)苯基硼酸，10分鐘后加入8.8毫升2M Na2CO3水溶液。反應(yīng)物在90℃加熱2小時，蒸發(fā)并用H2O/Et2O(3x)萃取。有機相用10％ NaCl水溶液洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過快速-硅膠色譜(甲苯)純化給出0.48克(36％)(2S，4R)-5-苯基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS674(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS432(MH+)。4.2方法B(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)平行合成0.13毫摩爾(2S，4R)-5-溴代-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、0.195毫摩爾硼酸或硼酸酯及0.004毫摩爾PdCl2(dppf)在2毫升二噁烷中的溶液和0.4毫升2M Na2CO3在80℃加熱48小時。過濾后混合物用制備型HPLC(RP18，50％～95％乙腈)純化。
TFA/三異丙基硅烷脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出游離硫醇。4.3方法C(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)[Giroux，Andre；Han，Yongxin；Prasit，Petpiboon“通過原位形成硼酸酯一次合成聯(lián)芳基”，Tetrahedron Lett.(1997年)，38卷(22期)，3841-3844頁]0.68克(1毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、0.28克(1.1毫摩爾)雙(頻哪醇)二硼、0.29克(3毫摩爾，在0.1托100℃干燥2小時)乙酸鉀和0.024克(0.03毫摩爾)PdCl2(dppf)在12毫升DMF中的溶液在80℃攪拌4.5小時。反應(yīng)物冷卻，用0.195毫升(2毫摩爾)2-溴代吡啶、0.024克(0.03毫摩爾)PdCl2(dppf)和2.5毫升2M Na2CO3水溶液處理并在80℃加熱16小時。反應(yīng)物蒸發(fā)(60℃/0.1托)并在水/Et2O(3x)之間分配。有機相用10％NaCl水溶液洗滌及Na2SO4干燥。通過快速-硅膠色譜(甲苯/EtOAc 97.5∶2.5)純化給出0.125克(2S，4R)-5-吡啶-2-基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS675(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)吡咯烷-3-硫醇；與三氟代-乙酸的化合物，MS433(MH+)。4.4方法D(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)0.68克(1毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、15毫克(0.022毫摩爾)二氯化雙(三苯基膦)鈀(II)和9.5毫克碘化銅(I)在0.4毫升DMF中的溶液在80℃用0.35毫升(2.5毫摩爾)乙炔基三甲基硅烷和1.87毫升Et3N在1.5毫升DMF中的溶液處理1小時。在1小時期間再加入此相同的溶液，并在4小時后用戊烷(3x)/H2O(2x)萃取。有機相干燥(Na2SO4)、蒸發(fā)及通過快速-硅膠色譜(甲苯)純化給出0.063克(9％)(2S，4R)-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-5-三甲基硅烷乙炔基-嘧啶，MS694(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護基(參閱脫S-保護基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS452(MH+)。
根據(jù)類似的方法，通過(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和下列表2提出的2.離析物的反應(yīng)制備下列化合物。
實施例5S-乙酰基-衍生化397毫克(1毫摩爾)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇(其三氟-乙酸鹽用飽和NaHCO3水溶液/EtOAc萃取)在6毫升吡啶中的溶液在0℃用0.14毫升(2毫摩爾)乙酰氯處理并在室溫攪拌5小時。反應(yīng)物傾入冰水中并用Et2O(3x)萃取。有機相用1N HCl水溶液和10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)?？焖俟枘z色譜(CH2Cl2/Et2O100∶0～95∶5)給出383毫克(87％)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯，MS440(MH+)。
b)上述粗產(chǎn)物懸浮在16.46克(105.1毫摩爾，2當量)2-氯-5-正丙基嘧啶和30毫升(175毫摩爾，3.3當量)N-乙基二異丙基胺中，混合物加熱到80℃。當全部溶解后，加入350毫克(1.84毫摩爾)碘化銅，反應(yīng)混合物保持在80℃過夜。冷卻到室溫后，混合物用EtOAc/H2O稀釋，水溶液用EtOAc萃取。合并的有機層用1M KHSO4、1M HCl和鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。用EtOAc∶己烷(1∶4～1∶1)快速色譜純化產(chǎn)生19.1克(74％)淺黃色泡沫狀的(2S，4R)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲醇，MS496(MH+)。
c)在15毫升THF中的1.0克(2.0毫摩爾)(2S，4R)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲醇在室溫下用764毫克(2.82毫摩爾)三苯基膦和420毫克(2.82毫摩爾)鄰苯二甲酰亞胺處理。溶液冷卻到0℃，加入615μl(3.83毫摩爾)偶氮二羧酸二乙酯在3毫升THF中的溶液。溶液室溫攪拌過夜，加入H2O，無機層用EtOAc萃取。合并的層用1M NaOH、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，并在Na2SO4上干燥。用1∶2的EtOAc∶己烷作淋洗液的柱色譜純化，得到1.20克(95％)(2S，4R)-2-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-異吲哚-1，3-二酮白色固體，MS625(MH+)。
d)將在95毫升乙醇中的960毫克(1.52毫摩爾)(2S，4R)-2-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-異吲哚-1，3-二酮用2.4毫升(49.4毫摩爾)水合肼回流處理。冷卻到室溫后，過濾溶液并濃縮，粗產(chǎn)物用CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH 90∶10∶0.25快速色譜來純化，生成659毫克(88％)白色泡沫狀的(2S，4R)-C-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲胺，MS495(MH+)。
e)往3毫升甲醇中的643毫克(1.3毫摩爾)(2S，4R)-C-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲胺中加入158μl(1.43毫摩爾)2，5-二氟苯甲醛和5毫升甲醇，使化合物部分地再溶解。接著加入108毫克(0.78毫摩爾)氯化鋅和109毫克(1.56毫摩爾)NaBH3CN在3毫升甲醇中的溶液。得到的溶液攪拌過夜、濃縮并溶解在EtOAc/飽和NaHCO3溶液中。無機層用EtOAc萃取，合并的有機層用NaHCO3和鹽水洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)。柱色譜純化產(chǎn)生750毫克(93％)淺黃色膠狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺，MS621(MH+)。
f)將在2毫升吡啶中的160毫克(0.258毫摩爾)(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺在0℃用37μl(0.52毫摩爾)乙酰氯處理。溶液室溫攪拌1.5小時，傾到冰水中并用EtOAc萃取。合并的有機層用1N HCl和鹽水洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)。用EtOAc∶己烷為1∶2～1∶1的柱色譜產(chǎn)生1 70毫克(定量)白色泡沫狀的(2S，4R)-N-(2，5-二氟-芐基)-N-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺。
g)用類似于一般程序E的方法，由(2S，4R)-N-(2，5-二氟-芐基)-N-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺制備無色膠狀的(2S，4R)-N-(2，5-二氟代-芐基)-N-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺，MS421(MH+)。
h)用類似于一般程序E的方法，由(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺制備無色膠狀的(2S，4R)-5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS379(MH+)。
i)將在1毫升吡啶中的50毫克(0.13毫摩爾)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇在0℃用28μl(0.39毫摩爾)乙酰氯處理。溶液室溫攪拌1.5小時，傾入冰水并用EtOAc萃取。合并的有機層用1N HCl和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用EtOAc∶己烷為1∶1～2∶1的柱色譜得到54毫克(88％)近于灰白色的膠狀(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[乙?；?(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯，MS463(MH+)。
j)將在6.5毫升CH2Cl2中的220毫克(0.35毫摩爾)(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺在0℃用74μl(0.43毫摩爾)N-乙基二異丙基胺、63μl(0.43毫摩爾)氯代甲酸芐酯和26.6毫克(0.043毫摩爾)聚合物結(jié)合的DMAP處理5分鐘，并在室溫處理1小時。加入212毫克(0.212毫摩爾)聚合物結(jié)合的三胺，且溶液被搖動過夜。過濾并濃縮產(chǎn)生的331毫克(定量)白色泡沫狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯，它根據(jù)程序E處理得到無色泡沫狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯，MS513(MH+)。
k)類似于實施例6g由(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯制備(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[芐氧基羰基-(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
1)在0℃往5毫升EE中的137毫克(2.5毫摩爾)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[芐氧基羰基-(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯中加入320μl 33％HBr的乙酸溶液。溶液在室溫攪拌12小時，傾入NaHCO3中，無機相用EtOAc萃取。合并的有機層用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用EtOAc作淋洗液進行柱色譜純化，得到65毫克(63％)無色油狀的(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯，MS421(MH+)。(沒有列出)
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及其二聚體形式，和/或其藥用酯，和/或其藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳基烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基羰基，二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺酰基、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基或YR2基團是雜環(huán)基；R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲?；?、羧基、羧烷基、氰基、氨基、單-和二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳基烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中最多只有兩個基團是N；Y是-O-或-NR5-。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的通式II的化合物 其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4和Y的定義如權(quán)利要求1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1～2中任意一項的化合物，其中R1是氫或烷基羰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任意一項的化合物，其中R1是氫或乙?；?。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項的化合物，其中R1是氫。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任意一項的化合物，其中R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；⒎蓟?、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基甲?；?、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；h(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基或雜環(huán)基烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任意一項的化合物，其中R2是芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；h(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基或雜芳基烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任意一項的化合物，其中R2是芳基、芳烷基、芳基氨基甲酰基、芳基羰基、芳基磺?；螂s芳基烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任意一項的化合物，其中R2是芳基烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中任意一項的化合物，其中R2是任選被2～3個鹵素原子取代的苯基烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任意一項的化合物，其中R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷硫基、鏈烯基、烷氧基、烷氧羰基、氨基、芳基、芳烷基、芳基鏈烯基、芳烷基氨基、芳氧基、單-和二烷基氨基、氨基甲?；?、羧基、氰基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、三甲基硅烷基乙炔基和三氟甲基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任意一項的化合物，其中R3和R4獨立地選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～12中任意一項的化合物，其中R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；并且其中R4氫。
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任意一項的化合物，其中Y是-NR5-。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R5是氫或烷基。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中R5是氫。
17.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任意一項的化合物，其中Y是-O-。
18.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項的化合物，其中X1是N，及X2、X3和X4是CH。
19.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項的化合物，其中X2是N，及X1、X3和X4是CH。
20.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項的化合物，其中X3是N，及X1、X2和X4是CH。
21.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項的化合物，其中X1、X2、X3和X4是CH。
22.根據(jù)權(quán)利要求1～21中任意一項的化合物，其中R1是氫或烷基羰基；R2是被2～3個鹵素取代的苯基烷基；R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基或苯氧基，及其中芳基和雜芳基任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；R4是氫；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中最多只有兩個基團是N；Y是-NH-或-O-。
23.根據(jù)權(quán)利要求1～22的化合物，其中R1是氫或乙?；?，及R2是二氟代芐基或三氟代芐基。
24.根據(jù)權(quán)利要求1～23中任意一項的化合物，它們選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(4，6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-(4-氨基-5-氟-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；d)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙腈；e)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；f)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酸；g)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸甲酯；h)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-羧酸甲酯；i)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；j)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酰胺；k)(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇；l)(3R，5S)-1-(2-氯代-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；m)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；n)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；o)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；p)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；q)(3R，5S)-1-吡啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；r)(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸；s)(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；t)(3R，5S)-1-(2-苯基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；u)(3R，5S)-1-(2-芐基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；v)(3R，5S)-1-(2-甲基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；w)(3R，5S)-1-(2-丁基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；x)(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；y)(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；z)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；aa)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；bb)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；cc)(3R，5S)-1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；dd)(3R，5S)-1-[5-(4-甲氧基-苯基)-嘧啶-2-基]-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；ee)(2S，4R)-4-{2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-嘧啶-5-基}-苯甲酸；ff)(3R，5S)-1-(5-烯丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；gg)(3R，5S)-1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及hh)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷基乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇。
25.根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項的化合物，它們選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；d)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；e)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；f)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；g)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；h)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯；i)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；j)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；k)1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；l)1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；m)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇；及n)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
26.藥物組合物，該組合物含有根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項的化合物和藥用賦形劑。
27.如權(quán)利要求1～25中任意一項所列的用于治療的化學(xué)式(I)的化合物。
28.權(quán)利要求1～25的化合物作為活性成分在制造藥物中的用途，所述藥物包含權(quán)利要求1～25中任意一項定義的化合物，用于預(yù)防和治療由內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長有關(guān)的疾病、眼科和大腦保護性適應(yīng)癥及器官保護的用途。
29.根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項的化合物的用途，用于治療或預(yù)防與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病關(guān)聯(lián)的疾病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科及大腦保護性適應(yīng)癥和器官保護。
30.根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項的化合物用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性關(guān)聯(lián)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護性適應(yīng)癥及器官保護。
31.一種治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，和用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護性適應(yīng)癥及器官保護的方法，該方法包括將一種根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項的化合物給人類或動物服用。
32.一種制備權(quán)利要求1～25中任意一項定義的化合物的方法，它包括下列化學(xué)式III的化合物 其中A是HS-保護基及P是NH-保護基，a)與R2-鹵化物的反應(yīng)以引入-OR2基團，接著脫去P-保護基并引入雜芳族化合物；或b)首先脫去化學(xué)式(III)的P-保護基，引入在權(quán)利要求1中定義的雜芳族化合物，接著通過-OH--NH2置換和還原胺化引入R2；任選地接著將權(quán)利要求1定義的R1，R2，R3，R4基團轉(zhuǎn)化為不同的基團和/或脫保護基和/或釋放出硫醇。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法制備的化合物。
34.上文定義的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)的化合物及其二聚體形式和/或其藥用酯和/或鹽，化學(xué)式(I)中R
文檔編號A61P1/04GK1443184SQ01812970
公開日2003年9月17日 申請日期2001年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月19日
發(fā)明者約翰內(nèi)斯·埃比, 丹尼爾·比爾, 亞歷山大·丘喬洛夫斯基, 亨麗埃塔·德姆洛 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司