專利名稱：化療栓塞用紫杉醇的混合組合物、該組合物的油包水型乳劑及它們的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)使紫杉醇可溶化而得到的用于動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(transcatheter arterial chemoembolization；TACE)的油性的紫杉醇組合物和制劑及它們的制造方法。動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)是一種治療癌癥的方法，其在使用造影劑使手術(shù)過(guò)程顯像的同時(shí)，通過(guò)將抗癌劑和栓塞物質(zhì)注入到腫瘤的營(yíng)養(yǎng)動(dòng)脈中，從而阻斷向癌組織供給營(yíng)養(yǎng)。
背景技術(shù)：
應(yīng)用最廣泛的動(dòng)脈化療栓塞術(shù)是用于肝癌治療的肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)。造影劑作為顯像工具在手術(shù)期間或手術(shù)后使用，并在腫瘤內(nèi)誘發(fā)栓塞。將多柔比星(adriamycin，阿霉素)、順鉑、卡鉑這樣的抗癌劑溶解或分散在油性造影劑中使用。
動(dòng)脈化療栓塞術(shù)中最頻繁使用的造影劑之一是例如超液化碘油(Lipiodol)等碘化油。但是，含有超液化碘油和上述抗癌劑的分散體系的物理性質(zhì)不穩(wěn)定，手術(shù)時(shí)有很多限制。以往，診斷放射學(xué)廣泛使用阿霉素、表阿霉素等抗癌劑來(lái)治療肝癌。但是，這些抗癌劑大部分是水溶性的，所以TACE手術(shù)中一直使用懸濁型制劑而不是油性溶液(YoshihiroKatagiri等，Cancer Chemother.Pharmacol 1989，23，238-242)。但是，隨著時(shí)間的推移，這樣的懸濁型制劑的顆粒逐漸聚集而形成沉淀，所以不能長(zhǎng)期保存。為了克服這樣的穩(wěn)定性問(wèn)題，采用了將抗癌劑溶解在水性造影劑后，將該水相分散到像超液化碘油那樣的油性造影劑中的方法。也就是說(shuō)，在對(duì)患者給藥前，才將抗癌劑溶解在水性造影劑中，再通過(guò)泵送法將其與油性造影劑混合。
為了使乳液的穩(wěn)定性最大化，使用比重與超液化碘油比重(1.275至1.290)相近的水性造影劑，如泛影葡胺(Urografin，1.328-1.332)或碘必樂(lè)(Iopamiro，1.17-1.41)(Takashi Kanematsu等，Journal of surgical oncology1984，25，218-226以及Takafumi Ichida等，Cancer Chemother.Pharmacol1994，33，74-78)。但是，通過(guò)所述方法只能形成暫時(shí)性乳液，該乳液制成后幾分鐘內(nèi)就再次發(fā)生相分離。而不穩(wěn)定的乳液系統(tǒng)不能提供充分的栓塞效果。實(shí)際上，在手術(shù)期間就觀察到導(dǎo)管內(nèi)發(fā)生了相分離。施用該不穩(wěn)定乳液時(shí)，阿霉素被組織立即吸收，不能提供持續(xù)釋放抗癌劑的效果。
理想的肝癌治療方法之一是使用合成高分子抗癌劑，也就是使用凈司他丁(聚(苯乙烯-馬來(lái)酸)新制癌菌素)(SMANCS)。SMANCS兼具親水性和親油性，可以直接溶解在超液化碘油中(Konno，T.和Maeda，H.，Targetting chemotherapy of hepatocellular carcinoma.Neoplasma of the liver，Eds.Okuda，K.，和Ishak，K.G.，Springger-Verlag，柏林，P343-352)。但是，SMANCS/超液化碘油制劑雖然解決了阿霉素/超液化碘油制劑中存在的穩(wěn)定性問(wèn)題，但因?yàn)槠鋬r(jià)格高，并且具有嚴(yán)重的毒副作用，所以沒(méi)有被普遍使用。
另外，抗癌劑紫杉醇作為對(duì)卵巢癌、乳腺癌、食道癌、黑素瘤、白血病有顯著細(xì)胞毒性的物質(zhì)為人們所熟知。紫杉醇的商用產(chǎn)品是百時(shí)美施貴寶公司的商標(biāo)為泰素(Taxol)的注射劑。
紫杉醇是一種難溶性藥物，所以從開(kāi)發(fā)階段就同時(shí)開(kāi)始了增溶技術(shù)的開(kāi)發(fā)。作為這樣的增溶技術(shù)的一個(gè)例子，可以舉出為了在靜脈注射等全身給藥中應(yīng)用而使用增溶劑。所述泰素使用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL聚氧乙烯35-蓖麻油)和乙醇作為增溶劑。泰素是一種乳劑預(yù)濃縮型制劑，該制劑在過(guò)量的水中分散時(shí)就會(huì)自發(fā)地形成微乳液(microemulsion)(參考美國(guó)專利第5438072號(hào))。但是，已知泰素中所使用的增溶劑會(huì)引起毒副作用。所以，為了開(kāi)發(fā)具有高抗癌活性和低毒性的新型紫杉醇制劑，進(jìn)行了多種研究。
動(dòng)脈化療栓塞術(shù)中，肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)最具代表性，除肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)以外，動(dòng)脈化療栓塞術(shù)還可以用于多種實(shí)體瘤。例如，通過(guò)在腎動(dòng)脈實(shí)施動(dòng)脈化療栓塞術(shù)，已將SMANCS/超液化碘油制劑用于腎癌的靶向治療(K.Tsuchiya.Tumor-targeted chemotherapy with SMANCS inLipiodol for renal cell carcinomalonger survival with larger size tumors.Urology.2000 Apr；55(4)495-500)。

發(fā)明內(nèi)容
到目前為止，還沒(méi)有把紫杉醇用作血管栓塞或血管造影用抗癌劑的例子。本發(fā)明的目的是通過(guò)使紫杉醇與油性造影劑及水性造影劑一起乳化，從而將紫杉醇用于動(dòng)脈化療栓塞術(shù)。
以往的阿霉素/超液化碘油/碘必樂(lè)乳劑最大的問(wèn)題是穩(wěn)定性低。通過(guò)泵送法形成乳劑后幾分鐘內(nèi)就發(fā)生相分離，常常在導(dǎo)管內(nèi)就可以觀察到這種相分離。現(xiàn)有的制劑達(dá)不到預(yù)期持續(xù)輸送抗癌劑的效果。
因此，需要開(kāi)發(fā)一種新型的化療栓塞用制劑，與以往的阿霉素/超液化碘油/碘必樂(lè)制劑不同，所述新型制劑應(yīng)當(dāng)在動(dòng)脈化療栓塞手術(shù)中或甚至手術(shù)后都能維持乳劑的穩(wěn)定性，并且該制劑應(yīng)當(dāng)比以往的SMANCS/超液化碘油制劑更便宜、毒副作用更小。
所以，本發(fā)明的目的是提供可以使紫杉醇可溶的新型紫杉醇組合物。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明的目的是提供可以在治療實(shí)體瘤的動(dòng)脈化療栓塞術(shù)中使用的紫杉醇乳劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供紫杉醇的混合組合物和油包水(w/o)型乳劑的制造方法。


圖1是含有0.8ml的超液化碘油和0.2ml的碘必樂(lè)的組合物(左側(cè))和含有0.8ml的超液化碘油、8mg的紫杉醇和0.2ml的碘必樂(lè)的組合物(右側(cè))，在渦動(dòng)處理前、渦動(dòng)結(jié)束時(shí)、渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的照片。
圖2是含有0.8ml的超液化碘油、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的多柔必星的組合物(左側(cè))和含有0.8ml的超液化碘油、8mg的紫杉醇、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的多柔必星的組合物(右側(cè))，在渦動(dòng)處理前、渦動(dòng)結(jié)束時(shí)、渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的照片。
圖3是含有0.8ml的超液化碘油、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的卡鉑的組合物(左側(cè))和含有0.8ml的超液化碘油、8mg的紫杉醇、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的卡鉑的組合物(右側(cè))，在渦動(dòng)處理前、渦動(dòng)結(jié)束時(shí)、渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的照片。
圖4是含有0.8ml的超液化碘油、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的順鉑的組合物(左側(cè))和含有0.8ml的超液化碘油、8mg的紫杉醇、0.2ml的碘必樂(lè)和4mg的順鉑的組合物(右側(cè))，在渦動(dòng)處理前、渦動(dòng)結(jié)束時(shí)、渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的照片。
圖5是含有0.8ml的超液化碘油、0.2ml的碘必樂(lè)和各種抗癌劑的油包水型乳劑的粒度在渦動(dòng)結(jié)束時(shí)、渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的圖，其中將無(wú)紫杉醇的情況(左側(cè))與有紫杉醇的情況(右側(cè))進(jìn)行了比較。
圖6是表示多柔比星從含有超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星(0.8ml/0.2ml/4mg)的組合物和含有超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星/紫杉醇(0.8ml/0.2ml/4mg/8mg)的組合物中體外溶出結(jié)果的曲線圖。
具體實(shí)施例方式
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明人在研究中意外地發(fā)現(xiàn)，油性造影劑/水性造影劑/紫杉醇的油包水型乳劑遠(yuǎn)比以往用于動(dòng)脈化療栓塞術(shù)的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星乳劑穩(wěn)定。也就是說(shuō)，發(fā)現(xiàn)使用紫杉醇代替以往的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星制劑中的多柔比星時(shí)，可以有效地使紫杉醇可溶化，其乳劑體系的物理性質(zhì)極其穩(wěn)定，由此本發(fā)明得以完成。
本發(fā)明僅通過(guò)向作為現(xiàn)有制劑的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星乳劑中添加紫杉醇，就大大增加了所述乳劑的穩(wěn)定性。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了包含50％～98.9％(V/V；體積比)的溶有0.01％～1％(W/V；重量體積比)紫杉醇的油性造影劑和0.1％～50％(V/V)的水性造影劑的混合組合物。
本發(fā)明還提供通過(guò)物理力使所述的使紫杉醇可溶的混合組合物中油性造影劑和水性造影劑混合均勻而得到的穩(wěn)定的油包水型乳劑。
如上述，超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星制劑雖然是經(jīng)過(guò)100次以上的泵吸制造的，但是制成后的幾分鐘內(nèi)就會(huì)發(fā)生相分離，是極不穩(wěn)定的乳液體系。
與之相對(duì)，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的油包水型乳劑1個(gè)月以上也不會(huì)發(fā)生相分離。所以，可以認(rèn)為紫杉醇其本身對(duì)提高油性造影劑/水性造影劑體系的穩(wěn)定性有重要作用。因此，即使在實(shí)施動(dòng)脈化療栓塞術(shù)的幾個(gè)小時(shí)前，通過(guò)預(yù)先物理混合本發(fā)明的混合組合物，形成的乳劑也可以保持穩(wěn)定。一旦形成乳劑，水相和油相就能完全并且穩(wěn)定地混合。因此，本發(fā)明的混合組合物解決了以往乳劑的穩(wěn)定性問(wèn)題。
本發(fā)明的油性造影劑/水性造影劑/紫杉醇乳劑的物性比含多柔比星那樣的水溶性抗癌劑的現(xiàn)有超液化碘油制劑有很大改善，并且本發(fā)明的油性造影劑/水性造影劑/紫杉醇乳劑具有類似于SMANCS/超液化碘油制劑的特性。但是，與SMANCS/超液化碘油制劑的成本過(guò)高，并且具有嚴(yán)重的毒副作用不同，本發(fā)明的混合組合物使用較廉價(jià)的原料物質(zhì)并且容易制造，所以可降低制造成本。
作為本發(fā)明在制造紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物時(shí)使用的油性造影劑的例子有碘化油。碘化油包括超液化碘油(Lipiodol；Laboratoire Guerbet，法國(guó))、乙碘油(Ethiodol；Savage Laboratories，Melville，NY)等的碘化罌粟種子油(iodized poppy seed oil)或碘化大豆油(iodized soybean oil)。Ma Tai已對(duì)碘化大豆油作了詳細(xì)說(shuō)明(The effect oforal iodized oil on prevention and treatment of endemic goiter.Chinese Med.J.61(9)533，1981)。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物中以及乳劑中紫杉醇的量設(shè)定在0.001％～1.5％(W/V)范圍。紫杉醇的量如果超過(guò)1.5％(W/V)，過(guò)量的紫杉醇會(huì)沉淀，所以不是優(yōu)選的。另一方面，紫杉醇的量如果不足0.001％(W/V)，抗癌活性過(guò)低，而且乳劑不穩(wěn)定，所以也不是優(yōu)選的。
本發(fā)明中，作為油性造影劑所使用的碘化油中的含碘量?jī)?yōu)選為30重量％～50重量％。更優(yōu)選的含碘量為35重量％～45重量％。最優(yōu)選使用超液化碘油(Lipiodol)作為油性造影劑。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑乳劑中，油性造影劑的含量為50％～98.9％(V/V)，優(yōu)選為75％～80％(V/V)。油性造影劑的量如果不足50％(V/V)或超過(guò)98.9％(V/V)，所述乳劑不穩(wěn)定，所以不是優(yōu)選的。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物中以及乳劑中，所述水性造影劑可以從甲泛葡胺(Metrizamide)、泛影酸鹽(Diatrizoate)、碘克沙酸鹽(Ioxaglate)、碘噴托(Iopentol)、碘帕醇(Iopamidol)、碘美普爾(Iomeprol)、碘曲侖(Iotrolan)、碘海醇(Iohexol)、碘佛醇(Ioversol)、碘昔蘭(Ioxilan)、碘普胺(Iopromide)、碘克沙醇(Iodixanol)和碘比醇(Iobitridol)構(gòu)成的組中選擇使用。其中，最優(yōu)選使用商標(biāo)為碘必樂(lè)(Iopamiro)的市售碘帕醇。
水性造影劑的含量為0.1％～50％(V/V)，優(yōu)選為20％～25％(V/V)。
除紫杉醇之外，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物及乳劑還可以額外包含其他的抗癌劑。允許添加的抗癌劑包括多柔比星(也稱為阿霉素)、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀(Carmustine)、達(dá)卡巴嗪(Dacarbazine)、依托泊苷(Etoposide)、長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine)、托泊替康(Topotecan)、伊立替康(Irinotecan)、雌莫司汀(Estramustine)等。附加抗癌劑的量為全部混合組合物的0.0001％～2％(W/V)。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物及乳劑還可以額外含有0.0001重量％～20重量％的乳化劑。乳化劑可以溶解于水性造影劑中，所述乳化劑包括磷脂、非離子性表面活性劑、陰離子性表面活性劑、陽(yáng)離子性表面活性劑或膽汁鹽等。
用作本發(fā)明乳化劑的磷脂有磷脂酰膽堿(PC)及其衍生物、磷脂酰乙醇胺(PE)及其衍生物、磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物或磷脂上共價(jià)鍵合了親水性聚合物的聚合物類脂質(zhì)。
用作本發(fā)明乳化劑的非離子性表面活性劑有泊洛沙姆(Poloxamer，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)、氫化蓖麻籽油(HCO)、山梨坦酯(Sorbitanesters，Span)、聚氧乙烯-山梨聚糖脂肪酸酯(Tween)或聚氧乙烯醚(Brij)。
用作本發(fā)明乳化劑的陰離子表面活性劑有磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物、磷脂酸(PA)及其衍生物、十二烷基磺酸鈉(SDS)。
用作本發(fā)明乳化劑的陽(yáng)離子表面活性劑有1，2-二油?；?3-三甲基銨-丙烷(DOTAP)、二甲基雙十八烷基銨溴(DDAB)、N-[1-(1，2-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨氯(DOTMA)、1，2-二油?；?3-乙基磷脂酰膽堿(DOEPC)、3 β-[N-[(N’，N’-二甲氨基)乙烷]氨基甲?；鵠膽甾醇(DC-Chol)。
用作本發(fā)明乳化劑的膽汁鹽有膽酸及其鹽和衍生物、去氧膽酸及其鹽和衍生物、鵝膽酸及其鹽和衍生物、熊去氧膽酸及其鹽和衍生物和石膽酸及其鹽和衍生物。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物可通過(guò)以下步驟簡(jiǎn)便地制得1)向油性造影劑中，所述組成范圍添加適量的紫杉醇，攪拌使其溶解、2)添加所述組成范圍的水性造影劑。此時(shí)，為了加速溶解可以加熱到約35～45℃或者在槽式超聲波儀中進(jìn)行超聲處理。這樣制造的本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物經(jīng)滅菌后，進(jìn)行保存。也可以在無(wú)菌條件下混合已滅菌的原料。另外，可以使紫杉醇/油性造影劑組合物通過(guò)無(wú)菌的注射過(guò)濾器(孔徑為200μm，PVDF滅菌濾膜)進(jìn)行注射以便滅菌。另外，可以采用γ-射線或EO氣體滅菌法，先將碘化罌粟種子油和紫杉醇滅菌后，再進(jìn)行混合，或者先將其混合后再采用γ-射線或EO氣體滅菌法，對(duì)其組合物進(jìn)行滅菌。
添加除紫杉醇之外的抗癌劑的情況下，如果添加的抗癌劑是水溶性的，可以使其溶解在水性造影劑中后以所述組成范圍內(nèi)的量添加。如果添加的抗癌劑是脂溶性的，可以使其溶解在油性造影劑中后以所述組成范圍內(nèi)的量添加。
這樣，制成的本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物用于動(dòng)脈化療栓塞術(shù)時(shí)，通過(guò)渦動(dòng)處理進(jìn)行乳化后使用。渦動(dòng)處理后，所述乳劑在室溫經(jīng)30天以上未發(fā)生相分離而穩(wěn)定存在。
動(dòng)脈化療栓塞術(shù)的手術(shù)最多需要3～5小時(shí)。所以手術(shù)期間，本發(fā)明的乳劑穩(wěn)定存在，即使進(jìn)入到腫瘤內(nèi)后，也可以持續(xù)地釋放抗癌劑。這一點(diǎn)，與以往通過(guò)泵送法形成乳劑后幾分鐘內(nèi)就發(fā)生相分離的多柔必星/超液化碘油/碘必樂(lè)制劑相比，本發(fā)明的乳劑的穩(wěn)定性得到明顯改善。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物也可以通過(guò)溶有紫杉醇的油相和溶有附加的抗癌劑的水相形成的兩相混合物的形式提供。另外，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的制劑還可作為通過(guò)向紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物施加物理力而混合均勻的油包水型(w/o)乳劑的形式提供。本發(fā)明的乳劑經(jīng)乳化后，至少2個(gè)月未發(fā)生相分離而穩(wěn)定存在。
另外，對(duì)于本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑乳劑的施用量和施用方法，醫(yī)生可根據(jù)患者的年齢、性別、體重、癥狀嚴(yán)重程度等患者的個(gè)體差進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。通常，按照原有的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑那樣，動(dòng)脈化療栓塞術(shù)可以每1～4個(gè)月進(jìn)行一次，并可重復(fù)實(shí)施。將2～15ml所述制劑經(jīng)實(shí)體瘤的營(yíng)養(yǎng)動(dòng)脈注入，例如就肝癌而言是經(jīng)肝動(dòng)脈注入。
以下根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。但是，下述的實(shí)施例僅供理解本發(fā)明，而本發(fā)明不受這些實(shí)施例中的條件、原料或裝置所限定。
實(shí)施例實(shí)施例1.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇乳劑的制造使用800μl的超液化碘油(Lipiodol Ultra-fluid，Laboratoire Guerbet，法國(guó)，含碘量為38重量％)作為油性造影劑。向所述超液化碘油中添加8mg的紫杉醇(韓國(guó)三養(yǎng)-真耐克斯公司(Samyang Genex，Korea))，裝入試管(帶有安全栓的微量試管，聚乙烯制，1.5ml，德國(guó)Eppendorf AG)，在室溫?cái)嚢枞芙?。為了迅速溶解將其加熱?0℃。向該油性混合物中添加200μl的碘必樂(lè)(Bracco s.p.a.Italy)。作為對(duì)照混合物，使用0.8ml的紫杉醇和0.2ml的碘必樂(lè)的混合物。這兩種混合物制成后的照片示于圖1(上行)。使用渦動(dòng)攪拌器，以最大設(shè)定值(120V，0.65A，60Hz)對(duì)各混合物渦動(dòng)處理10分鐘。渦動(dòng)結(jié)束時(shí)，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇制劑未發(fā)生相分離而形成乳劑，而在超液化碘油/碘必樂(lè)組合物中則觀察到相分離(中行)。渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇組合物的乳劑穩(wěn)定，而超液化碘油/碘必樂(lè)組合物中則幾乎完全相分離(下行)。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇制劑中，并有助于增加該制劑的穩(wěn)定性。
實(shí)施例2.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星乳劑的制造使用800μl的超液化碘油(Lipiodol Ultra-fluid，Laboratoire Guerbet，法國(guó)，含碘量為38重量％)作為油性造影劑。向所述超液化碘油中添加8mg的紫杉醇(韓國(guó)三養(yǎng)-真耐克斯公司(Samyang Genex，Korea))，裝入試管(帶有安全栓的微量試管，聚乙烯制，1.5ml，德國(guó)Eppendorf AG)，在室溫?cái)嚢枞芙狻榱搜杆偃芙?，用槽式超聲波儀進(jìn)行超聲處理。向該油性混合物中添加200μl的含有4mg多柔比星(希格碼化學(xué)公司)的碘必樂(lè)(Bracco s.p.a.Italy)。作為對(duì)照混合物，使用由0.8ml的紫杉醇和0.2ml的含有4mg多柔比星的碘必樂(lè)組成的混合物。這兩種混合物制成后的照片示于圖2(上行)。使用渦動(dòng)攪拌器，以最大設(shè)定值(120V，0.65A，60Hz)對(duì)各混合物渦動(dòng)處理10分鐘。渦動(dòng)結(jié)束時(shí)，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星制劑未發(fā)生相分離而形成乳劑，而超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星組合物中則觀察到相分離(中行)。渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星組合物中的乳劑仍然穩(wěn)定，而超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星組合物則幾乎完全相分離(下行)。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星制劑中，并有助于增加該制劑的穩(wěn)定性。
實(shí)施例3.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卡鉑組合物的制造除使用4mg的卡鉑代替多柔比星之外，如實(shí)施例2那樣制造組合物和對(duì)照組。這兩種混合物制成后的照片示于圖3(上行)。使用渦動(dòng)攪拌器，以最大設(shè)定值(120R，0.65A，60Hz)對(duì)各混合物渦動(dòng)處理10分鐘。渦動(dòng)結(jié)束時(shí)，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卡鉑制劑未發(fā)生相分離而形成乳劑，而超液化碘油/碘必樂(lè)/卡鉑組合物中則觀察到相分離(中行)。渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卡鉑組合物的乳劑穩(wěn)定，而超液化碘油/碘必樂(lè)/卡鉑組合物則幾乎完全相分離(下行)。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卡鉑組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(400～600nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卡鉑制劑中，并有助于增加該制劑的穩(wěn)定性。
實(shí)施例4.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/順鉑組合物的制造除使用4mg的順鉑代替多柔比星之外，如實(shí)施例2那樣制造組合物和對(duì)照組。這兩種混合物制成后的照片示于圖4(上行)。使用渦動(dòng)攪拌器，以最大設(shè)定值(120V，0.65A，60Hz)對(duì)各混合物渦動(dòng)處理10分鐘。渦動(dòng)結(jié)束時(shí)，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/順鉑制劑未發(fā)生相分離而形成乳劑，而超液化碘油/碘必樂(lè)/順鉑組合物中則觀察到相分離(中行)。渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/順鉑組合物的乳劑穩(wěn)定，而超液化碘油/碘必樂(lè)/順鉑組合物則幾乎完全相分離(下行)。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/順鉑組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(500～900nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/順鉑制劑中，并有助于增加該制劑的穩(wěn)定性。
實(shí)施例5.紫杉醇存在時(shí)超液化碘油/碘必樂(lè)乳劑的粒度將實(shí)施例1～4制造的各油包水型乳劑用大豆油稀釋100倍后，采用Malvem Zetasizer方法(QELS方法)測(cè)定各乳劑內(nèi)水滴的粒度。介質(zhì)的折射率和粘度定為作為主成分的三油酸甘油酯的值，即分別為1.84(Handbook of Chemistry and Physics，第23版，CRC Press)和69.3cSt/s(Chung等，J.Cont.Rel.(2001)71339-350)，此時(shí)，乳劑顆粒的折射率和粘度分別定為1.84和0.97cSt/s。測(cè)定渦動(dòng)結(jié)束時(shí)和渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后的粒度，其結(jié)果示于圖5。對(duì)于制劑內(nèi)無(wú)紫杉醇而存在卡鉑或順鉑的情況，在渦動(dòng)結(jié)束時(shí)乳劑雖然比較穩(wěn)定，但是渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，粒度增大到5μm或5μm以上，發(fā)生相分離。由于觀察到所制得的無(wú)紫杉醇的乳劑顆粒發(fā)生聚集，所以可以確認(rèn)該乳劑極不穩(wěn)定。相反，當(dāng)存在紫杉醇時(shí)，即使在渦動(dòng)結(jié)束3小時(shí)后，乳劑粒度也未增加，由此可知該乳劑極為穩(wěn)定。
實(shí)施例6.使用超液化碘油/碘必樂(lè)乳劑的多柔比星體外溶出實(shí)驗(yàn)分別取200μl實(shí)施例2中制成的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星和超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/多柔比星乳劑，裝入透析袋中，并將兩端密封。將所述透析袋浸在10ml的磷酸緩沖鹽水中。在37℃在振搖水槽中進(jìn)行溶出實(shí)驗(yàn)。用紫外線(UV)/可見(jiàn)光分光光度計(jì)，測(cè)定溶出的多柔比星濃度。其結(jié)果示于圖6。與無(wú)紫杉醇的乳劑相比，含有紫杉醇的乳劑中多柔比星的溶出速率較慢。140小時(shí)后，觀察到大于30％的多柔比星仍然存留在乳劑中，因此可以確認(rèn)紫杉醇使乳劑的穩(wěn)定性增加，具有降低多柔比星溶出速度的作用。
實(shí)施例7.超液化碘油/碘美普爾/紫杉醇組合物的制造除使用0.2ml的碘美普爾(lomeron300注射劑，韓國(guó)一星新藥)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘美普爾/紫杉醇組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘美普爾/紫杉醇制劑中。
實(shí)施例8.超液化碘油/碘普胺/紫杉醇組合物的制造除使用0.2ml的碘普胺(Ultravist 370注射劑，韓國(guó)賽菱(セ—リング)株式會(huì)社)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘普胺/紫杉醇組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘普胺/紫杉醇制劑中。
實(shí)施例9.超液化碘油/碘克沙醇/紫杉醇組合物的制造除使用0.2ml的碘克沙醇(Visipaque 320mg/ml，Nycomed IrelandLtd.)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘克沙醇/紫杉醇組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘克沙醇/紫杉醇制劑中。
實(shí)施例10.乙碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇組合物的制造除使用0.8ml的乙碘油(Savage Laboratories，Melville，NY)代替超液化碘油之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的乙碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在乙碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇制劑中。
實(shí)施例11.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/HCO 60組合物的制造除使用0.2ml的含有0.002mg HCO 60(氫化蓖麻籽油)的碘必樂(lè)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/HCO 60組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/HCO 60制劑中。
實(shí)施例12.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/吐溫20(Tween20)組合物的制造除使用0.2ml的含有10mg吐溫20(希格碼)的碘必樂(lè)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/吐溫20組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/吐溫20制劑中。
實(shí)施例13.超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卵磷脂酰膽堿組合物的制造除使用0.2ml的含有10mg卵磷脂酰膽堿(希格碼)的碘必樂(lè)代替碘必樂(lè)之外，如實(shí)施例1那樣制造組合物和對(duì)照組。制造的超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卵磷脂酰膽堿組合物，在顯微鏡下僅能觀察到小水滴(100～500nm)。由于未觀察到紫杉醇的沉淀，因而可以確認(rèn)紫杉醇完全溶解在超液化碘油/碘必樂(lè)/紫杉醇/卵磷脂酰膽堿制劑中。
本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物是用溶有紫杉醇的油相和單獨(dú)的水相或者額外溶有抗癌劑的水相組成的。本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物通過(guò)如渦動(dòng)處理等物理力，使油相和水相混合均勻，從而可以制成作為油包水型(w/o)乳劑的制劑。本發(fā)明的混合組合物可作為溶有紫杉醇的、穩(wěn)定的油包水型乳劑而得到，因此，可以通過(guò)除以往的靜脈給藥途徑之外的其他途徑給藥。與以往的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星制劑相比，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物和乳劑的物理穩(wěn)定性得到明顯改善。另外，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑的混合組合物和乳化制劑還可以同時(shí)溶有其他抗癌劑。因此，本發(fā)明的紫杉醇/油性造影劑/水性造影劑制劑作為一種新型制劑，克服了以往的超液化碘油/碘必樂(lè)/多柔比星制劑中存在的穩(wěn)定性問(wèn)題。同時(shí)，對(duì)以靜脈給藥為主作為注射劑使用的紫杉醇，本發(fā)明提供了新的給藥途徑，即通過(guò)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)來(lái)進(jìn)行給藥。
權(quán)利要求
1.用來(lái)制備化療栓塞用乳劑的混合組合物，其包含50％～98.9％體積比的油性造影劑和0.1％～50％體積比的水性造影劑，所述油性造影劑溶有0.01％～1％重量體積比的紫杉醇。
2.溶有紫杉醇的化療栓塞用油包水型乳劑組合物，該組合物包含50％～98.9％體積比的油性造影劑和0.1％～50％體積比的水性造影劑，所述油性造影劑溶有0.01％～1％重量體積比的紫杉醇。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中，所述油性造影劑是含碘量為30重量％～50重量％的碘化油，該碘化油選自由碘化罌粟種子油和碘化大豆油構(gòu)成的組，所述的碘化罌粟種子油包括超液化碘油和乙碘油。
4.如權(quán)利要求3所述的組合物，其中，所述油性造影劑中的含碘量為35重量％～48重量％。
5.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中，所述水性造影劑選自由甲泛葡胺、泛影酸鹽、碘克沙酸鹽、碘噴托、碘帕醇、碘美普爾、碘曲侖、碘海醇、碘佛醇、碘昔蘭、碘普胺、碘克沙醇和碘比醇構(gòu)成的組。
6.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中，所述水性造影劑選自由甲泛葡胺、泛影酸鹽、碘克沙酸鹽、碘噴托、碘帕醇、碘美普爾、碘曲侖、碘海醇、碘佛醇、碘昔蘭、碘普胺、碘克沙醇和碘比醇構(gòu)成的組。
7.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中，所述水性造影劑是碘帕醇。
8.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中，所述的組合物還含有0.0001重量％～20重量％的乳化劑。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述乳化劑選自由磷脂、非離子性表面活性劑、陰離子性表面活性劑、陽(yáng)離子性表面活性劑和膽汁鹽構(gòu)成的組。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述磷脂選自由磷脂酰膽堿及其衍生物、磷脂酰乙醇胺及其衍生物、磷脂酰絲氨酸及其衍生物和磷脂上共價(jià)鍵合了親水性聚合物的聚合物類脂質(zhì)構(gòu)成的組。
11.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述非離子性表面活性劑選自由泊洛沙姆、氫化蓖麻籽油、山梨坦酯、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯和聚氧乙烯醚構(gòu)成的組。
12.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述陰離子表面活性劑選自由磷脂酰絲氨酸及其衍生物、磷脂酸及其衍生物和十二烷基磺酸鈉構(gòu)成的組。
13.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述陽(yáng)離子表面活性劑選自由1，2-二油酰基-3-三甲基銨-丙烷、二甲基雙十八烷基銨溴、N-[1-(1，2-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨氯、1，2-二油?；?3-乙基磷脂酰膽堿和3β-[N-[(N’，N’-二甲氨基)乙烷]氨基甲?；鵠膽甾醇構(gòu)成的組。
14.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述膽汁鹽選自由膽酸及其鹽和衍生物、去氧膽酸及其鹽和衍生物、鵝膽酸及其鹽和衍生物、熊去氧膽酸及其鹽和衍生物或石膽酸及其鹽衍生物構(gòu)成的組。
15.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述油性造影劑是碘化罌粟種子油，而且所述水性造影劑是碘帕醇。
16.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中，所述組合物含有的附加的抗癌劑，選自由多柔比星/阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、長(zhǎng)春瑞濱、托泊替康、伊立替康、雌莫司汀構(gòu)成的組。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物，所述組合物用于通過(guò)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療肝癌。
18.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中，所述組合物含有的附加的抗癌劑，選自由多柔比星/阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、長(zhǎng)春瑞濱、托泊替康、伊立替康或雌莫司汀構(gòu)成的組。
19.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中，所述組合物用于通過(guò)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療肝癌。
20.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述組合物用于通過(guò)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療肝癌。
21.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述組合物含有的附加的抗癌劑，選自由多柔比星/阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、長(zhǎng)春瑞濱、托泊替康、伊立替康或雌莫司汀構(gòu)成的組。
22.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述組合物用于通過(guò)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療肝癌。
23.溶有紫杉醇的化療栓塞用混合組合物的制造方法，該方法包含如下步驟1)向油性造影劑中，添加0.01％～1％(重量體積比)的紫杉醇，使其溶解的步驟；2)添加0.1％～50％(體積比)的水性造影劑的步驟。
24.油包水型紫杉醇乳液組合物的制造方法，該方法包含如下步驟1)向油性造影劑中，添加0.01％～1％(重量體積比)的紫杉醇，使其溶解的步驟；2)添加0.1％～50％(體積比)的水性造影劑的步驟和3)施加物理力，混合所述油性造影劑相和水性造影劑相，使其成為均質(zhì)的步驟。
25.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述油性造影劑是含碘量為30重量％～50重量％的碘化油，該碘化油選自碘化罌粟種子油和碘化大豆油構(gòu)成的組，所述碘化罌粟種子油包括超液化碘油和乙碘油。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述油性造影劑中的含碘量為35重量％～48重量％。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述碘化油是碘化罌粟種子油。
28.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述水性造影劑選自由甲泛葡胺、泛影酸鹽、碘克沙酸鹽、碘噴托、碘帕醇、碘美普爾、碘曲侖、碘海醇、碘佛醇、碘昔蘭、碘普胺、碘克沙醇和碘比醇構(gòu)成的組。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述水性造影劑選自由甲泛葡胺、泛影酸鹽、碘克沙酸鹽、碘噴托、碘帕醇、碘美普爾、碘曲侖、碘海醇、碘佛醇、碘昔蘭、碘普胺、碘克沙醇和碘比醇構(gòu)成的組。
30.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述水性造影劑是碘帕醇。
31.如權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述水性造影劑是碘帕醇。
32.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述的方法還包括在無(wú)菌條件下將已滅菌的油性造影劑與紫杉醇混合的步驟或用EO氣體或γ-射線將制成后的混合物滅菌的步驟。
33.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述的方法包括另外添加0.0001重量％～20重量％的乳化劑的步驟。
34.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述乳化劑選自由磷脂、非離子性表面活性劑、陰離子性表面活性劑、陽(yáng)離子性表面活性劑和膽汁鹽構(gòu)成的組。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述磷脂選自由磷脂酰膽堿及其衍生物、磷脂酰乙醇胺及其衍生物、磷脂酰絲氨酸及其衍生物和磷脂上共價(jià)鍵鍵合了親水性聚合物的聚合物類脂質(zhì)構(gòu)成的組。
36.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述非離子性表面活性劑選自由泊洛沙姆、氫化蓖麻籽油、山梨坦酯、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯和聚氧乙烯醚構(gòu)成的組。
37.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述陰離子表面活性劑選自由磷脂酰絲氨酸及其衍生物、磷脂酸及其衍生物和十二烷基磺酸鈉構(gòu)成的組。
38.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述陽(yáng)離子表面活性劑選自由1，2-二油?；?3-三甲基銨-丙烷、二甲基雙十八烷基銨溴、N-[1-(1，2-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨氯、1，2-二油?；?3-乙基磷脂酰膽堿和3β-[N-[(N’，N’-二甲氨基)乙烷]氨基甲?；鵠膽甾醇構(gòu)成的組。
39.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述膽汁鹽選自由膽酸及其鹽和衍生物、去氧膽酸及其鹽和衍生物、鵝膽酸及其鹽和衍生物、熊去氧膽酸及其鹽和衍生物或石膽酸及其鹽和衍生物構(gòu)成的組。
40.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述的方法還包括使附加的抗癌劑溶解在所述水性造影劑中的步驟，所述的抗癌劑選自由多柔比星、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、長(zhǎng)春瑞濱、托泊替康、伊立替康、雌莫司汀構(gòu)成的組。
41.如權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述的方法還包括使附加的抗癌劑溶解在所述水性造影劑中的步驟，所述的抗癌劑選自由多柔比星、5-氟尿嘧啶、卡鉑、順鉑、卡莫司汀、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、長(zhǎng)春瑞濱、托泊替康、伊立替康和雌莫司汀構(gòu)成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及化療栓塞用的紫杉醇混合組合物、油包水型乳液制劑及它們的制造方法。本發(fā)明的乳液制劑可以額外含有其他的水溶性或脂溶性藥劑，所以能夠容易地制得抗癌劑的復(fù)合制劑。
文檔編號(hào)A61K47/16GK1547469SQ01823631
公開(kāi)日2004年11月17日 申請(qǐng)日期2001年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月13日
發(fā)明者鄭蕙嬋, 鄭曙榮, 權(quán)翊贊, 樸在亨, 鄭鎮(zhèn)旭, 金盈萬(wàn), 李仁鉉 申請(qǐng)人:韓國(guó)科學(xué)技術(shù)研究院, 大化制藥株式會(huì)社