專利名稱：一種新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及杭核酸DNA的體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑，特別是公開了一種新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑，屬于DNA免疫、基因治療和反義寡聚核苷酸藥物的體內(nèi)導(dǎo)入技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前DNA的體內(nèi)導(dǎo)入有多種方法，但大多價(jià)格昂貴或轉(zhuǎn)染效率不高。DNA進(jìn)入細(xì)胞的效率低是制約基因治療和基因免疫技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展的瓶頸之一?，F(xiàn)有的一些提高目的DNA進(jìn)入細(xì)胞核的技術(shù)，仍存在著這樣或那樣的缺陷。利用病毒載體進(jìn)行介導(dǎo)轉(zhuǎn)染，則存在整合復(fù)性的可能以及可使宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)等潛在的不安全性等問題；脂質(zhì)體和陽離子多聚物如聚乙烯亞胺等(PEI)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是目前應(yīng)用較多的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。其中脂質(zhì)體以轉(zhuǎn)移效率相對(duì)較高，毒性小而應(yīng)用最為廣泛，但其成本昂貴(1200-3000元/ml)而使其應(yīng)用受到一定的限制。PEI與脂質(zhì)體相比較而言，其轉(zhuǎn)移效率要低，但因其價(jià)格低廉，其應(yīng)用仍然較多，如何提高其轉(zhuǎn)移效率亦是許多科研工作者努力的方向之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑，解決了DNA的體內(nèi)導(dǎo)入轉(zhuǎn)染劑成本昂貴及轉(zhuǎn)染效率不高的問題。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下本發(fā)明的體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染劑是由下列物質(zhì)按重量份數(shù)比制成的試劑司苯2.5～3.5％、甘油0.6～0.8％。
以無菌蒸餾水配制2.5～3.5％、司苯和0.6～0.8％的甘油，將此混合液裝于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，?7℃～50℃以200～300轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩4～5小時(shí)，此時(shí)混合液變成均勻的懸濁液。此懸濁液即為核酸轉(zhuǎn)染試劑。使用時(shí)將核酸溶液與此試劑按一定的比例混合，于旋渦器上振蕩一分鐘即可，司苯的終濃度在0.1～0.8％之間均有效。
本發(fā)明的積極效果在于將此體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑與目前轉(zhuǎn)染效果最好的脂質(zhì)體和應(yīng)用較為普遍的PEI的轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行了比較。本發(fā)明的轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率與脂質(zhì)體未明顯的差異，但明顯高于PEI的轉(zhuǎn)染效率。在三者所介導(dǎo)的狂犬病基因疫苗試驗(yàn)中，試驗(yàn)小鼠的攻毒保護(hù)率分別是脂質(zhì)體78.4％；本轉(zhuǎn)染試劑71.6％；PEI 33.3％。該轉(zhuǎn)染試劑放置4℃ 2個(gè)月質(zhì)量保持穩(wěn)定。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1以無菌蒸餾水配制100ml 3％司苯和0.7％的甘油，將此混合液裝于1000ml的三角燒瓶，于37℃以300轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩4小時(shí)，此時(shí)混合液變成均勻的懸濁液。此懸濁液即為核酸轉(zhuǎn)染試劑。使用時(shí)將核酸溶液與此試劑按一定的比例混合，于旋渦器上振蕩一分鐘即可，司苯的終濃度在0.1～0.8％之間均有效。
實(shí)施例2以無菌蒸餾水配制50ml 3.5％司苯和0.8％的甘油，將此混合液裝于500ml的三角燒瓶，于40℃以250轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩4.5小時(shí)，此時(shí)混合液變成均勻的懸濁液。此懸濁液即為核酸轉(zhuǎn)染試劑。使用時(shí)將核酸溶液與此試劑按一定的比例混合，于旋渦器上振蕩一分鐘即可，司苯的終濃度在0.1～0.8％之間均有效。
實(shí)施例3以無菌蒸餾水配制100ml 2.5％司苯和0.6％的甘油，將此混合液裝于1000ml的三角燒瓶，于37℃以200轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩5小時(shí)，此時(shí)混合液變成均勻的懸濁液。此懸濁液即為核酸轉(zhuǎn)染試劑。使用時(shí)將核酸溶液與此試劑按一定的比例混合，于旋渦器上振蕩一分鐘即可，司苯的終濃度在0.1～0.8％之間均有效。
權(quán)利要求
1.一種新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑，是由下列物質(zhì)按重量份數(shù)比制成的試劑司苯2.5～3.5％、甘油0.6～0.8％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑的制備工藝，其特征在于以無菌蒸餾水配制2.5～3.5％司苯和0.6～0.8％的甘油，將此混合液裝于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，?7℃～50℃以200～300轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩4～5小時(shí)，此時(shí)混合液變成均勻的懸濁液，即為核酸轉(zhuǎn)染試劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種新型體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)染試劑,是由司苯、甘油按重量份數(shù)比制成的試劑,用無菌蒸餾水配制司苯和甘油,在37℃～50℃以200～300轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行劇烈振蕩4～5小時(shí),制成核酸轉(zhuǎn)染試劑。本體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑與目前轉(zhuǎn)染效果最好的脂質(zhì)體和應(yīng)用較為普遍的PEI的轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行了比較。本發(fā)明的轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率與脂質(zhì)體未明顯的差異,但明顯高于PEI的轉(zhuǎn)染效率。在三者所介導(dǎo)的狂犬病基因疫苗試驗(yàn)中,試驗(yàn)小鼠的攻毒保護(hù)率分別是:脂質(zhì)體78.4%;本轉(zhuǎn)染試劑71.6%;PEI33.3%。
文檔編號(hào)A61K48/00GK1375334SQ0210935
公開日2002年10月23日 申請(qǐng)日期2002年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月25日
發(fā)明者涂長春, 余興龍, 張茂林 申請(qǐng)人:中國人民解放軍軍需大學(xué)軍事獸醫(yī)研究所