專利名稱：云母在制藥中的用途的制作方法
涉及領(lǐng)域本發(fā)明涉及云母的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
云母屬硅酸鹽類礦物類藥物。主含水硅酸鉀鋁，其化學(xué)分子結(jié)構(gòu)式為KAl2Si3Al10(OH)2。主要成分為二氧化硅和氧化鋁。
云母的主要作用以健脾為主，主治虛損氣弱，眩暈，寒瘧，久痢，慢性腸炎，外用于癰疽瘡毒，金創(chuàng)出血等癥。但，云母多作為中藥復(fù)方制劑的有效成分用于臨床，對云母的單方制劑使用不多。在《中藥礦物藥圖譜》一書中，有較詳細(xì)的藥理研究入胃后能中和胃酸之功能，一部分至腸胃吸收入血，能促進(jìn)白血球繁殖，并能增加血液的凝固力，能包圍被結(jié)核菌侵蝕的周圍，減殺其蔓延的能力，有防止動脈硬化之效。文獻(xiàn)檢索顯示國內(nèi)外尚無云母治療慢性萎縮性胃炎的報(bào)告。國家和地方藥典均未記載云母治療慢性萎縮性胃炎的臨床適應(yīng)癥。
慢性萎縮性胃炎是一種較頑固的消化系統(tǒng)常見病，在一般人群中的發(fā)病率可達(dá)7.5％-13.8％，全國約有一億五千萬慢性萎縮性胃炎患者。早在80年代WHO就已將慢性萎縮性胃炎定為胃癌前病變。本發(fā)明可充分開發(fā)和利用我國豐富的礦產(chǎn)資源，推動民族醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種云母的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，采用了如下技術(shù)方案云母用于制備治療慢性萎縮性胃炎藥物的用途，以藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。同時，本發(fā)明還提供了云母元素及相結(jié)構(gòu)的測定方法和結(jié)果及急性毒性實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果。
一、云母對大鼠慢性萎縮性胃炎的藥效學(xué)作用采用以0.1％氨水、60％酒精和20mmol/L去氧膽酸鈉及“饑飽失?！痹斐陕晕s性胃炎大鼠模型。對云母及陽性對照物硫糖鋁對胃粘膜病理形態(tài)學(xué)和核增殖抗原(PCNA)、表皮生長因子(EGF)影響進(jìn)行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)云母使胃粘膜炎癥細(xì)胞浸潤、腺體萎縮程度減輕，腺體PCNA陽性表達(dá)增加，并可增加血清EGF的表達(dá)水平。提示云母對實(shí)驗(yàn)性大鼠慢性萎縮性胃炎有較好的逆轉(zhuǎn)治療和預(yù)防慢性萎縮性胃炎的發(fā)生發(fā)展的作用。云母治療大鼠慢性萎縮性胃炎的起效劑量是80mg/100g。云母藥理機(jī)制主要是通過增加腺體的PCNA增殖和胃粘膜EGF表達(dá)，使組織修復(fù)再生和維持胃粘膜的完整性。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動物采用健康、性成熟、一級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的雌性SD大鼠，體重200±10g，由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供。采用架式籠養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為20±1℃，濕度50-60％，光照每12小時明暗交替，通風(fēng)8-15次/小時，單獨(dú)空調(diào)。2.實(shí)驗(yàn)試劑及飼料氨水分析純，江蘇武進(jìn)縣化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號為20000914，含NH325.0-28.0％。用時配成濃度為0.1％的氨水，分裝后作飲用水。
酒精純度＞99.5％，宜興市鈕家化工助劑廠生產(chǎn)，上海市化輕一部經(jīng)銷。批號為20000226，用時用蒸餾水配成60％的溶液。
去氧膽酸鈉SERVA公司生產(chǎn)，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站進(jìn)口分裝經(jīng)銷。批號為980511，用時用蒸餾水配成20mmol/L的溶液。
云母經(jīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)的合格樣品，批號為20010315。
陽性對照藥硫糖鋁浙江嘉興藥業(yè)生產(chǎn)，批號為991203。
飲用水城市自來水過濾除菌后裝入飲用瓶給予。
飼料浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供的全價營養(yǎng)顆粒飼料。
PCI0為鼠抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)單克隆抗體，由美國DAKO公司生產(chǎn)，編號為M879，4℃冰箱冷藏。
血EGF測定藥盒(中國原子能研究院)3.實(shí)驗(yàn)方法——綜合應(yīng)用0.1％氨水、60％酒精和20mmol/L去氧膽酸鈉，處理24周，建成大鼠慢性萎縮性胃炎模型，具體方法如下①20mmol/L去氧膽酸鈉每日灌胃，其中每周二、五空腹灌胃(每周一、四晚9時撤除飼料，次晨9時空腹灌胃一次)。劑量 大鼠體重＜200g 每次灌胃1ml大鼠體重200-250g每次灌胃1.5ml大鼠體重＞250g 每次灌胃2ml②60％酒精每周二、五空腹灌胃空腹條件和劑量同上。③0.1％氨水自由飲用并記錄每日飲量——治療逆轉(zhuǎn)組慢性萎縮性胃炎模型建立后，取重量相近的大鼠31只，隨機(jī)分為B、C、D、E四組，分別予以蒸餾水、高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁每天灌胃一次，共8周。模型對照組(B組)蒸餾水灌胃2ml。云母高劑量組(C組)云母160mg/100g鼠重，溶于蒸餾水2ml灌胃。云母低劑量組(D組)云母80mg/100g鼠重，溶于蒸餾水2ml灌胃。硫糖鋁組(E組)硫糖鋁160mg/100g鼠重，溶于蒸餾水2ml灌胃?！深A(yù)組慢性萎縮性胃炎模型建立的末8周，取體重相近的大鼠31只，隨機(jī)分為F、G、H三組，分別予以高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁每天灌胃一次，共8周。方法同前。另取健康、性成熟、一級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的雌性SD大鼠7只，作為正常對照組(A組)各組研究對象一般資料見表1表1各組研究對象的一般資料

4.標(biāo)本制備——活組織標(biāo)本灌胃結(jié)束后，禁食不禁水24小時，頸椎脫臼處死。處死后立即破腹暴露全胃，在距賁門和幽門1.5cm處離斷，取出全胃，沿胃大彎切開，觀察胃粘膜的色澤、彈性、皺襞情況、粘液多少等大體情況。然后用生理鹽水沖洗后，立即以10％的中性甲醛溶液固定，送病理室，分別沿小彎側(cè)和大彎側(cè)條狀取材，石蠟包埋，每份蠟塊制成厚度5um切片兩張，一張行HE染色，另一張應(yīng)用PCI0行免疫組化測定PCNA表達(dá)情況。后者主要步驟如下①常規(guī)脫臘至水化；②30ml/LH202封閉內(nèi)源性過氧化物酶；③100ml/L正常血清37℃ 30分鐘；④滴加1400PCI0(一抗)，4℃過夜；⑤滴加1∶150生物素化羊抗鼠二抗，37℃ 30分鐘；⑥滴加1150S-P復(fù)合物，37℃30分鐘；⑦0.5％g/L DAB顯色10分鐘；⑧蘇木素復(fù)染、脫蠟、透明、封片。其中①-⑥步驟后均經(jīng)PBS洗3次，每次5分鐘?！鍢?biāo)本采集和處理頸動脈取血5ml，靜置2小時后用離心機(jī)3500轉(zhuǎn)/分×15’離心，留取血清，-20℃低溫保存。血EGF水平用放射免疫法檢測。步驟①血清標(biāo)本用冷凍抽干機(jī)抽干濃縮成粉末狀；②蒸餾水溶解(1∶2)；③加樣(見表2)；④孵育將各管搖勻，在4℃環(huán)境下，放置24小時；⑤分離各管內(nèi)加入分離劑500ul，搖勻，室溫下放置15分鐘；⑥離心3500轉(zhuǎn)/分×15’，吸棄上清液；⑦測定用放射免疫γ計(jì)數(shù)器測定各管計(jì)數(shù)率。(見表2)表2血EGF測定加樣程序單位微升試劑 NSB樣品0標(biāo)準(zhǔn) 100 100 --------- --- 100---樣品 --- --- ---100100 100 100100蒸留水100 --- ------抗體 --- 100 1001005.觀察指標(biāo)——一般情況動物飼養(yǎng)過程中的精神狀態(tài)，活動情況，毛發(fā)光澤度，食欲，大小便情況，體重等?！笜?biāo)本大體觀觀察胃粘膜的色澤、彈性、皺壁、粘液多少等大體情況?！±斫M織學(xué)指標(biāo)①胃粘膜炎癥情況用半定量法，即在低倍鏡下觀察整個胃粘膜，然后在胃竇部取10個視野，按炎細(xì)胞浸潤的程度分為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3七個級別。具體如下0級無炎癥0.5級鏡下觀察炎癥介于0與1之間。1級在胃粘膜上皮內(nèi)(胃小凹區(qū))或固有腺底部可見多個慢性炎性細(xì)胞浸潤。1.5級鏡下觀炎癥介于1與2之間。2級在胃粘膜小凹至粘膜肌層均有較多炎細(xì)胞浸潤。2.5級鏡下觀察炎癥介于2與3之間。3級胃粘膜內(nèi)可見成堆炎細(xì)胞聚集灶。用以上方法分別記錄下每只大鼠胃大、小彎側(cè)的炎癥情況，再將兩者平均后得出胃粘膜炎癥級別。②胃粘膜腺體厚度(L1)和粘膜肌層厚度(L2)之比(L1/L2)每張切片取胃竇部粘膜5個視野，用測微器測出每個視野的胃竇粘膜腺體厚度和粘膜肌層厚度，算出各自的比值，得出每張切片5個視野的平均值。③胃腺體數(shù)目找到每只大鼠的幽門環(huán)，測出距幽門環(huán)200-1200um之間(即1mm范圍)胃竇固有腺體總個數(shù)，單位以“個”表示。④胃粘膜增殖指標(biāo)在距幽門環(huán)250±50um處用測微器測量5個胃竇部腺體PCNA表達(dá)陽性的高度，算出平均值，單位用um表示。以上各項(xiàng)病理組織學(xué)指標(biāo)均取每只大鼠胃大、小彎側(cè)所得數(shù)值的平均數(shù)。⑤對每張切片同時觀察有無腸上皮化生、假性幽門腺化生、不典型增生、腺瘤、類癌、腺癌的發(fā)生情況。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，運(yùn)用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果——一般情況A組大鼠毛發(fā)色白，光澤度好，C、D、E組大鼠毛發(fā)色略黃，光澤度較好；A、C、D、E、F、G、H組大鼠均精神佳，反應(yīng)靈活，食欲較好，體重增長快，無惡心、流涕等表現(xiàn)。B組(模型組)大鼠毛發(fā)色黃，光澤度差，精神萎軟，活動減少，食欲差，體重增長慢，并有惡心、流涕等表現(xiàn)?！刚衬ご篌w觀察A、C、D、E、F、G、H各組大鼠胃壁彈性正常，粘膜層厚，粘膜淡紅色，有光澤，表面覆有少量黏液，皺襞規(guī)則，其中以E組粘膜色澤稍白。B組(模型組)大鼠胃壁彈性減少，粘膜層變薄，色蒼白，皺襞變平，黏液減少?！鈱W(xué)顯微鏡觀察結(jié)果①正常對照組大鼠胃粘膜胃粘膜上皮細(xì)胞排列整齊，腺體排列緊密規(guī)則，胃小凹內(nèi)清晰，除胃竇部個別炎細(xì)胞外，其余部位極少見到炎細(xì)胞。胃竇固有層腺體飽滿清晰，與胃小凹部分界明顯。胃體部固有腺分布規(guī)則，壁細(xì)胞數(shù)量豐富，染色均勻，腺體之間排列緊密，無出血、腸化、增生等現(xiàn)象。在胃體腺底部偶見少量腺體囊樣擴(kuò)張，而胃竇部粘膜末見腺體囊樣擴(kuò)張。(見圖1)②其他各組胃粘膜情況B組(模型對照組)胃竇粘膜腺體有不同程度的排列紊亂、稀疏，粘膜肌層增厚，向粘膜固有層伸展呈分枝狀插入腺體之間，伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分有成堆淋巴細(xì)胞聚集灶。同時可見胃體及胃竇粘膜內(nèi)有腺體囊樣擴(kuò)張。(見圖2)C、D、E、F、G、H各組大鼠粘膜上皮細(xì)胞及固有腺體排列較緊密規(guī)則，可見少量炎癥細(xì)胞浸潤，其中以E、H組胃竇部區(qū)域有較多炎細(xì)胞浸潤，粘膜肌層平滑肌增生及向粘膜層深入現(xiàn)象不明顯，基本類似于正常胃粘膜。見圖3、4、5)此外，各組均未發(fā)現(xiàn)腸上皮化生、假性幽門腺化生、不典型增生、腺瘤、癌、腺癌。下列就各組大鼠胃粘膜各項(xiàng)病理指標(biāo)列表分述如下。
*胃竇部炎癥情況(表3)表3大鼠胃竇部粘膜炎癥級別試驗(yàn)結(jié)果組別 12 3 4 5 6 7 8 X±S正常對照組 0.6 0.95 1.15 0.7 0.6 0.85 0.65 0.79±0.21△模型對照組 2.5 2.1 1.8 2.0 1.7 2.35 2.15 1.82.05±0.28*云母高劑治療組 1.18 0.88 1.17 1.08 0.78 0.83 0.6 0.93±0.22**△云母低劑治療組 1.05 0.83 0.9 0.95 1.03 1.0 0.75 1.33 0.98±0.17**△云母高劑干預(yù)組 0.7 0.85 0.75 0.8 1.0 0.85 0.75 0.80.81±0.10**△云母低劑干預(yù)組 0.75 1.2 0.65 0.7 1.0 0.8 0.65 1.00.84±0.20**△硫糖鋁干預(yù)組0.75 0.8 1.15 0.7 0.65 0.8 1.1 0.85±0.20**△硫糖鋁治療組1.15 0.7 1.33 0.98 1.3 0.95 1.38 1.18 1.12±0.23*△與正常組比*p＜0.01，**P＞0.05；與模型對照組組比△p＜0.01表3顯示與模型對照組相比，各藥物治療組的P值均＜0.01。說明高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁均能減輕炎癥細(xì)胞浸潤胃竇粘膜的炎癥級別。不同劑量云母治療和干預(yù)組治療效果均略優(yōu)于硫糖鋁，但無顯著差別(P＞0.05)。
*胃竇L1/L2情況(表4)表4大鼠胃竇部L1/L2試驗(yàn)結(jié)果組別 1 2 3 4 5 6 7 8X±S正常對照組 5.79 5.31 4.75 5.65 4.53 5.46 6.16 5.38±0.57模型對照組 2.92 2.87 2.47 3.30 4.03 3.67 3.26 4.572.82±0.55*云母高劑治療組 5.54 5.42 6.06 4.81 7.52 6.66 5.06 5.58±0.96*△云母低劑治療組 5.33 4.69 7.09 3.95 6.66 5.92 6.56 4.955.64±1.09*△云母高劑干預(yù)組 4.61 5.72 5.04 4.50 5.45 5.53 5.25 4.555.08±0.48**△云母低劑干預(yù)組 5.93 5.33 5.18 4.63 5.32 5.17 5.35 5.535.31±0.37**△硫糖鋁干預(yù)組5.52 5.42 5.71 5.34 4.61 5.7 4.56 5.26±0.48**△硫糖鋁治療組0.8 0.7 0.75 0.45 1.05 0.8 0.8 0.850.78±0.17*△與正常組比*p＜0.01，**P＞0.05；與模型對照組組比△p＜0.01表4顯示與模型對照組相比，各藥物治療組的P值均＜0.01。說明高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁均能增加胃竇腺體的L1/L2比值。
不同劑量云母組和硫糖鋁組無顯著差別(P＞0.05)。
*胃竇1mm長度腺體數(shù)目(表5)表5大鼠胃竇腺體數(shù)目結(jié)果組別 1 2 34 5 6 78X±S正常對照組283433 30363132 31.86±2.61模型對照組262025 26243122 2825.25±3.41*云母高劑治療組32.5 2938 34.5 343034 33.14±3.01**△云母低劑治療組312834 3630.5 30.5 33 2931.50±2.66**△云母高劑干預(yù)組293634 30323732 3032.5±2.93**△云母低劑干預(yù)組293628 30343230 3732.0±3.34**△硫糖鋁干預(yù)組 343228 34363231 32.43±2.57**△硫糖鋁治療組 313532 29283229 2730.38±2.62*△與正常組比*p＜0 01，**P＞0.05；與模型對照組組比△p＜0.01
表5顯示與模型對照組相比，各藥物治療組的P值均＜0.01。說明高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁均能增加胃竇腺體數(shù)目。不同劑量云母組和硫糖鋁組無顯著差別(P＞0.05)。
*胃竇粘膜PCNA陽性表達(dá)結(jié)果(表6)表6大鼠胃竇粘膜PCNA表達(dá)結(jié)果組別 12 3 456 78X±S正常對照組119 126 116 120 124 127 131123.29±5.22模型對照組57 65 54 70 51 59 56 57.14±6.57*云母高劑治療組131 118 112 130 109 123 98 117.29±11.91**△云母低劑治療組101 98 119 117 103 123 9493 106.00±11.68**△云母高劑干預(yù)組115 145 112 133 136 122 132 140 129.38±11.86**△云母低劑干預(yù)組128 123 128 120 126 110 142125.50±8.98**△硫糖鋁干預(yù)組 122 113 131 121 120 128 127123.14±6.04**△硫糖鋁治療組 91 103 89 130 96 9795 898.59±13.54*△與正常組比*p＜0.01，**P＞0.05；與模型對照組組比△p＜0.01表6顯示與模型對照組相比，各藥物治療組的P值均＜0.01。說明高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁均能增加粘膜PCNA的陽性表達(dá)。不同劑量云母組和硫糖鋁組無顯著差別(P＞0.05)。
*血清EGF濃度測定結(jié)果(表7)表7大鼠血清EGF測定結(jié)果(ng/ml)組別N 1 23 4 56 7 X±S蒸餾水組6 0.61 0.46 1.04 0.2 0.68 0.64 0.61±0.28模型組 6 2.32 3.04 3.26 1.26 1.35 2.20 2.24±0.83*云母高劑治療組 7 7.26 3.28 3.53 7.20 7.85 3.99 7.815.85±2.21*△云母低劑治療組 6 7.75 2.63 7.52 5.53 6.32 6.28 6.01±1.85*△云母高劑干預(yù)組 7 2.07 3.32 4.42 3.76 5.40 2.34 2.513.40±1.22*△云母低劑干預(yù)組 7 2.89 1.54 5.89 2.04 6.82 4.80 4.304.04±1.97*△硫糖鋁干預(yù)組6 3.83 3.37 3.06 2.40 3.46 3.80 3.32±0.53*△硫糖鋁治療組6 7.81 7.64 2.32 5.71 6.42 6.74 6.11±2.01*△與正常組比*p＜0.01，**P＞0.05；與模型對照組組比△p＜0.01表7顯示與模型對照組相比，各藥物治療組的P值均＜0.01。說明高劑量云母、低劑量云母及硫糖鋁均能增加血清EGF的表達(dá)水平。不同劑量云母組和硫糖鋁組無顯著差別(P＞0.05)。討論慢性萎縮性胃炎是消化系統(tǒng)的一種常見病，其內(nèi)鏡檢出率約為7.5％-13.8％，慢性萎縮性胃炎是公認(rèn)的胃癌前期病變，癌病率最高達(dá)10％左右。世界衛(wèi)生組織(WHO)已將其列入胃癌的I級預(yù)防?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性萎縮性胃炎病因復(fù)雜，幽門螺旋桿菌(H.pylori)、膽汁、酗酒、非甾體消炎藥等均為常見致病因素?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚無有效的慢性萎縮性胃炎治療手段。祖國醫(yī)學(xué)將慢性萎縮性胃炎歸于“胃脘痛”、“嘈雜”、“痞滿”等范疇，通常分為脾虛、濕困和肝郁型三型。三型中以脾虛型最為常見。中醫(yī)認(rèn)為胃的功能正常全賴脾之轉(zhuǎn)化。李東恒《脾胃論.脾胃勝衰論》指出“飲食不節(jié)即胃病…胃既病則脾不能秉受，…脾亦從而病蔫，脾既病則胃不能獨(dú)行其津，胃從而生病” 。國內(nèi)外尚無云母治療慢性萎縮性胃炎的報(bào)道。國家和地方藥典均未記載云母治療萎縮性胃炎的臨床適應(yīng)癥。云母為硅酸鹽類礦物主含水硅酸鉀鋁。云母作為中藥之一，首載于《神農(nóng)本草藥》，其性味“甘溫”《本草經(jīng)疏》?！盁o毒”《別錄》，“入脾，兼入肝、肺”《本草求真》。云母的現(xiàn)代藥理作用不明確，僅在《中國礦物藥圖譜》一書有較為詳細(xì)的記載“云母入胃能中和胃酸，一部分至腸胃后吸收入血，能促進(jìn)白血球繁殖，并增加血液的凝固力，能包圍被結(jié)核菌侵蝕的周圍，減殺其蔓延的能力，有防止動脈硬化的效果”。我們結(jié)合西醫(yī)的理化刺激0.1％氨水、60％酒精和20mmol/L去氧膽酸鈉和中醫(yī)脾氣虛“饑飽失?！币蛩?，成功復(fù)制慢性萎縮性胃炎大鼠模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)云母使慢性萎縮性胃炎大鼠的胃粘膜炎癥細(xì)胞浸潤、腺體萎縮程度減輕，腺體PCNA陽性表達(dá)增加。提示云母具有抗炎、促進(jìn)腺體恢復(fù)和腺體核增殖，促進(jìn)細(xì)胞生長和保護(hù)胃粘膜的作用。并使EGF水平表達(dá)增加。EGF是由53個氨基酸殘基組成的小分子多肽類生長因子，分子量6045，EGF的作用是通過和細(xì)胞膜上的表皮生長因子受體(EGFR)結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的，胃粘膜內(nèi)存在EGFR。EGF能刺激上皮細(xì)胞的RNA、DNA和蛋白質(zhì)合成，促使粘膜上皮的增生。研究表明，EGF及其受體對消化道的生長和成熟具有重要的調(diào)節(jié)作用。EGF能夠防止阿司匹林、酸或乙醇引起的胃潰瘍發(fā)生。消化性潰瘍患者胃粘膜及胃液內(nèi)EGF含量明顯減少。國內(nèi)亦有臨床應(yīng)用EGF口服液治療慢性萎縮性胃炎的報(bào)道。說明EGF對已經(jīng)形成的慢性萎縮性胃炎有一定程度的治療作用。PCNA是一種細(xì)胞增殖標(biāo)志物，是DNA多聚酶δ的輔酶，PCNA被作為一種很好的細(xì)胞增殖標(biāo)志物用于細(xì)胞的增殖動力學(xué)研究，其表達(dá)陽性表明細(xì)胞處于活躍的增殖狀態(tài)。我們發(fā)現(xiàn)用云母干預(yù)和治療組均可促進(jìn)大鼠慢性萎縮性胃炎胃粘膜細(xì)胞增殖帶顯著增加(P＜0.01)，這可能是云母增加EGF水平，治療慢性萎縮性胃炎并預(yù)防損傷因子進(jìn)一步刺激、破壞胃粘膜的最主要的作用機(jī)制之一。當(dāng)胃粘膜遭到各種損傷因子刺激使細(xì)胞喪失超過細(xì)胞再生時，可導(dǎo)致胃粘膜萎縮。連續(xù)的細(xì)胞再生和增殖是胃粘膜最主要的防御機(jī)制，用來維持粘膜的完整性，防治胃粘膜發(fā)生損傷。文獻(xiàn)報(bào)道，EGF是促進(jìn)胃粘膜細(xì)胞再生和增殖的最主要的因子之一。另外，EGF激活鳥氨酸脫羧酶(Ornithine decarboxylase，ODC)，增加粘膜DNA合成，可能是EGF促進(jìn)胃粘膜細(xì)胞增殖中的一個環(huán)節(jié)。云母對大鼠慢性萎縮性胃炎模型的藥理機(jī)制可能還包括EGF的以下幾個方面作用(1)增加胃粘膜血流量既往認(rèn)為維持胃粘膜血流量主要靠一氧化氮(NO)，內(nèi)源性前列腺素(PG)的作用。最近有人研究發(fā)現(xiàn)，給鼠被動吸煙或切除唾液腺，胃粘膜血流量下降，血清EGF水平顯著降低，而血清NO，內(nèi)源性PG水平不受影響，加用外源性EGF能完全逆轉(zhuǎn)胃粘膜血流量下降，提示EGF對胃粘膜血管有獨(dú)立的不依賴NO和內(nèi)源性PG的擴(kuò)張作用；另外有人用大鼠證實(shí)靜脈或胃腔內(nèi)應(yīng)用EGF可以增加門靜脈及腸系膜動脈血流量，從而也旁證EGF對胃粘膜血流量的影響。EGF對胃粘膜血流量的增加也是胃粘膜損傷后的重要的即刻保護(hù)機(jī)制之一。(2)促進(jìn)胃粘膜粘液糖蛋白的合成和分泌糖蛋白是胃粘膜屏障的主要成分，可形成具有強(qiáng)烈粘滯性的糖蛋白凝膠，覆蓋于胃粘膜上皮細(xì)胞表面，保護(hù)胃粘膜免受各種損傷因子的侵蝕和攻擊。另外，覆蓋粘液還可提供有利于細(xì)胞增殖的良好的堿性環(huán)境，有利于粘膜的修復(fù)。我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用云母后大鼠胃粘膜表面粘液增加，說明云母促進(jìn)胃粘膜粘液合成和分泌增加在大鼠慢性萎縮性胃炎胃粘膜病變愈合過程中發(fā)揮重要作用。云母治療慢性萎縮性胃炎效果顯著，可使慢性萎縮性胃炎大鼠胃粘膜炎癥細(xì)胞浸潤、腺體萎縮程度減輕，腺體PCNA陽性表達(dá)增加。提示云母具有抗炎、促進(jìn)腺體恢復(fù)促進(jìn)細(xì)胞生長和保護(hù)胃粘膜的作用。云母治療大鼠慢性萎縮性胃炎的起效劑量是80mg/100g。云母治療慢性萎縮性胃炎的主要藥理機(jī)制是促進(jìn)胃粘膜腺體核增殖，并使EGF水平表達(dá)增加。二、云母的元素和相結(jié)構(gòu)測定檢測依據(jù)JY/T009-1996轉(zhuǎn)靶多晶體X射線衍射方法通則等分析儀器X射線能量色散譜儀，轉(zhuǎn)靶多晶體X射線衍射儀工作條件掃描電鏡20kV；X射線衍射40Kv 50mA；Cu kα輻射；石墨單色器結(jié)果樣品含有Al，Si，K，F(xiàn)e，Cu，Zn等元素。主要含有水硅酸鉀鋁，其化學(xué)分子結(jié)構(gòu)式為KAl2Si3Al10(OH)2。主要成分為二氧化硅和氧化鋁，二氧化硅含量應(yīng)不少于40.0％，氧化鋁應(yīng)不少于25.0％。元素能譜圖(見圖6)，相對重量比(見圖7)。大小為1000目，主含水硅酸鉀鋁，經(jīng)理化性質(zhì)分析顯示酸堿度PH值應(yīng)為5.0-9.0，平均失重在103℃干燥至恒重，減失重量不得超過1.0％，重金屬不得超過百萬分之十，砷量不得超過百萬分之二。云母石硅元素的鑒別。原理為氟化物與濃硫酸反應(yīng)產(chǎn)生氫氟酸，產(chǎn)生的氫氟酸與二氧化硅反應(yīng)生成四氟化硅氣體，逸出的四氟化硅氣體與水珠相遇，生成原硅酸而使水珠產(chǎn)生白色渾濁。云母中鋁離子鑒別，參照中國藥典2000年版一部附錄IV中鋁鹽的鑒別反應(yīng)。二氧化硅測定采用堿性溶劑熔融分解后用稀酸浸取，然后用明膠使硅酸凝聚，過濾之后用重量法測定二氧化硅的量。氧化鋁的測定采用絡(luò)合滴定法，先加過量的氟化物，加熱使氟離子選擇性與鋁離子與乙二胺四醋酸二鈉置換，置換出來的乙二胺四醋酸二鈉再用鋅滴定液滴定。該法滴定終點(diǎn)突躍明顯，選擇性好。三、云母的急性毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖畲蠼o藥量實(shí)驗(yàn)材料藥物云母--白色粉末，云母原料藥加蒸餾水配制成0.2g/ml的水溶液動物昆明種小鼠，雌雄各半，健康成年，體重18-20g，停食不禁水14小時醫(yī)動字22-96010171方法在室溫20℃，相對濕度67％條件下，20只小鼠灌胃一周(最大給藥量為8g/kg，即80ml/kg)。給藥后小鼠活動正常，皮膚光澤，呼吸平穩(wěn)，無腹瀉現(xiàn)象。一周后平均體重雄性小鼠為28.4±1.20g，雌性小鼠為25.8±1.51g，較給藥前體重明顯增加。另，3個月大鼠慢性試驗(yàn)結(jié)果顯示藥物對心、肝、肺、腎、腸等臟器無病理性損害，對血象、肝腎功能均無明顯影響。選用健康成年SD大鼠、雌雄各半。在室溫20±3℃，40-70％濕度條件下，云母原料藥分高劑量組、中劑量組、低劑量組和一個對照組，每組20只，每天灌胃一次共3月，其中高劑量組行2周恢復(fù)觀察。觀察大鼠體重、活動情況，實(shí)驗(yàn)前和末次給藥后血象、肝腎功能等生化指標(biāo)。末次給藥后進(jìn)行大鼠心、肝、肺、腎、腦、脾、腸等臟器的大體肉眼觀和顯微鏡檢查。


圖1正常對照組大鼠(A組)圖2模型組大鼠(B組)圖3云母高劑量組大鼠(C、F組)圖4云母低劑量組大鼠(D、G組)圖5硫糖鋁組大鼠(E、H組)圖6云母元素能譜7云母相對重量比具體實(shí)施方式
云母原料洗凈，經(jīng)干燥、鍛燒、放涼后研磨，過1000目篩。實(shí)施例一云母凝膠劑的處方和工藝處方如下云母5000g卡波姆 2000g碳酸氫鈉適量(PH＝6)氯甲酚 200g加水至 200L工藝如下①調(diào)配1％卡波姆凝膠基質(zhì)取卡波姆2kg，加水200L，攪拌溶解，成透明均勻凝膠基質(zhì)②配制1％碳酸氫鈉溶液稱取5g碳酸氫鈉，加水500ml，攪拌溶解③配制氯甲酚溶液稱取10g氯甲酚，加水10ml溶解④取卡波姆基質(zhì)，用1％碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.0⑤邊攪拌邊加入云母，攪拌直至成均勻的凝膠劑實(shí)施例二云母散劑的處方和工藝處方如下云母3000g微晶纖維素 1000g山梨酸 40g阿司巴甜30g甜橙香精10gHPMC30g檸檬黃 適量處方如下①將云母經(jīng)1000目粉碎，微晶纖維素經(jīng)150目粉碎②配制3％HPMC溶液稱取HPMC30g，加1000ml熱水，溶解，涼至室溫，成均勻透明溶液③將山梨醇用適量乙醇溶解，加入到3％HPMC溶液中④將檸檬黃用少量水溶解，加入到3％HPMC溶液中⑤按處方量稱取云母，微晶纖維素及阿司巴甜，置FL3-C沸騰制粒機(jī)，用3％HPMC溶液作黏合劑，制粒干燥⑥取出細(xì)粉，加入處方量的香精，混合均勻穩(wěn)定性試驗(yàn)包括原料藥、凝膠劑和散劑的3個月12批樣品的室溫留樣觀察，藥物質(zhì)量穩(wěn)定，有效期暫訂為2年。原料藥、凝膠劑和散劑各3批，在上市包裝、溫度40℃、相對濕度75％條件下，考察0、1、2、3個月共4次。原料藥主要考察性狀、鑒別、浸出物、含量測定及微生物。
權(quán)利要求
1.云母用于制備治療慢性萎縮性胃炎藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及云母的新用途。云母用于制備治療慢性萎縮性胃炎的藥物中的用途。通過復(fù)制慢性萎縮性胃炎大鼠模型，對云母及陽性對照物硫糖鋁對胃粘膜病理形態(tài)學(xué)和核增殖抗原(PCNA)、表皮生長因子(EGF)影響進(jìn)行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)云母使胃粘膜炎癥細(xì)胞浸潤、腺體萎縮程度減輕，腺體PCNA陽性表達(dá)增加，并可增加血清EGF的表達(dá)水平。提示云母對實(shí)驗(yàn)性大鼠慢性萎縮性胃炎有較好的逆轉(zhuǎn)治療和預(yù)防慢性萎縮性胃炎的發(fā)生發(fā)展的作用。
文檔編號A61P1/00GK1432366SQ02110568
公開日2003年7月30日 申請日期2002年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月17日
發(fā)明者姚健敏, 王良靜, 王海云, 許妙, 范敏華 申請人:海南普利制藥有限公司