專利名稱：一種治療急性腦出血的中藥注射液及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療急性腦出血的藥物，尤其是涉及一種治療急性腦出血的注射液，本發(fā)明還涉及該注射液的制備方法。
在治療方面，中西醫(yī)均十分重視早期有效的治療，西醫(yī)治療措施主要包括(1)清除血腫或促進(jìn)腦血腫吸收；(2)預(yù)防再出血；(3)預(yù)防腦疝形成及促進(jìn)腦水腫吸收；(4)阻斷病變過程，清除有毒的病理產(chǎn)物，保護(hù)腦細(xì)胞，減輕神經(jīng)細(xì)胞的損傷和壞死。外科治療主要是及時清除血腫，解除血腫的壓迫，但有嚴(yán)格的適應(yīng)癥，需要較高的技術(shù)條件，且療效與內(nèi)科比較無明顯優(yōu)越性，因此內(nèi)科仍然是大多數(shù)腦出血病人急性期的主要治療方法。內(nèi)科治療主要是脫水、降顱內(nèi)壓、對癥處理、治療合并癥，讓腦血腫自行吸收。目前鈣拮抗劑、天門冬氨酸受體阻滯劑、超氧化物岐化酶、類固醇及免疫抑制劑對出血性中風(fēng)的治療正待步。中醫(yī)對腦出血急性雖有安宮牛黃丸，至寶丹，蘇合香丸，參附湯等治療方法，但臨床用藥極不方便。到日前為止，臨床尚缺乏治療急性腦出血的有效藥物。因此，研究適合于急性期搶救治療的新藥，特別是使用方便的靜脈制劑就顯得尤為迫切。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述中藥注射液的制備方法。
本發(fā)明提供的治療急性腦出血的中藥注射液，由下述重量配比的原料制成羚羊角1～70牡丹皮4～164石菖蒲2～60梔 子10～120將上述重量配比的原料制成本發(fā)明中藥注射液的方法，包括以下步驟(1)羚羊角打成粗粉，加4～12倍量0.1～1.5mol/L硫酸回流水解2～12小時，水解液用氫氧化鋇中和至pH3.5～6.0，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.32，用乙醇沉淀處理二次，第一次使含醇量為50～80％，第二次為70～85％，冷藏12～120小時，濾過，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15～1.40的稠膏，真空干燥，得羚羊角提取物；(2)石菖蒲粉碎成0.5～2.5cm粗粒，加10～30倍量水，水蒸氣蒸餾提取6～20小時，收集揮發(fā)油，蒸餾后的水提液備用；(3)牡丹皮打成粗粉，加10～25倍量水，加熱蒸餾，收集蒸餾液至8～12倍量，蒸餾液于2～6℃左右冷藏1～4小時，濾過，得結(jié)晶I，母液重蒸餾，收集重蒸餾液200～400ml，于2～4℃左右冷藏1小時，濾過，得結(jié)晶II，合并結(jié)晶I，II，于干燥器中干燥，得丹皮酚結(jié)晶，重蒸餾母液另器保存；(4)牡丹皮蒸餾后的水提液與石菖蒲蒸餾后的水提液合并，濾過，濾液減壓濃縮至1.08～1.18，用等量水飽和正丁醇提取2～6次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇，殘留物真空干燥，得丹、石水提物；(5)梔子粉碎成粗粉，用4～8倍量60～90％乙醇加熱回流1～3次，每次1～2小時，合并藥液，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.08～1.23，冷藏12～100小時，濾過，濾液加5％明膠水溶液至上清液無渾濁為止，靜置0.5～24小時，再加乙醇使含醇量75～85％，冷藏12～48小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度過1.20～1.43，真空干燥，得梔子提取物；(6)取石菖蒲揮發(fā)油、丹皮酚結(jié)晶和牡丹皮重蒸餾液結(jié)晶后的母液混合，加入泊洛沙姆，攪拌使溶解，備用；另取羚羊角提取物，丹、石水提物，梔子提取物混合，置配液容器中，加入注射用水，氯化鈉，攪拌溶解后，再加入上述混合液，攪拌混勻，加40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值6.5～8.0，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水，再用20～40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值5.5～8.5，然后用0.1～0.3μm微孔濾膜濾過，濾液灌裝于輸液瓶中，熱壓滅菌，即得。
本發(fā)明中藥注射液具有平肝熄風(fēng)、涼血化瘀、豁痰開竅的功能，對治療急性腦出血具有很好的療效。臨床試驗結(jié)果表明，本發(fā)明具有減輕腦水腫，增加腦血流量，減少神經(jīng)細(xì)胞繼發(fā)損傷，改善出血所致偏癱體征和神經(jīng)功能缺損，減少死亡率，提高存活質(zhì)量，抑制腦內(nèi)脂質(zhì)氧化，提高超氧化物歧化酶活性，促進(jìn)腦損傷等作用。臨床試驗結(jié)果還表明，本發(fā)明具有降壓、利尿，緩解腦血管痙攣及明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。
下面結(jié)合實施例及主要藥效學(xué)試驗對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
以下第6～10頁記載的為本發(fā)明的主要藥效學(xué)試驗，其中本發(fā)明中藥注射液稱為腦血寧注射液。
實驗?zāi)X血寧注射液對家兔急性腦出血的治療作用方法1.實驗分組及給藥取家兔48只，♂♀兼用，將動物隨機(jī)分為6組，即假手術(shù)組，模型對照組，腦血寧注射液低、中、高劑量組，陽性藥對照組，每組10只家兔。于造模當(dāng)日(術(shù)后1h)至造模后第7天，每天給藥一次，共給藥7天，各組均以前述劑量按5ml/kg體重的體積靜脈注射給藥。假手術(shù)組及模型組大鼠給予同體積生理鹽水。陽性組給予血栓通注射液，劑量同前述。1.兔急性腦出血模型的制備仿照Levine’s方法，并參考大鼠腦血腫模型制作方法，復(fù)制家兔急性腦出血模型。于術(shù)前1天自兔耳動脈采血1ml，肝素抗凝，注入無菌的青霉素小瓶內(nèi)，置4℃冰箱過夜。
實驗動物在3％戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg，iv)下行右側(cè)腦內(nèi)自體抗凝血深埋藏術(shù)，手術(shù)步驟與大鼠相似。手術(shù)部位為冠狀縫前0.1cm，矢狀縫右側(cè)旁開0.6cm，深1.4cm。將血液0.25ml埋入腦組織中，停留5min后緩慢出針，縫合切口。
動物于術(shù)后自由飲水進(jìn)食，如不能正常進(jìn)食，則每日灌1次濃奶粉溶液20ml。于術(shù)后第7天殺檢家兔，觀察和測定如下指標(biāo)。2.察指標(biāo)2.1動物一般情況、體溫變化及死亡數(shù)統(tǒng)計 如實記錄動物造模后的精神狀態(tài)，毛色。每天記錄一次。造模當(dāng)日及處死前各稱一次體重，以觀察動物的體重變化。隨時記錄死亡數(shù)及死亡日期。家兔體溫測定采用肛溫表(5min)測試家兔肛溫。
2.2神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損分級動物神經(jīng)功能缺損分級方案參照Bederson及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組方案修訂0級正常I級一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1m)；II級一側(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5-0.75m左右；III級一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以正臥，有顯著的歪頭，口角歪斜；IV級一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯；或不能自主進(jìn)食；神志迷蒙；或抽搐頻繁(10min內(nèi)2次以上)。V級昏迷或死亡。
2.3腦組織丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定 于造模手術(shù)第7天，末次給藥后2h，將家兔處死后迅速取出腦組織，剝?nèi)ケ韺幽X膜及血管后，取右側(cè)靠血腫壓近處約300mg腦組織，加冰冷的生理鹽水做成10％的組織勻漿用于測定MDA和SOD。MDA含量采用TBA法測定，SOD活性采用鄰苯三酚自氧化法測定，蛋白定量用福林酚氏法，用722光柵分光光度計測定。
2.4病理形態(tài)學(xué)檢查于造模術(shù)后第7天，將家兔處死后立即取腦，于血腫壓迫處取腦組織，用1％戊二醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，作HE染色，在Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察。用1％戊二醛及鋨酸固定后，Nissl染色，超薄切片，電鏡觀察。3.統(tǒng)計學(xué)處理 所有實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析和組間對比或給藥前后對比。
結(jié) 果1.物一般情況、體溫變化及死亡數(shù)統(tǒng)計受試家兔于術(shù)后均有不同程度的精神萎靡。造模各組家兔術(shù)后行動遲緩、左側(cè)肢體肌張力增高，肌力減弱，以前肢明顯；行走跛行，并向右側(cè)(健側(cè))偏轉(zhuǎn)；進(jìn)食及飲水量減少，體重明顯下降，以模型對照組顯著；小便少而色深，大便少而干。觀察7天，各組無動物死亡。腦出血手術(shù)各組家兔術(shù)后體溫明顯升高，術(shù)后第7天兔體溫有所下降，高劑量組兔第7天體溫與假手術(shù)組比較，P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。其它各組兔體溫仍明顯高于假手術(shù)組。表1、2、3。
表1 術(shù)后各組家兔存活情況及體重變化體重(kg)組別 死亡數(shù) 術(shù) 前 術(shù)后第7天假手術(shù)組0 2.46±0.112.51±0.10模型對照組 0 2.46±0.112.02±0.10**腦血寧低劑量組 0 2.45±0.122.46±0.10腦血寧中劑量組 0 2.43±0.132.47±0.13腦血寧高劑量組 0 2.44±0.102.30±0.13**陽性藥對照組0 2.44±0.102.38±0.14*N＝8，*P＜0.05，與假手術(shù)組比較。
表2 術(shù)后各組家兔體溫變化情況體溫(℃)組別 術(shù) 前 術(shù)后第3天術(shù)后第7天假手術(shù)組 38.4±0.26 39.0±0.29 38.5±0.29模型對照組 38.5±0.37 40.0±0.45**39.5±0.35**腦血寧低劑量組 38.5±0.27 39.7±0.31**39.3±0.25**腦血寧中劑量組 38.5±0.27 39.5±0.33*#39.0±0.28*#腦血寧高劑量組 38.6±0.26 39.4±0.23*##38.8±0.51##陽性藥對照組 38.6±0.28 39.6±0.36*#39.1±0.34**#N＝8，*P＜0.05，與假手術(shù)組比較。
#P＜0.05，##P＜0.01，與模型組比較。2.家兔神經(jīng)功能缺損分級變化假手術(shù)組動物手術(shù)后無明顯神經(jīng)功能缺損變化。各造模組家兔表現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損，以II、III級為主，沒出現(xiàn)IV、V級的神經(jīng)功能缺損。在術(shù)后第1、2、3天，模型組及各給藥組家兔神經(jīng)功能缺損分級相似，組間無明顯差異，與假手術(shù)組相比均有明顯差別。于造模手術(shù)第7天觀察，各給藥組兔神經(jīng)功能體征均有所減輕，模型組兔神經(jīng)功能缺損分級與第1天無顯著差別，P＞0.05。腦血寧高劑量組及陽性藥組與同一天的模型組相比，有明顯改善，與假手術(shù)組比較，無明顯差別，見表3。
表3 家兔急性腦出血神經(jīng)功能缺損分級觀察結(jié)果(N＝8)神經(jīng)功能缺損分級組別 時間 0 I II III IV V假手術(shù)組 第1天 8 - - - - -第3天 8 - - - - -第7天 8 - - - - -模型對照組 第1天 0 4 3 1 0 0第3天 0 4 3 1 0 0第7天 0 3 4 1 0 0腦血寧低劑量組 第1天 0 5 2 1 0 0第3天 0 6 1 1 0 0第7天 0 6 2 0 0 0腦血寧中劑量組 第1天 0 4 3 1 0 0第3天 0 4 3 1 0 0第7天 0 6 2 0 0 0腦血寧高劑量組 第1天 0 4 3 1 0 0第3天 0 6 2 0 0 0第7天*0 7 1 0 0 0陽性對照組 第1天 0 4 4 0 0 0第3天 0 7 1 0 0 0第7天*0 8 0 0 0 0*P＜0.05，與同天的模型組比較。3.家兔腦組織MDA含量及SOD活性的測定結(jié)果本實驗于造模術(shù)后第7天分別測定家兔腦組織內(nèi)MDA含量及SOD活性。結(jié)果表明，模型組家兔腦內(nèi)MDA含量明顯較假手術(shù)組增高(P＜0.01)，SOD水平則較假手術(shù)組明顯降低，P＜0.05。腦血寧低、中、高三劑量組及陽性藥組家兔腦組織MDA含量與模型組比較，有非常明顯差異，P＜0.01；高劑量組及陽性藥組SOD活力與假手術(shù)組比較，無明顯差別，但與模型組比較，則有明顯差異，P＜0.01。見表4。
表4 各組家兔腦組織內(nèi)MDA含量和SOD活性測定結(jié)果組別 MDA(nmol/mg蛋白) SOD(u/mg蛋白)假手術(shù)組0.89±0.190 18.6±2.29模型對照組 1.53±0.334**12.9±2.50**腦血寧低劑量組 1.06±0.364##14.4±1.52*腦血寧中劑量組 0.99±0.227##14.9±2.18*腦血寧高劑量組 0.94±0140##17.8±2.07##陽性藥對照組1.08±0.333##17.2±2.00##N＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，與假手術(shù)組比較。
#P＜0.05，##P＜0.01，與模型組比較。4.家兔腦組織病理形態(tài)學(xué)觀察4.1肉眼觀察 假手術(shù)組兩側(cè)大腦無明顯腫脹和瘀血；模型組家兔腦內(nèi)腫脹明顯，并伴有瘀血，色澤紫暗；各給藥組動物腦內(nèi)腫脹及瘀血均有減輕。4.2光鏡觀察見病理報告。4.3電鏡觀察假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，膜完整，細(xì)胞器無異常發(fā)現(xiàn)。神經(jīng)纖維排列整齊，表面光滑。
模型組神經(jīng)纖維髓鞘排列紊亂，結(jié)構(gòu)不清。神經(jīng)細(xì)胞中線粒體腫脹，部分嵴消失，細(xì)胞器數(shù)量減少，胞漿中出現(xiàn)空泡。
低劑量組神經(jīng)元中部分線粒體腫脹，有空泡和髓樣變。
中劑量組神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)中可見空泡結(jié)構(gòu)及髓樣變。
高劑量組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常，胞漿中細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰可見。
陽性對照組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常，偶見空泡結(jié)構(gòu)。
結(jié) 論本實驗采用腦內(nèi)注入自體抗凝血復(fù)制家兔急性腦出血模型。結(jié)果表明，模型對照組家兔造模后神經(jīng)功能缺損明顯，腦組織MDA水平增高，SOA活性下降。光鏡及電鏡的病理檢查發(fā)現(xiàn)，模型組腦內(nèi)血腫明顯，神經(jīng)細(xì)胞受損嚴(yán)重，腦組織中有片狀及點狀出血灶。神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)不清，線粒體腫脹。腦血寧注射液給藥7天，低、中、高三個劑量組均表現(xiàn)不同程度對腦出血的治療作用，神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損分級降低，腦內(nèi)MDA水平下降，SOD活性升高。病理學(xué)檢查表明，各給藥組腦組織中出血點減少，神經(jīng)元受損程度明顯減輕。
權(quán)利要求
1.一種治療急性腦出血的中藥注射液，由下述重量配比的原料制成羚羊角1～70牡丹皮4～164石菖蒲2～60梔 子10～120
2.權(quán)利要求1所述的治療急性腦出血的中藥注射液的制備方法，包括以下步驟(1)羚羊角打成粗粉，加4～12倍量0.1～1.5mol/L硫酸回流水解2～12小時，水解液用氫氧化鋇中和至pH3.5～6.0，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.32，用乙醇沉淀處理二次，第一次使含醇量為50～80％，第二次為70～85％，冷藏12～120小時，濾過，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15～1.40的稠膏，真空干燥，得羚羊角提取物；(2)石菖蒲粉碎成0.5～2.5cm粗粒，加10～30倍量水，水蒸氣蒸餾提取6～20小時，收集揮發(fā)油，蒸餾后的水提液備用；(3)牡丹皮打成粗粉，加10～25倍量水，加熱蒸餾，收集蒸餾液至8～12倍量，蒸餾液于2～6℃左右冷藏1～4小時，濾過，得結(jié)晶I，母液重蒸餾，收集重蒸餾液200～400ml，于2～4℃左右冷藏1小時，濾過，得結(jié)晶II，合并結(jié)晶I，II，于干燥器中干燥，得丹皮酚結(jié)晶，重蒸餾母液另器保存；(4)牡丹皮蒸餾后的水提液與石菖蒲蒸餾后的水提液合并，濾過，濾液減壓濃縮至1.08～1.18，用等量水飽和正丁醇提取2～6次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇，殘留物真空干燥，得丹、石水提物；(5)梔子粉碎成粗粉，用4～8倍量60～90％乙醇加熱回流1～3次，每次1～2小時，合并藥液，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.08～1.23，冷藏12～100小時，濾過，濾液加5％明膠水溶液至上清液無渾濁為止，靜置0.5～24小時，再加乙醇使含醇量75～85％，冷藏12～48小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度過1.20～1.43，真空干燥，得梔子提取物；(6)取石菖蒲揮發(fā)油、丹皮酚結(jié)晶和牡丹皮重蒸餾液結(jié)晶后的母液混合，加入泊洛沙姆，攪拌使溶解，備用；另取羚羊角提取物，丹、石水提物，梔子提取物混合，置配液容器中，加入注射用水，氯化鈉，攪拌溶解后，再加入上述混合液，攪拌混勻，加40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值6.5～8.0，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水，再用20～40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值5.5～8.5，然后用0.1～0.3μm微孔濾膜濾過，濾液灌裝于輸液瓶中，熱壓滅菌，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療急性腦出血的中藥注射液,由下述重量配比的原料制成:羚羊角1～70、牡丹皮4～164、石菖蒲2～60、梔子10～120。本發(fā)明還公開了該中藥注射液的制備方法。本發(fā)明中藥注射液具有平肝熄風(fēng)、涼血化瘀、豁痰開竅的功能,對治療急性腦出血具有很好的療效。臨床試驗結(jié)果表明,本發(fā)明具有減輕腦水腫,增加腦血流量,減少神經(jīng)細(xì)胞繼發(fā)損傷,改善出血所致偏癱體征和神經(jīng)功能缺損,減少死亡率,提高存活質(zhì)量,抑制腦內(nèi)脂質(zhì)氧化,提高超氧化物歧化酶活性,促進(jìn)腦損傷等作用。臨床試驗結(jié)果還表明,本發(fā)明具有降壓、利尿,緩解腦血管痙攣及明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。
文檔編號A61K35/32GK1371740SQ0211495
公開日2002年10月2日 申請日期2002年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月13日
發(fā)明者張平 申請人:張平