專利名稱：貫葉連翹提取物，其制備方法及藥用組合物的制作方法
藥理和臨床試驗證實，貫葉連翹的提取物對抑郁、植物神經(jīng)紊亂、恐懼和神經(jīng)不安有肯定療效，可使病人解除緊張，達(dá)到內(nèi)心平衡，迅速恢復(fù)工作能力和應(yīng)變能力，但這種功效還不能肯定是單一成份作用還是多種成份所致。參見J.H lzl，S.Sattler and H.Schutt，JohanniskrautEine AlternativezuSynthetischen Antidepressiva (St.John’s Wortsan alternative tosynthetic antidepresswants)，Pharmazeutische Zeitung，No.46，139，Jahrgang，1994年11月17日，第3959～3977頁。近年來，人們不斷地研究，發(fā)現(xiàn)金絲桃素對抑郁癥癥狀的緩解有顯著的作用，參見EP0599307A等文獻(xiàn)，對金絲桃素的作用大家已公認(rèn)。在近期，Veronika Butterweek and GuideJürgenliemk等在，《Planta Medica》Vol66 No.1 2000年，第3頁～第6頁上發(fā)表了實驗研究，題目為Flavonids from Hypericum perforatum showantidepressant activity in the force swimming test.研究證實從貫葉連翹中提取的黃酮能顯著縮短強(qiáng)迫游泳小鼠的不動時間，其作用強(qiáng)度不亞于金絲桃素。
在CN1198097A和EP0599307A等文獻(xiàn)均只報道了金絲桃素的提取，這些文獻(xiàn)側(cè)重于金絲桃素的提取純化，防止金絲桃素在提取過程中被破壞。在現(xiàn)有技術(shù)中，金絲桃素的含量在0.3％左右，黃酮含量一般在6％左右。
在本發(fā)明中，主要特點(diǎn)是在常規(guī)提取方法基礎(chǔ)上，增加精制純化過程，除去一些非活性成份，高度富集其活性成份，從而減少藥物的服用量，使藥物不良反應(yīng)降低。
本發(fā)現(xiàn)的技術(shù)問題是提供含有0.6％以上的金絲桃素和20～90％的黃酮的貫葉連翹的穩(wěn)定提取物。本發(fā)現(xiàn)的另一個技術(shù)問題是提供了一種制備穩(wěn)定提取物的方法以及提供了含有穩(wěn)定提取物的藥物組合物，其中，該組合物中的金絲桃素的量和黃酮的量也保持穩(wěn)定。
本發(fā)明提供制備穩(wěn)定提取物方法的優(yōu)選方案中，在常規(guī)提取方法基礎(chǔ)上，增加了用吸附材料吸附的柱層析方法分離，開始用水淋洗，然后用5％～30％的稀醇或丙酮溶液洗脫，再用20％～70％的醇溶液洗脫，收集第二次洗脫液。濃縮洗脫液，濃縮液用溶媒萃取，回收萃取溶媒，干燥得提取物。
在本發(fā)明中，術(shù)語“醇溶液”是指甲醇、乙醇或丙醇。
在本發(fā)明中的另一個優(yōu)選的方案中，所制備的提取物可以與常規(guī)藥物添加劑一起制備成片劑、包衣片、膠囊、顆粒劑。藥物添加劑是填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑和用于包衣片的包衣材料以及用于軟膠囊的油類和脂肪類填充劑。
使用本發(fā)明制備的貫葉連翹提取物與使用其它方法提取的提取物的質(zhì)量比較如下
使用本發(fā)明制備的精提取物與其它方法所得的提取物進(jìn)行了動物急性毒性比較。在18～21克健康小鼠中，隨機(jī)分為4組，每組20只，雌雄各半。實驗前動物禁食(不禁水)16小時，以藥物最大濃度(12.5％)及動物灌胃和皮下注射(用藥量分別為0.40ml/10g；0.25ml/10g)，一次性用藥，二種給藥途徑的對照組分別給予等體積0.5％溶液，藥后立即觀察動物反應(yīng)，連續(xù)7天，記錄動物中毒及死亡情況，最后與對照組比較體重增長情況，并作肉眼尺檢。實驗結(jié)果顯示，各組之間的動物在攝食、毛發(fā)、行為活動及大小便等均無異常，動物心、肝、肺、腎等臟器肉眼尺檢未見明顯病變，也未見明顯差異。實驗測得其它方法所得的提取物的動物灌胃LD50＝2692±441mg/Kg，而精制提取物灌胃和皮下注射最大給藥量LD50分別為5000mg/Kg、3125mg/Kg。
在雄性小鼠中，分別給予其它方法所得的提取物相當(dāng)于0.4g生藥/Kg、0.8g生藥/Kg、1.6g生藥/Kg、及精提取物0.25g生藥/Kg、0.125g生藥/Kg、0.0625g生藥/Kg(相當(dāng)于精提取物5.00mg/Kg、2.50mg/Kg、1.25mg/Kg)和鹽酸丙米嗪30.00mg/Kg組及溶劑對照組共8個組，對照組小鼠灌胃等體積0.5％溶液，所有動物均采用給藥1小時后將尾部貼在一木棍上，呈倒持狀態(tài)，小鼠頭部離臺面約5cm高，四周用紙板擋視線，以避免外界影響，記錄各組小鼠在6分鐘內(nèi)的不動時間。結(jié)果表明，24小時內(nèi)三次灌胃精制提取物和其它方法所得的提取物均能明顯縮短小鼠懸尾不動時間，但精制提取物的用量明顯小于其它方法所得的提取物。
所得的貫葉連翹干提取物與常規(guī)的藥物添加劑一起加工制備成片劑、膠囊、顆粒劑、軟膠囊等。藥物添加劑是填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑和用于包衣片的包衣材料以及用于軟膠囊的油類和脂肪類填充劑。
實施例1.
首先用常規(guī)方法提取，如取貫葉連翹藥材1Kg，切成1～2cm長的小段或粉碎成粗粉，用加入18倍的乙醇提取，減壓回收適量溶劑，靜置過夜，濾過，得濾液，待用。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的10％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.0％，總黃酮含量為55％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用大孔樹脂填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的10％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重29克，收率為2.9％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為0.9％，總黃酮含量為58％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用離子交換樹脂填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的10％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重29克，收率為2.9％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.2％，總黃酮含量為52％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的30％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重22克，收率為2.2％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.1％，總黃酮含量為55％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為0.7％，總黃酮含量為60％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的乙醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的30％的乙醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.5％，總黃酮含量為54％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的乙醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的70％的甲醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為0.6％，總黃酮含量為70％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的甲醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的70％的乙醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.3％，總黃酮含量為59％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的乙醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的50％的乙醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.3％，總黃酮含量為61％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用聚酰胺填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量丙酮洗脫，洗脫完后再用4倍量的50％的乙醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.0％，總黃酮含量為58％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用樹脂填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的乙醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的50％的乙醇洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與丙酮混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為1.2％，總黃酮含量為59％。
將常規(guī)方法制得的提取液通過用樹脂填充的吸收柱，首先用10～15倍量的水淋洗至無色，再用2倍量的20％的乙醇洗脫，洗脫完后再用4倍量的丙酮洗脫，回收洗脫液，得流浸膏200ml，再用乙酸乙酯與乙醇混合溶劑萃取，回收溶劑，得稠膏，干燥，得干浸膏，重27克，收率為2.7％。干燥提取物經(jīng)紫外分光光度法分析測得如下金絲桃素含量為0.9％，總黃酮含量為61％。
含有貫葉連翹提取物的軟明膠膠囊組合物貫葉連翹提取物的干提取物 20mg辛基十二烷醇 200mg制備將貫葉連翹提取物干提取物分散到辛基十二烷醇中，并加工成為軟膠囊。實施例15.
含有貫葉連翹提取物的制劑膠囊、顆粒劑。
貫葉連翹提取物的干提取物 20mg乳糖 58.5mg淀粉 11.5mg微晶纖維素30mg制備將上述材料均勻混合，然后進(jìn)行制粒，再灌裝或分裝。
含有貫葉連翹提取物的制劑片劑。
貫葉連翹提取物的干提取物 20mg乳糖 58.5mg淀粉 10mg微晶纖維素30mg硬脂酸鎂 1.5mg制備將上述材料除硬脂酸鎂以外，均勻混合，然后進(jìn)行制粒，再加入硬脂酸鎂，混勻、壓片，包成糖衣片或薄膜衣片。
權(quán)利要求
1.一種基于干燥提取物含有至少0.6％的金絲桃素的貫葉連翹的穩(wěn)定提取物，其特征在于提取物中的黃酮含量為20％～90％。
2.一種制備含有0.6％以上的金絲桃素和20％～90％的黃酮的貫葉連翹提取物的方法，其制備過程如下a)用常規(guī)方法獲得的貫葉連翹提取液。b)提取液經(jīng)裝有填充材料的吸附柱分離。填充的吸附材料選自聚酰胺，離子交換樹脂，大孔樹脂，硅膠，氧化鋁中的一種。c)用水洗脫至洗脫液至無色。d)用含5％～30％的C1～4低級脂肪醇溶液或丙酮洗脫至色淺。e)用含20％～70％的C1～4低級脂肪醇溶液洗脫，收集洗脫液。f)回收洗脫液，得浸膏。g)再用溶媒萃取，溶媒選自C1～4低級脂肪醇，C1～4低級羧酸酯，丙酮，或它們中二種或二種以上的混合溶劑之一。h)回收溶媒，干燥，得干燥提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2，貫葉連翹提取物中的金絲桃素含量應(yīng)大于0.6％，黃酮含量范圍為30％～80％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2，貫葉連翹提取物中的金絲桃素含量應(yīng)大于1％，黃酮含量范圍為40％～80％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2，貫葉連翹提取物中的金絲桃素含量應(yīng)大于1％，黃酮含量范圍為40％～70％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2，貫葉連翹提取物中的金絲桃素含量應(yīng)大于1％，黃酮含量范圍為50％～70％。含量范圍為50％-70％。
7.根據(jù)權(quán)利要求2，填充的吸附材料選自聚酰胺，離子交換樹脂，大孔樹脂，硅膠，氧化鋁中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求2，填充的吸附材料優(yōu)選聚酰胺，離子交換樹脂，大孔樹脂中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求2，洗脫液用的C1～4低級脂肪醇濃度優(yōu)選甲醇或乙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求2，第一次洗脫液的醇濃度優(yōu)選為10％～30％。
11.根據(jù)權(quán)利要求2，第一次洗脫液的醇濃度最佳范圍為10％～20％。
12.根據(jù)權(quán)利要求2，第二次洗脫液的醇濃度優(yōu)選為30％～60％。
13.根據(jù)權(quán)利要求2，第二次洗脫液的醇濃度最佳范圍為40％～55％。
14.根據(jù)權(quán)利要求2，萃取溶媒優(yōu)選C1～3低級脂肪醇與C1～3低級羧酸酯或丙酮混合溶劑中的一種。
15.根據(jù)權(quán)利要求2，萃取溶媒最佳為乙醇與乙酸乙酯或丙酮混合溶劑中的一種。
16.一種藥用組合物，它含有權(quán)利要求1～15中任何一種制備方法制備的干燥提取物。
17.權(quán)利要求16的藥物組合物用于治療抑郁癥、病毒性疾病、早老性癡呆癥及心腦血管疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及用合適的溶劑及柱分離方法從貫葉連翹中提取高純度的金絲桃素及高含量的總黃酮，這些提取物在藥學(xué)用于抑郁癥等疾病治療。
文檔編號A61P31/00GK1436562SQ02115540
公開日2003年8月20日 申請日期2002年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月8日
發(fā)明者孫代華, 周祖坤, 楊惠芳 申請人:湖北麗益醫(yī)藥科技有限公司