專利名稱：益母草總生物堿的制備方法及藥物新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種益母草總生物堿的制備方法及藥物新用途，特別是涉及一種益母草總生物堿在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥及降低雌激素水平的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前國內(nèi)外治療子宮內(nèi)膜異位癥的方法很多，如期待療法、藥物療法、手術(shù)療法、藥物與手術(shù)綜合療法等。手術(shù)治療雖可緩解疼痛，但復(fù)發(fā)率高。在藥物治療方面，國外多采用丹哪唑(Danazol)假絕經(jīng)療法，這種方法是通過藥物減少病灶的活性，使其逐漸消失。此法在改善病情及繼續(xù)使用率方面均比假孕療法效果好。盡管丹哪唑是當(dāng)今治療子宮內(nèi)膜異位癥普遍使用的藥物，但它的缺點(diǎn)是會(huì)造成低雌激素環(huán)境，從而引起異位內(nèi)膜退變，由此出現(xiàn)陣熱、潮紅、骨質(zhì)丟失等副反應(yīng)，同時(shí)還影響患者的肝功能及血小板、血紅蛋白的產(chǎn)生，往往在治療早期即可引起肝功能的損害。
中醫(yī)治療子宮內(nèi)膜異位癥多用復(fù)方，常用的有活血化瘀法方用三棱，莪術(shù)、生蒲黃、王靈脂、桃仁等、補(bǔ)腎祛瘀法，方用仙靈脾、仙茅、熟地、山藥、雞血藤、丹參、香附、三棱、莪術(shù)等，也常用棉酚以及雷公藤多甙、異位安等。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種益母草總生物堿的制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種益母草總生物堿在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥及降低雌激素水平的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明益母草總生物堿的制備方法為取益母草，分別加水8-12倍加熱煎煮2-3次，每1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.0～1.10，濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全，加鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏12～48小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱(床〕，用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內(nèi)容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后精制，即浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。
精制還可以是浸膏酸水溶解，調(diào)PH＝1～3后，重復(fù)上陽離子交換樹脂柱，用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內(nèi)容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止，洗脫液濃縮得總生物堿。
本發(fā)明方法制備的總生物堿用雷氏胺鹽沉淀法檢測生物堿含量大于50％；用藥典法檢測水蘇堿含量大于20％。
本發(fā)明是通過如下科學(xué)實(shí)驗(yàn)完成的。實(shí)驗(yàn)例1觀察益母草總生物堿對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的影響一、方法利用大鼠自體子宮異位的方法，觀察益母草總生物堿對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠性激素E2的影響，并通過光鏡、電鏡觀察異位子宮內(nèi)膜的形態(tài)變化。
1、動(dòng)物雌性SD大鼠，150g左右，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供2、試劑益母草總生物堿 連云港康緣制藥有限公司提供 批號(hào)200009143、儀器1470WIZARDTM液閃儀4、EMT模型制備取雌性SD大鼠120只，隨機(jī)分為7組，分別為正常組10只；假手術(shù)組10只；模型組；陽性組；益母草總生物堿高、中、低三劑量組每組20只。除正常組外，余各組動(dòng)物擇動(dòng)情期，建立EMT動(dòng)物模型。將大鼠以3％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，于下腹正中做一垂直切口，挑出右側(cè)子宮角，切除7mm的子宮，于生理鹽水中分離子宮內(nèi)膜，取3mm×3mm大小的子宮內(nèi)膜片，令其表面上皮對著腹壁，將四角與腹壁肌肉縫合，并將右側(cè)斷離之子宮對接縫合，常規(guī)關(guān)腹消毒，并注射青霉素1萬單位/kg。假手術(shù)組僅切除子宮，并不將其異位。每日按劑量定時(shí)灌胃給藥，觀察并記錄大鼠生長情況。
二、觀察指標(biāo)
1.陰道脫落細(xì)胞生理鹽水混合陰道分泌物滴片，95％乙醇固定，HE染色，光鏡下直接觀察陰道脫落細(xì)胞角化率。于造模后連續(xù)觀察4-5天。
2.移植物外觀分別于術(shù)后第8周剖腹觀察內(nèi)膜移植物生長情況。用雙腳圓規(guī)測量其直徑。
3.雌激素測定于給藥后一個(gè)月對大鼠眼眶后靜脈取血，分離血清，用放射免疫法測定E2水平。
三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對造模后大鼠進(jìn)行連續(xù)5天的陰道脫落細(xì)胞觀察，結(jié)果顯示大鼠發(fā)情周期并未因異位內(nèi)膜移植而改變。
2.于術(shù)后8周對大鼠腹內(nèi)異位子宮內(nèi)膜進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示各大鼠內(nèi)膜貼壁生長良好，呈丘疹形，透明，內(nèi)有液體，說明本發(fā)明模型組造模成功(見表1〕。
表1甲生物堿對大鼠異位子宮內(nèi)膜的影響組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 半徑(mm)模型組 --9 0.53±0.25陽性組 0.35 9 0.51±0.25高劑量組 0.50 9 0.53±0.22中劑量組 0.25 8 0.44±0.19低劑量組 0.10 9 0.38±0.273.從大鼠血清雌激素測定資料統(tǒng)計(jì)可以看出子宮內(nèi)膜異位癥大鼠E2有明顯的升高，模型組與正常組比較有明顯的差別(P＜0.01)，表明異位內(nèi)膜生長良好并已對大鼠體內(nèi)雌激素水平產(chǎn)生明顯的影響，而假手術(shù)組未見E2有變化給藥一個(gè)月后，益母草總生物堿各劑量組對E2的升高都有較明顯的降低作用，說明益母草總生物堿具有治療子宮內(nèi)膜異位癥的作用(見表2-3〕。
表2甲生物堿對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠E2、PRL的影響組別劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)E2(pg/ml) PRL(mIU/ml)正常組 --1011.96±9.46 1.07±0.95假手術(shù)組--8 15.95±16.05 1.71±0.67模型組 --1849.03±31.89## 1.16±0.82陽性組 0.35 1526.40±19.53*1.22±0.55高劑量組0.50 1723.50±12.71*0.86±0.56中劑量組0.25 1521.51±18.31*1.10±0.70低劑量組0.10 1725.49±17.56*1.03±0.67表3甲生物堿對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠FSH、LH的影響組別劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)FSH(mIU/ml) LH(ng/ml)正常組 --100.72±0.48 0.96±0.47假手術(shù)組--8 0.88±0.41 1.65±0.61模型組 --180.89±0.46 1.18±0.66陽性組 0.35 150.99±0.52 1.32±0.47高劑量組0.50 171.05±0.50 1.51±0.56中劑量組0.25 150.85±0.51 1.21±0.55低劑量組0.10 170.66±0.45 1.07±0.39實(shí)施例1取益母草，分別加水10倍加熱煎煮2次，每次1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.7，濃縮液加乙醇至含醇60％沉淀24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇80％沉淀24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏24小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱，用蒸餾水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用1-3mol/L氨水沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后繼續(xù)精制，浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。實(shí)施例2取益母草，分別加水9倍加熱煎煮3次，每次1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.5，濃縮液加乙醇至含醇65％沉淀36小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇75％沉淀36小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏36小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂上，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用9-12％鹽酸沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后繼續(xù)精制，浸膏酸水溶解，調(diào)PH＝1～3后，重復(fù)上陽離子交換樹脂上，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用鹽酸沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止，洗脫液濃縮得總生物堿。
權(quán)利要求
1.益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法為，取益母草，分別加水8-12倍加熱煎煮2-3次，每1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.0～1.10，濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全，加鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏12～48小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱(床〕，用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內(nèi)容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后精制即得總生物堿。
2.如權(quán)利要求1所述的益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法中的濃縮后繼續(xù)精制是指浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。
3.如權(quán)利要求1所述的益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法中的濃縮后繼續(xù)精制是指浸膏酸水溶解，調(diào)PH＝1～3后，重復(fù)上陽離子交換樹脂柱，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用鹽酸沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止，洗脫液濃縮得總生物堿。
4.如權(quán)利要求2所述的益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法為，取益母草，分別加水10倍加熱煎煮2次，每次1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.7，濃縮液加乙醇至含醇60％沉淀24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇80％沉淀24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏24小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱，用蒸餾水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用1-3mol/L氨水沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后繼續(xù)精制，浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。
5.如權(quán)利要求3所述的益母草總生物堿的制備方法，取益母草，分別加水9倍加熱煎煮3次，每次1.5～2小時(shí)，提取液合并濃縮至密度d-1.5，濃縮液加乙醇至含醇65％沉淀36小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇75％沉淀36小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調(diào)至PH＝1～3，冷藏36小時(shí)，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂上，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用9-12％鹽酸沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后繼續(xù)精制，浸膏酸水溶解，調(diào)PH＝1～3后，重復(fù)上陽離子交換樹脂上，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內(nèi)容物后，用鹽酸沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止，洗脫液濃縮得總生物堿。
6.如權(quán)利要求1、2、或3所述的益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法中沖洗樹脂柱的堿可以是氨水或氫氧化鈉。
7.益母草總生物堿在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥的藥物中的應(yīng)用。
8.益母草總生物堿在制備降低雌激素水平的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了益母草總生物堿的制備方法，該方法為，取益母草煎煮2－3次，提取濃縮液加乙醇沉淀12～48小時(shí)，濾液加入樹脂柱(床〕，水沖洗后，用鹽酸或堿沖洗，洗脫液濃縮后精制即得總生物堿。本發(fā)明還公開了益母草總生物堿在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥和制備降低雌激素水平的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1467204SQ0212396
公開日2004年1月14日 申請日期2002年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月10日
發(fā)明者蕭偉, 戴翔翎, 凌婭, 詹永成, 劉濤, 廖正根, 蕭 偉 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司