專利名稱：螺甾醇類甾體皂苷在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甾體皂苷的醫(yī)藥用途，具體地說是涉及螺甾醇類甾體皂苷化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
據(jù)目前已有的醫(yī)學(xué)流行病學(xué)資料推測，到2020年，人類疾病死因排列順序?qū)⒂兄卮笞兓?，但是冠心病和腦卒中仍將是人類死因的第一位和第二位。我國流行病學(xué)調(diào)查，近五十年來不論在農(nóng)村或城市，心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢。心腦血管疾病不僅是危害人類健康的主要疾病，更是目前和未來20年內(nèi)人類致死、致殘的“頭號殺手”。因此，尋找和研制治療心腦血管疾病的有效藥物，是醫(yī)藥研究工作者長期普遍關(guān)注的重要領(lǐng)域。
皂甙類化合物廣泛存在于自然界植物中，主要分為甾體皂甙和三萜皂甙兩大類，甾體皂苷是植物中一類很重要的生物活性物質(zhì)，迄今已從植物中得到約400種此類成分，大多存在百合科、薯蕷科等植物中，該類成分多具有抗腫瘤、降血脂、平喘、抗炎、降血糖等多種藥理活性，同時為合成激素類藥物和避孕藥物主要原料。甾體皂苷根據(jù)苷元的結(jié)構(gòu)不同又可分三大類。螺甾醇類甾體皂苷是其中一類。對于螺甾醇類甾體皂苷，國內(nèi)外學(xué)者已從不同薯蕷屬植物中用化學(xué)分離方法分離鑒定出數(shù)種螺甾醇類甾體皂苷化合物如李伯剛等人從黃山藥(Dioscorea panthaica Prain et Burkill)分離并鑒定出薯蕷皂苷(dioscin)和纖細皂苷(gracillin)[李伯剛，等.藥學(xué)學(xué)報1986，28(4)409-414]；唐世蓉等人從纖細薯蕷(Dioscorea gracillima Miq.)中分離并鑒定出薯蕷皂苷(dioscin)和纖細皂苷(gracillin)[唐世蓉，等.植物學(xué)報，1984，26(6)630-633]；劉承來等人從盾葉薯蕷(Disocoreazingiberensis wright)中分離并鑒定出延嶺草次苷(trillin)和纖細皂苷(gracillin)[劉承來，等.植物學(xué)報，1984，26(3)283-289]。但上述文獻中未見有關(guān)螺甾醇類甾體皂苷化合物抗心腦缺血活性的研究報道。另一項國內(nèi)研究公開了薯蕷總皂苷提取物中含有的8種甾體皂苷的結(jié)構(gòu)式，但尚未公開其中任何甾體皂苷單一成分的藥理活性。[李伯剛，周正質(zhì).中藥新藥與臨床.1994，13(2)75-76]。
到目前為止，螺甾醇類甾體皂苷化合物抗心腦缺血的藥理活性研究，尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供螺甾醇類甾體皂苷化合物在制備治療和預(yù)防心、腦血管疾病藥物中的新用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案是將通式為(I)的螺甾醇類甾體皂苷化合物，制備成治療心腦血管疾病的藥物，該藥物可以是口服制劑或注射液。
(式I)其中R甾體皂苷A(trillin) β-D-glc甾體皂苷B(prosapogenin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha甾體皂苷C(prosapogenin A of dioscin)β-D-glc(2←1)-α-L-rha甾體皂苷D(dioscin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha(2←1)|α-L-rha甾體皂苷E(gracillin)β-D-glc(3←1)-5-D-glc(2←1)|α-L-rha甾體皂苷F(dioscin Dc)β-D-glc(4←1)-α-L-rha-(4←1)-α-L-rha-(3←1)-α-L-rha本發(fā)明的有益效果是由于螺甾醇類甾體皂苷化合物具有良好的預(yù)防和治療心腦血管疾病作用，作為活性成分的單體化合物清楚明確，藥理作用確切，可控性及穩(wěn)定性好，可將其制成片劑、膠囊、注射液等多種劑型，根據(jù)癥狀可單獨或聯(lián)合用藥，具有療效顯著、使用安全方便等優(yōu)勢特點。本發(fā)明提供了一種治療和預(yù)防心腦血管疾病的新途徑。
具體實施例方式本發(fā)明提供如通式(I)的螺甾醇類甾體皂苷化合物在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病藥物中的用途， 其中R甾體皂苷A(trilling) β-D-glc甾體皂苷B(prosapogenin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha，甾體皂苷C(prosapogenin A of dioscin)β-D-glc(2←1)-α-L-rha甾體皂苷D(dioscin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha(2←1)|α-L-rha甾體皂苷E(gracillin) β-D-glc(3←1)-β-D-glc(2←1)|α-L-rha甾體皂苷F(dioscin Dc)β-D-glc(4←1)-α-L-rha-(4←1)-α-L-rha-(3←1)-α-L-rha優(yōu)選的螺甾醇類甾體皂苷化合物為甾體皂苷B或D，更加優(yōu)選的螺甾醇類甾體皂苷化合物為甾體皂苷D。本發(fā)明所述的心腦血管疾病為缺血性心臟病、高脂血證，上述化合物的至少一種，加上藥學(xué)上可接受載體，制備成口服制劑或注射液。優(yōu)選的是甾體皂苷D或B或其混合物，加上藥學(xué)上可接受載體，制備成口服制劑或注射液。所述的口服制劑為片劑、膠囊或口服液。
化合物的制備以薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥、穿龍薯蕷、盾葉薯蕷、蜀葵葉薯蕷、三角葉薯蕷、綿萆、福州薯蕷、纖細薯蕷中的一種或幾種植物的根莖為原料，采用溶劑提取法、大孔樹脂柱層析、硅膠柱層析、Sephadex柱層析及中低壓反相Lobar柱、制備型高效液相層析等，從中分離出多種螺甾醇類甾體皂苷化合物，經(jīng)NMR及MS波譜解析鑒定了其中六個化合物，分別為甾體皂苷A，B，C，D，E，F(xiàn)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 其中R甾體皂苷A(trilling) β-D-glc甾體皂苷B(prosapogenin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha，甾體皂苷C(prosapogenin A of dioscin)β-D-glc(2←1)-α-L-rha甾體皂苷D(dioscin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha(2←1)|α-L-rha甾體皂苷E(gracillin) β-D-glc(3←1)-β-D-glc(2←1)|α-L-rha甾體皂苷F(dioscin Dc)β-D-glc(4←1)-α-L-rha-(4←1)-α-L-rha-(3←1)-α-L-rha以上分離所得螺甾醇類甾體皂苷化合物中，以甾體皂苷D(Dioscin)，即薯蕷皂苷含量最高。
所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低級脂肪醇中的-種溶媒，也可以選用其中的任意兩種或者多種溶劑以任意比例組成的混合溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取。提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的大孔樹脂吸附法中，樹脂可選用HPD100、HPD300、LD140、D101以及其他類型的大孔吸附樹脂，或以上不同型號的大孔吸附樹脂按一定比例混合，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時可以濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
按照以上化學(xué)分離方法所獲得的螺甾醇類甾體皂苷化合物，分別進行了以下相關(guān)藥理實驗研究。
對大鼠急性心肌梗死的影響采用結(jié)扎大鼠冠狀動脈前降支造成大鼠心肌梗塞模型，觀察藥物對大鼠心電圖、血清酶學(xué)指標的影響，并經(jīng)病理圖像分析系統(tǒng)測定藥物對大鼠心肌梗死范圍的影響。結(jié)果表明，螺甾醇類甾體皂苷化合物對ECG-ST段抬高有一定改善作用，且降低心肌酶LDH作用明顯，明顯縮小心肌梗塞范圍。
對小鼠耐缺氧、大鼠血清脂質(zhì)、大鼠腦血管阻力及體外家兔血小板聚集的影響采用常規(guī)藥理試驗觀察了薯蕷皂苷對小鼠常壓耐缺氧、大鼠血清脂質(zhì)、大鼠腦血管阻力及體外家兔血小板聚集等的影響，試驗結(jié)果證明，螺甾醇類甾體皂苷化合物具有保護小鼠常壓耐缺氧作用，降低大鼠血清脂質(zhì)，大鼠血壓及腦血管阻力，同時具有一定的抗血小板聚集作用。
上述多項實驗結(jié)果表明，螺甾醇類甾體皂苷化合物具有擴張心、腦血管，增加血流量，改善局部供血，使外周阻力下降，減輕心臟負擔，減輕心肌耗氧量作用，同時具有增加機體耐缺氧能力，降低血脂，抑制血小板聚集等作用，這些作用都有利于預(yù)防和治療各種心腦血管疾病。
按照本發(fā)明，可以將上述通式為(I)的螺甾醇類甾體皂苷化合物，優(yōu)選甾體皂苷D(即薯蕷皂苷Dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)，加上藥學(xué)上可接受的載體，按照常規(guī)方法制成片劑、膠囊、口服液、注射液等多種劑型。適用于多種心腦血管疾病，如冠心病、心絞痛、高血脂、急性心肌梗塞、病毒性心肌炎、心律失常、腦梗死、偏頭痛、椎基底動脈供血不足、美尼爾氏病、腦動脈硬化癥、腦血栓形成后遺癥等疾病的治療及預(yù)防。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的描述，但并非對本發(fā)明的限制。
實施例1穿龍薯蕷的干燥根莖10kg，粉碎，用80％乙醇(100L×3)在85℃下回流三次，第一次3小時，第二、三次各2小時，濾過，合并提取液；回收乙醇，加水至每10ml相當于1g藥材，冷藏24小時，離心；上清液過HPD300吸附樹脂柱，先用水洗至流出液無色后，相繼用30％、70％乙醇洗脫；接收70％乙醇洗脫部分，回收乙醇并濃縮至濃浸膏，真空干燥，即得穿山龍總皂苷176g。取穿山龍總皂苷170g分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得正丁醇萃取物67g。
取正丁醇部分65g進行硅膠柱層析(φ10.5×52cm，2000g)，氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.1)梯度洗脫，每瓶接收50ml洗脫液，共計160份。合并41-45份洗脫液析出化合物甾體皂苷B 516mg，該化合物為白色針狀結(jié)晶，ESI-MSm/z723[M+H]+，577[M-rha+H]+，415[M-rha-glc+H]+，397[M-rha-glc-H2O+H]+；1HNMR(400MHz，C5D5N)δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝6.9)，0.88(3H，s，CH3-19)，0.80(3H，s，CH3-18)，0.66(3H，s CH3-27 J＝5.2Hz)，顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。13CNMR(100MHz，C5D5N)與甾體皂苷A，即延齡草次苷trillin的苷元部分完全一致(參見表1)。糖部分的信號102.7(C-1’)，75.5(C-2’)，76.7(C-3’)，78.2(C-4’)，77.1(C-5’)，61.5(C-6’)，102.4(C-1”)，72.8(C-2”)，72.6(C-3”)，74.0(C-4”)，70.3(C-5”)，18.5(C-6”)，其13CNMR數(shù)據(jù)與文獻報道prosapogenin相吻合。
合并94-104份洗脫液，回收溶劑，得甾體皂苷D2.37g，該化合物為白色針狀結(jié)晶，ESI-MS m/z891[M+Na]+，869[M+H]+，577[M-2×rha+H]+，437[M-2×rha-glc+Na]+，903[M+Cl]-，867[M-H]-，721[M-rha-H]-；1HNMR(400MHz，C5D5N)δ1.74(3H，d，J＝6.5Hz)，1.60(3H，d，J＝6.2Hz)分別顯示2個鼠李糖的甲基質(zhì)子信號，δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝6.8)，1.02(3H，s，CH3-19)，0.79(3H，s，CH3-18)，0.66(3H，d，CH3-27，J＝4.9Hz)分別顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。13CNMR(100MHz，C5D5N)苷元部分與與甾體皂苷A，即延齡草次苷trillin的苷元部分完全一致(參見表1)。糖部分的信號102.9(C-1’)，78.7(C-2’)，76.8(C-3’)，78.1(C-4’)，77.9(C-5’)，61.3(C-6’)，100.2(C-1”)，72.4(C-2”)，72.8(C-3”)，74.1(C-4”)，69.4(C-5”)，18.6(C-6”)，102.0(C-1)，74.1(C-2)，72.7(C-3)，73.8(C-4)，70.4(C-5)，18.4(C-6)，其NMR數(shù)據(jù)與文獻報道薯蕷皂苷(Dioscin)相吻合。
表1 甾體總皂苷A、B、D的13CNMR數(shù)據(jù)(溶劑CDCl3)
CA(trillin) B D137.4(t) 37.4(t) 37.5(t)230.2(t) 30.2(t) 30.1(t)378.6(d) 78.3(d) 77.8(d)439.3(t) 39.3(t) 38.9(t)5140.9(s)140.9(s)140.8(s)6121.7(d)121.7(d)121.7(d)732.2(t) 32.2(t) 32.3(t)831.6(d) 31.6(d) 31.6(d)950.3(d) 50.3(d) 50.3(d)10 37.0(s) 37.0(s) 37.1(s)11 21.1(t) 21.1(t) 21.1(t)12 39.9(t) 39.8(t) 39.8(t)13 40.4(s) 40.4(s) 40.4(s)14 56.6(d) 56.6(d) 56.6(d)15 32.2(t) 32.2(t) 32.2(t)16 81.1(d) 81.1(d) 81.1(d)17 62.9(d) 62.9(d) 62.9(d)18 16.3(q) 16.3(q) 16.3(q)19 19.4(q) 19.4(q) 19.3(q)20 42.0(d) 41.9(d) 41.9(d)21 15.0(q) 15.0(q) 15.0(q)22 109.2(s)109.3(s)109.2(s)23 31.8(t) 31.8(t) 31.8(t)24 29.2(t) 29.2(t) 29.2(t)25 30.6(d) 30.6(d) 30.5(d)26 66.8(t) 66.8(t) 66.8(t)27 17.3(q) 17.3(q) 17.2(q)1′ 102.6(d)102.7(d)102.9(d)2′ 75.4(d) 75.5(d) 78.7(d)3′ 78.5(d) 76.7(d) 76.8(d)4′ 71.7(d) 78.2(d) 78.1(d)5′ 78.1(d) 77.1(d) 77.9(d)6′ 62.9(t) 61.5(t) 61.3(t)1′′100.2(d)102.4(d)100.2(d)2′′72.4(d) 72.8(d) 72.4(d)3′′72.8(d) 72.6(d) 72.8(d)4′′74.1(d) 74.0(d) 74.1(d)5′′69.4(d) 70.3(d) 69.4(d)6′′18.6(q) 18.5(q) 18.6(q)1′′′ 1002.0(d)2′′′ 74.1(d)3′′′ 72.7(d)4′′′ 73.8(d)5′′′ 70.4(d)6′′′ 18.4(q)1′′′′2′′′′3′′′′4′′′′5′′′′6′′′′實施例2膠囊劑的制備每粒膠囊的組成甾體皂苷D 50mg
淀粉 150mg按上述比例取甾體皂苷D、淀粉，混勻，裝膠囊。每粒裝200mg，用于心腦血管疾病治療，口服，每日三次，每次1～2粒。二月為一療程。
實施例3片劑的制備片劑組成甾體皂苷B50gHPMCLV10030g乳糖 70g硬脂酸鎂 1g(共制成1000片)甾體皂苷B、HPMC、乳糖混勻，以75％乙醇為粘合劑制濕顆粒，過22目篩，50℃干燥3h，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻壓片，每片重0.15g。用于心腦血管疾病治療，口服，每日三次，每次1～2片。二月為一療程。
實施例4注射液的制備注射液組成甾體皂苷D25g吐溫80 10ml氯化鈉 8g(共制成1000ml)甾體皂苷D，加10％Na2CO3調(diào)PH至7.0-7.5，冷藏濾過，加吐溫-80，NaCl，加注射用水至1000ml，G3垂熔漏斗(玻璃)濾過，分裝，灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min即得。用于心腦血管疾病治療，皮下注射，每日二次，每次1～2ml。二月為一療程。
實施例5使用實施例1所得的甾體皂苷D(dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)進行了以下相關(guān)藥理試驗(1)甾體皂苷D(dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)對大鼠急性心肌梗死的影響雄性Wistar大鼠40只，體重273±19g，按體重隨機分為5組，每組10只。分別灌服蒸餾水(假手術(shù)對照、模型對照組)，甾體皂苷D200mg/kg，甾體皂苷B200mg/kg，心痛定10mg/kg(工具藥物組)。給藥體積均為1ml/100g體重，每天給藥一次，連續(xù)3天。于末次給藥后1hr，12％水合氯醛360mg/kg體重腹腔麻醉后，測定II導(dǎo)正常心電圖；左胸部去毛，鎖骨正中線與第四肋骨交點為中心，沿鎖骨正中線切開皮膚2cm，鈍性分離肌層，環(huán)肌層作荷包縫合，串線備扎；切斷第四肋骨，打開胸腔，以環(huán)形勾將心臟拉出胸腔，在動脈圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處以6/0號絲線結(jié)扎冠脈左前降支；將心臟置回胸腔，抽出胸腔內(nèi)空氣，并作肌層的荷包結(jié)扎，縫合皮膚；結(jié)扎后15、30、60、120、180min測定II導(dǎo)心電圖，并置籠飼養(yǎng)。24 hr后腹主動脈取血，-4℃，3000rpm，離心10min制備血清，取血清-20℃保存?zhèn)錅y血清生化指標；取血后，經(jīng)頸外靜脈注射1％伊思藍0.3ml/只，1min后取心臟，生理鹽水沖洗，沿心臟長軸的垂直方向?qū)⑿呐K切片，厚度為1.5mm，將切片置于2％TTC液中染色15min后，取出心臟切片，經(jīng)病理圖像分析系統(tǒng)測定并計算心肌梗死區(qū)占危險區(qū)及左室面積的百分比。
試驗結(jié)果見表2、表3、表4、表5。
A.對大鼠心肌缺血心電圖ST段的影響表2甾體皂苷D、甾體皂苷B對急性心肌梗死大鼠II導(dǎo)ECG-ST段的影響(mV)(x±s，n＝10)

注①與假手術(shù)對照組比較++P＜0.01，+++P＜0.001；②.與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表2結(jié)果顯示，冠脈前降支結(jié)扎后各時段，結(jié)扎前降支的模型對照組心電圖ST段明顯抬高，與假手術(shù)組比較有極顯著性差異(P＜0.01～0.001)，說明造模成功。甾體皂苷D(dioscin)組冠脈結(jié)扎后15、30、120、180分鐘各時段，心電圖ST段明顯降低，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.01～0.001)。甾體皂苷B組冠脈結(jié)扎后120、180分鐘各時段，心電圖ST段明顯降低，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.01～0.001)。
B.對心肌缺血大鼠心肌酶AST、LDH、XCMK的影響表3 甾體皂苷D、甾體皂苷B對大鼠血清生化影響(x±s，n＝10)

注①與假手術(shù)對照組比較++P＜0.01；②與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表4甾體皂苷D、甾體皂苷B對大鼠血清生化異常例數(shù)影響(x±s，n＝10)

注①與假手術(shù)對照組精確卡方檢驗比較++P＜0.01；②與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；③$表示手術(shù)時動物死亡，動物數(shù)減少。
表3、表4結(jié)果顯示，結(jié)扎前降支的模型對照組心肌酶AST、LDH、XCMK均明顯升高，與假手術(shù)組比較差異非常顯著(P＜0.01＝。甾體皂苷D組、甾體皂苷B(dioscin)組與模型對照組比較，AST均呈降低趨勢；LDH水平降低顯著，異常LDH轉(zhuǎn)陰率明顯，異常率由模型對照的60％降為0，差異有顯著意義；XCKM水平亦有一定降低趨勢。
C.對心肌缺血大鼠心肌梗死范圍的影響表5甾體皂苷D、甾體皂苷B對大鼠心肌梗死面積的影響(x±s，n＝10)

注①與假手術(shù)對照組比較+++P＜0.001；
②與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表4結(jié)果顯示，結(jié)扎前降支的模型對照組大鼠梗死區(qū)占危險區(qū)百分數(shù)為35.73％，梗死區(qū)占左室百分數(shù)為4.25％，心肌梗死范圍明顯；甾體皂苷D(dioscin)組可使梗死區(qū)/危險區(qū)百分比及梗死區(qū)/左室百分比顯著下降，與模型對照組比較，分別下降49.1％(P＜0.01)、67.8％(P＜0.001)，甾體皂苷B組與模型對照組比較心肌梗死范圍明顯亦明顯下降。
綜上結(jié)果表明，大鼠灌服甾體皂苷D(dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)400mg/kg能明顯縮小心肌梗塞范圍，對ECG-ST段抬高有一定改善作用，且降低心肌酶LDH作用明顯。
(2)甾體皂苷D(dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)對正常小鼠低壓缺氧的影響用體重18～22g純種C57BL小鼠，雌雄各半。每次選擇性別、體重相同的小鼠進行實驗。按表3所列藥物劑量分別給藥，對照組給等體積的生理鹽水。1小時后給藥組和對照組各取5只小鼠，放入低壓缺氧裝置中，調(diào)整壓力為240mmHg，觀察小鼠死亡4～6只時啟開容器，記錄兩組小鼠死亡數(shù)和存活數(shù)。在相同條件下，進行多批實驗。累計各組動物死亡數(shù)和存活數(shù)，結(jié)果見表5。
表5甾體皂苷D、甾體皂苷B對小鼠低壓缺氧存活率的影響組別 給藥劑量存活率途徑(mg/kg) (存活數(shù)/總動物數(shù))對照組給藥組普萘洛爾組 灌胃 30 10/23 18/23*甾體皂苷D灌胃 50 4/20 17/20***甾體皂苷D灌胃 1005/20 17/20***甾體皂苷B灌胃 50 5/20 16/20***甾體皂苷B灌胃 1006/20 16/20***普萘洛爾組 皮下 30 3/15 11/15*與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表5結(jié)果顯示，甾體皂苷D、甾體皂苷B各劑量組(100mg/kg、200mg/kg)灌胃均能明顯提高小鼠存活率，與普萘洛爾30mg/kg比較，無顯著差異。
(3)甾體皂苷B(prosapogenin)、甾體皂苷D(dioscin)對大鼠血清脂質(zhì)含量的影響實驗用體重140-160克的雄性大鼠，隨機分為正常對照組、高脂對照組和給藥組。除正常對照組給普通飼料外，其余各組均在普通飼料中加入膽固醇、膽酸、甲基硫氧嘧淀、豬油(2∶0.1∶0.01∶0.5)，組成高膽飼料。在喂高脂飼料的同時，給藥組每日灌胃給予甾體皂苷A膠囊、甾體皂苷D膠囊(100mg/kg)一次，正常對照組和高脂對照組給2％西黃耆膠溶液一次。連續(xù)給40天，取血測定血清總膽固醇和甘油三酯含量。取主動脈和肝臟制備脂質(zhì)提取液，測定總膽固醇和甘油三酯含量。結(jié)果見表6。
表6 甾體皂苷D、甾體皂苷B對大鼠血清脂質(zhì)含量的影響(X±SD)動物數(shù)劑量 血清脂質(zhì)組別(只) (mg/kg)總膽固醇(mg/％)甘油三酯mg％)正常對照組10 - 54.2±3.7 41.0±3.2高脂對照組8- 357.5±41.6107.5±28.1甾體皂苷 10 100 201.5±50.11* 59.56±32.1*甾體皂苷 9100 222.9±33.11* 96.56±26.9與高脂對照組比較*P＜0.05，**p＜0.01表6結(jié)果顯示，甾體皂苷D均能明顯降低大鼠血清總膽固醇和甘油三酯含量(P＜0.05)，甾體皂苷B能明顯降低大鼠血清總膽固醇(P＜0.05)，有一定降低血清甘油三酯的趨勢。
(4)甾體皂苷D(dioscin)、甾體皂苷B(prosapogenin)對大鼠椎動脈恒速灌流腦血管阻力的影響本實驗采用文獻方法(陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1996538-540)，觀察了向椎動脈注射甾體皂苷D(20mg/kg)、甾體皂苷B(20mg/kg)、酚妥拉明(0.5mg/kg)對大鼠血壓及腦血管阻力的作用。實驗結(jié)果表明，甾體皂苷D、甾體皂苷B、酚妥拉明注入椎動脈后，與注射前比較，均有明顯降低腦血管阻力和血壓作用。結(jié)果見表7。
表7 甾體皂苷D、甾體皂苷B對大鼠血壓及腦血管阻力的影響(X±SD)(n＝8)劑量 血壓kPa(mmHg) 腦血管阻力kPa(mmHg)藥物名稱 (mg/k 增減率 增減率給藥前 給藥后 給藥前給藥后g) (％) (％)甾體皂苷D 10.55± 8.66± -17.910.15±8.25± -18.7200.65 0.69** 0.63 0.79**甾體皂苷B 20 10.65± 5.99± -24.910.73±8.65± -17.90.62 0.42***0.55 0.87**酚妥拉明 0.5 10.77± 8.15±-24.310.64±0.68.66± -18.60.78 0.76** 0.57**
權(quán)利要求
1.如通式(I)的螺甾醇類甾體皂苷化合物在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病藥物中的用途， 其中R甾體皂苷A(trilling) p-D-glc甾體皂苷B(prosapogenin)β-D-glc(4←1)-α-L-rha，甾體皂苷C(prosapogenin A of dioscin) β-D-glc(2←1)-α-L-rha甾體皂苷D(dioscin) β-D-glc(4←1)-α-L-rha(2←1)|α-L-rha甾體皂苷E(gracillin) β-D-glc(3←1)-β-D-glc(2←1)|α-L-rha甾體皂苷F(dioscin Dc)β-D-glc(4←1)-α-L-rha-(4←1)-α-L-rha-(3←1)-α-L-rha
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的螺甾醇類甾體皂苷化合物為甾體皂苷B或D。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的螺甾醇類甾體皂苷化合物為甾體皂苷D。
4.根據(jù)上述任意一項權(quán)利要求所述的用途，其特征在于所述的心腦血管疾病為缺血性心臟病、腦血管病、高脂血癥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的用途，其特征在于所述的藥物為通式為(I)螺甾醇類甾體皂苷化合物的至少一種，加上藥學(xué)上可接受載體，制備成口服制劑或注射液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于所述的藥物為甾體皂苷B或D或其混合物，加上藥學(xué)上可接受載體，制備成口服制劑或注射液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用途，所述的口服制劑為片劑、膠囊或口服液。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式為(I)的螺甾醇類甾體皂苷化合物在制備治療和預(yù)防心腦缺血疾病藥物中的應(yīng)用，藥理研究表明，該類化合物具有擴張心、腦血管作用，增加血流量，改善局部供血，使外周阻力下降，減輕心臟負擔，減輕心肌耗氧量，同時具有增加機體耐缺氧能力，降低血脂，抑制血小板聚集等作用，為臨床治療和預(yù)防心腦血管疾病提供了新的有效方法。
文檔編號A61K31/7048GK1511535SQ02128119
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月27日
發(fā)明者付鐵軍, 劉忠榮, 李伯剛, 鄒文俊, 何民, 黃瑜 申請人:成都地奧制藥集團有限公司