專利名稱：頭花蓼提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及中草藥頭花蓼鮮品或干品的提取物及其制備方法以及這種提取物作為藥物的用途。
頭花蓼(Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don)是蓼科蓼屬植物，為多年生草本，別名四季紅、石莽草、石辣蓼、水繡球、紅花地丁、滿地紅等。在中國(guó)貴州、云南、廣西、四川、西藏、湖北、湖南和江西等地區(qū)均有分布，主要生長(zhǎng)在山坡、山谷及富含煤層的沙頁(yè)巖地帶。全草具有清熱解毒、散瘀、利尿通淋之功效。據(jù)1963年《廣西中藥志》第二冊(cè)記載，頭花蓼主要用于治療風(fēng)濕痛；1977年《中藥大辭典》上冊(cè)記載，頭花蓼主要用于治療痢疾、腎炎、膀胱炎和尿路結(jié)石等。民間一般將頭花蓼用水煎服，治療效果比較明顯，但是服用不方便。中國(guó)專利申請(qǐng)公開說(shuō)明書CN1054899A中公開了一種泌感靈沖劑、糖漿生產(chǎn)工藝，該方法是將中草藥頭花蓼經(jīng)煎煮后過(guò)濾，減壓濃縮成膏狀，再用乙醇提取2-3次，真空濃縮制成浸膏，再將浸膏分別制成糖漿或沖劑。該生產(chǎn)工藝包括煎煮、濃縮、提取、再濃縮等步驟，工藝復(fù)雜，而且，該方法得到的泌感靈沖劑的藥效學(xué)效果有待提高。我們貴州威門藥業(yè)股份有限公司長(zhǎng)期致力于中草藥頭花蓼的開發(fā)利用研究，我們將頭花蓼加水煎煮兩次后過(guò)濾濃縮制成熱淋清顆粒，該制劑公開在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)1998年編的中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)--中藥成方制劑》(第十七冊(cè))中，但是，隨著研究的不斷深入，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，1998年編的中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)--中藥成方制劑》(第十七冊(cè))中的熱淋清顆粒的制備工藝中，其提取和精制方法上存在缺陷，按照該工藝，將1000克頭花蓼煎煮，不可能得到400克浸膏顆粒。本發(fā)明人通過(guò)對(duì)中草藥頭花蓼進(jìn)行長(zhǎng)期開發(fā)研究，并結(jié)合藥理學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，通過(guò)改進(jìn)提取和精制工藝，得到的頭花蓼提取物的藥理活性明顯提高，并發(fā)現(xiàn)這種頭花蓼提取物具有新的療效，因此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的是提供了一種頭花蓼鮮品或干品的提取物；本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了一種制備頭花蓼提取物的方法；
本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了頭花蓼提取物用于制備抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石、治療腎盂腎炎以及前列腺炎的藥物的用途；本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了含有本發(fā)明提取物的藥物組合物。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列方法實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明人分別對(duì)頭花蓼鮮品或干品的不同藥用部位進(jìn)行了研究，對(duì)頭花蓼全草、頭花蓼地上部分、葉、種子、莖和根部及它們的組合分別進(jìn)行了提取和活性研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，頭花蓼的葉、種子、莖和根部分的生物學(xué)活性是有差別的，抗炎活性以葉提取物為最佳；抗菌活性的強(qiáng)弱順序是種子＞葉＞莖＞根。本發(fā)明人從這一發(fā)現(xiàn)中得到啟示，用頭花蓼的地上部分代替?zhèn)鹘y(tǒng)使用的頭花蓼全草進(jìn)行提取，這樣既保持和提高了提取浸膏的藥學(xué)活性，又避免使用頭花蓼的根部。由于頭花蓼是草本植物，不使用其根部，可以避免在采集頭花蓼時(shí)將其根部拔起，這樣，頭花蓼可以再生，既保護(hù)了植物資源，又保護(hù)了土地植被，這對(duì)保護(hù)資源和環(huán)境都有重要意義。
本發(fā)明人用水、75％乙醇和95％乙醇和二氧化碳超臨界條件分別對(duì)頭花蓼全草、地上部分、葉、種子、莖和根部分別進(jìn)行了提取和活性研究。
本發(fā)明的頭花蓼提取物是通過(guò)下列方法得到的實(shí)施例1制備頭花蓼地上部分水提取物(編號(hào)w-2-1)取頭花蓼地上部分220kg，洗凈，加入7倍量水，加熱煮沸1.5小時(shí)，過(guò)濾，藥渣中加入6倍量水，煮沸1.0小時(shí)，過(guò)濾。合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2(20℃)得到浸膏，噴霧干燥得到浸膏粉23kg，收率是10.45％。
采用分光光度計(jì)法測(cè)定w-2-1中的總黃酮含量，將本發(fā)明的方法制備得到的w-2-1提取物和輔料均勻混和，制粒，干燥，即得到新方法制備的熱淋清顆粒。實(shí)施例2制備頭花蓼全草水提取物(噴霧干燥)(編號(hào)w-1-2)根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法，用頭花蓼全草代替頭花蓼地上部分進(jìn)行提取。
取w-1-2浸膏粉按實(shí)施例1相同的方法，制得樣品(w-1-12)。
本發(fā)明將頭花蓼全草與頭花蓼地上部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。(見表1)
表1頭花蓼全草水提取物與頭花蓼地上部分水提取物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)名稱編號(hào)投料量得浸膏粉量收率 沒(méi)食子酸總黃酮含量(kg) (kg) (％) 含量(％)(％)頭花蓼 w-1-2300.9534.5 11.461.781.82全草頭花蓼 w-2-1220 23 10.453.994.71地上部分從以上結(jié)果看出，以地上部分為原料的浸膏粉中沒(méi)食子酸和總黃酮含量含量明顯高于以全草為原料的浸膏粉。實(shí)施例3制備頭花蓼全草水提取物(減壓干燥)(編號(hào)w-1-3)根據(jù)與實(shí)施例2相同的方法，將干燥方法改為減壓干燥。實(shí)施例4制備頭花蓼根95％乙醇提取物(編號(hào)w-1-4)取頭花蓼根10kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入7.5倍量的95％乙醇，回流提取1.5小時(shí)，過(guò)濾。藥渣加入7.5倍量95％乙醇，回流提取1.0小時(shí)，過(guò)濾。合并兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物0.215kg。實(shí)施例5制備頭花蓼莖95％乙醇提取物(編號(hào)w-1-5)根據(jù)與實(shí)施例4相同的方法，用頭花蓼莖進(jìn)行提取。實(shí)施例6制備頭花蓼葉95％乙醇提取物(編號(hào)w-1-6)根據(jù)與實(shí)施例4相同的方法，用頭花蓼葉進(jìn)行提取。實(shí)施例7制備頭花蓼種子95％乙醇提取物(編號(hào)w-1-7)根據(jù)與實(shí)施例4相同的方法，用頭花蓼種子進(jìn)行提取。實(shí)施例8制備頭花蓼鮮品95％乙醇提粉(編號(hào)w-1-8)
根據(jù)與實(shí)施例4相同的方法，用頭花蓼鮮品進(jìn)行提取。實(shí)施例9制備頭花蓼鮮品水提粉(編號(hào)w-1-9)根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法，用頭花蓼鮮品進(jìn)行提取。實(shí)施例10制備頭花蓼全草75％乙醇提取物(編號(hào)W-1-10)取頭花蓼全草10kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入7-8倍量75％乙醇，回流提取1.5小時(shí)，過(guò)濾。藥渣加入5倍量75％乙醇，回流提取1.0小時(shí)，過(guò)濾。合并兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物0.694kg。實(shí)施例11制備頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)和頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)取頭花蓼全草10.60kg，洗凈，加入350kg水，加熱煮沸1.5小時(shí)，轉(zhuǎn)移上清液，殘?jiān)屑尤?50kg水，煮沸1.0小時(shí)。合并煎煮液，過(guò)濾濃縮至相對(duì)密度為1.04(24℃)得浸膏16.1kg。加入95％乙醇調(diào)至含醇量為60％，靜至24小時(shí)，分取溶液。向沉淀加入95％乙醇調(diào)至含醇量為60％，靜至24小時(shí)，分取溶液，合并兩次溶液，揮去乙醇，80℃減壓干燥得頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)0.755kg；沉淀于80℃減壓干燥得頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)0.465kg。實(shí)施例12制備頭花蓼原藥粉二氧化碳超臨界萃取提取物(編號(hào)W-1-15a)取頭花蓼原藥粉10kg，洗凈，投入超臨界萃取釜中，對(duì)萃取釜和兩個(gè)解析釜加熱，對(duì)貯罐進(jìn)行冷卻，當(dāng)溫度達(dá)到預(yù)定的溫度時(shí)，打開CO2氣瓶送氣，當(dāng)壓力達(dá)到預(yù)定壓力時(shí)，開始循環(huán)萃取，調(diào)節(jié)流量，并加入夾帶劑，恒溫恒壓萃取2小時(shí)。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.135kg。實(shí)施例13制備頭花蓼藥渣二氧化碳超臨界萃取提取物(編號(hào)W-1-15b)取頭花蓼藥渣10kg，洗凈，投入超臨界萃取釜中，對(duì)萃取釜和兩個(gè)解析釜加熱，對(duì)貯罐進(jìn)行冷卻，當(dāng)溫度達(dá)到預(yù)定的溫度時(shí)，打開CO2氣瓶送氣，當(dāng)壓力達(dá)到預(yù)定壓力時(shí)，開始循環(huán)萃取，調(diào)節(jié)流量，并加入夾帶劑，恒溫恒壓萃取2小時(shí)。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.119kg。實(shí)施例14制備頭花蓼地上部分70％乙醇提取物(編號(hào)W-2-2)取頭花蓼地上部分30kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入8-9倍量70％乙醇，回流提取1.5小時(shí)，過(guò)濾。藥渣加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時(shí)，過(guò)濾。藥渣再加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時(shí)，過(guò)濾。合并三次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物3.75kg。表2不同部位、不同提取方法樣品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)編號(hào) 名稱 投料量得浸膏粉收率沒(méi)食子 總黃酮(kg) 量(kg) (％)酸含量 含量(％) (％)W-1-2頭花蓼全草水提取物 300.9534.5 11.46 1.78 1.82(噴霧干燥)W-1-3頭花蓼全草水提取物 300.9532.8 10.90 2.55 1.46(減壓干燥)W-1-4根95％乙醇提取物100.215 2.151.48 2.25W-1-5莖95％乙醇提取物100.125 1.251.89 1.94W-1-6葉95％乙醇提取物9 0.77.780.70 6.29W-1-7種子95％乙醇提取物 1.8 0.03 1.700.72 5.55W-1-8鮮品95％乙醇提粉220.550 2.502.87 3.78W-1-9鮮品水提粉 210.855 4.072.76 1.92W-1-10 頭花蓼全草的75％乙醇100.694 6.941.48 3.17提取物W-1-12 W-1-2加輔料制成的顆粒 / / / 0.73 1.59W-1-14a 頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉10.60 0.755 7.123.06 2.00W-1-14b 頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉10.60 0.465 4.390.8 0.64W-1-15a 頭花蓼原藥粉二氧化碳超臨界萃100.135 1.35取提取物W-1-15b 頭花蓼藥渣二氧化碳超臨界萃取100.119 1.19提取物W-2-1頭花蓼地上部分水提取物 220 23 10.45 3.99 4.71
W-2-2地上部分的70％乙醇提取物30 3.7512.55.884.57注由于樣品W-1-15a和樣品W-1-15b十分粘稠，前處理很困難，因此沒(méi)有測(cè)定其沒(méi)食子酸含量和總黃酮含量。
中國(guó)發(fā)明專利公開說(shuō)明書CN1054899A中制備頭花蓼全草提取物的方法與本文中制備頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)的方法一致。而樣品W-1-2實(shí)際是全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)和全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)的加和。經(jīng)過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)同樣具有良好的活性；而樣品W-1-2則是此三個(gè)樣品中活性最強(qiáng)的(見表5)。中國(guó)發(fā)明專利公開說(shuō)明書CN1054899A中制備頭花蓼全草提取物的方法操作煩瑣，因經(jīng)醇沉處理的藥液在保存期間容易產(chǎn)生沉淀或粘壁現(xiàn)象；經(jīng)醇沉回收乙醇后的藥液往往粘性較大，較難濃縮。醇沉處理生產(chǎn)周期長(zhǎng)，成本高。并且損失掉部分活性成分(即CN1054899A方法中扔掉的水煎醇沉沉淀部分W-1-14b)。
我們對(duì)頭花蓼全草、地上部分、根、莖、葉、花、種子及地上部分去花(即莖和葉)各部分的水提取物、95％乙醇提取物、CO2超臨界提取物都進(jìn)行了藥理學(xué)試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)其中以頭花蓼地上部分的療效最好。并以頭花蓼地上部分為原料，用制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法制成了一系列制劑洗劑、栓劑、外用溶液劑、泡騰片、硬膏劑、軟膏劑、糖漿劑、乳劑、散劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、氣霧劑、注射劑及緩釋、控釋制劑及靶向制劑。
本發(fā)明人將上述提取物進(jìn)行了藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的頭花蓼提取物具有良好的抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、排石、治療腎盂腎炎以及前列腺炎等藥理學(xué)活性。試驗(yàn)一抗炎活性研究實(shí)驗(yàn)方法用小鼠耳部巴豆油炎癥模型，根據(jù)小鼠耳腫脹生物活性測(cè)定法，測(cè)定不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物的抗炎活性。實(shí)驗(yàn)采用小鼠靜脈注射給藥，給藥劑量為40mg/kg，在同等劑量下，比較各提取物樣品的抗炎活性大小。以此來(lái)對(duì)不同藥用部位，不同提取工藝樣品的療效作出評(píng)判。
樣品配制方法用5％丙二醇作溶媒，將樣品稱量后，先加入0.5ml丙二醇超聲處理，待樣品粉末分散均勻后，再用生理鹽水稀釋至刻度(10ml)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果共進(jìn)行三批實(shí)驗(yàn)，每批實(shí)驗(yàn)均在同時(shí)相同的實(shí)驗(yàn)條件(室溫、濕度)下進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3
表3不同頭花蓼樣品抗炎活性的比較內(nèi)含總黃 內(nèi)含沒(méi)食劑量 第一次實(shí)驗(yàn)(n＝10) 第二次實(shí)驗(yàn)(n＝10)第三次實(shí)驗(yàn)(n＝11)編號(hào) 名稱酮量 子酸量(mg/kg) (mg) (mg) 腫脹度(mg) 腫脹率(％) 腫脹度(mg) 腫脹率(％) 腫脹度(mg) 腫脹率(％)W-1-2全草水提(噴霧)40 0.7280.86413.1±5.0*(30.7)77.8±36.8*10.8±2.5*(33.7)72.2±22.5**11.5±3.4*(33.1)64.0±20.2**全草水提(減壓)40 0.5841.09813.1±4.7*(30.7) 82.6±30.9 11.5±2.5**{29.4} 75.1±20.3**11.3±2.8**(34.3) 64.0±17.0**W-1-3W-1-4根95％醇提40 0.9010.59213.6±4.7*(28.0) 86.1±29.9 12.2±3.2**{25.1} 80.6±19.3**14.4±3.1*(16.3)84.7±24.5*W-1-5莖95％醇提40 0.7760.48014.1±3.5*(25.4) 86.4±26.0 13.9±2.3*(14.7)96.2±16.7*14.5±4.5(15.7) 80.5±24.7*W-1-6葉95％醇提40 2.5170.30513.0±2.6*(31.2) 82.1±22.7*8.4±3.1**(48.5)57.9±20.4**9.8±2.8**(43.0)59.4±17.0**陽(yáng)性對(duì)照 氫化可的松20 --6.7±2.9**(64.6) 45.2±20.7**4.9±2.8**(69.9)36.4±16.4**4.7±1.6**(72.7)29.7±12.1*陽(yáng)性對(duì)照 蘆丁 20 20 -11.4±2.7**(30.1) 74.7±17.1**11.4±2.9**(33.3) 65.4±21.3**陽(yáng)性對(duì)照 沒(méi)食子酸 20 -20 15.9±3.4(2.4) 107.0±19.515.3±2.2(11.0) 96.6±18.9模型組 5％丙二醇 18.9±5.3 117.2±43.1 16.3±2.5117.8±24.017.2±2.8104.4±16.6W-1-2全草水提 40 0.7280.86412.6±3.4**81.1±26.5**7.3±2.5**41.7±15.4**7.8±3.4**47.3±22.2**W-1-8鮮品醇提 40 1.5101.31313.0±2.4*(31.2) 86.2±26.3 13.5±3.0*(17.2)85.1±32.2*13.2±3.1*(23.3)77.3±23.8**W-1-9鮮品水提 40 0.7701.2767.4±2.6**(60.8) 45.8±18.0**9.5±3.7**(41.7)57.8±29.4**8.8±2.8**(48.8)55.2±22.8**W-1-15b CO2藥渣 4012.1±3.3**77.2±19.2**7.6±1.6**40.7±9.7**4.1±1.9**25.8±12.6**W-1-15a CO2藥材 4017.9±2.9 108.8±29.4 10.4±3.257.1±21.9 7.1±3.9**43.8±22.7**陽(yáng)性對(duì)照 氫化可的松205.0±2.4**34.8±18.0 2.4±1.3**13.8±7.8**2.2±1.4**13.4±8.6模型組 5％丙二醇 - 20.4±2.8 124.8±21.1 13.4±3.373.7±20.9 12.5±4.182.5±28.9**備注1.氫化可的松、蘆丁、沒(méi)食子酸用生理鹽水配制，其余樣品用5％丙二醇配制。2.除根醇提粉樣品在丙二醇中分散較難而超聲4小時(shí)外，其余樣品均超聲10分鐘處理。3.“*”“**”分別表示與模型組比較P＜0.05、P＜0.01。從三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析得出1.噴霧干燥與減壓干燥工藝所生產(chǎn)出的樣品，從抗炎角度(40mg/kg)來(lái)看二者無(wú)明顯差異。
2.根、莖、葉三醇提樣品以葉醇提粉抗炎作用最佳，表明頭花蓼抗炎活性成分主要在葉子中間，對(duì)三個(gè)部位醇提樣品的三次試驗(yàn)結(jié)果歸納統(tǒng)計(jì)處理見表4。
表4根、莖、葉中黃酮含量與抗炎相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析樣品編號(hào) 名稱 黃酮含量 腫脹抑制率 γ值w-1-4根醇提粉 22.53 28.0w-1-4根醇提粉 22.53 25.1w-1-4根醇提粉 22.53 16.3w-1-5莖醇提粉 19.41 25.4 γ＝0.850w-1-5莖醇提粉 19.41 14.7P＜0.01w-1-5莖醇提粉 19.41 15.7w-1-6葉醇提粉 62.93 31.2w-1-6葉醇提粉 62.93 48.5w-1-6葉醇提粉 62.93 43.0由此可見抗炎活性與上述三個(gè)部位的黃酮含量有正相關(guān)性關(guān)系。
3.鮮品醇提和鮮品水提二者比較，水提成分的抗炎作用明顯優(yōu)于醇提成分。表明頭花蓼的抗炎作用活性成分主要為水溶性。
4.蘆丁、沒(méi)食子酸劑量均達(dá)到20mg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)上述頭花蓼樣品中的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅顯示出蘆丁有抗炎效果，但作用強(qiáng)度未能超過(guò)頭花蓼提取成分的數(shù)倍，說(shuō)明頭花蓼中抗炎成分除黃酮外還有其他活性成分存在，而沒(méi)食子酸可能不是抗炎成份。
試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明1.頭花蓼根、莖、葉醇提樣品以葉醇提粉抗炎作用最佳，表明頭花蓼抗炎活性成分主要在葉子中，去掉根部，頭花蓼地上部分的抗炎活性不受影響；2.水提成分的抗炎作用明顯優(yōu)于醇提成分，表明頭花蓼的抗炎作用活性成分主要為水溶性。試驗(yàn)二體內(nèi)外抗菌活性研究體外抗菌實(shí)驗(yàn)方法采用瓊脂二倍稀釋法測(cè)定不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物的最低抑菌濃度(MIC)。用多點(diǎn)接種儀將細(xì)菌接種于含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點(diǎn)含菌量約為105CFU/ml，37℃孵育18小時(shí)(淋球菌孵育48小時(shí))觀察結(jié)果，以無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)平皿培養(yǎng)基中所含藥物的最低濃度為藥物對(duì)該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。
體內(nèi)抗菌保護(hù)實(shí)驗(yàn)方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按性別、體重均勻分組，每組10只小鼠，雌雄各半，給小鼠灌胃不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品，每日一次，0.5ml/20g鼠重，預(yù)先連續(xù)灌胃給藥3天，于第3天給藥后各組小鼠腹腔感染受試菌液，每鼠感染菌量為0.5ml(1MLD)，氟哌酸膠囊于感染菌液后即刻及4小時(shí)再灌胃給藥一次，同時(shí)設(shè)感染對(duì)照組及藥物對(duì)照組(不感染菌)，記錄感染后七天內(nèi)小鼠存活數(shù)，根據(jù)感染后七天動(dòng)物存活數(shù)計(jì)算其半數(shù)有效劑量(ED50)及其95％可信限或計(jì)算感染后七天動(dòng)物存活數(shù)與感染對(duì)照組比較的t測(cè)驗(yàn)值，判斷與感染對(duì)照組比較有無(wú)差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(一)體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。
1.沒(méi)食子酸、種子醇提取物(w-1-7)對(duì)所試革蘭氏陽(yáng)性，陰性細(xì)菌及白色念珠菌均呈現(xiàn)出一定的抗菌活力，其次是葉醇提取物(w-1-6)、頭花蓼75％乙醇提物(w-1-10)、噴霧干燥(w-1-2)和減壓干燥(w-1-3)。
2.11種頭花蓼樣品對(duì)所試臨床分離淋球菌具有良好的體外抗菌活性。
3.11種頭花蓼樣品對(duì)本次試驗(yàn)中臨床分離金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抗菌活力強(qiáng)于鏈球菌。
4.11種頭花蓼樣品對(duì)本次試驗(yàn)中對(duì)所試的陰性桿菌的大腸埃希菌、變形桿菌、痢疾桿菌的MIC范圍在1.56～400mg/ml；對(duì)肺炎克雷伯桿菌和銅綠假單胞菌的MIC范圍為6.25～＞40mg/ml。
5.11種頭花蓼樣品對(duì)白色念珠菌的抗菌活力較弱。
6.頭花蓼噴霧干燥粉(W-1-2)對(duì)皮膚真菌如石膏樣小孢子菌、石膏癬菌，紅色毛癬菌的MIC值為25～100mg/ml；對(duì)所試厭氧菌(如脆弱擬桿菌，消化球菌，消化鏈球菌，痤瘡丙酸桿菌和顆粒丙酸桿菌的MIC值在12.5～200mg/ml。)(二)體內(nèi)抗菌保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。
1.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對(duì)小鼠金黃色葡萄球菌MSSA43感染具有一定的治療作用.頭花蓼減壓干燥粉、頭花蓼噴霧干燥粉、根提醇物、葉提醇物、莖提醇物、鮮品醇提物、鮮品水提物對(duì)金黃色葡萄球菌MSSA43感染小鼠的ED50分別為13.62、6.87、16.14、9.14、15.29、13.62、23.47g生藥/kg。
2.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對(duì)大腸埃希菌994感染小鼠體內(nèi)保護(hù)作用較差，當(dāng)給藥濃度為1.2g/ml生藥濃度、0.8g/ml生藥濃度、0.4g/ml生藥濃度，小鼠存活率均大于或等于60％，與感染對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
表5不同藥用部位、不同提取、制備工藝的頭花蓼樣品的體外抗菌譜(W-1-(W-1-(W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1-10) (W-1- (W-1-(W-1-陽(yáng)性對(duì) 陽(yáng)性對(duì) 陽(yáng)性對(duì) 陽(yáng)性對(duì) 陽(yáng)性2)噴 3)減 4)5) 6) 7)8) 9)藥75％乙 12) 14a) 14b) 照沒(méi) 照 照 照 對(duì)照細(xì)菌 霧干 壓干 根醇 莖醇葉醇種子 鮮品 鮮品 醇提物 水煮醇 水提 食子 環(huán)丙沙 頭孢三 潔爾陰 氟康(菌號(hào)) 燥 燥 提取物提取物 提取物 提物 醇提 水提 (mg/m1)沉溶物 醇沉物 酸 星(μ 嗪鈉 (mg/ml 唑(mg/ (mg/m(mg/ml(mg/ml (mg/ml (mg/ml(mg/ml (mg/ml (mg/ml (mg/ml (mg/mg/ml) (μ) (μml) l) ) ) ) ) ) )))1) g/ml) g/ml)痢疾桿菌 100 50 100 50 12.53.12 6.25 2525 200 25 25 12.5 4 ＞128 Nt Nt銅綠假單胞菌994 100 25 5050 62.51.56 1002512.5 200 25 100 12.5 4 ＞128 Nt Nt肺炎克雷伯菌9938 25 50 100 50 12.512.5 1002525 400 50 400 12.5 4 ＞128 Nt Nt肺炎克雷伯菌9939 25 50 100 100 12.512.5 1002550 400 50 400 6.25 4 64 Nt Nt大腸埃希菌99225 25 5025 3.120.39 0.39 12.5 0.78 100 25 3.12 3.12 0.5 128Nt Nt大腸埃希菌9936.25 12.5 501.560.780.05 0.39 3.12 0.1 100 12.5 3.12 3.12 0.5 4 Nt Nt大腸埃希菌ATCC25922 25 50 100 50 6.256.25 6.25 2512.5 200 12.5 200 6.25 0.5 0.03 Nt Nt變形桿菌993 25 50 100 25 3.126.25 3.12 256.25 200 25 50 12.5 16 ＞128 Nt Nt變形桿菌994 25 50 100 25 3.126.25 6.25 256.25 200 25 50 12.5 16 2 Nt Nt滕黃八疊球菌 12.5 12.5 500.390.390.05 0.39 12.5 0.1 100 12.5 1.56 12.5 4 4 Nt Nt金黃色葡萄球菌209P6.25 6.25 250.391.560.05 0.05 1.56 0.1 251.56 0.1 12.5 0.5 4 Nt Nt金黃色葡萄球菌9981 12.5 6.25 500.780.780.05 0.05 1.56 0.1 12.5 12.5 0.05 12.5 4 8 Nt Nt金黃色葡萄球菌9982 12.5 25 500.390.780.05 0.05 1.56 0.1 6.25 1.56 0.05 6.25 4 8 Nt Nt金黃色葡萄球菌9983 12.5 6.25 500.390.780.05 0.05 1.56 0.1 6.25 1.56 0.78 6.25 0.5 8 Nt Nt表葡球菌994 6.25 6.25 500.780.780.05 0.39 3.12 0.78 100 3.12 6.25 12.5 8 8 Nt Nt表葡球菌995 12.5 6.25 5025 0.780.39 3.12 250.78 100 25 3.12 12.5 1 ＞128 Nt Nt表葡球菌9916 6.25 6.25 506.250.780.39 0.39 1.56 1.56 506.25 0.05 6.25 1 4 Nt Nt卡他氏球菌3 400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 2 ＞128 Nt NtC群鏈球菌400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 0.5 ＞128 Nt NtA型溶血性鏈球菌 400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 2 16 Nt Nt淋球菌1 3.12 0.78 2525 1.561.56 0.025 3.12 6.25 12.5 3.1 12.5 1.56 0.780.0015 8 Nt淋球菌2 3.12 0.78 2525 1.561.56 0.025 ＞50 6.25 253.12 6.25 0.78 0.786.25 8 Nt淋球菌3 0.05 0.0125 6.25 0.1 0.003 0.39 1.56 3.12 1.56 3.12 0.78 6.25 0.05 0.015 0.0015 8 Nt淋球菌4 0.2 0.78 500.2 6.251.56 0.20.39 6.25 1.56 ＞10012.5 0.78 0.780.0015 62.5Nt淋球菌5 0.1 0.025500.2 12.53.12 0.20.39 3.12 1.56 ＞1006.25 0.05 0.780.0015 31.5Nt淋球菌6 0.0250.78 6.25 25 6.253.12 1.56 1.56 3.12 12.5 1.56 6.25 0.78 0.396.25 16 Nt淋球菌7 0.0250.78 6.25 0.2 0.031.56 0.025 0.39 6.25 1.56 3.12 6.25 0.05 0.0125 0.0015 16 Nt淋球菌8 0.39 0.78 6.25 0.2 0.031.56 0.13.12 0.1 1.56 0.78 6.25 0.05 0.015 0.0125 8 Nt淋球菌9 0.0250.78 6.25 25 6.253.12 0.78 0.05 1.56 3.12 0.2 6.25 0.05 0.015 0.0015 4 Nt淋球菌10 0.0250.78 500.2 6.253.12 0.21.56 1.56 3.12 25 6.25 0.2 0.786.25 4 Nt淋球菌11 0.1 0.05 6.25 0.2 6.251.56 1.56 12.5 3.12 3.12 0.78 12.5 0.78 0.786.25 1 Nt淋球菌12 0.39 0.78 2525 0.025 1.56 1.56 6.25 6.25 3.12 0.78 6.25 0.78 0.780.39 1 Nt淋球菌13 0.05 0.05 6.25 25 0.003 0.39 0.025 0.39 3.12 1.56 0.78 6.25 0.01 0.015 0.0015 2 Nt
淋球菌14 0.025 0.78 6.25 0.2 0.39 1.56 0.250.39 1.563.12 0.2 6.25 0.01 0.1 0.0125 1Nt淋球菌15 0.025 0.05 6.25 0.2 6.25 1.56 6.560.39 0.2 6.25 0.2 6.25 0.01 0.0125 0.0125 2Nt淋球菌16 0.1 0.78 50 25 6.25 1.56 0.2 12.5 0.783.12 0.78 12.5 1.56 0.786.258Nt淋球菌17 0.1 0.78 6.25 25 0.0251.56 0.2 3.12 0.786.25 0.78 12.5 0.39 0.015 0.0015 1Nt淋球菌18 0.050.78 6.25 0.2 1.56 0.39 1.563.12 1.251.56 0.2 6.25 0.39 0.2 0.125 8Nt淋球菌19 0.390.78 6.25 0.2 1.56 1.56 1.560.39 0.781.56 0.2 6.25 0.78 0.025 0.054Nt淋球菌20 0.050.78 25 0.39 1.56 1.56 1.566.25 1.563.12 0.78 12.5 0.78 0.2 0.3931.25Nt白色念珠菌011 400 200 400200 25 25200 400 50 ＞400 400 400 25 64 128 16 0.03白色念珠菌012 400 200 400200 25 25400 400 50 ＞400 400 400 25 128 ＞128 80.06白色念珠菌013 400 200 400200 50 50200 400 50 400400 400 25 128 ＞128 31.252白色念珠菌014 400 200 400200 50 25200 400 100 400400 400 12.5 ＞128 ＞128 42白色念珠菌015 400 200 400200 25 25200 400 50 400400 400 25 ＞128 ＞128 41白色念珠菌016 200 100 200400 12.5 12.5 200 200 25 ＞400 200 200 25 128 ＞128 31.252白色念珠菌017 200 100 200400 25 12.5 400 400 50 ＞400 400 400 50 ＞128 ＞128 84白色念珠菌018 200 200 400100 6.25 6.25 100 200 100 ＞400 200 200 12.5 128 ＞128 62.5 0.03白色念珠菌019 400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 200 100 12.5 ＞128 128 80.5白色念珠菌0110400 200 400200 12.5 12.5 200 400 50 400400 200 12.5 ＞128 ＞128 128 0.5白色念珠菌0111400 200 400200 25 25200 400 25 400400 200 25 64 128 40.25白色念珠菌0112400 100 400200 12.5 25400 400 100 ＞400 400 400 25 ＞128 ＞128 40.125白色念珠菌0113400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 12.5 ＞128 ＞128 62.5 0.125白色念珠菌0114200 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 400 6.25 ＞128 ＞128 40.5白色念珠菌0115400 100 400200 25 12.5 400 400 50 ＞400 400 400 12.5 128 ＞128 62.5 8白色念珠菌0116400 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 25 ＞128 ＞128 84白色念珠菌0117400 200 400200 12.5 25200 400 50 ＞400 400 400 25 32 128 16 8白色念珠菌0118400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 400 400 6.25 64 128 42白色念珠菌0119400 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 12.5 ＞128 ＞128 40.03白色念珠菌0120400 200 400200 25 12.5 200 400 50 ＞400 400 400 25 ＞128 ＞128 80.125注Nt＝not tested(沒(méi)有試驗(yàn))
表6不同頭花蓼提取物的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果感染菌株(菌株 藥物 編號(hào) ED50(g/kg) P值號(hào))(感染菌量 95％可信限CFU/ml)金黃色 噴霧干燥粉 w-1-2 6.87(0-1000) P＜0.05葡萄球菌減壓干燥粉 w-1-3 13.62(0-1000) P＜0.05MSSA43 根醇提物 w-1-4 16.14(9.11-23.12) P＜0.05(2.5× 莖醇提物 w-1-5 15.29(0-1000) P＜0.05105) 葉醇提物 w-1-6 9.14(0-1000) P＜0.05鮮品醇提 w-1-8 13.62(3.89-19.94) P＜0.05鮮品水提 w-1-9 23.47(17.77-33.07) P＜0.05w-1-2加輔料制成的顆粒w-1-12 ＞30 P＞0.05氟哌酸膠囊 陽(yáng)性對(duì)照 25.96(16.09-35.24)(mg/kg)大腸噴霧干燥粉 w-1-2 ＞30 P＞0.05埃希菌994(3.0× 減壓干燥粉 w-1-3 ＞30 P＞0.05105)根醇提物 w-1-4 ＞30 P＞0.05莖醇提物 w-1-5 ＞30 P＞0.05葉醇提物 w-1-6 ＞30 P＞0.05鮮品醇提 w-1-8 ＞30 P＞0.05鮮品水提 w-1-9 ＞30 P＞0.05w-1-2加輔料制成的顆粒w-1-12 ＞30 P＞0.05氟哌酸膠囊 陽(yáng)性對(duì)照 57.97(43.33-78.24)(mg/kg)試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明1.不同藥用部位的體外抗菌活性強(qiáng)度依次為種子＞葉＞莖＞根。種子和葉的抗菌活性明顯強(qiáng)于莖和根；而種子和葉之間、莖和根之間的抗菌活性并無(wú)明顯差異。種子來(lái)源和采集都較困難，而根關(guān)系到藥材的再生以及資源、環(huán)境保護(hù)，因此采用葉和莖或者地上部分做藥材較合適。
2.全草、鮮品用95％乙醇提取的樣品的體外抗菌活性明顯強(qiáng)于用水提取的樣品。
3.全草、干品水提后用減壓干燥，還是用噴霧干燥，對(duì)樣品的體外抗菌活性無(wú)明顯影響。
4.頭花蓼浸膏粉的體外抗菌活性明顯強(qiáng)于樣品(w-1-12)。
5.鮮品醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌感染的體內(nèi)療效強(qiáng)于鮮品水提物。
6.頭花蓼噴霧干燥粉對(duì)金黃色葡萄球菌感染的體內(nèi)療效強(qiáng)于頭花蓼減壓干燥粉強(qiáng)于熱淋清顆粒。
7.葉95％乙醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌感染的體內(nèi)療效強(qiáng)于根95％乙醇提物和莖95％乙醇提物。
8.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對(duì)大腸埃希菌994感染小鼠體內(nèi)保護(hù)作用較差。試驗(yàn)三鎮(zhèn)痛活性研究實(shí)驗(yàn)方法就W-1-2進(jìn)行了扭體法、熱板法、熱輻射法三種疼痛模型的研究。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對(duì)醋酸誘發(fā)的小鼠疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用，量效關(guān)系明顯，有效劑量為34.8g/kg。
2.對(duì)輻射熱刺激造小鼠疼痛模型有一定鎮(zhèn)痛作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明提取物具有一定的鎮(zhèn)痛作用。試驗(yàn)四利尿活性研究實(shí)驗(yàn)方法就W-1-2進(jìn)行了導(dǎo)尿管集尿法和代謝籠法兩種利尿試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果17.4g/kg劑量對(duì)麻醉家兔有明顯的利尿作用；8.7g/kg劑量對(duì)正常大鼠有明顯的利尿作用。二試驗(yàn)均未顯出量效關(guān)系。
試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明提取物就有一定的利尿作用。試驗(yàn)五治療腎盂腎炎的研究實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠腎實(shí)質(zhì)內(nèi)接種大腸埃希氏菌ATCC-25922，制做大鼠腎盂腎炎模型。以口服給藥方式探討了頭花蓼浸膏粉(w-1-2)對(duì)腎盂腎炎的療效。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果頭花蓼浸膏粉6.0g/kg(折合生藥量為52.32g/kg)對(duì)腎盂腎炎有較為明顯的療效，與模型對(duì)照相比，給藥(i.g.)后3、4、5、6、7天能顯著減少尿液中的白細(xì)胞數(shù)量及隱血，但對(duì)尿液其它生化成份沒(méi)有明顯影響。
結(jié)果說(shuō)明本專利申請(qǐng)的樣品對(duì)腎盂腎炎有一定的療效。試驗(yàn)六排石活性研究實(shí)驗(yàn)方法用乙二醇飲水法造成大鼠草酸鈣腎結(jié)石模型，造模同時(shí)預(yù)防給予頭花蓼浸膏粉(w-1-2)13.1、26.2、52.4g原生藥/kg三個(gè)劑量，連續(xù)7天。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果頭花蓼浸膏粉26.2g原生藥/kg劑量可顯著性降低動(dòng)物尿液中草酸、尿酸的含量，以及腎臟中草酸鈣結(jié)晶的分布與數(shù)量。
結(jié)果說(shuō)明頭花蓼浸膏粉對(duì)大鼠草酸鈣腎結(jié)石模型具有明顯的保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1.一種頭花蓼提取物，其特征在于a.由頭花蓼全草的鮮品或干品用水分兩次煎煮或用醇水混合物分二至三次回流提取，每次1-2小時(shí)，合并煎煮液，過(guò)濾濃縮至20℃時(shí)的相對(duì)密度為1.2，噴霧干燥或減壓干燥得到；或者b.由頭花蓼全草及其水提藥渣經(jīng)二氧化碳超臨界萃取得到。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的提取物，其中頭花蓼選用其地上部分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的提取物，其中使用水作為提取劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的提取物，其中的醇水混合物是75％乙醇水溶液或95％乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是葉、花和莖。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是葉、種子和莖。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是葉和莖。
8.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是葉。
9.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是莖。
10.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是花。
11.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的提取物，其特征在于頭花蓼地上部分是種子。
12.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備抗菌藥物的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中抗菌藥物是抗淋球菌藥物。
14.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備抗炎藥物的用途。
15.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備鎮(zhèn)痛藥物的用途。
16.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備利尿藥物的用途。
17.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥物的用途。
18.權(quán)利要求1-11之一的提取物用于制備治療腎盂腎炎、前列腺炎的藥物的用途。
19.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-11之一的提取物和可藥用輔料。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其可以制成顆粒劑、丸劑、膠囊劑、噴霧劑、注射劑、洗劑、栓劑、滴丸劑、合劑、擦劑、貼劑、膜劑、紙型劑、混懸劑、酊劑、干糖漿劑、泡騰片、硬膏劑、軟膏劑、糖漿劑、乳劑、散劑、緩釋、控釋制劑及靶向制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及頭花蓼鮮品或干品提取物及其制備方法和用途，本發(fā)明還涉及含有該頭花蓼提取物的藥物組合物。本發(fā)明用水、75％乙醇和95％乙醇和二氧化碳超臨界萃取方法分別對(duì)頭花蓼全草、地上部分、葉、種子、莖和根部分別進(jìn)行了提取和活性研究，本發(fā)明工藝得到的頭花蓼提取物在抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、治療腎盂腎炎、前列腺炎和排石等方面具有明顯的效果。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1481832SQ0212968
公開日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2002年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月12日
發(fā)明者梁斌, 王子厚, 李孟林, 張麗艷, 莊鎮(zhèn)華, 榮祖元, 張淑華, 葉曉鳴, 鄭安飄, 梁 斌 申請(qǐng)人:貴州威門藥業(yè)股份有限公司