專利名稱：含sa脂質(zhì)體作為藥物載體的藥物新劑型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)和藥物學(xué)領(lǐng)域，更具體地涉及將SA脂質(zhì)體作為藥物載體的用途，以及含有SA脂質(zhì)體作為藥物載體的藥物組合物。
背景技術(shù)：
藥物傳遞系統(tǒng)能極大地改善藥物使用的安全性和效率，并使新的治療成為可能。理想的藥物傳遞系統(tǒng)應(yīng)具有的優(yōu)點(diǎn)包括(1).在治療允許的范圍內(nèi)維持藥物水平。(2).減少靶向傳遞時(shí)對(duì)非靶向細(xì)胞或組織的傷害。(3).降低用藥的有效劑量，減少藥物副反應(yīng)。(4).促進(jìn)體內(nèi)半衰期較短的藥劑(如蛋白質(zhì)、多肽)等的應(yīng)用。
藥物傳遞系統(tǒng)按其功能特點(diǎn)大致可分為三種類型聚合體-藥物傳遞系統(tǒng)、脂質(zhì)體藥物傳遞系統(tǒng)和智能傳遞系統(tǒng)。近年來，藥物傳遞系統(tǒng)有不小發(fā)展但尚有不少亟待改進(jìn)之處(1).釋放藥物的傳遞系統(tǒng)材料及其分解產(chǎn)物可能存在的毒性和副作用。(2).由系統(tǒng)本身或?qū)敕椒ㄋ鸬牟槐闩c不適。(3).新的傳遞系統(tǒng)價(jià)格昂貴。
隨著生物技術(shù)的發(fā)展，多肽和蛋白質(zhì)藥物的數(shù)量將會(huì)迅速增長(zhǎng)。近年來各類多肽藥物在全球的銷售額增加了20％。多肽和蛋白質(zhì)藥物一般是注射給藥的，對(duì)這類藥物來說，其藥物傳遞系統(tǒng)的應(yīng)用具有巨大的潛力。
長(zhǎng)久以來人們一直夢(mèng)想能夠有把藥物專一地導(dǎo)向作用位點(diǎn)，并能精確地控制藥物釋放，使藥效最大的傳遞系統(tǒng)。近年來，這個(gè)夢(mèng)想已開始變成事實(shí)并對(duì)醫(yī)學(xué)的各個(gè)分支包括心臟學(xué)、眼科學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、腫瘤學(xué)、肺科學(xué)、免疫學(xué)等產(chǎn)生了巨大影響。藥物傳遞系統(tǒng)在美國(guó)的年銷售額超過了10億美元，尚在飛速增長(zhǎng)。藥物傳遞原理，也已被應(yīng)用到農(nóng)藥、肥料、除草劑、香料、調(diào)味劑等多個(gè)領(lǐng)域。藥物傳遞系統(tǒng)已成為藥物競(jìng)爭(zhēng)的主要方面。
許多藥物，特別是抗癌藥物，在作用于靶細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞具有相當(dāng)?shù)亩拘?，?duì)機(jī)體會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的副作用，因而其使用和劑量常被限制在一定的范圍內(nèi)，減少藥物劑量、提高藥效與降低毒副作用顯得十分重要。多數(shù)多肽藥物在體內(nèi)的半衰期短，在治療時(shí)就需反復(fù)給藥，而這會(huì)使體內(nèi)藥物濃度起伏，從而造成自我調(diào)節(jié)系統(tǒng)的紊亂。
藥物與脂質(zhì)體結(jié)合后會(huì)明顯增強(qiáng)藥物療效，降低毒性，減少副反應(yīng)。脂質(zhì)體作為藥物載體，最初是用于對(duì)遺傳缺陷性疾病的治療研究，之后又?jǐn)U大到對(duì)癌癥的治療，抗細(xì)菌、真菌感染，免疫性疾病的治療，金屬螯合療法等方面。目前已有一些以脂質(zhì)體為載體的藥物進(jìn)入臨床。
脂質(zhì)體作為藥物載體，具有以下優(yōu)點(diǎn)1)由于主要由天然磷脂和膽固醇組成的脂質(zhì)體，進(jìn)入體內(nèi)后可被生物降解，不會(huì)積累在體內(nèi)，而且免疫原性小，易于被機(jī)體所接受。2)水溶性和脂溶性藥物都可包埋在脂質(zhì)體內(nèi)從脂質(zhì)體中緩慢釋放，使藥效持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。3)通過與細(xì)胞內(nèi)吞和融合相互作用，脂質(zhì)體可直接將藥物送入細(xì)胞內(nèi)而發(fā)揮作用，從而避免使用高濃度游離藥物作用機(jī)體。4)脂質(zhì)體在體內(nèi)的分布可以控制，從而使它在病變組織處釋放藥物，減少對(duì)正常組織的毒性，減少副反應(yīng)，增強(qiáng)藥效。
脂質(zhì)體應(yīng)用于藥物小分子的體內(nèi)輸送的報(bào)道，它主要是起穩(wěn)定藥物分子結(jié)構(gòu)、藥物抗降解從而延長(zhǎng)藥物分子體內(nèi)的半衰期和有一定的緩釋作用，此外它的脂質(zhì)成分通過與受藥組織和器官的細(xì)胞表面產(chǎn)生融合，又利于藥物的釋放和吸收。
目前脂質(zhì)體的藥物制劑有針劑、口服和外用藥劑等各種形式。與其它載體系統(tǒng)相比較，脂質(zhì)體與所載藥物之間不需共價(jià)交聯(lián)，藥物不經(jīng)化學(xué)修飾。脂質(zhì)體可以通過膜融合將所載藥物送入細(xì)胞，使吞噬能力較差的細(xì)胞如癌細(xì)胞也易于攝取藥物，這是脂質(zhì)體脂雙層所特有的功能。各種結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)體可用于不同的條件。
脂質(zhì)體與其它載體系統(tǒng)一樣，進(jìn)入體內(nèi)后，將很快被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞所吞噬，從外周血液循環(huán)中被清除，而集中于肝、脾組織，這雖然對(duì)治療肝、脾組織的某些疾病有利卻不利于其它治療目的。
目前，Doxoribicin，MTP-PE，Cisplatin和Amphotericin B等藥物的脂質(zhì)體制劑在臨床I期和II期的治療中取得較好療效，展示了脂質(zhì)體作為藥物載體用于治療的光輝前景。
脂質(zhì)體藥物載體用于常規(guī)治療，還需解決一些技術(shù)問題。一是脂質(zhì)體制劑如何長(zhǎng)期保存。二是現(xiàn)在的制備方法常涉及蒸餾、溫度控制，甚至透析等過程，不利于工業(yè)化生產(chǎn)或醫(yī)院日?？焖僦苽洹Ｈ侵苽涞闹貜?fù)性必須好。四是如何準(zhǔn)確計(jì)算藥物的包埋率。隨著這些問題的解決，藥物脂質(zhì)體制劑將成為有效的常規(guī)用藥。
陽離子脂質(zhì)體也曾作為藥物載體。目前，陽離子脂質(zhì)體一般用于攜帶負(fù)電荷的核酸物質(zhì)轉(zhuǎn)送，鮮有被用作多肽藥物的載體。陽離子脂質(zhì)體與通常的脂質(zhì)體作用原理不同，陽離子脂質(zhì)體表面帶有正電荷。藥物和陽離子脂質(zhì)體相互作用時(shí)，不僅部分可包埋于脂質(zhì)體的囊泡內(nèi)，也可由于陽離子脂質(zhì)體表面的正電荷與帶負(fù)電荷的藥物分子產(chǎn)生靜電相互作用，而且多肽類藥物分子中的疏水部分可插入脂雙層、而得到穩(wěn)定。陽離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電的細(xì)胞表面有很強(qiáng)的親合作用，有利于藥物進(jìn)入細(xì)胞。
因?yàn)殛栯x子脂質(zhì)體操作簡(jiǎn)單，因此受到越來越多的重視。但現(xiàn)有的商品陽離子脂質(zhì)體均含人工合成的陽離子成份，并且價(jià)格昂貴，而且對(duì)細(xì)胞的毒性較大，不利于體內(nèi)的藥物輸送。
理想的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體，不僅需要在離體培養(yǎng)的細(xì)胞中有很高的導(dǎo)入效率，更要有合適的體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，要有抗降解能力，能自然代謝，并且對(duì)機(jī)體不產(chǎn)生毒副作用。盡管有的由合成脂構(gòu)成的陽離子脂質(zhì)體已被應(yīng)用于體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染上并且開始在體內(nèi)基因治療上獲得初步成功，但它們尚存在以下缺陷(1).血清對(duì)大多數(shù)陽離子脂質(zhì)體有明顯的抑制作用，體內(nèi)藥物轉(zhuǎn)送的效率低。(2).人工合成的陽離子脂質(zhì)易被體內(nèi)免疫系統(tǒng)識(shí)別，產(chǎn)生較強(qiáng)的排異作用。(3)不同的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞有選擇性，適用范圍以及轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率是不同的。
本發(fā)明迫切需要開發(fā)新的藥物載體，所述的藥物載體可有效地?cái)y帶多肽、蛋白或核酸等藥物活性成分，不受血清抑制，免疫原性低，適用范圍廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的就是提供一種有效的、不受血清抑制，免疫原性低，適用范圍廣的藥物載體，即SA脂質(zhì)體。
本發(fā)明的另一目的是提供含有SA脂質(zhì)體作為藥物載體的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供SA脂質(zhì)體在基因治療等方面的用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種藥物組合物，它含有藥物活性成分和作為藥物載體的SA脂質(zhì)體。
在一優(yōu)選例中，所述的藥物活性成分選自多肽、蛋白質(zhì)、核酸。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物活性成分是多肽或蛋白，且多肽或蛋白與SA脂質(zhì)體的重量比為1∶10～1∶300。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物活性成分是核酸，且其與SA脂質(zhì)體的重量比為1∶10～1∶300。
在另一優(yōu)選例中，所述的SA脂質(zhì)體是CH3-(CH2)16-CH2-+NH3∶C41H78NO8P(DOPE)＝0.8∶1～1∶0.8，更佳地為1∶1(w/w)。
在另一優(yōu)選例中，所述的活性成分選自降鈣素、人降鈣素類似物I、人降鈣素類似物II、成骨生長(zhǎng)肽。
在本發(fā)明的第二方面，提供了所述SA脂質(zhì)體的用途，它作為藥物載體用于制備藥物。
在一優(yōu)選例中，所述藥物中的活性成分選自多肽、蛋白質(zhì)、核酸。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種轉(zhuǎn)染方法，將核酸與SA脂質(zhì)體脂質(zhì)體以重量比1∶10.-1∶20混合，然后轉(zhuǎn)染。
較佳地，所述的核酸選自DNA、RNA、寡核苷酸、反義核酸、或其混合物。


圖1鮭魚降鈣素(sCT)和SA脂質(zhì)體-sCT復(fù)合物的時(shí)間-劑量曲線的比較。
圖2人降鈣素類似物I和SA脂質(zhì)體復(fù)合物的降血鈣作用的時(shí)間曲線。
圖3人降鈣素類似物II和SA脂質(zhì)體的復(fù)合物的降血鈣作用與游離人降鈣素類似物II的比較。
圖4游離成骨生長(zhǎng)肽與其和SA脂質(zhì)體復(fù)合物對(duì)細(xì)胞增殖效率的活度曲線(以游離成骨生長(zhǎng)肽的量計(jì)算)。
圖5不同劑量游離的SA脂質(zhì)體對(duì)NIH3T3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
圖6在不全血清濃度下SA脂質(zhì)體與Lipofectin轉(zhuǎn)染NB-1細(xì)胞的能力。
圖7在不全血清濃度下SA脂質(zhì)體與Lipofectin轉(zhuǎn)染P19細(xì)胞的能力。
圖8在不全血清濃度下SA脂質(zhì)體與Lipofectin轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞的能力。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)SA脂質(zhì)體特別適合作為多肽、蛋白質(zhì)和核酸等藥物活性成分的藥物載體。SA脂質(zhì)體不僅免疫原性小，在體內(nèi)有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。對(duì)于多肽藥物，SA脂質(zhì)體能延長(zhǎng)其半衰期且具有一定的藥物緩釋作用。對(duì)于核酸藥物，SA脂質(zhì)體可在血清存在下高效轉(zhuǎn)染各類哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞。因此，SA脂質(zhì)體是一種安全、高效的藥物載體。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明SA脂質(zhì)體如本文所用，術(shù)語“SA脂質(zhì)體”、“SA陽離子脂質(zhì)體”、“硬脂胺陽離子脂質(zhì)體”、或“硬脂胺脂質(zhì)體”可互換使用，都指由硬脂胺(Stearylamine，SA)和二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleoyl-phosphatidylethanolamine，DOPE)構(gòu)成的混合物/復(fù)合物。SA與DOPE之比一般為約0.8∶1～1∶0.8，較佳地約為1∶1(w/w)。SA脂質(zhì)體表面帶有正電荷，通過靜電作用與帶負(fù)電荷的DNA、RNA、寡核苷酸及蛋白質(zhì)、多肽的帶負(fù)電部分等形成復(fù)合物，陽離子脂質(zhì)體可有效保護(hù)所傳送的分子不被降解。復(fù)合物會(huì)通過靜電作用被吸附在細(xì)胞表面，通過細(xì)胞的融合及內(nèi)吞作用將所復(fù)合的分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。
SA脂質(zhì)體的主要陽離子親水脂分子成份硬脂胺(SA)為一條18個(gè)碳原子的飽和脂肪酸的疏水錨著鏈和一個(gè)氨基的親水極性頭，化學(xué)式為CH3-(CH2)16-CH2-+NH3在SA脂質(zhì)體中，DOPE起“分子伴侶”作用，是形成穩(wěn)定的脂雙層的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)所必需的。二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)的化學(xué)式為 一種優(yōu)選的SA脂質(zhì)體是由帶陽離子的硬脂胺脂質(zhì)SA(Stearylamine)和二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)按約1∶1重量比(w/w)構(gòu)成的復(fù)合脂質(zhì)。其分子結(jié)構(gòu)CH3-(CH2)16-CH2-+NH3∶C41H78NO8P(DOPE)＝1∶1(w/w)。
SA脂質(zhì)體的制備方法是已知的，例如可通過水浴超聲法制備成小的單脂雙層脂質(zhì)體。
SA脂質(zhì)體通?？杀４嬗?℃，穩(wěn)定期大于6個(gè)月。一種常用的脂質(zhì)形式是水相懸液、濃度為2mg/ml，無菌。
藥物組合物可用于本發(fā)明的藥物活性成分沒有特別限制，可以是本領(lǐng)域已知或未知的藥物活性成分。特別優(yōu)選的活性成分是多肽、蛋白質(zhì)和核酸。
當(dāng)活性成分是多肽或蛋白質(zhì)時(shí)，它們可以是天然的、重組的或人工合成的。在本發(fā)明的藥物組合物中，多肽或蛋白質(zhì)與SA脂質(zhì)體的重量比通常為1∶10～1∶300(w∶w)，較佳地為1∶10～1∶100。如本文所用，術(shù)語“核酸”包括DNA、RNA、寡核苷酸、反義核酸、或其混合物。當(dāng)活性成分是核酸時(shí)，它們可以是分離的、抽提的或人工合成的。在本發(fā)明的藥物組合物中，核酸與SA脂質(zhì)體的重量比通常為1∶10～1∶300(w∶w)，較佳地為1∶10～1∶100(w∶w)，更佳地為1∶10～1∶50(w∶w)。
本發(fā)明藥物組合物的制備方法沒有特別限制，只要將所需比例的SA脂質(zhì)體與多肽藥物混合形成復(fù)合物即可。SA脂質(zhì)體對(duì)藥物本身不會(huì)造成任何破壞。
當(dāng)然，在本發(fā)明的藥物組合物中，還可含有其他藥學(xué)上可接受的載體和添加劑，例如水、緩沖液，甘油、抗氧化劑等。這些添加劑都是制藥領(lǐng)域中熟知的。
本發(fā)明藥物組合物的劑型沒有特別限制，如針劑、溶液、片劑和膠囊等。一種優(yōu)選方式是制成針劑、例如液體溶液或懸液；或制成在注射前適合配入溶液或懸液中、液體載體的固體形式。
給藥方法一旦配成本發(fā)明的組合物，可將其直接給予對(duì)象。待治療的對(duì)象可以是動(dòng)物；尤其可以治療人對(duì)象。
藥物組合物的直接輸送通常可通過皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射或輸送至組織間隙來實(shí)現(xiàn)。組合物也可輸送至病灶區(qū)。其它給藥方式包括血管阻流給藥；呼吸道噴霧給藥；肝、腎等內(nèi)臟器官的定點(diǎn)注射轉(zhuǎn)染；腹股溝淋巴系統(tǒng)給藥、口服、肺給藥、栓劑和透皮或經(jīng)皮膚施用、用針、基因槍。治療劑量方案可以是單劑方案或多劑方案。在給藥操作中應(yīng)盡量避免各種去垢劑、強(qiáng)電解質(zhì)、有機(jī)溶劑、高溫、氧化劑等。
應(yīng)用性本發(fā)明已證明了SA陽離子脂質(zhì)體不僅可用于多肽或蛋白質(zhì)類活性成分，還可作為非病毒型藥物載體可應(yīng)用于基因治療。SA脂質(zhì)體具有運(yùn)送和保護(hù)DNA、RNA、寡核苷酸等進(jìn)入細(xì)胞的能力，有著多方面的用途。
此外，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)還證明了SA脂質(zhì)體可在血清存在下高效轉(zhuǎn)染各類哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞。
因此，SA脂質(zhì)體具有穩(wěn)定性好、抗降解性強(qiáng)，免疫原性弱等眾多優(yōu)點(diǎn)，是基因操作與基因治療、體內(nèi)和體外多肽傳遞的有效手段。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1SA陽離子脂質(zhì)體的制備取5mg SA(SIGMA)和5mg DOPE(SIGMA)(10mg/ml)于磨口圓底燒瓶?jī)?nèi)，高純氮?dú)獯蹈捎袡C(jī)溶劑(約2～3小時(shí))，冷凍干燥(Labconco，美國(guó))2～3小時(shí)，加入20ml Millipore無菌水，充氮?dú)饧尤饪冢〕?上海超聲波儀器四廠CQ-50超聲波發(fā)生器)20分鐘，然后用探頭式超聲儀(Branson Sonifer CellDisruptor B15超聲儀)探頭超聲30分鐘，超聲過程中覆蓋氮?dú)狻?00,000g 4℃超離心30分鐘(Centrikon超離心機(jī))，取上清，159,000g 4℃超離心5小時(shí)，取中間層，用0.22μm孔徑的微孔無菌濾膜過濾(Millipore)，充氮分裝，于4℃保存。
實(shí)施例2SA脂質(zhì)體-降鈣素復(fù)合物的緩釋及延長(zhǎng)半衰期作用2.1 SA脂質(zhì)體-降鈣素復(fù)合物的形成1μg鮭魚降鈣素(SIGMA)用生理鹽水稀釋至300μl，含60μg的SA脂質(zhì)體用生理鹽水稀釋至300μl，兩者混勻，室溫放置20～30分鐘，再用生理鹽水稀釋至24ml。
2.2 SA脂質(zhì)體-降鈣素類似物I或II復(fù)合物的形成將1μg人降鈣素類似物I(hCT-I)或人降鈣素類似物II(hCT-II)，分別用生理鹽水稀釋至300μl。將含60μg的SA脂質(zhì)體用生理鹽水稀釋至300μl，兩者混勻，室溫放置20～30分鐘，再用生理鹽水稀釋至24ml。
2.3測(cè)試方法腹腔注射法比較SA脂質(zhì)體作用前后的人降鈣素類似物I、II效價(jià)和半衰期禁食18hr，僅喂食雙蒸水的雄性Wistar大鼠按體重隨機(jī)分組，每組8只，分別腹腔注射生理鹽水稀釋的SA脂質(zhì)體(對(duì)照組)、鮭魚或人降鈣素類似物溶液和SA脂質(zhì)體-鮭魚或人降鈣素類似物復(fù)合物溶液，每鼠注射0.4ml(16.6ng)。按不同時(shí)間取血樣，按以下方法(OCPC法)測(cè)定血鈣值。
每鼠取血約1ml，血液凝固后4000rpm/min離心10分鐘。取血清50μl，加鈣顯色劑4.0ml，混勻，立即在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度(Hitachi，U-2000分光光度計(jì)spectrophotometer)。每次測(cè)試均伴鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果(a)Wistar大鼠腹腔注射鮭魚降鈣素(sCT)以及注射SA脂質(zhì)體-鮭魚降鈣素(sCT)復(fù)合物后降鈣素體內(nèi)半衰期的比較該實(shí)驗(yàn)中，分別以生理鹽水和用生理鹽水稀釋的SA脂質(zhì)體作為對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如見表1和圖1所示。在注射鮭魚降鈣素后1小時(shí)的大鼠血鈣值降到最低，但4小時(shí)時(shí)降鈣作用已完全結(jié)束。比較注射SA-sCT復(fù)合物的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1小時(shí)的降鈣作用較單純注射sCT的略小，2小時(shí)的效果稍顯著，而且SA-sCT復(fù)合物在4小時(shí)仍有一定降鈣作用。
表1.腹腔注射鮭魚降鈣素(sCT)和SA脂質(zhì)體-鮭魚降鈣素復(fù)合物后不同時(shí)間大鼠的血鈣水平

(b)Wistar大鼠腹腔注射SA脂質(zhì)體-人降鈣素類似物I(hCT-I)復(fù)合物后的藥效和時(shí)效該實(shí)驗(yàn)中，以生理鹽水稀釋的SA脂質(zhì)體作為對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如見表2和圖2所示。大鼠在注射SA-hCT-I復(fù)合物后血鈣濃度即下降，2小時(shí)達(dá)最低值，SA-hCT-I復(fù)合物在注射4小時(shí)后的血鈣值與對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.01)，且在6小時(shí)尚有一定的降鈣作用。
表2.與SA脂質(zhì)體作用的人降鈣素類似物I(hCT-I)對(duì)大鼠體內(nèi)不同時(shí)間血鈣鼠水平的比較

(c)Wistar大鼠腹腔注射人降鈣素類似物II(hCT-II)及SA-hCT-II復(fù)合物后血鈣水平變化的比較該實(shí)驗(yàn)中，以生理鹽水稀釋的SA脂質(zhì)體作為對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如見表3和圖3所示。在注射游離的人降鈣素類似物II后1小時(shí)的大鼠血鈣值降到最低，但5小時(shí)后的血鈣值恢復(fù)正常。注射SA-hCT-II復(fù)合物后1小時(shí)的降血鈣作用較單純注射hCT-II的略差，2小時(shí)相同，而注射后5小時(shí)時(shí)仍可維持一定降鈣作用。注射SA-hCT-II復(fù)合物3小時(shí)后的血鈣值與對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.0015)，且與注射游離hCT-II 3小時(shí)時(shí)的血鈣值比較也有顯著差異(P＜0.005)。
表3.與SA脂質(zhì)體作用的人降鈣素類似物II(hCT-II)大鼠體內(nèi)不同時(shí)間血鈣水平的比較

上述結(jié)果表明，SA脂質(zhì)體可延長(zhǎng)降鈣素或其類似物的半衰期，并起緩釋作用。
實(shí)施例3SA脂質(zhì)體對(duì)成骨生長(zhǎng)肽(OGP)作用的影響3.1 SA脂質(zhì)體的制備按與實(shí)施例1中相同的方法制備SA脂質(zhì)體。
3.2成骨肽的合成以常規(guī)固相合成法中Boc系統(tǒng)，將各種側(cè)鏈和N端保護(hù)的氨基酸按成骨肽序列從C端向N端逐個(gè)合成，然后用干燥氟化氫切割下肽并脫去保護(hù)基，經(jīng)Sephadex D10去鹽和HPLC純化，得產(chǎn)物氨基酸組成符合理論值。
3.3細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞NIH3T3(Embryo，contact-inhibited，NIH Swiss)細(xì)胞株是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)獲得的。細(xì)胞用含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液在37℃、5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱(Herarus)中培養(yǎng)。二天換液，三天傳代。
3.4測(cè)試方法通過以下方法測(cè)定游離成骨肽對(duì)NIH3T3細(xì)胞的作用接種細(xì)胞約5×103于24孔塑料培養(yǎng)板(Corning)中，每孔加500ul含10％FBS胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)。OGP用PBS稀釋成系列不同的濃度(10-5至10-15M)。NIH3T3與OGP作用前，換450ul含10％FBS胎牛血清的DMEM/F12培液，加入不同濃度的OGP溶液50ul，使最終與細(xì)胞作用的OGP在培液的濃度為10-6～10-16M，每2天換一次含相應(yīng)原來OGP濃度的培液。
按以下方法測(cè)定SA脂質(zhì)體-成骨肽復(fù)合物對(duì)NIH3T3細(xì)胞的作用每孔取SA脂質(zhì)體(2ug/ul)1ug與不同濃度的OGP在室溫孵育30分鐘，并用1×PBS稀釋成50ul，使0GP的系列濃度為10-6至10-6M。NIH3T3用450ul含10％FBS胎牛血清的DMEM/F12培液保溫，加入不同濃度的SA-OGP溶液，使最終與細(xì)胞作用的OGP在培液中的濃度為10-6～10-16M，每2天換一次含相應(yīng)濃度的SA-OGP溶液。
用結(jié)晶紫法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)值，方法如下吸除待測(cè)24孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)液，加250ul，4％甲醛溶液(配于1×PBS中，pH7.2)固定1小時(shí)，用ddH2O洗三次，空氣干燥。每孔再加入200ul 0.01％結(jié)晶紫染色液(配于0.2M磷酸緩沖液中，pH6.8)染色30分鐘，用ddH2O洗三次，空氣干燥。每孔加500ul 10％HAC，溶解2小時(shí)后測(cè)OD590值(Beckman DU650分光光度計(jì))。
3.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果如圖4和5所示。
圖4是不同濃度的游離OGP和不同濃度OGP經(jīng)與1ugSA脂質(zhì)體作用后處理NIH3T3細(xì)胞增長(zhǎng)第三天的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)游離的OGP濃度為10-11～10-7M時(shí)有助于促進(jìn)細(xì)胞增殖，而在10-9M時(shí)為最佳，進(jìn)一步加大OGP濃度時(shí)，細(xì)胞的生長(zhǎng)反而受到抑制。當(dāng)不同濃度的OGP與SA脂質(zhì)體孵育后，細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線明顯發(fā)生改變，峰值發(fā)生位移，與SA脂質(zhì)體結(jié)合的OGP濃度在10-12～10-16M時(shí)有助于促進(jìn)細(xì)胞增殖，在10-14M時(shí)為最佳，然后隨著OGP濃度的增加細(xì)胞，生長(zhǎng)又漸趨緩。與SA脂質(zhì)體結(jié)合的OGP促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到峰值的濃度只是游離OGP的十萬分之一。
圖5是不同劑量游離的SA脂質(zhì)體對(duì)24孔板中NIH3T3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，每孔接種5×104細(xì)胞。結(jié)果表明，不同劑量的游離的SA脂質(zhì)體對(duì)NIH3T3細(xì)胞生長(zhǎng)無不良影響。
實(shí)施例4SA脂質(zhì)體應(yīng)用于基因治療4.1SA脂質(zhì)體的最適條件在不同條件下，將SA脂質(zhì)體應(yīng)用于DNA轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，得到了表4所示的SA脂質(zhì)體體外介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染的最適條件。在SA脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物中，優(yōu)選的SA脂質(zhì)體與DNA之比約為10-50/1。
表4.SA脂質(zhì)體體外介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)選條件

4.2 SA脂質(zhì)體體外轉(zhuǎn)染(in vitro)的步驟1)細(xì)胞接種接種細(xì)胞于培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)胞密度達(dá)80％～90％。
2)SA-DNA復(fù)合物的形成以轉(zhuǎn)染2.5×105個(gè)細(xì)胞為例，0.1～10μg DNA用超純水稀釋至50μl，5～30μg脂質(zhì)體用超純水稀釋至50μl，兩者混合均勻，室溫放置25～30分鐘。
3)換培液細(xì)胞換無血清培液。有的細(xì)胞株換用含適量小牛血清的培液效果更好。
4)轉(zhuǎn)染將SA-DNA復(fù)合物滴加入培養(yǎng)皿，輕輕搖勻，37℃培養(yǎng)18小時(shí)，換正常含血清培液培養(yǎng)48小時(shí)，然后測(cè)其定轉(zhuǎn)染活力。
4.3 SA脂質(zhì)體體內(nèi)轉(zhuǎn)染(in vivo)的步驟將SA∶DNA＝10∶1(w/w)的混合物加入10倍體積(視實(shí)驗(yàn)需要可適當(dāng)增減)的超濾水或各類佐劑，混勻，室溫放置25分鐘，形成SA-DNA復(fù)合物。然后進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
實(shí)施例5有血清條件下的SA脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA對(duì)昆蟲細(xì)胞的轉(zhuǎn)染采用SA脂質(zhì)體(2mg/ml)介導(dǎo)DNA對(duì)昆蟲細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。按照文獻(xiàn)的方法，從感染病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清中的病毒顆粒子中提取苜蓿丫紋夜蛾(Autographa califbrnica)核型多角體病毒(AcMNPV)基因組DNA。轉(zhuǎn)移載體pBlueBacEPO質(zhì)粒DNA按文獻(xiàn)堿法提取后，經(jīng)Sepharose 2B柱分離純化而得。草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf-21細(xì)胞株用含10％胎牛血清(FBS)(Sigma Co.，)的TC-100培液(GIBCO-BRL Co.，)，于27℃恒溫培養(yǎng)。
138kb的野生型AcMNPV含有多角體蛋白基因，多角體蛋白在感染晚期可達(dá)整個(gè)細(xì)胞中總堿性可溶蛋白的17％以上，感染晚期所形成的病毒多角體充斥整個(gè)細(xì)胞核，在顯微鏡下非常容易識(shí)別。
在直徑35mm的塑料培養(yǎng)皿中接種約1×105Sf-21細(xì)胞，細(xì)胞密度約為70％，貼壁生長(zhǎng)過夜。第二天換1ml含10％胎牛血清TC-100培液。病毒DNA和SA脂質(zhì)體用無菌水分別稀釋，兩者混勻，共100μl作轉(zhuǎn)染液，室溫靜置15min，逐滴加入培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，27℃培養(yǎng)6h后，補(bǔ)加培液到3ml。繼續(xù)置27℃培養(yǎng)72h，在200倍倒置顯微鏡下，每培養(yǎng)皿隨機(jī)檢查10個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)含有多角體的細(xì)胞數(shù)量?？梢姽灿?796個(gè)細(xì)胞的核中出現(xiàn)明顯的多角體，占細(xì)胞總量的69％。
結(jié)果說明，SA脂質(zhì)體可以在10％血清條件下仍可有效地介導(dǎo)長(zhǎng)達(dá)138kb的病毒基因組DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞。而Lipofectim試劑只能在無血清存在條件下介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
實(shí)施例6用SA脂質(zhì)體包裹的vEGF反義核酸對(duì)裸鼠人肝癌生長(zhǎng)的抑制1.動(dòng)物4周齡的Balb/cA裸鼠。預(yù)先在其側(cè)腹部縫制一個(gè)直徑約1.0cm皮囊，將5×106LC1-D20人肝癌細(xì)胞懸液接種在皮囊內(nèi)。
2.反義核酸5′-GCA GTA GCT GCG CTG ATA AGT GC-3′3.SA脂質(zhì)體300μg在生理鹽水中和60μg反義核酸在室溫混合，放置15min。
4.動(dòng)物及分組、劑量A組，共8只，注射生理鹽水B組，共6只，注射300μg SA脂質(zhì)體C組，共10只，注射反義核酸100μgD組，共8只，注射60μg反義核酸+300μg SA脂質(zhì)體5.注射方法及效果觀察在接種動(dòng)物的次日，開始將寡核苷酸注射在皮囊內(nèi)，隔日一次，共7次。在接種5周后，處死動(dòng)物，稱取瘤重。
在接種5周后，單純注射反義核酸的瘤重是對(duì)照組的53％，而注射SA脂質(zhì)體-反義核酸復(fù)合物的瘤重為對(duì)照組的37％，SA-脂質(zhì)體-反義核酸組的反義核酸用量為單純注射時(shí)的五分之三。
結(jié)果顯示用SA脂質(zhì)體合并給藥的vEGF反義核酸對(duì)裸鼠人肝癌生長(zhǎng)的抑制更顯著。
實(shí)施例7SA脂質(zhì)體在有血清存在時(shí)轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞1.pCH110質(zhì)粒DNA的制備按文獻(xiàn)[Birnboim，H.C.，and Doly，J.1979，Nucleic Acids Research，71513]進(jìn)行。
2.細(xì)胞COS細(xì)胞株是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type CultureCollection)獲得的。
3.Lipofectin(GIBCO BRL Co.，)介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染
Lipofectin試劑轉(zhuǎn)染按文獻(xiàn)[Whitt，M.A.et al.，1991，F(xiàn)ocus，138-12]進(jìn)行；COS細(xì)胞用含10％FCS(GIBCO BRL Co.)的DMEM/F12(GIBCO BRL Co.，)培養(yǎng)液在37℃、5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.SA脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染接種細(xì)胞約7.5×105個(gè)于Φ60mm塑料培養(yǎng)皿(Corning)中，含10％FBS胎牛血清的DMEM/F12培液培養(yǎng)24小時(shí)。換無血清和含不同濃度(分別為1％至20％)胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培液3ml，此時(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞密度應(yīng)為80～90％。3μl濃度為1mg/ml的質(zhì)粒DNA用無菌水稀釋至150μl，含60μl(濃度2mg/ml)脂質(zhì)的SA脂質(zhì)體用無菌水稀釋至150μl，兩者混勻，室溫放置15～30分鐘形成SA-DNA復(fù)合物，滴加入培養(yǎng)皿中，37℃、CO2培箱培養(yǎng)18小時(shí)。換4ml 10％FCS DMEM/F12培養(yǎng)液，培養(yǎng)48小時(shí)。
5.基因表達(dá)的測(cè)定收獲細(xì)胞，細(xì)胞用PBS漂洗三次，加含10mM EDTA的PBS消化，收集的細(xì)胞在液氮-37℃水浴凍融三次，裂解細(xì)胞，離心，按文獻(xiàn)[Hall，C.V.et al.，1983，J.Mol.Appl.Genet.，2101-109]取細(xì)胞抽提液測(cè)轉(zhuǎn)入的pCH110基因表達(dá)的β-半乳糖苷酶活力(OD420)。
6.蛋白含量用Folin酚法(Lowry法)測(cè)定[Lowry，O.H.，Rosebrough，N.J.，F(xiàn)arr，A.L.，and Randall，R.J.，1951，J.Biol.Chem.，193265]7.結(jié)果轉(zhuǎn)染是在直徑60mm的培養(yǎng)皿中進(jìn)行，培養(yǎng)皿中細(xì)胞數(shù)用細(xì)胞抽提液總蛋白來表示。轉(zhuǎn)染分別在SA脂質(zhì)體和Lipofectin試劑的最佳脂質(zhì)/DNA濃度下進(jìn)行。轉(zhuǎn)染效率以細(xì)胞抽提液中β-半乳糖苷酶活力來表示。
血清對(duì)SA脂質(zhì)體或Lipofectin試劑轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞效率的影響是截然不同的。SA脂質(zhì)體對(duì)于COS細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率隨著血清濃度的增高而增大(20％FBS時(shí)為最佳值，為無血清條件的230％)；在血清存在下Lipofectin轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞的效率明顯地被抑制，在20％FBS時(shí)轉(zhuǎn)染效率只有無血清時(shí)對(duì)照的11％。
實(shí)施例8SA脂質(zhì)體在有血清存在時(shí)轉(zhuǎn)染NB-1細(xì)胞1.pCH110質(zhì)粒DNA同實(shí)施例7。
2.細(xì)胞NB-1(Neuroblastoma，Human)細(xì)胞株是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)獲得的。
3.Lipofectin(GIBCO BRL Co.，)介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染同實(shí)施例7。
4.SA脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染同實(shí)施例7，不同點(diǎn)僅在于用NB-1替換COS細(xì)胞。
5.基因表達(dá)的測(cè)定同實(shí)施例7。
6.蛋白含量用Folin酚法(Lowry法)測(cè)定同實(shí)施例7。
7.結(jié)果NB-1屬于神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，它通常較難被轉(zhuǎn)染。血清對(duì)SA脂質(zhì)體和Lipofectin轉(zhuǎn)染NB-1細(xì)胞有完全不同的影響，兩種方法的劑量-反應(yīng)曲線的走向相反，在20％FBS SA脂質(zhì)體存在下有十五倍于無血清條件的轉(zhuǎn)染活力，而Lipofectin則下降到無血清時(shí)的20％。(見圖6)。
實(shí)施例9SA脂質(zhì)體在有血清存在時(shí)轉(zhuǎn)染P19細(xì)胞1.pCH110質(zhì)粒DNA同實(shí)施例7。
2.細(xì)胞P19(Embryonic carcinoma，mouse)細(xì)胞株是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)獲得的。
3.Lipofectin(GIBCO BRL Co.，)介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染同實(shí)施例7。
4.SA脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染同實(shí)施例7，不同點(diǎn)僅在于用P19細(xì)胞替換了COS細(xì)胞。
5.基因表達(dá)的測(cè)定同實(shí)施例7。
6.蛋白含量用Folin酚法(Lowry法)測(cè)定同實(shí)施例7。
7.結(jié)果P19是一株胚胎性癌細(xì)胞，是畸胎瘤中的干細(xì)胞，具有發(fā)育的多潛能，通過誘導(dǎo)可模擬多種組織的胚胎發(fā)育過程，被許多實(shí)驗(yàn)室用作神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生的體外研究模型。在不同血清濃度梯度存在下的SA脂質(zhì)體和Lipofectin轉(zhuǎn)染的比較實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SA脂質(zhì)體在10％FBS時(shí)獲得了最佳值，且所有在含有血清時(shí)的轉(zhuǎn)染值均大于無血清；而Lipofectin的轉(zhuǎn)染隨血清濃度的增高，轉(zhuǎn)染活力下降(20％FBS時(shí)為無血清時(shí)的60％)(見圖7)。
實(shí)施例10
SA脂質(zhì)體在有血清存在時(shí)轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞按實(shí)施例7所述的方法進(jìn)行試驗(yàn)，不同點(diǎn)僅在于用PC12(Adrenalpheochromocytoma，rat)細(xì)胞株(從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American TypeCulture Collection)獲得)替換COS細(xì)胞。
PC12是一種大鼠腎上腺嗜鉻癌細(xì)胞，常被用作細(xì)胞模型。PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中，SA脂質(zhì)體在6％的FBS+HS混合血清時(shí)獲得最佳轉(zhuǎn)染值，且所有血清條件下的轉(zhuǎn)染值均大于無血清；而Lipofectin隨血清濃度轉(zhuǎn)染活力遞減(20％FBS時(shí)為無血清條件的10％)(圖8)。
討論為了闡明SA脂質(zhì)體體外轉(zhuǎn)染的機(jī)制和適用范圍，在實(shí)施例7-10等試驗(yàn)中選擇了不同來源有代表性的常用的二十多種細(xì)胞株(部分?jǐn)?shù)據(jù)未示出)，用SA脂質(zhì)體結(jié)合磷酸鈣共沉淀法、Lipofectin法分別介導(dǎo)質(zhì)粒PCH110或質(zhì)粒PSK110進(jìn)入細(xì)胞，測(cè)定其β半乳糖苷酶的活力以進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的轉(zhuǎn)染方法有明顯不同的細(xì)胞選擇性，每種轉(zhuǎn)染方法都有最適合高表達(dá)的細(xì)胞株?？傮w結(jié)果表明，SA脂質(zhì)體有較理想的轉(zhuǎn)染能力。
一般說來，硬脂胺脂質(zhì)體與Lipofectin試劑的效果比磷酸鈣來得好。而SA脂質(zhì)體應(yīng)用范圍及效果更好一些。SA脂質(zhì)體的絕對(duì)最佳選擇率和相對(duì)最佳選擇率均比Lipofectin法和磷酸鈣共沉淀法高，對(duì)一些細(xì)胞如CV-1、CHO等細(xì)胞有特異性的高表達(dá)，且PA-1、NRK49F等細(xì)胞只能用SA法轉(zhuǎn)染，考慮到不同轉(zhuǎn)染方法的互補(bǔ)性、穩(wěn)定性以及潛在的價(jià)格因素，SA陽離子脂質(zhì)體是介導(dǎo)基因進(jìn)入真核細(xì)胞的一種有效的新的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
實(shí)施例11體外SA脂質(zhì)體對(duì)寡核苷酸轉(zhuǎn)染效率的影響1.寡核苷酸的制備按“分子克隆實(shí)驗(yàn)指南”中的方法。
2.SA脂質(zhì)體(2mg/ml)的制備。
制法同實(shí)施例1。
3.細(xì)胞7721人肝癌細(xì)胞株是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American TypeCulture Collection)獲得的。
4.轉(zhuǎn)染方法處于指數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌7721細(xì)胞以1×104/每毫升接種在1000微升含10％胎牛血清(FBS)(GIBCO Co.，)的1640培養(yǎng)液(GIBCO Co.，)的24孔培養(yǎng)板中，37℃、5％二氧化碳培養(yǎng)24小時(shí)。用無血清的1640培養(yǎng)液洗2次。分別以1∶5、1∶10、1∶15、1∶20比率(寡核苷酸和SA脂質(zhì)體的重量比)包裹5×104dpm32P標(biāo)記的寡核苷酸及4微克未標(biāo)記的寡核苷酸，繼續(xù)在37℃、5％CO2培養(yǎng)12小時(shí)。用冷的Hank′s液洗3次，加1000微升1％SDS(SIGMA Co.，)溶解細(xì)胞。經(jīng)LS-6500液閃儀計(jì)數(shù)dpm值。5.結(jié)果

結(jié)果顯示，SA脂質(zhì)體能顯著提高寡核苷酸的轉(zhuǎn)染效率，在1∶15時(shí)已接近達(dá)最高轉(zhuǎn)染效率。體外SA脂質(zhì)體對(duì)寡核苷酸轉(zhuǎn)染效率的影響結(jié)果顯示，SA陽離子脂質(zhì)體能提高寡核苷酸的轉(zhuǎn)染效率達(dá)60倍。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，它含有藥物活性成分和作為藥物載體的SA脂質(zhì)體。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的藥物活性成分選自多肽、蛋白質(zhì)、核酸。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述的藥物活性成分是多肽或蛋白，且多肽或蛋白與SA脂質(zhì)體的重量比為1∶10～1∶300。
4.如權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述的藥物活性成分是核酸，且其與SA脂質(zhì)體的重量比為1∶10～1∶300。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的SA脂質(zhì)體是CH3-(CH2)16-CH2-+NH3∶C41H78NO8P(DOPE)＝0.8∶1～1∶0.8(w/w)。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，所述的活性成分選自降鈣素、人降鈣素類似物I、人降鈣素類似物II、成骨生長(zhǎng)肽。
7.SA脂質(zhì)體的用途，其特征在于，作為藥物載體用于制備藥物。
8.如權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述藥物中的活性成分選白多肽、蛋白質(zhì)、核酸。
9.一種轉(zhuǎn)染方法，其特征在于，將核酸與SA脂質(zhì)體脂質(zhì)體以重量比1∶10.-1∶20混合，然后轉(zhuǎn)染。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的核酸選自DNA、RNA、寡核苷酸、反義核酸、或其混合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種安全、高效的藥物載體，即SA脂質(zhì)體。還提供了含有SA脂質(zhì)體作為藥物載體的藥物組合物。SA脂質(zhì)體與多肽、蛋白、核酸等各種藥物活性成分一起使用時(shí)，免疫原性小，穩(wěn)定性好。對(duì)于多肽藥物，SA脂質(zhì)體能延長(zhǎng)其半衰期且具有一定的藥物緩釋作用。對(duì)于核酸藥物，SA脂質(zhì)體可在血清存在下高效轉(zhuǎn)染各類哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1473621SQ0213643
公開日2004年2月11日 申請(qǐng)日期2002年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月9日
發(fā)明者林其誰, 王瓞, 崔大敷, 宣海星, 楊靜平 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所, 中國(guó)科學(xué)院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究