專利名稱：自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置和使用該裝置制備脂質(zhì)體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及脂質(zhì)體制備裝置，特別涉及自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置和使用該裝置制備脂質(zhì)體的方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體(liposome，又稱之為脂小球)，是由磷脂雙層膜構(gòu)成的中空小球。構(gòu)成脂質(zhì)體的主要成分是磷脂和其他類脂化合物。早在1961年英國學(xué)者Bangham和Standish就發(fā)現(xiàn)當(dāng)磷脂分子分散在水中時(shí)會(huì)自然形成有序排列的類似生物膜結(jié)構(gòu)的多層囊泡。囊泡的每一脂質(zhì)層均以有序排列的磷脂雙分子構(gòu)成；囊泡中央和各層之間被水相隔開。后來人們將這種具有雙層膜形態(tài)的類似生物膜結(jié)構(gòu)的中空小球通稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的性質(zhì)和粒徑依其制備方法，所用材料以及組成的不同而差異很大。通常按其結(jié)構(gòu)所包含的雙層磷脂膜層數(shù)，電荷性質(zhì)，功能，用途等來對(duì)脂質(zhì)體加以分類。這些分類法由于著眼點(diǎn)不同往往強(qiáng)調(diào)了脂質(zhì)體某一方面的特性，各種分類有著各自不同的優(yōu)缺點(diǎn)。
(一)按脂質(zhì)體的形狀和粒徑分類脂質(zhì)體可以按其形狀和粒徑分類。不同的制備方法會(huì)形成形狀和粒徑差異很大的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可以制備的非常小(大約25nm，理論可以達(dá)到的最小粒徑)，也可以非常大(1μm至5μm，相當(dāng)于動(dòng)物細(xì)胞的粒徑)。它們可以包含多層磷脂雙層膜，也可以僅含單層磷脂雙層膜。由于脂質(zhì)體的粒徑對(duì)其應(yīng)用影響很大，故按其形狀和粒徑分類是目前最常用的分類方法。
1、多室脂質(zhì)體(又稱多層脂質(zhì)體，Multilamellar vesicles MLVs)含有多層磷脂雙層膜的脂質(zhì)體稱為多室脂質(zhì)體，其粒徑≤10μm(多為300-5000nm)。一般來說多室脂質(zhì)體含五層以上的磷脂雙層膜。含三到五層磷脂雙層膜的脂質(zhì)體稱為復(fù)層脂質(zhì)體(Oligo-lamellar vesicles)。為了方便，很多時(shí)候人們把復(fù)層和多室脂質(zhì)體統(tǒng)統(tǒng)稱為多室脂質(zhì)體。
2、小單室脂質(zhì)體(Small unilamellar vesicles SUVs) 由一層磷脂雙層膜所構(gòu)成的脂質(zhì)體。小單室脂質(zhì)體的粒徑小于50nm。隨著脂質(zhì)體的粒徑遞減，其球體弧度增加，隨之造成磷脂雙層膜內(nèi)外膜的不對(duì)稱。這種內(nèi)外膜的不對(duì)稱性在小單室脂質(zhì)體中表現(xiàn)的尤其突出。比如25nm小單室脂質(zhì)體(磷脂雙層膜的厚度為4-5nm)它的外層膜占用了70％磷脂。內(nèi)外膜的不對(duì)稱性使得小單室脂質(zhì)體的球面有很大的張力。所以相對(duì)于大單室脂質(zhì)體來說，小單室脂質(zhì)體不穩(wěn)定，易于融合。
3、大單室脂質(zhì)體(Large unilamellar vesicles LUVs)由一層磷脂雙層膜所構(gòu)成的脂質(zhì)體。其與小單室脂質(zhì)體的區(qū)別僅在于粒徑的大小不同。大單室脂質(zhì)體的粒徑一般在80-200nm左右。其在血液中的長時(shí)效，高藥物包裹量，穩(wěn)定性，決定了大單室脂質(zhì)體是理想的靜脈給藥藥物載體。目前已上市的脂質(zhì)體藥物多數(shù)是大單室脂質(zhì)體。
(二)按表面電荷性質(zhì)分類1、中性脂質(zhì)體主要由卵磷脂，不帶電荷的磷脂以及其他不帶電荷的類脂化合物構(gòu)成的脂質(zhì)體。
2、負(fù)電性脂質(zhì)體就脂質(zhì)體整體而言，呈負(fù)電性。其磷脂組份中含有部分帶負(fù)電荷的磷脂，如磷脂酰絲胺酸(PS)，磷脂酰肌醇(PI)，以及磷脂酰甘油脂(PG)。
3、正電性脂質(zhì)體脂質(zhì)體呈正電性。其磷脂組份中含有部分帶正電荷的化合物，如兩-十八烷-兩-甲基胺鹽(DODAC)，十八氨。近年來正電性脂質(zhì)體作為非病毒基因藥物的載體受到了廣泛的關(guān)注。
(三)按功能分類1.普通脂質(zhì)體包括上述單室脂質(zhì)體、多室脂質(zhì)體和多相脂質(zhì)體等。
2.長效脂質(zhì)體可以在血液中保留較長一段時(shí)間。其表面多以聚乙二醇，甲基聚噁唑啉，聚乙烯吡加以修飾。
3.智能脂質(zhì)體利用某些身體內(nèi)外特殊理化性質(zhì)而構(gòu)造的脂質(zhì)體。這類脂質(zhì)體隨外界條件的變化而變化?？梢远〞r(shí)，定點(diǎn)，定量的釋放藥物。包括了熱敏，酸敏，光敏，磁敏，可控釋放和靶向給藥。
(四)按脂質(zhì)體發(fā)展斷代分類這一分類法主要側(cè)重于脂質(zhì)體作為給藥載體的發(fā)展歷史及重要的代有突破性的脂質(zhì)體功能改進(jìn)指標(biāo)而言，很難有一個(gè)公認(rèn)的統(tǒng)一說法。
1、第一代脂質(zhì)體藥物被天然或人工合成磷脂，膽固醇組成的雙層膜包裹的最基本，最簡(jiǎn)單的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)。主要功能為降低毒性和增加藥效。已上市生產(chǎn)的脂質(zhì)體藥物多屬此類比如脂質(zhì)體兩性霉素(商品名，AmBisome)，脂質(zhì)體阿霉素(Myocet)和脂質(zhì)體柔紅霉素(DaunoXome)已經(jīng)通過FDA認(rèn)證，上市生產(chǎn)。
2、第二代脂質(zhì)體表面用聚乙二醇-磷脂衍生物(PEG-lipids)修飾的脂質(zhì)體。修飾后的脂質(zhì)體提高了藥物在血液中的保存時(shí)間，增加了藥物的被動(dòng)靶向功能。聚乙二醇-脂質(zhì)體阿霉素(Doxil)已經(jīng)通過FDA認(rèn)證，上市生產(chǎn)，多種聚乙二醇-脂質(zhì)體藥物也已進(jìn)入臨床II/III期實(shí)驗(yàn)。
3、第三代脂質(zhì)體表面用聚乙二醇-磷脂衍生物(PEG-lipids)修飾的并且在聚乙二醇終端引入靶向基團(tuán)的脂質(zhì)體。提高了主動(dòng)靶向功能，從而顯著提高藥效。這些靶向基團(tuán)可以是單克隆抗體，多糖，多肽和維生素。
這類脂質(zhì)體藥物也已進(jìn)入臨床I/II期實(shí)驗(yàn)。
4、第四代脂質(zhì)體通過修飾而使脂質(zhì)體具有靶向性，可控緩釋性，酸敏融合性，和其他可控性能，從而顯著提高藥效。這類脂質(zhì)體藥物具有一定的可控性，亦稱作智能脂質(zhì)體。第四代脂質(zhì)體還處于實(shí)驗(yàn)室研究階段。
(五)按用途和給藥途徑分類1、靜脈滴注脂質(zhì)體。
2、外用(經(jīng)皮給藥)脂質(zhì)體。
3、口服脂質(zhì)體。
4、眼藥脂質(zhì)體。
5、呼吸道給藥脂質(zhì)體。
6、粘膜給藥脂質(zhì)體。
7、肌注和局部給藥脂質(zhì)體。
8、多肽，蛋白和基因給藥脂質(zhì)體。
9、脂質(zhì)體疫苗。
10、其它用途的脂質(zhì)體。
(六)、傳統(tǒng)脂質(zhì)體工業(yè)制備方法和缺陷1)、機(jī)械分散法各種磷脂敷料(如果是脂溶性藥物，也應(yīng)包括在此部分)均勻的溶于有機(jī)溶劑中，將有機(jī)溶劑蒸掉后制成均勻的薄膜。在磷脂薄膜容器中加入配方量的水或緩沖液或水溶性藥液，用機(jī)械分散法使薄膜分散于水相既可形成脂質(zhì)體。在脂質(zhì)體形成的同時(shí)，即可成功的將水溶性藥物包裹在脂質(zhì)體空囊內(nèi)，或?qū)⒂腿苄运幬锇谥|(zhì)體雙層膜內(nèi)。脂質(zhì)體的粒徑可以用不同粒徑控制裝置縮小至需要的粒徑尺寸。未包裹的藥物可以用的透析裝置加以分離。
機(jī)械分散法的局限在于磷脂薄膜形成步驟受溶劑蒸發(fā)設(shè)備的影響和限制，既不易制成均勻的磷脂薄膜，也不易大規(guī)模生產(chǎn)。此法的藥物包裹效率取決于磷脂膜在水相中機(jī)械分散程度的好壞。另外如果磷脂膜在水中機(jī)械分散程度不好，形成的多相多室脂質(zhì)體粒徑太大，會(huì)使脂質(zhì)體粒徑的縮小非常困難。
2)、溶劑分散法用與水混溶的有機(jī)溶劑溶解磷脂敷料和(或)脂溶性藥物，將有機(jī)磷脂藥物溶液緩慢的加入用攪拌的水溶液中，有機(jī)溶劑在水相中分散后磷脂被迫形成多相多室脂質(zhì)體藥物溶液。形成的脂質(zhì)體粒徑和包藥量受有機(jī)溶液和水的比例、攪拌速度、溶液溫度、水溶液pH、溶液粒子強(qiáng)度、藥物的理化性質(zhì)、磷脂的種類和配方等多種因素的影響。一般來說，有機(jī)溶液量在最終液體中的含量應(yīng)該在7％-20％之間。
由于該制備法要求有機(jī)溶液量在最終液體中的含量應(yīng)該在7％-20％之間，而磷脂在所用溶劑中的溶解度又不可能太大，所以此法制備的脂質(zhì)體濃度很低，如果沒有有效的濃縮設(shè)備，制成的脂質(zhì)體藥液濃度達(dá)不到臨床用藥濃度的要求。同時(shí)，此法的藥物包裹效率和脂質(zhì)體粒徑的大小取決于制備過程中有機(jī)溶液的滴加速度和混合溶液的攪拌速度，當(dāng)大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)有機(jī)溶液的滴加速度很難控制，且機(jī)械分散速度亦難達(dá)到理想水平。
3)、表面活性劑分散法對(duì)許多大分子化合物前述兩種方法很難包裹有效量的藥物。所以由此產(chǎn)生了表面活性劑分散法。該方法將大分子化合物、磷脂、表面活性劑按一定比例溶解在水溶液中，利用透析裝置緩慢的將表面活性劑除掉即可制成脂質(zhì)體藥物。此法已被用于脂質(zhì)體基因藥物，脂質(zhì)體蛋白藥物以及脂質(zhì)體多肽藥物的制備。
該制備法要求表面活性劑的CMC值在5-20之間，同時(shí)使用的表面活性劑不能影響大分子的生物活性。為了提高藥物的包埋率，常常在配方中使用帶電荷的磷脂或經(jīng)過高分子修飾的磷脂。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在設(shè)計(jì)一種自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置和使用該裝置制備脂質(zhì)體的方法。該裝置應(yīng)用了溶劑分散法制備脂質(zhì)體的原理，通過高壓泵將溶于有機(jī)相的磷脂和脂溶性藥物與水溶液在溶液混合器中高壓快速混合使之形成多相多層脂質(zhì)體，這樣就可以避免了傳統(tǒng)溶劑分散法有機(jī)溶液的滴加速度很難控制和機(jī)械分散速度難達(dá)到理想水平的缺陷。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種用于制備脂溶性和水溶性藥物的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特點(diǎn)是，該裝置包括一磷脂溶液罐1，磷脂溶液罐1通過第一三通閥2與第一有機(jī)高壓泵3連通；一藥液罐5，藥液罐5與第二有機(jī)高壓泵4連通；第一有機(jī)高壓泵3和第二有機(jī)高壓泵4分別和一混合器6連通；混合器6與一縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器7相連，并與一脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8的一入口端相通；脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8底部的出口端通過第二三通閥9和第一三通閥2、連接盤式控制閥10分別相連通；一緩沖液罐12，緩沖液罐12的入口端與脂質(zhì)體罐8的另一入口端連通，并與一控制閥13連通，控制閥13的另一端與一提純脂質(zhì)體用的超濾器15的一端相連通；緩沖液罐12的出口端通過第三三通閥11與一高壓泵14連接；通過高壓泵14和提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15的另一端連接；提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15通過另一控制閥16還和一廢液罐17相連。
該裝置的其它特點(diǎn)是，所說的有機(jī)溶液高壓泵2、4和高壓泵14是單缸、雙缸活塞式有機(jī)溶液高壓泵，轉(zhuǎn)輪式有機(jī)溶液高壓泵，往復(fù)式有機(jī)溶液高壓泵，高效液相輸液泵，制備用高效液相輸液泵的任一種。
所說的儲(chǔ)藏罐8是水浴控溫儲(chǔ)液罐、蒸汽控溫儲(chǔ)液罐、電控溫儲(chǔ)液罐、無控溫裝置的儲(chǔ)液罐中的任一種。
所說的縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器7是，帶可控溫裝置或無控溫裝置的脂質(zhì)體薄膜擠壓器(extruder)，或均質(zhì)機(jī)(homogenizer)，或微粒流質(zhì)化處理器(microfluidizer processor)或其它脂質(zhì)體粒徑控制設(shè)備。
所說的磷脂溶液罐1、擠壓器7、脂質(zhì)體罐8和緩沖液罐12上均帶有控溫裝置。
所說的提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15是中空纖維超濾透析柱，或凝膠超濾透析柱，或膜超濾透析柱。
采用上述自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法是，整個(gè)脂質(zhì)體生產(chǎn)過程在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行，并按以下方法進(jìn)行1)將處方量的脂溶性藥物、脂質(zhì)體材料的卵磷脂、膽固醇、脂質(zhì)體材料的油酸和抗氧化劑的維生素E加入有機(jī)溶劑，加熱使之充分溶解后注入有磷脂溶液罐1中；如果用此法包裹水溶性藥物時(shí)，水溶性藥物在水溶液或緩沖液加熱使之充分溶解后注入藥液罐5中；2)將有機(jī)磷脂藥物和水溶液分別用第一有機(jī)高壓泵3和第二有機(jī)高壓泵4壓入混合器6中，在混合器中高壓機(jī)磷脂藥物和水溶液快速混合使得有機(jī)溶劑快速、均勻分散在水中，迫使磷脂形成多相多室脂質(zhì)體藥物溶液；3)通過擠壓器7即可得到粒徑縮小了的脂質(zhì)體溶液；縮小粒徑的工藝過程可以反復(fù)進(jìn)行，脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8中的脂質(zhì)體溶液可以通過有機(jī)高壓泵3、混合器6和擠壓器7循環(huán)重復(fù)操作，直至達(dá)到所需粒徑范圍的脂質(zhì)體溶液；
4)然后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓泵14壓入高壓超濾透析柱15，有機(jī)溶劑和未被包裹的藥物會(huì)透析出來；反復(fù)進(jìn)行超濾透析過程即可以得到提純的脂質(zhì)體藥物產(chǎn)品，最終產(chǎn)品應(yīng)該是均勻的乳狀溶液，沒有沉淀，分層現(xiàn)象；5)將上述得到的產(chǎn)品裝瓶后在2℃-8℃條件下貯藏。
上述使用自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法；所述的脂溶性藥物是①抗菌藥物包括柔紅霉素、兩性霉素B；②抗癌藥物包括5-氟脲嘧啶、鹽酸阿霉素、鹽酸表阿霉素、硫酸長春新堿、拓?fù)涮婵?、米托蒽醌、紫杉醇、多烯紫杉醇；以及③脂溶性藥物包括咪康唑、伊曲康唑、益康唑、酮康唑、氟康唑、芬替康唑、硫康唑、噻康唑、舍他康唑、特康唑、氯康唑、異康唑、氟曲康唑等和水溶性藥物；所述脂質(zhì)體材料卵磷脂是蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂、鞘磷脂。
所述處方量的脂溶性藥物用量為0.1％-16％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的磷脂的用量為50％-80％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的膽固醇的用量為0-30％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的油酸的用量為0-10％(摩爾比)；作為抗氧化劑的維生素E的用量為0-0.4％(摩爾比)。
所述脂質(zhì)體的粒徑可以是80nm，100nm，200nm，400nm，800nm和不同粒徑的多相多室脂質(zhì)體。
本發(fā)明的裝置將有機(jī)溶液高壓泵、溶液混合器、脂質(zhì)體粒徑控制設(shè)備和高壓超濾透析柱聯(lián)合組成聯(lián)動(dòng)成為一體，從投料到獲得脂質(zhì)體成品的整個(gè)過程一氣哈成，減少了不必要的中間過程，生產(chǎn)規(guī)模可依需要調(diào)節(jié)，產(chǎn)品的質(zhì)量可控，不僅適用于脂溶性、也適用于水溶性藥物。實(shí)驗(yàn)證明用該裝置制備的脂質(zhì)體的大小可控，粒徑均勻，粒徑分布窄。用該裝置制備的前體脂質(zhì)體可以形成有效的pH或離子梯度，從而可以利用梯度法高效率的包裹弱堿弱酸性藥物。
四

圖1是本發(fā)明的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置示意圖；圖2是本發(fā)明的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置制成的脂質(zhì)體的冷凍切片電子顯微照片。
五具體實(shí)施例方式
為了更清楚的理解本發(fā)明，以下結(jié)合發(fā)明人給出的依本發(fā)明的技術(shù)方案所完成的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
5.1、設(shè)備裝置和脂質(zhì)體生產(chǎn)工藝流程5.1.1、設(shè)備裝置圖參見圖1，裝置包括一磷脂溶液罐1，磷脂溶液罐1通過第一三通閥2與第一有機(jī)高壓泵3連通；一藥液罐5，藥液罐5與第二有機(jī)高壓泵4連通；第一有機(jī)高壓泵3和第二有機(jī)高壓泵4分別和一混合器6連通；混合器6與一縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器7相連，并與一脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8的一入口端相通；脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8底部的出口端通過第二三通閥9和第一三通閥2、連接盤式控制閥10分別相連通；一緩沖液罐12，緩沖液罐12的入口端與脂質(zhì)體罐8的另一入口端連通，并與一控制閥13連通，控制閥13的另一端與一提純脂質(zhì)體用的超濾器15的一端相連通；緩沖液罐12的出口端通過第三三通閥11與一高壓泵14連接；通過高壓泵14和提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15的另一端連接；提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15通過另一控制閥16還和一廢液罐17相連。
有機(jī)溶液高壓泵2、4和高壓泵14是單缸、雙缸活塞式有機(jī)溶液高壓泵，轉(zhuǎn)輪式有機(jī)溶液高壓泵，往復(fù)式有機(jī)溶液高壓泵，高效液相輸液泵，制備用高效液相輸液泵的任一種。
儲(chǔ)藏罐8是水浴控溫儲(chǔ)液罐、蒸汽控溫儲(chǔ)液罐、電控溫儲(chǔ)液罐、無控溫裝置的儲(chǔ)液罐中的任一種。
縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器7是，帶可控溫裝置或無控溫裝置的脂質(zhì)體薄膜擠壓器(extruder)，或均質(zhì)機(jī)(homogenizer)，或微粒流質(zhì)化處理器(microfluidizer processor)或其它脂質(zhì)體粒徑控制設(shè)備。
磷脂溶液罐1、擠壓器7、脂質(zhì)體罐8和緩沖液罐12上均帶有控溫裝置。
所說的提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱15是中空纖維超濾透析柱，或凝膠超濾透析柱，或膜超濾透析柱。
上述脂質(zhì)體制備裝置的設(shè)計(jì)基于溶劑分散法制備脂質(zhì)體的原理，用兩臺(tái)高壓輸液泵分別將有機(jī)溶劑和水溶液高壓、快速注入混合器，使之充分、有效、均勻的混合生成脂質(zhì)體；將制備脂質(zhì)體的多種步驟和設(shè)備合理的連接在一起，使得脂質(zhì)體制備、粒徑控制、提純和脂質(zhì)體濃縮一步完成，避免了制劑中間體的反復(fù)轉(zhuǎn)移，減少了不必要的中間過程；生產(chǎn)規(guī)?？梢佬枰{(diào)節(jié)，產(chǎn)品的質(zhì)量可控；裝置適用面廣，可用于制備脂溶性和水溶性藥物。
5.1.2、生產(chǎn)工藝整個(gè)脂質(zhì)體生產(chǎn)過程在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。
處方量卵磷脂，膽固醇和脂溶性藥物加入有機(jī)溶劑，加熱使之充分溶解后注入有機(jī)溶液儲(chǔ)藏罐1中。如果用此法包裹水溶性藥物時(shí)，水溶性藥物在水溶液或緩沖液加熱使之充分溶解后注入水溶液儲(chǔ)藏罐5中。將有機(jī)磷脂藥物和水溶液分別用高壓泵3和4壓入混合器6中，在混合器中高壓機(jī)磷脂藥物和水溶液快速混合使得有機(jī)溶劑快速、均勻分散在水中，迫使磷脂形成多相多室脂質(zhì)體藥物溶液。通過粒徑控制器7即可得到粒徑縮小了的脂質(zhì)體溶液?？s小粒徑的工藝過程可以反復(fù)進(jìn)行，脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐8中的脂質(zhì)體溶液可以通過高壓泵3、混合器6和粒徑控制器7這一循環(huán)重復(fù)操作，直至達(dá)到所需粒徑范圍的脂質(zhì)體溶液。然后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓泵14壓入高壓超濾透析柱15，有機(jī)溶劑和未被包裹的藥物會(huì)透析出來。反復(fù)進(jìn)行超濾透析過程即可以得到提純的脂質(zhì)體藥物產(chǎn)品。最終產(chǎn)品應(yīng)該是均勻的乳狀溶液，沒有沉淀，分層現(xiàn)象。產(chǎn)品裝瓶后應(yīng)在2℃-8℃條件下貯藏。
以下是發(fā)明人給出的實(shí)施例，本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1使用自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置制備100nm粒徑的脂質(zhì)體脂質(zhì)體配方

將處方量的卵磷脂，膽固醇和維生素E加入20ml乙醇，加熱至45℃攪拌使之完全溶解后加入有機(jī)儲(chǔ)液罐中，將180ml注射用水加入水溶液儲(chǔ)液罐中，擠壓器內(nèi)置雙層100nm濾膜。開動(dòng)輸液泵，將乙醇輔料溶液和180ml注射用水分別通過高效液相色譜制備泵A和B壓入新型自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的混合器和擠壓器。調(diào)節(jié)梯度泵使水相泵與有機(jī)相泵的流量比為20-30∶70-80，收集并檢測(cè)產(chǎn)品的粒徑，如過大可將脂質(zhì)體溶液重新泵入混合器和擠壓器。最終可得粒徑范圍在80-180nm的脂質(zhì)體溶液。然后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓泵14壓入高壓超濾透析柱15，有機(jī)溶劑會(huì)被包透析出來。反復(fù)進(jìn)行超濾透析過程即可以得到提純的脂質(zhì)體藥物產(chǎn)品。
用同樣方法發(fā)明人制備了不同粒徑的脂質(zhì)體。制備脂質(zhì)體所不同粒徑的薄膜和對(duì)應(yīng)的制成的脂質(zhì)體的冷凍切片電子顯微照片如圖2所示實(shí)施例2使用本發(fā)明的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置制備100nm粒徑的可用于pH梯度法包裹藥物的脂質(zhì)體用本發(fā)明的裝置制備的脂質(zhì)體可以用來包裹所有用傳統(tǒng)pH梯度法可以包裹的藥物，僅以脂質(zhì)體阿霉素的制備為例加以驗(yàn)證。
脂質(zhì)體配方

將處方量的卵磷脂，膽固醇和維生素E加入20ml乙醇，加熱至45℃攪拌使之完全溶解后加入有機(jī)儲(chǔ)液罐中，將180ml的400mM，pH4酒石酸溶液加入水溶液儲(chǔ)液罐中，擠壓器內(nèi)置雙層100nm濾膜。開動(dòng)輸液泵，將乙醇輔料溶液和的400mM酒石酸溶液分別通過高效液相色譜制備泵A和B壓入新型自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的混合器和擠壓器。調(diào)節(jié)梯度泵使水相泵與有機(jī)相泵的流量比為20-30∶70-80，收集并檢測(cè)產(chǎn)品的粒徑，如過大可將脂質(zhì)體溶液重新泵入混合器和擠壓器。最終可得粒徑在120nm±40nm的脂質(zhì)體溶液。然后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓泵14壓入高壓超濾透析柱15，用400mM，pH4酒石酸溶液作為透析補(bǔ)充液將有機(jī)溶劑除去。反復(fù)進(jìn)行超濾透析過程即可以得到提純的可用于pH梯度法包裹藥物的脂質(zhì)體。
將50mg鹽酸阿霉素加入2ml包有400mM，pH4酒石酸的脂質(zhì)體溶液，待鹽酸阿霉素完全溶解后用pH10的Na2CO3溶液調(diào)節(jié)溶液的酸堿至pH8，置盛有藥液的小瓶于60℃水浴中20min。超速離心檢測(cè)證明藥物包埋率達(dá)到99％以上。
實(shí)施例3使用新型自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置制備脂溶性藥物脂質(zhì)體本發(fā)明裝置可以用來制備所有脂溶性藥物脂質(zhì)體，僅以脂質(zhì)體咪康唑的制備為例加以驗(yàn)證。
藥物脂質(zhì)體處方

處方量卵磷脂，膽固醇，油酸，硝酸咪康唑，氮酮，維生素E和薄荷油加入40ml乙醇，加熱至45℃攪拌使之完全溶解后加入有機(jī)儲(chǔ)液罐中，將180ml的純凈加入水溶液儲(chǔ)液罐中，擠壓器內(nèi)置雙層200nm濾膜。開動(dòng)輸液泵，將乙醇輔料溶液和的水分別通過高效液相色譜制備泵A和B壓入新型自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的混合器和擠壓器。調(diào)節(jié)梯度泵使水相泵與有機(jī)相泵的流量比為20-30∶70-80，收集并檢測(cè)產(chǎn)品的粒徑，如粒徑過大可將脂質(zhì)體溶液重新泵入混合器和擠壓器。最終可得粒徑在210nm±30nm的脂質(zhì)體藥物溶液。由于脂質(zhì)體咪康唑?qū)⒂糜谥委熎つw病，所以乙醇不需除去。生產(chǎn)中不需動(dòng)用超濾透析裝置。
取400ml純凈水緩慢的加入200ml的脂質(zhì)體咪康唑溶液中。加入時(shí)應(yīng)注意緩慢攪拌。最終產(chǎn)品為均勻的乳狀溶液，沒有沉淀，分層現(xiàn)象。稀釋后脂質(zhì)體粒徑212m±30nm與混合前相比沒有顯著變化。產(chǎn)品灌裝后在2℃-15℃和避光條件下貯藏。
綜上所述的實(shí)施例可以例舉許許多多，發(fā)明人在大量的實(shí)驗(yàn)中證明，只要在本發(fā)明提出的權(quán)利要求保護(hù)的范圍內(nèi)，都可以達(dá)到本發(fā)明的目的，在此不一一例舉。
權(quán)利要求
1.一種用于制備脂溶性和水溶性藥物的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，該裝置包括—磷脂溶液罐[1]，磷脂溶液罐[1]通過第一三通閥[2]與第一有機(jī)高壓泵[3]連通；—藥液罐[5]，藥液罐[5]與第二有機(jī)高壓泵[4]連通；第一有機(jī)高壓泵[3]和第二有機(jī)高壓泵[4]分別和一混合器[6]連通；混合器[6]與一縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器[7]相連，并與一脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐[8]的一入口端相通；脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐[8]底部的出口端通過第二三通閥[9]和第一三通閥[2]、連接盤式控制閥[10]分別相連通；—緩沖液罐[12]，緩沖液罐[12]的入口端與脂質(zhì)體罐[8]的另一入口端連通，并與一控制閥[13]連通，控制閥[13]的另一端與一提純脂質(zhì)體用的超濾器[15]的一端相連通；緩沖液罐[12]的出口端通過第三三通閥[11]與一高壓泵[14]連接；通過高壓泵[14]和提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱[15]的另一端連接；提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱[15]通過另一控制閥[16]還和一廢液罐[17]相連。
2.按照權(quán)利要求所述1的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，所說的有機(jī)溶液高壓泵[2]、[4]和高壓泵[14]是單缸、雙缸活塞式有機(jī)溶液高壓泵，轉(zhuǎn)輪式有機(jī)溶液高壓泵，往復(fù)式有機(jī)溶液高壓泵，高效液相輸液泵，制備用高效液相輸液泵的任一種。
3.按照權(quán)利要求所述1的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，所說的儲(chǔ)藏罐[8]是水浴控溫儲(chǔ)液罐、蒸汽控溫儲(chǔ)液罐、電控溫儲(chǔ)液罐、無控溫裝置的儲(chǔ)液罐中的任一種。
4.按照權(quán)利要求所述1的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，所說的縮小脂質(zhì)體粒徑的擠壓器[7]是，帶可控溫裝置或無控溫裝置的脂質(zhì)體薄膜擠壓器(extruder)，或均質(zhì)機(jī)(homogenizer)，或微粒流質(zhì)化處理器(microfluidizerprocessor)或其它脂質(zhì)體粒徑控制設(shè)備。
5.按照權(quán)利要求所述1的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，所說的磷脂溶液罐[1]、擠壓器[7]、脂質(zhì)體罐[8]和緩沖液罐[12]上均帶有控溫裝置。
6.按照權(quán)利要求所述1的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置，其特征在于，所說的提純脂質(zhì)體用的高壓超濾透析柱[15]是中空纖維超濾透析柱，或凝膠超濾透析柱，或膜超濾透析柱。
7.實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1所述的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法；其特征在于，整個(gè)脂質(zhì)體生產(chǎn)過程在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行，并按以下方法進(jìn)行1)將處方量的脂溶性藥物、脂質(zhì)體材料的卵磷脂、膽固醇、脂質(zhì)體材料的油酸和抗氧化劑的維生素E加入有機(jī)溶劑，加熱使之充分溶解后注入有磷脂溶液罐[1]中；如果用此法包裹水溶性藥物時(shí)，水溶性藥物在水溶液或緩沖液加熱使之充分溶解后注入藥液罐[5]中；2)將有機(jī)磷脂藥物和水溶液分別用第一有機(jī)高壓泵[3]和第二有機(jī)高壓泵[4]壓入混合器[6]中，在混合器中高壓機(jī)磷脂藥物和水溶液快速混合使得有機(jī)溶劑快速、均勻分散在水中，迫使磷脂形成多相多室脂質(zhì)體藥物溶液；3)通過擠壓器[7]即可得到粒徑縮小了的脂質(zhì)體溶液；縮小粒徑的工藝過程可以反復(fù)進(jìn)行，脂質(zhì)體儲(chǔ)藏罐[8]中的脂質(zhì)體溶液可以通過有機(jī)高壓泵[3]、混合器[6]和擠壓器[7]循環(huán)重復(fù)操作，直至達(dá)到所需粒徑范圍的脂質(zhì)體溶液；4)然后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓泵[14]壓入高壓超濾透析柱[15]，有機(jī)溶劑和未被包裹的藥物會(huì)透析出來；反復(fù)進(jìn)行超濾透析過程即可以得到提純的脂質(zhì)體藥物產(chǎn)品，最終產(chǎn)品應(yīng)該是均勻的乳狀溶液，沒有沉淀，分層現(xiàn)象；5)將上述得到的產(chǎn)品裝瓶后在2℃-8℃條件下貯藏。
8.按照權(quán)利要求所述7的實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1所述的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法；其特征在于，所述的脂溶性藥物是①抗菌藥物包括柔紅霉素、兩性霉素B；②抗癌藥物包括5-氟脲嘧啶、鹽酸阿霉素、鹽酸表阿霉素、硫酸長春新堿、拓?fù)涮婵怠⒚淄休祯?、紫杉醇、多烯紫杉醇；以及③脂溶性藥物包括咪康唑、伊曲康唑、益康唑、酮康唑、氟康唑、芬替康唑、硫康唑、噻康唑、舍他康唑、特康唑、氯康唑、異康唑、氟曲康唑等和水溶性藥物；所述脂質(zhì)體材料卵磷脂是蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂、鞘磷脂。
9.按照權(quán)利要求所述7的實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1所述的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法；其特征在于，所述處方量的脂溶性藥物用量為0.1-16％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的磷脂的用量為50-80％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的膽固醇的用量為0-30％(摩爾比)；作為脂質(zhì)體材料的油酸的用量為0-10％(摩爾比)；作為抗氧化劑的維生素E的用量為0-0.4％(摩爾比)。
10.按照權(quán)利要求所述7的實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1所述的自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置的制備脂質(zhì)體的方法；其特征在于，所述脂質(zhì)體的粒徑可以是80nm，100nm，200nm，400nm，800nm和不同粒徑的多相多室脂質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種自動(dòng)化脂質(zhì)體制備裝置和使用該裝置制備脂質(zhì)體的方法，其制備裝置包含1)、高壓泵；2)、溶液混合器；3)、脂質(zhì)體粒徑控制設(shè)備；4)、高壓超濾透析柱。該裝置應(yīng)用了溶劑分散法制備脂質(zhì)體的原理，通過高壓泵將溶于有機(jī)相的磷脂和脂溶性藥物與水溶液在溶液混合器中高壓快速混合使之形成多相多層脂質(zhì)體，在高壓下迫使生成的多相多層脂質(zhì)體直接通過脂質(zhì)體擠壓器而得到大單室脂質(zhì)體，沒有包裹在脂質(zhì)體中的藥物和有機(jī)溶劑可以用高壓超濾透析柱除去。本發(fā)明將大規(guī)模生產(chǎn)脂質(zhì)體的必備裝置連接為一體，從投料到獲得脂質(zhì)體成品的整個(gè)過程一體化，減少了不必要的中間過程，生產(chǎn)規(guī)?？梢佬枰{(diào)節(jié)，產(chǎn)品的質(zhì)量可控，不僅適用于脂溶性、也適用于水溶性藥物。
文檔編號(hào)A61J3/00GK1483400SQ02139429
公開日2004年3月24日 申請(qǐng)日期2002年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月17日
發(fā)明者王九成, 惠民權(quán), 陳濤 申請(qǐng)人:西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司