專利名稱：一種治療慢性腎炎的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及用于治療慢性腎炎的中藥組合物，同時(shí)涉及該組合物的制備方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
背景技術(shù)：
慢性腎小球腎炎(簡(jiǎn)稱慢性腎炎，CGN)，是由多種原因、多種病理類型組成原發(fā)于腎小球的一組疾病。臨床特點(diǎn)為病程長(zhǎng)，可以有一段時(shí)間的無(wú)癥狀期，呈緩慢進(jìn)行性病程。尿常規(guī)檢查有不同程度的蛋白尿，尿沉渣鏡檢常可見(jiàn)到紅細(xì)胞，大多數(shù)患者有程度不等的高血壓和腎功能損害，治療困難，預(yù)后較差，它起病潛隱，臨床表現(xiàn)可輕可重或時(shí)輕時(shí)重，但總的說(shuō)來(lái)，是不停頓地逐漸發(fā)展至腎功能衰竭，而危及生命。
按照全國(guó)中醫(yī)腎病專業(yè)委員會(huì)制定的慢性腎炎辨證分型標(biāo)準(zhǔn)，在統(tǒng)計(jì)了200例慢性腎炎的證型中，脾腎氣虛證有96例，占48％氣陰兩虛證有77例，占38.5％； 肝腎陰虛證有23例，占11.5％；脾腎陽(yáng)虛證有4例，占2％。脾腎氣虛證是慢性腎炎最常見(jiàn)的證型，開(kāi)發(fā)治療慢性腎炎脾腎氣虛證的新藥，對(duì)于提高慢性腎炎治療效果有積極意義。
目前西藥在治療慢性腎炎上沒(méi)有很好的辦法，中醫(yī)中藥在治療慢性腎炎上有其獨(dú)特的效果，但在《國(guó)家基本用藥目錄》中治療慢性腎炎脾腎氣虛證的類似中成藥僅有腎炎四味片和腎炎消腫片。腎炎四味片，其效果一般。腎炎消腫片由于療效不理想，市場(chǎng)上近二年已沒(méi)有銷售。因此，臨床醫(yī)生需要、患者治療需要、市場(chǎng)供銷需要盡快開(kāi)發(fā)出治療慢性腎炎脾腎氣虛證有效且無(wú)副作用的中成藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物的制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于公開(kāi)一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)黃芪700-1000重量份茯苓300-500重量份淫羊藿100-300重量份 僵蠶200-500重量份全蝎30-50重量份 澤瀉100-300重量份石韋300-600重量份 青風(fēng)藤700-1000重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥黃芪優(yōu)選生黃芪；本發(fā)明藥物組合物制劑每0.35g，相當(dāng)于原藥材3.48g。
本藥物組合物的制備方法1.青風(fēng)藤粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1-2倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇浸漬6～8小時(shí)，取出、分層，將潤(rùn)濕的藥材松緊適度地裝于滲漉筒中，藥材裝填好后，先打開(kāi)浸液出口，再添加6-10倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱堿性；滲漉液于75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，即得青風(fēng)藤濃縮液；2.黃芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，得黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液；3.僵蠶、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，即得僵蠶、全蝎濃縮液；4.石韋、澤瀉一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，加90-96％的乙醇，使含醇量達(dá)65-80％，充分?jǐn)嚢?，e靜置10-14小時(shí)，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對(duì)密度為1.20-1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；5.將濃縮液青風(fēng)藤濃縮液和僵蠶、全蝎濃縮液混和，得混合物A；6.將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，得混合物B；
7.將上述兩種A、B混合物混合得本發(fā)明藥物組合物，該藥物組合物，經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，如片劑、口服液體制劑、膠囊、顆粒劑。
本組合物制成藥劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別和/或含量測(cè)定。
鑒別方法包括下列方法中的一種和/或幾種(a).取本組合物制劑3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(b).取本組合物制劑3.5g，，加60-80％乙醇40-60ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?-11ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-3次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(c).取本組合物制劑5.3g，加乙醚20-35ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚30-50ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(d).取本組合物制劑1.8g，加乙醇14-18ml，超聲處理25-35分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照晶色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定方法包括下列方法中的一種和/或幾種(a).黃芪甲苷，取本組合物制劑，研細(xì)，取細(xì)粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?0-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)吸附樹(shù)脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)不得少于0.18mg；
(b).淫羊藿苷色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)260-280nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本組合物3.5g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)不得少于0.20mg。
本組合物在治療慢性腎炎氣虛證中，可顯著降低血肌酐、血尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇和甘油三酯，有明顯的利尿作用，極大地改善病人的臨床癥狀，具有標(biāo)本兼治的特點(diǎn)，并且無(wú)毒、無(wú)任何副作用。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。下列材料與儀器適用于各實(shí)驗(yàn)例。
1藥物本組合物制劑(健腎片干粉)，由江蘇康緣藥業(yè)股份公司提供，批號(hào)010310。每克干粉含生藥9.94克，成人日用量為42g/60Kg。臨用前用蒸餾水配制成0.14g/ml、0.28g/ml、0.56g/ml三種濃度的混懸液(均按生藥量計(jì)算)。腎炎四味片，荊州市制藥廠(原湖北沙市制藥廠)出品，ZZ-4326一鄂衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1981)第001544號(hào)，批號(hào)991002，規(guī)格每片0.36克，成人日用量8.64g/60Kg。該藥主要成分為胡枝子、黃芪、黃芩、石韋。將該藥粉碎過(guò)120目篩，加蒸餾水配制成0.05g/ml濃度的腎炎四味片混懸液(均按生藥量計(jì)算)。
嘌吟霉素(Puromycin，造模藥物)Sigma化學(xué)公司，批號(hào)10278。
2主要試劑無(wú)水乙二胺，上海試劑一廠，批號(hào)000210；碳化二亞胺，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)1531H；牛血清白蛋白，美國(guó)Amresc。公司，批號(hào)051 7H弗氏不完全佐劑，Gibco公司，批號(hào)1079128生理鹽水，南京小營(yíng)制藥廠，批號(hào)000823；肌酐液體試劑(堿性苦味酸法)，北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號(hào)000406；尿素試劑盒(尿素酶法)，北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號(hào)000401；白蛋白液體試劑盒(溴甲酚綠法)，北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號(hào)990908；膽固醇試劑盒(CHOD-PAP法)，北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號(hào)000502；甘油三酯試劑盒(GPO-PAP法)，北京中生生物工程高技術(shù)公司，批號(hào)000510；尿蛋白試劑盒(化學(xué)比色法)，英國(guó)RANDOX公司，批號(hào)3971H；羊抗鼠免疫熒光抗體(FITC)IgG，北京中山生物技術(shù)有限公司，批號(hào)45501；兔抗人免疫熒光抗體(FITC)C3補(bǔ)體，北京中山生物技術(shù)有限公司，批號(hào)038(101)。
3主要儀器REVCO-80℃超低溫冰箱，MILLIPORE純水凈化系統(tǒng)，TGL-16G臺(tái)式高速離心機(jī)，DKB-8A型電熱恒溫水槽(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，HG75-3A型電熱恒溫兩用箱(南京實(shí)驗(yàn)儀器廠)，LDZ5-2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。筒形大白鼠固定器(江蘇省張家港市醫(yī)用生理器械廠)。SHANDON冷凍切片機(jī)，AO熒光顯微鏡，JEM-1200EX透射電鏡。
4動(dòng)物雄性健康Wistar大鼠，清潔級(jí)，體重180±20克，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證中科院動(dòng)管會(huì)003號(hào)。
5飼料飼料為南京江浦實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)大鼠全價(jià)顆粒飼料。
6實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠自由攝食、飲水，室內(nèi)溫度控制在18～24℃，相對(duì)濕度保持在40-70％。工作照度為150～300Lux，盡夜明暗交替時(shí)間(h)10/14。
7統(tǒng)計(jì)方法采用最小顯著差法(LSD法)和方差分析法(F檢驗(yàn))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥物組合物制成的片劑(健腎片)對(duì)陽(yáng)離子化牛血清白蛋白(C-BSA)所致大鼠膜性腎病的影響1.分組及用藥劑量正常對(duì)照組雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸餾水3ml，每日一次。灌胃1小時(shí)后尾靜脈注射生理鹽水1ml，隔日一次。
模型對(duì)照組雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸餾水3ml，每日一次。灌胃1小時(shí)后尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配制成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次，腎炎四味片對(duì)照組雄性Wistar大鼠10只，每日用藥劑量0.79g/Kg，相當(dāng)于人體用藥量的5.5倍，以0.05g/ml的腎炎四味片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時(shí)后尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配制成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。健腎片低劑量組雄性Wistar大鼠10只，每日用藥劑量2.1g/Kg，相當(dāng)于人體用藥量的3倍，制成0.14g/ml健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時(shí)后尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配制成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
健腎片中劑量組雄性Wistar大鼠10只，每日用藥劑量4.2g/Kg，相當(dāng)于人體用藥量的6倍，以0.28g/ml的健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時(shí)后尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配制成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
健腎片高劑量組雄性Wistar大鼠10只，每日用藥劑量8.4g/Kg，相當(dāng)于人體用藥量的12倍，以0.56g/ml健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃后1小時(shí)尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配制成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
大鼠用藥量均按文獻(xiàn)方法換算。健腎片治療組劑距比1∶2∶4。
1.2、給藥時(shí)間連續(xù)給藥4周。
1.3、檢測(cè)指標(biāo)1.4.1用藥前及用藥2周、4周分別收集24小時(shí)尿標(biāo)本，測(cè)定尿量，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量(UTP)、24小時(shí)尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用藥2周、4周分別眼眶靜脈叢采血檢測(cè)血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3用藥結(jié)束后每組隨機(jī)取5只大鼠新鮮腎組織做免疫熒光檢查。
1.4.4每組按從小到大編號(hào)順序取2份，腎組織標(biāo)本分別進(jìn)行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光鏡檢查，并做超薄切片進(jìn)行電鏡檢查。
2結(jié)果2.1一般狀況及尿量變化表1健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠體重的影響(g，X±S)

與正常對(duì)照組比較*p＜0.05。
與模型對(duì)照組比較P＜0.05。
表2健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠尿量的影響(ml/24h，±S)組別劑量 給藥前 給藥后2周 4周(g/Kg體重)正常對(duì)照組 -7.40±3.99 8.63±3.217.31±3.90(10) (10) (10)模型對(duì)照組 -7.35±1.85 13.47±6.58**5.81±2.82(10) (10) (8)腎炎四味片組1.33 7.34±1.15 8.15±3.47ΔΔ10.52±8.00Δ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 7.30±1.20 17.30±16.50Δ17.29±12.84ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組 4.2 7.47±2.87 15.16±9.44 11.19±4.26ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 7.36±2.62 10.80±6.62 12.28±6.86ΔΔ(10) (10) (10)與正常對(duì)照組比較*p＜0.05，**p＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05，ΔP＜0.01。
()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
造模各組大鼠，造模后均出現(xiàn)精神不振，反應(yīng)遲鈍，喜拱背扎堆，毛發(fā)欠光澤，飲食減少，活動(dòng)量少，體重增長(zhǎng)緩慢，大便稀溏等。模型對(duì)照組大鼠有的出現(xiàn)腹脹大，會(huì)陰部水腫，有的處死時(shí)剖腹可見(jiàn)有大量腹水。治療組與模型對(duì)照組相比程度要輕，一般狀況要好于模型對(duì)照組。治療組體重增加高于模型對(duì)照組，健腎片III組體重明顯高于模型對(duì)照組，P＜0.05。造模后，模型對(duì)照組大鼠尿量先增加后減少，給藥4周后，健腎片I、II、III組尿量明顯大于模型對(duì)照組，P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，模型對(duì)照組大鼠死亡2只。其中1只因采血不慎致失血過(guò)多而死亡，另1只死亡大鼠膚色蒼白，形體瘦弱，死亡后解剖見(jiàn)腹腔有大量腹水，腎臟及其它臟器未見(jiàn)明顯異常。
2.2 24小時(shí)尿蛋白定量的變化結(jié)果見(jiàn)表3。
表3健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠24小時(shí)尿蛋白的影響(mg/24h，X±S)組別 劑量給藥前給藥后2周 4周(g/Kg體重)正常對(duì)照組- 3.57±2.075.73±2.038.20±3.65(10) (10) (10)模型對(duì)照組- 3.87±2.3658.74±39.6**266.4±103.3**(10) (10) (8)腎炎四味組1.333.65±1.4839.83±22.31ΔΔ70.6424.62ΔΔ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 3.82±1.9933.97±15.2ΔΔ47.51±24.23ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 3.36±1.0831.03±6.30ΔΔ42.01±12.74ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組8.43.79±1.3626.39±11.83ΔΔ29.60±11.06ΔΔ(10) (10) (10)與正常對(duì)照組比較 *P＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔΔP＜0.01。
()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
造模后，大鼠尿蛋白明顯升高，模型組與正常組比較P＜0.01。健腎片I、II、III組組尿蛋白明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.01)。給藥2周時(shí)即起效，4周非常明顯。
2.3血肌酐和尿素氮的變化表4健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠血肌酐和尿素氮的影響(X±S)組別 劑量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)(g/Kg體重) 2周4周2周 4周正常對(duì)照組 -105±2.11 102±8.01 4.33±0.73 4.14±1.51(10) (10) (10)(10)模型對(duì)照組 -144±39.26**125±7.5**9.62±4.01*10.5±2.98**(10) (8)(10)(8)腎炎四味片組 1.33 115±11.1ΔΔ119±10.9 7.52±1.75ΔΔ6.51±1.38ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片I組 2.1 130±28.5Δ123±14.4 7.80±1.25Δ6.66±0.85ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片II組 4.2 122±8.65ΔΔ115±8.09ΔΔ7.01±1.56Δ6.40±1.17ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片III組8.4 115±9.03ΔΔ115±9.03ΔΔ6.38±1.14Δ5.52±2.41ΔΔ(10) (10) (10)(10)與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05，ΔΔ＜0.01()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
表4表明，大鼠造模后血肌酐、尿素氮升高，健腎片組兩者數(shù)值低于模型組。給藥4周后，健腎片II、III組血肌酐明顯低于模型組(P＜0.01)，健腎片I、II、III組血尿素氮含量低于模型組(P＜0.01)。
2.4血漿白蛋白的變化表5健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠血漿白蛋白的影響(g/L X±S)組別 劑量2周 4周(g/Kg體重)正常對(duì)照組- 36.4±0.52 38.3±0.82(10)(10)模型對(duì)照組- 29.6±1.35**29.0±1.51**(10)(8)腎炎四味片組 1.3335.3±6.4ΔΔ2.8±1.81ΔΔ(10)(10)健腎片I組 2.1 32.3±1.49Δ32.0±1.05Δ(10)(10)健腎片II組4.2 34.3±5.26ΔΔ32.1±0.74Δ(10)(10)健腎片III組 8.4 36.4±7.43ΔΔ33.4±1.65ΔΔ(10)(10)
與正常對(duì)照組比較**P＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05。ΔP＜0.01。()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
從表5可以看出，大鼠造模后血漿白蛋白下降，模型組與正常組比較差異顯著(P＜0.01)。給藥2周、4周時(shí)，健腎片I、II、II工組血漿白蛋白均明顯高于模型組(P＜0.05、0.01)。
2.5膽固醇與甘油三酯的變化表6健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠膽固醇、甘油三酯的影響(mmol/L，X±S)組別 劑量 CHO TG(g/Kg體重) 2周 4周 2周 4周正常對(duì)照組-1.89±0.10 1.45±0.10 1.15±0.14 2.06±0.21(10)(10)(10)(10)模型對(duì)照組-3.25±0.51**4.42±0.74**2.76±0.66**4.04±1.65**(10)(8) (10)(8)腎炎四味片組 1.33 1.57±0.57ΔΔ2.51±0.34ΔΔ1.26±0.51ΔΔ2.09±0.38ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片I組 2.1 1.20±0.36ΔΔ2.15±0.18ΔΔ1.21±0.40ΔΔ65±0.47ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片II組4.2 1.62±0.40ΔΔ2.16±0.26ΔΔ0.88±0.35ΔΔ50±0.50ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片III組 8.4 1.31±0.41ΔΔ2.02±0.32ΔΔ1.12±0.67ΔΔ33±0.22ΔΔ(10)(10)(10)(10)與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，*P＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔΔP＜0.01。()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
從表6可知，造模后模型組大鼠膽固醇、甘油三酯均升高，與正常組比較P＜0.01。給藥4周后，健腎片I、II、III組CHO、TG均明顯低于模型組(P＜0.01)。
2.6尿肌酐、內(nèi)生肌酐清除率的變化表7健腎片對(duì)C-BSA所致膜性腎病大鼠Ucr、Ccr的影響(X±S)組別劑量 Ucr(μmol/L) Ccr(ml/24h)(g/Kg體重) 給藥前 給藥后2周4周 給藥后2周 4周正常對(duì)照組 - 5634±1579 3976±1279 4215±1940 298±67241±64.4(10)(10) (10) (10) (10)模型對(duì)照組 - 5717±2336 3350±1755*3631±1251*245±29.3*149±49*(10)(10) (8) (10) (8)腎炎四味片組 1.335027±1898 3992±1440ΔΔ5158±2939ΔΔ268±141 307±94(10)(10) (10) (10) (10)健腎片I組 2.1 5091±1739 3513±1852 3801±2592 286±99.6 310±92.1(10)(10) (10) (10) (10)健腎片II組 4.2 5947±1653 4269±2572ΔΔ4187±1635Δ00357±95.2ΔΔ363±50.5ΔΔ(10)(10) (10) (10) (10)健腎片III組8.4 5023±1572 4888±2434ΔΔ4887±2709ΔΔ362±96.8ΔΔ388±40.4ΔΔ(10)(10) (10) (10) (10)與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。 ()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
由表7可知，造模后大鼠Ucr、Ccr下降，與正常組比較P＜0.05。給藥4周后，健腎片II、III組Ucr、Ccr較模型對(duì)照組升高，P＜0.05、0.01。
2.7病理形態(tài)學(xué)改變2.7.1免疫熒光檢查在熒光顯微鏡下放大400倍觀察，記錄熒光強(qiáng)度，并用柯達(dá)400(27定)膠卷攝片，曝光指數(shù)設(shè)定為800，測(cè)定自動(dòng)曝光時(shí)間(秒)。每個(gè)標(biāo)本分別測(cè)定5個(gè)腎小球，求出平均值。結(jié)果見(jiàn)下表。
表8 4周時(shí)大鼠腎組織免疫熒光曝光時(shí)間的比較(秒，X±S)組別 劑量 IgG C3(g/Kg體重)模型對(duì)照組-0.76±0.061.43±0.83腎炎四味片組 1.33 1.85±0.404.76±1.69Δ健腎片I組 2.1 5.98±0.58Δ6.92±1.10Δ健腎片II組4.2 10.25±0.97Δ11.19±1.56Δ健腎片III組 8.4 15.84±1.97ΔΔ21.35±2.19ΔΔ與模型對(duì)照組比較 P＜0.05。
AAP＜0.01。
正常對(duì)照組在熒光顯微鏡下，腎小球毛細(xì)血管壁無(wú)IgG、C3沉積。
模型對(duì)照組IgG、C3沿腎小球毛細(xì)血管壁呈耀眼的彌漫性的細(xì)顆粒狀沉積，熒光強(qiáng)度為+++～++++。放大400倍攝片時(shí)自動(dòng)曝光時(shí)間最短。
腎炎四味片組IgG、C3沿腎小球毛細(xì)血管壁呈細(xì)顆粒狀沉積，熒光強(qiáng)度為++～+++。攝片時(shí)自動(dòng)曝光時(shí)間較模型組延長(zhǎng)。見(jiàn)圖3-4。
健腎片I組IgG、C3沿腎小球毛細(xì)備管壁呈細(xì)顆粒狀沉積，熒光強(qiáng)度++～+++，自動(dòng)曝光時(shí)間較模型對(duì)照組延長(zhǎng)，P＜0.05。見(jiàn)圖5-6。
健腎片II組IgG、C3沿腎小球毛細(xì)血管壁呈細(xì)顆粒狀沉積，熒光強(qiáng)度+～++，亮度較模型組明顯減弱，自動(dòng)曝光時(shí)間較模型對(duì)照組延長(zhǎng)，P＜0.05。健腎片III組IgG、C3沿腎小球毛細(xì)血管壁似乎可見(jiàn)有細(xì)顆粒狀沉積，熒光強(qiáng)度±～+，自動(dòng)曝光時(shí)間明顯延長(zhǎng)，與模型對(duì)照組比較P＜0.01。
2.7.2光鏡檢查參照章友康[2]等方法測(cè)量腎小球直徑和腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)。光鏡下放大400倍，腎小球直徑為每張切片中5個(gè)最大腎小球直、橫徑的平均值，腎小球細(xì)胞數(shù)為每張切片中5個(gè)最大腎小球細(xì)胞數(shù)的平均值。結(jié)果見(jiàn)下表。
表9 4周時(shí)大鼠腎小球直徑和腎小球細(xì)胞數(shù)的比較(X±S)組別 劑量 腎小球直徑 腎小球細(xì)胞數(shù)(g/Kg體重) (μm)(個(gè)/腎小球)正常對(duì)照組 - 89.10±3.12 43.50±5.81模型對(duì)照組 - 107.21±6.34*76.47±6.20*腎炎四味片組 1.33 103.54±5.79 59.20±7.24健腎片I組 2.1 105.46±7.01 62.32±8.15健腎片II組 4.2 97.50±6.03 56.78±5.38健腎片III組8.4 92.14±6.40Δ51.54±4.36Δ與正常對(duì)照組比較*P＜0.05。
與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05。
正常對(duì)照組HE染色腎小球結(jié)構(gòu)正常分布均勻，腎小球毛細(xì)血管袢開(kāi)放，基底膜無(wú)增厚，上皮細(xì)胞足突形態(tài)正常，系膜細(xì)胞及基質(zhì)無(wú)增殖，腎小球直徑為89.10±3.12llm，腎小球細(xì)胞數(shù)為43.50±5.81個(gè)/腎小球，腎小管、間質(zhì)無(wú)異常。PAS、PAM、Masson染色無(wú)異常。
模型對(duì)照組在HE、PAS、PAM、MASSON染色下，腎小球體積增大，細(xì)胞數(shù)增加，腎小球直徑為107.21±6.34llm，腎小球細(xì)胞數(shù)為76.47±6.20個(gè)/腎小球，與正常組比較P＜0.05?；|(zhì)增多，基底膜無(wú)明顯增厚現(xiàn)象。
腎炎四味片組、健腎片I、I.I、III組腎小球體積增大，細(xì)胞數(shù)略增多，健腎片III組腎小球直徑為92.14±6.40lim，腎小球細(xì)胞數(shù)為51.54±4.36個(gè)/腎小球，與模型對(duì)照組比較P＜0.05。基底膜無(wú)明顯增厚。
2.7.3電鏡檢查正常對(duì)照組腎小球細(xì)血管袢開(kāi)放，內(nèi)皮細(xì)胞分布均勻，基底膜厚度100～150，無(wú)增厚，無(wú)電子致密物沉積，三層結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞無(wú)腫脹，足突清晰無(wú)融合，系膜區(qū)無(wú)擴(kuò)大，未見(jiàn)系膜細(xì)胞增生基質(zhì)增多。見(jiàn)

圖17-18。
模型對(duì)照組腎小球毛細(xì)血管基底膜較正常組增厚，厚度為200～300，上皮細(xì)胞下見(jiàn)少量電子致密物沉積，上皮細(xì)胞廣泛足突融合，有明顯的假絨毛樣改變。
腎炎四味片組腎小球毛細(xì)血管基底膜無(wú)明顯增厚，上皮細(xì)胞下無(wú)電子致密物沉積，上皮細(xì)胞足突融合、有假絨毛樣改變。見(jiàn)圖23-24。
健腎片工組腎小球毛血血管基底膜無(wú)明顯增厚，上皮細(xì)胞足突融合，假絨毛樣改變?nèi)源嬖?，未?jiàn)電子致密物沉積。健腎片II組腎小球毛細(xì)血管基底膜無(wú)明顯增厚，未見(jiàn)電子致密物沉積，上皮細(xì)胞足突融合，有假絨毛樣改變。
健腎片III組腎小球超微結(jié)構(gòu)接近正常，腎小球毛細(xì)血管壁基底膜無(wú)增厚，無(wú)電子致密物沉積，上皮細(xì)胞足突融合及假絨毛樣改變明顯減輕。
3試驗(yàn)結(jié)論用C-BSA制作大鼠MN模型已被廣泛用于藥理藥效學(xué)研究。由于抗原的理化或免疫學(xué)特性，可預(yù)先種植或結(jié)合于腎小球，后來(lái)在腎臟原位形成IC，最后導(dǎo)致腎炎的產(chǎn)生。[2]本實(shí)驗(yàn)用C-BSA復(fù)制大鼠膜性腎病模型，與文獻(xiàn)報(bào)道變化一致。采用健腎片干粉高、中、低劑量組灌服MN大鼠連續(xù)4周，結(jié)果表明健腎片I、II、III組對(duì)大鼠刪的尿蛋白有明顯的降低作用，并能降低血肌酐、尿素氮，提高內(nèi)生肌酐消除率，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯，且具有明顯的利尿作用。腎臟組織學(xué)觀察提示，健腎片I、II、III劑量組能減輕刪大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜的增厚和C3、IgG的沉積的熒光反應(yīng)，及上皮電子致密物的沉積，健腎片組病理?yè)p害明顯輕于模型對(duì)照組。
實(shí)驗(yàn)例2對(duì)嘌呤霉素所致大鼠微小病變型腎病的影響1、分組及用藥劑量同實(shí)驗(yàn)例1。
1.3給藥時(shí)間從第一次注射嘌吟霉素起，連續(xù)給藥4周。
1.4檢測(cè)指標(biāo)1.4.1用藥前及用藥2周、4周分別收集24小時(shí)尿標(biāo)本，測(cè)定尿量，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量(UTP)、24小時(shí)尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用藥2周、4周分別眼眶靜脈叢采血檢測(cè)血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3每組按從小到大編號(hào)順序取2份，腎組織標(biāo)本分別進(jìn)行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光鏡檢查，并做超薄切片進(jìn)行電鏡檢查。
病理組織學(xué)檢查由江蘇省中醫(yī)院病理科、南京軍區(qū)總院病理科電鏡室承擔(dān)。
2結(jié)果2.1一般狀況及尿量變化表10 健腎片對(duì)嘌呤霉素所致微小病變型腎病大鼠體重的影響(g，X±S)組別 劑量 給藥前體重 給藥后體重(g/Kg體重) 1周 2周 3周 4周正常對(duì)照組-199.0±14.87212.5±16.71228.0±17.98244.5±16.91262.5±18.45模型對(duì)照組-200 5±14.62204.5±15.54210.0±16.50216.0±18.23*226.5±20 69*腎炎四味片組 1.33 200.0±13.74206.0±13.50206.5±14.54229.0±18.07246.5±20.55健腎片I組 2.1 199.5±16.41204.0±18.38211.5±18.57221.5±20.56233 5±22.49*健腎片II組4.2 201.0±13.29208.5±15.64219.5±17.71233.0±19.61248.5±22.24健腎片m組 8.4 198.5±15.64205.5±16.95217.5±18.61234.0±22.09251.5±24.16Δ與正常對(duì)照組比較*p＜0.05。
與模型對(duì)照組比較P＜0.05。
表11 健腎片對(duì)嘌呤霉素所致微小病變型腎病大鼠尿量的影響(ml/24h，X±S)組別 劑量 給藥前給藥后2周4周(g/kg體重)正常對(duì)照組-12.57±3.47 13.13±5.74 12.44±2.74(10) (10) (10)模型對(duì)照組-3.29±5.068.63±3.21**7.31±3.90**(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 13.02±4.95 8.58±4.69 9.65±3.53(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 2.86±3.8714.50±8.96ΔΔ13.22±4.68ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 13.85±4.24 12.48±3.02Δ12.95±3.02ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 12.73±3.62 10.25±4.98 9.38±3.46(10) (10) (10)與正常對(duì)照組比較*p＜0.05，**P＜0.01與模型對(duì)照組比較P＜0.05，P＜0.01，()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
造模大鼠腹腔注射嘌呤霉素后，出現(xiàn)飲食減少、大便稀溏，懶動(dòng)，喜拱背扎堆，體重增長(zhǎng)減慢等變化。各治療組與模型對(duì)照組相比，程度要輕，體重增長(zhǎng)高于模型對(duì)照組，其中健腎片工II組體重明顯高于模型對(duì)照組，P＜0.05。造模后模型對(duì)照組大鼠尿量在2周、4周時(shí)均減少，與正常組比較P＜0.01。健腎片I、II組尿量在2周、4周時(shí)比模型對(duì)照組明顯增加，P＜0.01，P＜0.05。
2.2 24小時(shí)尿蛋白定量的變化表12健腎片對(duì)嘌吟霉素所致微小病變型腎病大鼠UTP的影響(mg/24h X±S)組別 劑量 給藥前 給藥后2周 4周(g/Kg體重)正常對(duì)照組- 8.15±3.21 7.37±2.03 8.20±3.65(10) (10) (10)模型對(duì)照組- 7.90±2.06 1783±288**1805±413**(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 7.69±2.64 781±204ΔΔ983±276ΔΔ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 8.12±2.12 803±147ΔΔ1121±387ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 7.85±2.24 794±245ΔΔ811±319ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 7.86±2.33 431±67ΔΔ625±127ΔΔ(10) (10) (10)與正常對(duì)照組比較 *P＜0.01與模型對(duì)照組比較“P＜0.01，()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)從表12可以看出，造模后大鼠尿蛋白明顯增加，2周、4周時(shí)模型組尿蛋白與正常組比較均有非常顯著差異，P＜0.01。健腎片I、II、III組和腎炎四味片組2周、4周時(shí)尿蛋白均明顯低于模型對(duì)照組，P＜0.01。
2.3血肌酐和尿素氮的變化表13 健腎片對(duì)嘌呤霉素所致微小病變型腎病大鼠Scr和BUN的影響(X±S)組別 劑量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)(g/Kg體重) 2周 4周2周4周正常對(duì)照組-99±8.46102±8.87 3.51±0.92 3.83±1.42(10)(10) (10) (10)模型對(duì)照組-130±5.61**122±15.19**8.99±4.03**9.29±3.11**(10)(8)(10) (10)腎炎四味片組 1.33 105±4.67ΔΔ119±12.94 8.47±2.21 6.51±1.31ΔΔ(10)(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 116±13.55ΔΔ121±15.52 7.62±±4.70 6.95±1.30Δ(10)(10) (10) (10)健腎片II組4.2 103±4.04ΔΔ118±17.20 6.51±3.15Δ6.40±1.12ΔΔ(10)(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 101±4.25ΔΔ117±8.47Δ8.30±2.56 6.93±1.87Δ(10)(10) (10) (10)
與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01與模型對(duì)照組比較P＜0.05，P＜0.01，()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
表13說(shuō)明，造模后模型組大鼠血肌酐、尿素氮升高，與正常組比較有非常顯著差異，P＜0.01。各治療組大鼠血肌酐、尿素氮較模型組降低。其中2周時(shí)健腎片I、II、III組和腎炎四味片組血肌酐明顯低于模型對(duì)照組，P＜0.01，健腎片II組尿素氮低于模型組，P＜0.05；4周時(shí)健腎片I、II組血肌酐與模型組比較有顯著差異，P＜0.05；4周時(shí)健腎片III組血肌酐與模型組比較有顯著差異，P＜0.05，健腎片II組和腎炎四味片組尿素氮與模型組比較P＜0.01，健腎片I、III組尿素氮與模型組比較P＜0.05。
2.4血漿白蛋白的變化結(jié)果見(jiàn)表14。
表14健腎片對(duì)嘌呤霉素所致微小病變型腎病大鼠ALB的影響(g/L，±S)組別 劑量 2周 4周(g/Kg體重)正常對(duì)照組 -36.40±0.84 38.5±0.97ΔΔ(10) (10)模型對(duì)照組 -33.26±0.23**32.5±0.44**(10) (10)腎炎四味片組 1.33 35.25±0.36Δ34.25±0.73(10) (10)健腎片I組 2.1 34.40±0.73 33.05±0.12(10) (10)健腎片II組 4.2 36.53±0.24ΔΔ36.97±0.23ΔΔ(10) (10)健腎片III組8.4 36.01±0.52ΔΔ35.92±0.38Δ(10) (10)與正常對(duì)照組比較 **P＜0.01與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01表14顯示，造模后模型組大鼠ALB明顯下降，與正常組比較有非常顯著差異，P＜0.01。健腎片II、III組較模型組升高，比較有顯著差異和非常顯著差異，P值分別＜0.05，＜0.01。
2.5膽固醇與甘油三酯的變化表15健腎片對(duì)嘌呤霉素所致微小病變型腎病大鼠CHO、TG的影響(mmol/L，X±S)組別 劑量 CHOTG(g/Kg體重)2周 4周2周4周正常對(duì)照組 - 1.97±0.16 1.46±0.10 1.14±0.19 2.14±0.34(10)(10) (10) (10)模型對(duì)照組 - 2.91±1.00**3.06±2.06**1.67±0.70*2.79±0.69*(10)(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 1.75±0.47Δ2.52±0.37 1.50±0.95 2.14±0.55Δ(10)(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 2.00±0.99 2.67±0.67 1.56±0.98 2.25±1.22(10)(10) (10) (10)健腎片II組 4.2 1.80±1.01Δ2.62±0.82 1.28±0.52Δ1.90±0.82Δ(10)(10) (10) (10)健腎片III組8.4 1.65±0.65Δ2.29±0.61Δ1.28±0.78Δ1.46±0.50ΔΔ(10) (10)(10) (10)與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**p＜0.01與模型對(duì)照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
由表15可知，造模后模型組大鼠CHO、TG均升高，與正常組比較分別P＜0.01和P＜0.05。各治療組CHO、TG較模型組降低，2周時(shí)健腎片II、III組CHO、TG與模型組比較P＜0.05；4周時(shí)健腎片II組TG與模型組比較P＜0.05，健腎片III組CHO、TG與模型組比較P＜0.05，P＜0.01。
2.6病理形態(tài)學(xué)改變2.6.1光鏡檢查模型組HE染色示近曲小管?chē)?yán)重破壞，小管內(nèi)皮損傷，小管上皮細(xì)胞有泡沫樣變性，局部小管有壞死。PAS染色示腎小管刷狀緣破壞明顯。
腎炎四味片組，健腎片I、II、III劑量組HE染色示腎組織已基本達(dá)到正常水平，PAS染色刷狀緣修復(fù)比較明顯。
2.6.2電鏡檢查模型組腎小球基底膜外側(cè)上皮細(xì)胞足突腫大，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡變性，溶酶體增多，間質(zhì)細(xì)胞增多，近曲小管微絨毛受損傷，遠(yuǎn)曲小管刷狀緣有病變。
腎炎四味片組，健腎片I、II、III劑量組病理改變輕于模型組，上皮細(xì)胞足突基本正常，溶酶體仍多，但空泡變性減少，間質(zhì)空隙增大，細(xì)胞減少，近曲小管內(nèi)膜恢復(fù)正常，遠(yuǎn)曲小管微絨毛正常。見(jiàn)圖33。健腎片I、II、III劑量組的病理改變又輕于腎炎四味片組。
2.6.3組織免疫檢查光鏡見(jiàn)模型組在破壞的腎小管內(nèi)，有較多的補(bǔ)體C3；各治療組隨著腎小管組織的修復(fù)，補(bǔ)體C3大腎組織內(nèi)在大減少，但修復(fù)的組織內(nèi)仍見(jiàn)有補(bǔ)體C3。免疫電鏡示模型組損傷絨毛區(qū)、管腔內(nèi)有絨毛碎片，內(nèi)含大量C3補(bǔ)體，而各治療組損傷片斷仍有，內(nèi)含C3補(bǔ)體量減少。
3試驗(yàn)結(jié)論現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在眾多的動(dòng)物腎病模型中，嘌吟霉素連續(xù)注射于大鼠可獲得類似于人類的微小病變腎病。嘌呤霉素所致腎病的機(jī)理，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是嘌呤霉素對(duì)腎，特別是對(duì)腎小球直接損害所致。在本次實(shí)驗(yàn)中用嘌呤霉素制作大鼠微小病變型腎病模型，與文獻(xiàn)報(bào)道變化一致。采用健腎片干粉高、中、低劑量組灌服微小病變型腎病大鼠連續(xù)4周，結(jié)果表明健腎片I、II、III組對(duì)大鼠微小病變型腎病的尿蛋白有顯著的降低作用；并能降低血肌酐、尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯，且健腎片I、II組具有明顯的利尿作用，與模型對(duì)照組對(duì)比P＜0.01。腎臟組織學(xué)檢查提示健腎片I、II、III劑量組能減輕腎小球基底膜外側(cè)上皮細(xì)胞足突腫大，減少細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的空泡變性，病理?yè)p害明顯輕于模型對(duì)照組。
本發(fā)明下列實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
實(shí)施例1黃芪(生)875g茯苓437.5g淫羊藿233g僵蠶350g全蝎 43.7g 澤瀉233g 石韋437.5g青風(fēng)藤875g青風(fēng)藤過(guò)20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇浸漬6～8小時(shí)，取出、分層，將潤(rùn)濕的藥材松緊適度地裝于滲漉筒中，藥材裝填好后，先打開(kāi)浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱堿性；滲漉液于75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.35，即得青風(fēng)藤濃縮液；黃芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇照《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄I0流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.25，即得僵蠶、全蝎濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達(dá)70％，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對(duì)密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風(fēng)藤濃縮液和僵蠶、全蝎濃縮液混和，濕法制粒，80℃風(fēng)熱干燥，得干顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，80℃風(fēng)熱干燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用淀粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得干顆粒；將兩種顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓制成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相當(dāng)于原藥材3.48g。
實(shí)施例2黃芪(生)890g茯苓422.5g淫羊藿240g僵蠶334g全蝎 45.7g 澤瀉240g 石韋422.5g青風(fēng)藤890g制備方法青風(fēng)藤過(guò)20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的78％的乙醇浸漬7～8小時(shí)，取出、分層，將潤(rùn)濕的藥材松緊適度地裝于滲漉筒中，藥材裝填好后，先打開(kāi)浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的78％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱堿性；滲漉液于75～75℃的條件下回收乙醇，再濃縮至75℃下相對(duì)密度為1.35，即得青風(fēng)藤濃縮液；黃芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；
僵蠶、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量78％的乙醇照《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至75℃下相對(duì)密度為1.25，即得僵蠶、全蝎濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達(dá)70％，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至75℃相對(duì)密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風(fēng)藤濃縮液和僵蠶、全蝎濃縮液混和，濕法制粒，75℃風(fēng)熱干燥，得干顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，75℃風(fēng)熱干燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用淀粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得干顆粒；將兩種顆粒加常規(guī)賦型劑糊精適量，制成膠囊1000粒，即得組合物的膠囊，每粒裝0.35g，相當(dāng)于原藥材3.48g。
實(shí)施例3本組合物片劑的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(3)取本組合物制成的片劑15片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加乙醚25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(4)取本組合物制成的片劑5片，除去薄膜衣，研細(xì)，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照晶色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定(1)黃芪甲苷取本組合物制成的片劑20片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取細(xì)粉39，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?5ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，其內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λs＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得本品每片含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)不得少于0.18mg；(2)淫羊藿苷色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)不得少于0.20mg.
權(quán)利要求
1.一種治療慢性腎炎的中藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪700-1000重量份茯苓300-500重量份淫羊藿100-300重量份 僵蠶200-500重量份全蝎30-50重量份 澤瀉100-300重量份石韋300-600重量份 青風(fēng)藤700-1000重量份
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的生黃芪875重量份 茯苓437.5重量份淫羊藿233重量份 僵蠶350重量份全蝎43.7重量份澤瀉233重量份石韋437.5重量份 青風(fēng)藤875重量份
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的生黃芪890重量份 茯苓422.5重量份淫羊藿240重量份 僵蠶334重量份全蝎45.7重量份澤瀉240重量份石韋422.5重量份 青風(fēng)藤890重量份
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可加入賦型劑制成臨床可接受的劑型。
5.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟青風(fēng)藤粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1-2倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇浸漬6～8小時(shí)，取出、分層，將潤(rùn)濕的藥材松緊適度地裝于滲漉筒中，藥材裝填好后，先打開(kāi)浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱堿性；滲漉液于75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，即得青風(fēng)藤濃縮液；生黃芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，得黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.20-1.35，即得僵蠶、全蝎濃縮液；石韋、澤瀉一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，加90-96％的乙醇，使含醇量達(dá)65-80％，充分?jǐn)嚢?，靜置10-14小時(shí)，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對(duì)密度為1.20-1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風(fēng)藤濃縮液和僵蠶、全蝎濃縮液混和，得混合物A；將黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，得混合物B；將上述兩種A、B混合物混合得本發(fā)明藥物組合物，該藥物組合物，經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為青風(fēng)藤過(guò)20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇浸漬6～8小時(shí)，取出、分層，將潤(rùn)濕的藥材松緊適度地裝于滲漉筒中，藥材裝填好后，先打開(kāi)浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱堿性；滲漉液于75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.35，即得青風(fēng)藤濃縮液；生黃芪、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對(duì)密度為1.25，即得僵蠶、全蝎濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，每毫升相當(dāng)于原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達(dá)70％，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對(duì)密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風(fēng)藤濃縮液和僵蠶、全蝎濃縮液混和，濕法制粒，80℃風(fēng)熱干燥，得干顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，80℃風(fēng)熱干燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用淀粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得干顆粒；將兩種顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓制成1000片，包薄膜衣，即得。
7.權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；b.取本組合物制劑3.5g，加60-80％乙醇40-60ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?-11ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-3次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑5.3g，加乙醚20-35ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚30-50ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；d.取本組合物制劑1.8g，加乙醇14-18ml，超聲處理25-35分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
8.如利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；b.取本組合物制劑3.5g，除去薄膜衣后，研細(xì)，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑5.3g，研細(xì)，加乙醚25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；d.取本組合物制劑1.8g，研細(xì)，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照晶色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
9.如利要求1、2或3所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為包括如下測(cè)定方法中的一種或幾種a.黃芪甲苷，取本組合物制劑，研細(xì)，取細(xì)粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?0-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)吸附樹(shù)脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計(jì)不得少于0.18mg；b.淫羊藿苷∶色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)260-280nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本組合物制劑，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)不得少于0.20mg；
10.如利要求9所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為包括如下測(cè)定方法中的一種或幾種a.黃芪甲苷取本組合物制成的片劑20片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取細(xì)粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?5ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，其內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λs＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得本品每片含黃芪以黃芪甲苷計(jì)不得少于0.18mg；b.淫羊藿苷色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本品10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)不得少于0.20mg；
11.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別取本組合物制劑3.5g，研細(xì)，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；取本組合物制劑3.5g，除去薄膜衣后，研細(xì)，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮一水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；取本組合物制劑5.3g，研細(xì)，加乙醚25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；取本組合物制劑1.8g，研細(xì)，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照晶色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定取本組合物制劑，研細(xì)，取細(xì)粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?0-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)吸附樹(shù)脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計(jì)不得少于0.18mg；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)260-280nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本組合物制劑，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)不得少于0.20mg；
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；取本組合物制成的片劑15片，除去薄膜衣后，研細(xì)，加乙醚25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液4μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；取本組合物制成的片劑5片，除去薄膜衣，研細(xì)，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對(duì)照晶色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定黃芪甲苷取本組合物制成的片劑20片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取細(xì)粉39，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過(guò)夜，置水浴上加熱回流提取至無(wú)色，提取液回收甲醇并濃縮至于，殘?jiān)铀?5ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～7ml微熱使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，其內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4μl，對(duì)照晶溶液2μl與6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λs＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計(jì)不得少于0.18mg；淫羊藿苷色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備，精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備，取本組合物制成的片劑10片，除去薄膜衣后，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸于，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)不得少于0.20mg；
13.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物在制備治療慢性腎炎的藥物中的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于所述治療慢性腎炎是指顯著降低尿蛋白。
15.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于所述治療慢性腎炎是指降低血肌酐、尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯。
16.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于所述治療慢性腎炎是指具有明顯的利尿作用。
17.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于所述治療慢性腎炎是指減輕腎小球基底膜外側(cè)上皮細(xì)胞足突腫大，減少細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的空泡變性。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療慢性腎炎的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該組合物由黃芪、茯苓、淫羊藿、僵蠶、全蝎、澤瀉、石韋、青風(fēng)藤組成。該中藥組合物制備時(shí)對(duì)不同組分采用滲漉、煎煮醇縮制成干顆粒的方法，達(dá)到使有效藥物成分的充分發(fā)揮，同時(shí)本發(fā)明還提供了對(duì)該組合物采用成分鑒別、含量測(cè)定的質(zhì)量控制方法。本組合物在治療慢性腎炎上具有效果穩(wěn)定、顯著，無(wú)明顯毒副作用的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P13/12GK1500517SQ0214893
公開(kāi)日2004年6月2日 申請(qǐng)日期2002年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月12日
發(fā)明者王鋼, 肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 柳于介, 張孝法, 張艾麗, 王 鋼 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司