專利名稱：一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療心腦血管疾病的中藥有效部位的組合物及其制備方法，具體地說是中藥丹參中的總丹參酚酸和黃芪中黃芪總苷組成的藥物組合物及其制備方法。
黃芪是一味傳統(tǒng)的補氣中藥，藥理作用表明，黃芪總苷能改善心肌缺血，保護心腦血管，改善微循環(huán)。黃芪甲苷在藥材中含量只有0.04％，傳統(tǒng)的方法很難純化得到。
中醫(yī)認為氣滯血瘀是心腦血管發(fā)病的一個主要原因，以黃芪與丹參組成中藥復方用于氣滯血瘀心腦血管疾病，療效顯著。但是，傳統(tǒng)的中藥復方存在著成分不清，機理不明，質(zhì)量難控，療效不穩(wěn)的缺點。
本發(fā)明提出的中藥有效部位組合物，是由從丹參中提取的總丹參酚酸和從黃芪中提取的黃芪總苷為原料組配而成。
本中藥有效部位組合物，其比較合適的配比(按重量)為總丹參酚酸(含丹酚酸B鎂鹽50％以上)1份，黃芪總苷(含黃芪甲苷20％以上)0.1-1份。
上述中藥組合物所治的心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、腦梗塞、腦缺血等。
本發(fā)明還包括上述中藥有效部位組合物的制備方法。
對丹參，以丙酮進行滲漉法提取，經(jīng)大孔樹脂柱純化，可以得到含丹酚酸B鎂鹽50％以上的總丹參酚酸。
對黃芪，用水提取，經(jīng)大孔樹脂柱堿水洗脫，得到含黃芪甲苷20％以上的黃芪總苷。將該二種有效部位，按前述配比并加入相應輔料混合后，即可制成各種制劑。
所述制劑可以是粉針劑、注射劑、片劑、緩釋片、滴丸、沖劑、膠囊劑、緩釋微丸。所述輔劑為各種制劑的常規(guī)輔料。
本發(fā)明中，總丹參酚酸及黃芪總苷的提取純化具體步驟如下1.丹酚酸提取純化丹參酚酸性質(zhì)不穩(wěn)定，遇酸、堿、熱等劇烈條件會發(fā)生降解，故采用條件溫和、效率高的滲漉法。以丹酚酸B鎂鹽的得率及其純度為指標，對影響丹參酚酸得率的主要因素所用丙酮濃度、量、滲漉前浸泡時間按三因素三水平進行L9(33)正交試驗。試驗結(jié)果表明，丙酮濃度在50～70％之間較好，使用量為丹參重量的10倍以上，浸泡時間影響不大，一般在20分鐘以上。
將丙酮滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右后，至無丙酮味，加少量水稀釋后，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積的20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得丹酚酸成分。再以高濃度乙醇液洗去脂溶性雜質(zhì)，再進行下一輪純化。
丹酚酸成分對熱不穩(wěn)定，故采用冰凍干燥法進行濃縮干燥。于低溫(＜50℃)減壓濃縮除去乙醇，繼續(xù)濃縮至原體積的1/10左右，以0.45μm微孔濾膜過濾，濃縮液按照常規(guī)凍干工藝-50℃預凍3-4小時，-10℃凍干，升溫至20℃保溫2-3小時，最終得黃色疏松結(jié)晶性粉末。其中，含丹酚酸B鎂鹽達50％以上。
2黃芪總苷提取純化黃芪總苷在水中都有一定的溶解度，且黃芪皂苷對熱穩(wěn)定，故黃芪總苷的提取采用加熱回流法。以黃芪甲苷的得率為指標，對三個主要因素提取時間、提取次數(shù)及溶劑用量三個因素三水平L9(33)正交試驗。試驗結(jié)果表明，水15倍量以上，回流提取2次以上，每次40-80分鐘較為適宜。
因黃芪水提液中主要含糖類水溶性雜質(zhì)，在水溶液中，大孔吸附樹脂對有機物具有良好的吸附選擇性，可以固相萃取的方法，在吸附黃芪皂苷的同時將糖類成分去除。黃芪水提液按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以15倍以上體積堿性溶液洗脫，繼以20％乙醇溶液洗脫，再以70-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，即為黃芪總苷。最后用95％乙醇再生樹脂柱，進行下一輪純化。70-90％乙醇洗脫液部分濃縮到小體積(1體積水溶液含5倍量藥材)，離心，沉淀，即得黃芪甲苷，為A部分。上清液濃縮后，75-85％乙醇沉淀，離心除去沉淀，上清液濃縮至于，得B部分。將A、B兩部分合并，即為黃芪總苷，其中黃芪甲苷的含量在20％以上。大孔吸附樹脂柱的其他洗脫部位，經(jīng)HPLC-ELSD跟蹤檢測，均未檢出黃芪甲苷。
總丹參酚酸和黃芪總苷組合物的藥效學試驗為了考察不同配比的總丹參酚酸和黃芪總苷的藥效，找到最佳療效的組方，設計不同試驗，觀察總丹參酚酸和黃芪總苷對犬冠狀動脈結(jié)扎造成心肌梗塞模型的治療作用。實驗選擇的配比為(總丹參酚酸/黃芪總苷)10/0、10/3、10/5、10/7、10/10、10/15、0/10，其給藥劑量總的均為1mg/kg；另加陰性對照生理鹽水組、陽性對照恬爾心組，共9組。
試驗參照有關(guān)文獻報告的方法進行。分別在給藥后30min、60min、90min、120min、180min記錄心外膜電圖的變化。心外膜電圖觀察指標以ST段升高2mV以上的導聯(lián)數(shù)(NST)和ST段升高值的總和(∑ST)為指標觀察給藥前后的變化，并計算心肌缺血程度(∑ST)和范圍(NST)。以用藥后不同時間實測值與用藥前進行比較，以用藥后不同時間變化百分率(用藥前為100％)進行組間比較。
每組動物數(shù)為5條，給總丹參酚酸/黃芪總苷1.0mg/kg(臨用前用生理鹽水新鮮配制)，陽性對照藥劑量為0.5mg/kg，陰性對照組給1.0mg/kg的生理鹽水，三者均靜脈注射單次給藥。觀察犬心外膜電圖，觀察時間為給藥后0～3小時。
實驗結(jié)果如下1、總丹參酚酸和黃芪總苷對心肌缺血程度(心外膜電圖∑ST)的影響冠脈結(jié)扎后，心外電圖ST段總和(∑ST)明顯升高。生理鹽水組120min時∑ST升高達26.5±12.1％；總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈給藥后均能減輕心肌缺血程度，其中10/5、10/7和10/10組及陽性對照組∑ST顯著下降(P＜0.01)，并有一定的劑量關(guān)系。作用從給藥持續(xù)至180min，各時間點與生理鹽水組比較均有顯著差異(P＜0.01)。實驗結(jié)果見表1。
實驗結(jié)果表明，總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈給藥對犬冠脈結(jié)扎引起的急性心肌缺血程度有顯著的治療作用，且該作用與藥物配比有關(guān)。
給藥前后變化的統(tǒng)計檢驗用各組不同時間點變化值與生理鹽水組同一時間點變化值作組間方差分析檢驗。
2、總丹參酚酸和黃芪總苷對心肌缺血范圍(心外膜電圖N-ST)的影響總丹參酚酸和黃芪總苷能縮小心肌缺血范圍，降低N-ST值，作用可持續(xù)180min。其中10/3、10/5、10/7組及陽性對照組與生理鹽水組同時間點比較，有顯著差異(P＜0.05)或極顯著差異(P＜0.01)，10/10組僅在60 min時差異顯著(P＜0.05)。實驗結(jié)果見表2。
實驗結(jié)果表明，總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈注射能顯著降低心肌缺血范圍，且該作用與藥物配比有關(guān)。
3、總丹參酚酸和黃芪總苷對心肌梗塞范圍的定量組織學檢測的影響用定量組織學檢測心肌梗塞范圍即用N-BT染色顯示總丹參酚酸和黃芪總苷對心肌梗塞范圍的影響與心外膜電圖測定的結(jié)果一致?？偟⒎铀岷忘S芪總苷靜脈注射均能減少心肌梗塞范圍。其中10/5、10/7、10/10組及陽性對照組與生理鹽水組比較，有顯著差異(P＜0.05)或極顯著差異(P＜0.01)，10/15組僅對“梗塞區(qū)/全心”差異顯著(P＜0.05)。實驗結(jié)果見表3。
實驗結(jié)果表明，總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈給藥對犬冠脈結(jié)扎引起的心肌梗塞范圍有顯著的改善作用，且該作用與藥物配比有關(guān)。實驗結(jié)果證明，總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈注射能顯著降低冠脈結(jié)扎犬的心肌缺血的程度，縮小心肌缺血范圍，定量組織學檢測與心外膜電圖測定的結(jié)果一致，與生理鹽水對照組比較，梗塞區(qū)顯著縮小，證明總丹參酚酸和黃芪總苷靜脈注射對犬冠狀動脈結(jié)扎引起的心肌梗塞有明顯的治療作用。實驗結(jié)果還證明，總丹參酚酸和黃芪總苷的配比對藥效有影響，從實驗結(jié)果分析，總丹參酚酸和黃芪總苷的最佳配比應為10/3～10/7。
黃芪根10kg粉碎后，在加熱回流提取罐中用水回流提取三次，每次1h，合并提取液，加入到AB-8大孔吸附樹脂柱上，以100升的去離子蒸餾水洗脫糖類，再以50升0.1％的氫氧化鈉水溶液進行洗脫，繼以50升20％的酒精洗脫進行脫色，再以25升75％的酒精洗脫黃芪皂苷，洗脫液濃縮到小體積，離心得到沉淀A部分5.435克，向母液中加入酒精至酒精濃度為70％，離心，分得上清液，濃縮干燥后得到B部分，A部分和B部分混合后得到黃芪總皂苷。其中含黃芪甲苷20％以上。
取丹參酚酸提取物5.8g，黃芪總苷1.7g混合后用適量注射用水溶解，加甘露醇7.5g，按照常規(guī)凍干工藝凍干，即得注射用凍干粉。
實施例2取丹參10kg，用10倍量的50％的丙酮浸泡30min后開始滲漉，滲漉液減壓濃縮到?jīng)]有丙酮味，用適當體積的水稀釋濃縮液，按照比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過AB-8大孔樹脂柱，即用10kg大孔樹脂填充柱。先以4倍體積去離子蒸餾水洗脫，再以12倍柱體積30％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得丹酚酸成分。45℃減壓濃縮除去乙醇，繼續(xù)濃縮至原體積的1/10，以0.45微孔濾膜過濾，濃縮液按以下工藝凍干-50℃預凍3小時，-10℃凍干，升溫至20℃保溫2小時，然后得到黃色疏松結(jié)晶型粉末。其中含丹酚酸B鎂鹽達50％以上。
黃芪根10kg粉碎后，在加熱回流提取罐中用水回流提取三次，每次1h，合并提取液，加入到D101大孔吸附樹脂柱上，以100升的去離子蒸餾水洗脫糖類，再以50升0.1％的氫氧化鉀水溶液進行洗脫，繼以50升20％的酒精洗脫進行脫色，再以25升90％的酒精洗脫黃芪皂苷，洗脫液濃縮到小體積，離心得到沉淀A部分5.754克，向母液中加入酒精至酒精濃度為70％，離心，分得上清液，濃縮干燥后得到B部分，A部分和B部分混合后得到黃芪總皂苷。其中含黃芪甲苷20％以上。
取丹參酚酸提取物10g，加注射用水溶解；取黃芪總苷6g，加注射用水溶解。合并兩部分溶液，按常規(guī)方法配制成1000ml藥液，過濾，精濾，灌封，滅菌，檢驗，得20ml/支注射劑共50支。
表1 犬冠脈結(jié)扎對心外膜電圖ST段總和(∑ST)的影響(mV，x±SD，n＝5)組別 劑量 指標0min 30min 60min 90min120min 180min生理鹽水 1ml/kgx±SD332.8±120.5366.0±133.2 411.9±178.5 412.0±185.0 422.8±172.3 398.4±1401變化％ 10.6±6.0 22.2±12.421.8±15.026.5±12.123.0±20.6恬爾心0.5mg/kg x±SD278.9±124.6180.0±134.0 177.4±140.7 176.6±155.0 177.5±135.9 204.3±146.8變化％ -42.4±21.3***-43.8±21.1***-45.0±24.0***-42.7±18.5***-33.0±24.0***10/01mg/kgx±SD317.6±103.0289.9±107.4 246.7±110.2 294.0±83.1 261.2±77.9 243.6±92.1變化％ 2.9±2.2 8.0±5.6 16.8±10.09.2±6.7 11.1±7.510/31mg/kgx±SD349.4±113.1318.9±118.4 261.8±121.4 323.1±92.1 287.2±85.9 267.6±101.0變化％ 12.9±5.2 18.0±5.6 21.8±11.019.2±6.7 17.1±5.510/51mg/kgx±SD351.6±151.41 230.0±96.1 229.8±104.4 245.5±117.6 226.5±97.7 208.9±84.6變化％ -25.3±16.4***-29.2±10.5***-31.1±11.6***-32.4±12.3***-35.6±14.6***10/71mg/kgx±SD266.2±128.8151.8±104.0 158.0±84.7 150.7±83.4 180.7±93.3 160.7±107.9變化％ -45.9±18.1***-48.5±21.7***-51.4±25.4***-45.9±20.2***-49.6±21.7***10/10 1mg/kgx±SD272.5±67.7 194.2±98.4 208.4±122.4 210.4±103.4 216.1±98.4 223.6±108.0變化％ -48.0±18.2***-43.7±26.9***-44.3±30.1***-40.7±21.9***-39.7±18.9***10/15 1mg/kgx±SD351.0±127.1303.0±104.7 294.9±148.6 282.2±115.4 260.9±80.9 318.6±138.3變化％ 22.6±12.018.6±12.520.3±11.226.9±13.527.3±15.50/101mg/kgx±SD3115±149.0 282.9±85.3 294.1±125.0 300.2±87.9 325.4±108.5 238.7±71.1變化％ 17.9±8.9 24.6±11.721.0±12.213.9±8.7 13.1±7.5與生理鹽水組比較**P＜0.05，***P＜0.01
表2 犬冠脈結(jié)扎對心肌梗塞范圍(N-ST)的影響(點，x±SD，n＝5)組別 劑量 0min30min 60min90min 120min180min生理鹽水 1ml/kg28.4±1.3 28.6±2.128.6±1.7 28.4±1.1 28.4±1.5 27.8±1.5變化％0.6±3.0 0.7±2.9 0.2±7.4 0.2±8.1 -1.8±10.0恬爾心 0.5mg/kg 26.6±2.1 18.8±5.018.0±3.7 17.6±4.9 17.4±3.8 17.2±5.4變化％-29.9±13.8***-32.3±13.2***-34.0±17.3***-34.8±12.5***-35.4±19.4***10/0 1mg/kg26.6±3.7 22.4±3.223.2±3.1 23.6±2.3 22.4±2.6 23.2±2.2變化％-15.0±12.7 -12.2±10.7 -10.2±12.4 -14.5±14.9 -11.9±9.710/3 1mg/kg26.7±1.5 21.8±7.123.0±7.1 25.2±5.8 22.0±7.0 22.8±5.2變化％-26.1±10.0***-21.6±9.4***-13.2±9.0**-25.4±9.9***-22.0±13.5***10/5 1mg/kg26.8±2.1 18.0±5.717.8±6.1 17.8±5.4 13.6±3.2 12.8±5.3變化％-22.6±11.7***-23.5±9.8***-23.7±16.8***-27.7±8.0***-30.7±7.7***10/7 1mg/kg28.1±1.6 17.8±3.616.6±3.8 17.8±5.8 17.6±3.6 16.6±4.0變化％-26.9±9.9***-28.6±13.5***-27.9±15.6***-28.0±10.2***-29.5±9.1***10/101mg/kg28.6±2.6 22.9±5.625.7±7.4 26.2±7.8 26.6±9.0 24.6±8.9變化％-12.0±10.7 -13.2±5.9**-8.1±10.0-7.5±10.9-10.9±13.010/151mg/kg26.8±1.9 25.9±7.626.7±6.4 24.2±9.8 26.6±8.0 27.6±6.9變化％-7.2±11.0 -10.0±13.7 -8.3±10.1-8.2±14.0-1.4±6.50/10 1mg/kg28.0±4.7 23.4±4.224.2±4.1 24.6±3.3 23.4±3.6 24.2±3.2變化％-14.0±11.7 -11.2±9.7-9.2±8.4 -13.5±13.9 -10.9±8.7與生理鹽水組比較**P＜0.05，***P＜0.01
表3犬冠脈結(jié)扎后的心肌梗塞范圍(x±SD，n＝5)組別 劑量 梗塞區(qū)/全心(％)梗塞區(qū)/左心室(％)生理鹽水 1ml/kg 13.7±2.1 22.8±3.5恬爾心0.5mg/kg6.7±1.5***10.9±2.0***10/01mg/kg 10.2±4.6 16.3±8.110/31mg/kg 11.4±6.0 19.5±7.210/51mg/kg 9.8±2.3**11.6±4.8**10/71mg/kg 7.1±1.8***9.5±2.8***10/10 1mg/kg 11.3±2.1**15.0±2.3**10/15 1mg/kg 11.2±2.3**18.0±8.20/101mg/kg 12.0±4.8 18.8±7.9
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物，其特征在于由從丹參中提取的總丹參酚酸和從黃芪中提取的黃芪總苷為原料組配而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物，其特征在于原料組份的重量配比為含丹酚酸B鎂鹽50％以上的總丹參酚酸1份，含黃芪甲苷20％以上的黃芪總苷0.1-1份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物，其特征在于總丹參酚酸∶黃芪總苷為1∶0.3----1∶0.7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的中藥有效部位組合物，其特征在于加入相應輔料，為粉針劑、注射劑、片劑、緩釋劑、滴丸、沖劑、膠囊劑、緩釋微丸。
5.一種如權(quán)利要求1-4所述的治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于以丙酮進行滲漉法提取，經(jīng)大孔樹脂柱純化，得到含丹酚酸B鎂鹽50％以上的總丹參酚酸；用水提取，經(jīng)大孔樹脂柱堿水洗脫，得到含黃芪甲苷20％以上的黃芪總苷；將該二種有效部位按前述配比并加入相應輔料混合后，即可制成各種制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提取純化總丹參酚酸時，丙酮濃度在50～70％之間，使用量為丹參重量的10倍以上，浸泡時間在20分鐘以上；將丙酮滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右，至無丙酮味，加少量水稀釋后，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積的20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得丹酚酸成分；再以高濃度乙醇液洗去脂溶性雜質(zhì)，再進行下一輪純化；采用冰凍干燥法進行濃縮干燥；最終得黃色疏松結(jié)晶性粉末，其中含丹酚酸B鎂鹽達50％以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提取黃芪總苷時，水15倍量以上，回流提取2次以上，每次40-80分鐘；黃芪水提液按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以15倍以上體積堿性溶液洗脫，繼以20％乙醇溶液洗脫，再以70-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，即為黃芪總苷；最后用95％乙醇再生樹脂柱，進行下一輪純化；其中黃芪甲苷的含量在20％以上。
全文摘要
本發(fā)明是一種用于治療心腦血管病的中藥有效部位組合物及其制備方法。該藥物組合物由總丹參酚酸(丹酚酸B鎂鹽達50％以上)和黃芪總皂苷(黃芪甲苷達2％以上)二種原料按一定配比制成。本發(fā)明生產(chǎn)的復方藥物既提高了傳統(tǒng)中藥的藥理作用和臨床療效，同時又降低了雜質(zhì)的含量，可制成各種制劑，治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、腦梗塞、腦缺血，實現(xiàn)了中藥復方安全、有效、穩(wěn)定、可控、方便的目的。
文檔編號A61P9/00GK1425430SQ0215500
公開日2003年6月25日 申請日期2002年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月19日
發(fā)明者張衛(wèi)東, 蘇娟, 張川 申請人:上海博泰醫(yī)藥科技有限公司