專(zhuān)利名稱(chēng)：一組抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組抗HIV感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近兩年的研究結(jié)果證實(shí)短的雙鏈RNA在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中具有干擾RNA功能，可以特異抑制特定基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。通過(guò)該途徑也可抑制病毒(包括HIV病毒)基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。但是由于HIV病毒具有極大的變異性，目前所使用的序列均只與少數(shù)HIV株序列同源，因此不能作為普遍有效的基因治療藥物使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一組抗HIV感染及防治艾滋病的核苷酸序列。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述核苷酸序列的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下設(shè)計(jì)方案一組抗HIV感染及防治艾滋病的RNA序列及其片段，該組RNA序列如下(1)aucaaugaggaagcugcagaaugg；(2)gggaagugacauagcaggaacuacuag；(3)uaaauaaaauaguaagaauguauagcccu；(4)uaugggguaccugugugga；(5)gccaauucccauacauuauugugc；(6)uuaaauggcagucuagcagaa；(7)accacacacaaggcuacuucccugau；(8)acagccgccuagcauuucaucac；(9)ggauggugcuucaagcuaguaccaguu。
一組由所述的RNA序列及其片段和與之互補(bǔ)的序列雜交形成的雙鏈RNA序列。
一組由所述的RNA序列及其片斷在其5’端或3’端加核苷酸修飾的序列。
一組所述的RNA序列及其片段和與之反向互補(bǔ)的序列加上中間非互補(bǔ)連接序列形成的發(fā)夾樣RNA雙鏈。
一組所述序列對(duì)應(yīng)的DNA序列。
包含所述的RNA序列的表達(dá)載體。
包含所述的DNA序列的表達(dá)載體。
包裹所述的RNA序列的脂質(zhì)體。
包裹所述的DNA序列的脂質(zhì)體。
包裹所述的表達(dá)載體的脂質(zhì)體。
將權(quán)所述的RNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
將所述的DNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
將所述的表達(dá)載體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
將所述的脂質(zhì)體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
所述的RNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
所述的DNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
所述的表達(dá)載體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
所述的脂質(zhì)體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)同源比較，獲得一系列與所有已經(jīng)發(fā)表的HIV序列高度同源的RNA序列片段，使用該系列片段衍生的雙鏈RNA序列可以有效地抑制HIV基因的表達(dá)；使用質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄的該系列RNA也可在細(xì)胞內(nèi)抑制HIV基因的表達(dá)；攜帶該片段對(duì)應(yīng)DNA腺病毒伴隨病毒感染細(xì)胞后可以轉(zhuǎn)錄出對(duì)應(yīng)的雙鏈RNA并抑制HIV基因的表達(dá)。


圖1為報(bào)告質(zhì)粒pEGFP-gp120的構(gòu)建圖。
圖2為通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)的雙鏈干擾RNA可以降低EGFP-HIV gp120融合蛋白的表達(dá)圖。
圖3為通過(guò)Western-Blot檢測(cè)的雙鏈干擾RNA可以降低EGFP-HIV gp120融合蛋白的表達(dá)圖。
圖4為表達(dá)內(nèi)部雙鏈RNA的質(zhì)粒p-H1-gp120i的構(gòu)建圖。
圖5為質(zhì)粒pAAV-120i的構(gòu)建圖。
圖6為通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)的攜帶可轉(zhuǎn)錄HIV gp120發(fā)夾樣雙鏈RNA的重組AAV病毒可抑制GFP-GP120融合蛋白的表達(dá)圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例中采用的方法均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，詳見(jiàn)《分子克隆》第三版。
實(shí)施例1極度保守HIV RNA序列的獲得選擇已經(jīng)發(fā)表的HIV1典型序列，按功能基因分成每個(gè)約70個(gè)核苷酸(nt)的片段；每一個(gè)片段用NIH(美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院)提供的BLAST軟件(BLASTN 2.2.4/2.2.5)在英特網(wǎng)上分析其在GenBank(NCBI，美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心)，EMBL(歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù))，DDBJ(日本DNA數(shù)據(jù)庫(kù))及GDB(基因組數(shù)據(jù)庫(kù))不少于14萬(wàn)個(gè)核苷酸序列中的同源序列；選擇出符合以下條件的核苷酸序列(1)該片段大于或等于19個(gè)核苷酸；(2)該片段在所比較的HIV序列中完全同源或至少有1000個(gè)以上公開(kāi)序列中該片段完全同源；(3)不完全同源時(shí)，相應(yīng)序列與該片段僅一個(gè)nt不同。所獲得的序列見(jiàn)表1，比較結(jié)果詳見(jiàn)表2。
表1.通過(guò)同源比較發(fā)現(xiàn)的HIV序列中極度保守的RNA序列

表2.極度保守RNA序列的同源比較結(jié)果

實(shí)施例2.使用合成RNA雙鏈，降低HIV env基因的表達(dá)。
根據(jù)上述env基因的保守序列(表1中4號(hào)序列)19核苷酸的RNA片斷，并根據(jù)互補(bǔ)原則合成該鏈的互補(bǔ)RNA鏈，在RNA鏈3’端加UU修飾5’ uaugggguaccuguguggauu3’uuauaccccauggacacaccu如圖1所示，質(zhì)粒pEGFPC1(Clontech，CA)用EcoRI和BamHI雙酶切(37℃ 1小時(shí))后回收大片斷作為載體；以HIV-1 Bru株cDNA(2ng)為模板，加gp120引物1(5’cggaattctaaagagcacaaga cagtggac)；和引物2(5’cggatcctactctaccgtcagcgtcattga)各100ng，Pfu高保真酶2.5單位，dNTP 250μmol/L，2.5mol/L MgCl2，25mmol/LTrisHCl(pH8.3)進(jìn)行PCR反應(yīng)(94℃ 30秒，50℃ 30秒，72℃ 90秒，使用Perkin Elmer 9700型PCR儀，共30循環(huán))，PCR產(chǎn)物用Qiagen Gel Extraction Kit(購(gòu)自Biolab)EcoRI和BamHI酶切后與上述載體連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109(購(gòu)自Promega)，獲得完全正確的質(zhì)粒pEGFP-gp120，該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可表達(dá)綠色熒光蛋白與HIV gp120的融合蛋白。
質(zhì)粒pEGFP-gp120 1μg和1μg上述合成的RNA雙鏈，使用LIPOFECTamine法(見(jiàn)Invitrogen說(shuō)明書(shū))共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞(購(gòu)自ATCC)，36小時(shí)后與加1μg無(wú)關(guān)雙鏈(使用實(shí)施例3中的GAG雙鏈作為無(wú)關(guān)雙鏈)RNA的共轉(zhuǎn)染細(xì)胞用熒光照相法比較綠色熒光蛋白-GP120融合蛋白的表達(dá)量，并可通過(guò)使用抗GFP抗體(購(gòu)自Clontech)進(jìn)行免疫印跡(IB)，比較融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量。
結(jié)果如圖2所示，與對(duì)照比較，env基因特異的雙鏈RNA使融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量顯著降低；重復(fù)該實(shí)驗(yàn)兩次，分別以DsRNA1和DsRNA2表示，如圖3所示，該dsRNA能降低GFP-HIV GP120融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量80％以上。
實(shí)施例3、合成RNA雙鏈抑制gag基因表達(dá)根據(jù)上述gag保守序列(表1中2號(hào)序列)合成19核苷酸的RNA片斷，并根據(jù)互補(bǔ)原則合成該鏈的互補(bǔ)RNA鏈，在互補(bǔ)RNA鏈3’端加UU，退火后形成RNA雙鏈5’ gugacauagcaggaacuacuu3’uucacuguaucguccuugaug按照實(shí)施例2的方法，通過(guò)PCR從HIV(LAV-1，Bru分離株)cDNA擴(kuò)增出GAG基因，克隆至pEGFP C1質(zhì)粒(Clontech，CA)，該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可表達(dá)綠色熒光蛋白與HIV gag的融合蛋白。
所獲得質(zhì)粒與RNA雙鏈，使用LIPOFECTamine法共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，36小時(shí)后與不加雙鏈RNA的轉(zhuǎn)染細(xì)胞通過(guò)熒光顯微鏡觀察比較綠色熒光蛋白-GAG融合蛋白的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)該RNA可使融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量顯著降低。
實(shí)施例4.合成雙鏈RNA抑制nef基因表達(dá)根據(jù)nef保守序列(表1中的7號(hào)序列)，合成19核苷酸的RNA片斷，并根據(jù)互補(bǔ)原則合成該鏈的互補(bǔ)RNA鏈，在互補(bǔ)RNA鏈3’端加UU，退火后形成RNA雙鏈5’accacacacaaggcuacuuuu3’ uuuggguguguuccgaugaa按照實(shí)施例2的方法，通過(guò)PCR從HIV(LAV-1，Bru分離株)cDNA擴(kuò)增出nef基因，克隆至pEGFP C1質(zhì)粒(Clontech，CA)，該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可表達(dá)綠色熒光蛋白與HIV NEF的融合蛋白。
所獲得質(zhì)粒與RNA雙鏈?zhǔn)褂肔IPOFECTamine法共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，36小時(shí)后與不加雙鏈RNA的轉(zhuǎn)染細(xì)胞通過(guò)熒光顯微鏡觀察比較綠色熒光蛋白-NEF融合蛋白的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)該RNA可使融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量顯著降低。
實(shí)施例5.使用合成雙鏈RNA降低其他HIV蛋白的產(chǎn)量按照實(shí)施例2所述的方法使用合成雙鏈RNA降低相應(yīng)HIV蛋白的產(chǎn)量，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3使用新型雙鏈核糖核酸制HIV其它基因表達(dá)的效率

注+++抑制60-80％；++++抑制80-100％。
實(shí)施例6、合成含有env基因保守序列對(duì)應(yīng)的DNA片段及其雜交序列，克隆至真核表達(dá)載體，在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)干擾RNA，抑制HIV膜蛋白的表達(dá)合成含有env基因保守序列(表1中5號(hào)序列)對(duì)應(yīng)的DNA片段及其雜交序列(黑斜體)的DNA片斷，退火后形成DNA片段，5’端為BamHI位點(diǎn)的末端，3’端為HindIII位點(diǎn)的末端，在同源序列及其互補(bǔ)序列中間含有間隔序列。B為A的互補(bǔ)序列A5’gatccccttcccatacatttattgtgcttcaagagagcacaataatgtatgggaatttttggaaaB5’agcttttccaaaaa ttcccatacattattgtgctctcttgaagcacaataatgtatgggaaggg如圖4所示，通過(guò)PCR(以人基因組DNA 1μg為模板，引物15’-TAATTAATGCGGCCGCAATTCGAACGCTGACGTC-3’，引物2 5’-GCACTAGTAAGCT TGGATCCGTGGTCTCATACAGAACTTATAAGATTCCC-3’，擴(kuò)增條件同實(shí)施例2)獲得人H1 RNA基因的啟動(dòng)子區(qū)，質(zhì)粒pEGFPC1(Clontech)用AseI和XbaI酶切后回收大片段作為載體，上述擴(kuò)增片段用AseI和SpeI酶切后回收，與載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后獲得質(zhì)粒pH1。將上述合成的DNA片段(A，B)退火后克隆至pH1質(zhì)粒的BamHI和HindIII位點(diǎn)，構(gòu)建質(zhì)粒pH1-gp120i。該質(zhì)粒在細(xì)胞中，在RNA聚合酶III的作用下，表達(dá)發(fā)夾狀RNA，形成RNA雙鏈。
用4μg pH1-gp120i質(zhì)粒(使用同量pH1質(zhì)粒作為對(duì)照)與表達(dá)EGFP-HIV GP120融合蛋白的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，通過(guò)如實(shí)施例2所述方法比較融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量的差異，結(jié)果表明EGFP-gp120融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)量有顯著降低；該結(jié)果說(shuō)明使用質(zhì)粒載體攜帶編碼上述RNA的DNA序列可以有效抑制HIV靶基因的表達(dá)。
實(shí)施例7.使用腺病毒伴隨病毒載體，攜帶如實(shí)施例6中所述的H1啟動(dòng)子及編碼發(fā)夾狀雙鏈RNA的DNA片段，重組病毒感染細(xì)胞后抑制HIV GP120基因的表達(dá)。
如圖5所示，質(zhì)粒pAAV-MCS(購(gòu)于Stratagene)用NotI和HindIII酶切；含H1啟動(dòng)子和編碼gp120的發(fā)夾狀RNA的DNA片段從質(zhì)粒pH1-gp120i中用NotI和HindII酶切獲得，并克隆至pAAV-MCS的相應(yīng)位點(diǎn)。構(gòu)建質(zhì)粒pAAV-gp120i，將該質(zhì)粒(4μg)(對(duì)照病毒載體用pAAV-MCS)與輔助質(zhì)粒pHelper(1μg，Stratagene)和質(zhì)粒pAAV-RC(2μgStratagene)一起用LIPOFECTamine法共轉(zhuǎn)染HEK 293FT細(xì)胞，48小時(shí)后取上清制備“重組AAV病毒”及對(duì)照病毒；將pEGFP-GP120(1μg)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，然后加入上述含重組病毒的制備上清，24小時(shí)后用熒光顯微鏡分析細(xì)胞內(nèi)GFP發(fā)光強(qiáng)度。
結(jié)果如圖6所示，表明攜帶可轉(zhuǎn)錄HIV gp120發(fā)夾樣雙鏈RNA的重組AAV病毒可使GFP-GP120融合蛋白表達(dá)水平顯著降低。
序列表<110>北京昭衍新藥研究中心<120>一組抗HIV感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其應(yīng)用<130>
<160>9<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>24<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>1aucaaugagg aagcugcaga augg24<210>2<211>27<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>2gggaagugac auagcaggaa cuacuag 27<210>3<211>29<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>3uaaauaaaau aguaagaaug uauagcccu 29
<210>4<211>19<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>4uaugggguac cugugugga 19<210>5<211>24<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>5gccaauuccc auacauuauu gugc24<210>6<211>21<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>6uuaaauggca gucuagcaga a 21<210>7<211>26<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>7accacacaca aggcuacuuc ccugau 26
<210>8<211>23<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>8acagccgccu agcauuucau cac 23<210>9<211>27<212>RNA<213>慢病毒屬(Lentivirus genera)<400>9ggauggugcu ucaagcuagu accaguu 2權(quán)利要求
1.一組抗HIV感染及防治艾滋病的RNA序列及其片段，該組RNA序列如下(1)aucaaugaggaagcugcagaaugg；(2)gggaagugacauagcaggaacuacuag；(3)uaaauaaaauaguaagaauguauagcccu；(4)uaugggguaccugugugga；(5)gccaauucccauacauuauugugc；(6)uuaaauggcagucuagcagaa；(7)accacacacaaggcuacuucccugau；(8)acagccgccuagcauuucaucac；(9)ggauggugcuucaagcuaguaccaguu。
2.一組由權(quán)利要求1所述的RNA序列及其片段和與之互補(bǔ)的序列雜交形成的雙鏈RNA序列。
3.一組由權(quán)利要求1或2所述的RNA序列及其片斷在其5’端或3’端加核苷酸修飾的序列。
4.一組由權(quán)利要求1或2所述的RNA序列及其片段和與之反向互補(bǔ)的序列加上中間非互補(bǔ)連接序列形成的發(fā)夾樣RNA雙鏈。
5.一組權(quán)利要求1或2所述序列對(duì)應(yīng)的DNA序列。
6.一組權(quán)利要求3所述序列對(duì)應(yīng)的DNA序列。
7.一組權(quán)利要求4所述序列對(duì)應(yīng)的DNA序列。
8.包含權(quán)利要求1或2所述的RNA序列的表達(dá)載體。
9.包含權(quán)利要求3所述的RNA序列的表達(dá)載體。
10.包含權(quán)利要求4所述的RNA序列的表達(dá)載體。
11.包含權(quán)利要求5所述的DNA序列的表達(dá)載體。
12.包含權(quán)利要求6或7所述的DNA序列的表達(dá)載體。
13.包裹權(quán)利要求1或2所述的RNA序列的脂質(zhì)體。
14.包裹權(quán)利要求3所述的RNA序列的脂質(zhì)體。
15.包裹權(quán)利要求4所述的RNA序列的脂質(zhì)體。
16.包裹權(quán)利要求5所述的DNA序列的脂質(zhì)體。
17.包裹權(quán)利要求6或7所述的DNA序列的脂質(zhì)體。
18.包裹權(quán)利要求8所述的表達(dá)載體的脂質(zhì)體。
19.包裹權(quán)利要求9或10或11所述的表達(dá)載體的脂質(zhì)體。
20.包裹權(quán)利要求12所述的表達(dá)載體的脂質(zhì)體。
21.將權(quán)利要求1或2所述的RNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
22.將權(quán)利要求3所述的RNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
23.將權(quán)利要求4所述的RNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
24.將權(quán)利要求5所述的DNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
25.將權(quán)利要求6或7所述的DNA序列在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
26.將權(quán)利要求8所述的表達(dá)載體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
27.將權(quán)利要求9或10或11所述的表達(dá)載體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
28.將權(quán)利要求12所述的表達(dá)載體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
29.將權(quán)利要求13所述的脂質(zhì)體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
30.將權(quán)利要求14或15或16或18或20所述的脂質(zhì)體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
31.將權(quán)利要求17所述的脂質(zhì)體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
32.將權(quán)利要求19所述的脂質(zhì)體在體內(nèi)或體外導(dǎo)入真核細(xì)胞系、動(dòng)物及人體的方法。
33.權(quán)利要求1或2所述的RNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
34.權(quán)利要求3所述的RNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
35.權(quán)利要求4所述的RNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
36.權(quán)利要求5所述的DNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
37.權(quán)利要求6或7所述的DNA序列及其片段用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
38.權(quán)利要求8所述的表達(dá)載體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
39.權(quán)利要求9或10或11所述的表達(dá)載體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
40.權(quán)利要求12所述的表達(dá)載體用于制備抗HIV感染及艾磁病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
41.權(quán)利要求13所述的脂質(zhì)體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
42.權(quán)利要求14或15或16或18或20所述的脂質(zhì)體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
43.權(quán)利要求17所述的脂質(zhì)體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
44.權(quán)利要求19所述的脂質(zhì)體用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
45.權(quán)利要求21所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
46.權(quán)利要求22或23或24或26或28或29或31或32所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
47.權(quán)利要求25所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
48.權(quán)利要求27所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
49.權(quán)利要求30所述的方法用于制備抗HIV感染及艾滋病診斷、治療和預(yù)防的藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一組抗HIV感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其應(yīng)用，該序列如序列表所示，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)同源比較，獲得一系列與所有已經(jīng)發(fā)表的HIV序列高度同源的RNA序列片段，使用該系列片段衍生的雙鏈RNA序列可以有效地抑制HIV基因的表達(dá)；使用質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄的該系列RNA也可在細(xì)胞內(nèi)抑制HIV基因的表達(dá)；攜帶該片段對(duì)應(yīng)DNA腺病毒伴隨病毒感染細(xì)胞后可以轉(zhuǎn)錄出對(duì)應(yīng)的雙鏈RNA并抑制HIV基因的表達(dá)。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1508141SQ0215678
公開(kāi)日2004年6月30日 申請(qǐng)日期2002年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月18日
發(fā)明者周志文, 馮宇霞, 左叢林, 李月娟 申請(qǐng)人:北京昭衍新藥研究中心