專(zhuān)利名稱(chēng):穿山龍及其薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明是關(guān)于中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎中的新用途,屬于中藥領(lǐng)域。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎中的新用途。
中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎中的作用,是通過(guò)以下的藥效實(shí)驗(yàn)、臨床實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)的。
中藥穿山龍與其提取物薯蕷總皂苷具有減輕尿蛋白排泄、降低高血壓、減輕腎小球病理變,從而達(dá)到治療慢性腎炎,改善腎功能的作用。實(shí)驗(yàn)例1中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎中的藥效實(shí)驗(yàn)一、材料與方法(1)、動(dòng)物模型的制備雄性Wistar大鼠,切除左腎24小時(shí)后,尾靜脈注射500μg單克隆抗體1-22-3,造成慢性系膜增生性腎小球腎炎,造模后共觀察6周。
(2)、實(shí)驗(yàn)用藥的制備按常規(guī)取實(shí)驗(yàn)室制備薯蕷總皂苷。
(3)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
28只雄性Wistar大鼠7周齡,隨機(jī)分四組,每組7只。第1組給生理鹽水(PBS)作對(duì)照;第2組,給穿山龍生藥煎劑3g/公斤·體重/日。第3組,給薯蕷總皂苷50mg/公斤·體重/日。第4組,給洛丁新2mg/公斤·體重/日。抗體注射同時(shí)灌胃給藥,共觀察42天。第42天處死全部大鼠,心臟取血,摘取右腎稱(chēng)重后,取腎組織做免疫熒光和光鏡檢查。
(4)、尿蛋白檢查取單克隆抗體1-22-3注射后第1、7、14、21、28、35、42天24小時(shí)尿,利用Bradford方法,檢查尿液中24小時(shí)蛋白的含量。
(5)、大鼠血壓測(cè)定于取尿前檢查大鼠的血壓,方法是將大鼠固定在檢測(cè)裝置(SoftronECGprocessor,Tokyo,Japan)中,加溫至30℃,測(cè)尾部血管的收縮壓和舒張壓,共重復(fù)三次,取平均值。我們測(cè)量了大鼠造模后第1、7、21、31和41天血壓的變化。
(6)、光學(xué)顯微鏡檢查部分腎組織被置于10%福爾馬林液中固定,石蠟包埋,將組織切割為4μm厚的薄片,進(jìn)行PAM和PAS染色。每張組織切片我們觀察了100個(gè)腎小球,對(duì)腎小球內(nèi)系膜基質(zhì)增生進(jìn)行了半定量分析。并計(jì)算了100個(gè)腎小球中新月體的個(gè)數(shù)。
(7)、免疫熒光分析法部分腎組織迅速被冷凍在N-乙烷液體中,置-70℃保存。冷凍組織被切割為3-4μm薄片,利用間接免疫熒光方法染色。所使用的一次抗體有抗轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)抗體,抗I型膠原抗體,和抗大鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)抗體等。FITC標(biāo)記的豬抗兔免疫球蛋白Igs,作為T(mén)GF-β和I型膠原的二次抗體;FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG2a作為α-SM-actin的二次抗體。我們檢查了每張組織切片中20個(gè)腎小球,根據(jù)Floege等人(Kidney Int.1992)的方法,進(jìn)行了半定量分析。即根據(jù)腎小球熒光范圍和強(qiáng)度,可分為陰性和陽(yáng)性。陰性我們定為“O”。陽(yáng)性中,熒光范圍小于25%,為“1+”;25%~50%為“2+”;50~75%為“3+”;大于75%為“4+”。然后算出每張切片中,一個(gè)腎小球的均值。將所有組織切片,按組分類(lèi),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
(8)、血生化檢查我們檢查了各組大鼠血漿總蛋白、白蛋白、總膽固醇、血肌酐和尿素氮的含量。
(9)、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理組間比較采用秩和檢驗(yàn)和非配對(duì)t檢驗(yàn)方法。
二.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)尿蛋白結(jié)果中藥穿山龍與穿龍薯蕷總皂苷在造模后第1、7、14、21、28、35和42天明顯地抑制了尿蛋白的排泄。與生理鹽水對(duì)照組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異(見(jiàn)表1)。表1. 24小時(shí)尿蛋白結(jié)果(x±s)1天 7天 14天21天 28天 35天 42天組別 n mg/d mg/d mg/dmg/d mg/d mg/d mg/dPBS 7 15.04±2.94 76.84±25.4383.97±24 53 70.50±13.95 54.69±15.34 45.27±7.85 35.47±6.51穿山龍3g 7 9.93±1.96**△△△46.66±9.77**45.96±12.92***34.63±4.18**△30.29±5.42***△24 63±4.43***22.67±6.51**薯蕷皂苷50mg 7 13.96±1.94 50.30±5.36*42.41±3.19**37.84±3.27***34.27±4.33**33.03±4.27**△△32.44±4.90洛丁新4mg7 15.79±2.28 54.67±5.61**49.56±3.51*43.56±5.39***34.27±4.33**37.59±6.11 35.30±5.34注與PBS組比較*P<0.05,**p<0.001;與洛丁新組比較△p<0.05,△△p<0.01△△△,<p<0.001(2)光鏡與免疫熒光結(jié)果中藥穿山龍與穿龍薯蕷總皂苷均可減輕腎小球的病理?yè)p害。減少系膜基質(zhì)的擴(kuò)張和新月體的形成(見(jiàn)圖1、圖2、圖3)。我們半定量分析了穿山龍與穿龍薯蕷總皂苷對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_(TGF-β),I型膠原(Coll I)和大鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)等的影響,我們發(fā)現(xiàn)藥物治療后明顯地抑制了TGF-β、CollI和α-SM-actin等在腎小球內(nèi)的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性的差異(見(jiàn)表2)。
表2免疫熒光半定量分析結(jié)果(x±s)n TCF-β Coll I α-SMAPBS7 1.06±0.30 1.05±0.341.13±0.26穿山龍3g 7 0.21±0.13***0.18±0.099***△0.40±0.12***薯蕷皂苷50mg 7 0.32±0.057***0.31±0.073***0.46±0.20***洛丁新4mg 7 0.37±0.076***0.4±0.082***0.53±0.13***注與PBS組比較***p<0.001;與洛丁新組比較△P<0.05(3)對(duì)大鼠血壓的影響如表3、4所示,造模后大鼠的血壓逐漸增高,在第21天、31天和41天均表現(xiàn)出高血壓,而中藥穿山龍與穿龍薯蕷總皂苷均可使血壓降低,與已公認(rèn)的降壓藥洛丁新有同樣的效果(見(jiàn)表2、3),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性的差異。
表3收縮壓的變化情況 (x±s)1天 7天 21天 31天41天組別 n (mmHg)(mmHg)(mmHg) (mmHg) (mmHg)PBS 7 114.09±7.31 114.46±9.55 137.34±11.72 143.33±15.26139.13±14.75穿山龍3g 7 113.33±6.24*109.3±3.07 126.57±4.56**122.2±3.77***123.36±3.51**薯蕷皂苷50mg 7 112.53±6.88 116.07±9.88 127.67±4.18*124.01±4.02***123.64±3.09**洛丁新4mg7 114.79±4.76 115.01±4.47 129.43±3.29*129.34±2.71**130.63±5.33注與PBS組比較*P<0.05,**p<0.01,***p<0.001表4舒張壓的變化情況(x±s)1天 7天 21天31天 41天組別 n (mmHg)(mmHg) (mmHg) (mmHg) (mmHg)PBS 7 82.77±6.74 81.39±8.66 94.50±7.30101.00±11.94 99.39±14.24穿山龍3g 7 78.61±4.45 77.76±3.884.01±3.32**85.24±4.83***83.27±2.94***薯蕷皂苷50mg 7 86.84±4.01 86.49±4.487.46±4.49*86.06±2.97**85.31±2.52**洛丁新4mg7 84.8±3.1887±5.79 89.04±3.7090.51±4.38*89.07±2.42*注與PBS組比較*P<0.05,**p<0.01,***p<0.001(4)對(duì)血生化指標(biāo)的影響如表5所示,穿山龍與穿龍薯蕷總皂苷可提高血漿總蛋白,改善腎功能。
表5血生化指標(biāo)(x±s)n T-proteinT-cholest BUN Creatinine(G/dl) (Mg/dl)(Mg/dl)(Mg/dl)PBS 7 5.64±0.18 91.86±24.0934.54±9.93 0.36±0.079穿山龍3g 7 5.61±0.11 73.71±9.07*27.36±4.09*0.31±0.069薯蕷皂苷50mg 7 6.04±0.15***△△△83.14±7.34 26.24±6.26*0.29±0.069洛丁新4mg7 5.66±0.19 81.43±12.2031.93±3.26 0.34±0.053注與PBS組比較*p<0.05,***p<0.001;與洛丁新組比較△△△<P<0.001實(shí)驗(yàn)例2中藥穿山龍?jiān)谥委熉阅I小球腎炎中的臨床實(shí)驗(yàn)1臨床資料1.1病例選擇 凡臨床表現(xiàn)符合慢性腎炎診斷標(biāo)準(zhǔn),排除了急性感染后腎小球腎炎、過(guò)敏性紫癜、狼瘡性腎炎等繼發(fā)性腎小球疾病的可能性。
1.2一般資料臨床觀察20例,均為中日友好醫(yī)院1999-2001年住院或門(mén)診患者。其中男21例,女9例;年齡16-62歲,平均37.53歲;病程2-10年。臨床表現(xiàn)為單純蛋白尿7例,蛋白尿兼血尿7例,腎病綜合征6例。10例具有病理診斷結(jié)果,其中IgA腎病2例,非IgA系膜增生性腎炎5例,微小病變3例。
2治療方法患者沒(méi)有使用任何西藥,單純口服穿山龍為主的中藥煎劑,每天2次,每次約100ml?;蚧颊邌渭兪褂梦魉幆熜Р幻黠@,尿蛋白持續(xù)不消。西藥減量的同時(shí),配合服用穿山龍為主的中藥煎劑。
3療效標(biāo)準(zhǔn)與治療結(jié)果3.1療效標(biāo)準(zhǔn)參照第二次全國(guó)腎病專(zhuān)題學(xué)術(shù)討論會(huì)通過(guò)的療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。完全緩解尿蛋白持續(xù)陰性,高倍鏡下尿紅細(xì)胞消失?;揪徑饽虻鞍壮掷m(xù)減少≥50%,高倍鏡下尿紅細(xì)胞不超過(guò)4個(gè)。好轉(zhuǎn)尿蛋白持續(xù)減少≥25%,高倍鏡下尿紅細(xì)胞不超過(guò)4個(gè)。無(wú)效尿蛋白或尿紅細(xì)胞無(wú)顯著變化。
3.2治療結(jié)果20例中,完全緩解3例(15%),基本緩解6例(30%),好轉(zhuǎn)9例(45%),無(wú)效2例(10%),總有效率為90%。療效明顯優(yōu)于單純西藥治療。
圖1為生理鹽水對(duì)照組;圖2為薯蕷總皂苷治療組;圖3為穿山龍治療組成。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1精密稱(chēng)取穿山龍粗粉1000g,飲片打碎,過(guò)20目篩,加6倍量水煎煮2次,每次2小時(shí),合并煎煮液和上述水溶液,濾過(guò),濾液濃縮至適量,用適量乙醇制粒,干燥、整粒、分裝即得顆粒劑??诜淮?.25g,一日兩次。實(shí)施例2薯蕷總皂苷原料1000g,藥用淀粉1000g,混合均勻,裝入0#膠囊,得膠囊劑。每粒0.35g,每次口服1-2粒,每日兩次。實(shí)施例3薯蕷總皂苷原料1000g,藥用淀粉500g,混合均勻,用適量乙醇制粒,經(jīng)整粒機(jī)整粒,壓片,每片0.25g,口服,每次1-2片,每日兩次。
權(quán)利要求
1.中藥穿山龍?jiān)谥委熉阅I小球腎炎藥物中的應(yīng)用。
2.薯蕷總皂苷在治療慢性腎小球腎炎藥物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1或2中所述的治療慢性腎小球腎炎是指減輕尿蛋白排泄、降低高血壓、減輕腎小球病理?yè)p害。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷治療慢性腎小球腎炎中的新用途,中藥穿山龍及其提取物薯蕷總皂苷具有減輕尿蛋白排泄、降低高血壓、減輕腎小球病理?yè)p害,從而達(dá)到治療慢性腎炎,改善腎功能的作用。
文檔編號(hào)A61P13/12GK1437949SQ0215907
公開(kāi)日2003年8月27日 申請(qǐng)日期2002年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者李平 申請(qǐng)人:中日友好臨床醫(yī)學(xué)研究所, 中國(guó)中醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)交流中心