專利名稱：知母皂苷a的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從中藥知母中提取分離的有效成分經(jīng)藥理試驗(yàn)證明對II型糖尿病治療有效，更具體指從中藥知母中提取分離的有效成分知母皂苷AIII，它可在制備治療II型糖尿病藥物中應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病是由于人體內(nèi)胰島素絕對或相對缺乏而引起的一種臨床常見病，血中葡萄糖濃度升高，進(jìn)而糖大量從尿中排出，并出現(xiàn)多飲、多尿、多食、消瘦、頭暈、乏力等癥狀。進(jìn)一步發(fā)展則引起全身各種嚴(yán)重的急、慢性并發(fā)癥，威脅身體健康。其中I型糖尿病患者完全失去產(chǎn)生胰島素的功能，依賴胰島素治療且需終身使用；II型糖尿病患者體內(nèi)胰島素處于相對缺乏狀態(tài)，不必完全依賴胰島素而可以用其它藥物治療。在糖尿病患者中，II型糖尿病占了大多數(shù)。糖尿病是現(xiàn)代社會中的常見病、高發(fā)病，嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。
目前西醫(yī)治療糖尿病的主要方法為胰島素治療和口服磺脲類、雙胍類等降血糖藥物，但胰島素治療價(jià)格昂貴，而其它類型藥物或療效有限，或毒副作用明顯。
近年來，大量研究表明，中藥在II型糖尿病的臨床治療中顯示出很大優(yōu)勢，但現(xiàn)有中成藥大多有效成分不清，作用機(jī)理不明，劑型落后，急待開發(fā)出有效成分和作用機(jī)理清楚、質(zhì)量穩(wěn)定可控、劑型先進(jìn)、服用攜帶方便的中藥制劑。
中藥知母清熱瀉火，生津潤燥，主要具有抗菌、抗病毒、解熱、降血糖等作用，但未見其治療II型糖尿病的有效部位和有效成分的報(bào)道。知母皂苷AIII(薩爾薩皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(→2)-β-D-吡喃半乳糖苷)單體成分的藥理作用也未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是克服常規(guī)中藥存在的不足之處，采用化學(xué)方法從中藥知母中分離出有效成分——知母皂苷AIII，經(jīng)藥理試驗(yàn)，使該化合物在制備治療II型糖尿病的藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明采用中藥知母藥材用乙醇回流提取3次，將濾液減壓回收，制成知母浸膏，再以少量水溶解，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇層用甲醇拌樣上硅膠柱，用正丁醇-氯仿(1∶1)洗脫，分離得到純化合物知母皂苷AIII。結(jié)構(gòu)式如下 它的分子式為C39H64O13，分子量為740，化學(xué)名為薩爾薩皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷。
本發(fā)明采用上述方法提取得到的知母皂苷AIII首先進(jìn)行常規(guī)的藥效試驗(yàn)。
雄性KKAy小鼠(自發(fā)型糖尿病小鼠，II型糖尿病的良好動(dòng)物模型)測定隨機(jī)和空腹血糖，根據(jù)測定結(jié)果將小鼠分為3組。
1、空白對照組正常喂食；2、陽性對照組口服給予羅格列酮(ROS，葛蘭素史克(天津)公司，批號02060041。羅格列酮是噻唑烷二酮類胰島素增敏劑，劑量小，療效顯著，可增加細(xì)胞能耗和改善葡萄糖代謝，是目前國內(nèi)外臨床使用較廣泛的降血糖藥)；3、給藥組口服給予本發(fā)明藥物(知母皂苷AIII，HHG-001)。
每日一次，連續(xù)給藥23天，在給藥前、給藥13天、給藥23天時(shí)采用葡萄糖測定試劑盒測定KKAy小鼠的空腹血糖。空腹血糖的測定主要是用來衡量基礎(chǔ)血糖水平，空腹血糖高，說明該小鼠血糖高，是糖尿病的癥狀之一。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠的空腹血糖。
給藥結(jié)束后進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)，測定給糖前和給糖后的血糖值。葡萄糖耐量是衡量糖代謝的主要指標(biāo)之一。正常小鼠進(jìn)食后一定時(shí)間內(nèi)血糖可以恢復(fù)到基礎(chǔ)值，而患病鼠在相同時(shí)間內(nèi)血糖不能恢復(fù)到基礎(chǔ)值。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠給糖前和給糖后的血糖值，明顯改善其糖負(fù)荷。
在給藥結(jié)束時(shí)進(jìn)行胰島素耐量試驗(yàn)。胰島素耐量也是衡量糖代謝的指標(biāo)。患病鼠一般具有胰島素抗性，即胰島素正常生理作用的效應(yīng)不足，表現(xiàn)為外周組織尤其是肌肉、脂肪組織對葡萄糖的利用障礙，是促使高血壓、高血脂等并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的重要原因。若藥物有效，患病鼠給藥后對胰島素的敏感程度提高，從而促進(jìn)血糖下降。結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物可提高KKAy糖尿病小鼠對胰島素的敏感程度，促進(jìn)血糖下降。
給藥前后分別測定小鼠體重。正常情況下，給藥后，小鼠體重不應(yīng)出現(xiàn)明顯變化，若體重下降，說明小鼠體質(zhì)下降；而體重上升，即使小鼠血糖下降，也說明該藥有增加體重的副作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠的體重?zé)o明顯影響，而陽性藥ROS使小鼠體重明顯增加。
在給藥結(jié)束時(shí)測定小鼠血脂。糖尿病患者在高血糖的同時(shí)往往伴有高血脂。測定血脂主要是觀察該藥在降血糖的同時(shí)是否還有降血脂的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠的血脂，陽性藥ROS無此效果。
本發(fā)明研究證明，知母皂苷AIII具有良好的降低空腹血糖和血脂，提高葡萄糖耐量和對胰島素的敏感程度，同時(shí)不影響患者體重的功效。
空腹血糖、血脂、葡萄糖耐量、胰島素耐量是衡量II型糖尿病的重要指標(biāo)?？崭寡堑臏y定主要是用來衡量基礎(chǔ)血糖水平，空腹血糖高，說明患者基礎(chǔ)血糖高，這是糖尿病的癥狀之一，此外，糖尿病患者在出現(xiàn)高血糖的同時(shí)往往伴有高血脂。葡萄糖耐量是衡量糖代謝的指標(biāo)之一，健康者的血糖在進(jìn)食后一定時(shí)間內(nèi)可以恢復(fù)到基礎(chǔ)值，而糖尿病患者在相同時(shí)間內(nèi)血糖不能恢復(fù)到基礎(chǔ)值。胰島素耐量也是衡量糖代謝的指標(biāo)。糖尿病患者一般具有胰島素抗性，即胰島素執(zhí)行其正常生物作用的效應(yīng)不足，表現(xiàn)為外周組織尢其是肌肉、脂肪組織對葡萄糖的利用障礙，這是促使高血壓、高血脂等并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的重要原因。通過藥理試驗(yàn)及其結(jié)果說明知母皂苷AIII可作為制備治療糖尿病藥物中應(yīng)用。


圖1為知母皂苷對KKAy糖尿病小鼠葡萄糖耐量的影響試驗(yàn)結(jié)果圖，其中—◆—表示空白對照組，—■—表示陽性對照組，—△—表示藥物試驗(yàn)組，與空白對照組相比，**P＜0.01
圖2為知母皂苷對KKAy糖尿病小鼠胰島素耐量的影響試驗(yàn)結(jié)果圖，其中—◆—表示空白對照組，—■—表示陽性對照組，—△—表示藥物試驗(yàn)組，與空白對照組相比，**P＜0.01有益效果1、本發(fā)明發(fā)掘了已知化合物知母皂苷在作為制備治療II型糖尿病藥物中的新用途，開拓了新的應(yīng)用領(lǐng)域。
2、本發(fā)明的知母皂苷不僅有顯著的降血糖、血脂，提高葡萄糖耐量及胰島素耐量的藥理功效，且對體重?zé)o明顯影響，副作用小。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述，但不對其有任何限制。
實(shí)施例1本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠空腹血糖的影響試驗(yàn)15只雄性KKAy小鼠飼養(yǎng)于清潔級動(dòng)物房的層流柜中，適應(yīng)2周后測定隨機(jī)和空腹血糖，根據(jù)測定結(jié)果將15只小鼠分為3組，每組5只，分別正常喂食(空白對照組)，口服給予4mg/kg羅格列酮(陽性對照組，ROS)，和400mg/kg本發(fā)明藥物(給藥組)。每日一次，連續(xù)給藥23天，在給藥前、給藥13天、給藥23天時(shí)采用葡萄糖測定試劑盒測定小鼠的空腹血糖?？崭寡堑臏y定主要是用來衡量基礎(chǔ)血糖水平，空腹血糖高，說明該小鼠血糖高，是糖尿病的癥狀之一。
結(jié)果本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠的空腹血糖，見表1。
表1本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠空腹血糖的影響試驗(yàn)空腹血糖組別給藥前 給藥13天 給藥23天空白對照組 16.58±4.99 18.66±3.72 17.88±1.75ROS組 16.58±6.33 11.24±2.22**12.06±4.89*HHG-001組 17±5.9112.5±5.52*11.46±3.66**
*P＜0.05**P＜0.01與空白對照相比實(shí)施例2本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠葡萄糖耐量的影響試驗(yàn)分組及試驗(yàn)方法同實(shí)施例1，給藥結(jié)束后進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)?？诜o予2.5g/kg葡萄糖，測定空白對照組和給藥組給糖前后的血糖值。葡萄糖耐量是衡量糖代謝的指標(biāo)之一。正常小鼠進(jìn)食后一定時(shí)間內(nèi)血糖可以恢復(fù)到基礎(chǔ)值，而患病鼠在相同時(shí)間內(nèi)血糖不能恢復(fù)到基礎(chǔ)值。
結(jié)果本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠給糖前和給糖后的血糖值，明顯改善其糖負(fù)荷，見圖1。
實(shí)施例3本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠胰島素耐量的影響試驗(yàn)分組及試驗(yàn)方法同實(shí)施例1，在給藥結(jié)束時(shí)進(jìn)行胰島素耐量試驗(yàn)，分別測定皮下注射胰島素前后的血糖值。胰島素耐量也是衡量糖代謝的指標(biāo)?；疾∈笠话憔哂幸葝u素抗性，若藥物有效，患病鼠給藥后對胰島素的敏感程度提高，從而促進(jìn)血糖下降。
結(jié)果本發(fā)明藥物可提高KKAy糖尿病小鼠對胰島素的敏感程度，促進(jìn)血糖下降，見圖2。
實(shí)施例4本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠體重的影響試驗(yàn)分組及試驗(yàn)方法同實(shí)施例1，在給藥前后分別測定小鼠體重。正常情況下，給藥后，小鼠體重不應(yīng)出現(xiàn)明顯變化，若體重下降，說明小鼠體質(zhì)下降，而體重上升，即使小鼠血糖下降，也說明該藥有增加體重的副作用。
結(jié)果本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠的體重?zé)o明顯影響，而陽性藥ROS使小鼠體重明顯增加，見表2。
表2本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠體重的影響試驗(yàn)體重組別給藥前 給藥后 增加值空白對照組42.2±3.16 43.8±2.68 1.8±0.84ROS組 41.0±2.35 48.4±4.28*7.4±3.36HHG-001組 40.6±3.44 40.4±3.78 -0.2±1.64*P＜0.05與給藥前相比實(shí)施例5本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠血脂的影響試驗(yàn)分組及試驗(yàn)方法同實(shí)施例1，在給藥結(jié)束時(shí)測定小鼠血脂。測試血脂主要是觀察該藥在降血糖的同時(shí)是否還有降血脂的作用。
結(jié)果本發(fā)明藥物可顯著降低KKAy糖尿病小鼠的血脂，陽性藥ROS無此效果，見表3。
表3本發(fā)明藥物對KKAy糖尿病小鼠血脂的影響試驗(yàn)組別 血脂空白對照組192.39±33.41ROS組 214.98±69.85HHG-001組 120.16±45.97**P＜0.05與空白對照相比
權(quán)利要求
1.一種從知母中提取分離的有效成分具有如下結(jié)構(gòu)的知母皂苷AIII，其特征在于它在制備降血糖和治療II型糖尿病的藥物中應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母皂苷AIII，其特征在于在降血糖、血脂、提高葡萄糖耐量及胰島素耐量方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及從中藥知母中提取分離的有效成分知母皂苷A
文檔編號A61K31/7048GK1513463SQ0216015
公開日2004年7月21日 申請日期2002年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者黃成鋼, 王新亮, 張振秋, 張亮, 施松 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所