專利名稱：：4-氟-n-(1,2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺及其作為藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及式(I)的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺及其作為藥物試劑的用途。內(nèi)皮NO合酶(eNOS，NOS-III)屬于一組通過氧化精氨酸產(chǎn)生一氧化氮(NO)的三個(gè)同功酶。內(nèi)皮釋放的NO在許多關(guān)鍵性的心血管機(jī)理中是至關(guān)重要的。它具有一種血管舒張效應(yīng)并抑制血小板的聚集、白細(xì)胞到內(nèi)皮的粘附和內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞的增殖。內(nèi)皮NO合酶可在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后的水平上進(jìn)行生理和病理調(diào)節(jié)。已經(jīng)存在于內(nèi)皮中的酶可以通過特定的氨基酸的磷酸化作用、以及通過與特定的蛋白質(zhì)直接相互作用而進(jìn)行鈣-依賴和鈣-無關(guān)的活化。這些通常是短暫的NO釋放的刺激物為細(xì)胞外精氨酸、17β-雌激素以及通過血流(剪應(yīng)力)施加于內(nèi)皮的腔表面上的機(jī)械刺激。后者還導(dǎo)致在轉(zhuǎn)錄水平上的eNOS調(diào)節(jié)。因此，例如，Sessa等人(Circ.Research74(1994)349-353)得以借助運(yùn)動(dòng)鍛煉和伴隨此增加的剪應(yīng)力實(shí)現(xiàn)eNOS的顯著增加。在轉(zhuǎn)錄后水平上的調(diào)節(jié)是否與體內(nèi)相關(guān)，往往沒有清楚無誤的證明。因此，例如，大劑量的精氨酸給藥僅僅會(huì)使患有冠心病的病人的內(nèi)皮-依賴的血管舒張得到短暫的改善。另一方面，eNOS蛋白正調(diào)節(jié)的重要性已被科學(xué)地承認(rèn)了。因此，人們發(fā)現(xiàn)HMG-CoA還原酶抑制劑西伐它汀的保護(hù)作用可以部分地歸因于(除脂類降低外)eNOS體內(nèi)表達(dá)的增加(Endres等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA95(1998)8880-8885)。另外已知在eNOS基因(“eNOS啟動(dòng)子”)的5′-旁側(cè)區(qū)中的單點(diǎn)突變以及與此有關(guān)的eNOS基因轉(zhuǎn)錄速度的下降與日本人口中冠狀動(dòng)脈痙攣危險(xiǎn)的增加有關(guān)(Nakayama等人，Circulation99(1999)2864-2870)。因此現(xiàn)在的假設(shè)是，在大量的疾病特別是心血管疾病中eNOS調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后機(jī)理被嚴(yán)重干擾。即使在多種心血管疾病的早期，襯套于血管內(nèi)皮中的這種類型的機(jī)能障礙也可能導(dǎo)致生理活性的NO的不足，這隨著可度量的疾病生理和形態(tài)變異形式的病癥的發(fā)展而表達(dá)出來。因此，在早期動(dòng)脈粥樣硬化形成中的關(guān)鍵步驟由于內(nèi)皮NO釋放的降低，例如，低密度脂蛋白的氧化作用、血管內(nèi)膜中的單核細(xì)胞的補(bǔ)充和沉積、和內(nèi)膜細(xì)胞的增殖而被加速。動(dòng)脈粥樣化形成的后果是在血管的內(nèi)壁上形成斑塊，其可以反過來通過剪應(yīng)力的減少而導(dǎo)致內(nèi)皮NO釋放的進(jìn)一步下降以及病狀的進(jìn)一步惡化。由于內(nèi)皮NO也是一種血管擴(kuò)張劑，它們的降低還經(jīng)常導(dǎo)致高血壓，后者作為獨(dú)立的危險(xiǎn)因素可導(dǎo)致進(jìn)一步的器官損壞。這些病癥的治療方法的目標(biāo)相應(yīng)地必須通過增加內(nèi)皮NO表達(dá)來阻斷這一連串事件?？稍陬A(yù)先損壞的血管中導(dǎo)致NO合酶體外超量表達(dá)的基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)事實(shí)上能夠阻礙所述的病癥的發(fā)展，并因此可作為此方法的正確性的證明(Varenne等人，Hum.GeneTher.11(2000)1329)。在文獻(xiàn)中已經(jīng)公開了某些低分子量化合物，它們(在細(xì)胞培養(yǎng)中)可以導(dǎo)致在eNOS轉(zhuǎn)錄和表達(dá)上的直接效應(yīng)。然而，已經(jīng)提及的抑制素是迄今為止可能顯示出作為一種副作用而使eNOS體內(nèi)增加的唯一的物質(zhì)。然而考慮到這類物質(zhì)的副作用的已知范圍，還不清楚在毒理學(xué)上無問題的劑量下，這種效果能到什么程度。Liao等人，在WO99/47153和WO00/03746要求保護(hù)rhoGTPase抑制劑和試劑的用途，該rhoGTPase抑制劑和試劑可影響肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的機(jī)體組成以增加內(nèi)皮細(xì)胞中的eNOS，并用于治療各種病癥例如，中風(fēng)或肺動(dòng)脈高血壓。然而，該專利中沒有指明實(shí)現(xiàn)這一目的的具體方式。因此，現(xiàn)實(shí)中存在對(duì)一種能夠上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞中的eNOS表達(dá)的化合物的強(qiáng)烈的需要。本發(fā)明的目的在于提供了顯示此能力的化合物。這一目的通過使用如式(I)的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺生產(chǎn)刺激內(nèi)皮NO合酶表達(dá)的藥物而實(shí)現(xiàn)。這一目的也通過用包括有效劑量的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺和醫(yī)藥上可以接受的載體的刺激內(nèi)皮NO合酶表達(dá)的藥物制劑而達(dá)到。本發(fā)明還包括符合式(I)的化合物的所有溶劑化物的使用。該溶劑化物的例子包括式(I)的化合物的水合物、乙醇加合物和活性代謝物以及含有生理學(xué)上可以容忍的并且可以裂去的基團(tuán)的式(I)的化合物的衍生物和藥物前體，其例子包括酯、酰胺和式(I)中所述N-H基團(tuán)被N-烷基基團(tuán)所取代(如N-甲基)或N-?；鶊F(tuán)(如N-乙酰基或N-精氨?；?所取代的化合物，包括在?；械墓倌軋F(tuán)上形成的、醫(yī)藥上可以接受的鹽。WO00/51970公開了作為藥物的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺生產(chǎn)和使用。該化合物具有強(qiáng)烈的膽堿能活性(cholinergicactivity)的潛力，并且對(duì)于治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物的中央神經(jīng)系統(tǒng)病癥有用，上述中央神經(jīng)系統(tǒng)病癥更具體而言是健忘癥、癡呆(例如老年性癡呆、Alzheimer氏癡呆、與伴隨多種疾病的癡呆，其例子包括腦血管癡呆、腦外傷后癡呆、腦腫瘤引起的癡呆、慢性硬膜下腫引起的癡呆、正常壓力腦積水引起的癡呆、腦膜炎后的癡呆、帕金森氏病型的癡呆和類似的疾病)。預(yù)計(jì)該化合物作為治療和/或預(yù)防精神分裂癥、抑郁癥、中風(fēng)、顱腦損傷、尼古丁戒除、脊髓損傷、焦慮、尿頻、尿失禁、肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良、注意缺陷多動(dòng)癥、過度白晝睡眠(嗜眠病)、帕金森氏病和孤獨(dú)癥的藥劑有用。WO00/51970沒有公開或提出將4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺用于正調(diào)節(jié)內(nèi)皮NO合酶表達(dá)上，特別是在處置心血管疾病例如穩(wěn)定型和不穩(wěn)定型心絞痛，冠心病，變異型心絞痛，急性冠狀動(dòng)脈綜合癥，心力衰竭，心肌梗塞，中風(fēng)，血栓癥，外周塞性血管病，內(nèi)皮機(jī)能障礙，動(dòng)脈粥樣硬化，再狹窄，PTCA(經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成型術(shù))后的內(nèi)皮損傷，高血壓，原發(fā)性高血壓，肺動(dòng)脈高血壓，和繼發(fā)性高血壓，腎血管高血壓，慢性腎小球性腎炎，勃起機(jī)能障礙，室律不齊，糖尿病或糖尿病并發(fā)癥、腎病、視網(wǎng)膜病變、血管生成、支氣管哮喘、慢性腎衰竭、肝硬化、骨質(zhì)疏松、記憶功能受限、學(xué)習(xí)能力受限或降低絕經(jīng)后女性或攝入避孕藥后患心血管病的危險(xiǎn)等方面的應(yīng)用。符合式(I)的化合物可以從文獻(xiàn)中已知的1，2-二氫化茚-2-基胺開始而制備。可以在堿(例如三乙胺)的存在下，將1，2-二氫化茚-2-基胺以游離堿或其鹽的形式與4-氟苯甲酰氯反應(yīng)。反應(yīng)一般在例如二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯或二氧雜環(huán)己烷的溶劑中進(jìn)行，并優(yōu)選在室溫下進(jìn)行。此外，符合式(I)的化合物可以通過所述1，2-二氫化茚-2-基胺在堿(例如二異丙基乙基胺)的存在下使用適當(dāng)?shù)呐悸?lián)劑(例如碳二亞胺、HATU或TOTU)與4-氟苯甲酸的偶聯(lián)反應(yīng)得到。對(duì)于熟悉該領(lǐng)域的人員，其它合成符合式(I)的化合物的反應(yīng)是顯而易見的或?yàn)槿怂熘模⑶铱梢栽跇?biāo)準(zhǔn)條件下按照文獻(xiàn)中所描述的過程或類似的過程進(jìn)行，上述文獻(xiàn)的例子包括德國(guó)斯圖加特的Thieme-Verlag出版的Houben-Weyl的《有機(jī)化學(xué)方法》(MethodenderOrganischenChemie)或美國(guó)紐約的JohnWiley&Sons出版的《有機(jī)反應(yīng)》。如果希望，符合式(I)的化合物可以通過慣用的提純過程(例如重結(jié)晶或色譜)進(jìn)行提純。制備符合式(I)的化合物的起始化合物是商業(yè)上可以得到的或可以按照文獻(xiàn)中的過程或類似的過程可以制備的。符合式(I)的化合物可以被用于內(nèi)皮NO合酶表達(dá)的正調(diào)節(jié)，并且是在處置多種疾病的處理中有用的藥用化合物。對(duì)于本發(fā)明，處置包括各種疾病的治療和預(yù)防。按照本發(fā)明可以使用的符合式(I)的化合物處置的疾病的例子包括心血管疾病例如穩(wěn)定型和不穩(wěn)定型心絞痛，冠心病，變異型心絞痛(痙攣)，急性冠狀動(dòng)脈綜合癥，心力衰竭，心肌梗塞，中風(fēng)，血栓癥，外周塞性血管病(PAOD)，內(nèi)皮機(jī)能障礙，動(dòng)脈粥樣硬化，再狹窄，PTCA(經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成型術(shù))后的內(nèi)皮損傷，高血壓包括原發(fā)性高血壓，肺動(dòng)脈高血壓，和繼發(fā)性高血壓(腎血管高血壓，慢性腎小球性腎炎)，勃起機(jī)能障礙，室律不齊，和降低絕經(jīng)后女性或攝入避孕藥后患心血管病的危險(xiǎn)?；衔?I)還可以被用于治療和預(yù)防糖尿病和糖尿病并發(fā)癥(腎病、視網(wǎng)膜病)、血管生成、支氣管哮喘、慢性腎衰竭、肝硬化、骨質(zhì)疏松癥、記憶功能受限或?qū)W習(xí)能力受限。優(yōu)選的適應(yīng)癥是穩(wěn)定心絞痛、冠心病、高血壓、內(nèi)皮機(jī)能障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病并發(fā)癥。符合式(I)的化合物也可以與其他具有藥物活性的化合物結(jié)合使用，優(yōu)選與能夠加強(qiáng)符合式(I)的化合物的效果的化合物結(jié)合使用。此類化合物的例子包括抑制素、ACE抑制劑、AT1拮抗劑、精氨酸酶抑制劑、PDEV抑制劑、Ca拮抗劑、α-阻斷劑、β-阻斷劑、metimazol和類似化合物、精氨酸、四氫生物蝶呤、維生素(特別是維生素C和維生素B6)、煙酸?？梢詫⒒衔?I)，任選與其他具有藥物活性的化合物相結(jié)合，以其自身作為藥物或以藥物制劑的形式用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。本發(fā)明的另外的目標(biāo)是包含有效劑量的符合式(I)的化合物和醫(yī)藥上可以接受的載體(例如一種或多種醫(yī)藥上可以接受的載體物質(zhì)和/或添加劑)的藥物制劑(或藥物組合物)。所述藥物制劑被用于刺激內(nèi)皮NO合酶的表達(dá)，特別是用于治療和預(yù)防上述綜合征的藥物。符合本發(fā)明的藥物可以口服或直腸給藥，其中口服的形式的例子包括丸劑、片劑、漆片(lacqueredtablet)、糖衣片劑、顆粒劑、硬或軟明膠膠囊劑、水溶液、酒精溶液或油溶液、糖漿劑、乳劑或混懸劑，直腸給藥的形式的例子包括栓劑。給藥也可以采取非腸道使用的形式進(jìn)行，例如以用于注射或輸注的溶液的形式通過皮下、肌肉或靜脈給藥進(jìn)行。其它適用的給藥形式是例如經(jīng)皮膚或局部給藥，例如以軟膏劑、酊劑、噴霧或透皮治療劑體系的形式，或以鼻噴入法或氣霧劑混合物的形式的吸入給藥，或采取微囊劑、植入劑或植入棒的形式給藥。優(yōu)選的給藥形式取決于例如所要處理的疾病及其嚴(yán)重程度。式(I)的化合物在藥物制劑中的量一般為每劑0.2至800mg，優(yōu)選0.5至500mg，特別是1至200mg，但取決于藥物制劑的類型該量可以更高。藥物制劑通常包含0.5至90重量％的式(I)的化合物。藥物制劑的制備可以以其本身系已知的方式進(jìn)行。在這一方面，將式(I)的化合物與一種或多種固體或液體藥物載體物質(zhì)和/或添加劑(或輔助物質(zhì))并且(如果希望的話)與其他具有治療或預(yù)防功能的具有藥物活性的化合物結(jié)合在一起，制成適當(dāng)?shù)慕o藥形式或配藥形式，該給藥形式或配藥形式可隨后用作人用或獸用藥物中的藥物。對(duì)于丸劑、片劑、糖衣片劑和硬明膠膠囊的生產(chǎn)，可以使用例如乳糖、淀粉(例如玉米淀粉)或淀粉衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等。軟明膠膠囊和栓劑的載體是例如脂肪、蠟、半固體和液體多元醇、天然或硬化油等。適用于溶液(例如注射用溶液)、乳劑或糖漿劑的制劑的載體是例如水、生理氯化鈉溶液、醇例如酒精、甘油、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖、甘露醇、植物油等。也可以將式(I)的化合物凍干并使用得到的凍干物，例如將其用于制備用于注射和輸注的制劑中。適用于微囊劑、植入劑或植入棒的載體是例如羥基乙酸和乳酸的共聚物。除化合物(I)和載體外，藥物制劑也可以包含添加劑，例如填充劑、崩解劑、粘合劑、滑潤(rùn)劑、濕潤(rùn)劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩沖物質(zhì)、溶劑、增溶劑、旨在獲得貯存效果的試劑、旨在改變滲透壓的鹽、涂布劑或抗氧化劑。式(I)的化合物的給藥的劑量取決于各個(gè)實(shí)例，并且依慣例根據(jù)每一情況進(jìn)行調(diào)整從而達(dá)到最好的效果。由此，上述計(jì)量取決于待處理的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，也取決于性別、年齡、體重和被處理的人或動(dòng)物的個(gè)體的反應(yīng)性，取決于化合物(I)的作用時(shí)間，取決于治療是急性的或長(zhǎng)期的或預(yù)防性的，或者取決于除式(I)的化合物外是否有其它活性化合物被給藥。一般而言，對(duì)于對(duì)體重約75kg的成年人的給藥，為了取得所希望的效果，適宜的每日劑量是約0.01至100mg/kg，優(yōu)選0.1至10mg/kg，特別是0.3至5mg/kg(在每一情況下均為每kg體重的mg數(shù))。每日劑量可以在一次給藥中使用，或者特別當(dāng)給藥量較大量時(shí)，被分成幾次(例如兩次、三次獲四次)單獨(dú)的給藥。在有些情況下，取決于個(gè)體的反應(yīng)，可能需要從給出的每日劑量向上或向下調(diào)整。符合式(I)的化合物也可以被用于上文所指出的目的之外的目的。該目的其非限定性的例子包括診斷目的、用作生物化學(xué)工具和作為制備其它化合物(例如具有藥物活性的化合物)的中間體。以下通過實(shí)施例闡明本發(fā)明。實(shí)施例4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺的制備將43.70g(258mmol)2-胺基-1，2二氫化茚鹽酸鹽和53.43g(528mmol)三乙胺與250ml四氫呋喃混合，加入42.89g(270mmol)4-氟苯甲酰氯，并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將得到的混合物傾倒在冰/HCl混合物上，將得到的沉淀過濾，用NaHCO3溶液和水洗滌并在真空中干燥。將粗產(chǎn)物從甲醇中結(jié)晶出來。如此得到47.8g(73％)白色結(jié)晶產(chǎn)物。熔點(diǎn)167℃MSM+H+256.11H-NMR(300MHz，d6-DMSO)2.96(dd，2H，H1/H3)，3.25(dd，2H，H3/H1)，4.70(六重峰，1H，H2)，7.12-7.19(m，2H，H4，7/5，6)，7.20-7.28(m，2H，H5，6/4，7)，7.30(t，2H，H3’，5’)，7.95(dd，2H，H2’，6’)，8.68(d，1H，NH)eNOS轉(zhuǎn)錄活化的測(cè)定eNOS轉(zhuǎn)錄的活化作用的測(cè)定詳細(xì)描述于Li等人，“ActivationofproteinkinaseCalphaand/orepsilonenhancestranscriptionofthehumanendothelialnitricoxidesynthasegene”，Mol.Pharmacol.1998；53630-637。簡(jiǎn)要地說，將3.5kB長(zhǎng)的eNOS基因的5′起始密碼子的片段克隆，測(cè)序并在熒火蟲熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒克隆，以通過報(bào)告基因的活動(dòng)監(jiān)測(cè)eNOS啟動(dòng)子的活化作用。用轉(zhuǎn)染的和表達(dá)此啟動(dòng)子-報(bào)告基因構(gòu)造的人內(nèi)皮細(xì)胞系來進(jìn)行化合物(I)的檢測(cè)。將細(xì)胞用化合物培養(yǎng)18小時(shí)。此前將所有化合物溶解在無菌的DMSO(二甲亞砜)中。使DMSO在完全培養(yǎng)基中的最后濃度為0.5％。根據(jù)該廠家的說明書用標(biāo)準(zhǔn)熒光素酶試驗(yàn)體系(Promega，產(chǎn)品目錄NoE150)測(cè)定這些細(xì)胞中的報(bào)告基因表達(dá)的誘導(dǎo)。將用化合物(I)孵育的細(xì)胞中的熒光素酶誘導(dǎo)與僅用溶劑用孵育的細(xì)胞相比較。將兩種活性的比例(轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)比，TIR)對(duì)化合物濃度作圖。典型地，TIR值在低濃度下起始比例為1表示沒有化合物效果，而達(dá)到最大TIR值(TIR(max))則表示eNOS轉(zhuǎn)錄的增加。用圖表表示作為化合物濃度的變化的函數(shù)的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)比的EC50值。在第二個(gè)試驗(yàn)中根據(jù)對(duì)eNOS蛋白的檢測(cè)確定了化合物(I)對(duì)eNOS-轉(zhuǎn)錄的影響。按照標(biāo)準(zhǔn)方法分離并培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)。用化合物(I)將融合的細(xì)胞孵育18小時(shí)，并通過定量的免疫組化和免疫印跡法(WesternblottingProcedure)測(cè)定其對(duì)eNOS蛋白表達(dá)的影響?；衔?I)孵育后，將HUVEC溶解在含有10mMTris-HCl、pH8.0、1％SDS和蛋白酶抑制劑的冰浴的溶解緩沖液中。對(duì)溶解產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，并滲出到硝化纖維素膜上。使用一種特殊的原代單克隆抗體(TransductionLaboratories，英國(guó))和堿性磷酸酶標(biāo)記的二級(jí)抗體(JacksonLabs)，基于化學(xué)熒光檢測(cè)方法將一種特定的eNOS蛋白帶顯現(xiàn)出來并進(jìn)行定量。對(duì)于化合物(I)，EC50值為0.8μM，TIR(max)值為4.10。動(dòng)物模型所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行均符合德國(guó)動(dòng)物保護(hù)法律并符合美國(guó)國(guó)家健康學(xué)會(huì)的《實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的管理和使用指南》(GuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimals)中給出的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用準(zhǔn)則。動(dòng)物和處置(實(shí)驗(yàn)A-C)使用ApoE和eNOS缺乏的小鼠(C57BL/6Jbackground，JacksonLaboratory，BarHarbor，Me)。所有動(dòng)物是10-12星期大且重22到28克的。手術(shù)之前三天將小鼠分成4組(apoE對(duì)照組，n＝10-12；具有化合物(I)的apoE，n＝10-12；eNOS對(duì)照組，n＝10-12；具有化合物(I)的eNOS，n＝10-12)并接受標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物食物(含有4％脂肪和0.001％膽固醇；在下面指定為安慰劑組)或標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物食物+化合物(I)(10或30毫克/千克/天，口服)。A.ApoE缺失鼠的抗高血壓效果用計(jì)算機(jī)化尾套系統(tǒng)測(cè)定清醒的鼠的血壓。對(duì)于化合物(I)，30mg/kg/d組中的處置4個(gè)月后的ApoE缺失鼠的血壓顯著(p＜0.05)低于安慰劑處置的鼠(92±5mmHg對(duì)115±2mmHg)。在處置4周后用類似劑量處置eNOS缺失鼠沒有觀察到血壓下降。B.新內(nèi)膜形成和動(dòng)脈粥樣化形成的抑制(股動(dòng)脈套管(cuff))用化合物(I)(10毫克/千克/天顎壓入)對(duì)ApoE缺乏的小鼠治療3天后，腹膜內(nèi)注射戊巴比妥(60毫克/千克)接著肌肉注射甲苯噻嗪(2毫克/千克)使動(dòng)物麻醉，并在股動(dòng)脈上裝一個(gè)套，如Moroi等人所描述(JClinInvest.1011225-32，1998)。簡(jiǎn)單地說，切開左側(cè)股動(dòng)脈。圍繞動(dòng)脈安插一個(gè)由PE-50管(內(nèi)徑0.56mm，外徑0.965mm，BectonDickinson，MountainView，Ca)制成的非閉合的2.0mm聚乙烯套并原位用兩個(gè)7-0縫線接結(jié)。自圍繞的組織中分離右側(cè)股動(dòng)脈，但不安插套。手術(shù)后用化合物(I)繼續(xù)治療14天。然后殺死動(dòng)物。取出主動(dòng)脈通過定量的免疫組化和免疫印跡法進(jìn)行血管eNOS表達(dá)的測(cè)定。采集兩種股動(dòng)脈，置于福爾馬林中并嵌入石蠟中。從左側(cè)股動(dòng)脈的被套的部分和相應(yīng)的右動(dòng)脈的部分中切下20個(gè)橫斷面(10微米)。對(duì)各部分進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)蘇木素伊紅染色。使用圖像分析計(jì)算機(jī)程序(LeicaQWin，LeicaImagingSystems，Cambridge，GB)進(jìn)行形態(tài)學(xué)(Morphometric)分析。對(duì)每個(gè)斷面測(cè)定腔管、新內(nèi)膜和中膜的區(qū)域。為此目的，新內(nèi)膜定義為腔管和內(nèi)部彈性層之間的區(qū)域，中膜定義為在內(nèi)部和外部的彈性層之間區(qū)域。新內(nèi)膜的面積和中膜的面積之間的比例用新內(nèi)膜/中膜的比例來表示?；衔?I)以2為系數(shù)減少了適應(yīng)不良的新內(nèi)膜形成，將新內(nèi)膜與中膜的比率從安慰劑組的0.39±0.07降低至化合物組的0.170±0.04。與此平行地，血管eNOS表達(dá)以2.1為系數(shù)被加強(qiáng)。使用eNOS缺失鼠而不是ApoE缺失鼠的相似的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)沒有顯示出化合物(I)的影響。C.長(zhǎng)期處理中的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的預(yù)防用壓入鼠糧的化合物(I)處理ApoE缺失鼠16周并最終將鼠處死。從每一只鼠取出大動(dòng)脈，在福爾馬林中固定并嵌入石蠟中。斑的形成通過大動(dòng)脈中的脂質(zhì)損害的形成進(jìn)行測(cè)量并用油紅O染色法進(jìn)行分析。為了定量分析該化合物對(duì)于血管eNOS表達(dá)的影響，在本實(shí)驗(yàn)中使用了股動(dòng)脈。符合本發(fā)明的化合物(I)顯著地降低了斑的形成(5.2±1％對(duì)安慰劑組中的13.3±2.6，數(shù)值為斑總尺寸占總表面的％)。在處置組中發(fā)現(xiàn)血管eNOS表達(dá)被正調(diào)節(jié)了1.75倍。D.患病的ApoF缺失鼠的冠狀動(dòng)脈供能的改善在實(shí)驗(yàn)中使用老年雄性野生型C57BL/6J鼠(CharsRiverWigaGmbH，德國(guó)Sulzfeld)和年齡6個(gè)月、重量28至36g的apoE缺失鼠(C57BL/6J背景，JacksonLaboratory，美國(guó)緬因州BarHarbor)。將鼠分成3組(C57BL/6J，n＝8；apoE對(duì)照，n＝8；使用化合物(I)的apoE，n＝8)，并給與標(biāo)準(zhǔn)鼠糧(含4％脂肪和0.001％膽固醇；以下稱為安慰劑組)或標(biāo)準(zhǔn)鼠糧+化合物(I)(30mg/kg/dp.o.)共8周。將鼠用戊巴比通鈉(100mg/kgi.p.(腹膜內(nèi)))麻醉，將心臟快速切除并放入冰冷的灌注緩沖劑中。將大動(dòng)脈插管并連接在灌注裝置(HugoSachsElectronics，德國(guó)Freiburg)上，立即在60mmHg的恒定灌注壓強(qiáng)下啟動(dòng)該灌注裝置。將心臟以逆行方式用改性Krebs碳酸氫鹽緩沖劑灌注，用95％O2和5％CO2平衡并維持在37.5℃。有斜面的小管(PE50)通過肺靜脈進(jìn)入左心室并通過心室壁拉出，通過有槽的末端在頂點(diǎn)上固定，并連接至尖端微壓力表(Millar1.4French)。將左心房通過同一肺靜脈插管，隨后用恒定的10mmHg的前負(fù)荷壓強(qiáng)和60mmHg的后負(fù)荷壓強(qiáng)將心臟切換至工作模式。用超聲波流量探測(cè)器(HSE/TransonicSystemInc.)連續(xù)測(cè)量大動(dòng)脈流出量和心房流入量。用心房流量和大動(dòng)脈流量的不同計(jì)算冠脈血流量。所有血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)以1000Hz的取樣速度數(shù)字化并在一臺(tái)PC上用專用軟件(HEM，Notocord)記錄。將心臟穩(wěn)定30分鐘。所有官能性血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)均在穩(wěn)態(tài)期間和加載壓力負(fù)荷和加載容量負(fù)荷期間測(cè)定。通過改變前負(fù)荷壓強(qiáng)得到了左心室功能曲線。對(duì)于前負(fù)荷曲線的獲得，將后負(fù)荷設(shè)定為60mmHg并將前負(fù)荷在5至25mmHg的范圍內(nèi)以0.5mmHg的步長(zhǎng)進(jìn)行調(diào)整。加載壓力負(fù)荷和加載容量負(fù)荷之間將心臟在基線條件下在穩(wěn)定。與C57B16野生型鼠相比，從ApoE缺失動(dòng)物分離出的心臟在此實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中顯示出較低的冠狀血流量(3.6ml/min對(duì)4.95ml/min)。按照本發(fā)明用化合物(I)處理ApoE缺失鼠的冠狀血流量增加到了可以與未患病的野生型鼠的水平相比的5ml/min。化合物(I)還改進(jìn)了依賴于前負(fù)荷壓強(qiáng)的冠狀血流量，并且，作為抗局部缺血功效的標(biāo)志，減少了的室性心律失常的發(fā)生機(jī)率。權(quán)利要求1.式(I)的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺的用途，用于制造刺激內(nèi)皮NO合酶表達(dá)的藥物。2.4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺的用途，用于制造用于處置心血管病、穩(wěn)定或不穩(wěn)定心絞痛、冠心病、變異型心絞痛、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心力衰竭、心肌梗塞、中風(fēng)、血栓癥、外周閉塞性血管病、內(nèi)皮機(jī)能障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成型術(shù)后的內(nèi)皮損傷、高血壓、原發(fā)性高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、繼發(fā)性高血壓、腎血管性高血壓、慢性腎小球腎炎、勃起功能障礙、室律不齊、糖尿病或糖尿病并發(fā)癥、腎病、視網(wǎng)膜病、血管生成、支氣管哮喘、慢性腎衰竭、肝硬化、骨質(zhì)疏松癥、記憶功能受限、學(xué)習(xí)能力受限，或降低絕經(jīng)后女性或攝入避孕藥后患心血管病的危險(xiǎn)的藥物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其中藥物是用于處理內(nèi)皮功能障礙、高血壓、冠心病、穩(wěn)定性心絞痛、糖尿病或動(dòng)脈粥樣硬化的。4.刺激內(nèi)皮NO合酶的表達(dá)的藥物制劑，其中包含有效劑量的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺和醫(yī)藥上可以接受的載體。5.一種藥物制劑，用于處置心血管疾病、穩(wěn)定或不穩(wěn)定心絞痛、冠心病、變異型心絞痛、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心力衰竭、心肌梗塞、中風(fēng)、血栓癥、外周閉塞性血管病、內(nèi)皮機(jī)能障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成型術(shù)后的內(nèi)皮損傷、高血壓、原發(fā)性高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、繼發(fā)性高血壓、腎血管性高血壓、慢性腎小球腎炎、勃起功能障礙、室律不齊、糖尿病或糖尿病并發(fā)癥、腎病、視網(wǎng)膜病、血管生成、支氣管哮喘、慢性腎衰竭、肝硬化、骨質(zhì)疏松癥、記憶功能受限、學(xué)習(xí)能力受限，或降低絕經(jīng)后女性或攝入避孕藥后患心血管病的危險(xiǎn)，該藥物制劑包含有效劑量的4-氟-N-(1，2-二氫化茚-2-基)苯甲酰胺和醫(yī)藥上可以接受的載體。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的藥物制劑，該藥物制劑的形式為丸劑、片劑、漆片、糖衣片劑、顆粒劑、硬或軟明膠膠囊劑、水溶液、酒精溶液或油溶液、糖漿劑、乳劑或混懸劑、栓劑、注射或輸注用溶液、軟膏劑、酊劑、噴霧劑、透皮治療劑體系、鼻噴入劑、氣霧劑混合物、微囊劑、植入劑或植入棒。全文摘要本發(fā)明涉及符合式(I)的4－氟－N－(1，2－二氫化茚－2－基)苯甲酰胺及其作為藥物的用途?；衔?I)可以用于治療或預(yù)防心血管疾病，例如穩(wěn)定或不穩(wěn)定心絞痛、變異型心絞痛(痙攣)、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心力衰竭、心肌梗塞、中風(fēng)、血栓癥、外周閉塞性血管病PAOD、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、PTCA后的內(nèi)皮損傷、原發(fā)性高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、繼發(fā)性高血壓、腎血管慢性腎小球腎炎、勃起功能障礙、室律不齊和降低絕經(jīng)后女性或攝入避孕藥后患心血管病的危險(xiǎn)、治療和預(yù)防糖尿病和糖尿病并發(fā)癥(腎病、視網(wǎng)膜病)、血管生成、支氣管哮喘、慢性腎衰竭、肝硬化、記憶功能受限或?qū)W習(xí)能力受限的藥物制劑。文檔編號(hào)A61P13/12GK1496264SQ02804863公開日2004年5月12日申請(qǐng)日期2002年2月12日優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日發(fā)明者P·沃爾法特,鈴木照,R·M·達(dá)拉尼普拉加達(dá),A·沙法洛娃,A·沃爾澤,H·斯特羅貝爾,,P沃爾法特,羋薇炊,達(dá)拉尼普拉加達(dá),逋申請(qǐng)人:安萬特醫(yī)藥德國(guó)有限公司