專利名稱：形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體以及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體以及其制備方法。更精確地，本發(fā)明涉及在水性介質(zhì)中形成自聚集體的、由一種疏水的抗癌試劑和一種親水的脫乙酰殼多糖組成的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體以及其制備方法。本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體不僅選擇性地對(duì)靶腫瘤組織起作用，而且持續(xù)長時(shí)間地釋放藥物。此外，抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體可以用作一種物理裝載疏水抗癌藥物的藥物載體。因此，本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體可以有效地用于癌癥的化學(xué)療法。
背景當(dāng)通過使用氨甲蝶呤完全治愈絨毛膜癌時(shí)癌癥的化學(xué)療法開始發(fā)展。到今天為止，已經(jīng)使用大約50種不同種類的抗癌藥，并且尤其是使用那些抗癌藥已經(jīng)滿意地治療了絨毛膜癌，白血病，維爾姆斯瘤，尤因瘤，橫紋肌瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，淋巴瘤，蕈樣肉芽腫，睪丸瘤等。
最近，已經(jīng)公開了很多關(guān)于癌癥發(fā)展和腫瘤細(xì)胞特征的知識(shí)，并且已經(jīng)進(jìn)行了關(guān)于新抗癌藥開發(fā)的研究。大多數(shù)抗癌藥通過抑制腫瘤細(xì)胞核酸的合成或通過直接與核酸結(jié)合使其失去功能來顯示抗癌作用。然而，由于這些抗癌藥不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞起作用而且對(duì)正常細(xì)胞起作用，它們經(jīng)常導(dǎo)致嚴(yán)重的副效應(yīng)如骨髓抑制(bone marrow depression)，胃腸損傷和脫發(fā)。
使用抗癌藥的最大問題是那些藥物不選擇性地只對(duì)腫瘤細(xì)胞起作用。就是說；抗癌藥對(duì)每個(gè)顯示快速分化或增殖的細(xì)胞(骨髓細(xì)胞，胃腸的表皮細(xì)胞，毛發(fā)濾泡細(xì)胞等)起作用，導(dǎo)致大多數(shù)患者將遭受副作用如骨髓抑制，胃腸疾病和脫發(fā)等。然而，抗癌藥具有抗癌的治療作用是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞反應(yīng)更敏感，使得比正常細(xì)胞更多的腫瘤細(xì)胞被殺死，另外，正常細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞再生更快。同時(shí)，除了抗癌作用，那些抗癌藥還有抗免疫作用。因此，將其提供給需要器官移植的患者是抗癌藥的另一個(gè)應(yīng)用，其目的是為了在移植后消除排斥癥狀。但是因?yàn)槟切┧幬锝档兔庖咝詫?duì)于癌癥患者而言必須考慮到感染的危險(xiǎn)。
到目前為止已經(jīng)廣泛使用了大約50種抗癌藥。按照它們的反應(yīng)機(jī)理和成分將這些藥物分類。在它們之中，已知亞德里亞霉素，通常稱為阿霉素，對(duì)于惡性淋巴瘤，急性骨髓性白血病，軟組織骨肉瘤，乳腺癌，卵巢癌，肺癌，支氣管癌，膀胱癌，消化系統(tǒng)癌癥等的治療高度有效。盡管它是一種非常有效的抗癌藥，它還是表現(xiàn)出這樣的副作用，如嚴(yán)重的骨髓抑制，心臟和腎機(jī)能減退和從血管至組織中的血液外流(N.Eng.J.Med.，1981，305，139)。
由于抗癌藥物的毒副作用導(dǎo)致癌癥化學(xué)治療是非常受限制的。如上述解釋，副作用產(chǎn)生于在化學(xué)治療中抗癌藥缺乏針對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效選擇性的事實(shí)。為了抑制抗癌藥對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用并提高它們對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的功效，已經(jīng)進(jìn)行了許多研究。優(yōu)選的方法是使用膠束或微球作為抗癌藥的載體并且將抗癌藥物與聚合物載體偶聯(lián)。
已經(jīng)使用膠束或微球作為抗癌藥的載體以減小癌癥治療的副作用。通過將抗癌藥物理裝載于膠束或微球之中，可以控制藥物的釋放速率，其取決于藥物載體的物理化學(xué)性質(zhì)。當(dāng)抗癌藥是單獨(dú)給藥時(shí)，它在一個(gè)短時(shí)期內(nèi)以一個(gè)很大的量起作用，這導(dǎo)致副作用。通過在密封于膠束或微球之中的條件下使得抗癌藥緩慢釋放，可能減小那些副作用(Pharm.Res.，1983，15，1844)。
可生物降解的聚合物載體與抗癌藥的化學(xué)偶聯(lián)是另一種有前途的用于癌癥治療的策略。如先前討論，副作用產(chǎn)生于在目前的癌癥化學(xué)治療中使用的抗癌藥缺乏針對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效選擇性的事實(shí)。因此，作為一種有前途的、抑制抗癌藥對(duì)正常細(xì)胞的副作用并提高它們對(duì)腫瘤細(xì)胞的功效的方法，已經(jīng)進(jìn)行了將抗癌藥與聚合物載體偶聯(lián)的研究。這種方法預(yù)期的有利特征是由聚合物載體的特性賦予的優(yōu)選的藥物組織分布，在血漿中延長的藥物半衰期，以及通過調(diào)節(jié)藥物和載體之間的鍵的化學(xué)性質(zhì)而控制藥物從聚合物載體的釋放。
已經(jīng)研究了作為抗癌藥物載體的幾種類型的聚合物，天然存在的和合成的聚合物。在天然存在的聚合物中，將免疫球蛋白最廣泛地作為藥物載體使用，這是因?yàn)樗鼈儗?duì)多種類型腫瘤細(xì)胞的高度特異性和廣泛的適用性。然而，免疫球蛋白作為聚合物載體的用途受它的化學(xué)和物理性質(zhì)所限制。例如，由于藥物的疏水性，抗癌藥對(duì)免疫球蛋白的修飾經(jīng)常導(dǎo)致在生理?xiàng)l件下的沉淀。另外，為了避免免疫球蛋白的變性，將修飾方法限制于在溫和條件下進(jìn)行的幾種。
最近，使用如今可利用的多種類型的合成聚合物可以設(shè)計(jì)藥物的聚合物載體，并且可以利用多種有機(jī)反應(yīng)將藥物引入到合成聚合物載體。從這個(gè)觀點(diǎn)，已經(jīng)研究了幾種類型的合成聚合物，如聚(N-2-(羥丙基)甲基丙烯酰胺)，聚(二乙烯基醚-共-馬來酐)，聚(苯乙烯-共-馬來酐)，葡聚糖，聚(乙二醇)，聚(L-谷氨酸)，聚(天冬氨酸)和聚(L-賴氨酸)。
基于腫瘤組織的病理生理學(xué)特征，抗癌藥-聚合物復(fù)合體賦予了一種治療癌癥的潛能。已知在腫瘤組織中，為了為腫瘤細(xì)胞的分化和增殖獲得足夠的營養(yǎng)，產(chǎn)生比在正常細(xì)胞中更多的血管。那些在腫瘤中的血管被認(rèn)為具有帶有大孔的缺損結(jié)構(gòu)，其允許聚合物載體容易地穿過。另外，通過圍繞癌癥組織的淋巴導(dǎo)管的排泄也被認(rèn)為與通過正常組織相比是受限制的。因此，聚合物容易地滲透于腫瘤組織之中但幾乎不從腫瘤組織中排出。將這種在腫瘤組織中顯示的特殊現(xiàn)象稱為增強(qiáng)的通透和滯留(EPR)效應(yīng)(Adv.Drug Deliv.Rev.，2000，65，271)。作為使用抗癌藥-聚合物復(fù)合體治療的其中之一，使用N-(羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)-抗癌藥復(fù)合體的嘗試處于II期臨床試驗(yàn)之中(美國專利5,037,883(1991))。
未結(jié)合的藥物是一種小分子，與其相比，預(yù)計(jì)形成自聚集體的抗癌藥-聚合物復(fù)合體具有一個(gè)大的直徑。具有理想直徑的聚合物藥物預(yù)期能夠在血流中循環(huán)而不會(huì)在毛細(xì)血管中形成栓塞，以避免在腎中的分泌，并通過血管滲透于靶細(xì)胞之中。并且期望該自聚集體形式通過利用聚合物隱蔽偶聯(lián)的藥物保護(hù)偶聯(lián)藥物在血漿中不受酶的攻擊。
殼多糖，脫乙酰殼多糖的一種前體，是一種含有(1→4)-β-糖苷鍵的天然聚合物，其中N-乙?；?D-葡萄糖胺單元是重復(fù)的，其通常在包括無脊椎動(dòng)物甲殼綱(Crustacea)的昆蟲的外殼中和真菌的細(xì)胞壁中被發(fā)現(xiàn)。脫乙酰殼多糖是一種通過使用高濃度的堿處理殼多糖的N-脫乙酰作用產(chǎn)生的堿性多糖。已經(jīng)知道脫乙酰殼多糖在細(xì)胞吸附力，生物適合性，生物降解力和可塑性方面優(yōu)于其它合成的聚合物。
因此，本發(fā)明人已經(jīng)合成了一種新型抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其形成自聚集體并允許抗癌藥物的物理裝載。通過證實(shí)抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體能夠緩慢而持續(xù)的釋放藥物而完成本發(fā)明。另外，通過改變復(fù)合體中的藥物含量可以控制藥物的釋放模式，導(dǎo)致對(duì)腫瘤組織的高選擇性。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供一種形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體及其制備方法，該復(fù)合體通過長時(shí)間持續(xù)地釋放藥物，增強(qiáng)對(duì)腫瘤組織的特異性和提高抗癌藥的含量，可以有效地應(yīng)用于癌癥的化學(xué)治療。
附圖簡述參考附圖可最好地理解本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的應(yīng)用，其中

圖1是顯示通過光散射測量在水溶液中本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的平均直徑和大小分布的圖表；圖2是一組本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的透射電子顯微鏡相片；A5×104放大倍數(shù)(條200nm)，B1×106放大倍數(shù)(條50nm)圖3是一張顯示按照pH從本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體中阿霉素的不同釋放水平的圖表。
○pH4， ●pH7優(yōu)選實(shí)施方案詳細(xì)描述本發(fā)明提供一種形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
本發(fā)明還提供一種上述抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法。
以下，詳細(xì)描述本發(fā)明。
本發(fā)明提供一種形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，每一種具有103-106MW的脫乙酰殼多糖都能夠作為一種抗癌藥物的載體使用，并且優(yōu)選具有高生物降解力和生物適合性的可溶的脫乙酰殼多糖。尤其更優(yōu)選通過引入乙二醇基團(tuán)而具有增強(qiáng)的溶解度的乙二醇脫乙酰殼多糖。而且，大多數(shù)疏水的抗癌藥可以用于本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，并且特別優(yōu)選阿霉素。本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的優(yōu)選尺寸為1nm-2,000nm。尤其更優(yōu)選10nm-80nm。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體可能包括在酸性條件下可斷開的接頭。作為一種接頭，可使用順烏頭酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐，寡肽和苯甲酰腙，并且尤其優(yōu)選pH-敏感的順烏頭酸酐(Biochem.Biophys.Res.Comm.，1981，102，1048)。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體在水性介質(zhì)中形成類似膠束的，圓形的自聚集體，這是由于由抗癌藥物的疏水性和脫乙酰殼多糖的親水性導(dǎo)致的復(fù)合體的兩親性的原因。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的大小按照包含的抗癌藥的數(shù)量而變化，其中包含的抗癌藥的可能數(shù)量為1-70重量％。
本發(fā)明人將上述抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體作為一種抗癌藥物載體使用，其里面有效地包含藥物。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，每種類型的疏水抗癌藥都可以作為一種抗癌藥使用。尤其更優(yōu)選阿霉素，紫杉醇，順鉑，絲裂霉素-C，道諾霉素和5-氟尿嘧啶。內(nèi)部含有抗癌藥物的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的優(yōu)選直徑為1nm-2,000nm，并且更優(yōu)選10nm-800nm。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的內(nèi)部是由疏水的抗癌藥組成的，并且尤其是抗癌藥的一些親水部分與脫乙酰殼多糖結(jié)合，這導(dǎo)致復(fù)合體內(nèi)部強(qiáng)烈的疏水性。因此，本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體提供將疏水抗癌藥裝載至復(fù)合體內(nèi)部的容易路徑，并且能夠增加裝載藥物的數(shù)量。任一種相同的抗癌藥既可以用于組成抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，又可以將其插入復(fù)合體內(nèi)部。同樣，可以將多種不同種類的抗癌藥一起插入到抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體之中。由于在抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體組成材料和其中插入的抗癌藥的性質(zhì)之間的相似性，該復(fù)合體作為一個(gè)載體具有比其它任何載體更大的作用。
由于增強(qiáng)的通透和滯留(EPR)效應(yīng)，本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體具有對(duì)腫瘤組織的高度選擇性，所以與小分子量抗癌藥物相比較，它可以在腫瘤組織中更大數(shù)量地積累以有效地對(duì)靶細(xì)胞起作用。同樣，復(fù)合體在水性介質(zhì)中還形成類似膠束的、圓形的自聚集體，這是由與親水的脫乙酰殼多糖，主鏈，結(jié)合的疏水抗癌藥引起的。通常，膠束是一種圓形的聚集體，其是由既具有疏水基團(tuán)又具有親水基團(tuán)的分子在水性介質(zhì)中形成。在這個(gè)時(shí)候，親水基團(tuán)在形成的聚集體外表聚集，疏水基團(tuán)在內(nèi)部聚集(Adv.Drug Deliv.Rev.，1996，21，107)。作為一種多種疏水抗癌藥物的載體已經(jīng)廣泛使用該聚集體。這種類型的藥物傳遞系統(tǒng)使用形成自聚集體的兩性聚合物，顯示出對(duì)靶細(xì)胞的高度選擇性和顯著減小的對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性。另外，該系統(tǒng)使得藥物保持足夠長的時(shí)間并且緩慢地和連續(xù)地釋放藥物，導(dǎo)致有效用于嚴(yán)重疾病如癌癥的治療。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體是一種抗癌藥物載體，其具有對(duì)腫瘤組織的高度選擇性，膠束的多種優(yōu)點(diǎn)和連續(xù)釋放藥物的能力。因此，可以將本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體用作具有強(qiáng)抗癌作用的抗癌藥。
本發(fā)明還提供上述抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的一種制備方法。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法包括下列步驟(1)將疏水抗癌藥物與以在酸性條件下斷開為特征的接頭連接；以及(2)將抗癌藥和接頭的復(fù)合體與親水的脫乙酰殼多糖結(jié)合。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，將阿霉素作為疏水抗癌藥使用。作為一種接頭，可以使用順烏頭酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐，寡肽和苯甲酰腙，并且尤其優(yōu)選pH-敏感的順烏頭酸酐(Biochem.Biophys.Res.Comm.，1981，102，1048)。
順烏頭酸酐是一種用于結(jié)合抗癌藥和脫乙酰殼多糖的接頭，其在酸性pH條件下斷開并釋放抗癌藥。腫瘤組織顯示比正常組織更低的pH值。因此，該pH-敏感的順烏頭酸酐可以提高抗癌藥對(duì)腫瘤組織的選擇性，并且減輕已經(jīng)是抗癌藥物最大問題的對(duì)正常組織的細(xì)胞毒性。
作為一種疏水的脫乙酰殼多糖，優(yōu)選乙二醇脫乙酰殼多糖，其中引入了乙二醇基團(tuán)。
可以通過直接將抗癌藥與脫乙酰殼多糖結(jié)合或使用一種接頭將抗癌藥與脫乙酰殼多糖連接來制備本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體；優(yōu)選后者。
本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法包括將抗癌藥裝載至形成自聚集體的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體內(nèi)部的方法。
阿霉素，紫杉醇，順鉑，絲裂霉素-C，道諾霉素和5-氟尿嘧啶是裝載于抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體內(nèi)部的抗癌藥的實(shí)例。通過化學(xué)成鍵的裝載被限制在10％(基于抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的總重量)；然而，通過物理裝載，抗癌藥物的裝載量可以提高到60％，導(dǎo)致超過化學(xué)成鍵的界限的抗癌藥含量的增加。
實(shí)施例如在下列實(shí)施例中所示，本發(fā)明實(shí)用的和目前優(yōu)選的實(shí)施方案是例證性的。
然而，應(yīng)當(dāng)理解那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員，考慮到這個(gè)公開內(nèi)容，可以在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)進(jìn)行修改和改進(jìn)。
實(shí)施例1制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體1<1-1>制備順烏頭阿霉素為了制備順烏頭阿霉素，本發(fā)明人將13.46mg順烏頭酸酐(化學(xué)式1)溶解于0.5ml二噁烷中，然后將10mg阿霉素(化學(xué)式2)溶解于350μl吡啶中。在那以后，本發(fā)明人將順烏頭溶液加入阿霉素溶液之中并讓其于4℃反應(yīng)24小時(shí)。
<化學(xué)式1>

<化學(xué)式2>
將上述反應(yīng)混合物分散至5ml氯仿和5％的NaHCO3溶液中，并劇烈攪拌。然后，去除底部的氯仿層并用乙酸乙酯萃取剩下的溶液，之后將溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生順烏頭阿霉素制劑。反應(yīng)過程在<反應(yīng)式1>中總結(jié)。
<反應(yīng)式1>
<1-2>脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備將乙二醇脫乙酰殼多糖以1重量％的濃度溶解在10ml水中，然后向其中加入10ml甲醇。將3mg順烏頭阿霉素溶解在1ml DMF中，將其緩慢加載至乙二醇脫乙酰殼多糖溶液之中。將7mg 1-乙基-3-(3-二甲基-氨丙基)碳二亞胺(EDC)和5mg N-氫琥珀酰亞胺(NHS)溶解在1ml的甲醇中，將其加至反應(yīng)混合物之中并室溫?cái)嚢?4小時(shí)。將反應(yīng)混合物透析2天以除去未反應(yīng)的順烏頭阿霉素，然后將其冷凍干燥，產(chǎn)生本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體制劑(圖1和圖2)。上面的反應(yīng)過程在<反應(yīng)式2>中總結(jié)。
<反應(yīng)式2>

實(shí)施例2制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體2在順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖的反應(yīng)過程中，將2mg順烏頭阿霉素溶解于1ml的DMF中，將其緩慢加載至乙二醇脫乙酰殼多糖溶液之中。在那以后，將4.6mg EDC和3.3mg NHS溶解于1ml甲醇之中，將其加入上述反應(yīng)混合物之中。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例3制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體3在順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖的反應(yīng)過程中，將1mg順烏頭阿霉素溶解于1ml的DMF中，將其緩慢加載至乙二醇脫乙酰殼多糖溶液之中。在那以后，將2.3mg EDC和1.7mg NHS溶解于1ml甲醇之中，將其加入上述反應(yīng)混合物之中。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例4制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體4在順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖的反應(yīng)過程中，將4mg順烏頭阿霉素溶解于1ml的DMF中，將其緩慢加載至乙二醇脫乙酰殼多糖溶液之中。在那以后，將9.3mg EDC和6.7mg NHS溶解于1ml甲醇之中，將其加入上述反應(yīng)混合物之中。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例5制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體5在順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖的反應(yīng)過程中，將5mg順烏頭阿霉素溶解于1ml的DMF中，將其緩慢加載至乙二醇脫乙酰殼多糖溶液之中。在那以后，將11.7mg EDC和8.3mg NHS溶解于1ml甲醇之中，將其加入上面的反應(yīng)混合物之中。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
如在上面實(shí)施例1-實(shí)施例5中所示，包含在阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體中的阿霉素的數(shù)量取決于順烏頭阿霉素的數(shù)量。
實(shí)施例6制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體6讓順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖反應(yīng)6小時(shí)。同樣，剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例7制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體7讓順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖反應(yīng)12小時(shí)。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例8制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體8讓順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖反應(yīng)18小時(shí)。同樣，剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例9制備阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體9讓順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖反應(yīng)48小時(shí)。剩余的過程實(shí)施與上面<1-2>相同的方法以制備本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
如在上面實(shí)施例6-實(shí)施例9中所示，包含在阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體之中的阿霉素的數(shù)量取決于順烏頭阿霉素與乙二醇脫乙酰殼多糖的反應(yīng)時(shí)間。
實(shí)施例10制備形成其中含有阿霉素的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體1為了制備形成內(nèi)部包含阿霉素的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，本發(fā)明人將1mg阿霉素溶解于1ml氯仿溶液中，然后向其中加入三乙胺。將5mg本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體溶解于10ml水中，然后將上述阿霉素溶液緩慢裝載至其中，接著攪拌24小時(shí)。在此時(shí)，將容器打開并接觸空氣以蒸發(fā)加入的氯仿。24小時(shí)后，用分子量截止(MWCO)1000的過濾器對(duì)每種溶液進(jìn)行超濾，以消除沒有滲透進(jìn)入阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體內(nèi)部的剩余的阿霉素。將在過濾器上收集的材料再次溶解于需要量的水中，然后冷凍干燥，產(chǎn)生內(nèi)部含有阿霉素的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體(表1)。在表1中，裝載效果用％表示阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體之中裝載的阿霉素的實(shí)際數(shù)量。
<表1>
實(shí)施例11制備形成其中含有阿霉素的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體2本發(fā)明人將1mg阿霉素溶解于1ml氯仿溶液中。并且，剩余的過程實(shí)施與上述實(shí)施例10相同的方法以制備形成其中含有阿霉素的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體(表1)。
實(shí)施例12制備形成其中含有紫杉醇的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體1將1mg紫杉醇溶解于1ml DMF中以制備內(nèi)部包含紫杉醇的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。將5mg本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體溶解于10ml水中，然后將上述紫杉醇溶液緩慢加載于其中，接著攪拌24小時(shí)。24小時(shí)后，用MWCO 3500的膜對(duì)每種溶液進(jìn)行2天的透析，以消除沒有滲透入阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體內(nèi)部的剩余的紫杉醇。在透析后，將溶液冷凍干燥，產(chǎn)生內(nèi)部含有紫杉醇的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)施例13制備形成其中含有紫杉醇的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體2本發(fā)明人將2mg紫衫醇溶解于1ml DMF中。并且，剩余的過程實(shí)施與上述實(shí)施例12相同的方法以制備形成其中含有紫杉醇的自聚集體的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1按照pH值從阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體釋放的阿霉素的測量本發(fā)明人已經(jīng)觀察到按照pH值從本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體釋放的阿霉素水平。具體地，將阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體分散于水中直至濃度達(dá)到2mg/ml，然后將500μl阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體溶液包裹于纖維素透析膜(MWCO 12,000-14,000)中。分別在pH4的水和pH7的水中將它浸泡之后，本發(fā)明人在37℃下將其150rpm攪拌，按照時(shí)間表獲得釋放溶液以利用分光光度計(jì)測量釋放的阿霉素的量。
結(jié)果，如圖3所示，在pH4和pH7的兩種情形下釋放的阿霉素的數(shù)量都隨時(shí)間進(jìn)行逐漸增大。但是當(dāng)浸泡在pH4的水溶液中時(shí)，相比較而言本發(fā)明的阿霉素-脫乙酰殼多糖復(fù)合體釋放多得多的阿霉素，暗示通過對(duì)通常顯示酸性條件的腫瘤生長區(qū)域適當(dāng)?shù)蒯尫虐⒚顾?，阿霉?脫乙酰殼多糖復(fù)合體可以有效地用于癌癥治療。
工業(yè)實(shí)用性如上所示，本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體通過形成自聚集體具有延長的藥物釋放時(shí)間，增強(qiáng)的對(duì)腫瘤組織的選擇性，并且通過將抗癌藥物理加入到自聚集體內(nèi)部增加藥量。因此，本發(fā)明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體可以有效地用于癌癥化學(xué)療法。
那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可以容易地利用在前述中公開的概念和具體的實(shí)施方案作為一個(gè)基礎(chǔ)來修飾或設(shè)計(jì)其它實(shí)現(xiàn)本發(fā)明相同目的的實(shí)施方案。那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員還將認(rèn)識(shí)到，這樣同等的實(shí)施方案不脫離在后附的權(quán)利要求中闡明的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其包含一種疏水抗癌藥和一種親水脫乙酰殼多糖，并且在水性介質(zhì)中形成自聚集體。
2.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述的疏水抗癌藥是阿霉素。
3.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述抗癌藥的含量為1-70重量％。
4.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述的親水脫乙酰殼多糖為乙二醇脫乙酰殼多糖。
5.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述脫乙酰殼多糖的平均分子量為103-106。
6.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述復(fù)合體另外包括一種在酸性條件中分解的接頭。
7.如權(quán)利要求6所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述接頭選自順烏頭酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐和寡肽。
8.如權(quán)利要求1所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中所述復(fù)合體的直徑為10-800nm。
9.如權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中進(jìn)一步將所述疏水抗癌藥包含于復(fù)合體內(nèi)部。
10.如權(quán)利要求9所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體，其中包含于所述復(fù)合體內(nèi)部的抗癌藥選自阿霉素，紫杉醇，順鉑，道諾霉素和5-氟尿嘧啶。
11.一種所述抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法包括下列步驟(1)將一種疏水抗癌藥物與一種以在酸性條件下斷開為特征的接頭結(jié)合；以及(2)將一種抗癌藥和一種接頭的復(fù)合體與親水脫乙酰殼多糖結(jié)合。
12.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述疏水抗癌藥是阿霉素。
13.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述抗癌藥的含量是1-70重量％。
14.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述疏水脫乙酰殼多糖是乙二醇脫乙酰殼多糖。
15.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述脫乙酰殼多糖的平均分子量為103-106。
16.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述接頭選自順烏頭酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐和寡肽。
17.如權(quán)利要求11所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中所述復(fù)合體的直徑為10-800nm。
18.如在權(quán)利要求11-17其中任何一項(xiàng)所闡明的制備抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的方法，其中進(jìn)一步包括將所述疏水抗癌藥裝載于所述復(fù)合體內(nèi)部的步驟。
19.如權(quán)利要求18所闡明的抗癌藥-脫乙酰殼多糖復(fù)合體的制備方法，其中包含于所述復(fù)合體內(nèi)部的疏水抗癌藥選自阿霉素，紫杉醇，順鉑，道諾霉素和5-氟尿嘧啶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種形成自聚集體的抗癌藥－脫乙酰殼多糖復(fù)合體以及其制備方法。更精確地，本發(fā)明涉及在水性介質(zhì)中形成自聚集體的、由一種疏水的抗癌試劑和一種親水的脫乙酰殼多糖組成的抗癌藥－脫乙酰殼多糖復(fù)合體以及其制備方法。本發(fā)明的抗癌藥－脫乙酰殼多糖復(fù)合體不僅選擇性地對(duì)靶腫瘤組織起作用，而且持續(xù)長時(shí)間地釋放藥物。此外，抗癌藥－脫乙酰殼多糖復(fù)合體通過將抗癌藥加入到自聚集體之中可以攜帶更多數(shù)量的藥物，這通常被化學(xué)鍵所限制。因此，本發(fā)明的抗癌藥－脫乙酰殼多糖復(fù)合體可以有效地用于癌癥的化學(xué)療法。
文檔編號(hào)A61K31/337GK1503679SQ02808392
公開日2004年6月9日 申請日期2002年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月18日
發(fā)明者權(quán)翊贊, 金仁山, 鄭曙榮, 鄭蕙嬋, 趙容佑, 孫娟珠, 樸鐘來, 徐祥奉 申請人:韓國科學(xué)技術(shù)研究院, 株式會(huì)社自光