專利名稱：靶向氧化性治療制劑的制作方法
背景和概述本發(fā)明涉及含有過(guò)氧化屬或氧化產(chǎn)物的組合物、它的制備方法和它的用途。更具體地，本發(fā)明涉及藥物組合物或制劑，它含有烯屬化合物被含氧氧化劑氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，為液體形式或溶液；滲透溶劑；含有螯合金屬的染劑；和芳族氧化還原化合物。本發(fā)明還涉及該藥物制劑的制備及其用途。
臭氧是一種三原子的氣體分子，是氧的同素異形體?？梢越柚烹娀驈?qiáng)紫外光從純氧獲得之。Christian Friedrich Schonbein于1840年發(fā)現(xiàn)臭氧后，六十年內(nèi)沒(méi)有關(guān)注過(guò)它的醫(yī)藥應(yīng)用。在第一次世界大戰(zhàn)開(kāi)始時(shí)，Albert Wolf第一次使用該氣體進(jìn)行治療，用于感染傷口的局部愈合。不過(guò)，在二十世紀(jì)二十年代，抗生素藥物(磺胺類和青霉素類)的發(fā)現(xiàn)以及有關(guān)在醫(yī)藥領(lǐng)域中內(nèi)服臭氧氣體的懷疑阻礙了其醫(yī)藥應(yīng)用的發(fā)展。六十年間，臭氧的臨床研究?jī)H限于歐洲私人行醫(yī)，零散的材料沒(méi)有發(fā)表在行業(yè)雜志上。而且，人們關(guān)于臭氧是嚴(yán)重的污染物的誤解、疾病的“自由基”理論和抗氧化劑添加劑市場(chǎng)都為它的使用帶來(lái)偏見(jiàn)，這也是可以理解的。
臭氧療法是一種誤稱。臭氧是一種極具反應(yīng)性的和不穩(wěn)定的氣體，作用機(jī)理直接涉及副產(chǎn)物，它通過(guò)與存在于血漿和細(xì)胞膜中的有機(jī)化合物的選擇性相互作用而生成。臭氧與不飽和烯烴的選擇性反應(yīng)發(fā)生在碳-碳雙鍵上，生成臭氧化物。臭氧本身是毒性的，它的反應(yīng)產(chǎn)物臭氧化物是不穩(wěn)定的，本身也不是治療性的。
于1818年發(fā)現(xiàn)的過(guò)氧化氫(H2O2)僅以痕量存在于自然界中。過(guò)氧化氫是不穩(wěn)定的，在與有機(jī)膜和特定物質(zhì)直接接觸時(shí)劇烈分解(泡沫)。光、攪拌、加熱和鐵都加速過(guò)氧化氫在溶液中的分解速率。過(guò)氧化氫的來(lái)自體內(nèi)直接接觸殺死過(guò)氧化物破壞性酶、即過(guò)氧化氫酶水平低的微生物。例如，在將過(guò)氧化氫注入被過(guò)氧化物敏感性大腸桿菌感染的兔子血液中時(shí)，沒(méi)有細(xì)菌效應(yīng)。而且，增加含有大腸桿菌的兔或人血液中的過(guò)氧化物的來(lái)自體內(nèi)濃度沒(méi)有產(chǎn)生直接的細(xì)菌活動(dòng)的跡象。高濃度過(guò)氧化氫的效應(yīng)的缺乏直接涉及過(guò)氧化物破壞性酶、即過(guò)氧化氫酶的存在。為了具有任何效應(yīng)，高濃度過(guò)氧化氫將不得不與細(xì)菌接觸相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。正常存在于血液中的大量過(guò)氧化氫破壞性酶、例如過(guò)氧化氫酶使過(guò)氧化物不可能在血液中存在超過(guò)幾秒鐘。必須承認(rèn)，通過(guò)注射或輸注引入到血流中的過(guò)氧化氫不會(huì)在血液或細(xì)胞外液中直接充當(dāng)細(xì)胞外殺菌劑。
不過(guò)，過(guò)氧化氫的確參與活化巨噬細(xì)胞內(nèi)的殺菌過(guò)程。細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化作用的關(guān)鍵治療標(biāo)準(zhǔn)是過(guò)氧化載體分子的選擇性釋放、吸收和活化，僅進(jìn)入患病的巨噬細(xì)胞，而這據(jù)信不能提升過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶的活性。所注入的過(guò)氧化氫是一種泛化的毒素，而靶向細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化作用是一種選擇性治療工具。
De Villez的美國(guó)專利No.4,451,480教導(dǎo)了治療痤瘡的組合物和方法。該方法包括用臭氧化材料局部治療病患區(qū)域，該材料源于臭氧化各種不揮發(fā)油和不飽和酯、醇、醚與脂肪酸。
De Villez的美國(guó)專利No.4,591,602提示了用于控制微生物感染的霍霍巴油的臭氧化物。
Herman的美國(guó)專利No.4,983,637公開(kāi)了腸胃外治療局部與全身病毒感染的方法，該方法在藥學(xué)上可接受的載體中給以萜烯的臭氧化物。
Herman的美國(guó)專利No.5,086,076提示了含有載體和萜烯臭氧化物的抗病毒組合物。該組合物適合于全身給藥或局部用藥。
Herman的美國(guó)專利No.5,126,376描述了局部治療哺乳動(dòng)物病毒感染的方法，該方法在載體中使用萜烯的臭氧化物。
Herman的美國(guó)專利No.5,190,977教導(dǎo)了含有非水性載體和萜烯臭氧化物的抗病毒組合物，適合于全身注射。
Herman的美國(guó)專利No.5,190,979描述了腸胃外治療哺乳動(dòng)物病癥的方法，該方法在載體中使用萜烯的臭氧化物。
Herman的美國(guó)專利No.5,260,342教導(dǎo)了腸胃外治療哺乳動(dòng)物病毒感染的方法，該方法在載體中使用萜烯的臭氧化物。
0Herman的美國(guó)專利No.5,270,344提示了治療哺乳動(dòng)物全身疾患的方法，該方法向哺乳動(dòng)物腸道應(yīng)用不飽和烴的三氧戊環(huán)或二過(guò)氧化物衍生物，該衍生物是通過(guò)臭氧化溶于非極性溶劑的不飽和烴而制備的。
Herman的美國(guó)專利No.5,364,879描述了治療哺乳動(dòng)物病癥的組合物，該組合物含有非萜烯類不飽和烴的二過(guò)氧化物或三氧戊環(huán)衍生物，該衍生物是通過(guò)在35℃下、在載體中臭氧化不飽和烴而制備的。
盡管有關(guān)于萜烯臭氧化物用于不同適應(yīng)癥的報(bào)道，萜烯臭氧化物仍然顯示多種缺陷。例如，單萜、如月桂烯和檸檬烯的臭氧化物在實(shí)驗(yàn)室中突然起火。所以，它們太危險(xiǎn)，無(wú)法配制或貯存。
此外，一種直鏈單萜醇、香葉醇的臭氧化物在水或DMSO中對(duì)三例水痘-帶狀皰疹(帶狀皰疹)病毒和兩例單純皰疹性皮炎都不顯示任何臨床功效。
因而，需要安全有效的采用烯烴化合物氧化反應(yīng)產(chǎn)物的藥物制劑或組合物。
詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及組合物，包含不飽和有機(jī)化合物被含氧氧化劑氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，為液體形式或溶液；滲透溶劑；螯合染劑；和芳族氧化還原化合物。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，必要組分包括由不飽和醇的臭氧分解作用所生成的過(guò)氧化產(chǎn)物、穩(wěn)定溶劑、金屬卟啉和醌。
用于本發(fā)明的不飽和有機(jī)化合物或不飽和烯屬烴可以是沒(méi)有羥基的烯烴或含有羥基的烯烴。因而，沒(méi)有羥基的烯烴可以是開(kāi)鏈不飽和烴、單環(huán)不飽和烴或二環(huán)不飽和烴。含有羥基的烯烴可以是開(kāi)鏈不飽和醇、單環(huán)不飽和醇或二環(huán)不飽和醇。
不飽和有機(jī)化合物可以是直鏈的、支鏈的、環(huán)狀的、螺旋的或與其他分子配合的，具有一定的構(gòu)型。在與“活化氧”鍵合之前，不飽和有機(jī)化合物可以以氣態(tài)、液態(tài)或固態(tài)形式天然存在。
開(kāi)鏈不飽和烴可以是CnH2n，一條雙鍵，n＝2-20；CnH2n-2，兩條雙鍵，n＝4-20；CnH2n-4，三條雙鍵，n＝6-20；CnH2n-6，四條雙鍵，n＝8-20；C25H40，二倍半萜烴；或C30H48，三萜烴。
單環(huán)不飽和烴可以是CnH2n-2，一條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝3-20；CnH2n-4，兩條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝5-20；CnH2n-6，三條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝7-20；C25H40，二倍半萜烴；或C30H48，三萜烴。
二環(huán)不飽和烴可以是CnH2n-4，一條雙鍵+兩個(gè)環(huán)，n＝4-20；CnH2n-6，兩條雙鍵+兩個(gè)環(huán)，n＝6-20；C25H40，二倍半萜烴；或C30H48，三萜烴。
開(kāi)鏈不飽和醇可以是CnH2nOm，一條雙鍵，n＝3-20，m＝1-4；CnH2n-2Om，兩條雙鍵，n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-4Om，三條雙鍵，n＝7-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，四條雙鍵，n＝9-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜醇；或C30H48Om，三萜醇。
單環(huán)不飽和醇可以是CnH2n-2Om，一條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝3-20，m＝1-4；CnH2n-4Om，兩條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，三條雙鍵+一個(gè)環(huán)，n＝7-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜醇；或C30H48Om，m＝1-4，三萜醇。
二環(huán)不飽和醇可以是CnH2n-4Om，一條雙鍵+兩個(gè)環(huán)，n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，兩條雙鍵+兩個(gè)環(huán)，n＝7-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜醇；或C30H48Om，m＝1-4，三萜醇。
可用的不飽和烯烴可以是未取代的、取代的、環(huán)狀的或配合的烯烴、肼、類異戊二烯、類固醇、喹啉、類胡蘿卜素、生育酚、異戊烯基化蛋白質(zhì)或不飽和脂肪。本發(fā)明所優(yōu)選的不飽和烴是烯烴和類異戊二烯。本發(fā)明更優(yōu)選的不飽和烴是直鏈類異戊二烯醇，在線性鏈中具有二至四個(gè)重復(fù)的異戊二烯基，例如香葉醇、香葉基香葉醇、橙花醇或芫荽醇。
類異戊二烯主要見(jiàn)于植物，是精油的成分。盡管很多類異戊二烯是烴類，不過(guò)也存在含氧的類異戊二烯，例如醇、醛和酮。在正式意義上，類異戊二烯的構(gòu)件可以被想象為異戊二烯烴CH2＝C(CH3)-CH＝CH2，不過(guò)已知異戊二烯本身是類異戊二烯生物合成的終產(chǎn)物，不是中間體。類異戊二烯烴是根據(jù)它們所含有的異戊二烯(C5H8)單元數(shù)而分類的。因而分別地，單萜具有2個(gè)、倍半萜具有3個(gè)、二萜具有4個(gè)、二倍半萜具有5個(gè)、三萜具有6個(gè)、四萜具有8個(gè)異戊二烯單元。四萜更普遍地稱為類胡蘿卜素。
檸檬烯和蒎烯是單萜的實(shí)例。法尼醇和橙花叔醇是倍半萜醇的實(shí)例。維生素A1和植醇是二萜醇的實(shí)例，角鯊烯是三萜的實(shí)例。維生素原A1、即已知的胡蘿卜素，是四萜的實(shí)例。香葉醇是一種單萜醇，在氧鍵合與正常狀態(tài)下都是液體，對(duì)活細(xì)胞是安全的。
基于藥物制劑的總重量，烯烴可以占約0.001％至約30％，優(yōu)選約0.1％至約5.0％，更優(yōu)選約0.5％至約3.0％。
與不飽和烴反應(yīng)的含氧氧化劑可以是單線態(tài)氧、三線態(tài)氧、超氧化物陰離子、臭氧、高碘酸鹽、羥基原子團(tuán)、過(guò)氧化氫、烷基過(guò)氧化物、過(guò)氧化氨甲酰、過(guò)氧化苯甲酰、或與過(guò)渡元素、例如鉬鍵合的氧(例如MoO5)。
本發(fā)明優(yōu)選的含氧氧化劑包括臭氧、單線態(tài)氧和超氧化物陰離子。臭氧是與不飽和烴鍵合所最優(yōu)選的含氧氧化劑。它是從純氧制備的。
我們發(fā)現(xiàn)，使“活化氧”與完整香葉醇鍵合的最好方法是在0-20℃之間的溫度下，在黑暗中，在沒(méi)有水或極性溶劑的存在下進(jìn)行臭氧化。然后在黑暗中、在100％二甲基亞砜(DMSO)中溶解和穩(wěn)定化香葉醇“臭氧化物”，以防止產(chǎn)物的過(guò)早分解。盡管不希望受任何理論所限，不過(guò)據(jù)信在超氧化物陰離子的存在下，在細(xì)胞內(nèi)部發(fā)生香葉醇臭氧化的四噁烷過(guò)氧化二聚物副產(chǎn)物的催化分解，它不是臭氧化物。所釋放的最終反應(yīng)性治療劑是過(guò)氧化氫和乙酸。
盡管不希望受任何理論所限，不過(guò)據(jù)信一般而言，本申請(qǐng)中烯烴與臭氧之間的反應(yīng)是通過(guò)Criegee機(jī)理進(jìn)行的。按照這種機(jī)理，最初的反應(yīng)步驟是臭氧向烯烴的1，3-偶極環(huán)加成，得到伯臭氧化物(1，2，3-三噁烷)。伯臭氧化物是不穩(wěn)定的，與羰基化合物經(jīng)歷1，3-裂環(huán)，得到“正常的”臭氧化物，即1，2，4-三噁烷。

流程1在副反應(yīng)中，羰基氧化物能夠參加二聚化，得到過(guò)氧化二聚物，即1，2，4，5-四噁烷。
流程2羰基氧化物是強(qiáng)親電劑，在親核劑(例如醇或水)的存在下，它容易經(jīng)歷親核加成，得到1-烷氧基過(guò)氧化氫。在某些條件下，1-烷氧基過(guò)氧化氫能夠經(jīng)歷進(jìn)一步的反應(yīng)，得到羧酸衍生物。
流程3仍然不希望受理論所限，據(jù)信在本發(fā)明中含醇烯烴的臭氧分解期間，合理的是預(yù)期將存在三種主要類型的過(guò)氧化產(chǎn)物正常的臭氧化物、羰基四噁烷二聚物和1-烷氧基過(guò)氧化氫。在水的存在下，這些過(guò)氧化產(chǎn)物有些還可能導(dǎo)致在粗的產(chǎn)物混合物中存在有機(jī)過(guò)酸。
本發(fā)明涉及DMSO“穩(wěn)定化”臭氧分解的最初產(chǎn)物的用途。類似地，不希望受任何理論所限，據(jù)信穩(wěn)定化作用最有可能是簡(jiǎn)單的溶劑化現(xiàn)象。不過(guò)，已知二甲基亞砜本身是一種親核試劑。它作為親核配偶體參與穩(wěn)定化反應(yīng)屬也是可能的(例如作為二甲基氧化锍鹽)。
用于氧鍵合性不飽和烴的滲透溶劑可以是軟化劑、液體、膜、膠束、等離子體或蒸汽。
可用的滲透溶劑是水、脂肪、固醇、卵磷脂、磷脂、pH緩沖鹽水、乙醇、丙二醇、二甲基亞砜、甲磺?；淄楹途垡蚁┻量┩?。優(yōu)選的滲透溶劑包括二甲基亞砜、聚乙烯吡咯烷和pH緩沖鹽水。最優(yōu)選的滲透溶劑包括二甲基亞砜。
基于藥物制劑的總重量，滲透溶劑可以占約50％至約99％，優(yōu)選約90％至約98％，更優(yōu)選約95％至約98％。
“被穩(wěn)定的”過(guò)氧化分子及其滲透溶劑已經(jīng)從目前用于生產(chǎn)的組分制成，它們已獲得食品與藥品管理局(FDA)的許可。這些成分是DrugMaster Files，Drug Monographs的主體，見(jiàn)于USP/NF，或者是被公認(rèn)為安全的(GRAS)。超氧化物生成性染劑和持恒劑也是生物學(xué)上可相容的，很可能適宜構(gòu)成分子配合物。
藥物制劑的其他組分可以包括金屬卟啉和芳族醌。金屬卟啉在光化學(xué)激發(fā)下使氧敏感的傾向有大量文獻(xiàn)為證，這也是亞鐵卟啉和銅卟啉鍵合含氧系統(tǒng)的傾向。
光動(dòng)力學(xué)療法的研究人員已經(jīng)知道，超氧化物染劑和持恒劑選擇性吸收被感染的和發(fā)育異常的細(xì)胞。這些病態(tài)細(xì)胞偶爾是過(guò)氧化氫酶缺陷的。染劑和持恒劑的電子活化僅需要毫伏AC脈沖。這種必需的脈沖適宜由心跳提供。而且，正常的細(xì)胞也不受傷害。
可用的染劑包括天然或合成的染劑。實(shí)例包括卟啉、玫瑰紅、葉綠酸、氯化血紅素、卟吩、咕啉、texaphrin、亞甲基藍(lán)、蘇木精、曙紅、藻紅、flavinoid、核黃素、蒽染劑、金絲桃素、甲基膽蒽、中性紅和熒光素。
本發(fā)明所優(yōu)選的染劑可以是任何天然或合成的卟啉、血卟啉、葉綠酸、玫瑰紅、它們各自的同種物或其組合。最優(yōu)選的染劑是天然存在的卟啉，例如血卟啉，和玫瑰紅。
基于藥物制劑或組合物的總重量，染劑可以占約0.1％至約30％，優(yōu)選約0.5％至約5％，更優(yōu)選約0.8％至約1.5％。
染劑可以敏感于光子；激光；電離輻射；聲子；心電穿孔；磁或等離子脈沖；或連續(xù)的流動(dòng)激發(fā)。
芳族氧化還原化合物包括任何取代的或未取代的苯醌、萘醌或蒽醌。優(yōu)選的芳族氧化還原化合物包括苯醌、甲基苯醌、萘醌和甲基萘醌。最優(yōu)選的芳族氧化還原化合物包括取代的或未取代的苯醌和萘醌。
基于藥物制劑的總重量，芳族氧化還原化合物可以占約0.01％至約20.0％，優(yōu)選約0.1％至約10％，更優(yōu)選約0.1％至約0.5％。
可用于本發(fā)明的電子供體包括等離子體、電流、抗壞血酸鹽和倍半氧化鍺。優(yōu)選的電子供體包括抗壞血酸鹽和倍半氧化鍺。最優(yōu)選的電子供體是抗壞血酸的任意鹽形式。
基于藥物制劑的總重量，電子供體可以占約0.01％至約20％，優(yōu)選約1％至約10％，更優(yōu)選約1％至約5％。
為了獲得體內(nèi)生物學(xué)效果，有必要輸注萜烯醇臭氧分解所得過(guò)氧化四噁烷產(chǎn)物，而不是臭氧化物，以及超氧化物生成性金屬卟啉和芳族醌。盡管不希望受任何理論所限，不過(guò)假定優(yōu)選的藥物制劑是生化成分的組合，這些成分誘導(dǎo)被感染的或發(fā)育異常的巨噬細(xì)胞重新進(jìn)行自動(dòng)催化的氧化作用。重新進(jìn)行自動(dòng)催化的氧化作用通過(guò)暢通無(wú)阻的過(guò)氧化作用刺激所定向的編程性細(xì)胞死亡(細(xì)胞自殺)。
本發(fā)明的藥物制劑用于消除患有馬原蟲性Myeloencephalitis(EPM)的馬的肉孢子蟲屬原蟲(Sarcocystis neurona)感染，EPM是一種代價(jià)巨大的、衰弱性的、最終致命的神經(jīng)病學(xué)疾病。實(shí)施例二和實(shí)施例三詳細(xì)描述了回顧性非隨機(jī)化研究。該試驗(yàn)連續(xù)評(píng)價(jià)了344匹被診斷為EPM并據(jù)此治療的馬。
EPM是目前北美和南美最普遍的馬神經(jīng)病學(xué)病癥。EPM通常是由脊與顱神經(jīng)束被寄生蟲Sarcocystis Neurona感染所導(dǎo)致的。EPM據(jù)報(bào)道產(chǎn)生大量中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的癥狀。S.Neurona把野負(fù)鼠(Didelphis virginiana)作為它的主要宿主。北美和南美的馬似乎是EPM的非正常宿主，因?yàn)榱阎匙硬粩嘣谥袠猩窠?jīng)系統(tǒng)中分化，不形成包囊?；加蠩PM的馬最普遍地具有步態(tài)異常，但是它們還可能存在其他腦疾病征兆，包括視神經(jīng)失明。疾病的嚴(yán)重性從輕微跛行到突然斜倒，臨床征兆是進(jìn)行性的。
血清學(xué)檢查提示，美國(guó)大約有80％的馬借助有寄生蟲。發(fā)現(xiàn)與疾病風(fēng)險(xiǎn)明顯有關(guān)的因素是馬的品種和年齡。quarterhorse和更老的馬比其他品種和年齡的馬面臨更高的感染風(fēng)險(xiǎn)。馬神經(jīng)病學(xué)疾病的誤診在EPM傳染病的流行中是常見(jiàn)的。用210匹馬測(cè)定臨床診斷馬神經(jīng)病學(xué)疾病的準(zhǔn)確性參數(shù)，其中確認(rèn)了決定性的病理診斷。臨床診斷全部疾病的總體效率為0.95，不過(guò)關(guān)于個(gè)別的疾病種類，有效性從0.79至1.00不等，敏感性從0.73至0.95不等，特異性從0.88至1.00不等。EPM被過(guò)度診斷，而東方馬腦脊髓炎、馬變性性腦脊髓病和創(chuàng)傷性神經(jīng)病學(xué)疾病被診斷不足。在臨床實(shí)踐中提高診斷參數(shù)的準(zhǔn)確度將允許新的診斷技術(shù)得以客觀評(píng)價(jià)，導(dǎo)致診斷和治療的效率更大。EPM被視為一種可治療的疾病，不過(guò)對(duì)抑制性抗微生物治療的響應(yīng)尚不完全。
為了從導(dǎo)致肢體感覺(jué)喪失的其他疾病中鑒別診斷EPM，進(jìn)行了廣泛的神經(jīng)病學(xué)檢查。這種檢查被證實(shí)準(zhǔn)確度為97％，它檢驗(yàn)?zāi)X脊液(CSF)中抗體的存在與否。
目前可利用的EPM治療是源于抗瘧疾療法的，一般是基于使用乙胺嘧啶與磺酰胺的組合療法的。臨床經(jīng)驗(yàn)提示，這些治療必須持續(xù)至少三至十二個(gè)月，并且大多數(shù)馬在目前可利用的治療停止之后復(fù)發(fā)。因此，這種疾病迫切需要新的治愈性治療。
實(shí)施例1烯烴的臭氧分解既可以在溶劑中進(jìn)行，也可以按凈態(tài)進(jìn)行。在兩者情況下，反應(yīng)混合物的冷卻是關(guān)鍵的，以避免反應(yīng)過(guò)氧化產(chǎn)物的暴發(fā)性分解。
下列一般工藝是液體烯烴臭氧分解的典型代表。
向配有磁攪拌器的1升燒瓶裝入烯烴(2摩爾)，將儀器稱重。用冷卻浴(冰水或冰鹽)包圍燒瓶。一旦內(nèi)容物冷卻至低于5℃，即開(kāi)始攪拌，使含臭氧的干燥氧流(通常含3％臭氧)穿過(guò)混合物。有利的是分散臭氧化的氧在玻璃原料中，但是對(duì)攪拌的溶液而言這不是必要的。定期中止氣流，將反應(yīng)燒瓶稱重或者對(duì)反應(yīng)混合物取樣。然后恢復(fù)氣流。
一旦反應(yīng)燒瓶的質(zhì)量顯示明顯增重，或者一旦反應(yīng)混合物的質(zhì)子磁共振(H1NMR)光譜顯示烯屬質(zhì)子共振強(qiáng)度減少了所需程度(通常約50％)，即終止氣流。
如上可以進(jìn)行臭氧分解，代之以烯烴在溶劑中的溶液，溶劑對(duì)臭氧無(wú)反應(yīng)性，例如飽和烴或氯代烴。
如上可以進(jìn)行臭氧分解，有無(wú)溶劑均可，用烯醇代替烯烴，但決不影響反應(yīng)。
然后將反應(yīng)混合物緩慢倒入冷卻的滲透溶劑中。
實(shí)施例2如下制備本發(fā)明優(yōu)選的藥物制劑(1)向鏈二烯醇3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-醇(香葉醇)噴射120mg/L臭氧/純氧氣體混合物，每小時(shí)1升氣體；(2)保持反應(yīng)溫度在5℃左右；(3)每小時(shí)取少量反應(yīng)產(chǎn)物，用H1NMR測(cè)量過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物的生成；(4)當(dāng)超過(guò)約50％的可用不飽和鍵已被反應(yīng)時(shí)，終止反應(yīng)；(5)將產(chǎn)物混合物用二甲基亞砜稀釋(1∶10)，得到溶液或分散系；(6)在用于靶生物系統(tǒng)之前，向溶液或分散系加入足量血卟啉、玫瑰紅與甲基萘醌干粉混合物，以便在通過(guò)鹽水靜脈內(nèi)輸注方式釋放至靶生物系統(tǒng)時(shí)，分散其中的每種組分的濃度為20毫摩爾?？蛇x地，在使用前可以向制劑加入抗壞血酸鹽。
實(shí)施例13兩種優(yōu)選的制劑如下A.
*用質(zhì)譜測(cè)定B.
*用質(zhì)譜測(cè)定實(shí)施例4向腦脊液(CSF)單次注射0.5ml實(shí)施例3A所述未稀釋的優(yōu)選藥物制劑或組合物，治療33匹馬。在注射之前取CSF樣本，以確診。通過(guò)神經(jīng)病學(xué)檢查，認(rèn)為全部馬都是EPM陽(yáng)性的。CSF的實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果為28例抗體陽(yáng)性(85％)、三例無(wú)特異性(9％)和兩例陰性(6％)。
本組中前六匹所治療的馬有兩匹死于錯(cuò)誤的脊注射技術(shù)(允許頭下垂)，從研究中排除。改變技術(shù)后，治療27匹馬沒(méi)有任何不良反應(yīng)。其余31匹馬中，26匹(85％)變?yōu)闊o(wú)癥狀，可以騎乘，恢復(fù)正?；顒?dòng)，超過(guò)1年沒(méi)有復(fù)發(fā)。使3匹最終斜倒下的馬(9％)安樂(lè)死，因?yàn)樯窠?jīng)病狀態(tài)的持續(xù)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有改善。2匹具有長(zhǎng)期EPM病史的馬(6％)表現(xiàn)顯著的改善，能夠騎乘，但是仍然有一些輕微的神經(jīng)病學(xué)缺陷。
鑒于整組呈現(xiàn)疾病的進(jìn)展、其他制度的失敗和嚴(yán)重的神經(jīng)病學(xué)癥狀，這些馬的85％恢復(fù)率是相當(dāng)顯著的。相比之下，采用可利用的傳統(tǒng)治療預(yù)計(jì)部分恢復(fù)率為10-20％，馬也將不可用于騎乘。
實(shí)施例5在本組中治療了311匹馬，歷時(shí)超過(guò)12個(gè)月。治療是這樣的，單次頸靜脈注射6ml優(yōu)選藥物制劑(如實(shí)施例3A所述)，稀釋在50ml無(wú)菌鹽水中，每天給藥，連續(xù)三天。本組中沒(méi)有不良反應(yīng)，極少數(shù)馬在治療完成后昏睡2-3天。
本組中有296匹馬(95％)在一個(gè)療程后7-14天內(nèi)變得無(wú)癥狀，在一個(gè)月內(nèi)恢復(fù)至完整訓(xùn)練或以前的用途，水平相當(dāng)或更大。本組有四匹馬(1％)復(fù)發(fā)，表現(xiàn)輕微的EPM癥狀，但是在第二次三日治療系列之后全都恢復(fù)至完整的用途。
7匹馬(4％)的神經(jīng)病學(xué)狀態(tài)有改善，使它們可以騎乘和工作。根據(jù)騎手的說(shuō)法，它們沒(méi)有表現(xiàn)出與EPM發(fā)作之前相同的水平。
2匹馬(＜1％)呈現(xiàn)神經(jīng)病學(xué)癥狀有所進(jìn)展，包括顱神經(jīng)缺損。這兩匹馬都在呈現(xiàn)癥狀之前兩天斜倒，它們沒(méi)有響應(yīng)于優(yōu)選的藥物組合物。出于人道原因，使這兩匹馬安樂(lè)死。
本發(fā)明表現(xiàn)若干不同于常規(guī)治療的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明制劑的靜脈內(nèi)輸注在治療EPM中是顯著有效的。
給藥溶劑以及療程持續(xù)時(shí)間短，為客戶提供比任何其他療法都更實(shí)用和經(jīng)濟(jì)的選擇。傳統(tǒng)的治療系列采用乙胺嘧啶與磺酰胺或地克珠利，每療程可能持續(xù)超過(guò)十二個(gè)月。與這些長(zhǎng)期治療系列有關(guān)的另一個(gè)缺點(diǎn)是高復(fù)發(fā)率。
事實(shí)上，所報(bào)道的恢復(fù)時(shí)間在本研究中是顯著的和空前的，僅為七天至三周。而且，靜脈內(nèi)釋放途徑表明本發(fā)明的藥物制劑跨越血腦屏障，目的是對(duì)付感染。
本發(fā)明的制劑沒(méi)有導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥、死亡、子代動(dòng)物遺傳缺陷或妊娠困難(8匹母馬)。這種引示研究中的大量病例以及杰出結(jié)果提示，本發(fā)明的藥物組合物遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于任何目前可利用的EPM治療。
本發(fā)明可以體現(xiàn)為其他具體方式，而不背離其精神或本質(zhì)特征。這些實(shí)施方式因此在各方面都被視為說(shuō)明性的而非限制性的，本發(fā)明的范圍是由附后的權(quán)利要求書所指示的，而不是上面的說(shuō)明，所有在權(quán)利要求書的等價(jià)含義與范圍內(nèi)的變化因此都被涵蓋其中。
實(shí)施例6在5℃下，向100ml 100％香葉烯液體噴射120mcg/ml臭氧，速率為1/8L/min，使蒸汽進(jìn)入大氣中。由化學(xué)人員靜電抵消蒸汽中的暴燃的火焰。
通過(guò)相同的方法產(chǎn)生臭氧化的檸檬烯，小心避免生成火花。在室溫下將臭氧化物產(chǎn)物貯存在箱子內(nèi)密封的褐色瓶子中過(guò)夜。第二天早上，化學(xué)人員和藥學(xué)人員見(jiàn)到濺在箱子內(nèi)部的微細(xì)玻璃粉末和糖漿狀化學(xué)品。
實(shí)施例7在5℃下，向1L純凈香葉醇通入臭氧(120mg/ml)達(dá)48小時(shí)。將反應(yīng)產(chǎn)物用DMSO稀釋(1∶9)，得到產(chǎn)物混合物。
每天向患有帶狀皰疹(水痘)的患者靜脈內(nèi)給以3％混合物，連續(xù)3天。關(guān)于患者的帶狀皰疹(水痘)沒(méi)有可觀察到的效果或改善。
權(quán)利要求
1.藥物制劑，包含烯烴被含氧氧化劑氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，其中該烯烴具有少于約35個(gè)碳；滲透溶劑；染劑，含有螯合的二價(jià)或三價(jià)金屬；和芳族氧化還原化合物。
2.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴包含開(kāi)鏈不飽和烴、單環(huán)不飽和烴或二環(huán)不飽和烴。
3.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴包含開(kāi)鏈不飽和醇、單環(huán)不飽和醇或二環(huán)不飽和醇。
4.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴是含有羥基的烯烴。
5.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴是液體形式、溶液或分散系。
6.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴包含類異戊二烯。
7.權(quán)利要求6的藥物制劑，其中該類異戊二烯包含-萜品醇、香茅醇、橙花醇、植醇、薄荷醇、香葉醇、香葉基香葉醇、芫荽醇或法尼醇。
8.權(quán)利要求6的藥物制劑，其中該類異戊二烯包含香葉烯、citrillene、檸檬醛、蒎烯或檸檬烯。
9.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該烯烴包含含有不揮發(fā)油、酯、脂肪酸或醚的烯烴。
10.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該含氧氧化劑包含單線態(tài)氧、三線態(tài)的氧、超氧化物陰離子、高碘酸鹽、羥基原子團(tuán)、過(guò)氧化物或與過(guò)渡元素鍵合的氧。
11.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該含氧氧化劑包含臭氧。
12.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該滲透溶劑是液體、膠束膜、軟化劑、等離子體或蒸汽。
13.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該滲透溶劑是二甲基亞砜。
14.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該滲透溶劑是聚乙烯吡咯烷或pH緩沖鹽水。
15.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該滲透溶劑是水溶液、脂肪、固醇、卵磷脂、磷脂、乙醇、丙二醇或甲磺?；淄?。
16.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該染劑可以被一種能量活化。
17.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該染劑包含卟啉或玫瑰紅。
18.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該染劑包含葉綠酸、氯化血紅素、咕啉、texaphrin、亞甲基藍(lán)、蘇木精、曙紅、藻紅、核黃素、蒽染劑、金絲桃素、甲基膽蒽、中性紅或熒光素。
19.權(quán)利要求16的藥物制劑，其中該能量包含光子或電穿孔脈沖。
20.權(quán)利要求13的藥物制劑，其中該能量包含激光、電離輻射、聲子、電脈沖、磁場(chǎng)、等離子體脈沖、重力脈沖或連續(xù)流動(dòng)激發(fā)。
21.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該金屬包含鐵。
22.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該金屬包含銅、錳、錫、鎂或鍶。
23.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中該芳族氧化還原化合物包含苯醌或萘醌。
24.權(quán)利要求1的藥物制劑，進(jìn)一步包含電子供體。
25.權(quán)利要求24的藥物制劑，其中該電子供體包含抗壞血酸或其藥學(xué)鹽。
26.權(quán)利要求24的藥物制劑，其中該電子供體包含等離子體、電流或倍半氧化鍺。
27.藥物制劑，包含含羥基烯烴被臭氧與氧的混合物氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，其中該含羥基烯烴具有少于約35個(gè)碳；滲透溶劑；染劑，含有螯合的二價(jià)或三價(jià)金屬；和芳族氧化還原化合物。
28.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該含羥基烯烴包含開(kāi)鏈不飽和醇、單環(huán)不飽和醇或二環(huán)不飽和醇。
29.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該含羥基烯烴是液體形式、溶液或分散系。
30.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該含羥基烯烴包含-萜品醇、香茅醇、橙花醇、芫荽醇、植醇、香葉醇、紫蘇子醇、薄荷醇、香葉基香葉醇或法尼醇。
31.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該滲透溶劑是液體、膠束膜、軟化劑、等離子體或蒸汽。
32.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該滲透溶劑是二甲基亞砜。
33.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該滲透溶劑是聚乙烯吡咯烷或pH緩沖鹽水。
34.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該滲透溶劑是水溶液、脂肪、固醇、卵磷脂、磷脂、乙醇、丙二醇或甲磺酰基甲烷。
35.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該染劑包含卟啉或玫瑰紅。
36.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該染劑包含葉綠酸、氯化血紅素、咕啉、texaphrin、亞甲基藍(lán)、蘇木精、曙紅、藻紅、核黃素、蒽染劑、金絲桃素、甲基膽蒽、中性紅或熒光素。
37.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該金屬包含鐵。
38.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該金屬包含銅、錳、錫、鎂或鍶。
39.權(quán)利要求27的藥物制劑，其中該芳族氧化還原化合物包含苯醌或萘醌。
40.權(quán)利要求27的藥物制劑，進(jìn)一步包含電子供體。
41.權(quán)利要求40的藥物制劑，其中該電子供體包含抗壞血酸或其藥學(xué)鹽。
42.權(quán)利要求40的藥物制劑，其中該電子供體包含等離子體、電流或倍半氧化鍺。
43.藥物制劑，包含含羥基烯烴被臭氧與氧的混合物氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，其中該含羥基烯烴包含-萜品醇、香茅醇、橙花醇、芫荽醇、植醇、香葉醇、紫蘇子醇、薄荷醇、香葉基香葉醇、或法尼醇；滲透溶劑，其中該滲透溶劑包含二甲基亞砜、固醇、卵磷脂、丙二醇或甲磺?；淄椋蝗緞?，含有螯合的二價(jià)或三價(jià)金屬，其中該染劑包含卟啉、玫瑰紅、葉綠酸、氯化血紅素、咕啉、texaphrin、亞甲基藍(lán)、蘇木精、曙紅、藻紅、核黃素、蒽染劑、金絲桃素、甲基膽蒽、中性紅或熒光素；芳族氧化還原化合物，其中該氧化還原化合物包含苯醌或萘醌。
44.權(quán)利要求43的藥物制劑，其中該金屬包含鐵、銅、錳、錫或鎂。
45.權(quán)利要求43的藥物制劑，進(jìn)一步包含電子供體。
46.權(quán)利要求45的藥物制劑，其中該電子供體包含抗壞血酸或其藥學(xué)鹽。
47.權(quán)利要求45的藥物制劑，其中該電子供體包含等離子體、電流或倍半氧化鍺。
48.制備藥物制劑的方法，包含使少于約35個(gè)碳的烯烴的液體形式或溶液或分散系與臭氧與氧的氣體混合物在低于約30℃的溫度下接觸，得到過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物；將過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物用滲透溶劑稀釋，得到所得混合物；向所得混合物加入含有螯合二價(jià)或三價(jià)金屬的染劑，得到含有染劑的混合物；和向含有染劑的混合物加入芳族氧化還原化合物。
49.治療被原蟲感染的動(dòng)物的方法，包含向被原蟲感染的動(dòng)物給以有效量的藥物制劑，該制劑包含烯烴被含氧氧化劑氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物，其中該烯烴具有少于約35個(gè)碳；滲透溶劑；染劑，含有螯合的二價(jià)或三價(jià)金屬；和芳族氧化還原化合物。
50.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴包含開(kāi)鏈不飽和烴、單環(huán)不飽和烴或二環(huán)不飽和烴。
51.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴包含開(kāi)鏈不飽和醇、單環(huán)不飽和醇或二環(huán)不飽和醇。
52.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴是含有羥基的烯烴。
53.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴是液體形式、溶液或分散系。
54.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴包含類異戊二烯。
55.權(quán)利要求54的藥物制劑，其中該類異戊二烯包含-萜品醇、香茅醇、橙花醇、植醇、紫蘇子醇、薄荷醇或法尼醇。
56.權(quán)利要求54的藥物制劑，其中該類異戊二烯包含香葉醇、香葉基香葉醇、香葉烯、citrillene、檸檬醛、蒎烯、檸檬烯或芫荽醇。
57.權(quán)利要求49的方法，其中該烯烴包含含有不揮發(fā)油、酯、脂肪酸或醚的烯烴。
58.權(quán)利要求49的方法，其中該含氧氧化劑包含單線態(tài)氧、三線態(tài)的氧、超氧化物陰離子、高碘酸鹽、羥基原子團(tuán)、過(guò)氧化物或與過(guò)渡元素鍵合的氧。
59.權(quán)利要求49的方法，其中該含氧氧化劑包含臭氧。
60.權(quán)利要求49的方法，其中該滲透溶劑是液體、膠束膜、軟化劑、等離子體或蒸汽。
61.權(quán)利要求49的方法，其中該滲透溶劑是二甲基亞砜。
62.權(quán)利要求49的方法，其中該滲透溶劑是聚乙烯吡咯烷或pH緩沖鹽水。
63.權(quán)利要求49的方法，其中該滲透溶劑是水溶液、脂肪、固醇、卵磷脂、磷脂、乙醇、丙二醇或甲磺?；淄椤?br> 64.權(quán)利要求49的方法，其中該染劑包含卟啉或玫瑰紅。
65.權(quán)利要求49的方法，其中該染劑包含葉綠酸、氯化血紅素、咕啉、texaphrin、亞甲基藍(lán)、蘇木精、曙紅、藻紅、核黃素、蒽染劑、金絲桃素、甲基膽蒽、中性紅或熒光素。
66.權(quán)利要求49的方法，其中該金屬包含鐵。
67.權(quán)利要求49的方法，其中該金屬包含銅、錳、錫、鎂或鍶。
68.權(quán)利要求49的方法，其中該芳族氧化還原化合物包含苯醌或萘醌。
69.權(quán)利要求49的方法，進(jìn)一步包含電子供體。
70.權(quán)利要求69的方法，其中該電子供體包含抗壞血酸或其藥學(xué)鹽。
71.權(quán)利要求69的方法，其中該電子供體包含等離子體、電流或倍半氧化鍺。
全文摘要
藥物制劑、它的制備方法和它的用途。藥物制劑含有烯烴、例如香葉醇被含氧氧化劑、例如臭氧氧化所得過(guò)氧化屬或反應(yīng)產(chǎn)物；滲透溶劑，例如二甲基亞砜；染劑，含有螯合金屬，例如血卟啉；和芳族氧化還原化合物，例如苯醌。藥物制劑用于治療被肉孢子蟲屬原蟲感染的馬。
文檔編號(hào)A61K31/535GK1671393SQ02808703
公開(kāi)日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2002年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月30日
發(fā)明者羅伯特·F·霍夫曼 申請(qǐng)人:羅伯特·F·霍夫曼