專利名稱：誘導(dǎo)持續(xù)免疫應(yīng)答的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及刺激和促進(jìn)持續(xù)天然免疫系統(tǒng)應(yīng)答的方法，該方法導(dǎo)致對感染因子包括病毒，細(xì)菌，真菌和寄生蟲，和其它免疫缺陷相關(guān)疾病增強(qiáng)抵抗力和抑制作用。更具體地，本發(fā)明涉及用于促進(jìn)持續(xù)增加T細(xì)胞(細(xì)胞毒T細(xì)胞)產(chǎn)生水平的間歇給藥方案。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體抵抗感染因子，包括病毒，細(xì)菌，真菌和寄生蟲。此外，免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體抵抗癌癥，以及由免疫失衡，機(jī)會致病菌感染，和自身免疫疾病引起的疾病狀態(tài)(Penney，美國專利5,980,913)。用藥物刺激免疫系統(tǒng)是預(yù)防和治療引起免疫抑制狀態(tài)的因素的主要方法。
免疫系統(tǒng)對免疫原的應(yīng)答可以由于某些疾病或病理狀態(tài)而被抑制。例如，感染了人類免疫缺陷病毒(HIV-1)的患者可以發(fā)生獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)或AIDS相關(guān)綜合征(AIDS-related complex，ARC)，并因此抑制了免疫應(yīng)答。這類患者對病理感染或惡性疾病更易感而在正常免疫系統(tǒng)將會提供足夠的保護(hù)以對抗它們。其它這樣的免疫低下個體包括患有癌癥，接受X線，外科手術(shù)，或化療治療的患者。
目前防止如HIV等病毒感染的個體發(fā)生免疫缺陷的措施通常包括給予抑制病毒DNA合成因而延緩病毒相關(guān)免疫抑制發(fā)作的化合物。對HIV感染患者的治療通常包括給予化合物例如3’疊氮-3’-脫氧胸苷(AZT)，2’，3’-雙脫氧胞苷(DDC)和2’，3’-雙脫氧肌苷(DDI)，齊多夫定(zidovudine)，地達(dá)諾新(didanosine)，扎西他賓(zalcitabine)，司他夫定(stavudine)，和奈韋拉平(viramune)。更新的抗HIV治療包括給予蛋白酶抑制劑例如，沙喹那韋(saquinovir)，nefinavir，利托那韋(ritonavir)，吲哚那韋(indinavir)和其它。細(xì)胞因子治療也用于AIDS患者的治療，研究機(jī)構(gòu)已經(jīng)證實(shí)白細(xì)胞介素-2(IL2)對HIV陽性患者CD4 T細(xì)胞亞群水平升高是有效的(Kovacs，et al.，N.Engl.JMed.，1996；3351350-1356)。也有報道詳述了IL2也能提高CD8 T細(xì)胞計數(shù)(Schmitz，et al.，Science，1999；283857-860)。不幸地是，使用IL2常常伴有明顯的毒性(Davey，etal.，JAMA，2000；284183-189)。然而，這些治療盡管具有潛在的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的作用，但其中沒有一種已被證實(shí)在AIDS的治療或預(yù)防中完全有效。此外，這些化合物中有很多引起嚴(yán)重的副作用，包括血小板計數(shù)降低，腹瀉，惡心，腎毒性，和骨髓細(xì)胞減少癥(Kempf，et al.，U.S.Patent 6,017,928；Lai，et al.，U.S.Patent 6,093,743)。在正常志愿者，HIV陽性者，和癌癥患者中用甲硫氨酸腦啡肽(met-enkephalin)進(jìn)行的多項(xiàng)臨床研究未顯示明顯毒性(Plotnikoff，et al，Clin.Immun.Immunopath.，1997)。但是，測定的血漿中甲硫氨酸腦啡肽半衰期大約為2分鐘(Bihari，et al.，Seventh Int.Coizf.OnAIDS.1991)。因此，在此領(lǐng)域?qū)π枰@種治療的患者要有刺激持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的改進(jìn)方法，這類患者包括例如免疫系統(tǒng)應(yīng)答水平降低者(例如AIDS)，或者有可能出現(xiàn)免疫系統(tǒng)應(yīng)答水平降低者(例如HIV感染患者)。
發(fā)明概述所有引用的專利，專利申請和參考文獻(xiàn)在此以其全部引入作為參考。
最近對甲硫氨酸腦啡肽的研究顯示其激活I(lǐng)L2(Wybran，et al.，from SomeImmunological Effects of Methionine Enkephalin In ManPotentialTherapeutical Use Leukocytes and Host Defense.205-212，Alan R.Liss，Inc.1986)和γ干擾素(Brown，et al.，Immunology，1986；10319-26)及IL12(Zhong，et al.，Augmentation of TNF-alpha Production，NK cell activity andIL-12 p35 mRNA Expression by Metliaonine Enkephalin，1996；17(2)182-5)基因的轉(zhuǎn)錄。AIDS患者有IL2和γ干擾素缺陷癥狀(Fauci，et al.，Science，1993；2621011-1018)。最近發(fā)現(xiàn)HIV陽性者甲硫氨酸腦啡肽缺陷(Valentine，et al.，F(xiàn)ASEB J.，1988；2(5)4518；Chao，Thesis，University of Illinois College ofPharmacy 1993)。所有上述細(xì)胞因子源于輔助性T細(xì)胞中的前激素(Plotnikoff，et al.，Clin.Immun.Immunopath.，1997；82(2)93-101)。免疫抑制，部分是細(xì)胞因子缺陷的結(jié)果(Fauci，et al.，Science，1993；2621011-1018)。
但是，基于上述本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員不會預(yù)料到本發(fā)明的活性制劑可被用于對患者產(chǎn)生持續(xù)免疫應(yīng)答有用的治療方法中，所述方法包括對需要這種治療的患者按照間歇給藥方案給予活性制劑。
本發(fā)明的基礎(chǔ)是驚奇地發(fā)現(xiàn)，有規(guī)律的甲硫氨酸腦啡肽劑量方案在患者停藥后至少1個月里對促進(jìn)免疫系統(tǒng)應(yīng)答中持續(xù)的細(xì)胞增加，包括持續(xù)的細(xì)胞水平是有效的。
本發(fā)明提供，在需要這樣治療的免疫低下患者中對誘導(dǎo)持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答有用的治療方法，其中該方法包括給予患者有效量的腦啡肽，給藥方式為單獨(dú)，聯(lián)合，或者進(jìn)一步聯(lián)合其它對增強(qiáng)免疫系統(tǒng)應(yīng)答有用的化合物，包括疫苗。在此上下文中“免疫低下”指T細(xì)胞數(shù)或功能的任何降低。
本發(fā)明也提供，在感染HIV的患者中對誘導(dǎo)持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答有用的治療方法，其中該方法包括給予HIV感染者有效量的腦啡肽，給藥方式為單獨(dú)，聯(lián)合，或者進(jìn)一步聯(lián)合其它對延緩HIV增殖或HIV相關(guān)感染發(fā)展有用的化合物，包括逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑例如3’疊氮-3’-脫氧胸苷(AZT)，2’，3’-雙脫氧胞苷(DDC)和2’，3’-雙脫氧肌苷(DDI)，齊多夫定，地達(dá)諾新，扎西他賓，司他夫定和奈韋拉平；蛋白酶抑制劑例如，沙喹那韋，nefinavir，利托那韋，吲哚那韋；細(xì)胞因子例如G-CSF，IL-11，IL-12，IL-2；和γ干擾素以及抗生素或其它用于治療或預(yù)防HIV感染者的感染的藥物。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述定義除非另有說明，這里使用的短語“活性制劑”指一組包括腦啡肽類的化合物。
除非另有說明，短語“腦啡肽”或“腦啡肽類”包括任何屬于類鴉片(opioid)肽分子一般范疇的化合物，包括在其一個末端具有下列肽結(jié)構(gòu)的化合物Tyr-Gly-Gly-Phe-R其中R是甲硫氨酸或亮氨酸。腦啡肽的例子列于表I。
表I類鴉片肽及其前體和結(jié)構(gòu)
腦啡肽類似物也屬于本發(fā)明范疇，并且在引入以做參考的下列文獻(xiàn)中有描述1994年8月28日授權(quán)Rodbard等人的美國專利4,468,383；1983年2月1日授權(quán)Pert等人的美國專利4,371,463；1981年4月14日授權(quán)Smolarsky等人的美國專利4,261,883；1981年3月3日授權(quán)Wilkinson等人的美國專利4,254,106；1980年7月22日授權(quán)Kastin等人的美國專利4,213,968；1980年4月15日授權(quán)Hudson等人的美國專利4,198,398；1978年11月28日授權(quán)Coy等人的美國專利4,127,534；1978年3月30日授權(quán)Jones，Jr.等人的美國專利4,092,304；1977年6月7日授權(quán)Jones，Jr.等人的美國專利4,028,319；J.Chang et al.，″Opiate Receptor Affnities and Behavioral Effects of EnkephalinStructure Activity Relationship of Ten Synthetic Peptide Analogues，″18 Life Sci.1473-1482(1976)；G.A.Gacel et al.，″Synthesis，Biochemical andPharmacological Properties of BUBUC，a Highly Selective and SystematicallyActive Agonist for In Vivo Studies of Delta-Opioid Receptors″，11 Peptides983-988(1990)；和B.P.Roques，″Peptidomimetics as Receptor Agonists orPeptidase InhibitorsA Structural Approach in the Field of Enkephalins，ANP andCCK″，32 Biopolymers 407-410(1992)。
如這里使用的，短語“持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答”意思是，使患者體內(nèi)與免疫系統(tǒng)相關(guān)的細(xì)胞或分子的血清水平維持在高于基線的水平，細(xì)胞包括T細(xì)胞例如CD3，CD4，CD8，CD56，CD25，CD38，分子例如白細(xì)胞介素和干擾素。
如這里使用的，短語“基線”或“基礎(chǔ)應(yīng)答水平”意思是指給予活性制劑前患者體內(nèi)與免疫系統(tǒng)相關(guān)的細(xì)胞或分子的血清水平，細(xì)胞包括T細(xì)胞例如CD3，CD4，CD8，CD56，CD25，CD38，分子例如白細(xì)胞介素和干擾素。
這里使用的短語腦啡肽的“間歇劑量方案”指腦啡肽重復(fù)給藥的起始規(guī)律，在一定時間段內(nèi)從每日給藥到每周給藥不等(或者可以在一定時間段內(nèi)給藥能促進(jìn)體內(nèi)產(chǎn)生腦啡肽的化合物)(統(tǒng)稱“起始劑量方案”)，當(dāng)這種給藥不連續(xù)時要隨后間歇一段時間。此后在一定間斷的基礎(chǔ)上給予額外的腦啡肽(或促進(jìn)體內(nèi)產(chǎn)生腦啡肽的化合物)。
間歇劑量方案實(shí)例包括，但不局限于，在12周內(nèi)每周給予腦啡肽1至5次，然后間歇4至24周。此后，在某些規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，給予加強(qiáng)劑量，最高至每周5次，持續(xù)1-4周。屬于本發(fā)明范疇的間歇劑量方案的其它例子包括4周內(nèi)每周給予腦啡肽1至5次，然后間歇4至16周。此后根據(jù)測定的持續(xù)應(yīng)答水平給予加強(qiáng)劑量，最高至每周5次，持續(xù)1至4周。也可以使用其它間歇方案。
這里使用的短語“HIV”包括HIV-1，HIV-2的所有變異體和型別，以及其它同義的逆轉(zhuǎn)錄病毒，例如人類III型T淋巴病毒(HTLV-III)和淋巴結(jié)病相關(guān)病毒(LAV-1和LAV-2)。
這里使用的短語“AIDS”指獲得性免疫缺陷綜合征，AIDS-相關(guān)綜合征(ARC)，和HIV感染個體淋巴細(xì)胞數(shù)降低。
這里使用的短語“治療或預(yù)防AIDS”包括預(yù)防或降低AIDS引起的免疫抑制，例如，通過降低患者外周血淋巴細(xì)胞中HIV水平，或者通過增加淋巴細(xì)胞數(shù)來實(shí)現(xiàn)；骨髓再造；增加HIV感染患者的存活；以及預(yù)防或降低相關(guān)的癥狀，異常和與HIV感染相關(guān)的感染，包括但不局限于對致病生物和機(jī)會致病生物和感染的易感性，貧血，血小板減少癥，和淋巴細(xì)胞減少癥。
這里使用的短語“機(jī)會致病菌感染”指在有正常免疫系統(tǒng)功能的患者體內(nèi)一般是不致病的微生物的感染。
在本發(fā)明中描述的許多肽類可以商業(yè)上獲得，但是也可以用任何傳統(tǒng)方法合成，包括但不局限于下列文獻(xiàn)發(fā)表的J.M.Stewart and J.D.Young，SolidPhase Peptide Synthesis，2nd ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.(1984)和J.Meienhofer，HormonalProteins and Peptides，Vol.2，Academic Press，NewYork，(1973)for solid phase synthesis and E.Schroder and K.Lubke，ThePeptides，Vol.1，Academic Press，New York，(1965)for solution synthesis。前述的發(fā)表物在此引入作為參考。
一般地，這些方法包括在延長的肽鏈上順序加入受保護(hù)的氨基酸(美國專利5,693,616，在此以其全部引入作為參考)。通常，將第一個氨基酸的氨基或者羧基和任何反應(yīng)性側(cè)鏈基團(tuán)加以保護(hù)。然后將受保護(hù)的氨基酸附著于惰性固體支持物上，或者應(yīng)用于溶液中，將同樣被適當(dāng)保護(hù)的按順序排列在下一個的氨基酸在利于形成酰胺鍵的條件下加入。在所有的目的氨基酸按照正確的順序連接后，去除保護(hù)基團(tuán)和任何固相支持物，得到粗制多肽。將多肽脫鹽并純化，優(yōu)選層析純化，以生產(chǎn)最終產(chǎn)物。
可以按照標(biāo)準(zhǔn)的固相方法學(xué)合成肽類，例如可以在Applied BiosystemsModel 430A peptide synthesizer(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，Calif.)上按照生產(chǎn)商的說明進(jìn)行。通過固相方法學(xué)或者在液相中合成肽或肽類似物的其它方法，是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
或者，可以用傳統(tǒng)的生物學(xué)方法生產(chǎn)肽。
發(fā)明詳述定義在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，在12周期間內(nèi)按每周一次給予患者有效量的活性制劑，然后停藥。起始劑量停藥后從4周到16周測定患者的免疫應(yīng)答(T細(xì)胞計數(shù))，并且既與基礎(chǔ)應(yīng)答水平對比也與該劑量方案結(jié)束時測定的應(yīng)答水平對比。此后，根據(jù)需要給予加強(qiáng)劑量，最高至每周5次，持續(xù)1至4周。
在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，在4周期間內(nèi)按每周1至5次給予患者有效量的活性制劑，然后停藥。起始劑量停藥后從4周到16周測定患者的免疫應(yīng)答(T細(xì)胞計數(shù))。此后，根據(jù)測定的持續(xù)應(yīng)答水平考慮給予加強(qiáng)劑量，最高至每周5次，持續(xù)1至4周。也可以使用其它間歇方案。
本發(fā)明方法的一方面用于在HIV感染患者中治療或預(yù)防AIDS，包括給予HIV感染患者有效治療或預(yù)防AIDS劑量的至少一種化合物，其選自多種活性制劑，并且是單獨(dú)給予，不同活性藥物聯(lián)合給予，或與其它對治療或預(yù)防HIV感染個體的AIDS有益的化合物聯(lián)合給予，這些化合物包括但不局限于逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，蛋白酶抑制劑，細(xì)胞因子，以及抗生素或其它用于治療或預(yù)防HIV感染患者感染的藥物或者疫苗，其中逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑包括但不局限于，3’疊氮-3’-脫氧胸苷(AZT)，2’，3’-雙脫氧胞苷(DDC)和2’，3’-雙脫氧肌苷(DDI)，齊多夫定，地達(dá)諾新，扎西他賓，司他夫定，和奈韋拉平；蛋白酶抑制劑例如沙喹那韋，nefinavir，利托那韋，吲哚那韋；細(xì)胞因子例如G-CSF，IL-11，IL-12，IL-2和紅細(xì)胞生成素。
用于治療或預(yù)防HIV感染個體的AIDS發(fā)作時，可將活性制劑按照任何合適的途徑給藥，但是優(yōu)選口服，非胃腸道給藥，通過霧化吸入，經(jīng)皮，靜脈，直腸，動脈，鼻內(nèi)，滴眼，面頰貼(buccal patch)，或者局部給藥，為含有傳統(tǒng)可藥用的載體，助劑，和賦形劑的劑量單位配制劑。這里使用的短語非胃腸道，包括皮下，粘膜內(nèi)，靜脈，動脈，或腱內(nèi)。
也可以將活性制劑置于適合藥用的賦形劑中直接向患者給藥，所述賦形劑例如，5％DMSO或10％乙醇的鹽水溶液。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在包括有效治療在內(nèi)的時間段內(nèi)多次給予活性制劑。
已知本領(lǐng)域中有大量適合持續(xù)釋放目的的可選方案并且視為包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。合適的傳送賦形劑包括但不局限于下列微囊或微球；脂質(zhì)體和其它以脂類為基礎(chǔ)的釋放系統(tǒng)；類晶體和粘性滴劑；可吸收的和/或可生物降解的機(jī)械載體；和聚合的釋放物質(zhì)，例如聚環(huán)氧乙烷/聚環(huán)氧丙烷嵌段共聚物(例如poloxamers)，聚原酸酯，交聯(lián)聚乙烯醇，聚酐，聚甲基丙烯酸酯和聚甲基丙烯酰胺水凝膠，陰離子碳水聚合物，聚乙二醇，等等。有用的傳送系統(tǒng)是本領(lǐng)域熟知的并且在例如美國專利4,937,254中有描述，在此將其全部內(nèi)容引入作為參考。
也可以將活性制劑制成液體形式(例如溶液，懸液，或乳劑)，以及可以進(jìn)行傳統(tǒng)的制藥操作例如滅菌和/或可以含有傳統(tǒng)的可藥用的助劑，例如穩(wěn)定劑，濕潤劑，乳化劑，保存劑，共溶劑，懸浮劑，粘度增強(qiáng)劑，離子強(qiáng)度和重量克分子滲透濃度調(diào)節(jié)劑以及其它除了緩沖試劑外的賦形劑?？杀挥糜谒幬飩魉唾x形劑中的合適的水溶性保存劑包括亞硫酸氫鈉，硫代硫酸鈉，抗壞血酸鹽，苯扎氯銨，氯丁醇，硫柳汞，硼酸苯汞，parabens，芐醇，苯基乙醇或抗氧化劑例如維生素E和生育酚，螯合劑例如EDTA和EGTA。一般地，這些制劑可以按重量大約0.001％至大約5％的量存在，并且優(yōu)選地，以重量大約0.01％至大約2％的量存在。
對于給藥，一般將活性制劑與一種或多種適合所需給藥方式的可藥用助劑聯(lián)合。可以將化合物與下列物質(zhì)混合乳糖，蔗糖，淀粉，鏈烷酸的纖維素酯，硬脂酸，滑石粉，硬脂酸鎂，氧化鎂，磷酸和硫磺酸的鈉鹽和鈣鹽，阿拉伯樹膠，明膠，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，和/或聚乙烯醇，并制成適于傳統(tǒng)給藥的片劑或膠囊。或者，可以將本發(fā)明的化合物溶解于鹽水，水，聚乙二醇，丙二醇，羧甲基纖維素膠體溶液，乙醇，玉米油，花生油，棉籽油，芝麻油，黃芪膠樹脂，和/或包括磷酸緩沖鹽水等各種緩沖液。其它佐劑和給藥方式是制藥領(lǐng)域熟知的。載體或稀釋液可以包括延時物質(zhì)，例如單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯，單獨(dú)或與蠟或本領(lǐng)域熟知的其它物質(zhì)一起使用。
用于誘導(dǎo)HIV感染患者持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的活性制劑的劑量方案以許多因素為基礎(chǔ)，包括年齡，體重，性別，個體的醫(yī)療狀況，嚴(yán)重程度，給藥方式，和使用的具體活性制劑。因此，劑量方案可以有很大不同，但是可以由內(nèi)科醫(yī)生使用標(biāo)準(zhǔn)方法來常規(guī)判斷。
活性制劑在10-14μg/Kg至30,000μg/Kg體重之間的劑量水平可以用于這里公開的所有方法。在間歇劑量方案中優(yōu)選的劑量水平從1μg/Kg至250μg/Kg。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在起始劑量方案期間劑量為20μg/Kg受試者體重，在該起始劑量方案之后間歇劑量變?yōu)閺?0-100μg/Kg體重。
用測定下述指標(biāo)的方法判斷劑量方案的有效性，所述指標(biāo)例如患者外周血淋巴細(xì)胞中HIV水平的降低，(病毒載量)，貧血，血小板減少癥，和淋巴細(xì)胞減少癥；CD4+，CD8+，CD3+，和CD56+細(xì)胞計數(shù)，淋巴細(xì)胞數(shù)，抗體滴度，對致病性感染和機(jī)會致病性感染的抵抗力的增加，和HIV感染患者的存活。
本發(fā)明的活性制劑也可以用更穩(wěn)定的形式給藥，例如，與聚乙二醇聯(lián)合或?yàn)槿诤系鞍祝蚱渌绢I(lǐng)域已知的形式。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)AIDS，外科手術(shù)患者和癌癥患者具有升高的皮質(zhì)醇(cortisol)水平，其導(dǎo)致對細(xì)胞因子，例如IL2和γ干擾素的產(chǎn)生進(jìn)行抑制。對細(xì)胞因子的產(chǎn)生的這種抑制促成免疫系統(tǒng)的抑制。特別是，認(rèn)為皮質(zhì)醇對IL2的基因轉(zhuǎn)錄有抑制作用，并下調(diào)細(xì)胞毒細(xì)胞和NK細(xì)胞。參見，例如K.Ogawa etal.，″Suppression of Cellular Immunity by Surgical Stress，″Surgery，127(3)329-36(March，2000)；″Suppressant Effects of Cortisol，″Goodman and Gilmans，The Pharmacological Basis of Therapeutics，Pergamon Press，New York(8th Ed.1990)。皮質(zhì)醇也使AIDS患者疲勞和衰弱。在實(shí)施例中報道的研究證明，甲硫氨酸腦啡肽的間歇劑量方案逆轉(zhuǎn)了HIV誘導(dǎo)的免疫抑制，導(dǎo)致增加了IL2水平和T細(xì)胞，并且預(yù)期能逆轉(zhuǎn)由普通途徑-皮質(zhì)醇-誘導(dǎo)的這類免疫抑制，如在AIDS，外科手術(shù)，癌癥和其它患者上見到的一樣。
參考附帶的實(shí)施例可以更好理解本發(fā)明，實(shí)施例僅意在說明的目的不應(yīng)被理解為對本發(fā)明范圍的限制。
實(shí)施例1甲硫氨酸-腦啡肽作為“治療性疫苗”的體內(nèi)給藥設(shè)計最初12周的雙盲研究，來測定甲硫氨酸-腦啡肽規(guī)律劑量方案對HIV感染患者細(xì)胞毒T細(xì)胞水平的影響。每個患者的劑量按照組別有不同(1)60μg/Kg；(2)125μg/Kg和(3)安慰劑。每周一次靜脈注射給予患者活性制劑(甲硫氨酸-腦啡肽)或者安慰劑(常規(guī)鹽水；對照組)持續(xù)12周。在8和12周時，采集每位患者的標(biāo)本以測定T細(xì)胞水平。在12周時停止注射。在停止注射后4周時(時間點(diǎn)為16周)再記錄下T細(xì)胞數(shù)的測定值。結(jié)果顯示在最后一次甲硫氨酸腦啡肽給藥的一個月后細(xì)胞毒T細(xì)胞的持續(xù)應(yīng)答水平。
表II末次N-鹽水注射的一個月后的免疫學(xué)值
CD3*P＝0.01CD4*P＝0.001CD8*P＝0.02CD56*P＝0.01CD25*P＝0.02CD38*P＝0.01(1)每立方毫米的平均細(xì)胞數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(N/8)細(xì)胞數(shù)高于(或低于)基線的患者的數(shù)量表III末次N-甲硫氨酸腦啡肽注射的一個月后的免疫學(xué)值
(1)每立方毫米的平均細(xì)胞數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤CD3*P＝0.04CD4*P＝0.01CD8*P＝0.001CD56*P＝0.001CD25*P＝0.09CD38*P＝0.05(N/12)細(xì)胞數(shù)高于基線的患者的數(shù)量結(jié)果概述發(fā)現(xiàn)與基線值相比，末次N-甲硫氨酸腦啡肽給藥(8-12周注射)的一個月后，細(xì)胞毒T細(xì)胞(包括CD3，CD4，CD8細(xì)胞)水平升高。與此明顯對比，安慰劑處理的對照組在16周研究期間同類細(xì)胞的水平進(jìn)行性降低。這些結(jié)果顯示，用甲硫氨酸腦啡肽處理增加了細(xì)胞毒T細(xì)胞(這可減少病毒載量)，并且可以認(rèn)為是間歇劑量方案治療HIV的“治療性疫苗”方法。這些持續(xù)性結(jié)果尤其驚奇的是，經(jīng)過測定，血漿中甲硫氨酸腦啡肽的半衰期大約為2分鐘。
CD3，CD4，和CD8細(xì)胞發(fā)現(xiàn)一個月前用甲硫氨酸腦啡肽治療的患者具有相對于基線而言持續(xù)的T細(xì)胞增加(平均值CD3+180，CD4+37，CD8+128)。明顯對比的是，一個月前用n-鹽水注射的患者T細(xì)胞數(shù)相對于基線值直線下降(CD3-284，CD4-79，CD8-246)。
CD56細(xì)胞與基線對比，甲硫氨酸腦啡肽組和n-鹽水注射組的自然殺傷細(xì)胞數(shù)均比基線增高。但是，甲硫氨酸腦啡肽組明顯高于n-鹽水組(80+18對137+21p＝0.03)。
CD25細(xì)胞(IL2受體)白細(xì)胞介素II受體表達(dá)在兩個組中都比基線水平增加，但甲硫氨酸腦啡肽組比n-鹽水組增加得更多(45對87個細(xì)胞)。
CD38細(xì)胞發(fā)現(xiàn)兩個組的CD38細(xì)胞數(shù)均高于基線(鹽水組的285對腦啡肽組的316)。
本研究支持Walker及其同事提出的假說，即在AIDS患者體內(nèi)維持免疫系統(tǒng)時最重要的細(xì)胞是細(xì)胞毒T細(xì)胞(CD3，CD8)(Walker，et al.，Nature，1987；328345-348)。這些細(xì)胞毒T細(xì)胞與被疫苗激活的細(xì)胞是同一種細(xì)胞(Belyakov，et al.，J.Clin.Invest.，1998；102(112)2072-2081)。CD4亞群也具有抗HIV的細(xì)胞毒作用(Hahn，et al.，Int.Rev.Immunol.，1999；18(5-6)449-464)。NK細(xì)胞也具有對抗HIV的細(xì)胞毒作用(Melder，et al.，F(xiàn)ASEB J.，1989；34)。
在本研究中，CD56細(xì)胞在腦啡肽和鹽水治療組均升高(注射8-12周)。在腦啡肽組的顯著更明顯增加可歸因于腦啡肽的激活作用，并且腦啡肽組的最終增加可歸因于NK細(xì)胞。鹽水注射8-12周也可以由于該操作的壓力而在一定程度上激活相同系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞因子和CD25的一定程度的增加。
實(shí)施例2進(jìn)展期AIDS患者的甲硫氨酸腦啡肽體內(nèi)給藥
6例CD4計數(shù)低于每微升200個細(xì)胞的進(jìn)展期AIDS患者，用甲硫氨酸腦啡肽進(jìn)行間歇治療。在起始劑量方案期間，甲硫氨酸腦啡肽的劑量按20μg/Kg受試者體重給藥，每周3次持續(xù)4周。此后，根據(jù)需要給予受試者20-100μg/Kg體重?；颊?和6在起始劑量方案后進(jìn)行了間歇治療。
方案開始時，規(guī)律起始劑量方案的一個月后，以及對患者4和6而言，額外3個月間歇治療后的結(jié)果列于表IV和V。
表IV-AIDS患者Rx方案和臨床評價患者描 Rx前狀態(tài) Met腦啡肽 治療相關(guān)治療臨床評價述Rx方案期間1.42·Kaposi肉瘤 20μg/Kg，4個月 ·Kaposi肉瘤穩(wěn)定歲，男 (皮膚)3x/wk ·無機(jī)會感染同性戀 ·卡氏肺囊蟲 (5/15/87)·AIDS-(IV，C，D)AZT(5/87)2.42·卡氏肺囊蟲 20μg/Kg，10個·兩性霉素 ·除念珠菌食管炎以外無歲，男 食管念珠菌??；3x/wk(12/85) 月 ·磺胺嘧啶 機(jī)會感染非洲人 腦的弓形體??；至100μg/Kg， ·長春新堿 ·志賀菌腸炎治愈全身性隱球菌感染 3x/wk(10/87) ·咪康唑·Kaposi肉瘤穩(wěn)定(肺，G.I，骨髓，腦膜炎，·克雷伯氏菌敗血癥治愈心包炎)·Kaposi肉瘤穩(wěn)定·AIDS-(IV，C，D)3.34·Kaposi肉瘤(皮膚淋巴 20μg/Kg， 24個 ·局部液態(tài) ·Kaposi肉瘤穩(wěn)定(一些消歲，男 結(jié)) 3x wk(10/85) 月 N2 退，一些新?lián)p傷)同性戀 ·AIDS-(IV，C，D) 至100μg/Kg， ·無機(jī)會感染3x(10/87) ·22個月時沙門菌敗血癥4.37·腦的弓形體病； 20μg/Kg， 8個月 ·磺胺嘧啶 ·7個月Rx截癱和括約肌歲，女 ·念珠菌食管炎；(皮膚)3x/wk(1/87) ·乙胺嘧啶 問題(HIV脊神經(jīng)根炎？)非洲人 ·Kaposi肉瘤 至100μg/Kg， ·不明原因死亡(細(xì)菌感·AIDS-(IV，C)(2/87)染？肺栓塞？)·無機(jī)會感染的復(fù)發(fā)5.34·腦 20μg/Kg， 4個月 ·磺胺嘧啶 ·RX 2個月后有腦萎縮癥歲，男 ·弓形體??； 3x/wk(1/07)； (退出) ·乙胺嘧啶 狀(HIV癡呆)同性戀 ·AIDS-(IV，C)至50μg/Kg， ·無機(jī)會感染的復(fù)發(fā)3x/1wk(3/87)6.31·非何杰金氏 20μg/Kg， 11個 ·皮膚損傷消失(活檢)的第歲，男 ·淋巴瘤 3x/wk(4/86)； 月 一例，但復(fù)發(fā)(7個月)且11同性戀 ·腦 至100μg/Kg， (退出) 個月時可能累及肺·弓形體病； (5/87)·無機(jī)會感染復(fù)發(fā)·分支桿菌·Kansani·Kaposi肉瘤(皮膚)·AIDS-(IV，C，D)表V-AIDS患者免疫學(xué)患者編號#淋巴細(xì)胞數(shù)/mm3開始時 1個月4個月 其它值(月數(shù)) 其它值(月數(shù))
1 578 -1130*2 700 1066*1172*540(8M)360(10M)3 1716 2080*1776*1173(24M)4 1380 1440*1620*969(7M)5 896 928*360 -6 247 324*252 112(11M)CD3/mm31 387 -881*-2 616 820 1337 410(8M)256(10M)3 1287 1560*1598*961(24M)4 730 940*790*532(7M)5 689 677 --6 205 250*164 78(11M)CD4/mm31 2968*--2 2843*49*32(8M) 7(10M)3 205 437*391*106(24M)4 4040 60*58*(7M)5 6365*50 -6 2532*13 10(11M)CD8/mm3開始時1個月4個月1 6166*2 546 767*1271*340(8M)23(10M)3 1047 1144*1154*821(24M)4 650 860*770*610(7M)5 609 594 198 -6 205 250*164 78(11M)CD4/CD8比率1 0.5 -1.0*-2 0.05 0.06*0.40 0.09*(8M) 0.02(10M)3 0.02 0.38*0.34*0.13(24M)4 0.06 0.05 0.08*0.09*(7M)5 0.10 0.11*0.26*-6 0.10 0.13*0.08 0.13*(11M)PHA(cpmx103)1 213 - -2 42828 15(8M) 11(10M)3 144 72 128 227*(24M)4 92151*187*16(7M)5 4882*60*-6 9686 37 8(11M)PHA(cpmx103) 開始時1個月4個月1 32---2 146712(8) 9(10M)3 1419*12 57*(24M)4 2125*47*-(7M)5 1318*12 --6 1719*--NK(％)1 3 -17*2 2727 6-3 2643*33*13(8M)4 5 5430*(24M)5 2 7*-16*(7M)6 1819*--(11M)IL2(單位)1 0.04 -0.1*-2 0 --0.1*(8M) 0(10M)
3 0.340.43*0 -4 0 00 0.03*(7M)5 0 00.03*-6 0.1 0- -(11M)*比基線升高結(jié)果概述實(shí)施例2中描述的研究證明，與使用相當(dāng)于(comparable)起始劑量方案的連續(xù)方案的患者相比，在某些患者中間歇劑量方案提供可比的或更好的結(jié)果。特別是，患者4和6在延續(xù)的時間內(nèi)出現(xiàn)陽性結(jié)果，無機(jī)會感染的復(fù)發(fā)?；颊?在延續(xù)的時間內(nèi)皮膚損傷消失。變化包括肉眼可見的某些腫瘤體積的縮小，以及腫瘤顏色退成白色。
患者4被證實(shí)增加了淋巴細(xì)胞，CD3，CD4，和CD8的計數(shù)；患者6與基線相比增加了淋巴細(xì)胞數(shù)。主要的免疫學(xué)效應(yīng)是T細(xì)胞亞群(CD3，CD4，和CD8)增加以及與基因轉(zhuǎn)錄的激活相伴的母細(xì)胞化。
因此，此臨床數(shù)據(jù)證明，甲硫氨酸腦啡肽的間歇劑量治療可以增加進(jìn)展期AIDS患者T細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄并縮小或穩(wěn)定Kaposis肉瘤。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以看出活性制劑和本發(fā)明的方法可以在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下進(jìn)一步修改，并且不被前述的實(shí)施例或優(yōu)選實(shí)施方案所限制。此公開的內(nèi)容意欲包括在其所屬領(lǐng)域總體遵循本發(fā)明原則的所有本發(fā)明的變體，應(yīng)用，或改變。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)免疫低下個體持續(xù)增加T細(xì)胞產(chǎn)生水平的方法，其中按照間歇給藥方案給予腦啡肽。
2.一種治療免疫低下患者的方法，其包括在起始劑量方案中單獨(dú)給予或者與其它治療聯(lián)合給予腦啡肽，并根據(jù)維持持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的需要而定期給予腦啡肽加強(qiáng)劑量。
3.權(quán)利要求1或2的治療方法，其中其它治療包括疫苗，細(xì)胞因子，抗病毒，抗生素，抗真菌，抗寄生蟲和抗腫瘤治療。
4.權(quán)利要求2的方法，其中起始劑量方案是在4-12周期間每周給藥1-5次。
5.權(quán)利要求2的方法，其中起始劑量方案期間腦啡肽的劑量是按患者體重10-14-30,000μg/Kg。
6.權(quán)利要求2的方法，其中起始劑量方案期間腦啡肽的劑量是按患者體重1至250μg/Kg。
7.權(quán)利要求2的方法，其中起始劑量方案期間腦啡肽的劑量是按患者體重20μg/Kg。
8.權(quán)利要求2的方法，其中是否需要定期加強(qiáng)劑量，是通過起始劑量方案停藥的4周到16周后測定患者的免疫應(yīng)答(T細(xì)胞計數(shù))，并且將免疫應(yīng)答既與基線應(yīng)答水平對比也與該劑量方案結(jié)束時測定的應(yīng)答水平對比來判斷。
9.權(quán)利要求2的方法，其中按照需要給予定期加強(qiáng)劑量，最高至每周5次持續(xù)1-4周。
10.權(quán)利要求2的方法，其中起始劑量方案后腦啡肽的加強(qiáng)劑量為20-100μg/Kg體重。
11.按照間歇劑量方案給予腦啡肽而治療癌癥的方法。
12.治療癌癥的方法，其包括在起始劑量方案中單獨(dú)或者與其它治療聯(lián)合給予腦啡肽，并根據(jù)維持持續(xù)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的需要給予定期加強(qiáng)劑量的腦啡肽。
13.治療受試者皮質(zhì)醇誘導(dǎo)的免疫抑制的方法，其通過周腦啡肽起始劑量方案然后再給予腦啡肽定期加強(qiáng)劑量來治療該受試者。
14.抑制受試者經(jīng)皮質(zhì)醇誘導(dǎo)的對細(xì)胞因子的產(chǎn)生進(jìn)行抑制的方法，其通過用腦啡肽起始劑量方案，然后再給予腦啡肽定期加強(qiáng)劑量來治療該受試者。
15.抑制受試者經(jīng)皮質(zhì)醇誘導(dǎo)的IL2基因轉(zhuǎn)錄降低的方法，其通過用腦啡肽起始劑量方案，然后再給予腦啡肽定期加強(qiáng)劑量來治療該受試者。
16.抑制受試者經(jīng)皮質(zhì)醇誘導(dǎo)的細(xì)胞毒細(xì)胞或NK淋巴細(xì)胞下調(diào)的方法，其通過用腦啡肽起始劑量方案，然后再給予腦啡肽定期加強(qiáng)劑量來治療該受試者。
全文摘要
促進(jìn)免疫低下個體持續(xù)增加T細(xì)胞產(chǎn)生水平的方法，其中按照間歇給藥方案給予腦啡肽。特別是，該方法包括對免疫低下患者的治療，其包括或者單獨(dú)或者與其它治療聯(lián)合給予起始劑量的腦啡肽，并根據(jù)維持持續(xù)免疫系統(tǒng)反應(yīng)的需要而定期給予加強(qiáng)劑量的腦啡肽。
文檔編號A61K38/33GK1541103SQ02814327
公開日2004年10月27日 申請日期2002年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月16日
發(fā)明者尼古拉斯·P·普洛特尼科夫, 尼古拉斯 P 普洛特尼科夫 申請人:尼古拉斯·P·普洛特尼科夫, 尼古拉斯 P 普洛特尼科夫