專利名稱：胸腺素α1肽的給藥方法
背景技術(shù)：
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及胸腺素α1肽的給藥方法。
2、背景技術(shù)描述胸腺素α1(有時(shí)寫作TA1)是一個(gè)具有免疫調(diào)節(jié)功能的28個(gè)氨基酸的胸腺肽，與最初從小牛胸腺的胸腺素分部5分離的天然產(chǎn)物類似。其生物學(xué)功效包括增進(jìn)T淋巴細(xì)胞功能并包括調(diào)控白細(xì)胞介素-2(IL-2)、刺激干擾素-γ產(chǎn)生、誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性，以及刺激胸腺生成作用。胸腺素α1還顯示出上調(diào)MHC族I表達(dá)的作用。
早前已提示過(guò)胸腺素α1例如通過(guò)每周2次皮下注射在某些癌癥、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV等治療中的用途。在本領(lǐng)域中一直需要改進(jìn)胸腺素α1給藥方法。
發(fā)明概述按照本發(fā)明，在需要免疫刺激的患者中給予胸腺素α1(TA1)肽的方法，包括給予患者該TA1肽以在患者至少大約6小時(shí)的治療周期中基本上連續(xù)地保持該TA1肽的免疫刺激有效量。
發(fā)明詳述本發(fā)明是基于這樣的發(fā)現(xiàn)，在治療周期中在患者的循環(huán)系統(tǒng)中保持免疫刺激量的TA1肽對(duì)TA1肽的免疫刺激效應(yīng)提供了實(shí)質(zhì)上的改善。
本發(fā)明可應(yīng)用在包括天然產(chǎn)生的TA1和合成TA1以及含有天然產(chǎn)生的TA1的氨基酸序列、與其實(shí)質(zhì)上相同的氨基酸序列、或其簡(jiǎn)并的序列類型的重組TA1，以及含有取代的、缺失的、延長(zhǎng)的、置換的、和其他修飾的序列的類似物，這些類似物具有與TA1實(shí)質(zhì)上相同的生物活性，例如具有與TA1足夠的氨基酸同源性的TA1衍生肽，以至于其以與TA1具有實(shí)質(zhì)上相同活性的實(shí)質(zhì)上相同的方式發(fā)揮作用。
由于皮下注射的TA1的血漿半衰期僅約2小時(shí)，按照一個(gè)實(shí)施方案，將例如TA1的TA1肽給藥于需要免疫刺激的患者，以在基本上較長(zhǎng)的治療周期中在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。盡管按照本發(fā)明預(yù)期更長(zhǎng)的治療周期，但是本發(fā)明的實(shí)施方案包括在至少6小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)或更長(zhǎng)的治療周期中在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。在其它實(shí)施方案中，治療周期至少大約一天，甚至延續(xù)幾天，例如，一周或更長(zhǎng)。然而，預(yù)期上述在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫有效量的TA1肽的治療可以通過(guò)相同或不同的持續(xù)時(shí)間的非治療期來(lái)分隔。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，在治療期間將TA1肽連續(xù)地注入患者體內(nèi)，例如，通過(guò)靜脈內(nèi)注入，以在患者循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。該注入可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)姆绞絹?lái)實(shí)施，例如通過(guò)微型真空泵。
或者，可以維持TA1肽的注射制度以在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。適當(dāng)?shù)淖⑸渲贫瓤梢园?小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)等注射，以在治療期間在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的胸腺素α1肽。
雖然預(yù)期在連續(xù)地注入TA1肽的過(guò)程中，給藥將是對(duì)于一個(gè)基本上較長(zhǎng)的持續(xù)時(shí)間，根據(jù)一個(gè)實(shí)施方式，該連續(xù)的TA1肽的注入是對(duì)于至少大約1小時(shí)的治療周期。更優(yōu)選的是，連續(xù)的注入是對(duì)于較長(zhǎng)的周期來(lái)實(shí)施的，例如至少大約6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)或更長(zhǎng)的周期。在其它實(shí)施方案中，連續(xù)的注入是至少大約一天，并且甚至是例如一周的數(shù)天或更長(zhǎng)。
通過(guò)給予患者在大約0.0001-0.1mg/小時(shí)/公斤體重的速率范圍內(nèi)的TA1肽可以在患者的循環(huán)系統(tǒng)中基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。優(yōu)選的給藥速率范圍是大約0.0003-0.03mg/小時(shí)/公斤體重。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，TA1肽存在于一藥學(xué)上可接受的液體載體中，例如注射用水、生理鹽水或類似的液體中。
本發(fā)明可以應(yīng)用于任何需要免疫刺激的患者的治療，包括癌癥患者、HIV患者、以及各種類型肝炎患者，包括乙型肝炎和丙型肝炎。例如，本發(fā)明在癌癥患者后續(xù)的化療中可以用于促進(jìn)骨髓再生。對(duì)于在化學(xué)免疫治療中用于增加黑素瘤和肝細(xì)胞癌(HCC)患者的生存期，以及在肺癌患者中降低血液毒性，本發(fā)明增加TA1特別有用。
在下面的實(shí)施例中，并不打算限制，在一個(gè)具有使用外科手術(shù)灌輸?shù)臐B透微型真空泵的癌癥治療模型中評(píng)價(jià)了TA1的連續(xù)注入，該模型以一恒定的流速輸送液體5天。給藥于大鼠5-氟尿嘧啶(5-FU)以引起免疫抑制，然后8天后(使用5-FU后白細(xì)胞計(jì)數(shù)的最低點(diǎn))用注射的或注入的TA1治療。每組8只大鼠，治療分組是對(duì)照(微型真空泵使用鹽水)；低劑量TA1(0.2mg/kgsc注射；空微型真空泵)；高劑量TA1(3.5mg/kg sc注射；空微型真空泵)；以及高劑量注入的TA1(3.5mg/kg用微型真空泵注入)。在基線和5-FU處理8天后(TA1治療的1天)，以及TA1治療的5天、12天、20天和27天后測(cè)定免疫參數(shù)。
實(shí)施例110周齡大鼠，重250-300g，給予100mg/kg 5-氟尿嘧啶(5-FU)進(jìn)行免疫抑制。
5-FU處理8天后，將大鼠隨機(jī)分入下面的組(n＝8)對(duì)照(微型真空泵使用鹽水)低劑量TA1，0.2mg/kg s.c.注射；(用空微型真空泵)高劑量TA1，3.5mg/kg s.c.注射；(用空微型真空泵)連續(xù)注入TA1，通過(guò)微型真空泵以3.5mg/kg/5天提供在基線和5-FU處理8天后(TA1治療的1天)，以及TA1治療的5天、12天、20天和27天后測(cè)定免疫參數(shù)。
評(píng)價(jià)包括NK活性(暴露于PBMC 4小時(shí)后從YAC-1細(xì)胞中釋放的LDH)、總白細(xì)胞數(shù)(在通過(guò)單克隆抗體進(jìn)行特異性檢查后，通過(guò)身體的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)參數(shù)來(lái)判斷)、總淋巴細(xì)胞數(shù)(流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD3+)、以及有活性的淋巴細(xì)胞(流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD25+CD3+)。
在基線的NK活性為42±5％，而5-FU處理后下降至9±2％。低劑量的TA1在12天后導(dǎo)致NK活性的明顯恢復(fù)，而高劑量的TA1使NK活性僅在5天中就獲得了明顯恢復(fù)。然而，連續(xù)注入TA1在5天時(shí)能雙倍該效應(yīng)，達(dá)到32±4％(相對(duì)于高劑量注射組的16±2％，低劑量注射組的12±3％和對(duì)照組的11±1％)。只有通過(guò)連續(xù)注入TA1治療的動(dòng)物的NK活性恢復(fù)到基線水平。
由形態(tài)學(xué)測(cè)定的總白細(xì)胞計(jì)數(shù)，在用5-FU處理后從14,590±2,071細(xì)胞/mm3下降至2,597±582細(xì)胞/mm3。與未治療的動(dòng)物相比，采用注射的低或高劑量TA1治療組在恢復(fù)上傾向于較快的增加。而連續(xù)注入TA1的組僅在5天后就統(tǒng)計(jì)上明顯地并且完全地恢復(fù)至基線水平。
5-FU處理后有活性的淋巴細(xì)胞(CD3+CD25+)沒(méi)有明顯降低(從65±21細(xì)胞/mm3至37±10細(xì)胞/mm3)，然而，在高劑量TA1治療12和20天后，有活性的淋巴細(xì)胞明顯地增加(分別為297±136細(xì)胞/mm3和321±75對(duì)166±70和212±77細(xì)胞/mm3)。由連續(xù)注入提供的TA1導(dǎo)致有活性的淋巴細(xì)胞更多的增加，達(dá)到422±105和446±73細(xì)胞/mm3。
實(shí)施例210周齡大鼠，重250-300g，給予100μg/kg 5-氟尿嘧啶(5-FU)進(jìn)行免疫抑制。
5-FU處理8天后，將大鼠隨機(jī)分入下面的組(n＝15)對(duì)照(微型真空泵使用鹽水)高劑量TA1，3.5mg/kg s.c.注射；(用空微型真空泵)連續(xù)注入TA1，通過(guò)微型真空泵以3.5mg/kg/5天提供在基線和5-FU處理8天后(TA1治療的1天)，以及TA1治療的5天和14后測(cè)定免疫參數(shù)。
評(píng)價(jià)包括總白細(xì)胞數(shù)(在通過(guò)單克隆抗體進(jìn)行特異性檢查后，通過(guò)身體的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)參數(shù)來(lái)判斷)、粒細(xì)胞(用FITC抗大鼠粒細(xì)胞HIS-48進(jìn)行流式細(xì)胞測(cè)定)、總淋巴細(xì)胞數(shù)(流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD3+)、輔助性T淋巴細(xì)胞(流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD4+)、有活性的淋巴細(xì)胞(流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD25+CD3+)和血漿中的細(xì)胞因子表達(dá)(通過(guò)ELISA測(cè)定IL-2和IFN-γ)。
在實(shí)施例1中測(cè)定了與皮下注射相比通過(guò)連續(xù)注入提供的TA1對(duì)于白細(xì)胞總數(shù)有明顯影響后，人們對(duì)于測(cè)定哪種類型的白細(xì)胞帶來(lái)了這種增長(zhǎng)感興趣。顯示出通過(guò)連續(xù)注入提供的TA1影響最明顯的白細(xì)胞種類是粒細(xì)胞。在5-FU作用后，粒細(xì)胞數(shù)從4,485±1,116降至1,249±432。用TA1治療后導(dǎo)致5天內(nèi)粒細(xì)胞數(shù)增至14,652±2,463(與注射TA1的9,924±3,218和無(wú)TA1的6,954±1,519比較)，并且這個(gè)數(shù)目在14天后仍然是最高的。
有趣的是，在該研究中有一只動(dòng)物既通過(guò)注射(3.5mg/kg)又通過(guò)連續(xù)注入(另外的3.5mg/kg)提供TA1。這只動(dòng)物不僅健康和精力旺盛，沒(méi)有明顯的不利的反應(yīng)，而且TA1對(duì)測(cè)定的免疫參數(shù)的影響甚至比其他的那些動(dòng)物更大。對(duì)于粒細(xì)胞，與其他采用注入方式治療的動(dòng)物的平均14,652±2,463相比，這只研究的動(dòng)物在5天后具有非常高的19,376細(xì)胞/mm3的水平。
5-FU處理后，總淋巴細(xì)胞數(shù)(CD3+)顯著下降(從10,904±1,973細(xì)胞/mm3降至1,740±560)。用TA1治療使得總淋巴細(xì)胞數(shù)恢復(fù)至基線水平，這發(fā)生在用連續(xù)注入方式提供TA1后僅5天，而用注射方式提供TA1則直至14天都未見(jiàn)這種恢復(fù)。
通過(guò)注射和注入二種方式提供TA1的那只動(dòng)物具有與其他動(dòng)物差不多的淋巴細(xì)胞水平(與平均的9,644±961細(xì)胞/mm3相比，其為9,765細(xì)胞/mm3)，但是在這些淋巴細(xì)胞中有活性的淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)大大增多(從通過(guò)注入方式提供TA1的動(dòng)物中有活性的淋巴細(xì)胞數(shù)428±89，或淋巴細(xì)胞的4％，增至通過(guò)以高劑量注射接著注入TA1的動(dòng)物中有活性的淋巴細(xì)胞數(shù)為976，或淋巴細(xì)胞的10％)。
用5-FU處理后輔助性T淋巴細(xì)胞(CD3+CD4+)也降低，從5,411±1,084細(xì)胞/mm3降至1,710±449細(xì)胞/mm3。不用TA1治療的實(shí)驗(yàn)這個(gè)降低的T細(xì)胞水平14天中沒(méi)有增加。在粒細(xì)胞測(cè)定中，對(duì)于細(xì)胞數(shù)目恢復(fù)的效果，以連續(xù)注入方式提供TA1優(yōu)于注射方式，與粒細(xì)胞測(cè)定中所見(jiàn)到的結(jié)果相反，用這兩種輸送方式提供TA1都足以將輔助性T細(xì)胞的水平恢復(fù)至基線。
由于通過(guò)注射或通過(guò)連續(xù)注入提供TA1都可導(dǎo)致CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞增多，人們對(duì)于測(cè)定這種增多是歸于輔助性T細(xì)胞的Th1還是Th2種類影響感興趣。先前在體外和體內(nèi)的數(shù)據(jù)已證明TA1增加T細(xì)胞的Th1種類，并且在本研究中也觀察到相同的結(jié)果。通過(guò)連續(xù)注入的方式提供TA1比通過(guò)皮下注射方式提供TA1導(dǎo)致在血漿水平的Th1細(xì)胞因子IL-2更多增加(在連續(xù)注入TA1后14天為42±7pg/ml，與之相比，對(duì)于采用注射的TA1為21±16pg/ml，而對(duì)照動(dòng)物為10±16pg/ml)。
用TA1治療導(dǎo)致Th1細(xì)胞因子IL-2的增加，并且TA1可使另一Th1細(xì)胞因子IFN-γ增加。雖然其水平較低，治療后5天，皮下注射TA1導(dǎo)致較高的血漿水平的IFN-γ。在用連續(xù)注入提供TA1治療動(dòng)物14天時(shí)，具有最高的血漿水平的IFN-γ(14±5pg/ml，與之相比，對(duì)于采用注射的TA1組為10±1pg/ml，而對(duì)照組為8±8pg/ml)。
接受注射和連續(xù)注入TA1的動(dòng)物具有更高的2種測(cè)定的Th1細(xì)胞因子，特別是IFN-γ，治療14天后為45pg/ml，與之相比，其他動(dòng)物為14±5pg/ml。結(jié)論● 在循環(huán)系統(tǒng)中維持恒定水平的TA1數(shù)天可增加測(cè)定的免疫效應(yīng)。
● 這種劑量制度在粒細(xì)胞數(shù)上導(dǎo)致未預(yù)料到的正效果，并且在注射TA1中在單核細(xì)胞中觀察到正效果。
● 未觀察到不利事件，甚至在比常規(guī)用量高15倍的TA1劑量下使用也未觀察到不利事件(并且在一只動(dòng)物中以超過(guò)常規(guī)用量的30倍劑量使用)。
權(quán)利要求
1.給藥于需要免疫刺激的患者胸腺素α1肽的方法，包括給予所述患者所述胸腺素α1肽，以在至少約6小時(shí)的治療周期中基本上連續(xù)地維持患者體內(nèi)免疫刺激有效量的TA1肽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療周期為至少約8小時(shí)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療周期為至少約10小時(shí)。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療周期為至少約12小時(shí)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療周期為至少約1天。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療周期包括數(shù)天。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述胸腺素α1肽為TA1。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述TA1肽存在于藥學(xué)上可接受的液體載體中，并且在所述治療周期中基本上連續(xù)地注入所述患者體內(nèi)。
9.權(quán)利要求8所述的方法，其中所述治療周期為至少約8小時(shí)。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療周期為至少約10小時(shí)。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療周期為至少約12小時(shí)。
12.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療周期為至少約1天。
13.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療周期包括數(shù)天。
14.權(quán)利要求8的方法，其中所述胸腺素α1肽為TA1。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述TA1以約0.0001-0.1mg/小時(shí)/公斤體重的速率范圍給藥于所述患者。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述范圍為約0.0003-0.03mg/小時(shí)/公斤體重。
17.給藥于需要免疫刺激的患者胸腺素α1肽的方法，包括在至少約1小時(shí)的周期中在所述患者體內(nèi)基本上連續(xù)地注入免疫刺激有效量的所述胸腺素α1肽。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述胸腺素α1肽為TA1，并且在至少約6小時(shí)的周期中向所述患者體內(nèi)連續(xù)注入所述TA1。
19.權(quán)利要求17的方法，其中在向所述患者體內(nèi)連續(xù)注入所述TA1至少約1天。
20.權(quán)利要求17的方法，其中向所述患者體內(nèi)連續(xù)注入所述TA1數(shù)天。
全文摘要
給予需要免疫刺激的患者胸腺素α1(TA1)肽以在患者體內(nèi)基本上連續(xù)地維持免疫刺激有效量的TA1肽。該給藥方法可以是通過(guò)連續(xù)注入。
文檔編號(hào)A61P37/04GK1582163SQ02821871
公開(kāi)日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2002年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月1日
發(fā)明者阿爾佛雷德·R·魯?shù)婪? 辛西婭·W·塔特希爾 申請(qǐng)人:賽克隆制藥公司