專利名稱：作為黑素皮質素受體調節(jié)劑的新的1，2，4－噻二唑鎓衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供新的1，2，4-噻二唑-2-鎓衍生物，該類衍生物用于治療由黑素皮質素受體介導的疾病。更具體地講，本發(fā)明的化合物用于治療代謝性疾病、CNS病和皮膚病，例如肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病、X綜合征、糖尿病性視網膜病、急性神經變性性疾病、慢性神經變性性疾病、神經叢病、男性勃起功能障礙、干眼病、痤瘡、皮膚干燥、皮膚老化、脂溢性皮炎、酒渣鼻、耳垢過量、瞼板腺炎、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮脂溢性皮炎、化膿性汗腺炎(hiradenitis suppurativa)、眼部紅斑痤瘡和汗腺炎。
背景技術：
黑素皮質素是由阿片促黑激素皮質素原(POMC)產生的神經肽，它最廣泛地表達于下丘腦弓狀核、垂體葉和腦干的孤束核中[Gantz，I.等，Molecular Cloning，Expression，and Gene Localization of a FourthMelanocortin Receptor，J.Biolog.Chem.，1993，268，15174-15179.]這類肽包括ACTH、α-MSH、β-MSH、γ1-3-MSH和合成類似物NDP-αMSH(Wikberg，J E S，Melanocortin receptorsnew opportunities indrug discovery，Exp.Opin.Ther.Patents，2000，11(1)，61-76)。
這些肽與五種類型的黑素皮質素受體(MC1-MC5)相結合，這些受體是全都正調節(jié)腺苷酸環(huán)化酶的G-蛋白偶合受體。MC4和MC5受體廣泛分布于大腦和脊髓中，而MC3受體主要存在于下丘腦中。[Gantz，I.等，同上]所述MC4受體被αMSH選擇性地激活，并且可在Neuro 2A細胞中誘發(fā)軸突分枝。(Adan R.A.H.等.，Molecular BrianResearch，1996，36，第37-44頁；Mounjoy，K.G.，Mortud，M.T.，Low，M.J.，Simerly，R.B.和Cone，R.D.，Mol.Endocrinol.，1994，8，第1298-1308頁)。ACHT是比αMSH效果更差的MC4受體的激活劑(Adan，R.A.H.等，Cone，R.D.，Burbach，J.P.H.和Gispen，W.H.，mol.Pharmacol.，1994，46，第1182-1190頁)。MC5受體按如下強度順序被激活NDP≈α-MSH＞ACHT(1-24)≥αMSH ACHT(1-39)＝βMSH＞＞γMSH(The Melanocortin Receptors，Cone，R.D.，Editor，HumanPress Inc.，Totowa，N.J.，2000，Chen，W.，第449-472頁)。
在所有動物中，對大鼠坐骨神經擠壓模型的研究已經表明，α-MSH能增加軸突分枝，且就所述ACTH衍生的肽的最大效果而言，它顯著地促進神經未梢分支、增大終板面積和周長。[Bijlsma，W.A.等，The Enhanced Recovery of Sensorimotor Function in Rats is Relatedto the Melantropic Moiety of ACTH/MSH Neuropeptides，Eur.JPharmacol，1983，92，231-236；Van der Neut.R.，等，Stimulation byMelanocortins of Neurite Outgrowth from Spinal and Sensory Neurons InVitro，Peptides，1992，13，1109-1115；Van Der Zee，C.E.E.M.，等，α-MSH和Org 2766 in Peripheral Nerve Regeneration；Different Route ofDelivery(外周神經再生中的α-MSH和Org 2766；傳遞的不同途徑)，Eur.J.Pharmacol.，1988，147，351-357；Strand，F(xiàn).L.，等，Melanocortinsas Factors in Somatic Neuromuscular Growth and Regrowth，Pharmac.Ther.，1994，62，1-27]。此外，通過應用α-MSH和其它黑素皮質素可縮短神經損傷后運動功能的恢復[Strand，F(xiàn).L.，等，同上]。
通過基因靶向使小鼠MC4受體失活而使小鼠變得肥胖，這表明所述MC4受體涉及到食物攝取。[Huszar，D.，等，Targeted Disruption ofthe Melanocortin-4 Receptor Results in Mice，Cell，1997，88，131-141]各種MC4肽激動劑抑制刺小鼠(agouti mice)的食物攝取行為的報告證實了這一點。[Fan，W.等，Role of Melanocortingenic Neurons in Feedingand the Agouti Obesity Syndrome，Nature，1997，385，165-168]。α-MSH誘發(fā)大鼠的梳理行為，但其意義不明確并且它可能不通過MC4受體的調節(jié)[Adan，R.A.H.等。Differential Effects of Melanocortin Peptideson Neural Melanocortin Receptors，Molecular Pharmacology，1994，46，1182-1190]。
現(xiàn)也清楚黑素皮質素α-MSH和ACTH分別具有刺激色素沉著和腎上腺糖皮質激素分泌的能力。黑素皮質素(尤其是αMSH)調節(jié)皮脂腺活性(一種具有全泌性分泌類型的外泌性腺體)的作用最初見于大鼠中。更具體地講，所述研究表明，垂體的中葉(它產生POMC肽)的去除導致皮脂生成量減少，但用αMSH進行替代療法后能完全恢復至正常水平(Thody，A.J.和Shuster，Nature，237，346-347，1972)。在全部垂體切除術后的大鼠的研究中，用αMSH治療導致皮脂生成量增加，盡管只在用αMSH和睪酮聯(lián)合治療后才能達到皮脂生成的完全恢復(Thody，A.J.，Shuster，S.，J.Endocr.64，503-510，1975；Ebling，F(xiàn).J.，Ebling，E.，Randall，V和Skinner，J.，J.Endocr.66，407-412，1975)。對去除MC5受體的剔除小鼠的觀察發(fā)現(xiàn)，由于皮脂生成的減少，其在厭水性和熱調節(jié)試驗上表現(xiàn)出嚴重的缺陷(Chen，W.Kelly，M.A.，Opitz-Araya，X.，Thomas，R.E.，Low，M.J.和Cone，R.，Cell，91，788-798，1997)。
已知MC5受體表達于人體皮脂腺中，并可能與人體皮脂合成的調節(jié)有關。人MC5-R已被克隆和鑒定(Chhajlani，V.，Muceniece，R.，Wikberg，JES.，Biochem.Biophys.Res.Commun.195，866-873，1993)。而且，MC5-R m RNA在人體皮脂腺的存在已通過RT-PCR證明，并且通過免疫組織化學和蛋白印跡分析已檢測出所述蛋白(Thiboutot，D.，Sivarajah，Gililand，K.，Cong，Z.和Clawson，G.，J.Invest.Dermatol.115(4)，614-619，2000)。
人體皮脂的組成不同于其它哺乳動物。人體皮脂中主要的脂類是甘油三酯、蠟酯和角鯊烯(Greene，R.S.，Downing，D.T.，Poci，P.E.，Strauss，J.S.，JID 54，240-247，1970)。例如，除水獺和海貍外，許多哺乳動物中都沒有發(fā)現(xiàn)角鯊烯。人體皮脂的主要成份甘油三酯極少出現(xiàn)在其它動物種類中，且在許多動物(例如猩猩)中完全不存在(Thody，A.J.，Shuster，S.，Physiolog.Rev.69，383-415，1989)。而且，黑素皮質素對細胞的作用根據(jù)種類不同而不同。例如，αMSH(EC50＝3.7nM)和ACTH(EC50＝16.4nM)都是兔子脂肪細胞的有效脂解劑，而在大鼠中只有ACTH(EC50＝1.34nM)具有有效的脂解活性(Ramachadran，J.，Lee，V.，428，339-346，1987；Richter，W.O.，Schwandt，P.，Neuropeptides 9，59-74，1987)。盡管對嚙齒類動物和兔子有脂解活性，但ACTH對分離出的人體和非人類靈長目動物的脂肪細胞的脂解卻效果甚微，即使?jié)舛雀哌_1μM也是如此(Ng，T.B.ComparativeBiochem.97，441-446，1990)。因此，確定黑素皮質素及其受體在動物皮脂模型系統(tǒng)中的作用并非必然地預見到其對人體皮脂調節(jié)的作用。
最近，Basu等在WIPO公布號WO99/55679中公開了異喹啉衍生物(小分子非肽化合物)，它們對MC1和MC4受體表現(xiàn)出低微摩爾的親和力，能減少由花生四烯酸誘發(fā)的皮炎并能減少體重和食物攝取。
Nargund等在WIPO公布號WO99/64002中公開了作為黑素皮質素激動劑的螺哌啶衍生物，它們可用于治療諸如肥胖癥、糖尿病和性功能障礙的疾病和病癥。
因此，目前存在一種對黑素皮質素受體，更具體地講，對黑素皮質素-3、黑素皮質素-4和/或黑素皮質素-5受體的小分子調節(jié)劑的需求。
發(fā)明概要本發(fā)明涉及通式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽，
其中R1選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基，其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫、烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；R4選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；X選自溴、氯、碘、乙酸根、苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根和甲苯磺酸根；前提是當R1為苯基、氯代苯基或芐基，R2為苯基或苯并噻吩基和R4為苯基或芳烷基時，則R3選自烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；另外的前提是，當R1為芐基或甲基苯基，R2為苯基或甲基苯基和R4為甲基苯基或4-甲氧基苯基時，則R3選自烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基與連接點離開至少一個碳原子；另外的前提是，當R1為苯基，R2為苯基和R4為苯基時，則R3選自C3-8烷基(即不是甲基或乙基)、鏈烯基和炔基；優(yōu)選R3選自鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子。
本發(fā)明還涉及一種治療由黑素皮質素受體介導的疾病的方法，該方法包括給予有此需要的主體治療有效量的式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽 其中R1選自烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或者多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫、烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；R4選自氫、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；X-選自溴、氯、碘、乙酸根、苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根和甲苯磺酸根。
本發(fā)明的示例為一種藥用組合物，它包括藥學上可接受的載體和任何上述化合物。本發(fā)明的一個示例為一種藥用組合物，它通過使上述任何化合物與藥學上可接受的載體混合制備。本發(fā)明的示例為一種制備藥用組合物的方法，它包括使上述任何化合物與藥學上可接受的載體混合。
本發(fā)明的示例性說明為在有此需要的患者中治療由黑素皮質素受體誘發(fā)的疾病的方法，該方法包括給予患者治療有效量的上述任何化合物或藥用組合物。
本發(fā)明的一個實施方案是本發(fā)明所述的任何化合物在治療選自代謝性疾病、CNS病和皮膚病的疾病中的用途。
本發(fā)明的一個實例是在有此需要的患者中治療選自以下疾病的方法肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病、X綜合征、糖尿病性視網膜病、脊髓損傷、神經損傷、急性神經變性性疾病、慢性神經變性性疾病、神經叢病、男性勃起功能障礙、干眼病、痤瘡、皮膚干燥、皮膚老化、脂溢性皮炎、酒渣鼻、耳垢過量、瞼板腺炎、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮脂溢性皮炎、化膿性汗腺炎、眼部紅斑痤瘡和汗腺炎，該方法包括給予所述患者治療有效量的上述任何化合物或藥用組合物。
本發(fā)明的另一實例是本文所述的任何化合物在制備用于在有此需要的患者中治療下述病癥的藥物中的用途(a)肥胖癥，(b)口服葡萄糖耐受性受損，(c)血糖水平升高，(d)II型糖尿病，(e)X綜合征，(f)糖尿病性視網膜病，(g)急性神經變性性疾病，(h)慢性神經變性性疾病，(i)神經叢病，(j)男性勃起功能障礙，(k)干眼病，(l)痤瘡，(m)皮膚干燥，(n)皮膚老化，(o)脂溢性皮炎，(p)酒渣鼻，(q)耳垢過量，(r)瞼板腺炎，(s)假毛囊炎，(t)酵母菌感染，(u)頭皮脂溢性皮炎，(v)化膿性汗腺炎，(w)眼部紅斑痤瘡或(x)汗腺炎。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于治療由黑素皮質素受體介導的疾病的新的取代1，2，4-噻二唑-2-鎓衍生物。更具體地講，本發(fā)明涉及用作黑素皮質素受體激動劑或拮抗劑的式(I)化合物 其中X、R1、R2、R3和R4如本文中所定義。
本發(fā)明還涉及一種治療疾病的方法，該疾病由黑素皮質素受體介導，優(yōu)選該疾病對黑素皮質素受體的激動作用或拮抗作用的治療敏感。所述黑素皮質素受體優(yōu)選選自黑素皮質素-3、黑素皮質素-4和黑素皮質素-5受體，所述黑素皮質素受體更優(yōu)選為黑素皮質素-4或黑素皮質素-5。
優(yōu)選R1選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代。更優(yōu)選R1選自芳基；其中所述芳基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代。甚至更優(yōu)選R1選自苯基、2-氯代苯基、4-氯代苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基。最優(yōu)選R1為2-甲氧基苯基。
R2優(yōu)選選自芳基、芳烷基和雜芳基，其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代。更優(yōu)選R2選自芳基；其中所述芳基任選地被一或多個獨立地選自烷基和烷氧基的取代基取代。甚至更優(yōu)選R2選自苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基。最優(yōu)選R2選自苯基和2-甲氧基苯基。
優(yōu)選R3選自氫和烷基。更優(yōu)選R3選自氫和甲基。
優(yōu)選R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代。更優(yōu)選R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基或芳烷基任選被一或多個獨立地選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代。甚至更優(yōu)選R4選自苯基、2-氯代苯基、4-氯代苯基、4-溴代苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、芐基、2-氯代芐基、4-氯代芐基、2-甲基芐基、4-甲基芐基、2-甲氧基芐基、4-甲氧基芐基、2，6-二氟代苯基、3，5-二氟代苯基、2-氯-6-甲基苯基和3-pridyl。最優(yōu)選R4選自苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基。
本發(fā)明的一類化合物為式(I)的化合物，其中R1、R2和R4各自獨立選自芳基和取代的芳基；R3為氫。
優(yōu)選X-選自溴、氯、碘、乙酸根、苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根和甲苯磺酸根。更優(yōu)選X-選自溴、氯、碘。最優(yōu)選X-為溴。
除非另有說明，本文所用的術語“由黑素皮質素受體介導的疾病”包括，但不限于，肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病、X綜合征、糖尿病性視網膜病、急性神經變性性疾病、慢性神經變性性疾病、神經叢病、男性勃起功能障礙、干眼病、痤瘡、皮膚干燥、皮膚老化、脂溢性皮炎、酒渣鼻、耳垢過量、瞼板腺炎、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮脂溢性皮炎、化膿性汗腺炎、眼部紅斑痤瘡和汗腺炎。
除非另有說明，本文所用的術語“代謝性疾病”包括，但不限于，肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病和X綜合征。
除非另有說明，本文所用的術語“CNS病”包括，但不限于，糖尿病性視網膜病、急性神經變性性疾病、慢性神經變性性疾病和神經叢病。
除非另有說明，本文所用的術語“皮膚病”包括，但不限于，干眼病、痤瘡、皮膚干燥、皮膚老化、脂溢性皮炎、酒渣鼻、耳垢過量、瞼板腺炎、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮脂溢性皮炎、化膿性汗腺炎、眼部紅斑痤瘡和汗腺炎。
本文所述的急性神經變性性疾病包括與神經細胞死亡或受損相關的各種急性神經變性性疾病，包括腦血管供血不足、病灶或擴散性腦創(chuàng)傷、擴散性腦損傷和脊髓損傷，即，包括血栓閉塞和血栓形成閉塞的腦缺血或腦梗死、急性缺血后再灌注、圍產期缺氧缺血性損傷、心臟停搏以及各種類型的顱內出血(包括，但不限于，硬膜外出血、硬膜下出血、蛛網膜下出血和腦內出血)、顱內和脊柱內損害(包括，但不限于，挫傷、穿透、剪切、壓迫和裂傷)和嬰兒頭部振搖綜合征。
本文所述的包括在本發(fā)明的方法內的慢性神經變性性疾病包括早老性癡呆癥、皮克病、彌散性盧伊體病、進行性核上麻痹(斯-理綜合征)、特發(fā)性進行性自主神經功能不全(夏-德綜合征)、與神經變性性疾病相關的慢性癲癇病、運動神經元病，包括肌萎縮性脊髓側索硬化、變性性共濟失調、皮質基底變性、Guam的ALS-帕金森氏-癡呆復合癥、亞急性硬化性全腦炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森氏病、synucleinopathies(包括多系統(tǒng)性萎縮)、原發(fā)性進行性失語、紋狀體黑質變性、馬-約病/3型脊髓小腦性共濟失調和橄欖體橋腦小腦變性、吉勒德拉圖雷氏綜合征、延髓和假性麻痹、脊髓和脊髓延髓性肌萎縮(Kennedy’s病)、原發(fā)性側束硬化、家族性痙攣截癱、韋-霍脊肌萎縮、庫-韋綜合征、泰薩病、桑德霍夫病、家族性痙攣病、遺傳性少年型肌萎縮、痙攣性輕截癱、進行性多灶性白質腦病、家族性自主神經系統(tǒng)功能障礙(賴-戴綜合征)和瘋牛病(prion diseases)(包括但不限于，克-雅綜合征、格-施-沙病、庫魯病和致命家族性失眠癥)。
本文所述的神經叢病包括叢麻痹、多病灶神經病、感覺神經病、運動神經病、感覺-運動神經病、感染性神經病、植物神經病、感覺-植物神經病、脫髓鞘神經病(包括但不限于吉-巴綜合征和慢性炎癥性脫髓鞘多發(fā)性神經根神經病)、其它炎癥性和免疫性神經病、藥物誘發(fā)的神經病、藥理學治療誘發(fā)的神經病、毒素誘發(fā)的神經病、創(chuàng)傷性神經病(包括但不限于壓迫性、粉碎性、撕裂性和節(jié)段性神經病)、代謝性神經病、內分泌性和腫瘤相關性神經病變以及其它神經病，例如沙-馬-圖病(1a、1b、2、4a、1-X聯(lián)合型)、費里德賴希共濟失調、異染色性腦白質營養(yǎng)不良、雷夫敘姆病、腎上腺脊髓神經病、共濟失調毛細管擴張癥、進行性肥大性神經病(A和B型)、蘭-伊綜合征和顱神經病。
除非另有說明，本文所述的術語“鹵素”應包括碘、溴、氯和氟。
本文中所用的術語“烷基”無論單獨使用還是用作取代基的一部分，其包括含有1-8個碳原子的直鏈和支鏈。例如烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基等。除非另有說明，“低級”與烷基合用時表示1-4個碳原子的碳鏈組合。
術語“鏈烯基”，無論單獨使用還是用作取代基的一部分，其包括含有2-8個碳原子的直鏈和支鏈的烯烴。適用的例子包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、1-異丁-2-烯基等。類似地，術語“炔基”，無論單獨使用還是用作取代基的一部分，其包括含有2-8個碳原子的直鏈和支鏈的炔鏈。適用的例子包括2-丙炔基、2-丁炔基、1-丁炔基、1-戊炔基等。
除非另有說明，本文所用的“烷氧基”應指上述直鏈或支鏈烷基的氧醚基。例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、己氧基等。
除非另有說明，本文所用的術語“環(huán)烷基”應指含有3-8個環(huán)碳原子，優(yōu)選5-7個碳的飽和單環(huán)結構。適用的例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
本文所用的術語“芳基”指芳香族碳環(huán)結構，例如苯基、萘基等。
除非另有說明，本文所用的“芳烷基”應指由芳基取代的任何低級烷基。例如，芐基、苯基乙基、苯基丙基、萘基甲基等。
除非另有說明，本文所用的“雜芳基”應指任何5或6元單環(huán)芳香環(huán)結構，它含有至少1個選自O、N和S的雜原子，并任選含有1-3個獨立選自O、N和S的其它雜原子；或應指9或10元雙環(huán)芳族環(huán)結構，它含有至少1個選自O、N和S的雜原子，并任選含有1-4個獨立選自O、N和S的其它雜原子。所述雜芳基可與所述環(huán)的任何碳原子相連以便形成穩(wěn)定的結構。
適用的雜芳基的實例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡喃基、呋咱基、中氮茚基、吲哚基、異二氫吲哚基、吲唑基、異噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、異噻唑基、肉啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，5-二氮雜萘基、蝶啶基等。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、噻吩基和咪唑基。
用于本文的術語“雜環(huán)烷基”應指任何5-7元單環(huán)的、飽和、部分不飽和或部分芳香化的環(huán)結構，它含有至少一個選自O、N和S的雜原子，并任選含1-3個獨立地選自O、N和S的其它雜原子；或指9-10元的飽和、部分不飽和或部分芳香化的雙環(huán)系統(tǒng)，它含有至少一個選自O、N和S的雜原子，并任選含1-4個獨立地選自O、N和S的其它雜原子。所述雜環(huán)烷基可與所述環(huán)的任何碳原子相連，以形成穩(wěn)定的結構。
適用的雜環(huán)烷基的實例包括，但不限于，吡咯啉基、吡咯烷基、dioxalanyl、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、二噁烷基、嗎啉基、二噻烷基、硫代嗎啉基、哌嗪基、三噻烷基、二氫吲哚基、苯并吡喃基、3，4-亞甲二氧基苯基、2，3-二氫苯并呋喃基等。
用于本文的符號“*”應指存在手性中心。
由于本發(fā)明的化合物具有至少一個手性中心，因此它們可作為對映體存在。當所述化合物有兩個或多個手性中心時，它們還可作為非對映異構體存在。應該理解，所有的這類異構體及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內。另外，所述化合物的部分晶體形式可以多晶型存在，并且這些也打算包括在本發(fā)明內。另外，部分所述化合物可與水(即水合物)或普通有機溶劑形成溶劑合物，這類溶劑合物也打算包括在本發(fā)明的范圍內。
當某一具體基團為“取代的”(例如，環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基)，該基團可具有一或多個取代基，優(yōu)選1-5個取代基，更優(yōu)選1-3個取代基，最優(yōu)選1-2個取代基，所述取代基獨立地選自所列出的取代基中。
分子中具體位置上的任何取代基或變量的定義都獨立于本分子中別處對其的定義。應該理解，本領域普通技術人員可對本發(fā)明的化合物的取代基和取代方式進行選擇，以提供化學穩(wěn)定并且可容易地通過本領域所知的技術和本文所提出的那些方法合成的化合物。
本公開全文采用標準命名法，先描述指定側鏈的末端部分，接著描述的是連接點上的相鄰的官能團。因此，例如，“苯基C1-C6烷基氨基羰基C1-C6烷基”取代基指下式基團
本文所用的術語“患者”，指作為或已經作為治療、觀察或實驗的對象的動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
本文所用的術語“組合物”意指包括由特定量的特定成份組成的產物以及由特定量的特定成份的組合而直接或間接得到的任何產物。
本文所用的術語“治療有效量”指研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師正在探索的在組織系統(tǒng)、動物或人體中產生生物或醫(yī)學響應(包括減輕所治療的疾病或病癥的癥狀)的活性化合物或藥物的量。
對于在醫(yī)學中的應用，本發(fā)明化合物的鹽指無毒的“藥學上可接受的鹽”。然而，其它鹽可用于本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽的制備中。本發(fā)明化合物的適用的藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽，例如，它可通過使所述化合物的溶液與一種藥學上可接受的酸例如鹽酸、硫酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸的溶液相混合生成。
本發(fā)明在其范圍內包括本發(fā)明化合物的前藥。一般說來，這類前藥是在體內易于轉化為所需化合物的所述化合物的功能化的衍生物。因此，在本發(fā)明的治療方法中，術語“給藥”應包括用具體公開的化合物或未具體公開的但在給予患者后在體內可轉化為所述具體化合物化合物治療各種所述疾病。例如，在H.Bundgaard，Elsevier，1985年編輯的“Design of Prodrugs”中，描述了合適的前藥衍生物的選擇和制備的常規(guī)方法。
在本說明中，尤其是在流程和實施例中，所用的縮略語如下BHT ＝2，6-雙-(叔丁基)-4-甲基-苯酚BSA ＝牛血清白蛋白
cAMP或環(huán)AMP＝環(huán)腺苷酸DCE＝1，2-二氯乙烷DEAD ＝偶氮二甲酸乙酯DM ＝區(qū)分溶劑DMF＝二甲基甲酰胺DMEM ＝Dulbeccos Minimal Essential Medium(Dulbeccos極限必需培養(yǎng)基)DMSO ＝二甲亞砜DPBS ＝Dulbeccos磷酸鹽緩沖鹽水EDTA ＝乙二胺四乙酸FBS＝胎牛血清GDP＝鳥苷二磷酸GTP＝鳥苷三磷酸GM ＝生長培養(yǎng)基HBSS ＝Hank’s緩沖鹽溶液HEPES ＝4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷硫酸HS ＝人血清IgG＝免疫球蛋白G％Inh ＝百分抑制率MEM＝極限必需培養(yǎng)基NBS＝N-溴代琥珀酰亞胺NCS＝N-氯代琥珀酰亞胺NDP αMSH ＝[Nle4，D-Phe7]αMSH，αMSH類似物PBS＝磷酸鹽緩沖鹽水PEG＝聚乙二醇PNC＝青霉素rt或RT ＝室溫SPA＝閃爍近似測定法
STM＝鏈霉素TLC＝薄層層析法TM ＝過渡培養(yǎng)基TMS＝三甲基甲硅烷基可根據(jù)流程I所述的方法制備其中R3為氫的式I化合物。
流程1更具體地說，在升高的溫度(優(yōu)選在約回流溫度)下，在堿例如NaNH2、NaH、NaN(TMS)2等(優(yōu)選NaNH2)的存在下，使適當取代的式(III)的氰基化合物(一種已知的化合物或經已知方法制備的化合物)與適當取代的式(IV)的伯胺(一種已知的化合物或經已知方法制備的化合物)反應，得到相應的式(V)化合物。
在升高的溫度(優(yōu)選約45℃)下，在DCE的存在下，使式(V)化合物與適當取代的式(VI)的硫氰酸酯(一種已知的化合物或經已知方法制備的化合物)反應，得到相應的式(VII)化合物。
在室溫下，在Br2的存在下，使式(VII)化合物進行閉環(huán)/氧化，得到相應的式(Ia)化合物。
可根據(jù)流程2中所述的方法，由其中R3為氫的適當取代的式(I)化合物制備式(II)化合物。
流程2更具體地說，在室溫下，用堿例如NaHCO3、Na2CO3、NaOH等(優(yōu)選NaHCO3)處理適當取代的式(Ia)化合物，生成相應的式(II)化合物。
還可根據(jù)流程3中所述的方法，由適當取代的式(VII)化合物制備式(II)化合物。
流程3更具體地說，在室溫下，使適當取代的式(VII)化合物與氧化劑例如NBS、NCS、DEAD等(優(yōu)選NBS)反應，生成相應的式(II)化合物。優(yōu)選從堿性水溶液例如NaHCO3、Na2CO3、NaOH等中萃取式(II)化合物。
可根據(jù)流程4中所述的方法，由適當取代的式(II)化合物制備其中R3為烷基的式(I)化合物。

流程4因此，在室溫下，使適當取代的式(II)化合物與其中X-為三氟甲磺酸根、Br-和I-的適當取代的式(VIII)化合物(一種已知的化合物或經已知方法制備的化合物)反應，生成相應的式(I)化合物。
可根據(jù)流程5中所述的方法，由適當取代的式(II)化合物制備其中R3為氫的式(I)化合物。
流程5因此，在室溫下，使適當取代的式(II)化合物與藥學上可接受的酸例如HCl、HBr、HNO3等(優(yōu)選HCl)反應，生成其中X-為Cl-、Br-、NO3-等的相應的式(Ia)化合物。
由于本發(fā)明的化合物的制備方法產生立體異構體的混合物，因此可經常規(guī)技術例如制備層析法分離這些異構體。通過對映專一性(enantiospecific)合成或通過拆分，可將所述化合物制成外消旋形式，或者可制成單一對映體。例如，通過標準技術，例如通過與光學活性的酸例如(-)-二-對甲苯基-d-酒石酸和/或(+)-二-對甲苯基-1-酒石酸成鹽而形成非對映異構體對，接著進行分級結晶和游離堿的再生，可將所述化合物拆分為其各種組成的對映體。所述化合物也可通過形成非對映異構體的酯或酰胺，然后通過層析分離并除去手性助劑拆分。另外，可用手性高效液體層析(HPLC)柱拆分所述化合物。
在制備本發(fā)明化合物的任何過程中，可按需要和/或要求對涉及的任何分子上的敏感或反應基團加以保護。這可通過常用保護基團的方法來實現(xiàn)，例如在J.F.W.McOmie 1973年Plenum Press出版編輯的Protective Groups in Organic Chemistry和John Wliey和Sons 1991年出版，T.W.Greene & P.G.M.Wuts編輯的Protective Groups in OrganicSynhesis中的那些方法。可用本領域已知的方法在常規(guī)后繼步驟中除去這些保護基。
可根據(jù)本文的實施例4-11中所述的方法確定本發(fā)明化合物對由黑素皮質素受體介導的疾病的治療用途。因此，本發(fā)明提供了一種治療這些疾病的方法，它包括給予有效治療所述疾病的量(即以治療有效量)的本文所定義的任何化合物。所述化合物可經任何常規(guī)給藥途徑，包括但不限于，靜脈內、口服、皮下、肌內、真皮內、胃腸外和透皮途徑給予患有這樣的疾病的患者。
本發(fā)明也提供含有與藥學上可接受的載體混合的一種或多種本發(fā)明化合物的藥用組合物。
為制備本發(fā)明的藥用組合物，可根據(jù)常規(guī)制藥化合技術，將一種或多種式(I)化合物和/或(II)化合物或其鹽(活性成分)與藥用載體緊密混合，所述載體可采取各種取決于給藥所需的制劑的形式，例如，口服或胃腸外(例如肌內)給藥?？捎萌魏纬Ｓ盟幬锝橘|制備口服劑型組合物。因此，對液體口服制劑，例如混懸液、酏劑和溶液劑，適用的載體和添加劑包括水、二醇類、油類、醇類、調味劑、防腐劑、著色劑等；對固體口服制劑，例如散劑、膠囊劑、膠囊形片劑、軟膠囊和片劑，適用的載體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于給藥方便，片劑和膠囊是最有優(yōu)勢的口服劑量單位形式，因此，固體藥物載體最為常用。如需要，可用常規(guī)技術對片劑進行糖包衣或腸溶包衣。對胃腸外的制劑，所述載體通常包括滅菌水，但例如為了諸如提高溶解性或為了防腐而可能包括其它成分。采用適當?shù)囊后w載體、懸浮劑等，也可制備注射用混懸液。
本發(fā)明包括局部用制劑，包括但不限于霜劑、洗劑、復合性乳劑、微乳液、脂質霜劑或凝膠劑、凝膠劑、溶液、混懸液、軟膏劑、泡沫氣霧劑、硬或軟明膠膠囊、面罩、粘著劑、擦滾式制劑、散劑、噴霧劑等。除所述活性成分外，局部用制劑可含一種或多種非活性組分，包括但不限于，螯合劑、緩沖劑、著色劑、防腐劑、芳香劑、乳化劑、表面活性劑、不透明劑、軟化劑、溶劑、防曬劑、粘度調節(jié)劑、抗氧化劑、增濕劑、滲透促進劑、成膜劑等。
包括在本發(fā)明內的治療痤瘡的局部用制劑還可含一種或多種下列組分，包括除粉刺制劑(comedolytic)/角質離解劑、抗菌劑和類固醇類或非類固醇類抗炎藥。(除粉刺制劑指能破裂粉剌的任何化合物。角質離解劑指能裂解導致表皮脫落角質的任何化合物。)適用的除粉刺制劑/角質離解劑包括但不限于視黃醛衍生物(retinoids)、水楊酸、乙醇酸、十六烷基甜菜堿等。適用的抗菌劑包括但不限于苯甲酰過氧化物、紅霉素、四環(huán)素、氯林可霉素、壬二酸等。局部用制劑一般含0.01-1％活性成分。
本文所述的藥用組合物每劑量單位例如片劑、膠囊、散劑、注射劑、茶匙劑等含有必須在需要時能傳送有效劑量的活性成分的量。本發(fā)明的非局部用的藥用組合物每劑量單位例如片劑、膠囊、散劑、注射劑、栓劑、茶匙劑等含有約0.03-100mg/kg(優(yōu)選0.1-30mg/kg)，并且可以以約0.1-300mg/kg/天(優(yōu)選1-50mg/kg/天)的劑量給藥。然而，所述劑量可隨患者的需要、所治療疾病的嚴重性和所用的化合物而改變?？刹捎妹咳战o藥或周期性給藥。
對口服、胃腸外、鼻內、舌下或直腸給藥，或對經吸入或吹入給藥，這些組合物優(yōu)選為單位劑型，例如片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滅菌腸胃外溶液劑或混懸液、定量氣霧劑或流體噴霧劑、滴劑、安瓿劑、自動注射裝置或栓劑。另外，所述組合物可以為適用于每周一次或每月一次給藥的形式；例如，可采用所述活性化合物的不溶性鹽(例如癸酸鹽)，以提供用于肌內注射的長效貯庫(depot)制劑。為制備固體組合物例如片劑，可將所述主要活性成分與藥物載體例如常用制片成分例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫二鈣或樹膠和其它藥用稀釋劑例如水相混合，形成含有本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽的均勻混合物的固體預配制組合物。當提及這些均勻的預配制組合物時，其意是指將所述活性成分均勻徹底地分散到所述組合物中，以使所述組合物便于細分成等效的劑量形式，例如片劑、丸劑和膠囊。然后將這種固體預配制組合物細分為含0.1-約500mg本發(fā)明的活性成分的上述類型的單位劑型中?？蓪⑺鲂陆M合物的片劑或丸劑包衣，或制成提供具有延長作用優(yōu)點的劑型。例如，所述片劑或丸劑可含內層劑量和外層劑量組分，后者為包蓋在前者上的形式。兩種組分可通過腸溶層隔開，腸溶層的作用是避免在胃里崩解，使內層組分完整地通過十二脂腸或延緩釋放。許多原料可用作這類腸溶層或包衣，這類原料包括聚合酸(polymeric acid)與例如紫膠、十六醇和醋酸纖維素等原料形成的許多種物質。
本發(fā)明新組合物供口服或注射給藥的液體劑型包括水溶液劑、適當矯味過的糖漿劑、水性或油性混懸液以及含食用油(例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油)矯味過的乳液以及酏劑和類似的藥物溶媒。水性混懸液的適用分散劑或懸浮劑包括合成和天然樹膠類，例如黃芪膠、阿拉伯樹膠、藻酸鹽、右旋糖酐、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
也可用包括任一種本文所定義的化合物及其藥學上可接受的載體的藥用組合物實現(xiàn)本發(fā)明所述的治療由黑素皮質素受體介導的疾病的方法。非局部用的藥用組合物可含約0.01-100mg，優(yōu)選約5-50mg所述化合物，且可制成適于所選給藥方式的任何形式。載體包括必要的和惰性的藥用賦形劑，其包括但不限于粘合劑、懸浮劑、潤滑劑、芳香劑、甜味劑、防腐劑、染料和包衣物。適于口服給藥的組合物包括固體劑型，例如丸劑、片劑、膠囊形片劑、膠囊劑(各自包括即時釋放、定時釋放和緩釋制劑)、顆粒劑和散劑以及液態(tài)形式，例如溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳液和混懸液。用于胃腸外給藥的形式包括滅菌溶液、乳液和混懸液。
本發(fā)明化合物可以有利地以單一日劑量給藥，或將全日劑量分成每日兩次、三次或四次的分劑量給藥。另外，本發(fā)明化合物可以經局部使用適用鼻內介質的鼻內形式或經本領域一般技術人員熟知的透皮貼劑給藥。為了以透皮傳遞系統(tǒng)的形式給藥，所述劑量的給予在整個給藥劑量方案中當然將是連續(xù)的而不是間歇的。
例如，為進行片劑或膠囊劑形式的口服給藥，可將所述活性藥物組分與口服的無毒的藥學上可接受的惰性載體例如乙醇、甘油、水等相結合。另外，當要求或需要時，還可將適用的粘合劑；潤滑劑、崩解劑和著色劑也可加入所述混合物中。適用的粘合劑包括但不限于淀粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然和合成樹膠例如阿拉伯膠、黃耆膠或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬酯酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。
所述液體劑型可加入適當調過味的懸浮劑或分散劑，例如合成或天然樹膠例如黃耆膠、阿拉伯膠、甲基纖維素等。對胃腸外給藥，需要滅菌混懸液和溶液。當需要靜脈內給藥時，采用一般含適當防腐劑的等滲制劑。
本發(fā)明化合物還可以以脂質體傳遞系統(tǒng)例如小單室囊泡、大單室囊泡和多室囊泡的形式給藥。脂質體可由各種磷酯例如膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿形成。
還可通過采用作為與所述化合物分子偶合的獨特載體的單克隆抗體來傳遞本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物也可與作為靶向藥物載體的可溶性聚合物偶合。這些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羥基-乙基天冬酰胺苯酚或被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷聚賴氨酸。另外，本發(fā)明化合物可與一類用于實現(xiàn)藥物的控制釋放的可生物降解的聚合物偶合，例如聚乙酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)的或兩親的嵌段共聚物。
當需要治療由黑素皮質素受體介導的疾病時，可以以任何形式的前述組合物并根據(jù)本領域所確立的劑量方案，給予本發(fā)明化合物。
所述產物的日劑量可在每個成人每天0.01mg-1,000mg的寬范圍內變化。對口服給藥，優(yōu)選以含有隨癥狀調整的下述劑量的活性成分的片劑形式向待治療的患者提供所述組合物0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500毫克。所述藥物的有效量一般為約0.01-約100mg/kg體重/每天的劑量水平提供。所述范圍優(yōu)選為約0.03-10mg/kg體重/每天。所述化合物可以以每天1-4次的劑量方案給藥。
給藥的最適劑量易于被本領域的技術人員確定，該劑量隨所用的具體化合物、給藥方式、制劑的劑量、給藥方式和病情的發(fā)展狀況而變化。另外，與被治療的具體患者相關的各因素，包括患者的年齡、體重、飲食和給藥次數(shù)，會產生調整劑量的需要。
在此給出下列實施例以幫助理解本發(fā)明，但并不意味也不能解釋為以任何方式限定在此后權利要求書中所說明的本發(fā)明的范圍。
實施例12-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-對甲苯基氨基-[1，2，4]噻二唑-2-鎓化合物#31 步驟A在室溫下，將鄰茴香胺(15.0g，121.8mmol)和氨化鈉(50％重量百分比懸浮于甲苯中)(11.40g，146.2mmol)在無水甲苯(200ml)中的混合物攪拌1小時。向所述混合物中加入芐腈(9.86ml，96.6mmol)然后回流加熱16小時。冷卻所述反應混合物，加入1.0N HCl(150ml)猝滅所述反應物。加入活性碳，經硅藻土墊過濾反應混合物。加入1.0NNaOH(200ml)調節(jié)所述混合物pH至約14。用氯仿(3×150 ml)萃取含水層。合并的有機層經無水MgSO4干燥，蒸發(fā)。用己烷洗滌所生成的固體，經真空干燥，得到淺白色固體的產物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)TM3.83(s，3H)，4.79(s，2H)，6.96(m，3H)，7.04(m，1H)，7，43(m，3H)，7.93(d，2H)MS(APCI，MH+)227步驟B將按步驟A制備的N-芳基苯甲脒(3.0g，13.27mmol)和4-甲苯基異硫氰酸酯(2.18g，14.60)在無水氯仿(30ml)中的混合液回流加熱16小時。冷卻所述反應混合物，蒸發(fā)溶劑。得到的殘留物經快速柱層析純化，用25％己烷的二氯甲烷液作為流動相。蒸發(fā)合并的部分，真空干燥所得到的固體，得到黃色固體產物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)TM2.36(s，3H)，3.66(s，3H)，6.76(m，1H)，6.97(t，1H)，7.17-7.39(m，7H)，7.47(d，2H)，7.60(d，2H)，8.20(s，1H)，14.18(s，1H)MS(ES，MH+)376.29步驟C向步驟B中制備的硫脲(2.90g，7.73mmol)的無水氯仿(15ml)溶液中緩慢加入溴(438μl，8.51mmol)。攪拌16小時后，蒸發(fā)溶劑。用無水乙醚洗滌所生成的固體。將粗產物從含20％水的乙醇溶液中重結晶，得到黃色固體產物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)TM2.39(s，3H)，3.66(s，3H)，6.96(d，1H)，7.06(t，1H)，7.20-8.07(m，7H)，7.61(d，2H)，7.80(d，2H)，12.40(s，1H)MS(ES，MH+)374.25
實施例22-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-苯基氨基-[1，2，4]噻二唑-2-鎓化合物#74 步驟A在室溫下，將鄰茴香胺(13.5g，110.0mmol)和氨化鈉(50％重量百分比懸浮于甲苯中)(9.40g，120.0mmol)在無水甲苯(200ml)中的混合物攪拌1小時。向所述混合物中加入2-甲氧基芐腈(16ml，131.0mmol)，然后回流加熱所述反應混合物16小時。冷卻所述反應混合物，加入1.0N HCl(150ml)猝滅所述反應物。加入活性碳，經硅藻土墊過濾反應混合物。加入1.0N NaOH(200ml)調節(jié)所述混合物的pH至約14。用氯仿(3×150ml)萃取含水層。合并的有機層經無水MgSO4干燥，蒸發(fā)。用己烷洗滌所得到的固體，經真空干燥，得到淺白色固體的產物。
MS(APCI，MH+)257步驟B將步驟A制備的N-芳基苯甲脒(15.5g，60.6mmol)和苯基異硫氰酸酯(8.70mL，72.7mmol)在無水氯仿(30ml)中的混合物加熱至45℃16小時。冷卻所述反應混合物，蒸發(fā)溶劑。得到的殘留物經快速柱層析純化，用25％己烷的二氯甲烷液作為流動相，蒸發(fā)合并的部分，真空干燥所得到的固體，得到黃色固體產物。
MS(ES，MH+)391.50
步驟C向步驟B中制備的硫脲(12.95g，33.1mmol)的無水氯仿(15ml)溶液中緩慢加入溴(1.78ml，34.75mmol)。攪拌16小時后，蒸發(fā)其溶劑。用無水乙醚洗滌所生成的固體。將所述粗產物從含20％水的乙醇溶液中重結晶，生成黃色固體產物。
MS(ES，MH+)390.1按本文所公開的方法，制備本發(fā)明的代表性的式(I)化合物，如表1中所示。
表1
實施例32-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-苯基氨基-[1，2，4]-噻二唑化合物#89
向實施例2步驟B制備的化合物(0.921g，2.36mmol)的無水氯仿(10mL)溶液中加入N-氯代琥珀酰亞胺(326mg，2.71mmol)。然后攪拌該反應混合物16小時，之后停止攪拌，用NaHCO3水溶液洗滌兩次。經硫酸鎂干燥有機層，經真空除去殘余溶劑，得到為固體的標題產物。
MS(ES，MH+)390.1按本文所述的方法，制備列于表2中的本發(fā)明的代表性的式(II)化合物。
表2
除非另有說明，采用Bruker Avance 300MHz NMR光度計測定NMR光譜。除非另有說明，采用Micromass LC平板電子噴霧化質譜儀測定分子量，結果列于表3中。
表3
實施例4黑素皮質素MC-4受體結合試驗于25℃下，使黑素皮質素[MC-4]-膜[購自Receptor Biology Inc.]與用聚乙烯甲苯包衣的小麥胚凝集素-閃爍近似測定珠(ScintillationProximity Assay beads)[購自Amersham Pharmacia Inc.]偶合30分鐘。在96孔Opti培養(yǎng)板[購自Packard，CA]的每一孔中，使2.5μg膜和0.25mg珠在100μL培養(yǎng)基中混合。所述培養(yǎng)基為含0.1％牛血清白蛋白、2mM CaCl2、2mM MgCl2和蛋白酶抑制劑的50mM HEPES，pH 7.4。將1mM濃度的待測試合物(1.5μl)在30％DMSO-50mM HEPES、pH7.4的緩沖液中的溶液加入到所述培養(yǎng)板的各個孔中。將放射性配體125I-NDP-促黑素細胞激素[NEN，2000 Ci/mmol]加入到各孔(每孔48.5μL，最終濃度40pM)中。然后密封所述培養(yǎng)板并于25℃下放置16小時。采用NDP-促黑素細胞激素肽和α-促黑素細胞激素肽[購于Palomar Research Inc，1μM]作為參照抑制劑化合物以確定非特異性結合(N)。用30％DMSO-50mM HEPES、pH 7.4的緩沖液確定總結合(T)。用TopCount[Packard，CA]按每分鐘測定的數(shù)量(cpm)測定每孔結合的放射性(Y)。抑制百分率計算如下[(T-Y)/(T-N)]*100％實施例5環(huán)腺苷酸[cAMP]刺激試驗使表達人黑素皮質素MC-4受體的人Bowes黑素瘤細胞于24-孔培養(yǎng)板中生長至匯合。棄去生長培養(yǎng)基，向各孔中加入0.5mL的Hank’s溶液。將待測化合物加入到96孔培養(yǎng)板的各孔中。向陽性對照孔中加入NDP-促黑素細胞激素肽(1μM)，同時向陰性對照孔中加入30％DMSO-50mM HEPES、pH7.4緩沖液的介質。在37℃和5％CO2下孵育所述培養(yǎng)板30分鐘。棄去上清液，將細胞用Hank’s溶液洗滌2次。向各孔中加入乙醇(80％，0.5mL)，在4℃下，將培養(yǎng)板孵育30min。用NEN Flashplate試劑盆[NEN]測量環(huán)AMP含量。能導致本試驗中cAMP產量增加的待測化合物即被定義為黑素皮質素受體激動劑。
實施例6G-蛋白激活試驗對每一試驗，在25℃下，在100μL 25mM HEPES pH 7.5的緩沖液(該緩沖液含100mM NaCl、蛋白酶抑制劑、0.5μM GDP、5mM2-巰基乙醇、1mM MgCl2以及待測化合物、1μM NDP-促黑素細胞激素或NDP-促黑素細胞激素和待測化合物的混合物)中，使表達黑素皮質素MC-4受體的膜(5μg)與0.5nM35S-GTPγS一起培養(yǎng)5分鐘。通過含30％DMSO的10mM HEPES、pH 7.4的緩沖液確定基礎35S-GTPγS結合。加入含25mM HEPES(pH 7.5)、20mM MgCl2、蛋白酶抑制劑、100μM GDP、100μM GTP、5mM 2-巰基乙醇及去垢劑(0.5％洋地黃皂苷、0.2％去氧膽酸鈉和0.5％NP-40)的50μl終止緩沖溶液終止所述反應。在25℃下溶解所述膜30分鐘。用連接于結合SPA的抗-兔IgG蛋白A的抗-Gαs(0.5μg)使35S-GTPγS結合的Gαs蛋白免疫沉淀。用Topcount[Packard]測定結合的放射性活性。通過正常的兔IgG(0.5μg)由35S-GTPγS免疫沉淀確定非特異性的35S-GTPγS結合。
基礎結合(B) ＝被抗-Gαs免疫沉淀的平均數(shù)/分鐘(cpm)非特異性結合(NSB)＝被正常兔IgG免疫沉淀的平均cpm
特異性基礎結合(SB)＝B-NSB各孔中的Cpm ＝C各孔(N)中的凈cpm ＝C-NSB％刺激＝[(N-SB)/SB]×100％對黑素皮質素MC-3受體重復上述用于黑素皮質素MC-4受體的方法。按所述方法，在MC-4和/或MC-3試驗中測試本發(fā)明的代表性化合物的結合，結果列于表4中。
表4
實施例7嚙齒動物喂養(yǎng)食物剝脫的大鼠(MC-4)的食物攝取在規(guī)定時間期限內，單獨關養(yǎng)雄性Long-Evans大鼠(180-200克)，維持一天一次的喂養(yǎng)計劃(即上午10點-下午4點)五天，隨后隔離以使所述動物適應進食磨成粉狀的固型食物(#5002 PMI認證過的嚙齒動物食料)。將所述食物放于開口瓶中，該瓶用線固定在籠內，并用金屬蓋蓋住食物以減少泄漏?？勺杂娠嬎?br> 在試驗前將動物禁食18小時。在禁食期結束后，給動物服用待測化合物或溶媒。將溶媒和待測化合物在實驗前60分鐘口服給予(5mL/kg)、或實驗前30分鐘皮下給予(1mL/kg)，或者實驗前30分鐘腹膜內給予(1mL/kg)。待測化合物以0.5％甲基纖維素-0.4％Tween 80的水性懸浮液口服給予，或者以在PEG 200中的溶液或懸液腹膜內給藥；化合物濃度一般介于1-100mg/kg，優(yōu)選10-30mg/kg范圍內。在實驗前和在特定的時間點，通過對裝有食物的專用瓶的稱重，確定給藥后2、4和6小時的食物攝取量。實驗完成后，再次測試前，給所有動物一周的清除(washout)期。
按上述方法，測試本發(fā)明的選擇化合物，以測定對禁食大鼠的食物攝取的影響，結果列于表5和表6。
表5
表6
實施例8神經細胞生長試驗細胞培養(yǎng)按Mattson，M.P.，Barger，S.W.，Begley，J，和Mark，Rj.，Methods Cell Biol.，1994，46087-216所述，從18天胚胎期的大鼠胎兒中建立分離的海馬趾細胞和皮層細胞培養(yǎng)物。簡要地說，經剖宮產術從懷孕母體內取出胚胎(Sprague-Dawley)，然后根據(jù)AVMA板安死術用氟烷麻醉。切下小鼠仔的頭，取出其腦，放在HEPES緩沖的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS；Gibco)中。解剖所述海馬趾和皮層，然后根據(jù)組織類型匯集。將組織經胰酶消化15分鐘(1mg/ml胰蛋白酶-HBSS；Worthington)，用新鮮HBSS漂洗，在胰酶蛋白抑制劑(1mg/ml；Sigma)中培養(yǎng)5分鐘，再用新鮮HBSS漂洗，然后在1ml新鮮HBSS中用火琢過的玻璃移液管搗碎。以30,000細胞/孔的量將分離的細胞接種于覆蓋聚-D-賴氨酸的96孔培養(yǎng)板(Collaborative BioScience)中。各孔含有添加有26mM NaHCO3(Sigma)、56mM葡萄糖(Sigma)、15mM KC1(Sigma)、1mM丙酮酸鈉(Sigma)、1.1mM L-谷氨酰胺(Sigma)、10％(v/v)熱滅活胎牛血清(Hyclone)和0.001％硫酸慶他霉素(Sigma)的100μl Eagle’s極限必須培養(yǎng)基(MEM；Gibco)(pH 7.4)。實驗處理前，將細胞放置于增濕的37℃5％CO2孵化器中。每3日抽出培養(yǎng)基并用新鮮培養(yǎng)基替換。
試驗平板接種24小時后，將培養(yǎng)物用介質(PBS+0.1％BSA)、α-促黑素細胞激素(α-MSH)或待測化合物(用DPBS稀釋)處理。各處理條件按一式四份進行。在培養(yǎng)的第三天，吸出培養(yǎng)基并用新鮮培養(yǎng)基和待測化合物替換。在培養(yǎng)1周時，用10％磷酸緩沖過的福爾馬林固定細胞15分鐘，然后用DPBS(Sigma)漂洗，之后置于阻斷血清中30分鐘(馬血清；1∶50 DPBS稀釋液；Vector Labs)。再用DPBS漂洗所述培養(yǎng)物，然后在初次抗體中培養(yǎng)2小時(微管相關蛋白-2(MAP-2)是樹狀突的一種選擇標記；抗-小鼠單克隆的(Chemicon)；MAP-2在抗體稀釋劑(Zymed)中的1∶1000稀釋液)。陰性對照各孔僅在抗體稀釋液中培養(yǎng)。通過有或無抗體培養(yǎng)的空白孔(無細胞)確定背景信號。再用DPBS漂洗培養(yǎng)物，然后置于熒光素中1小時(FITC；抗-小鼠IgG；大鼠吸附的；1∶50 DPBS稀釋液；Vector Labs)。用DPBS將培養(yǎng)基漂洗最后一次，然后用Cytofluor 4000熒光板讀取儀讀取各培養(yǎng)板。以與對照組(介質)的百分變化率表示軸突分枝。
在上述試驗中對本發(fā)明的選擇化合物進行了測試，其結果列于表7中。所述數(shù)據(jù)表示為超出所述介質響應的變化百分率。所有化合物在50nM濃度下篩選?？s略語NA表示無改變/無活性；縮略語ND表示化合物未測試/響應未測定。
表7軸突分枝
上述數(shù)據(jù)表明，用本發(fā)明的選擇化合物處理培養(yǎng)物導致軸突分枝的明顯增加，如通過MAP2-FITC免疫熒光測定的。待測化合物與α-MSH之間的比較說明在測試濃度下，在促進軸突分枝方面待測化合物優(yōu)于α-MSH。另外，幾種待測化合物對海馬細胞或皮層細胞中的軸突分枝表現(xiàn)出選擇性作用。
實施例9體內面神經壓迫模型采用面神經壓迫模型研究待測化合物提供神經保護或神經再生作用的能力。面神經運動軸索廣泛產生于完全確定的軸索中的腦橋內神經中。面神經壓迫導致接近損害部位的退行性反應和它的遠側部位的華勒氏變性，這在損害部位引起胡須運動的減少。
在手術過程中，將雄性Long-Evans大鼠(150-180g)用3-5％異氟烷進行麻醉誘導，然后用2％異氟烷維持麻醉。暴露右臉神經，然后用鉗在其莖突乳突孔出口處壓迫30秒鐘。左臉神經做假手術并作為內部對照。神經壓迫導致胡須肌肉麻痹，因此，從麻醉中恢復后立即可觀察到損害部位的胡須運動減少。觀察到的與功能缺陷有關的下列形態(tài)學異常(1)損害部位面部神經核中的外周神經膠質細胞的數(shù)量增加，并觀察到在D3-6附近峰值增加；
(2)在損害約一周后，在壓迫面神經中出現(xiàn)較薄的髓鞘和較少的髓基質蛋白染色；(3)N-M結合和胡須卵泡區(qū)域附近的形態(tài)學變化，并且面神經核內的運動神經元逐步變性。
從麻醉中恢復后，將所述大鼠隨機分組，每組6只，給予介質、α-MSH或待測化合物。用αMSH(s.c.，70μg/每48小時)作為陽性對照。以20mg/kg的量口服(bid)給予待測化合物14天。術后用兩種標準每日監(jiān)測胡須運動的恢復(1)相對于用作基線對照的另一側(假手術)的受損一側的胡須運動的頻率(2)對胡須肌肉強度的半定量測定(0-4+)，特征基于對運動胡須的百分率、胡須肌肉的肌肉緊張度和鼻子的位置的觀察上。對于所有的觀察，行為觀察者并不知道實驗設計。
行為評價結果表明，與介質對照相比，兩種待測化合物，化合物#31和#84加速了受損傷大鼠胡須肌肉運動的恢復的時間(p＜0.05)。用其本身內部對照(假手術)的百分比表示胡須運動的恢復速度，結果列于表8中。
表8面神經壓迫模型中口服化合物#31和#84后的胡須運動的功能恢復
實施例10體外試驗皮脂合成的調節(jié)的測定步驟A飼養(yǎng)層(feeder layer)的制備將3T3小鼠結締組織細胞的半融合培養(yǎng)物(Swiss Albino小鼠，ATCC CCL-92)用絲裂霉素C(4μg/ml)處理3小時，胰蛋白酶消化然后在含10％Colorado小牛血清、PNC(100U/ml)、STM(100μg/ml)、L谷氨酰胺(0.3mg/ml)、丙酮酸鈉(1mM)和非必需氨基酸(100μM)的Dulbeccos極限必需培養(yǎng)基(DMEM)中以2.5×105/9.5cm2組織培養(yǎng)板的密度接種。在用作皮脂細胞的飼養(yǎng)層之前，將所述細胞在37℃下培養(yǎng)24小時。
步驟B人體皮脂細胞的分離在0.4-0.8mm深度的術后人體皮膚片(這部分皮膚先前曾富含皮脂腺)的皮區(qū)刮片中分離出人皮脂細胞。將這樣得到的刮片用含10％血清的1％分散酶(Dispase)的Iscoves培養(yǎng)基在37℃下處理20分鐘。再于37℃下，將所述組織置于0.3％胰蛋白酶/1％EDTA的磷酸緩沖鹽水(PBS)中10分鐘。這樣培養(yǎng)后，在含有DMEM/F12培養(yǎng)基混合物(3∶1)并補充有8％熱滅活FBS、2％熱滅活人血清(HS)、1mM丙酮酸鈉、表皮生長因子(10ng/ml)、胰島素(10μg/ml)、氫化可的松(0.4μg/ml)和+/-霍亂毒素(100μg/ml)、L-谷氨酰胺和抗生素的生長培養(yǎng)基(GM)中，從組織中緩緩刮出所述細胞。經尼龍網(100μ孔徑)過濾這樣得到的細胞，以750RPM離心，再懸浮于GM中，然后計數(shù)。
步驟C人皮脂細胞的培養(yǎng)將上述分離步驟中得到的細胞以2×105個/9.5cm2的密度置于在生長培養(yǎng)基中的3T3飼養(yǎng)層上，于37℃和5％CO2下保持3天(I期)。最初生長期后，將其轉移到過渡培養(yǎng)基(TM)中，該培養(yǎng)基由加有1mM丙酮酸鈉、胰島素(10μg/ml)、轉鐵蛋白(6.7ng/ml)和硒(5.5μg/ml)(ITS)、2％熱滅活FBS和2％熱滅活人血清和+/-霍亂毒素(ch.t.)(100μg/ml)、L-谷氨酰胺和抗生素的DMEM/F12培養(yǎng)基組成(II期)。三天后，將所述細胞轉移至分化培養(yǎng)基(DM)中，該培養(yǎng)基由加有ITS、3，3’，5-三碘-L-甲狀腺原氨酸鈉(3nM)、1％(v/v)示蹤元素混合物和選擇出的區(qū)分試劑(即牛垂體抽取物)(10μg/ml)的DMEM/F12組成。所述培養(yǎng)基每3天換一次(III期)。
步驟D皮脂細胞分化和脂生成的刺激劑或抑制劑的測試在III期的開始，向培養(yǎng)物中加入激素、激素混合物(即牛垂體提取物)或待測化合物。用兩種標準評估這些物質對皮脂培養(yǎng)物的影響1)視覺觀察和2)皮脂積累和合成的評估。用Nile red方法進行脂積聚的評估。這種方法取決于通過Nile red方法觀察中性脂并通過用平板讀出儀在535nm激發(fā)波長、580nm發(fā)射波長處讀取熒光定量。用14C乙酸鹽放射活性標記評估脂合成，通過采用4.1軟件的Bio RadPhosphoimager(Molecular Imager(分子成像儀)，F(xiàn)X)定量所述脂合成。
步驟E脂積聚的視覺觀察和Nile Red評估由于細胞放大和顯示出的脂顆粒在透明區(qū)光顯微鏡下顯示為細胞中的微黃環(huán)，所以易于識別脂積聚的形態(tài)學評估。皮脂細胞中的中性脂的積聚/抑制的定量可經Nile red結合試驗完成。簡單地講，在皮脂細胞暴露于待測化合物后，使所述細胞與1μM Nile red在含DMSO和Pluronic F127的Hanks緩沖鹽水溶液中相互作用。培養(yǎng)4小時后，洗滌并培養(yǎng)過夜，用熒光板式讀出儀在535激發(fā)和580發(fā)射波長處讀出所述熒光。為確定所述化合物對細胞生長是否有抑制作用，進行細胞計數(shù)。
按上述方法，測試本發(fā)明的選擇化合物對脂積聚的視覺觀察和Nile red評估，結果列于表9中。
表9
*+符號的增加數(shù)表示抑制程度，其中++++＝100％、+++＝75％、++＝50％和+＝25％的脂顆粒形成被抑制。
步驟F通過皮脂細胞評估皮脂合成在培養(yǎng)的第11天，在無血清的培養(yǎng)基中，用最終濃度2μCi/ml的14C乙酸鹽標記皮脂細胞24小時。然后從平板中刮下所述細胞，并于-80℃下將其冷凍于玻璃小瓶中。用如本文詳述的稍作修改的Bligh-Dyer方法(Bligh，E.G.和Dyer，W.J.，Can.j.Biochem.Physiol.，1959，37，第911-916頁)完成對脂的提取。簡要地說，在KCl的存在下，在2∶1氯仿-甲醇混合物中，勻化所述細胞。從所述混合物中移出有機相，在氬氣下干燥分離出的脂，然后點樣于高效薄層層析(HPTLC)板上。通過三種獨立的流動相展開平板。首先是己烷(至所述板的頂部)，接著是甲苯(至頂部)，最后是己烷∶乙醚∶乙酸(70∶30∶1)的混合物(所述板的中間距頂端10cm處)。為觀察放射活性脂類，再將所述板暴露于射線照相膠卷上。為觀察未標記的脂，用8％銅酸向所述板上噴霧，然后在一加熱板上炭化。通過Image Pro Plus 3.0(MediaCybemetics，Silver Springs，MD)對所述結果進行定量。
按上述方法，測試本發(fā)明的選擇化合物對人皮脂細胞分化的抑制作用。目測觀察，在七天處理后，在皮脂細胞培養(yǎng)物中，用#74化合物處理過的染色細胞培養(yǎng)物顯示脂顆粒完全消失。通過由HPTLC分離的放射性標記的脂質測定可見，檢測過脂合成的相同細胞顯示出對角鯊烯、膽固醇酯和蠟酯的抑制作用。通過采用Image Pro Plus(5.0版)測量譜帶密度而對所述細胞底板定量。根據(jù)處理過的樣本和介質處理過的對照品的差別計算出％抑制率，結果列于表10中。
表10
實施例11待測化合物對皮脂產生的影響的體內評估人體皮膚-SCID小鼠嵌合體模型嚴重復合免疫缺陷小鼠(SCID)提供了一種非常寶貴的皮膚異種移植模型。這些動物無T和B細胞的免疫性。SCID小鼠中的人體皮膚移植保留了人體細胞組織組分及部分移入的內皮，這些組織組分包括皮膚免疫細胞(即朗格漢細胞)、巨噬細胞和淋巴細胞(Kaufman R.，等，Exp.Dermatol.19932209-216，1993)?？衫眠@些性質對待測化合物進行人體皮膚細胞的生理學和/或病理學響應的研究。
步驟A移植方法用5-6周齡的C.B-17 scid/scid小鼠(Taconic，Germantown，N.Y.)進行移植。用Forman植皮刀將完整厚度的人體面部皮膚切成約0.4mm。將所述皮膚切片在含抗生素和抗真菌劑(青霉素、鏈霉素、兩性霉素)(Life technologies)的Dulbecco氏改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM，LifeTechnologies)中洗滌3次。將約2.0-2.5×1.0-1.5的橢圓形皮膚移植至制備好的移植基上，然后用4.0絲縫合。手術過程中用Ketaset(0.16mg/g體重)和Rompun(8.0μg/g體重)的混合物麻醉所述小鼠。
SCID小鼠的移植皮膚的創(chuàng)傷愈合過程需要一個月是完全可以接受的，期間所述人體皮膚可用于實驗目的。我們還發(fā)現(xiàn)在移植的人體皮膚中皮脂腺逐漸再生，且7周內這些腺完全再生并分泌皮脂，這可通過Sebutape和組織形態(tài)學證實。移植術后3個月可觀察到這些腺體的最大體積。所述腺體恢復了其產生人體特有皮脂的能力，這些腺體組織表達人體特異性的標志，包括MC5-R。由于術后2-3個月腺體達到其最大體積，即在這個點上測試皮脂分泌的抑制劑的作用。
步驟B處理方法用移植了人體臉部皮膚2-3個月后的小鼠進行研究。用溶解于聚乙二醇-乙醇(20μl/2cm2)中的所需濃度的待測化合物處理移植區(qū)域。對照組單用溶媒處理。每日(不包括周末)都用這些待測化合物處理。處理后15天和30天用Sebutape測定皮脂分泌。
步驟C實驗的終止用SEBUTAPE通過對皮脂產生的初步臨床評估確定所述實驗的終止。這時，切開人體皮膚移植物，收集有代表性的樣品進行組織評估。更具體地，制備2mm打孔的活組織檢查，將此用于評估在所處理的組織內的脂合成和總脂積聚。
步驟D檢測組織中的脂合成和總脂積聚的評估將收集到的2mm打孔的活組織檢查分別放入Krebs緩沖液中的96孔培養(yǎng)板中，然后用10μCi的14C乙酸鹽標記3小時。標記期后，用介質洗滌所述標本，采集5片活組織，稱重，然后用于脂提取。脂提取和HPTLC分析對組織培養(yǎng)衍生的細胞所述的方法相同。
進行上述處理后，將人體皮膚移植至所述SCID小鼠的11天處理后，測試本發(fā)明的化合物#74對皮脂腺活性的抑制作用。
用0.1％的化合物#74溶液局部處理后，皮脂腺的視覺評估的結果是皮脂腺可見性皺縮和皮脂下調。用0.05％和0.005％溶液局部處理15天并不足以調低所述脂。采用HPTCL分析對這些細胞的人體皮脂的抑制作用的多種評估，結果列于表11、12和13中。列出相對于對照實驗的％抑制率值。
表11化合物#74對人體皮脂的作用(處理11天)
表12化合物#74對脂積聚的作用(處理30天)
表13化合物#74對皮脂合成的作用(處理30天)
如上表12和13所示，用0.05％和0.01％的化合物#74溶液局部處理30天后，總皮脂積聚和皮脂的重新合成明顯下降。
實施例12口服制劑作為口服組合物的一個具體實施方案，將100mg的實施例2的化合物#74與充分細化過的乳糖一起配制，得到580-590mg總量，然后裝入O號硬明膠膠囊中。
實施例13局部用制劑A微乳劑作為微乳劑組合物的一個具體實施方案，將下列組分按需要邊加熱邊混合
然后按需要邊混合邊向混合過的混合物中緩慢加入水(42.9重量份)，生成所述乳液。
B氫醇化凝膠作為氫醇化凝膠組合物的一個具體實施方案，將水(74.85份，按總重量計)與聚丙二醇(10重量份)、丁二醇(10重量份)、苯甲醇(2重量份)、EDTA(0.05重量份)和BHT(0.05重量份)混合。將所述混合物混合直到所有組分溶解。然后在固定轉向下，緩慢加入卡波姆(例如Goodrich的卡波普934P)(3重量份)，得到一種凝膠。隨后攪拌下，使化合物#74(0.05重量份)分散到所述凝膠中。將所述凝膠的pH調節(jié)至約pH 3-4。
C無水凝膠作為無水凝膠的一個具體實施方案，將異丙醇(20重量份)加入到丁二醇(20重量份)中。隨后將BHT(0.05重量份)和苯甲醇(1.0重量份)加入到異丙醇/丁二醇混合物中。然后在連續(xù)攪拌下，向所生成的混合物中加入環(huán)四硅氧烷(D4)和有機聚硅氧烷-11(如Grant Industries的Gransil GSM Gel)(58.85重量份)。將化合物#74(0.1重量份)微粉化，然后在連續(xù)攪拌下，分散至所述凝膠中，直至均勻分布。
D霜劑作為o/w(油/水)霜劑的一個具體實施方案，按所示量(重量份)混合下列組分。用鹽酸將最終混合物調節(jié)至約pH 2。
盡管前述說明書采用以解釋為目的而提供的實施例講述本發(fā)明的原理，但要明白本發(fā)明的準則包括在下列權利要求書及其等價物范圍內的所有常規(guī)變化、修改和/或修飾。
權利要求
1.一種式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽， 其中R1選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基，其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫、烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；R4選自芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；X-選自溴、氯、碘、乙酸根、苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根和甲苯磺酸根；前提是當R1為苯基、氯代苯基或芐基，R2為苯基或苯并噻吩基和R4為苯基或芳烷基時，則R3選自烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；另外的前提是，當R1為芐基或甲基苯基，R2為苯基或甲基苯基和R4為甲基苯基或4-甲氧基苯基時，則R3選自烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；另外的前提是，當R1為苯基，R2為苯基和R4為苯基時，則R3選自C3-8烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子。
2.一種權利要求1的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中R1選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫和烷基；R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；前提是當R1為苯基、氯代苯基或芐基，R2為苯基或苯并噻吩基和R4為苯基或芳烷基時，則R3選自烷基；另外的前提是，當R1為芐基或甲基苯基，R2為苯基或甲基苯基和R4為甲基苯基或4-甲氧基苯基時，則R3選自烷基；另外的前提是，當R1為苯基，R2為苯基和R4為苯基時，則R3選自C3-8烷基。
3.一種權利要求2的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中R1為芳基；其中所述芳基任選被一或兩個獨立選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代；R2為芳基；其中所述芳基被一或兩個獨立選自烷基和烷氧基的取代基取代；R3選自氫和烷基；R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基或芳烷基任選被1-2個獨立地選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代；前提是當R1為苯基或氯代苯基，R2為苯基和R4為苯基或芳烷基時，則R3選自烷基；另外的前提是，當R1為甲基苯基，R2為苯基和R4為甲基苯基或4-甲氧基苯基時，則R3選自烷基；另外的前提是，當R1為苯基，R2為苯基和R4為苯基時，則R3選自C3-8烷基。
4.一種權利要求3的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中R1選自苯基、2-氯代苯基、4-氯代苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基；R2選自苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基；R3選自氫和甲基；R4選自苯基、2-氯代苯基、4-氯代苯基、4-溴代苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、芐基、2-氯代芐基、4-氯代芐基、2-甲基芐基、4-甲基芐基、2-甲氧基芐基、4-甲氧基芐基、2，6-二氟代苯基、3，5-二氟代苯基、2-氯-6-甲基苯基和3-吡啶基；前提是當R1為苯基或氯代苯基，R2為苯基和R4為苯基或芐基時，則R3選自烷基；另外的前提是當R1為甲基苯基，R2為苯基以及R4為甲基苯基或4-甲氧基苯基時，則R3選自烷基；另外的前提是R1、R2和R4不能同時為苯基。
5.一種權利要求4的化合物及其藥學上可接受的鹽，它選自2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-苯基氨基-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-(2-甲氧基苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-(4-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(4-甲氧基苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(4-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(2-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓。
6.權利要求5的化合物，它選自2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-苯基氨基-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓或其藥學上可接受的鹽。
7.一種藥用組合物，它包括權利要求1的化合物和藥學上可接受的載體。
8.一種制備藥用組合物的方法，它包括使權利要求1的化合物與藥學上可接受的載體相混合。
9.一種通過使權利要求1的化合物與藥學上可接受的載體混合而制備的藥用組合物。
10.一種治療由黑素皮質素受體介導的疾病的方法，它包括給予有此需要的患者治療有效量的式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽 其中R1選自烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基-烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫、烷基、鏈烯基和炔基；其中所述鏈烯基的雙鍵或所述炔基的三鍵與連接點離開至少一個碳原子；R4選自氫、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基；其中所述芳基、芳烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基-烷基任選被一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵代烷基、鹵代烷氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；X-選自溴、氯、碘、乙酸根、苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根和甲苯磺酸根。
11.一種權利要求10的方法，其中R1選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R2選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代；R3選自氫和烷基；R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基、芳烷基或雜芳基任選被一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、氨基、烷基氨基或二(烷基)氨基的取代基取代，及其藥學上可接受的鹽。
12.權利要求11的方法，其中R1為芳基；其中所述芳基任選被一或兩個獨立選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代；R2為芳基；其中所述芳基被一或兩個獨立選自烷基和烷氧基的取代基取代；R3選自氫和烷基；R4選自芳基、芳烷基和雜芳基；其中所述芳基或芳烷基任選1-2個獨立地選自鹵素、烷基和烷氧基的取代基取代，及其藥學上可接受的鹽。
13.權利要求12的方法，其中所述化合物選自2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-苯基氨基-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-(2-甲氧基苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-(2-甲氧基苯基)-5-(4-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(4-甲氧基苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(4-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓；2-(2-甲氧基苯基)-3-苯基-5-(2-甲苯基氨基)-[1，2，4]-噻二唑-2-鎓及其藥學上可接受的鹽。
14.權利要求10的方法，其中由黑素皮質素受體介導的疾病選自代謝性疾病、CNS病和皮膚病。
15.權利要求10的方法，其中由黑素皮質素受體介導的疾病選自肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病、X綜合征、糖尿病性視網膜病變、急性神經變性性疾病、慢性神經變性性疾病、神經叢病、男性勃起功能障礙、干眼病、痤瘡、皮膚干燥、皮膚老化、脂溢性皮炎、酒渣鼻、耳垢過量、瞼板腺炎、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮脂溢性皮炎、化膿性汗腺炎、眼部紅斑痤瘡和汗腺炎。
16.權利要求10的方法，其中由黑素皮質素受體介導的疾病選自肥胖癥、口服葡萄糖耐受性受損、血糖水平升高、II型糖尿病和X綜合征。
17.權利要求10的方法，其中由黑素皮質素受體介導的疾病選自痤瘡、皮膚干燥和脂溢性皮炎。
18.權利要求10的方法，其中所述黑素皮質素受體選自黑素皮質素-3受體、黑素皮質素-4受體和黑素皮質素-5受體。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作黑素皮質素受體的激動劑或拮抗劑的新的式(I)的1，2，4－噻二唑－2－鎓衍生物，其中R
文檔編號A61P25/00GK1612869SQ02826898
公開日2005年5月4日 申請日期2002年11月5日 優(yōu)先權日2001年11月8日
發(fā)明者M·埃辛格爾, L·J·費茨帕特里克, D·H·李, K·潘, C·普拉塔-薩拉曼, A·B·雷茨, V·L·史密斯-斯溫托斯基, B·趙 申請人:奧索-麥克尼爾藥品公司