專利名稱：抗病毒核苷衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗病毒核苷衍生物，更具體地說是一類拉米夫定衍生物。
背景技術(shù)：
拉米夫定是一個核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑，是目前用于治療乙肝病毒感染的最有效的藥物之一。此外，拉米夫定還能和齊多夫定合用治療愛滋病，拉米夫定最早由Belleau和Bernard合成(EP0382526A2)，同時，他們合成了一系列的以拉米夫定為母核的衍生物，此后，Liotta等人(WO91/11186)又在此基礎(chǔ)上合成了一系列的在5位上衍生化的衍生物，Charvet-faury等(WO95/32200)在N4位上進(jìn)行了很多衍生物的合成工作，M，Camplo等人(J.Med.Chem.(1994)29，357-362)用視黃酸作為側(cè)鏈，對拉米夫定的氨基和羥基進(jìn)行了衍生化。
本發(fā)明提供的化合物相對于拉米夫定而言，可能會具有更長的半衰期和更高的生物利用度，部分化合物可能會有降低體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的作用，部分化合物可能有明顯的肝靶向作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新的具有抗病毒作用的拉米夫定的衍生物，即抗病毒核苷衍生物。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案如通式I或通式II表示的化合物及其藥用酸的加成鹽 通式(I) 通式(II)其中，R1和R2表示酰基或烷氧甲?；?
A和D表示二?；蛲檠醵；?；B和E表示核苷、核苷衍生物或其他類別的化合物。
所述R1為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的?；?、或C1-C10的直鏈或帶有支鏈的酰基烷氧?；?br> 所述A具有以下結(jié)構(gòu) 或 其中，R3和R4為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基、或含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基。
所述B和D為拉米夫定、齊多夫定、聯(lián)苯雙酯、雙環(huán)醇、水飛蘚素、膽酸等。
所述C具有以下結(jié)構(gòu) 或 其中，R5為含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基；R6為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基、或含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基。
所述雜原子為O或S或N。
一種抗HBV病毒或抗HIV的藥物，它含有權(quán)利要求1所述通式I或通式II表示的化合物。
一種抗HBV病毒或抗HIV的藥物，它含有權(quán)利要求1所述通式I和通式II表示的化合物。
本發(fā)明提供的化合物相對于拉米夫定而言，可能會具有更長的半衰期和更高的生物利用度，部分化合物可能會有降低體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的作用，部分化合物可能有明顯的肝靶向作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、拉米夫定鹽酸鹽的制備取6.3g拉米夫定溶于適量的無水甲醇中，通入經(jīng)干燥后HCl氣體，反應(yīng)液變得渾濁，有白色沉淀生成，當(dāng)沒有固體析出時，停止通氣，過濾，固體用甲醇洗滌，真空干燥，得到7.0g拉米夫定鹽酸鹽。收率94％，mp.192-193(分解)。
實(shí)施例2、5’-乙酰拉米夫定鹽酸鹽的制備取7.3g拉米夫定鹽酸鹽和73ml冰醋酸加入到250ml的三頸瓶中，攪拌下滴加36.5ml的乙酰氯，滴加完后，反應(yīng)液在30℃的條件下繼續(xù)攪拌23個小時，反應(yīng)完后，減壓蒸干溶液，得一白色固體，用無水乙醚反復(fù)洗滌，真空干燥，得5’-乙酰拉米夫定鹽酸鹽8.8g，收率86％，mp.195(分解)。
實(shí)施例3、己二酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺)的制備取己二酸1.9g，懸浮在20ml的二氯亞砜中，滴入1滴DMF，然后在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)液變得澄清，減壓蒸去未反應(yīng)完的二氯亞砜，加入甲苯30ml，減壓蒸干，除去殘留的二氯亞砜，冷至室溫，加入20ml二氯甲烷得己二酰氯溶液，另取5’-乙酰拉米夫定鹽酸鹽4.0g懸浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基嗎啡啉1.5ml，固體全部溶解，再加1小時，減壓蒸干，再加入50ml的二氯甲烷溶解，然后依次用水、5％的檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液|、飽和氯化鈉溶液洗滌，分出有機(jī)層，用無水硫酸鈉干燥，濃縮，硅膠拄層析，洗脫劑為二氯甲烷∶甲醇＝15∶1，得到白色粉末5.2g，收率61.2％。
其核磁數(shù)據(jù)為10.883(s，2H)，8.170(d，2H，J＝7Hz)，7.252(t，2H，J＝7.5Hz)，6.225(d，2H，J＝7.5Hz)，5.416(t，2H，J＝4Hz)，4.426(d，4H，J＝5Hz)，3.568(m，2H)，3.229(m，2H)，2.349(m，4H)，2.065(s，6H)，1.540(s，4H)。
實(shí)施例4、己二酰(二拉米夫定胺)的制備取己二酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺1g，溶于甲醇中，冰浴下慢慢滴入1ml氨水，然后攪拌1小時，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)PH到中性，蒸去溶劑，二氯甲烷重結(jié)晶得白色晶體0.4g，收率51％，mp.195-196(分解)。
其核磁數(shù)據(jù)為10.879(s，2H)，8.170(d，2H，J＝7Hz)，7.254(t，2H，J＝7.5Hz)，6.230(d，2H，J＝7.5Hz)，5.412(t，2H，J＝4Hz)，5.521(s，2H)，4.420(d，4H，J＝5Hz)，3.572(m，2H)，3.226(m，2H)，2.321(m，4H)，1.535(s，4H)。
實(shí)施例5、二甘醇酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺)的制備取二甘醇酸1.75g，懸浮在20ml的二氯亞砜中，滴入1滴DMF，然后在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)液變得澄清，減壓蒸去未反應(yīng)完的二氯亞砜，加入甲苯30ml，減壓蒸干，除去殘留的二氯亞砜，冷至室溫，加入20ml二氯甲烷得己二酰氯溶液，另取5’-乙酰拉米夫定鹽酸鹽4.0g懸浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基嗎啡啉1. 5ml，固體全部溶解，再加入吡啶20ml，在冰水浴下滴加己二酰氯溶液，在二十分鐘滴加完畢，然后在室溫下再攪拌1小時，減壓蒸干，再加入50ml的二氯甲烷溶解，然后依次用水、5％的檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液|、飽和氯化鈉溶液洗滌，分出有機(jī)層，用無水硫酸鈉干燥，濃縮，硅膠拄層析，洗脫劑為二氯甲烷∶甲醇＝15∶1，得到白色粉末1.2g，收率29％。
其核磁數(shù)據(jù)為10.790(s，2H)，8.214(d，2H，J＝7Hz)，7.215(t，2H，J＝7.5Hz)，6.238(d，2H，J＝7.5Hz)，5.437(t，2H，J＝4Hz)，4.473(d，4H，J＝5Hz)，4.257(s，4H)，3.584(m，2H)，3.251(m，2H)，2.506(s，6H)。
實(shí)施例6、二甘醇酰(二拉米夫定胺)的制備取二甘醇酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺1g，溶于甲醇中，冰浴下慢慢滴入1ml氨水，然后攪拌1小時，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH到中性，蒸去溶劑，二氯甲烷重結(jié)晶得白色晶體0.5g，收率為62％。
其核磁數(shù)據(jù)為10.765(s，2H)，8.210(d，2H，J＝7Hz)，7.214(t，2H，J＝7.5Hz)，6.242(d，2H，J＝7.5Hz)，5.433(t，2H，J＝4Hz)，5.532(s，2H)，4.469(d，4H，J＝5Hz)，4.254(s，4H)，3.580(m，2H)，3.256(m，2H)。
實(shí)施例7、1，3-丙二氧羰基二拉米夫定胺的制備取5’-乙酰拉米夫定鹽酸鹽4.0g懸浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基嗎啡啉3ml，攪拌使之溶解，再加入10ml吡啶，將它慢慢滴入到10％光氣甲苯溶液中，滴完后繼續(xù)攪拌1小時，另取1，3-丙二醇1.2ml，加入10ml二氯甲烷，慢慢滴加到上述制備的溶液中，然后攪拌過夜，反應(yīng)完全后，蒸去溶劑，加入30ml二氯甲烷溶解，依次水、5％檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，加入乙醇溶解，加入氨水，攪拌一小時，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH到中性，濃縮至干，拄層析，得到白色固體1.7g。收率31％。
其核磁數(shù)據(jù)為10.760(s，2H)，8.214(d，2H，J＝7Hz)，7.220(t，2H，J＝7.5Hz)，6.244(d，2H，J＝7.5Hz)，5.430(t，2H，J＝4Hz)，5.532(s，2H)，4.464(d，4H，J＝5Hz)，4.238(s，4H)，4.127(m，4H)，3.541(m，2H)，3.238(m，2H)，1.841(m，2H)。
實(shí)施例8、一縮二乙氧羰基二拉米夫定胺的制備用一縮二乙醇代替1，3-丙二醇，反應(yīng)條件同實(shí)施例7，收率為33％。
核磁數(shù)據(jù)為10.870(s，2H)，8.224(d，2H，J＝7Hz)，7.280(t，2H，J＝7.5Hz)，6.254(d，2H，J＝7.5Hz)，5.468(t，2H，J＝4Hz)，5.578(s，2H)，4.476(d，4H，J＝5Hz)，4.234(s，4H)，4.176(m，4H)，3.549(m，2H)，3.406(m，4H)，3.238(m，2H)。
實(shí)施例9、N，N-二甲基氨基亞甲基拉米夫定的制備在100ml的三頸瓶中，加入10g拉米夫定，9ml的DMF-DMA，150ml二氯甲烷，在50下攪拌21個小時，反應(yīng)液變澄清，減壓蒸去溶劑，加入10ml的乙醚和10ml的乙醇的混合溶液，有白色固體析出，過濾，洗滌，干燥，得到N，N-二甲基氨基亞甲基拉米夫定11g，收率90％。
實(shí)施例10、二甘醇酰(二拉米夫定酯)的制備取二甘醇酸1.75g，懸浮在20ml的二氯亞砜中，滴入1滴DMF，然后在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)液變得澄清，減壓蒸去未反應(yīng)完的二氯亞砜，加入甲苯30ml，減壓蒸干，除去殘留的二氯亞砜，冷至室溫，加入20ml二氯甲烷得二甘醇酰氯溶液，另取N，N-二甲基氨基亞甲基拉米夫定2g，吡啶10ml，DMAPO.2g，加入到50ml的三頸瓶中，在0℃下滴加二甘醇酰氯溶液，滴加完后，在室溫下繼續(xù)攪拌2小時，反應(yīng)液濃縮至干，加入50ml二氯甲烷溶解，依次水、5％檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，然后濃縮二氯甲烷溶液到15ml，加入5ml甲醇，攪拌下加入5ml 80％的醋酸溶液，反應(yīng)過夜，蒸去溶劑，在殘留的油狀物中加入20ml的丙酮，有白色固體析出，過濾，洗滌，干燥得二甘醇酸(二拉米夫定酯)0.2g，收率26％。
其核磁數(shù)據(jù)為7.683(d，2H，J＝7.5Hz)，7.200(d，4H，J＝25Hz)，6.239(t，2H，J＝6Hz)，5.761(d，2H，J＝7.5Hz)，5.379(t，2H，J＝4Hz)，4.443(d，4H，J＝5Hz)，4.301(s，4H)，3.420(m，2H)，3.101(m，2H)。
實(shí)施例11、亞硫基二乙酰(二拉米夫定酯)的制備用亞硫基二乙酸代替二甘醇酸，按上法操作，收率為22％。
其核磁數(shù)據(jù)為7.675(d，2H，J＝7.5Hz)，7.195(d，4H，J＝25Hz)，6.227(t，2H，J＝6Hz)，5.761(d，2H，J＝7.5Hz)，5.360(t，2H，J＝4Hz)，4.424(d，4H，J＝5Hz)，4.376(s，4H)，3.418(m，2H)，3.091(m，2H)。
實(shí)施例12、1，3-丙二氧羰基二拉米夫定酯取N，N-二甲基氨基亞甲基拉米夫定4.0g懸浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基嗎啡啉3ml，攪拌使之溶解，再加入10ml吡啶，將它慢慢滴入到10％光氣甲苯溶液中，滴完后繼續(xù)攪拌1小時，另取1，3-丙二醇1.2ml，加入10ml二氯甲烷，慢慢滴加到上述制備的溶液中，然后攪拌過夜，反應(yīng)完全后，怔去溶劑，加入30ml二氯甲烷溶解，依次水、5％檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮二氯甲烷溶液到15ml，加入5ml甲醇，攪拌下加入5ml 80％的醋酸溶液，反應(yīng)過夜，蒸去溶劑，在殘留的油狀物中加入20ml的丙酮，有白色固體析出，過濾，洗滌，干燥得0.2g，收率27％其核磁數(shù)據(jù)為7.668(d，2H，J＝7.5Hz)，7.178(d，4H，J＝25Hz)，6.232(t，2H，J＝6Hz)，5.758(d，2H，J＝7.5Hz)，5.366(t，2H，J＝4Hz)，4.428(d，4H，J＝5Hz)，4.231(m，4H)，3.432(m，2H)，3.096(m，2H)，1.852(m，2H)。
實(shí)施例13、一縮二乙氧羰基二拉米夫定酯的制備按實(shí)施例12操作，用一縮二乙醇代替1，3-丙二醇，反應(yīng)的收率為21％。
核磁數(shù)據(jù)為7.673(d，2H，J＝7.5Hz)，7.205(d，4H，J＝25Hz)，6.230(t，2H，J＝6Hz)，5.777(d，2H，J＝7.5Hz)， 5.373(t，2H，J＝4Hz)，4.435(d，4H，J＝5Hz)，4.106(m，4H)，3.436(m，2H)，3.410(m，4H)，3.102(m，2H)。
實(shí)施例14、一縮二乙氧羰基二拉米夫定酯片的處方一縮二乙氧羰基二拉米夫定酯 300mg淀粉 100mg微晶纖維素 60mgL-HPC54.6mg
硬脂酸鎂5.4mgCMC-Na 20mg4％HPMC 適量540mg/片取淀粉/微晶纖維素、L-HPC各過80目篩備用，將原輔料按處方稱好后以等量遞加法混勻，加入適量的HPMC溶液，制成軟材，過16目篩，制成濕粒，在60下℃的干燥箱中，干燥3小時，18目篩整粒，加如處方量的硬脂酸鎂和CMC-Na，混合均勻，壓片即得。
實(shí)施例15、二甘醇酰(二拉米夫定酯)對2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)HBV DNA的抑制實(shí)驗(yàn)2.2.15細(xì)胞(北京市腫瘤研究所提供)培養(yǎng)上清中HBV-DNA提取2.2.15細(xì)胞接種6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)后24小時加入不同濃度的，每4天換原濃度藥液，培養(yǎng)第8天收取上清液，加入聚乙二醇沉淀，離心去上清，加蛋白酶K裂解細(xì)胞，加入酵母T-RNA酶，用苯酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)抽提2次，10000g離心，取上清，加無水乙醇沉淀核酸，真空抽干，重溶于TE緩沖液中作樣品。
斑點(diǎn)雜交取20ul(DNA含量25ug)，加變性液變性，用中和液將其中和，并以20×SSC緩沖液對倍稀釋至1∶128倍，點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上，放室溫晾干后放置在80℃烤箱中干烤，以固定DNA。將硝酸纖維素膜裝于塑料袋中加預(yù)雜交液，放置于水浴中預(yù)雜交2小時加入5×107CPM α32P-dCTP標(biāo)記的變性HBV-DNA探針，于42℃水浴中雜交14-18小時。夾片，曝光，以常規(guī)方法沖洗X光片放射自顯影。掃描儀掃描光片，用gel-pro軟件(PowerLab公司提供)測定IOD值，計(jì)算抑制率及IC50。
2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液中HBV-DNA抑制＝CIOD-TIOD/CIOD×100％注CIOD加藥組IOD值TIOD無藥對照組IOD值統(tǒng)計(jì)和分析對HBV-DNA抑制效果以及gel-pro凝膠分析軟件分析光片相對密度，計(jì)算抑制率及半數(shù)有效量(IC50)。
結(jié)果二甘醇酰(二拉米夫定酯)的IC50為10.25ug，抑制率為80％。
權(quán)利要求
1.如通式I或通式II表示的化合物及其藥用酸的加成鹽 通式(I) 通式(II)其中，R1和R2表示酰基或烷氧甲?；?；A和D表示二?；蛲檠醵；籅和E表示核苷、核苷衍生物或其他類別的化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述R1為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的?；?、或C1-C10的直鏈或帶有支鏈的?；檠貂；?。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述A具有以下結(jié)構(gòu) 或 其中，R3和R4為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基、或含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述B和D為拉米夫定、齊多夫定、聯(lián)苯雙酯、雙環(huán)醇、水飛蘚素、膽酸等。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述C具有以下結(jié)構(gòu) 或 其中，R5為含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基；R6為C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基、或含有雜原子的C1-C10的直鏈或帶有支鏈的烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述雜原子為O或S或N。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物及其藥用酸的加成鹽，其特征在于所述雜原子為O或S或N。
8.一種抗HBV病毒或抗HIV的藥物，其特征在于它含有權(quán)利要求1所述通式I或通式II表示的化合物。
9.一種抗HBV病毒或抗HIV的藥物，其特征在于它含有權(quán)利要求1所述通式I和通式II表示的化合物。
全文摘要
如通式I或通式II表示的化合物及其藥用酸的加成鹽其中，R1和R2表示?；蛲檠跫柞；?；A和D表示二?；蛲檠醵；?；B和E表示核苷、核苷衍生物或其他類別的化合物。本發(fā)明提供的化合物相對于拉米夫定而言，可能會具有更長的半衰期和更高的生物利用度，部分化合物可能會有降低體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的作用，部分化合物可能有明顯的肝靶向作用。
文檔編號A61P31/12GK1517347SQ0310051
公開日2004年8月4日 申請日期2003年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月16日
發(fā)明者周志文, 王文峰, 時煜, 楊巖, 費(fèi)久佳, 楊波 申請人:北京昭衍新藥研究中心