專利名稱：復(fù)方丹參滴丸在制備抗血管通透性藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制過氧化物所導(dǎo)致的血管通透性增強(qiáng)藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
復(fù)方丹參滴丸是在中醫(yī)理論指導(dǎo)研制而成的滴丸劑，療效優(yōu)于復(fù)方丹參片。高效、速效、微量、定量和多途徑給藥為其特點(diǎn)，尤其適用于心絞痛的急性發(fā)作。
經(jīng)過多年的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究，復(fù)方丹參滴丸的應(yīng)用范圍得到了很大的拓展。目前已證實(shí)復(fù)方丹參滴丸具有增加冠脈血流量，舒張血管平滑肌，促進(jìn)側(cè)之循環(huán)的開放，提高靜脈竇血氧含量，明顯改善急性心肌缺血和梗塞；提高缺氧耐受力，抗脂質(zhì)過氧化，清除有害自由基；保護(hù)細(xì)胞免受缺氧及缺氧/復(fù)氧的損傷；改善微循環(huán)；抗心律失常；抗血小板聚集，促進(jìn)纖溶，抗血栓形成；降低血液粘滯度，調(diào)節(jié)血脂，防止動(dòng)脈硬化；降低血漿內(nèi)皮素的含量，顯著改善動(dòng)物的肝、腎和胰腺等臟器功能；增強(qiáng)免疫等等功能，并應(yīng)用與相應(yīng)的有關(guān)疾病。近年來的臨床證明，復(fù)方丹參滴丸不儀在在治療心血管、腦血管有作用，而且在治療肝功能障礙、腎功能障礙、糖尿病血管合并癥等與微循環(huán)障礙相關(guān)疾病方面取得了良好的臨床療效。但有關(guān)復(fù)方丹參滴丸在抑制過氧化物所導(dǎo)致的血管通透性增強(qiáng)的作用未見報(bào)道。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的一是提供復(fù)方丹參滴丸在制備抑制過氧化物所導(dǎo)致血管通透性增強(qiáng)藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目是提供復(fù)方丹參滴丸在制備過氧化物所導(dǎo)致的微循環(huán)障礙藥物中的應(yīng)用。
大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，組織在缺血/再灌注過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞可產(chǎn)生大量的過氧化物，過氧化物是影響血管的通透性、導(dǎo)致微循環(huán)障礙的重要因素之一。因此抑制缺血再灌注過程中過氧化物的產(chǎn)生，是保護(hù)血管、改善微循環(huán)的重要步驟。其中主要因素是通過抑制或清除過氧化物來降低血管通透性，達(dá)到對(duì)血管的保護(hù)作用。
本發(fā)明利用缺血再灌注引起的大鼠腸系膜微循環(huán)障礙的模型，用可視化、動(dòng)態(tài)、連續(xù)性的微循環(huán)觀察系統(tǒng)，通過將過氧化物感受性發(fā)光物質(zhì)dihydorhodaminel23(DHR)液持續(xù)地滴加在觀察部位的腸系膜表面，當(dāng)過氧化物與DHR相遇時(shí)，可將DHR還原成dorhodaminel23而發(fā)光。用熒光顯微攝像系統(tǒng)觀察并記錄DHR的熒光強(qiáng)度，用影像數(shù)字化處理系統(tǒng)經(jīng)實(shí)地測(cè)定細(xì)靜脈壁及腸系膜組織的DHR熒光強(qiáng)度，用缺血再灌注前細(xì)靜脈壁的DHR熒光強(qiáng)度減去腸系膜組織的DHR熒光強(qiáng)度所得的值為基礎(chǔ)值，用再灌注后各時(shí)限所測(cè)得的值與基礎(chǔ)值的比表示DHR熒光強(qiáng)度的變化，以此判定細(xì)靜脈壁過氧化物的產(chǎn)生動(dòng)態(tài)。
缺血再灌注后、氧的突然和大量地供應(yīng)、增加了黃嘌呤氧化酶的活性、使次黃嘌呤迅速氧化、氧氣被還原成超氧陰離子，進(jìn)而、被歧化為過氧化氫攻擊細(xì)胞膜成分，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。此外缺血還活化細(xì)胞的粘附因子(血管內(nèi)皮粘附因子如工CAM-1、白細(xì)胞粘附因子CD18、CD11b)，引起白細(xì)胞與血管內(nèi)皮的粘附。白細(xì)胞與血管內(nèi)皮粘附后，通過NADPH氧化酶爆發(fā)性地產(chǎn)生過氧化物加重了對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞等膜結(jié)構(gòu)的攻擊，引起血管通透性增加。本發(fā)明證明，SOD可以抑制再灌注早期的DHR熒光強(qiáng)度、但在再灌注20分鐘時(shí)，SOD抑制DHR熒光強(qiáng)度作用顯著降低。復(fù)方丹參滴丸對(duì)再灌注早期和再灌注晚期細(xì)靜脈壁的DHR熒光強(qiáng)度都有抑制作用，且作用顯著優(yōu)于SOD。這證明復(fù)方丹參滴丸具有抑制過氧化物產(chǎn)生、減輕血管通透性的作用。另外復(fù)方丹參滴丸具有服用和攜帶方便，可以長(zhǎng)期服用的優(yōu)點(diǎn)，所以復(fù)方丹參滴丸可用作預(yù)防和治療因過氧化物造成的血管通透性增高的疾病。


圖1復(fù)方丹參滴丸預(yù)給藥對(duì)缺血再灌注大鼠腸系膜細(xì)靜脈壁過氧化物產(chǎn)生動(dòng)態(tài)的抑制作用。
具體實(shí)施例方式
為了更好的理解本發(fā)明，下面用復(fù)方丹參滴丸對(duì)缺血再灌注引起大鼠腸系膜血管內(nèi)過氧化物含量及血管通透性的影響，說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。以下試驗(yàn)旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明而非對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例 復(fù)方丹參滴丸預(yù)給藥對(duì)缺血再灌注引起的大鼠腸系膜細(xì)靜脈內(nèi)過氧化物含量及血管通透性的影響一、材料和方法1、方法按慶應(yīng)義塾大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心規(guī)定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物規(guī)范、取Wistar雄性大鼠(體重200-250g)，在實(shí)驗(yàn)12小時(shí)前，禁食，自由飲水。按30mg/kg的劑量腹腔注射sodiumpentobarbital進(jìn)行麻醉。從右側(cè)頸靜脈插入并留置3G聚乙稀管。沿腹正中線切2-3cm長(zhǎng)的切口，輕柔地把近回盲部的回腸移至腹腔外，將腸系膜在附有薄玻片的臺(tái)板上展開。為維持溫度和濕度，在展開的腸系膜的表面持續(xù)滴加37℃的Krebs-Ringer緩沖液。腸系膜微循環(huán)的動(dòng)態(tài)，用置于37℃恒溫槽內(nèi)的倒置生物顯微鏡(DiaphotTMD-2S，Nikon，東京)觀察，并用高感度攝像機(jī)攝像，S-VHS錄像機(jī)錄像。選直徑在25-40um之間的細(xì)靜脈非分枝部(長(zhǎng)200um以上)為觀察部位。
2、測(cè)定方法細(xì)靜脈壁過氧化物產(chǎn)生動(dòng)態(tài)的觀察在缺血再灌注前，將10uM濃度的過氧化物感受性發(fā)光物質(zhì)dihydorhodaminel23(DHR)液持續(xù)地滴加在觀察部位的腸系膜表面。當(dāng)過氧化物與DHR相遇時(shí)，可將DHR還原成dorhodaminel23而發(fā)光。用熒光顯微攝像系統(tǒng)觀察并記錄DHR的熒光強(qiáng)度，用影像數(shù)字化處理系統(tǒng)經(jīng)實(shí)地測(cè)定細(xì)靜脈壁及腸系膜組織的DHR熒光強(qiáng)度，用缺血再灌注前細(xì)靜脈壁的DHR熒光強(qiáng)度減去腸系膜組織的DHR熒光強(qiáng)度所得的值為基礎(chǔ)值，用再灌注后各時(shí)限所測(cè)得的值與基礎(chǔ)值的比表示DHR熒光強(qiáng)度的變化，以此判定細(xì)靜脈壁過氧化物的產(chǎn)生動(dòng)態(tài)。
3、動(dòng)物分組(1)正常對(duì)照組不進(jìn)行缺血再灌注處理。
(2)缺血再灌注組經(jīng)10分鐘基礎(chǔ)觀察之后，用4G聚乙稀管將還流于觀察部的腸系膜動(dòng)靜脈血管同時(shí)結(jié)扎10分鐘(缺血)，解除結(jié)扎(再灌注)，將時(shí)間記錄儀調(diào)至0處。在同一視野連續(xù)觀察30分鐘。
(3)SOD對(duì)照組在缺血再灌注10分鐘前，用連續(xù)推注器按12000u/g/hr的給藥量，經(jīng)頸靜脈連續(xù)注入SOD至觀察結(jié)束。
(4)復(fù)方丹參滴丸組在缺血再灌注60分鐘前、按0.4g/kg的給藥量灌胃。
將觀察部位的腸系膜固定、用抗血管內(nèi)皮粘附因子ICAM-1、抗白細(xì)胞粘附因子CD11b的單克隆抗體、熒光標(biāo)記法染色。
每組6只大鼠的各測(cè)定值用one-way analysis of variance(ANOVA)處理，F(xiàn)isher’s post hoc test檢驗(yàn)。各組數(shù)值用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，設(shè)P＜0.05為有顯著意義。
二、結(jié)果圖1顯示復(fù)方丹參滴丸和SOD對(duì)大鼠腸系膜細(xì)動(dòng)靜脈在缺血再灌注后過氧化物產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)影響。正常對(duì)照組在本觀察的時(shí)間范圍內(nèi)，沒有觀察到細(xì)靜脈壁DHR熒光強(qiáng)度的明顯變化；缺血再灌注組在再灌注10分鐘時(shí)，細(xì)靜脈壁DHR熒光強(qiáng)度已顯著地增加，之后持續(xù)增加SOD可以抑制再灌注早期的DHR熒光強(qiáng)度，但在再灌注20分鐘時(shí)，SOD抑制DHR熒光強(qiáng)度作用顯著降低；復(fù)方丹參滴丸對(duì)缺血再灌注早期和再灌注晚期細(xì)靜脈壁的DHR熒光強(qiáng)度都有抑制作用，特別時(shí)在再灌注20分鐘、30分鐘時(shí)，復(fù)方丹參滴丸抑制細(xì)靜脈壁DHR熒光強(qiáng)度的作用顯著優(yōu)于SOD。
結(jié)果證明復(fù)方丹參滴丸對(duì)缺血再灌注后過氧化物的產(chǎn)生、以及過氧化物導(dǎo)致的血管通透性增強(qiáng)有廣泛的抑制作用。
權(quán)利要求
1.復(fù)方丹參滴丸在制備抗血管通透性藥物中的應(yīng)用。
2.復(fù)方丹參滴丸在制備治療過氧化物所導(dǎo)致血管通透性增強(qiáng)藥物中的應(yīng)用。
3.復(fù)方丹參滴丸在制備治療過氧化物所導(dǎo)致的微循環(huán)障礙藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制氧化物所導(dǎo)致血管通透性增強(qiáng)藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過復(fù)方丹參滴丸對(duì)缺血再灌注所導(dǎo)致的氧自由基和血管的通透性的動(dòng)態(tài)影響，證明復(fù)方丹參滴丸具有顯著的抑制過氧化物產(chǎn)生的作用。復(fù)方丹參滴丸可作為預(yù)防和治療過氧化物所導(dǎo)致的血管損傷性疾病的理想藥物。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1522715SQ0310450
公開日2004年8月25日 申請(qǐng)日期2003年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月17日
發(fā)明者韓晶巖, 秋葉保忠, 鈴木秀和, 永田博司, 三浦總一郎, 織田正也, 石井裕正, 一郎, 也, 司, 和, 忠, 正 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司